Αρχική → Αναλύσεις → Ανοσολογική μέθοδος → Αντιδράσεις αιμοσυγκόλλησης (ανοσολογική μέθοδος)

Αντιδράσεις συγκόλλησηςβασίζονται στην αλληλεπίδραση ενός αντιδραστηρίου (αντισώματα) με αντιγόνα που βρίσκονται στην επιφάνεια κυττάρων ή ξένων σωματιδίων. Ως αποτέλεσμα, σχηματίζονται μεγάλα συσσωματώματα, τα οποία καθιζάνουν και φαίνονται ακόμη και με γυμνό μάτι. Με αυτόν τον τρόπο προσδιορίζεται η ομάδα αίματος σύμφωνα με το σύστημα ABO, η παρουσία του παράγοντα Rh σε αυτό κ.λπ. Αυτή είναι μια πιο ευαίσθητη διαγνωστική μέθοδος σε σύγκριση με τις αντιδράσεις καθίζησης, αφού ο όγκος του ιζήματος (συγκολλητικό) υπερβαίνει τον όγκο του ίζημα.

Άμεση αιμοσυγκόλληση

Η αντίδραση άμεσης αιμοσυγκόλλησης (DHR) χρησιμοποιείται για την ανίχνευση επιφανειακών αντιγόνων μικροοργανισμών και ερυθρών αιμοσφαιρίων, καθώς και αντισωμάτων σε αυτά.
ΝΑ τυπικοί οροίπου περιέχει αντισώματα, προστίθεται το υλικό δοκιμής (αίμα). Η ταχύτητα της αντίδρασης άμεσης συγκόλλησης σχετίζεται με την ποσότητα του υλικού που ελέγχεται, την ποσότητα και τη συγκέντρωση του ορού και τη θερμοκρασία περιβάλλοντος.

Έμμεση αιμοσυγκόλληση

Αντίδραση έμμεση αιμοσυγκόλλησηδιενεργείται για την ανίχνευση αντισωμάτων στο αίμα του ασθενούς χρησιμοποιώντας διαγνωστικό τεστ ερυθροκυττάρων. Το αντιδραστήριο αποτελείται από ερυθρά αιμοσφαίρια στην επιφάνεια των οποίων υπάρχει ένα αντιγόνο (πρωτεΐνες μικροοργανισμών, τοξίνες, αλλεργιογόνα κ.λπ.).
Ο ορός αίματος του ασθενούς αραιώνεται με διάλυμα χλωριούχου νατρίου 0,9%, στη συνέχεια προστίθεται erythrocyte diagnosticum και παρακολουθείται το αποτέλεσμα. Αυτή η εξαιρετικά ευαίσθητη διαγνωστική μέθοδος ανιχνεύει αντιγόνα ακόμη και σε μικρές συγκεντρώσεις.

Αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (HRA).

Στο εργαστήριο χρησιμοποιούνται δύο αντιδράσεις αιμοσυγκόλλησης με διαφορετικούς μηχανισμούς δράσης.

Η πρώτη RGA είναι ορολογική. Σε αυτή την αντίδραση, τα ερυθρά αιμοσφαίρια συγκολλούνται όταν αλληλεπιδρούν με κατάλληλα αντισώματα (αιμαγλουτινίνες). Η αντίδραση χρησιμοποιείται ευρέως για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματος.

Το δεύτερο RGA δεν είναι ορολογικό. Σε αυτό, η προσκόλληση των ερυθρών αιμοσφαιρίων δεν προκαλείται από

αντισώματα, αλλά ειδικές ουσίες που σχηματίζονται από ιούς. Για παράδειγμα, ο ιός της γρίπης συγκολλεί τα ερυθρά αιμοσφαίρια του κοτόπουλου και ινδικά χοιρίδια, ιός πολιομυελίτιδας - ερυθρά αιμοσφαίρια προβάτου. Αυτή η αντίδραση μας επιτρέπει να κρίνουμε την παρουσία ενός συγκεκριμένου ιού στο υπό μελέτη υλικό.

Η αντίδραση πραγματοποιείται σε δοκιμαστικούς σωλήνες ή σε ειδικές πλάκες με φρεάτια. Το υλικό που ελέγχεται για την παρουσία του ιού αραιώνεται με ισοτονικό διάλυμα από 1:10 έως 1:1280. 0,5 ml από κάθε αραίωση αναμιγνύεται με ίσο όγκο 1-2% εναιωρήματος ερυθρών αιμοσφαιρίων. Στον έλεγχο, 0,5 ml ερυθροκυττάρων αναμιγνύονται με 0,5 ml ισοτονικού διαλύματος. Οι δοκιμαστικοί σωλήνες τοποθετούνται σε θερμοστάτη για 30 λεπτά και οι πλάκες αφήνονται σε θερμοκρασία δωματίου για 45 λεπτά.

Λογιστική για τα αποτελέσματα.Στο θετικό αποτέλεσμααντίδραση, ένα ίζημα ερυθρών αιμοσφαιρίων με χτενισμένες άκρες («ομπρέλα») εμφανίζεται στον πυθμένα του δοκιμαστικού σωλήνα ή του πηγαδιού, που καλύπτει ολόκληρο τον πυθμένα του φρεατίου. Εάν το αποτέλεσμα είναι αρνητικό, τα ερυθρά αιμοσφαίρια σχηματίζουν ένα πυκνό ίζημα με λείες άκρες («κουμπί»). Το ίδιο ίζημα πρέπει να βρίσκεται στον έλεγχο. Η ένταση της αντίδρασης εκφράζεται με πρόσημα «+».

Αντίδραση αιμοσυγκόλλησης

Ο τίτλος του ιού είναι η μέγιστη αραίωση του υλικού στο οποίο λαμβάνει χώρα η συγκόλληση.

