Βασίζεται στο γεγονός ότι τα ερυθρά αιμοσφαίρια, στα οποία έχουν προηγουμένως προσροφηθεί αντιγόνα, αποκτούν την ικανότητα να συγκολλούνται παρουσία ομόλογων ορών (αντισωμάτων).

Στην περίπτωση αυτή, τα ερυθρά αιμοσφαίρια δρουν ως φορείς συγκεκριμένων καθοριστικών παραγόντων, η συγκόλληση των οποίων συμβαίνει ως αποτέλεσμα της αντίδρασης αντιγόνου + αντισώματος.

Τα ερυθρά αιμοσφαίρια στην επιφάνεια των οποίων τα αντιγόνα είναι σταθερά συνδεδεμένα ονομάζονται ερυθροκυτταρικό αντιγόνο diagnosticum ή ερυθροκύτταρα ευαισθητοποιημένα με αντιγόνο.

Ένας άλλος τύπος RNGA - αντισώματα απορροφώνται στην επιφάνεια των ερυθροκυττάρων και η επακόλουθη συγκόλληση τους λαμβάνει χώρα παρουσία ενός ομόλογου αντιγόνου. Στην περίπτωση αυτή, τέτοια ερυθροκύτταρα ονομάζονται διαγνωστικά αντισώματα ερυθροκυττάρων ή ερυθροκύτταρα που ευαισθητοποιούνται από αντισώματα.

Με βάση αυτές τις δύο θεμελιώδεις μεθοδολογικές προσεγγίσεις, έχουν αναπτυχθεί και χρησιμοποιηθεί πολλές τροποποιήσεις του RNGA. Έτσι, μικρά τυπικά σωματίδια λατέξ χρησιμοποιούνται ως φορείς. Σε αυτή την περίπτωση, η αντίδραση ονομάζεται αντίδραση συγκόλλησης λατέξ (RLA) ή χρησιμοποιείται Staphylococcus aureus- αντίδραση πήξης κ.λπ. Συνήθως, τα διαγνωστικά ερυθροκυττάρων προετοιμάζονται σε επιχειρήσεις βιολογικής βιομηχανίας και η κύρια εμπειρία του RNGA πραγματοποιείται σε διαγνωστικά εργαστήρια.

Η προετοιμασία των διαγνωστικών ερυθροκυττάρων περιλαμβάνει τα ακόλουθα βήματα:

στερέωση των ερυθρών αιμοσφαιρίων με φορμαλδεΰδη ή γλουταρικές ή ακρυλικές αλδεΰδες. Τέτοια επεξεργασμένα ερυθρά αιμοσφαίρια αποθηκεύονται για μεγάλο χρονικό διάστημα. Συχνότερα, για το σκοπό αυτό χρησιμοποιούνται ερυθροκύτταρα από πρόβατα, ανθρώπους, κοτόπουλα κ.λπ.
επεξεργασία σταθερών ερυθροκυττάρων με διάλυμα τανίνης. Ως αποτέλεσμα, τα ερυθρά αιμοσφαίρια αποκτούν την ικανότητα να προσροφούν μη αναστρέψιμα πρωτεΐνες (ιούς και αντισώματα) στην επιφάνειά τους.
ευαισθητοποίηση μαυρισμένων ερυθροκυττάρων από ιούς ή αντισώματα.

Θα πρέπει να σημειωθεί ότι οι μέθοδοι προετοιμασίας διαγνωστικών ερυθροκυττάρων για ιογενείς λοιμώξειςδιαφορετικός.

Η διαδικασία για την εκτέλεση RNGA για την ανίχνευση και τον προσδιορισμό του τίτλου αντισωμάτων είναι η εξής:

ίσες δόσεις ερυθροκυττάρων ευαισθητοποιημένων με αντιγόνο προστίθενται σε διαδοχικές διπλάσιες αραιώσεις ορού.
Το μείγμα αφήνεται για 2-3 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου ή για 16-18 ώρες στους 4 °C.
λαμβάνουν υπόψη τα αποτελέσματα. Εάν ο ορός περιέχει αντισώματα έναντι του ιού με τον οποίο ευαισθητοποιήθηκαν τα ερυθρά αιμοσφαίρια, παρατηρείται αιμοσυγκόλληση, η οποία αξιολογείται σε διασταυρώσεις.

Ο τίτλος αντισωμάτων στον ορό θεωρείται ότι είναι η υψηλότερη αραίωση ορού που εξακολουθεί να παρέχει αιμοσυγκόλληση κατά τουλάχιστον δύο διασταυρώσεις.

Το RNGA συνοδεύεται από όλους τους σχετικούς ελέγχους. Συνήθως η αντίδραση πραγματοποιείται χρησιμοποιώντας τη μικρομέθοδο.

Το RNGA σάς επιτρέπει να επιλύσετε τα ακόλουθα διαγνωστικά προβλήματα:

ανίχνευση αντισωμάτων και προσδιορισμό του τίτλου τους στον ορό αίματος χρησιμοποιώντας ένα γνωστό ερυθροκυτταρικό αντιγόνο diagnosticum.
ανίχνευση και ταυτοποίηση ενός άγνωστου ιού χρησιμοποιώντας ένα γνωστό διαγνωστικό αντισώματος ερυθροκυττάρων.

Πλεονεκτήματα του RNGA: υψηλή ευαισθησία, απλότητα τεχνικής τοποθέτησης και ταχύτητα απόκρισης. Ωστόσο, είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι προκύπτουν μεγάλες δυσκολίες στην προετοιμασία σταθερών διαγνωστικών ερυθροκυττάρων (μεγάλη εξάρτηση από την καθαρότητα των συστατικών που χρησιμοποιούνται, ανάγκη επιλογής τρόπου στερέωσης, μαυρίσματος και ευαισθητοποίησης των ερυθροκυττάρων για κάθε τύπο ιού).

Αρχή RTGAσυνίσταται στην ανάμειξη ίσων όγκων ορού αίματος και ενός εναιωρήματος ιού σε δοκιμαστικό σωλήνα και, μετά την έκθεση, στον προσδιορισμό του εάν ο ιός παραμένει στο μείγμα με την προσθήκη ενός εναιωρήματος ερυθρών αιμοσφαιρίων. Η συγκόλληση των ερυθροκυττάρων υποδηλώνει την παρουσία και η απουσία αιμοσυγκόλλησης υποδηλώνει την απουσία ιού στο μείγμα. Η εξαφάνιση του ιού από το μείγμα ιού + ορού θεωρείται ως ένδειξη αλληλεπίδρασης μεταξύ των αντισωμάτων ορού και του ιού.

Αλλά τα αντισώματα αλληλεπιδρούν με τα αντιγόνα σε αυστηρά καθορισμένες ποσοτικές αναλογίες. Επομένως, για να στερηθεί μια ορισμένη ποσότητα του ιού της αιμοσυγκολλητικής του ικανότητας, απαιτείται ένα ορισμένο ελάχιστο αντισωμάτων και δεδομένου ότι ένα από τα συστατικά του RTHA είναι πάντα άγνωστο, η αντίδραση πρέπει να τοποθετηθεί σε μια σειρά από δοκιμαστικούς σωλήνες με διαφορετικές δόσεις αντισωμάτων και τις ίδιες δόσεις ιού ή το αντίστροφο. Αυτό επιτυγχάνεται λαμβάνοντας είτε διαφορετικές αραιώσεις του ορού και την ίδια αραίωση του ιού, είτε διαφορετικές αραιώσεις του ιού και την ίδια αραίωση του ορού.

Το RTGA σάς επιτρέπει να επιλύσετε τα ακόλουθα προβλήματα: προσδιορίστε τον τίτλο των αντισωμάτων στον αιμοσυγκολλητικό ιό στον ορό. ταυτοποίηση ενός άγνωστου αιμοσυγκολλητικού ιού από γνωστούς ορούς. να καθορίσουν τον βαθμό αντιγονικής συγγένειας των δύο ιών.

Πλεονεκτήματα του RTGA:απλότητα τεχνικής, ταχύτητα, δεν απαιτείται στείρα εργασία, ειδικότητα, χαμηλό κόστος. Μειονέκτημα: Η RTGA είναι δυνατή μόνο με ιούς αιμοσυγκόλλησης.

Η αρχή της τιτλοδότησης αντισωμάτων σε RTGAέχει ως εξής:

– προετοιμάστε μια σειρά από διαδοχικές (συνήθως διπλάσιες) αραιώσεις του ορού δοκιμής σε ίσους όγκους (συνήθως 0,25 ή 0,2 ml).

– σε κάθε αραίωση προσθέστε τους ίδιους όγκους ομόλογου ιού σε τίτλο 4 HAE.

– τα μείγματα διατηρούνται ορισμένη ώρασε μια ορισμένη θερμοκρασία (για τον ιό της νόσου Newcastle 40–60 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου).

– ίσοι όγκοι ενός εναιωρήματος 1% πλυμένων ερυθροκυττάρων προστίθενται σε όλα τα μείγματα.

– μετά την έκθεση, η αιμοσυγκόλληση σε κάθε μείγμα αξιολογείται σε διασταυρώσεις.

Η αντίδραση περιλαμβάνει ελέγχους ορού, ιού και ερυθρών αιμοσφαιρίων.

Η υψηλότερη αραίωση ορού που εξακολουθεί να αναστέλλει πλήρως την αιμοσυγκόλληση λαμβάνεται ως δείκτης του τίτλου αντισωμάτων σε αυτόν τον ορό.

Χρήση αντίδρασης αιμορρόφησης στην ιολογία.

RGAd.Η αιματορρόφηση - η σύνδεση των ερυθροκυττάρων με την επιφάνεια των κυττάρων που επηρεάζονται από τον ιό - ανακαλύφθηκε για πρώτη φορά από τους Vogel και Shchelokov (1957) σε μια καλλιέργεια ιστού μολυσμένη με τον ιό της γρίπης. Το φαινόμενο αυτό βασίζεται στη συγγένεια των υποδοχέων του ιού που βρίσκονται στην επιφάνεια του προσβεβλημένου κυττάρου με τους υποδοχείς των ερυθροκυττάρων, η οποία οδηγεί στην αμοιβαία προσκόλληση τους παρόμοια με την αντίδραση αιμοσυγκόλλησης. Το πλεονέκτημα αυτής της αντίδρασης είναι ότι γίνεται θετική ακόμη και πριν από την εμφάνιση ευδιάκριτων κυτταροπαθητικών αλλαγών στα μολυσμένα κύτταρα.

Τεχνική RGAdέχει ως εξής. Την 3-4η ημέρα μετά τη μόλυνση των κυττάρων, λαμβάνονται δύο σωληνάρια με την ίδια κυτταροκαλλιέργεια, εκ των οποίων ο ένας είναι μολυσμένος με υλικό που περιέχει ιό και ο δεύτερος είναι ο έλεγχος. Το υγρό της καλλιέργειας αποστραγγίζεται και από τους δύο σωλήνες και 2-3 σταγόνες ενός εναιωρήματος 0,5% πλυμένων ερυθροκυττάρων προστίθενται και στους δύο. Και οι δύο σωλήνες αφήνονται για 5-10 λεπτά, έτσι ώστε τα ερυθρά αιμοσφαίρια να βρίσκονται στην επιφάνεια των κυττάρων (τοποθετημένα οριζόντια στο τραπέζι), και στη συνέχεια ξεπλένονται ελαφρά με φυσιολογικό ορό και εξετάζονται σε μικροσκόπιο (χαμηλή μεγέθυνση). Στο σωλήνα ελέγχου, τα ερυθρά αιμοσφαίρια αφαιρούνται πλήρως με το αλατούχο διάλυμα και μερικά από τα υπόλοιπα επιπλέουν μαζί με το υγρό. Εάν σε μολυσμένο δοκιμαστικό σωλήνα τα ερυθρά αιμοσφαίρια δεν έχουν αφαιρεθεί με φυσιολογικό ορό και δεν επιπλέουν, αλλά είναι προσκολλημένα στην επιφάνεια των κυττάρων, το RGAd θα πρέπει να θεωρείται θετικό.

Ανάλογα με τον ιό και τον τύπο του κυττάρου, η διάταξη των ερυθρών αιμοσφαιρίων μπορεί να είναι τριπλή:

– τα ερυθρά αιμοσφαίρια απορροφώνται μόνο κατά μήκος της περιφέρειας της κυτταρικής στιβάδας με τη μορφή «κολιέ» (ιός αφρικανικής πανώλης των χοίρων).

– τα ερυθρά αιμοσφαίρια βρίσκονται στο κυτταρικό στρώμα σε εστίες ή ομάδες (ιός γρίπης).

– τα ερυθρά αιμοσφαίρια βρίσκονται διάχυτα στο κυτταρικό στρώμα (ιός παραγρίπης).

Κάθε ιός είναι ικανός να προσροφήσει ερυθρά αιμοσφαίρια ορισμένων ειδών ζώων.