Αντίδραση αναστολής αιμοσυγκόλλησης

Αυτή είναι μια ορολογική αντίδραση στην οποία συγκεκριμένα αντιιικά αντισώματα, αλληλεπιδρώντας με τον ιό (αντιγόνο), τον εξουδετερώνουν και του στερούν την ικανότητα να συγκολλεί τα ερυθρά αιμοσφαίρια, δηλαδή να αναστέλλει την αντίδραση αιμοσυγκόλλησης. Αυτή η αντίδραση σάς επιτρέπει να προσδιορίσετε τον τύπο και τον τύπο των ιών.

Ρύθμιση αντίδρασης. 0,25 ml αντιιικού ορού αναμιγνύεται με ίσο όγκο υλικού που περιέχει τον ιό. Το μίγμα ανακινείται και τοποθετείται σε θερμοστάτη για 30 λεπτά, μετά από τα οποία προστίθενται 0,5 ml αιωρήματος ερυθρών αιμοσφαιρίων 1-2%.

Λογιστική για τα αποτελέσματα.Εάν το πείραμα πραγματοποιηθεί σωστά, θα πρέπει να σχηματιστεί ένα «κουμπί» στον έλεγχο του ορού και των ερυθροκυττάρων - δεν υπάρχει παράγοντας συγκόλλησης των ερυθροκυττάρων. στον έλεγχο αντιγόνων, σχηματίζεται μια "ομπρέλα" - ο ιός προκάλεσε συγκόλληση των ερυθρών αιμοσφαιρίων. Εάν ο ορός είναι ομόλογος με τον ιό που μελετάται, σχηματίζεται ένα «κουμπί» - ο ορός έχει εξουδετερώσει τον ιό.

Έμμεση αντίδραση αιμοσυγκόλλησης

Η έμμεση (παθητική) αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (RIHA) βασίζεται στο γεγονός ότι τα ερυθρά αιμοσφαίρια, εάν ένα διαλυτό αντιγόνο προσροφηθεί στην επιφάνειά τους, αποκτούν την ικανότητα να συγκολλούνται όταν αλληλεπιδρούν με αντισώματα στο προσροφημένο αντιγόνο.

Ρύθμιση αντίδρασης.Ο ορός θερμαίνεται για 30 λεπτά στους 56 °C, αραιώνεται διαδοχικά σε αναλογία 1:10 - 1:1280 και χύνεται σε 0,25 ml σε δοκιμαστικούς σωλήνες ή φρεάτια, όπου στη συνέχεια τοποθετούνται 2 σταγόνες ερυθρών αιμοσφαιρίων με αντιγόνα που έχουν προσροφηθεί πάνω τους. προστέθηκε.

Στοιχεία ελέγχου:ένα εναιώρημα ερυθροκυττάρων με αντιγόνα προσροφημένα πάνω τους με προφανώς άνοσο ορό, ένα εναιώρημα ερυθροκυττάρων με αντιγόνα προσροφημένα πάνω τους με κανονικό ορό. ένα εναιώρημα φυσιολογικών ερυθρών αιμοσφαιρίων με δοκιμαστικό ορό. Στον πρώτο έλεγχο θα πρέπει να συμβεί συγκόλληση, στον δεύτερο και στον τρίτο δεν πρέπει να συμβεί.

Ερωτήσεις τεστ.

1. Τι δείχνει ένα θετικό αποτέλεσμα ανάλυσης ακτίνων Χ μεταξύ των ερυθρών αιμοσφαιρίων και του υλικού που ελέγχεται για την παρουσία του ιού;

2. Θα συμβεί αντίδραση συγκόλλησης των ερυθρών αιμοσφαιρίων εάν προστεθεί σε αυτά ένας ιός και ο αντίστοιχος ορός του; Πώς ονομάζεται η αντίδραση που αποκαλύπτει αυτό το φαινόμενο;

ΠΡΑΚΤΙΚΗ ΕΡΓΑΣΙΑ Νο 12.

Αντίδραση στερέωσης συμπληρώματος.

Η αντίδραση στερέωσης συμπληρώματος (FFR) βασίζεται στο γεγονός ότι ένα συγκεκριμένο σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος πάντα προσροφά (δεσμεύει) το συμπλήρωμα στον εαυτό του.

Αυτή η αντίδραση χρησιμοποιείται ευρέως στην αναγνώριση αντιγόνων και στην οροδιάγνωση λοιμώξεων, ιδιαίτερα ασθενειών που προκαλούνται από σπειροχαίτες (αντίδραση Wassermann), ρικέτσια και ιούς.

Το RKS είναι μια σύνθετη ορολογική αντίδραση. Περιλαμβάνει συμπλήρωμα και δύο συστήματα αντιγόνου-αντισώματος. Ουσιαστικά πρόκειται για δύο ορολογικές αντιδράσεις.

Το σωστό κύριο σύστημα αποτελείται από ένα αντιγόνο και ένα αντίσωμα (το ένα είναι γνωστό, το άλλο όχι). Μια ορισμένη ποσότητα συμπληρώματος προστίθεται σε αυτό. Εάν το αντιγόνο και το αντίσωμα αυτού του συστήματος ταιριάζουν, θα συνδεθούν και θα δεσμεύσουν ένα κομπλιμέντο. Το σύμπλοκο που προκύπτει είναι λεπτώς διασκορπισμένο και δεν είναι ορατό.

Ο σχηματισμός αυτού του συμπλέγματος ανιχνεύεται χρησιμοποιώντας ένα δεύτερο αιμολυτικό ή σύστημα δείκτη. Περιλαμβάνει ερυθρά αιμοσφαίρια προβάτου (αντιγόνο) και τον αντίστοιχο αιμολυτικό ορό (αντίσωμα), δηλ. έτοιμο ανοσοποιητικό σύμπλεγμα. Σε αυτό το σύστημα, η λύση των ερυθρών αιμοσφαιρίων μπορεί να συμβεί μόνο με την παρουσία συμπληρώματος. Εάν το συμπλήρωμα δεσμεύεται από το πρώτο σύστημα, τότε στο δεύτερο σύστημα δεν θα υπάρχει αιμόλυση, γιατί κανένα δωρεάν συμπλήρωμα. Η απουσία αιμόλυσης (το περιεχόμενο του σωλήνα είναι θολό ή υπάρχει ίζημα ερυθροκυττάρων στον πυθμένα) καταγράφεται ως θετικό αποτέλεσμα RSC.

Εάν στο πρώτο σύστημα το αντιγόνο δεν αντιστοιχεί στο αντίσωμα, τότε δεν θα σχηματιστεί το ανοσοποιητικό σύμπλεγμα και το συμπλήρωμα θα παραμείνει ελεύθερο. Παραμένοντας ελεύθερο, το κομπλιμέντο συμμετέχει στο δεύτερο σύστημα, προκαλώντας αιμόλυση, το αποτέλεσμα RSC είναι αρνητικό (τα περιεχόμενα των σωλήνων είναι διαφανή - "λακαρισμένο αίμα").

Συστατικά, αντιδράσεις στερέωσης συμπληρώματος:

1. Αντιγόνο - συνήθως προϊόν λύσης, εκχύλισμα, απτένιο,

λιγότερο συχνά ένα εναιώρημα μικροοργανισμών.

2. Αντίσωμα – ορός ασθενούς.

3. Συμπλήρωμα - ορός ινδικού χοιριδίου.

4. Αντιγόνο - ερυθροκύτταρα προβάτου.

5. Αντίσωμα - αιμολυσίνη σε ερυθροκύτταρα προβάτου.

6. Ισοτονικό διάλυμα.

Λόγω του ότι συμμετέχει το ΡΣΚ μεγάλο αριθμόσύνθετα συστατικά,

Πρέπει πρώτα να τιτλοδοτηθούν και να ληφθούν στην αντίδραση σε ακριβείς ποσότητες και σε ίσους όγκους: 0,5 ή 0,25, λιγότερο συχνά 0,2, 1,25 ή 1,0 ml (μεγαλύτεροι όγκοι δίνουν πιο ακριβές αποτέλεσμα). Η τιτλοδότηση των συστατικών της αντίδρασης πραγματοποιείται στον ίδιο όγκο με το πείραμα, αντικαθιστώντας τα συστατικά που λείπουν με ένα ισοτονικό διάλυμα.

Σχετικές πληροφορίες:

Αναζήτηση στον ιστότοπο:

Η έμμεση ή παθητική δοκιμή αιμοσυγκόλλησης (IRHA ή RPHA) είναι πιο ευαίσθητη και ειδική από τη δοκιμή συγκόλλησης. Αυτή η αντίδραση χρησιμοποιείται επίσης σε δύο κατευθύνσεις.

1) Για την ανίχνευση αντισωμάτων στον ορό αίματος του ασθενούς, χρησιμοποιούνται διαγνωστικά ερυθροκυττάρων, στα οποία το αντιγόνο προσροφάται στην επιφάνεια των ερυθροκυττάρων που έχουν υποστεί επεξεργασία με τανίνη. Σε σχέση με αυτή την αντίδραση, ο όρος RPGA χρησιμοποιείται συχνότερα.

Ο ορός δοκιμής αραιώνεται στα φρεάτια πλαστικών πλακών και προστίθεται ερυθροκύτταρο diagnosticum. Εάν η αντίδραση είναι θετική, εμφανίζεται μια λεπτή μεμβράνη κατά μήκος των τοιχωμάτων της τρύπας με τη μορφή "ομπρέλας δαντέλας". αρνητική αντίδραση- ένα πυκνό ίζημα ερυθροκυττάρων με τη μορφή "κουμπιού".

2) Για την ανίχνευση τοξινών και βακτηριακών αντιγόνων στο υπό μελέτη υλικό, χρησιμοποιούνται διαγνωστικά υγρά ερυθροκυττάρων αντισωμάτων, που λαμβάνονται με προσρόφηση αντισωμάτων στα ερυθροκύτταρα. Σε σχέση με αυτή την αντίδραση, ο όρος RNGA χρησιμοποιείται συχνότερα. Για παράδειγμα, με τη βοήθεια διαγνωστικών αντισωμάτων, ανιχνεύονται αντιγόνο βακίλλου πανώλης, εξωτοξίνη διφθερίτιδας και εξωτοξίνη αλλαντίασης.

Τι είναι η διάγνωση ερυθροκυττάρων; Τι είναι η διάγνωση ερυθροκυττάρων αντισωμάτων;

Τα διαγνωστικά ερυθροκυττάρων είναι ερυθρά αιμοσφαίρια (επεξεργασμένα με τανίνη ή φορμαλίνη) με αντιγόνα που εξάγονται από βακτήρια προσροφημένα πάνω τους και χρησιμοποιούνται σε RPHA (αντιδράσεις παθητικής αιμοσυγκόλλησης). Στην περίπτωση που το RPHA χρησιμοποιείται για την ανίχνευση αντιγόνου στις εκκρίσεις ασθενών, σε ιστούς κ.λπ., χρησιμοποιούνται «διαγνωστικά αντισώματα», δηλαδή ερυθρά αιμοσφαίρια ευαισθητοποιημένα με αντισώματα.

Στο RNGA, τα αντισώματα ορού αίματος ανιχνεύονται χρησιμοποιώντας ένα αντιγονικό ερυθροκύτταρο diagnosticum, το οποίο είναι ερυθροκύτταρα με αντιγόνα προσροφημένα πάνω τους.

Μεθοδολογία για τη ρύθμιση των αντιδράσεων. Αντίδραση πήξης.