Ορολογική διάγνωση ιογενών ασθενειών με την αύξηση του τίτλου αντισωμάτων σε ζευγαρωμένους ορούς αίματος.

Αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (HRA) και αντίδραση αναστολής αιμοσυγκόλλησης (HIR), μηχανισμός, συστατικά και εφαρμογή αντιδράσεων.

Η αντίδραση αιμοσυγκόλλησης βασίζεται στο φαινόμενο της κόλλησης των ερυθρών αιμοσφαιρίων, το οποίο συμβαίνει υπό την επίδραση διάφορους παράγοντες. Υπάρχουν άμεση και έμμεση αιμοσυγκόλληση.

Αρχικά, τα ερυθρά αιμοσφαίρια πλένονται με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου, στη συνέχεια, εάν είναι απαραίτητο (όταν χρησιμοποιούνται πρωτεϊνικά αντιγόνα), υποβάλλονται σε επεξεργασία με διάλυμα τανίνης 1: 20.000 και ευαισθητοποιούνται με διαλυτά αντιγόνα. Μετά από πλύση με ρυθμισμένο ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου, το αντιγόνο ερυθροκυττάρων είναι έτοιμο για χρήση.

Οι οροί δοκιμής αραιώνονται με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου σε δοκιμαστικούς σωλήνες ή ειδικές πλαστικές πλάκες με φρεάτια και στη συνέχεια προστίθεται ένα διαγνωστικό ερυθροκυττάρων σε κάθε αραίωση του ορού. Αποτελέσματα αντίδρασης έμμεση αιμοσυγκόλλησηλαμβάνεται υπόψη από τη φύση του ιζήματος των ερυθρών αιμοσφαιρίων που σχηματίζεται στον πυθμένα του δοκιμαστικού σωλήνα. Ένα αποτέλεσμα αντίδρασης στο οποίο τα ερυθρά αιμοσφαίρια καλύπτουν ομοιόμορφα ολόκληρο τον πυθμένα του σωλήνα θεωρείται θετικό. Σε περίπτωση αρνητικής αντίδρασης, τα ερυθρά αιμοσφαίρια με τη μορφή μικρού δίσκου ή «κουμπιού» βρίσκονται στο κέντρο του πυθμένα του δοκιμαστικού σωλήνα

Κύρια στοιχεία του RP:

Α) διαλυτό αντιγόνο,

Β) Ειδικά αντισώματα (ορός)

(RTGA) είναι μια μέθοδος για τον εντοπισμό ενός ιού ή την ανίχνευση αντιιικών αντισωμάτων στον ορό αίματος ενός ασθενούς, με βάση το φαινόμενο της απουσίας συγκόλλησης των ερυθρών αιμοσφαιρίων από ένα φάρμακο που περιέχει έναν ιό παρουσία ορού αίματος που είναι ανοσοποιημένο σε αυτόν.
βασίζεται στον αποκλεισμό, την καταστολή των ιικών αντιγόνων από τα αντισώματα του ανοσοποιητικού ορού, με αποτέλεσμα οι ιοί να χάνουν την ικανότητά τους να συγκολλούν τα ερυθρά αιμοσφαίρια.

Το RTGA χρησιμοποιείται για τη διάγνωση πολλών ιογενών ασθενειών, οι αιτιολογικοί παράγοντες των οποίων (ιοί γρίπης, ιλαρά, ερυθρά, εγκεφαλίτιδα που μεταδίδεται από κρότωνες κ.λπ.) μπορούν να συγκολλήσουν τα ερυθροκύτταρα διαφόρων ζώων.
Μηχανισμός.Ο προσδιορισμός του ιού πραγματοποιείται χρησιμοποιώντας μια αντίδραση αναστολής αιμοσυγκόλλησης (HAI) με ένα σύνολο τυποειδικών ορών. Τα αποτελέσματα της αντίδρασης λαμβάνονται υπόψη από την απουσία αιμοσυγκόλλησης. Υποτύποι του ιού Α με αντιγόνα H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 κ.λπ.

μπορεί να διαφοροποιηθεί σε RTGA με ένα σύνολο ομόλογων ορών ειδικών για τον τύπο.

Στον πυρήνα αντιδράσεις αιμοσυγκόλλησης έγκειται το φαινόμενο της προσκόλλησης των ερυθρών αιμοσφαιρίων, που συμβαίνει υπό την επίδραση διαφόρων παραγόντων.

Υπάρχουν άμεση και έμμεση αιμοσυγκόλληση.
Στην άμεση αντίδραση αιμοσυγκόλλησης, τα ερυθρά αιμοσφαίρια κολλάνε μεταξύ τους όταν ορισμένα αντιγόνα, όπως οι ιοί, απορροφώνται πάνω τους.
Σε ορολογικές μελέτες, χρησιμοποιείται μια άμεση αντίδραση αναστολής της αιμοσυγκόλλησης, όταν ο ιός που απομονώνεται από έναν ασθενή εξουδετερώνεται με ειδικό ανοσοποιητικό ορό και στη συνέχεια συνδυάζεται με ερυθρά αιμοσφαίρια.

Η απουσία αιμοσυγκόλλησης υποδηλώνει τη συνοχή του ιού και του ανοσοποιητικού ορού που χρησιμοποιείται.

Η έμμεση αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (παθητική αιμοσυγκόλληση) παρατηρείται σε περιπτώσεις όπου ανοσοποιητικός ορός ή ορός ασθενούς που περιέχει κατάλληλα αντισώματα προστίθεται σε ερυθρά αιμοσφαίρια που έχουν προηγουμένως υποστεί αγωγή (ευαισθητοποίηση) με διάφορα αντιγόνα.

Συμβαίνει μια συγκεκριμένη κόλληση των ερυθρών αιμοσφαιρίων, η παθητική αιμοσυγκόλληση τους.

Η έμμεση ή παθητική αντίδραση αιμοσυγκόλλησης είναι ανώτερη σε ευαισθησία και ειδικότητα από άλλες ορολογικές μεθόδους και χρησιμοποιείται στη διάγνωση λοιμώξεων που προκαλούνται από βακτήρια, ρικέτσια και πρωτόζωα.

Η μέθοδος για την πραγματοποίηση μιας έμμεσης αντίδρασης αιμοσυγκόλλησης αποτελείται από διάφορα στάδια.

Μετά από πλύση με ρυθμισμένο ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου, το αντιγόνο ερυθροκυττάρων είναι έτοιμο για χρήση. Οι οροί δοκιμής αραιώνονται με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου σε δοκιμαστικούς σωλήνες ή ειδικές πλαστικές πλάκες με φρεάτια και στη συνέχεια προστίθεται ένα διαγνωστικό ερυθροκυττάρων σε κάθε αραίωση του ορού.

Τα αποτελέσματα της έμμεσης αντίδρασης αιμοσυγκόλλησης λαμβάνονται υπόψη από τη φύση του ιζήματος των ερυθρών αιμοσφαιρίων που σχηματίζεται στον πυθμένα του δοκιμαστικού σωλήνα. Ένα αποτέλεσμα αντίδρασης στο οποίο τα ερυθρά αιμοσφαίρια καλύπτουν ομοιόμορφα ολόκληρο τον πυθμένα του σωλήνα θεωρείται θετικό. Σε μια αρνητική αντίδραση, τα ερυθρά αιμοσφαίρια με τη μορφή ενός μικρού δίσκου ή «κουμπιού» βρίσκονται στο κέντρο του πυθμένα του δοκιμαστικού σωλήνα.

Αντίδραση αναστολής αιμοσυγκόλλησης- ορολογική αντίδραση που βασίζεται στην ικανότητα των αντισωμάτων να αποτρέπουν τη συγκόλληση ερυθροκυττάρων με αιμοσυγκόλληση τύπων ιών (αδενοϊοί, αρβοϊοί, ορισμένοι εντεροϊοί, ιοί γρίπης και παραγρίπης, ιλαρά, ρεοϊοί).

Ειδικά αντιιικά αντισώματα αλληλεπιδρούν με τα επιφανειακά μόρια αιμοσυγκολλητίνης των βιριόντων αυτών των ιών και εμποδίζουν τη σύνδεσή τους σε συμπληρωματικά μόρια της μεμβράνης των ερυθροκυττάρων.

ΣΕ πρόσφαταΗ αντίδραση χρησιμοποιείται ευρέως σε εργαστήρια κλινικής ιολογίας για τον προσδιορισμό τίτλων ειδικών αντισωμάτων σε ορισμένους ιούς, καθώς και για ορολογική ταυτοποίηση και τυποποίηση απομονώσεων ιών από κλινικό υλικό ασθενών.

Η χρήση τους είναι κάπως περιορισμένη λόγω της παρουσίας στον ορό του ανθρώπινου αίματος μη ειδικών ιικών αναστολέων, καθώς και φυσικών αντισωμάτων - συγκολλητινών.

Η αντίδραση εξουδετέρωσης είναι η αντίδραση αναστολής της αιμοσυγκόλλησης (HAI).

Το RTGA χρησιμοποιείται:
-για ορότυπο ιών.
-για την οροδιάγνωση λοιμώξεων.
Υπάρχουν δύο τρόποι ρύθμισης:
- μέθοδος σταγόνας σε γυαλί ( ενδεικτική αντίδραση), χρησιμοποιείται για την οροαντιγραφή ιών.
- επεκτείνεται σε δοκιμαστικούς σωλήνες.

Μηχανισμός.

Ορισμένοι ιοί (όπως η γρίπη) έχουν αιμοσυγκολλητίνη, η οποία προκαλεί συγκόλληση των ερυθρών αιμοσφαιρίων διαφόρων ζώων, ανάλογα με τον τύπο του ιού.

Με την παρουσία αντισωμάτων - αντιαιμοσυγκολλητινών - στον ορό, παρατηρείται αναστολή της ιικής δραστηριότητας.
RTGA.
Στόχος: ορότυπος του ιού της γρίπης Α

Συστατικά:
1. Το υπό μελέτη υλικό είναι το αλλαντοϊκό υγρό ενός εμβρύου κοτόπουλου,
2. Διαγνωστικοί οροί κατά της γρίπης,
3. 5% εναιώρημα ερυθροκυττάρων κοτόπουλου.
4.

Αλατούχο διάλυμα.

Η αντίδραση πραγματοποιείται σε γυαλί χρησιμοποιώντας τη μέθοδο σταγόνας. Εφαρμόστε 1 σταγόνα διαγνωστικού ορού και υλικού δοκιμής στο ποτήρι, ανακατέψτε και μετά προσθέστε 1 σταγόνα εναιώρημα ερυθρών αιμοσφαιρίων. Με θετική αντίδραση παρατηρείται ομοιογενής ερυθρότητα και με αρνητική αντίδραση πέφτουν κόκκινες νιφάδες (αιμοσυγκόλληση).

Προηγούμενο31323334353637383940414243444546Επόμενο

Χαρακτηριστικά των ιών της γρίπης. Επιδημιολογία και διάγνωση της γρίπης. Χρήση RTGA για ορότυπο ιών γρίπης. Προετοιμασίες για ειδική πρόληψη και θεραπεία.

Γρίπη ή γρίπη - οξεία μολυσματική ασθένεια, που χαρακτηρίζεται από βλάβη στους βλεννογόνους του άνω μέρους αναπνευστική οδός, πυρετός, γενική μέθη, διαταραχή του καρδιαγγειακού και του νευρικού συστήματος.

Η γρίπη είναι επιρρεπής σε επιδημική και πανδημική εξάπλωση λόγω της υψηλής μεταδοτικότητας και μεταβλητότητας του παθογόνου.

Χαρακτηριστικά των παθογόνων. Παθογόνα - οι ιοί της γρίπης ανήκουν στην οικογένεια. Orthomyxoviridae, γένη Influenzavirus A, B και Influenzavirus C. Οι ιοί της γρίπης είναι ιοί RNA. Ο ιός της γρίπης τύπου Α απομονώθηκε το 1933 από τους W. Smith, K. Andrews και P. Laidlaw. Το 1940 ο Τ.

Εφαρμογή της μεθόδου της αιμοσυγκόλλησης στην ιολογία.

Οι Francis και R. Magill απομόνωσαν ιούς γρίπης τύπου Β, το 1949 R. Taylor - τύπου C. Στη Ρωσία, οι πρώτοι ιοί γρίπης απομονώθηκαν το 1936 από τον A. A. Smorodintsev και ταξινομήθηκαν ως τύπου A. Morphology. Οι ιοί της γρίπης έχουν σφαιρικό σχήμα (σχήμα μπάλας) - 80 - 120 nm, λιγότερο συχνά έχουν νηματοειδές σχήμα. Αποτελείται από: 1) πυρήνα - νουκλεοκαψίδιο ελικοειδούς τύπου συμμετρίας (μονόκλωνος γραμμικός κλώνος «-» RNA + πρωτεϊνικό καψίδιο). 2) βασική μεμβράνη- εξωτερική λιποπρωτεϊνική μεμβράνη - υπερκαψίδιο.