- στερέωση των ερυθρών αιμοσφαιρίων με φορμαλδεΰδη ή γλουταρικές ή ακρυλικές αλδεΰδες. Τέτοια επεξεργασμένα ερυθρά αιμοσφαίρια αποθηκεύονται για μεγάλο χρονικό διάστημα. Συχνότερα, για το σκοπό αυτό χρησιμοποιούνται ερυθροκύτταρα από πρόβατα, ανθρώπους, κοτόπουλα κ.λπ.
— επεξεργασία σταθερών ερυθροκυττάρων με διάλυμα τανίνης. Ως αποτέλεσμα, τα ερυθρά αιμοσφαίρια αποκτούν την ικανότητα να απορροφούν μη αναστρέψιμα πρωτεΐνες (ιούς και αντισώματα) στην επιφάνειά τους.
- ευαισθητοποίηση μαυρισμένων ερυθροκυττάρων από ιούς ή αντισώματα.

Αντίδραση πήξης (CAR)

Η αντίδραση πήξης χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό των αντιγόνων χρησιμοποιώντας αντισώματα που έχουν προσροφηθεί στην πρωτεΐνη Α των σταφυλοκοκκικών κυττάρων (antibody diagnosticum).
Η πρωτεΐνη Α έχει συγγένεια με το θραύσμα Fc των ανοσοσφαιρινών, επομένως τέτοια βακτήρια που αντιμετωπίζονται με ανοσοδιαγνωστικό ορό προσροφούν μη ειδικά αντισώματα ορού, τα οποία στη συνέχεια αλληλεπιδρούν με ενεργά κέντρα με τα αντίστοιχα μικρόβια που απομονώνονται από ασθενείς. Ως αποτέλεσμα της πήξης, σχηματίζονται νιφάδες που αποτελούνται από σταφυλόκοκκους, διαγνωστικά αντισώματα ορού και το ανιχνευμένο μικρόβιο.

Οροί συγκόλλησης: τι περιέχουν; πώς λαμβάνονται, σε τι χρησιμοποιούνται· Ποιος είναι ο τίτλος του συγκολλητικού ορού;

Ο ορός συγκόλλησης λαμβάνεται με ανοσοποίηση κουνελιών (ενδοφλέβια, υποδόρια ή ενδοπεριτοναϊκά) με εναιώρημα σκοτωμένων βακτηρίων, ξεκινώντας με δόση 200 εκατομμυρίων, μετά 500 εκατομμύρια, 1 δισεκατομμύριο, 2 δισεκατομμύρια μικροβιακών σωμάτων σε 1 ml, σε διαστήματα 5 ημερών. 7-8 ημέρες μετά την τελευταία ανοσοποίηση, λαμβάνεται αίμα και προσδιορίζεται ο τίτλος των αντισωμάτων.

Ο τίτλος ενός συγκολλητικού ορού είναι η μέγιστη αραίωση του ορού στην οποία λαμβάνει χώρα συγκόλληση με τον αντίστοιχο μικροοργανισμό.

Οι οροί συγκόλλησης χρησιμοποιούνται για την αναγνώριση μικροβίων σε μια αντίδραση συγκόλλησης πλήρους κλίμακας.

Αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (HRA)

Εάν ο υπό μελέτη μικροοργανισμός συγκολληθεί με ορό στον τίτλο ή στο μισό της τιμής του τίτλου, μπορεί να θεωρηθεί ότι ανήκει στο είδος του οποίου το όνομα αναγράφεται στην ετικέτα της αμπούλας.

Ποιες είναι οι διαφορές μεταξύ πολυσθενών και μονοσθενών (μονοϋποδοχέων) συγκολλητικών ορών; Γιατί όταν ένα κουνέλι ανοσοποιείται με μικρόβια ενός τύπου, λαμβάνεται ορός που περιέχει αντισώματα σε πολλά αντιγόνα;

Οι οροί μονοϋποδοχέων είναι οροί που περιέχουν αντισώματα έναντι ενός μόνο αντιγόνου και πολυσθενείς οροί που δίνουν αντιδράσεις συγκόλλησης με δύο ή τρία σχετικά βακτήρια που έχουν κοινό αντιγόνο. Οι οροί συγκόλλησης χρησιμοποιούνται για την αναγνώριση μικροοργανισμών σε μια αντίδραση συγκόλλησης. Το μειονέκτημα τέτοιων ορών είναι ότι είναι ικανοί να δίνουν αντιδράσεις ομαδικής συγκόλλησης, επειδή περιέχουν αντισώματα σε βακτήρια που έχουν κοινά αντιγόνα.

Αντίδραση αιμοσυγκόλλησης. Περιγραφή και Εφαρμογή

Βασίζεται στο γεγονός ότι τα ερυθρά αιμοσφαίρια, στα οποία έχουν προηγουμένως προσροφηθεί αντιγόνα, αποκτούν την ικανότητα να συγκολλούνται παρουσία ομόλογων ορών (αντισωμάτων).

Στην περίπτωση αυτή, τα ερυθρά αιμοσφαίρια δρουν ως φορείς συγκεκριμένων καθοριστικών παραγόντων, η συγκόλληση των οποίων συμβαίνει ως αποτέλεσμα της αντίδρασης αντιγόνου + αντισώματος.

Τα ερυθρά αιμοσφαίρια στην επιφάνεια των οποίων τα αντιγόνα είναι σταθερά συνδεδεμένα ονομάζονται ερυθροκυτταρικό αντιγόνο diagnosticum ή ερυθροκύτταρα ευαισθητοποιημένα με αντιγόνο.

Ένας άλλος τύπος RNGA - αντισώματα απορροφώνται στην επιφάνεια των ερυθροκυττάρων και η επακόλουθη συγκόλληση τους λαμβάνει χώρα παρουσία ενός ομόλογου αντιγόνου. Στην περίπτωση αυτή, τέτοια ερυθροκύτταρα ονομάζονται διαγνωστικά αντισώματα ερυθροκυττάρων ή ερυθροκύτταρα που ευαισθητοποιούνται από αντισώματα.