Στην επιφάνεια του κελύφους υπάρχουν γλυκοπρωτεΐνες (με τη μορφή ακίδων και λαχνών) 2 τύπων: 1) αιμοσυγκολλητίνη - προάγει την προσκόλληση στους κυτταρικούς υποδοχείς. 2) νευραμινιδάση - προωθεί την απελευθέρωση του ιού από το κύτταρο. Καλλιέργεια. Για την καλλιέργεια, χρησιμοποιούνται έμβρυα κοτόπουλου, πρωτογενείς κυτταρικές καλλιέργειες με θρυψίνη και μερικές φορές πειραματόζωα.

Το πιο βολικό μοντέλο είναι τα έμβρυα κοτόπουλου 10-12 - ημερών ηλικίας. Σας επιτρέπει να αποκτήσετε μεγάλες ποσότητες του ιού, που είναι απαραίτητος για την παραγωγή εμβολίων και αντιβακτηριακών φαρμάκων.

Η μόλυνση πραγματοποιείται στην αλλοντοϊκή κοιλότητα, στη χόριο-αλλοντοϊκή μεμβράνη, στην αμνιακή κοιλότητα, στο αμνίο. Η παρουσία του ιού σε ένα έμβρυο κοτόπουλου ανιχνεύεται με μια αντίδραση αιμοσυγκόλλησης. Αντιγονική δομή. Οι ιοί έχουν ένα εσωτερικό αντιγόνο - S και επιφανειακά αντιγόνα: ΗΑ-αιμοσυγκολλητίνη και ΝΑ-νευραμινιδάση. Το αντιγόνο S είναι ειδικό για την ομάδα, κοινό για ολόκληρο τον τύπο, σύμφωνα με αυτό το αντιγόνο, οι ιοί της γρίπης χωρίζονται σε τύπους Α, Β και C. Αυτό είναι ένα σταθερό (αμετάβλητο) αντιγόνο που δεσμεύει το συμπλήρωμα.

Τα αντιγόνα ΗΑ και ΝΑ είναι ειδικά αντιγόνα. Το αντιγόνο ΗΑ προκαλεί το σχηματισμό αντισωμάτων εξουδετέρωσης του ιού και την προσκόλληση των ερυθρών αιμοσφαιρίων.

Το αντιγόνο NA προκαλεί το σχηματισμό αντισωμάτων που εξουδετερώνουν μερικώς τους ιούς.

Ο ιός τύπου Β είναι λιγότερο μεταβλητός, ενώ ο τύπος C είναι εξαιρετικά σταθερός.

Τοξικές ιδιότητες. Τοξική επίδραση του ιού στον οργανισμό ( πονοκέφαλο, μυϊκός πόνος, πυρετός, καταρροϊκά συμπτώματα) προκαλείται από ιικές πρωτεΐνες (το ίδιο το ιικό σωματίδιο). Αυτή η δράση είναι αυστηρά ειδική και εξουδετερώνεται μόνο από ανοσοορό του κατάλληλου τύπου ή υποτύπου ή ορού όσων έχουν αναρρώσει από τη νόσο. Αντίσταση. Οι ιοί της γρίπης είναι ευαίσθητοι στις ακτίνες UV, στα απολυμαντικά (φορμαλίνη, αλκοόλ, φαινόλη, χλωραμίνη) και σε λιποδιαλύτες.

Σε υγρό περιβάλλον πεθαίνουν σε θερμοκρασία 50 - 60°C για αρκετά λεπτά. Σε θερμοκρασία δωματίου στον αέρα, οι ιοί διατηρούν μολυσματικές ιδιότητες για αρκετές ώρες. Διαρκούν πολύ όταν στεγνώσουν και όταν παγώσουν (-70°C) όχι μόνο διαρκούν πολύ, αλλά και δεν χάνουν τη μολυσματικότητα.

Ευαισθησία των ζώων. Υπό φυσικές συνθήκες, οι ιοί τύπου Α μολύνουν ανθρώπους και ζώα (προσβάλλονται άλογα και χοίροι), ενώ οι ιοί τύπου Β και Γ προσβάλλουν μόνο ανθρώπους. Μεταξύ των εργαστηριακών ζώων, τα λευκά ποντίκια, τα αφρικανικά κουνάβια, τα συριακά χάμστερ και οι πίθηκοι είναι ευαίσθητα στους ιούς.

Η ασθένεια στα ζώα χαρακτηρίζεται από βλάβη των πνευμόνων, πυρετώδη κατάσταση και μπορεί να οδηγήσει σε θάνατο ζώων. Επιδημιολογία της νόσου. Η πηγή μόλυνσης είναι ένα άρρωστο άτομο με κλινικά έντονη ή ασυμπτωματική μορφή. Ένα άρρωστο άτομο απελευθερώνει τον ιό περιβάλλοόταν βήχετε, μιλάτε, φταρνίζεστε με σταγόνες σάλιου, βλέννας, πτυέλων ήδη κατά την περίοδο επώασης.

Ο ασθενής μολύνεται 24 ώρες πριν την έναρξη των κύριων συμπτωμάτων και ενέχει κίνδυνο επιδημίας εντός 48 ωρών μετά την εξαφάνισή τους.

Ο μηχανισμός μετάδοσης είναι αερογενής. Η διαδρομή μετάδοσης είναι αερομεταφερόμενη. Η ευαισθησία των ανθρώπων στη γρίπη είναι πολύ υψηλή. Όλοι αρρωσταίνουν ηλικιακές ομάδες, κυρίως σε χειμερινή ώρα. Τα παιδιά και οι ηλικιωμένοι είναι πιο ευαίσθητοι. Το όνομα της νόσου αντικατοπτρίζει τις ιδιαιτερότητες της επιδημιολογίας: γρίπη από τα γαλλικά. λαβή - αρπάγη, γρίπη - από τα ιταλικά. Influenza di freddo - η επίδραση του κρυολογήματος.

Από όλα τα πικάντικα αναπνευστικές παθήσειςη γρίπη είναι η πιο διαδεδομένη και σοβαρή ασθένεια. Οι πανδημίες και οι επιδημίες γρίπης καλύπτουν έως και 30-50% ή περισσότερο του πληθυσμού σφαίρα, προκαλώντας τεράστιες ζημιές στην υγεία και την οικονομία των χωρών. Οι πρώτες περιγραφές επιδημιών γρίπης χρονολογούνται από τον 12ο-14ο αιώνα. Η εμφάνιση πανδημιών και μεγάλων επιδημιών προκαλείται από τον ιό της γρίπης τύπου Α, ο οποίος οφείλεται στην υψηλή μεταβλητότητα του ιού και σχετίζεται με την εμφάνιση ενός νέου υποτύπου ως αποτέλεσμα της μετατόπισης του αντιγόνου.

Μεταξύ των πανδημιών, επιδημικές εστίες εμφανίζονται κάθε 1,5-2 χρόνια, γεγονός που σχετίζεται με αντιγονική μετατόπιση ιών. Το 1918, η πανδημία της ισπανικής γρίπης (1,5 δισεκατομμύρια άνθρωποι αρρώστησαν, 20 εκατομμύρια άνθρωποι πέθαναν) προκλήθηκε από τον ιό της γρίπης Α1. Αρχικά καταγράφηκε στην Ισπανία, αυτή η πανδημία κάλυψε σχεδόν ολόκληρο τον πληθυσμό της Γης. η νόσος χαρακτηρίστηκε από την ανάπτυξη εξαιρετικά σοβαρής αιμορραγικής πνευμονίας με ποσοστό ρεκόρ θνησιμότητας (έως και 1% όλων των περιπτώσεων).

Το 1957, η «ασιατική» πανδημία (2 δισεκατομμύρια άνθρωποι αρρώστησαν) προκλήθηκε από έναν νέο υποτύπο - τον υποτύπο Α2. Το 1968, η πανδημία «Χονγκ Κονγκ» (1 δισεκατομμύριο άνθρωποι αρρώστησαν) προκλήθηκε από έναν υποτύπο που εμφανίστηκε πρόσφατα - τον υποτύπο Α3. Κατά κανόνα, νέα επιλογήΟ ιός εκτοπίζει την παραλλαγή που κυκλοφορούσε στο παρελθόν από τον ανθρώπινο πληθυσμό.

Αλλά το 1977, μετά από ένα διάλειμμα 20 ετών, ο τύπος Α1 «επέστρεψε» απροσδόκητα, γεγονός που οδήγησε σε μια μεγάλη επιδημία. Κατά συνέπεια, οι εκτοπισμένες παραλλαγές του ιού της γρίπης επιμένουν και, σε ορισμένα διαστήματα, μπορούν να προκαλέσουν ξανά επιδημία. Ο ιός τύπου Β προκαλεί τοπικές επιδημίες, αλλά ο τύπος C δεν προκαλεί επιδημίες. Παθογένεση και κλινική εικόνα της νόσου. Η πύλη εισόδου είναι η ανώτερη αναπνευστική οδός. Ο ιός εισβάλλει στα επιθηλιακά κύτταρα της βλεννογόνου μεμβράνης και πολλαπλασιάζεται σε αυτά.

Η επίδραση του ιού στα επιθηλιακά κύτταρα προκαλεί τη νέκρωση τους και την απολέπιση (απόρριψη) του επιθηλίου, με αποτέλεσμα η βλεννογόνος μεμβράνη να γίνεται διαπερατή από ιούς και βακτήρια. Διεισδύουν στο αίμα και εξαπλώνονται σε όλο το σώμα. Η ίωση συνοδεύεται από πολλαπλές βλάβες του τριχοειδούς ενδοθηλίου με αύξηση της διαπερατότητάς τους.

ΣΕ σοβαρές περιπτώσειςΠαρατηρούνται εκτεταμένες αιμορραγίες στους πνεύμονες, στο μυοκάρδιο και στα παρεγχυματικά όργανα. Τα προϊόντα διάσπασης των κατεστραμμένων κυττάρων και των ιικών πρωτεϊνών έχουν τοξική επίδρασησε διάφορα όργανα και συστήματα οργάνων. Οι τοξίνες του ιού καταπιέζουν έντονα το κεντρικό νευρικό σύστημα και παρόλο που η διαδικασία δεν διαρκεί πολύ (3 - 5 ημέρες), ο άρρωστος παραμένει εξασθενημένος για μεγάλο χρονικό διάστημα και κάποια δευτερογενής μόλυνση ενώνεται με το εξασθενημένο σώμα και προκύπτουν επιπλοκές: πνευμονία γρίπης , οξύ πνευμονικό οίδημα, νεφρική βλάβη , καρδιά, βρόγχοι.

Μια συχνή επιπλοκή της γρίπης είναι βακτηριακή πνευμονία(στρεπτόκοκκοι ομάδας Β). Κατά τη διάρκεια της πανδημίας της ισπανικής γρίπης, άνθρωποι πέθαναν κυρίως από δευτερογενή βακτηριακή πνευμονία.

Στην παθογένεση της γρίπης, δεν είναι μόνο σημαντική η δηλητηρίαση, αλλά και η αλλεργία, καθώς και η παραβίαση των λειτουργικών ιδιοτήτων των ανοσοεπαρκών κυττάρων με την ανάπτυξη ανοσοανεπάρκειας. Περίοδος επώασης- αρκετές ώρες - 1-3 ημέρες. Χαρακτηρίζεται από οξεία έναρξη, αύξηση της θερμοκρασίας στους 37,5 - 38 ° C, γενική μέθη, εκφράζεται σε κακουχία, πονοκέφαλο, πόνο σε βολβοί των ματιών, φλεγμονώδεις διεργασίες της αναπνευστικής οδού ποικίλης σοβαρότητας (ρινίτιδα, λαρυγγίτιδα, τραχειίτιδα, φαρυγγίτιδα).

Η εμπύρετη κατάσταση της γρίπης χωρίς επιπλοκές διαρκεί 5-6 ημέρες. Ασυδοσία. Μετά από μια ασθένεια, σχηματίζεται ειδική για τον τύπο και το στέλεχος ανοσία, η οποία παρέχεται από συγκεκριμένους και μη ειδικούς κυτταρικούς και χυμικούς παράγοντες. Μεγάλη αξίαΈχετε αντισώματα Ig A δεν αναπτύσσεται μετά από γρίπη τύπου A1, μπορείτε να πάθετε γρίπη τύπου A2. Μετά από έναν ιό τύπου Β, η ανοσία διαρκεί 1-2 χρόνια, μετά από έναν ιό τύπου Β - 3-5 χρόνια.

Παθητική φυσική ανοσία - σε παιδιά κάτω των 8 - 11 μηνών. Λόγω της υψηλής αντιγονικής μεταβλητότητας του ιού, η ανάρρωση δεν οδηγεί στην ανάπτυξη σταθερής ανοσίας σε επαναλαμβανόμενες λοιμώξεις.

Εργαστηριακή διάγνωση. Υλικό υπό μελέτη: επιχρίσματα-αποτυπώματα από τον βλεννογόνο της ρινικής κοιλότητας, ρινοφαρυγγικό έκκριμα, κομμάτια πνευμόνων, εγκέφαλος σε περίπτωση θανάτου.

Διαγνωστικές μέθοδοι: 1) μέθοδος κυτταρινοσκόπησης - ανίχνευση ενδοκυτταρικών εγκλεισμάτων ειδικών για τον ιό - όταν χρωματίζεται με πυοκτανίνη κάτω από μικροσκόπιο, τα έντονα κόκκινα εγκλείσματα του ιού της γρίπης είναι ορατά στα κύτταρα του βλεφαρικού επιθηλίου. 2) ιολογική μέθοδος— απομόνωση του ιού της γρίπης από το ανθρώπινο σώμα με μόλυνση εμβρύων κοτόπουλου με επιχρίσματα από το ρινοφάρυγγα του ασθενούς· η ένδειξη (παρουσία) του ιού πραγματοποιείται με τη χρήση RGA (οι ιοί της γρίπης συγκολλούν ερυθροκύτταρα ανθρώπων και διαφόρων ζώων), η ταυτοποίηση του ιού πραγματοποιείται σε στάδια: ο τύπος προσδιορίζεται στο RSC, ο υπότυπος αιμοσυγκολλητίνης προσδιορίζεται στο RGA, και ο υποτύπος νευραμινιδάσης προσδιορίζεται στην αντίδραση αναστολής της ενζυμικής δραστηριότητας. 3) ορολογική μέθοδος - ανίχνευση αύξησης του τίτλου (4 φορές) συγκεκριμένων αντισωμάτων στον ορό αίματος του ασθενούς χρησιμοποιώντας RSC, RTGA, RN σε κυτταρική καλλιέργεια, αντίδραση καταβύθισης σε γέλη, ELISA. 4) βιολογική μέθοδος- ενδορινική μόλυνση ποντικών - εισαγωγή υλικού στους πνεύμονες κάτω αναισθησία με αιθέρα; ποντίκια πεθαίνουν μετά από 2 - 3 ημέρες ως αποτέλεσμα πνευμονίας. 5) ταχεία διάγνωση - ανίχνευση ιικού αντιγόνου με χρήση RIF.

Θεραπεία και πρόληψη.

Για την πρόληψη και τη θεραπεία τις πρώτες ημέρες της νόσου χρησιμοποιείται ιντερφερόνη ανθρώπινων λευκοκυττάρων (ενδορινικά). ΣΕ ιατρικούς σκοπούςχρήση αντιιικά φάρμακα- ρεμανταδίνη (γρίπη τύπου Α), αδαπρομίνη, βιραζόλη και ανοσοτροποποιητικά φάρμακα - διβαζόλη, προδιγιοζάνη, λεβαμισόλη.

Σε περίπτωση σοβαρής γρίπης, ιδιαίτερα στα παιδιά, χρησιμοποιείται αντιγριπική ανοσοσφαιρίνη δότη, καθώς και φάρμακα - αναστολείς των κυτταρικών πρωτεασών (Gordox, Contrical, αμινοκαπροϊκό οξύ).

Ειδική πρόληψη. Χρησιμοποιούνται τα ακόλουθα αντιιικά φάρμακα και ανοσοτροποποιητές, καθώς και εμβόλια - ζωντανά και αδρανοποιημένα: 1) ζωντανά μονοεμβόλια για από του στόματος χρήση - εξασθενημένα στελέχη ιών που κυκλοφορούν αυτή τη στιγμή (Α1, Α3 και Β). παρουσιάζουν τη μεγαλύτερη ανοσογονικότητα. 2) εμβόλια ολικού ιού από λοιμώδη στελέχη που απενεργοποιούνται από φορμαλδεΰδη ή ακτίνες UV. 3) εμβόλια γρίπης υπομονάδας μόνο από επιφανειακά αντιγόνα - αντιγόνα HA και NA (έχουν ελάχιστη αντιδραστικότητα).

Για τη λήψη εμβολίων, οι ιοί καλλιεργούνται σε έμβρυα κοτόπουλου και σε κυτταροκαλλιέργειες εμβρύων κοτόπουλου.

Όταν χορηγούνται εμβόλια, σχηματίζεται τοπική και χυμική ανοσία. Ο εμβολιασμός πραγματοποιείται σε περιόδους μεγαλύτερου κινδύνου επιδημιών. Ενδείκνυται κυρίως για νεότερους και ηλικιωμένους. Η χρήση νεκρών εμβολίων απαιτεί ετήσιο επανεμβολιασμό. η αποτελεσματικότητά τους δεν υπερβαίνει το 60 - 70%.

Επειδή Συχνά παρατηρούνται αντιγονικές παραλλαγές του παθογόνου, τότε το σύνολο των αντιγόνων του αντίστοιχου ιού για ανοσοποίηση μπορεί να προσδιοριστεί μόνο αφού ξεκινήσει το ξέσπασμα της νόσου.

Εισιτήριο 15.

Αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (HRA).

Στο εργαστήριο χρησιμοποιούνται δύο αντιδράσεις αιμοσυγκόλλησης με διαφορετικούς μηχανισμούς δράσης.

Η πρώτη RGA είναι ορολογική. Σε αυτή την αντίδραση, τα ερυθρά αιμοσφαίρια συγκολλούνται όταν αλληλεπιδρούν με κατάλληλα αντισώματα (αιμοσυγκολλητίνες).

Η αντίδραση χρησιμοποιείται ευρέως για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματος.

Το δεύτερο RGA δεν είναι ορολογικό. Σε αυτό, η προσκόλληση των ερυθρών αιμοσφαιρίων δεν προκαλείται από

αντισώματα, αλλά ειδικές ουσίες που σχηματίζονται από ιούς. Για παράδειγμα, ο ιός της γρίπης συγκολλεί τα ερυθρά αιμοσφαίρια του κοτόπουλου και ινδικά χοιρίδια, ιός πολιομυελίτιδας - ερυθρά αιμοσφαίρια προβάτου. Αυτή η αντίδραση μας επιτρέπει να κρίνουμε την παρουσία ενός συγκεκριμένου ιού στο υπό μελέτη υλικό.

Η αντίδραση πραγματοποιείται σε δοκιμαστικούς σωλήνες ή σε ειδικές πλάκες με φρεάτια.

Το υλικό που ελέγχεται για την παρουσία του ιού αραιώνεται με ισοτονικό διάλυμα από 1:10 έως 1:1280. 0,5 ml από κάθε αραίωση αναμιγνύεται με ίσο όγκο 1-2% εναιωρήματος ερυθρών αιμοσφαιρίων. Στον έλεγχο, 0,5 ml ερυθροκυττάρων αναμιγνύονται με 0,5 ml ισοτονικού διαλύματος. Οι σωλήνες τοποθετούνται σε θερμοστάτη για 30 λεπτά και οι πλάκες αφήνονται σε θερμοκρασία δωματίου για 45 λεπτά.

Λογιστική για τα αποτελέσματα.Εάν η αντίδραση είναι θετική, εμφανίζεται ένα ίζημα ερυθρών αιμοσφαιρίων με χτενισμένες άκρες («ομπρέλα») στον πυθμένα του δοκιμαστικού σωλήνα ή του πηγαδιού, που καλύπτει ολόκληρο τον πυθμένα του φρεατίου.

Αντίδραση αναστολής αιμοσυγκόλλησης

Εάν το αποτέλεσμα είναι αρνητικό, τα ερυθρά αιμοσφαίρια σχηματίζουν ένα πυκνό ίζημα με λείες άκρες («κουμπί»). Το ίδιο ίζημα πρέπει να βρίσκεται στον έλεγχο.

Η ένταση της αντίδρασης εκφράζεται με πρόσημα «+». Ο τίτλος του ιού είναι η μέγιστη αραίωση του υλικού στο οποίο λαμβάνει χώρα η συγκόλληση.

Αντίδραση αναστολής αιμοσυγκόλλησης

Πρόκειται για μια ορολογική αντίδραση κατά την οποία συγκεκριμένα αντιιικά αντισώματα, αλληλεπιδρώντας με τον ιό (αντιγόνο), τον εξουδετερώνουν και του στερούν την ικανότητα συγκόλλησης των ερυθρών αιμοσφαιρίων, δηλ.

ε. αναστέλλουν την αντίδραση αιμοσυγκόλλησης. Αυτή η αντίδραση σάς επιτρέπει να προσδιορίσετε τον τύπο και τον τύπο των ιών.

Ρύθμιση αντίδρασης. 0,25 ml αντιιικός ορόςαναμεμειγμένο με ίσο όγκο υλικού που περιέχει τον ιό. Το μίγμα ανακινείται και τοποθετείται σε θερμοστάτη για 30 λεπτά, μετά από τα οποία προστίθενται 0,5 ml αιωρήματος ερυθρών αιμοσφαιρίων 1-2%.

Λογιστική για τα αποτελέσματα.Εάν το πείραμα πραγματοποιηθεί σωστά, θα πρέπει να σχηματιστεί ένα «κουμπί» στον έλεγχο του ορού και των ερυθροκυττάρων - δεν υπάρχει παράγοντας συγκόλλησης των ερυθροκυττάρων. στον έλεγχο αντιγόνων, σχηματίζεται μια "ομπρέλα" - ο ιός προκάλεσε συγκόλληση των ερυθρών αιμοσφαιρίων.

Εάν ο ορός είναι ομόλογος με τον ιό που μελετάται, σχηματίζεται ένα «κουμπί» - ο ορός έχει εξουδετερώσει τον ιό.

Έμμεση αντίδραση αιμοσυγκόλλησης

Η έμμεση (παθητική) αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (RIHA) βασίζεται στο γεγονός ότι τα ερυθρά αιμοσφαίρια, εάν ένα διαλυτό αντιγόνο προσροφηθεί στην επιφάνειά τους, αποκτούν την ικανότητα να συγκολλούνται όταν αλληλεπιδρούν με αντισώματα στο προσροφημένο αντιγόνο.

Ρύθμιση αντίδρασης.

Ο ορός θερμαίνεται για 30 λεπτά στους 56 °C, αραιώνεται διαδοχικά σε αναλογία 1:10 - 1:1280 και χύνεται σε 0,25 ml σε δοκιμαστικούς σωλήνες ή φρεάτια, όπου στη συνέχεια τοποθετούνται 2 σταγόνες ερυθρών αιμοσφαιρίων με αντιγόνα που έχουν προσροφηθεί πάνω τους. προστέθηκε.

Στοιχεία ελέγχου:ένα εναιώρημα ερυθροκυττάρων με αντιγόνα προσροφημένα πάνω τους με προφανώς άνοσο ορό, ένα εναιώρημα ερυθροκυττάρων με αντιγόνα προσροφημένα πάνω τους με κανονικό ορό. ένα εναιώρημα φυσιολογικών ερυθρών αιμοσφαιρίων με δοκιμαστικό ορό.

Στον πρώτο έλεγχο θα πρέπει να γίνει συγκόλληση, στον δεύτερο και στον τρίτο δεν πρέπει.

Ερωτήσεις ασφαλείας.

1. Τι δείχνει ένα θετικό αποτέλεσμα ανάλυσης ακτίνων Χ μεταξύ των ερυθρών αιμοσφαιρίων και του υλικού που ελέγχεται για την παρουσία του ιού;

2. Θα συμβεί αντίδραση συγκόλλησης των ερυθρών αιμοσφαιρίων εάν προστεθεί σε αυτά ένας ιός και ο αντίστοιχος ορός του;

Πώς ονομάζεται η αντίδραση που αποκαλύπτει αυτό το φαινόμενο;

ΠΡΑΚΤΙΚΗ ΕΡΓΑΣΙΑ Νο 12.

Αντίδραση στερέωσης συμπληρώματος.

Η αντίδραση στερέωσης συμπληρώματος (FFR) βασίζεται στο γεγονός ότι ένα συγκεκριμένο σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος πάντα προσροφά (δεσμεύει) το συμπλήρωμα στον εαυτό του.

Αυτή η αντίδραση χρησιμοποιείται ευρέως για την ταυτοποίηση αντιγόνων και την οροδιάγνωση λοιμώξεων, ιδιαίτερα ασθενειών που προκαλούνται από σπειροχαίτες (αντίδραση Wassermann), ρικέτσια και ιούς.

Το RKS είναι μια σύνθετη ορολογική αντίδραση.

Περιλαμβάνει συμπλήρωμα και δύο συστήματα αντιγόνου-αντισώματος. Ουσιαστικά πρόκειται για δύο ορολογικές αντιδράσεις.

Το σωστό κύριο σύστημα αποτελείται από ένα αντιγόνο και ένα αντίσωμα (το ένα είναι γνωστό, το άλλο όχι). Μια ορισμένη ποσότητα συμπληρώματος προστίθεται σε αυτό. Εάν το αντιγόνο και το αντίσωμα αυτού του συστήματος ταιριάζουν, θα συνδεθούν και θα δεσμεύσουν ένα κομπλιμέντο. Το προκύπτον σύμπλοκο είναι λεπτώς διασκορπισμένο και δεν είναι ορατό.