Με βάση αυτές τις δύο θεμελιώδεις μεθοδολογικές προσεγγίσεις, έχουν αναπτυχθεί και χρησιμοποιηθεί πολλές τροποποιήσεις του RNGA. Έτσι, μικρά τυπικά σωματίδια λατέξ χρησιμοποιούνται ως φορείς. Σε αυτή την περίπτωση, η αντίδραση ονομάζεται αντίδραση συγκόλλησης λατέξ (RLA) ή χρησιμοποιείται Staphylococcus aureus- αντίδραση πήξης κ.λπ. Συνήθως, τα διαγνωστικά ερυθροκυττάρων προετοιμάζονται σε επιχειρήσεις βιολογικής βιομηχανίας και η κύρια εμπειρία του RNGA πραγματοποιείται σε διαγνωστικά εργαστήρια.

Η προετοιμασία των διαγνωστικών ερυθροκυττάρων περιλαμβάνει τα ακόλουθα βήματα:

• στερέωση των ερυθρών αιμοσφαιρίων με φορμαλδεΰδη ή γλουταρικές ή ακρυλικές αλδεΰδες. Τέτοια επεξεργασμένα ερυθρά αιμοσφαίρια αποθηκεύονται για μεγάλο χρονικό διάστημα. Συχνότερα, για το σκοπό αυτό χρησιμοποιούνται ερυθροκύτταρα από πρόβατα, ανθρώπους, κοτόπουλα κ.λπ.
• επεξεργασία σταθερών ερυθροκυττάρων με διάλυμα τανίνης. Ως αποτέλεσμα, τα ερυθρά αιμοσφαίρια αποκτούν την ικανότητα να απορροφούν μη αναστρέψιμα πρωτεΐνες (ιούς και αντισώματα) στην επιφάνειά τους.
• ευαισθητοποίηση μαυρισμένων ερυθροκυττάρων από ιούς ή αντισώματα.

Θα πρέπει να σημειωθεί ότι οι μέθοδοι προετοιμασίας διαγνωστικών ερυθροκυττάρων για ιογενείς λοιμώξειςδιαφορετικός.

Η διαδικασία για την εκτέλεση RNGA για την ανίχνευση και τον προσδιορισμό του τίτλου αντισωμάτων είναι η εξής:

• ίσες δόσεις ερυθροκυττάρων ευαισθητοποιημένων με αντιγόνο προστίθενται σε διαδοχικές διπλάσιες αραιώσεις ορού.
• Το μείγμα αφήνεται για 2-3 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου ή για 16-18 ώρες στους 4 °C.
• λαμβάνουν υπόψη τα αποτελέσματα. Εάν ο ορός περιέχει αντισώματα έναντι του ιού με τον οποίο ευαισθητοποιήθηκαν τα ερυθρά αιμοσφαίρια, παρατηρείται αιμοσυγκόλληση, η οποία αξιολογείται σε διασταυρώσεις.

Ο τίτλος αντισωμάτων στον ορό θεωρείται ότι είναι η υψηλότερη αραίωση ορού που εξακολουθεί να παρέχει αιμοσυγκόλληση κατά τουλάχιστον δύο διασταυρώσεις.

Το RNGA συνοδεύεται από όλους τους σχετικούς ελέγχους. Συνήθως η αντίδραση πραγματοποιείται χρησιμοποιώντας τη μικρομέθοδο.

Το RNGA σάς επιτρέπει να επιλύσετε τα ακόλουθα διαγνωστικά προβλήματα:

• ανίχνευση αντισωμάτων και προσδιορισμό του τίτλου τους στον ορό αίματος χρησιμοποιώντας ένα γνωστό ερυθροκυτταρικό αντιγόνο diagnosticum.
• ανίχνευση και ταυτοποίηση ενός άγνωστου ιού χρησιμοποιώντας ένα γνωστό διαγνωστικό αντισώματος ερυθροκυττάρων.

Πλεονεκτήματα του RNGA: υψηλή ευαισθησία, απλότητα τεχνικής τοποθέτησης και ταχύτητα απόκρισης. Ωστόσο, είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι προκύπτουν μεγάλες δυσκολίες στην προετοιμασία σταθερών διαγνωστικών ερυθροκυττάρων (μεγάλη εξάρτηση από την καθαρότητα των συστατικών που χρησιμοποιούνται, ανάγκη επιλογής τρόπου στερέωσης, μαυρίσματος και ευαισθητοποίησης των ερυθροκυττάρων για κάθε τύπο ιού).

Εάν βρείτε κάποιο σφάλμα, επιλέξτε ένα κομμάτι κειμένου και πατήστε Ctrl+Enter.

ΕΜΜΕΣΗ ΑΝΤΙΔΡΑΣΗ ΑΙΜΟΣΥΓΚΟΛΥΤΙΝΗΣΗΣ, RNGA
(Έμμεση δοκιμή αιμοσυγκόλλησης)

Μια μέθοδος ανίχνευσης αντιγόνων και αντισωμάτων, βασισμένη στην ικανότητα των ερυθρών αιμοσφαιρίων, στην επιφάνεια των οποίων έχουν προ-προσροφηθεί αντιγόνα ή αντισώματα, να συγκολλούνται παρουσία ομόλογων ορών ή αντίστοιχων αντιγόνων.

Όταν ανιχνεύονται αντιγόνα, η αντίδραση υποδεικνύεται με τεστ αντίστροφης παθητικής αιμοσυγκόλλησης και όταν ανιχνεύονται αντισώματα, με τεστ παθητικής αιμοσυγκόλλησης. Το RNGA έχει βρει ευρεία εφαρμογή για τον εντοπισμό ορολογικών δεικτών μόλυνσης από τον ιό της ηπατίτιδας Β, ιδιαίτερα το HBsAg και τα αντισώματα σε αυτόν.