Ο σχηματισμός αυτού του συμπλέγματος ανιχνεύεται χρησιμοποιώντας ένα δεύτερο αιμολυτικό ή σύστημα δείκτη.

Περιλαμβάνει ερυθρά αιμοσφαίρια προβάτου (αντιγόνο) και τον αντίστοιχο αιμολυτικό ορό (αντίσωμα), δηλ. έτοιμο ανοσοποιητικό σύμπλεγμα. Σε αυτό το σύστημα, η λύση των ερυθρών αιμοσφαιρίων μπορεί να συμβεί μόνο με την παρουσία συμπληρώματος. Εάν το συμπλήρωμα δεσμεύεται από το πρώτο σύστημα, τότε στο δεύτερο σύστημα δεν θα υπάρχει αιμόλυση, γιατί

κανένα δωρεάν συμπλήρωμα. Η απουσία αιμόλυσης (το περιεχόμενο του σωλήνα είναι θολό ή υπάρχει ίζημα ερυθροκυττάρων στον πυθμένα) καταγράφεται ως θετικό αποτέλεσμα RSC.

Εάν στο πρώτο σύστημα το αντιγόνο δεν αντιστοιχεί στο αντίσωμα, τότε δεν θα σχηματιστεί το ανοσοποιητικό σύμπλεγμα και το συμπλήρωμα θα παραμείνει ελεύθερο. Παραμένοντας ελεύθερο, το κομπλιμέντο συμμετέχει στο δεύτερο σύστημα, προκαλώντας αιμόλυση, το αποτέλεσμα RSC είναι αρνητικό (τα περιεχόμενα των σωλήνων είναι διαφανή - "λακαρισμένο αίμα").

Συστατικά, αντιδράσεις στερέωσης συμπληρώματος:

Αντιγόνο - συνήθως λύμα, εκχύλισμα, απτένιο,

λιγότερο συχνά ένα εναιώρημα μικροοργανισμών.

2. Αντίσωμα – ορός ασθενούς.

3. Συμπλήρωμα - ορός ινδικού χοιριδίου.

Αντιγόνο - ερυθρά αιμοσφαίρια προβάτου.

5. Αντίσωμα - αιμολυσίνη σε ερυθροκύτταρα προβάτου.

6. Ισοτονικό διάλυμα.

Λόγω του ότι συμμετέχει το ΡΣΚ μεγάλο αριθμόσύνθετα συστατικά,

πρέπει πρώτα να τιτλοδοτηθούν και να αντιδράσουν σε ακριβείς ποσότητες και σε ίσους όγκους: 0,5 ή 0,25, λιγότερο συχνά 0,2, 1,25 ή 1,0 ml (μεγαλύτεροι όγκοι δίνουν πιο ακριβές αποτέλεσμα). Η τιτλοδότηση των συστατικών της αντίδρασης πραγματοποιείται στον ίδιο όγκο με το πείραμα, αντικαθιστώντας τα συστατικά που λείπουν με ένα ισοτονικό διάλυμα.

Σχετικές πληροφορίες:

Αναζήτηση στον ιστότοπο:

Ένας άλλος τύπος RNGA - αντισώματα απορροφώνται στην επιφάνεια των ερυθροκυττάρων και η επακόλουθη συγκόλληση τους λαμβάνει χώρα παρουσία ενός ομόλογου αντιγόνου.

Στην περίπτωση αυτή, τέτοια ερυθροκύτταρα ονομάζονται διαγνωστικά αντισώματα ερυθροκυττάρων ή ερυθροκύτταρα που ευαισθητοποιούνται από αντισώματα.

Αντίδραση αναστολής αιμοσυγκόλλησης (HAI)

Σε αυτή την περίπτωση, η αντίδραση ονομάζεται αντίδραση συγκόλλησης λατέξ (RLA) ή χρησιμοποιείται Staphylococcus aureus - αντίδραση πήξης κ.λπ. Συνήθως, τα διαγνωστικά ερυθροκυττάρων προετοιμάζονται σε επιχειρήσεις βιολογικής βιομηχανίας και η κύρια εμπειρία του RNGA πραγματοποιείται σε διαγνωστικά εργαστήρια.

Η προετοιμασία των διαγνωστικών ερυθροκυττάρων περιλαμβάνει τα ακόλουθα βήματα:

στερέωση των ερυθρών αιμοσφαιρίων με φορμαλδεΰδη ή γλουταρικές ή ακρυλικές αλδεΰδες.
Τέτοια επεξεργασμένα ερυθρά αιμοσφαίρια αποθηκεύονται για μεγάλο χρονικό διάστημα. Συχνότερα, για το σκοπό αυτό χρησιμοποιούνται ερυθροκύτταρα από πρόβατα, ανθρώπους, κοτόπουλα κ.λπ.
επεξεργασία σταθερών ερυθροκυττάρων με διάλυμα τανίνης. Ως αποτέλεσμα, τα ερυθρά αιμοσφαίρια αποκτούν την ικανότητα να προσροφούν μη αναστρέψιμα πρωτεΐνες (ιούς και αντισώματα) στην επιφάνειά τους.
ευαισθητοποίηση μαυρισμένων ερυθροκυττάρων από ιούς ή αντισώματα.

Πρέπει να σημειωθεί ότι οι μέθοδοι προετοιμασίας διαγνωστικών ερυθροκυττάρων για ιογενείς λοιμώξεις είναι διαφορετικές.

Η διαδικασία για την εκτέλεση RNGA για την ανίχνευση και τον προσδιορισμό του τίτλου αντισωμάτων είναι η εξής:

ίσες δόσεις ερυθροκυττάρων ευαισθητοποιημένων με αντιγόνο προστίθενται σε διαδοχικές διπλάσιες αραιώσεις ορού.
Το μείγμα αφήνεται για 2-3 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου ή για 16-18 ώρες στους 4 °C.
λαμβάνουν υπόψη τα αποτελέσματα.
Εάν ο ορός περιέχει αντισώματα έναντι του ιού με τον οποίο ευαισθητοποιήθηκαν τα ερυθρά αιμοσφαίρια, παρατηρείται αιμοσυγκόλληση, η οποία αξιολογείται σε διασταυρώσεις.

Το RNGA σάς επιτρέπει να επιλύσετε τα ακόλουθα διαγνωστικά προβλήματα:

ανίχνευση αντισωμάτων και προσδιορισμό του τίτλου τους στον ορό αίματος χρησιμοποιώντας ένα γνωστό ερυθροκυτταρικό αντιγόνο diagnosticum.
ανίχνευση και ταυτοποίηση ενός άγνωστου ιού χρησιμοποιώντας ένα γνωστό διαγνωστικό αντισώματος ερυθροκυττάρων.

Πλεονεκτήματα του RNGA: υψηλή ευαισθησία, απλότητα τεχνικής τοποθέτησης και ταχύτητα απόκρισης.

Ωστόσο, είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι προκύπτουν μεγάλες δυσκολίες στην προετοιμασία σταθερών διαγνωστικών ερυθροκυττάρων (μεγάλη εξάρτηση από την καθαρότητα των συστατικών που χρησιμοποιούνται, ανάγκη επιλογής τρόπου στερέωσης, μαυρίσματος και ευαισθητοποίησης των ερυθροκυττάρων για κάθε τύπο ιού).

Εάν βρείτε κάποιο σφάλμα, επιλέξτε ένα κομμάτι κειμένου και πατήστε Ctrl+Enter.

συμμαθητές

Χρησιμοποιεί ερυθρά αιμοσφαίρια ή ουδέτερα συνθετικά υλικά (για παράδειγμα, σωματίδια λατέξ), στην επιφάνεια των οποίων απορροφώνται αντιγόνα (βακτηριακά, ιικά, ιστοί) ή αντισώματα.

Η συγκόλληση τους συμβαίνει όταν προστίθενται κατάλληλοι οροί ή αντιγόνα. Τα ερυθρά αιμοσφαίρια που ευαισθητοποιούνται με αντιγόνα ονομάζονται αντιγονικά ερυθροκύτταρα διαγνωστικά και χρησιμοποιούνται για την ανίχνευση και την τιτλοδότηση αντισωμάτων. Ερυθρά αιμοσφαίρια ευαισθητοποιημένα με αντισώματα. ονομάζονται διαγνωστικά ερυθροκυττάρων ανοσοσφαιρίνης και χρησιμοποιούνται για την αναγνώριση αντιγόνων.

Η παθητική αντίδραση αιμοσυγκόλλησης χρησιμοποιείται για τη διάγνωση ασθενειών που προκαλούνται από βακτήρια (τύφος και παρατυφοειδής πυρετός, δυσεντερία, βρουκέλλωση, πανώλη, χολέρα κ.λπ.), πρωτόζωα (ελονοσία) και ιούς (γρίπη, αδενοϊικές λοιμώξειςιογενής ηπατίτιδα Β, ιλαρά, εγκεφαλίτιδα που μεταδίδεται από κρότωνες, Κριμαία αιμορραγικός πυρετόςκ.λπ.), καθώς και για τον προσδιορισμό ορισμένων ορμονών, την ταυτοποίηση υπερευαισθησίαασθενής να φάρμακακαι ορμόνες όπως η πενικιλίνη και η ινσουλίνη.

Αντίδραση παθητικής αιμοσυγκόλλησης (RPHA).

Το τεστ παθητικής αιμοσυγκόλλησης είναι μια ευαίσθητη μέθοδος ορολογικής διάγνωσης και χρησιμοποιείται τόσο για την έγκαιρη όσο και για την αναδρομική διάγνωση, καθώς και για τον προσδιορισμό της ανοσοποιητικής κατάστασης των εμβολιασμένων ατόμων. Σε ασθενείς με τουλαραιμία, τα αντισώματα ανιχνεύονται συνήθως στο τέλος της 1ης ή 2ης εβδομάδας της νόσου μετά από 1-1,5 μήνες, οι τίτλοι RPHA φτάνουν τα μέγιστα επίπεδα (1: 100.000-1: 20.000, λιγότερο συχνά υψηλότερα). μείωση στο επίπεδο 1:100-1:200 αποθηκεύονται για μεγάλο χρονικό διάστημα.

Στα εμβολιασμένα άτομα, τα αντισώματα ανιχνεύονται επίσης συνεχώς, ωστόσο, σε χαμηλότερους τίτλους, που δεν ξεπερνούν το 1:2000-1:5000 1-1,5 μήνα μετά τον εμβολιασμό και παραμένουν για αρκετά χρόνια σε χαμηλό επίπεδο 1:20-1:80.

Το αντιγόνο για τη σταδιοποίηση του RPHA είναι το διαγνωστικό ερυθροκύτταρο τουλαραιμίας (αντιγονικό).

Το φάρμακο είναι φορμαλινοποιημένα ερυθρά αιμοσφαίρια προβάτου, ευαισθητοποιημένα με αντιγόνο τουλαραιμίας, διαθέσιμο σε υγρή και ξηρή μορφή. Υγρό παρασκεύασμα - ένα εναιώρημα 10% ερυθρών αιμοσφαιρίων σε διάλυμα φορμαλδεΰδης συγκέντρωσης 10%. Το ξηρό λυοφιλισμένο παρασκεύασμα είναι ένα εναιώρημα 10% των ερυθρών αιμοσφαιρίων που έχει ξηρανθεί σε κενό χωρίς συντηρητικό. Πριν από τη χρήση, αραιώνεται σύμφωνα με τις οδηγίες στην ετικέτα. Για τη διεξαγωγή της αντίδρασης σε πλάκες πολυστυρενίου, και τα δύο φάρμακα χρησιμοποιούνται σε συγκέντρωση 2,5% και κατά τη διεξαγωγή της αντίδρασης σε μικροόγκους - σε συγκέντρωση 0,5%.

Τεχνική για τη ρύθμιση του RPGA.

Οι οροί δοκιμής αραιώνονται αλατούχο διάλυμα 1:5 (1:10) και θερμαίνεται στους 56 βαθμούς C για 30 λεπτά.

Αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (HRA) και

Μετά από αυτό, προκειμένου να απομακρυνθούν ετερογενή αντισώματα στα ερυθροκύτταρα προβάτου, οι οροί υποβάλλονται σε επεξεργασία με ένα εναιώρημα 50% φορμαλινοποιημένων ερυθροκυττάρων προβάτου. Για να γίνει αυτό, προσθέστε ερυθρά αιμοσφαίρια με ρυθμό 2 σταγόνες (0,05 ml) ανά 1 ml ορού και ανακατέψτε καλά ανακινώντας.

Ο ορός αφήνεται έως ότου τα ερυθροκύτταρα καθιζάνουν πλήρως ή φυγοκεντρείται μετά από μία ώρα σε θερμοκρασία δωματίου και μετά είναι έτοιμος για εξέταση.

Το υγρό αραίωσης χύνεται σε όγκο 0,5 ml σε μια σειρά φρεατίων σε μια πλάκα πολυστυρενίου.

Κατά τη διάρκεια της προκαταρκτικής μελέτης των ορών, είναι σκόπιμο να ελέγχονται, τοποθετώντας την αντίδραση σε μια μικρή σειρά της πλάκας (6 φρεάτια). Εάν ανιχνευθούν αντισώματα σε μια σύντομη σειρά, οι οροί επανεξετάζονται σε μια μεγάλη σειρά αραιώσεων (12 φρεάτια).

Αφού χυθεί το υγρό αραίωσης, προσθέστε 0,5 ml δοκιμαστικού ορού σε αραίωση 1:5 στο πρώτο φρεάτιο κάθε σειράς (κοντό ή μεγάλο). Στη συνέχεια, οι ίδιοι όγκοι ορού τιτλοδοτούνται με διπλές αραιώσεις. Έτσι, οι αραιώσεις ορού λαμβάνονται στη σύντομη σειρά από 1:10 έως 1:320 και στη μεγάλη σειρά από 1:10 έως 1:20480. Μετά την τιτλοδότηση των ορών, μια σταγόνα (0,05 ml) ενός λειτουργικού εναιωρήματος 2,5% ευαισθητοποιημένων ερυθροκυττάρων προστίθεται σε κάθε φρεάτιο.

Τα περιεχόμενα των πλακών αναδεύονται καλά μέχρι να ληφθεί ένα ομοιογενές εναιώρημα. Οι πλάκες αφήνονται σε θερμοκρασία δωματίου σε σταθερή επιφάνεια τραπεζιού. Η προκαταρκτική καταγραφή της αντίδρασης πραγματοποιείται μετά από 2-3 ώρες, ο τελικός προσδιορισμός του τίτλου γίνεται μετά από πλήρη καθίζηση των ερυθρών αιμοσφαιρίων στα φρεάτια. Οι ακόλουθοι έλεγχοι παρέχονται για την αντίδραση: 1) ορός δοκιμής αραιωμένος 1:10 σε όγκο 0,5 ml + 1 σταγόνα ενός εναιωρήματος 2,5% μη ευαισθητοποιημένων ερυθροκυττάρων. 2) υγρό αραίωσης σε όγκο 0,5 ml + 1 σταγόνα εναιωρήματος 2,5% μη ευαισθητοποιημένων ερυθροκυττάρων. 3) υγρό αραίωσης σε όγκο 0,5 ml + 1 σταγόνα εναιωρήματος 2,5% ευαισθητοποιημένων ερυθροκυττάρων.

Όλοι οι μάρτυρες πρέπει να δίνουν μια σαφώς αρνητική αντίδραση.

Λογιστική και αξιολόγηση RPGA. Η αντίδραση αξιολογείται σύμφωνα με το ακόλουθο σχήμα:

1) απότομα θετική αντίδραση (++++) - τα ερυθρά αιμοσφαίρια πέφτουν στο κάτω μέρος της τρύπας σε ένα ομοιόμορφο στρώμα με τη μορφή "ομπρέλας", η οποία συχνά έχει μια λεπτή τήξη των άκρων.

2) θετική αντίδραση (+++) - τα ερυθρά αιμοσφαίρια καλύπτουν τουλάχιστον τα 2/3 του πυθμένα του πηγαδιού.

3) ασθενώς θετική αντίδραση (++) - το συγκολλητικό είναι μικρό και βρίσκεται στο κέντρο του φρέατος.

4) αμφισβητήσιμη αντίδραση (+) - γύρω από το ίζημα των ερυθροκυττάρων στο κέντρο του φρέατος υπάρχουν μεμονωμένοι κόκκοι συγκολλητισμού.

5) αρνητικό (-) - στο κάτω μέρος της οπής, τα ερυθρά αιμοσφαίρια εγκαθίστανται με τη μορφή ενός "κουμπιού" ή ενός μικρού δακτυλίου με λείες, έντονα καθορισμένες άκρες.

Ο τίτλος του ορού λαμβάνεται υπόψη με βάση την τελευταία αραίωση του ορού, η οποία έδωσε μια πολύ καθαρή αντίδραση (τουλάχιστον τρία συν).

Μια αραίωση 1:100 ή μεγαλύτερη θεωρείται διαγνωστικός τίτλος, ωστόσο, όπως και στην περίπτωση της ΡΑ, είναι απαραίτητο να παρακολουθείται η αύξησή της.

Το RPHA για την τουλαραιμία είναι αρκετά συγκεκριμένο και ανιχνεύει ορισμένες διασταυρούμενες αντιδράσεις μόνο με ορούς βρουκέλλωσης. Διαφορική διάγνωσηείναι δυνατό από το ύψος των τίτλων στο RPGA, οι οποίοι είναι σημαντικά υψηλότεροι με το ομόλογο αντιγόνο.

Τεχνική ρύθμισης RPHA σε μικροόγκους.

Το RPGA μπορεί να εκτελεστεί σε μικροόγκους χρησιμοποιώντας μικροτιτλοδοτητή τύπου Takachi (ή μικροπλάκες με στρογγυλό πυθμένα με μικροπιπέτες), που επιτρέπει την τιτλοδότηση υλικού σε όγκους 25 μl και 50 μl. Η τεχνική αντίδρασης και η αλληλουχία όλων των εργασιών είναι η ίδια όπως όταν μελετάμε σε πλάκες πολυστυρενίου. Θα πρέπει να ληφθεί υπόψη, ωστόσο, ότι η ευαισθησία της μικρομεθόδου είναι συνήθως μία αραίωση (δηλ.

2 φορές) χαμηλότερα από τη μακρομέθοδο.

Για να ρυθμιστεί η αντίδραση σε μικροτιτλοδοτητή, ένα υγρό αραίωσης σε όγκο 50 μl προστίθεται σε κάθε φρεάτιο χρησιμοποιώντας ένα σταγονόμετρο πιπέτας. Στη συνέχεια, χρησιμοποιώντας τιτλοδοτητές με κεφαλή 50 μl, συλλέγεται ο ορός δοκιμής βυθίζοντας την κεφαλή σε αυτόν.

Βεβαιωθείτε ότι το υγρό έχει γεμίσει την κεφαλή τιτλοδότησης. Ο τιτλοδοτητής με ορό μεταφέρεται στο πρώτο φρεάτιο και, κρατώντας το σε κάθετη θέση, αρκετές περιστροφικές κινήσειςκαι προς τις δύο κατευθύνσεις. Στη συνέχεια ο τιτλοδοτητής μεταφέρεται στο επόμενο φρεάτιο και ο χειρισμός επαναλαμβάνεται. Η τιτλοδότηση μπορεί να πραγματοποιηθεί ταυτόχρονα σε πολλές σειρές. Μετά την τιτλοδότηση ολόκληρης της σειράς, ο τιτλοδοτητής πλένεται με απεσταγμένο νερό (αλλάζοντας 2 δόσεις) με περιστροφικές κινήσεις, το νερό αφαιρείται από την κεφαλή χρησιμοποιώντας ένα μάκτρο και καίγεται σε φλόγα καυστήρα.

Μετά την τιτλοδότηση, προσθέστε 25 μl διαγνωστικού υγρού ερυθροκυττάρων στα φρεάτια.

Η συγκέντρωση του διαγνωστικού για RPHA σε μικροόγκους πρέπει να είναι 0,5% (δηλαδή, ένα εναιώρημα 2,5% των ερυθρών αιμοσφαιρίων αραιώνεται επιπλέον 5 φορές). Μετά την προσθήκη ερυθρών αιμοσφαιρίων, οι πλάκες πρέπει να ανακινούνται ελαφρά μέχρι να ληφθεί ένα ομοιογενές εναιώρημα. Τα αποτελέσματα μπορούν να καταγραφούν εντός 1-1,5 ώρας, γεγονός που αποτελεί σημαντικό πλεονέκτημα του RPGA σε έναν μικροτίτλο.

Επιπλέον, αυτή η τεχνική απαιτεί μικρές ποσότητες από όλα τα συστατικά της αντίδρασης και ορούς δοκιμής.

Η αντίδραση λαμβάνεται υπόψη σύμφωνα με το ακόλουθο σχήμα:

1) "+" - πλήρης αιμοσυγκόλληση, κατά την οποία τα ερυθρά αιμοσφαίρια πέφτουν στον πυθμένα του πηγαδιού σε ένα ομοιόμορφο στρώμα με τη μορφή "ομπρέλας", καταλαμβάνοντας τουλάχιστον τα 2/3 του πυθμένα.

2) "+-" - μερική αιμοσυγκόλληση, κατά την οποία τα ερυθρά αιμοσφαίρια πέφτουν στον πυθμένα με τη μορφή ενός χαλαρού δακτυλίου μικρού μεγέθους.

3) "-" - απουσία αιμοσυγκόλλησης, όταν τα ερυθρά αιμοσφαίρια πέφτουν στο κάτω μέρος με τη μορφή ενός μικρού κουμπιού ή δακτυλίου με λεία άκρη.

Ιδιαιτερότητα θετικό αποτέλεσμα, που λαμβάνεται σε RPHA, μπορεί να ελεγχθεί χρησιμοποιώντας μια αντίδραση τριών συστατικών - την αντίδραση αναστολής της παθητικής αιμοσυγκόλλησης (RPHA).

Τεχνική για τη ρύθμιση του RTPGA.

Αυτή η αντίδραση χρησιμοποιείται για να επιβεβαιώσει την εξειδίκευση ενός θετικού αποτελέσματος RPGA όταν υπάρχει αμφιβολία ή έχει ιδιαίτερο επιδημιολογικό ενδιαφέρον. Ο μηχανισμός της αντίδρασης είναι η ειδική αναστολή της αιμοσυγκόλλησης όταν προστίθεται ένα εναιώρημα σκοτωμένου βακτηρίου τουλαραιμίας στον ορό δοκιμής. Τρία συστατικά αλληλεπιδρούν στην αντίδραση: ορός δοκιμής, ειδικό αντιγόνο τουλαραιμίας και αντιγονικό ερυθροκύτταρο diagnosticum Το RTPHA τοποθετείται συνήθως σε μια σειρά 7-8 φρεατίων.

Συνιστάται να εγκαταστήσετε ένα επαναλαμβανόμενο RPGA παράλληλα με το RTPGA. 0,25 ml υγρού αραίωσης χύνεται σε δύο σειρές φρεατίων, στη συνέχεια ο ορός δοκιμής σε όγκο 0,25 ml προστίθεται στα πρώτα φρεάτια και των δύο σειρών και πραγματοποιείται τιτλοδότηση δύο όμοιων σειρών αραιώσεων ορού. Προσθέστε 0,25 ml υγρού αραίωσης σε όλα τα φρεάτια της δεύτερης σειράς και 0,25 ml ενός εναιωρήματος βακτηρίων τουλαραιμίας στα φρεάτια της πρώτης σειράς.

Χρησιμοποιείται Tularemia diagnosticum (που περιέχει 25 δισεκατομμύρια βακτήρια τουλαραιμίας σε 1 ml), προηγουμένως αραιωμένο 50 φορές.

Αυτό το εναιώρημα περιέχει 500 εκατομμύρια βακτήρια σε 1 ml ή 125 εκατομμύρια σε όγκο 0,25 ml. Μετά την προσθήκη του αντιγόνου, η πλάκα αφήνεται για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου, μετά την οποία προστίθεται μία σταγόνα (0,05 ml) ερυθροκυττάρου diagnosticum σε όλα τα φρεάτια και των δύο σειρών, η πλάκα ανακινείται και αφήνεται σε μια επίπεδη επιφάνεια τραπεζιού.

Η λογιστική διενεργείται μετά από 2-3 ώρες.

Λογιστική και αξιολόγηση RTPGA. Εάν ο ορός δοκιμής περιέχει ειδικά αντισώματα για την τουλαραιμία, αυτά εξουδετερώνονται από το προστιθέμενο αντιγόνο και δεν θα συμβεί αιμοσυγκόλληση στην πρώτη σειρά φρεατίων ή, με υψηλό τίτλο ορού, θα παρατηρηθεί αιμοσυγκόλληση σε μικρότερο (2-4) αριθμό φρεάτια παρά στη σειρά με RPHA. Στην περίπτωση αυτή, επιβεβαιώθηκε η ειδικότητα των αποτελεσμάτων.

Εάν σημειωθεί αιμοσυγκόλληση και στις δύο σειρές, π.χ. Εάν τα αποτελέσματα των RTPGA και RPGA συμπίπτουν, αυτό υποδηλώνει την απουσία αντισωμάτων τουλαραιμίας στον ορό δοκιμής. Σε αυτήν την περίπτωση, το πρωταρχικό αποτέλεσμα του RPGA θεωρείται μη ειδικό.

Τεχνική σταδιοποίησης RTHG σε μικροόγκους. Το RTPGA, όπως και το RPGA, μπορεί να εκτελεστεί σε μικροόγκους χρησιμοποιώντας μικροτίτλο τύπου Takachi.