Αναπτύχθηκε επί του παρόντος διάφορες μεθόδουςπαραγωγή διαγνωστικών ερυθροκυττάρων, που διαφέρουν ως προς τις μεθόδους ευαισθητοποίησης των ερυθροκυττάρων (χρησιμοποιώντας τανίνη, γλουταραλδεΰδη, χλωριούχο χρώμιο, ριβανόλη κ.λπ.), τα είδη τους (άνθρωπος, πρόβατο, κοτόπουλο, γαλοπούλα κ.λπ.), επιλογές για τη σταδιοποίηση της αντίδρασης (σε μικροτίτλο πλάκες, δοκιμαστικοί σωλήνες, τριχοειδή αγγεία κ.λπ.) και καταγραφή των αποτελεσμάτων (οπτική και ενόργανη). Τα διαγνωστικά κιτ ερυθροκυττάρων για την ανίχνευση HBsAg και anti-HB παράγονται από πολλές επιχειρήσεις και εταιρείες τόσο στη χώρα μας όσο και στο εξωτερικό.

Συχνότερα, το RNGA πραγματοποιείται σε πλάκες μικροτιτλοδότησης, στις οποίες προπαρασκευάζονται αραιώσεις του ορού δοκιμής και των δειγμάτων ελέγχου. Μετά την προσθήκη του διαγνωστικού ερυθροκυττάρου και την επώαση, καταγράφονται τα αποτελέσματα της αντίδρασης. Τα δείγματα στα οποία συμβαίνει συγκόλληση ερυθρών αιμοσφαιρίων, που μοιάζουν με ανεστραμμένη «ομπρέλα», θεωρούνται θετικά. Εάν η αντίδραση είναι αρνητική, τα ερυθρά αιμοσφαίρια εγκαθίστανται στο κάτω μέρος της οπής με τη μορφή δακτυλίου ή δίσκου.

Για να επιβεβαιωθεί η εξειδίκευση των ληφθέντων αποτελεσμάτων, η αντίδραση εκτελείται τόσο με «πειραματικό» διαγνωστικό ερυθροκυττάρων (δηλαδή ερυθροκύτταρα ευαισθητοποιημένα με αντιγόνο ή αντισώματα) όσο και με διαγνωστικό «έλεγχος» (δηλ. ερυθροκύτταρα μη ευαισθητοποιημένα με αντιγόνο ή αντισώματα). Η παρουσία θετικής αντίδρασης με ένα διαγνωστικό φάρμακο «μάρτυρα» υποδηλώνει ψευδώς θετική αντίδραση. Για την εξάλειψη των μη ειδικών αντιδράσεων, ο ορός δοκιμής υποβάλλεται σε επεξεργασία με μη ευαισθητοποιημένα ερυθροκύτταρα. Προϋπόθεση για τη διεξαγωγή του RNGA είναι η αντίδραση εξουδετέρωσης, δηλαδή η δοκιμή επιβεβαίωσης.

Σε σύγκριση με μεθόδους όπως RPG, VIEF και RSK, η έμμεση αντίδραση αιμοσυγκόλλησης έχει μεγαλύτερη ευαισθησία (200 - 400 φορές). Έτσι, το HBsAg σε RPGA μπορεί να ανιχνευθεί σε συγκεντρώσεις 6-10 ng/ml. Η απλότητα της αντίδρασης και η ταχύτητα (20 - 30 λεπτά) έχουν καθορίσει την ευρεία χρήση της αυτή τη μέθοδοστην υπηρεσία μετάγγισης αίματος για ανίχνευση HBsAg.

Εκτός από τα διαγνωστικά ερυθροκυττάρων για την ανίχνευση HBsAg και αντι-ΗΒ, έχουν αναπτυχθεί επίσης διαγνωστικά παρασκευάσματα για αναγνώριση anti-HBc, anti-HBc κατηγορίας IgM (έκδοση στερεάς φάσης), HBeAg, αντιγόνο ιού ηπατίτιδας Α και αντισώματα σε αυτό, ωστόσο, όλα αυτά δεν έχουν βρει εφαρμογή στην πρακτική υγειονομική περίθαλψη.

Έμμεση αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (RIHA).

Το RIGA χρησιμοποιείται σε δύο εκδόσεις: με γνωστά αντισώματα για την ανίχνευση αντισωμάτων με γνωστά αντισώματα για την ανίχνευση αντισωμάτων. Αυτή η αντίδραση είναι ειδική και χρησιμοποιείται για τη διάγνωση ασθενειών που προκαλούνται από βακτήρια και ρικετσία. Για τη διεξαγωγή του RIGA, χρησιμοποιούνται διαγνωστικά ερυθροκυττάρων, που παρασκευάζονται με προσρόφηση AG ή AT σε ερυθροκύτταρα, ανάλογα με το σκοπό της μελέτης (Εικ. 10.3). Σε θετικές περιπτώσεις, ο βαθμός συγκόλλησης των ερυθροκυττάρων σημειώνεται με συν. Τέσσερα συν αξιολογούν μια αντίδραση που μοιάζει με μια λεπτή μεμβράνη συγκολλητικών ερυθρών αιμοσφαιρίων (ομπρέλα) που καλύπτει το κάτω μέρος του δοκιμαστικού σωλήνα. η παρουσία μιας μεμβράνης με χτενισμένες άκρες δαντέλας υποδεικνύεται από δύο συν. Ο τίτλος θεωρείται ότι είναι η μέγιστη αραίωση του υλικού δοκιμής που προκάλεσε συγκόλληση των ερυθροκυττάρων κατά δύο συν.

Ρύζι. 10.3.

1 - ερυθρά αιμοσφαίρια, 2 - ερυθροκύτταρο AG, 3 - συζευγμένο AG, 4-AT

RHA και αντίδραση αναστολής αιμοσυγκόλλησης (HAI).