Για να γίνει αυτό, προσθέστε 0,25 μl αραιωτικού υγρού στα φρεάτια των μικροπλακών σε δύο σειρές των 7-8 πηγαδιών η καθεμία. Στη συνέχεια, χρησιμοποιώντας τιτλοδοτητή, προστίθενται 0,25 μl του ορού δοκιμής και τιτλοδοτούνται και στις δύο σειρές. Μετά από αυτό, 25 μl αντιγόνου τουλαραιμίας (η συγκέντρωση του οποίου είναι 500 εκατομμύρια βακτήρια τουλαραιμίας σε 1 ml) προστίθενται σε κάθε φρεάτιο της πρώτης σειράς και 25 μl υγρού αραίωσης στη δεύτερη σειρά.

Οι πλάκες αφήνονται για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου, μετά την οποία προστίθενται 25 μl αντιγονικού zritrocytic diagnosticum (συγκέντρωση 0,5%) σε όλα τα φρεάτια και των δύο σειρών.

Η λογιστική και η αξιολόγηση των αποτελεσμάτων διεξάγονται παρόμοια με τις αντιδράσεις σε μακροόγκους.

Ημερομηνία δημοσίευσης: 2015-02-03; Διαβάστε: 3176 | Παραβίαση πνευματικών δικαιωμάτων σελίδας

studopedia.org - Studopedia.Org - 2014-2018 (0,003 s)…

Αντίδραση Βιδάλ. Από τη δεύτερη εβδομάδα της νόσου, αντισώματα κατά του μολυσματικού παράγοντα συσσωρεύονται στο αίμα των ασθενών. Για τον εντοπισμό τους, ο ορός αίματος του ασθενούς εξετάζεται σε μια αντίδραση συγκόλλησης. Ως αντιγόνα χρησιμοποιούνται καλλιέργειες σκοτωμένης σαλμονέλας - diagnosticums.

Για την εκτέλεση της αντίδρασης Widal, χρησιμοποιείται ο ορός του ασθενούς, ένα σετ διαγνωστικών κιτ και ένα ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου.

Αίμα (2-3 ml) από τον πολτό του δακτύλου ή την κυλινδρική φλέβα συλλέγεται σε αποστειρωμένο σωλήνα και παραδίδεται στο εργαστήριο. Στο εργαστήριο, ο δοκιμαστικός σωλήνας τοποθετείται σε θερμοστάτη για 20-30 λεπτά για να σχηματιστεί θρόμβος, στη συνέχεια χρησιμοποιείται μια πιπέτα Pasteur για να κυκλώσει τον θρόμβο για να τον διαχωριστεί από το τοίχωμα του δοκιμαστικού σωλήνα και τοποθετείται στο κρύο. για 30-40 λεπτά. Ο διαχωρισμένος ορός αναρροφάται και χρησιμοποιείται για τη διεξαγωγή μιας αντίδρασης συγκόλλησης με διαγνωστικά από σαλμονέλα τύφο και παρατυφοειδή πυρετό. Το αίμα μπορεί να φυγοκεντρηθεί για να ληφθεί ορός.

Οποτεδήποτε μολυσματική διαδικασία- τυφοειδής πυρετός ή παρατυφοειδής πυρετός - το σώμα παράγει Ο- και Η-αντισώματα στα ίδια αντιγόνα του παθογόνου.

Τα O-αντισώματα εμφανίζονται πρώτα και εξαφανίζονται αρκετά γρήγορα. Τα H-αντισώματα διαρκούν πολύ. Το ίδιο συμβαίνει και κατά τον εμβολιασμό, επομένως μια θετική αντίδραση Widal με Ο- και Η-αντιγόνα υποδηλώνει την παρουσία της νόσου και μια αντίδραση μόνο με Η-αντιγόνα μπορεί να συμβεί τόσο σε όσους έχουν αναρρώσει (αναμνηστική αντίδραση) όσο και σε αυτούς που έχουν εμβολιαστεί ( εμβολιασμός). Με βάση αυτό, η αντίδραση Widal πραγματοποιείται χωριστά με Ο- και Η-αντιγόνα (diagnosticums).

Δεδομένου ότι ο τυφοειδής πυρετός και ο παρατύφος Α και Β είναι κλινικά παρόμοια, για να προσδιοριστεί η φύση της νόσου, ο ορός του ασθενούς ελέγχεται ταυτόχρονα με διαγνωστικά από Salmonella typhus και παρατύφο Α και Β.

Η αντίδραση Widal χρησιμοποιείται ευρέως γιατί είναι απλή και δεν απαιτεί ειδικές συνθήκες.

Η αντίδραση μπορεί να πραγματοποιηθεί με δύο τρόπους: στάγδην και ογκομετρικό (βλ. Κεφάλαιο 12). Στην πράξη, η ογκομετρική μέθοδος χρησιμοποιείται συχνότερα. Κατά την εκτέλεση μιας γραμμικής αντίδρασης συγκόλλησης, ο αριθμός των σειρών πρέπει να αντιστοιχεί στον αριθμό των αντιγόνων (diagnosticums). Ο αιτιολογικός παράγοντας της νόσου θεωρείται ένας μικροοργανισμός από τον οποίο το διαγνωστικό συγκολλήθηκε από τον ορό του ασθενούς. Μερικές φορές παρατηρείται ομαδική συγκόλληση, καθώς οι αιτιολογικοί παράγοντες του τύφου και του παρατυφοειδούς πυρετού έχουν κοινά αντιγόνα ομάδας. Σε αυτή την περίπτωση, το αποτέλεσμα της αντίδρασης στη σειρά στην οποία σημειώνεται συγκόλληση σε μεγαλύτερη αραίωση ορού θεωρείται θετικό (Πίνακας 36).

Πίνακας 36. Πιθανό αποτέλεσμα της αντίδρασης συγκόλλησης

Σημείωμα. Στην πράξη, η αντίδραση Widal πραγματοποιείται με τέσσερα διαγνωστικά: τυφοειδή πυρετό «Ο» και «Η» και παρατυφοειδή πυρετό Α και Β με διαγνωστικά «ΟΝ».

Εάν η συγκόλληση συμβαίνει μόνο σε μικρές αραιώσεις ορού - 1:100, 1:200, τότε για να διακρίνουν την αντίδραση κατά τη διάρκεια της νόσου από τον εμβολιασμό ή την αναμνηστική αντίδραση, καταφεύγουν στην επανάληψη της αντίδρασης συγκόλλησης μετά από 5-7 ημέρες. Σε έναν ασθενή, ο τίτλος των αντισωμάτων αυξάνεται, αλλά σε ένα εμβολιασμένο ή ανάρρωστο άτομο δεν αλλάζει. Έτσι, η αύξηση του τίτλου αντισωμάτων στον ορό του αίματος χρησιμεύει ως δείκτης της νόσου.

Σε απάντηση στην εισαγωγή παθογόνων τυφοειδούς που διαθέτουν το αντιγόνο Vi στο σώμα, οι συγκολλητίνες Vi εμφανίζονται στο αίμα του ασθενούς. Εντοπίζονται από τη 2η εβδομάδα της νόσου, αλλά ο τίτλος τους συνήθως δεν ξεπερνά το 1:10. Η ανίχνευση των αντισωμάτων Vi συνδέεται με την παρουσία παθογόνων τυφοειδούς στο σώμα, επομένως ο προσδιορισμός αυτών των αντισωμάτων έχει μεγάλη επιδημιολογική σημασία, καθώς επιτρέπει την αναγνώριση βακτηριακών φορέων.

Αντίδραση Vi-αιμοσυγκόλλησης. Αυτή είναι η πιο ευαίσθητη αντίδραση για την ανίχνευση αντισωμάτων.

Η αρχή της αντίδρασης είναι ότι τα ανθρώπινα (ομάδα I) ή τα ερυθρά αιμοσφαίρια προβάτου, μετά από ειδική επεξεργασία, μπορούν να προσροφήσουν Vi-αντιγόνο στην επιφάνειά τους και έτσι να αποκτήσουν την ικανότητα να συγκολλούνται με τα αντίστοιχα Vi-αντισώματα.

Τα ερυθρά αιμοσφαίρια με αντιγόνα προσροφημένα στην επιφάνεια ονομάζονται διαγνωστικά ερυθροκυττάρων.

Για να εκτελέσετε την αντίδραση Vi-αιμοσυγκόλλησης, πάρτε:

1) ορός αίματος του ασθενούς (1-2 ml). 2) ερυθροκύτταρο Salmonella Vi-diagnosticum. Η) Vi-ορός; 4) Ο-ορός; 5) ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου.

Η αντίδραση πραγματοποιείται σε σωλήνες συγκόλλησης ή σε πλαστικές πλάκες με φρεάτια.

Λαμβάνεται αίμα από τον ασθενή με τον ίδιο τρόπο όπως και για την αντίδραση Vidal. Λαμβάνεται ορός. Παρασκευάζονται διπλές σειριακές αραιώσεις από τον ορό, ξεκινώντας από 1:10 έως 1:160.

0,5 ml από κάθε αραίωση προστίθενται στο φρεάτιο και προστίθενται 0,25 ml ερυθροκυτταρικού διαγνωστικού. Η αντίδραση εκτελείται σε όγκο 0,75 ml.

Οι έλεγχοι είναι: 1) τυπικός ορός συγκολλητικού μονοϋποδοχέα + διαγνωστικός - η αντίδραση πρέπει να είναι θετική μέχρι τον τίτλο του ορού. 2) diagnosticum σε ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου (μάρτυρας) - η αντίδραση πρέπει να είναι αρνητική.

Το περιεχόμενο των πηγαδιών αναμειγνύεται καλά, τοποθετείται σε θερμοστάτη για 2 ώρες και αφήνεται σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι την επόμενη μέρα (18-24 ώρες).

Η λογιστική ξεκινά με τον έλεγχο. Η αντίδραση αξιολογείται ανάλογα με το βαθμό συγκόλλησης του διαγνωστικού.

Τα αποτελέσματα λαμβάνονται υπόψη σύμφωνα με το σύστημα τεσσάρων σταυρών:

Τα ερυθρά αιμοσφαίρια είναι πλήρως συγκολλημένα - ιζήματα στον πυθμένα του πηγαδιού με τη μορφή "ομπρέλας".

+++ η "ομπρέλα" είναι μικρότερη, δεν είναι όλα τα ερυθρά αιμοσφαίρια συγκολλημένα.

++ η "ομπρέλα" είναι μικρή, στο κάτω μέρος της τρύπας υπάρχει ένα ίζημα από μη συγκολλημένα ερυθροκύτταρα.

Η αντίδραση είναι αρνητική. τα ερυθρά αιμοσφαίρια δεν συγκολλήθηκαν και κατακάθισαν στον πυθμένα του πηγαδιού με τη μορφή κουμπιού.

Ερωτήσεις ασφαλείας

1. Σε ποια περίοδο της νόσου γίνεται η αντίδραση Vidal;

2. Ποια συστατικά χρειάζονται για να πραγματοποιηθεί η αντίδραση Widal;

3. Ποια διαγνωστικά χρησιμοποιούνται για την εκτέλεση της αντίδρασης Vidal;

4. Ποια ορολογική αντίδραση είναι η πιο ευαίσθητη στη διάγνωση λοιμώξεων από τυφοειδή παρατύφο;

5. Τι διαγνωστικό χρησιμοποιείται κατά την εκτέλεση της αντίδρασης Vi-αιμοσυγκόλλησης;

6. Ποιος ορός χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της παρουσίας του αντιγόνου Vi στην υπό μελέτη καλλιέργεια;

7. Ποια είναι η σημασία του προσδιορισμού του Vi-φαγοτύπου;

Πάρτε O- και H-διαγνωστικά από Salmonella typhus, paratyphoid A και paratyphoid B και τον ορό του ασθενούς από τον δάσκαλο. Δώσε την αντίδραση του Βιδάλ.

Πολιτιστικά μέσα

Τα υλικά EMS, Ploskireva και άγαρ θειώδους βισμούθιου παράγονται από την ιατρική βιομηχανία με τη μορφή ξηρής σκόνης. Παρασκευάζονται σύμφωνα με τις οδηγίες της ετικέτας: ζυγίστε μια ορισμένη ποσότητα σκόνης, ρίξτε την κατάλληλη ποσότητα νερού, βράστε και ρίξτε σε αποστειρωμένα πιάτα Petri.

Ράσελ Τετάρτη. Προσθέστε 40 g ξηρού θρεπτικού μέσου σε 950 ml απεσταγμένου νερού και προσθέστε 5 g θρεπτικού άγαρ. Ζεσταίνουμε μέχρι να βράσει και οι σκόνες να διαλυθούν. 1 g x διαλύεται σε 50 ml απεσταγμένου νερού. ώρες γλυκόζης και προσθέτουμε στο παρασκευασμένο μείγμα. Το μέσο χύνεται σε αποστειρωμένα σωληνάρια των 5-7 ml, αποστειρώνεται με ρέον ατμό (2 ημέρες για 2 λεπτά) και λοξοτομείται έτσι ώστε να παραμείνει μια στήλη. Το μέσο Russell με μαννιτόλη και σακχαρόζη παρασκευάζεται με τον ίδιο τρόπο.

Μέσο Olkenitsky από ξηρό άγαρ. 2,5 g ξηρού θρεπτικού άγαρ τήκονται σε 100 ml απεσταγμένου νερού. Όλα τα συστατικά που καθορίζονται στη συνταγή (ετικέτα) προστίθενται στο άγαρ που έχει ψυχθεί στους 50°C. Το μέσο που χύνεται σε δοκιμαστικούς σωλήνες αποστειρώνεται με ρέον ατμό (3 ημέρες για 20 λεπτά) και στη συνέχεια κουρεύεται. Το παρασκευασμένο μέσο πρέπει να έχει ανοιχτό ροζ χρώμα.

Αντίδραση αναστολής αιμοσυγκόλλησης

Αντίδραση αιμοσυγκόλλησης

Αντίδραση συγκόλλησης

Η αντίδραση συγκόλλησης (RA) είναι η κόλληση και η καθίζηση μικροβίων ή άλλων κυττάρων υπό την επίδραση αντισωμάτων παρουσία ηλεκτρολύτη (ισότονο διάλυμα χλωριούχου νατρίου). Το ίζημα που προκύπτει ονομάζεται προσκολλώ.

Για την αντίδραση χρειάζεστε:

1. Αντισώματα (συγκολλητίνες) - βρίσκονται στον ορό του ασθενούς ή στον ορό του ανοσοποιητικού.

2. Αντιγόνο - ένα εναιώρημα ζωντανών ή νεκρών μικροοργανισμών, ερυθρών αιμοσφαιρίων ή άλλων κυττάρων.

3. Ισοτονικό διάλυμα.

Το τεστ συγκόλλησης για την οροδιάγνωση χρησιμοποιείται ευρέως σε τυφοειδής πυρετός, παρατυφοειδής πυρετός (αντίδραση Vidal), βρουκέλλωση (αντίδραση Wright) κ.λπ. Το αντίσωμα σε αυτή την περίπτωση είναι τον ορό του ασθενούς και το αντιγόνο είναι γνωστό μικρόβιο.

Κατά την αναγνώριση μικροβίων ή άλλων κυττάρων, το εναιώρημα τους χρησιμοποιείται ως αντιγόνο και ένας γνωστός ανοσοποιητικός ορός χρησιμοποιείται ως αντίσωμα. Αυτή η αντίδραση χρησιμοποιείται ευρέως στη διάγνωση εντερικές λοιμώξεις, κοκκύτης κ.λπ.

Στην εργαστηριακή πρακτική, χρησιμοποιούνται δύο αντιδράσεις αιμοσυγκόλλησης (HRAs) που διαφέρουν ως προς τον μηχανισμό δράσης τους.

Πρώτη RGAαναφέρεται σε ορολογικό. Σε αυτή την αντίδραση, τα ερυθρά αιμοσφαίρια συγκολλούνται όταν αλληλεπιδρούν με κατάλληλα αντισώματα (αιμοσυγκολλητίνες). Η αντίδραση χρησιμοποιείται ευρέως για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματος.

Δεύτερο RGAδεν είναι ορολογικό. Σε αυτό, η κόλληση των ερυθρών αιμοσφαιρίων προκαλείται όχι από αντισώματα, αλλά από ειδικές ουσίες που σχηματίζονται από ιούς. Για παράδειγμα, ο ιός της γρίπης συγκολλεί τα ερυθρά αιμοσφαίρια των κοτόπουλων και των ινδικών χοιριδίων και ο ιός της πολιομυελίτιδας συγκολλεί τα ερυθρά αιμοσφαίρια των προβάτων. Αυτή η αντίδραση καθιστά δυνατή την κρίση της παρουσίας ενός συγκεκριμένου ιού στο υπό μελέτη υλικό.

Πρόκειται για μια ορολογική αντίδραση κατά την οποία ειδικά αντιιικά αντισώματα, που αλληλεπιδρούν με τον ιό (αντιγόνο), τον εξουδετερώνουν και του στερούν την ικανότητα να συγκολλήσει τα ερυθρά αιμοσφαίρια, δηλαδή αναστέλλουν την αντίδραση αιμοσυγκόλλησης. Η υψηλή εξειδίκευση της αντίδρασης αναστολής της αιμοσυγκόλλησης (HAI) επιτρέπει τη χρήση της για τον προσδιορισμό του τύπου και ακόμη και του τύπου των ιών που ανιχνεύονται κατά τη δοκιμή HRA.

Η έμμεση (παθητική) αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (IRHA) βασίζεται στο γεγονός ότι τα ερυθρά αιμοσφαίρια, εάν ένα διαλυτό αντιγόνο προσροφηθεί στην επιφάνειά τους, αποκτούν την ικανότητα να συγκολλούνται όταν αλληλεπιδρούν με αντισώματα στο προσροφημένο αντιγόνο. Το διάγραμμα RNGA φαίνεται στο Σχ. Το RNGA χρησιμοποιείται ευρέως στη διάγνωση ενός αριθμού λοιμώξεων.

Ρύζι.Σχήμα της παθητικής αντίδρασης αιμοσυγκόλλησης (RPHA). Α - λήψη διαγνωστικού ερυθροκυττάρου. B - RNGA: 1-ερυθροκύτταρο: 2 - αντιγόνο υπό μελέτη. 3 - ερυθροκύτταρο διαγνωστικό; 4 - αντίσωμα στο αντιγόνο που μελετάται: 5 - συγκόλληση.

Χρησιμοποιώντας το RNGA, είναι δυνατό να προσδιοριστεί ένα άγνωστο αντιγόνο εάν γνωστά αντισώματα προσροφηθούν σε ερυθροκύτταρα.

Αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (HRA)

Το RGA βασίζεται στο γεγονός ότι ορισμένοι τύποι βακτηρίων και ιών έχουν την ικανότητα να απορροφώνται στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων διαφορετικών τύπωνζώα (και πουλιά), με αποτέλεσμα να κολλήσουν μεταξύ τους και να σχηματίσουν ένα συγκολλητικό (άμεσο RGA).

Η προσρόφηση αντιγόνου (βακτήρια, ιοί) στην επιφάνεια των ερυθροκυττάρων δεν εκδηλώνεται πάντα με το σχηματισμό ενός ορατού ιζήματος. Επιπλέον, το RHA είναι μη ειδικό επειδή τα ερυθρά αιμοσφαίρια του ίδιου ζωικού είδους μπορούν να προσροφήσουν διαφορετικά αντιγόνα.

Η παθητική (έμμεση) αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (RPHA) είναι ειδική. Για να πραγματοποιηθεί αυτή η διαδικασία, προετοιμάζεται πρώτα ένα ερυθροκύτταρο διαγνωστικό (ερυθροκύτταρα στα οποία προσροφάται το αντιγόνο). Για το σκοπό αυτό, λαμβάνεται στείρα αίμα προβάτου (ή κόκορα), απινιδώνεται και πλένεται πολλές φορές σε διάλυμα ρυθμισμένο με φωσφορικά (pH 7,2) χρησιμοποιώντας φυγοκέντρηση 3-5 φορές. Το υπερκείμενο αφαιρείται, η συγκέντρωση των ερυθροκυττάρων ρυθμίζεται στο 2,5% (1:40). Σε ένα εναιώρημα 2,5% ερυθροκυττάρων, προσθέστε ίσο όγκο (1 ml ή 0,5 ml) ενός εναιωρήματος βακτηρίων του υπό μελέτη είδους μικροβίων σε συγκέντρωση 5-10 δισεκατομμυρίων κυττάρων ανά 1 ml. Τα ερυθρά αιμοσφαίρια απορροφούν εύκολα τα πολυσακχαριδικά αντιγόνα. Για την προσρόφηση ενός πρωτεϊνικού αντιγόνου, τα ερυθροκύτταρα υποβάλλονται σε προεπεξεργασία με τανίνη σε αραίωση 1:20.000 Τα ερυθροκύτταρα σε συνδυασμό με το προστιθέμενο αντιγόνο αφήνονται για ευαισθητοποίηση (προσρόφηση) για 2 ώρες σε θερμοστάτη (37 °C), και στη συνέχεια φυγοκεντρούνται. και πάλι στις 3-4 χιλιάδες rpm για 5 λεπτά με ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών (Εικ. 9.13).

Το προκύπτον διαγνωστικό ερυθροκυττάρων τοποθετείται σε δοκιμαστικούς σωλήνες (ή φρεάτια σε σανίδα από πλεξιγκλάς) και σε αυτό προστίθεται τυπικός ανοσοποιητικός ορός.

Σε θετικές περιπτώσεις, θα εμφανιστεί RHA - απώλεια ερυθρών αιμοσφαιρίων με τη μορφή ενός χαρακτηριστικού νιφάδας ή κοκκώδους ιζήματος που κατανέμεται σε ολόκληρη την επιφάνεια του πυθμένα του δοκιμαστικού σωλήνα (αιμαγλουτινικό). Αυτό σημαίνει ότι ο τύπος του υπό μελέτη μικροβίου (αντιγόνο) είναι ειδικός για τα αντισώματα του ανοσοποιητικού ορού. Σε αρνητικές περιπτώσεις, τα μη κολλημένα ερυθρά αιμοσφαίρια θα εγκατασταθούν στο κάτω μέρος με τη μορφή ενός μικρού, ομοιόμορφου κύκλου.

Για μεγαλύτερη αξιοπιστία των αποτελεσμάτων, πραγματοποιείται RPGA καθυστέρηση αντίδρασης(φρενάρισμα) φαινόμενο αιμοσυγκόλλησης(RZGA) ή την τροποποίησή του - αντίδραση εξουδετέρωσης αντισωμάτων(RIA).

Ρύζι. 9.13. Παθητική αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (σχήμα): Er - ερυθρά αιμοσφαίρια: AG - αντιγόνο: AT - αντίσωμα

Η ουσία του RZGAσυνίσταται στο γεγονός ότι πραγματοποιείται αντίδραση συγκόλλησης με ειδικό διαγνωστικό ορό και δοκιμαστικό αντιγόνο (ο τύπος του μικροβίου που μελετάται χρησιμοποιείται ως αντιγόνο). Αυτό το μείγμα διατηρείται για 1-2 ώρες στους 37 °C και στη συνέχεια προστίθενται ερυθρά αιμοσφαίρια. Εάν το δοκιμαστικό αντιγόνο είναι ομόλογο με τα αντισώματα του διαγνωστικού ορού, αυτά αλληλεπιδρούν μεταξύ τους και τα προστιθέμενα ερυθρά αιμοσφαίρια δεν συγκολλούνται - το αποτέλεσμα της αντίδρασης είναι θετικό. Εάν το δοκιμαστικό αντιγόνο δεν είναι ομόλογο με τα αντισώματα ορού ή δεν περιέχεται στο υλικό, τότε τα προστιθέμενα ερυθροκύτταρα προσροφούν το αντιγόνο και εμφανίζεται RGA - το αποτέλεσμα RGA είναι αρνητικό, ο τύπος του μικροβίου (αντιγόνου) που ελέγχεται δεν έχει τεκμηριωθεί.

Μεθοδολογία ρύθμισης PH Aσυνίσταται στη λήψη ίσων όγκων και στην ανάμειξη διαγνωστικού ανοσοποιητικού ορού με διάφορες αραιώσειςΤο υπό μελέτη υλικό (το επιθυμητό αντιγόνο), αφήνεται για επαφή για 1-2 ώρες, στη συνέχεια προστίθενται ερυθρά αιμοσφαίρια ευαισθητοποιημένα με ένα συγκεκριμένο (γνωστό) αντιγόνο ειδικό για αντισώματα ορού (erythrocyte diagnosticum). Όταν το επιθυμητό αντιγόνο αντιδρά με αντισώματα ορού, αυτά εξουδετερώνονται και τα προστιθέμενα ερυθρά αιμοσφαίρια δεν συγκολλούνται, δεν εμφανίζεται RHA - το αποτέλεσμα RHA είναι θετικό. Εάν το υλικό δοκιμής δεν περιέχει αντιγόνο ειδικό για τα αντισώματα του ορού που χρησιμοποιείται, δεν θα συμβεί εξουδετέρωση των αντισωμάτων. Επομένως, κατά την προσθήκη ερυθροκυττάρων diagnosticum, εμφανίζεται συγκόλληση των ερυθροκυττάρων (αιμοσυγκόλληση) και το αποτέλεσμα RNA είναι αρνητικό. Η αντίδραση εξουδετέρωσης αντισώματος είναι μια εξαιρετικά ευαίσθητη μέθοδος για την ανίχνευση αντιγόνου όχι μόνο σε ένα εναιώρημα ζώντων (ή σκοτωμένων) βακτηρίων, αλλά και σε ένα εναιώρημα αλεσμένου ιστού διαφόρων οργάνων, φυσικών και θερμαινόμενων εκκρίσεων και εκκρίσεων ενός νοσούντος οργανισμού.