Όπως έχει ήδη σημειωθεί, το RHA βασίζεται στην ικανότητα των ερυθροκυττάρων να κολλούν μεταξύ τους όταν ορισμένα αντιγόνα απορροφώνται πάνω τους. Ως υλικό δοκιμής για αιμοσυγκόλληση χρησιμοποιούνται αλλαντοϊκό και αμνιακό υγρό, εναιώρημα χοριο-αλλαντοϊκών μεμβρανών εμβρύων κοτόπουλου, εναιωρήματα και εκχυλίσματα από καλλιέργειες ή όργανα ζώων μολυσμένων με ιούς και φυσικό μολυσματικό υλικό. Το RGA δεν είναι ορολογική αντίδραση, καθώς εμφανίζεται χωρίς τη συμμετοχή του ανοσοποιητικού ορού και χρησιμοποιείται για την επιλογή της αραίωσης εργασίας ενός αντιγόνου για τη σταδιοποίηση ενός RGA ή της παρουσίας ενός αντιγόνου (ιού) στο υλικό δοκιμής (για παράδειγμα, για τη γρίπη ). Η αντίδραση χρησιμοποιεί ερυθρά αιμοσφαίρια από ζώα, πτηνά και ανθρώπους με ομάδα αίματος Ι (0). Για τη δημιουργία ενός κατά προσέγγιση RGA, μια σταγόνα ενός εναιωρήματος 5% ερυθροκυττάρων και μια σταγόνα του υλικού δοκιμής εφαρμόζονται σε μια γυάλινη πλάκα και αναμειγνύονται επιμελώς. Εάν το αποτέλεσμα είναι θετικό, μετά από 1-2 λεπτά παρατηρείται μακροσκοπικά η εμφάνιση κροκιδωτής συγκόλλησης των ερυθροκυττάρων. Για να τοποθετήσετε το RGA σε μια ξεδιπλωμένη σειρά στα φρεάτια των πλακών πολυστυρενίου, προετοιμάστε διπλά αυξανόμενες αραιώσεις του υλικού δοκιμής ανά αλατούχο διάλυμασε όγκο 0,5 ml. 0,5 ml ενός εναιωρήματος 0,25-1% ερυθρών αιμοσφαιρίων προστίθεται σε όλους τους δοκιμαστικούς σωλήνες. Τα αποτελέσματα λαμβάνονται υπόψη μετά από πλήρη καθίζηση των ερυθροκυττάρων στον μάρτυρα (ερυθρά αιμοσφαίρια + αλατούχο διάλυμα). Η αντίδραση λαμβάνεται υπόψη από τη φύση του ιζήματος των ερυθροκυττάρων. Σε θετικές περιπτώσεις, ο βαθμός συγκόλλησης σημειώνεται με συν. Μια αντίδραση που μοιάζει με μια λεπτή μεμβράνη από κολλώδη ερυθρά αιμοσφαίρια που καλύπτει το κάτω μέρος ενός δοκιμαστικού σωλήνα (ομπρέλα) αξιολογείται με τέσσερα συν. μια αντίδραση με κενά στο φιλμ σημειώνεται με τρία συν Τα άκρα των κολλωδών ερυθρών αιμοσφαιρίων σημειώνονται με δύο συν. Ένα σαφώς καθορισμένο ίζημα ερυθροκυττάρων, που δεν διακρίνεται από τον έλεγχο, υποδηλώνει την απουσία συγκόλλησης. Ο τίτλος θεωρείται ότι είναι η μέγιστη αραίωση του υλικού δοκιμής που προκάλεσε συγκόλληση των ερυθροκυττάρων κατά δύο συν. Εάν το αποτέλεσμα RGA είναι θετικό, η μελέτη συνεχίζεται, προσδιορίζοντας τον τύπο του απομονωμένου ιού χρησιμοποιώντας RT GA με ορούς ειδικούς για τον τύπο. Το RTGA βασίζεται στην ιδιότητα του αντιορού να καταστέλλει την ιική αιμοσυγκόλληση, καθώς ο ιός που εξουδετερώνεται από συγκεκριμένα αντισώματα χάνει την ικανότητα να συγκολλεί τα ερυθρά αιμοσφαίρια. Για τη δοκιμαστική πληκτρολόγηση των ιών, χρησιμοποιείται η μέθοδος σταγονιδίων στο γυαλί. Για να προσδιοριστεί οριστικά ο τύπος του απομονωμένου ιού και να τιτλοδοτηθούν τα αντισώματα στους ορούς, τοποθετείται ένα διευρυμένο RTGA σε δοκιμαστικούς σωλήνες ή φρεάτια. Για το σκοπό αυτό, διπλές αραιώσεις ορών παρασκευάζονται σε φυσιολογικό διάλυμα και διανέμονται σε 0,25 ml. Στις αραιώσεις ορού προσθέστε μία σταγόνα υλικού που περιέχει τον ιό και μία σταγόνα από ένα εναιώρημα 1% ερυθρών αιμοσφαιρίων. Όταν χρησιμοποιείται RTGA για τον προσδιορισμό του τύπου του ιού, χρησιμοποιούνται τυποειδικοί οροί, οι οποίοι προστίθενται σε ίσο όγκο της αραίωσης εργασίας του AG. Ο τύπος του απομονωθέντος ιού προσδιορίζεται από τον ειδικό ανοσοορό που έδειξε τον υψηλότερο τίτλο αντισωμάτων σε αυτόν τον ιό. Τα RGA και RTGA χρησιμοποιούνται ευρέως για τη διάγνωση ιογενών λοιμώξεων ( εγκεφαλίτιδα που μεταδίδεται από κρότωνες, γρίπη κ.λπ.) προκειμένου να ανιχνευθούν συγκεκριμένα αντισώματα και να ταυτοποιηθούν πολλοί ιοί από τα αντισώματά τους.

Έμμεση αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (IRHA)

Η χρήση προσροφημένων διαγνωστικών φαρμάκων βασίζεται στην αρχή της ανοσολογικής αναγνώρισης των επιφανειακών δομών, η οποία πραγματοποιείται συνεχώς στη φύση. Από αυτή την άποψη, δεν υπάρχουν θεμελιώδεις διαφορές μεταξύ της χρήσης, για παράδειγμα, ενός μικροβιακού κυττάρου ή ενός τεχνητού φορέα φορτωμένου με αντιγόνο (αντισώματα). Διάφοροι φορείς χρησιμοποιούνται ως βάση για προσροφημένα φάρμακα - μικροβιακά κύτταρα, ερυθροκύτταρα, λατέξ, μπεντονίνη, χοληστερόλη, Sephadex, δερματόλη, ενεργού άνθρακα, σπόρια μυκήτων κ.λπ.

Μετά την εργασία του A.T Kravchenko (1945), τα ερυθροκύτταρα που στερήθηκαν τη βιωσιμότητα και στερεώθηκαν με διάφορα χημικά αντιδραστήρια έγιναν πιο διαδεδομένα ως φορείς αντιγόνων ή αντισωμάτων. Με βάση την αρχή της χρήσης ερυθροκυττάρων (τόσο φυσικών όσο και σταθερών) ως φορέα αντιγόνου, η έμμεση (παθητική) αντίδραση αιμοσυγκόλλησης έχει γίνει ευρέως διαδεδομένη.

Η πρόταση για χρήση της έμμεσης αντίδρασης αιμοσυγκόλλησης (IRHA) για διαγνωστικούς σκοπούς προέκυψε με βάση προηγουμένως ανεπτυγμένες γνώσεις σχετικά με την υψηλή ροφητική δραστηριότητα των ερυθροκυττάρων. Σε σύγκριση με πολλούς άλλους φορείς αντιγόνων και αντισωμάτων, τα ερυθροκύτταρα έχουν ορισμένα πλεονεκτήματα στην έμμεση αντίδραση αιμοσυγκόλλησης. Πρώτον, σε ισοτονικό αλατούχα διαλύματασχηματίζουν μια αρκετά σταθερή πρόσφυση και δεν καθιζάνουν πίσω σύντομο χρονικό διάστημα. Δεύτερον, τα ερυθρά αιμοσφαίρια του ίδιου ζωικού είδους έχουν το ίδιο μέγεθος. Και τέλος, είναι σχετικά εύκολο για τα ερυθροκύτταρα να προσκολλήσουν διάφορα ορολογικά ενεργά συστατικά απευθείας ή ως αποτέλεσμα ειδικής επεξεργασίας.

Η δημιουργία διαγνωστικών ερυθροκυττάρων από σταθεροποιημένα ερυθροκύτταρα καθιστά δυνατή την υπέρβαση των δυσκολιών που προκύπτουν κατά τη χρήση φυσικών ερυθροκυττάρων.

Κατά τη μελέτη ερυθροκυττάρων που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διάφορες ουσίες στερέωσης, διαπιστώθηκαν μερικές από τις κοινές τους ιδιότητες:

Όσον αφορά τη μορφολογία, πρακτικά δεν διαφέρουν από τα φρέσκα.

Μην αιμολύετε σε υποτονικά διαλύματα, σε νερό και μετά από κατάψυξη-απόψυξη.

Μπορεί να στεγνώσει με κατάψυξη.

Οι επιφανειακές δομές τους διατηρούν την ικανότητα να τροποποιούνται χημικά (για παράδειγμα, τανίνες, διαζωενώσεις) και να αντιδρούν με αντιγόνα και αντισώματα.

Το κύριο κριτήριο για την ποιότητα των σταθερών ερυθροκυττάρων είναι η δυνατότητα χρήσης τους για τη λήψη ευαισθητοποιημένων φαρμάκων απουσία μη ειδικής κόλλησης σε σταθεροποιητικά υγρά.

Η προετοιμασία της επιφάνειας των ερυθροκυττάρων προκειμένου να αυξηθεί η ικανότητα προσρόφησης για τα αντιγόνα είναι σημαντική στο σχεδιασμό των διαγνωστικών φαρμάκων. Η θεραπεία των ερυθρών αιμοσφαιρίων με τανίνη έχει γίνει ιδιαίτερα διαδεδομένη.

Υπό την επιρροή του αλλάζουν αντιγονικές ιδιότητεςερυθροκύτταρα (διαπερατότητα, ρυθμός καθίζησης), η αντοχή τους στις αιμολυτικές επιδράσεις ορισμένων λιπαρά οξέα. Ωστόσο, το κύριο πράγμα έχει επιτευχθεί - τα μαυρισμένα ερυθροκύτταρα έχουν σημαντικά μεγαλύτερη ικανότητα απορρόφησης πρωτεϊνών, η οποία χρησιμοποιείται σήμερα ευρέως στην κατασκευή υψηλής ποιότητας διαγνωστικών αντιγόνων και αντισωμάτων.

Μαζί με τα μαυριστικά ερυθροκύτταρα, χημικά αντιδραστήρια όπως η βρωμελίνη, η τρυοψίνη, το υπεριωδικό κάλιο, τα οποία επίσης τροποποιούν τις μεμβράνες των ερυθροκυττάρων, χρησιμοποιούνται για την παραγωγή διαγνωστικών ερυθροκυττάρων και την προετοιμασία φορέων αντιγόνου.

Μετά την προετοιμασία της επιφάνειας των ερυθρών αιμοσφαιρίων, το περισσότερο σημαντική διαδικασία- διαδικασία αιμοευαισθητοποίησης - τελικό στάδιοπαραγωγή διαγνωστικών ερυθροκυττάρων.

Για την ενίσχυση της σύνδεσης μεταξύ του φορέα και του αντιγόνου, χρησιμοποιούνται διάφορες συζυγικές ουσίες - διφθοροδινιτροβενζίνη, χλωριούχο κυανογόνο, χλωριούχο και οξικό κάδμιο, χλωριούχο βρώμιο, φορμαλδεΰδη, γλουταραλδεΰδη, βρωμιούχο κυανογόνο, ριβανόλη, κλπ.

Η χρήση συζευκτικών ουσιών βοηθά στην εξάλειψη των μειονεκτημάτων που έχουν τα μαυρισμένα ερυθροκύτταρα, που χρησιμοποιούνται για ευαισθητοποίηση χωρίς συζυγείς ουσίες.

Οι πιο ευρέως χρησιμοποιούμενες ουσίες σύζευξης είναι το χλωριούχο χρώμιο, η γλουταραλδεΰδη, η μαύρη διαζόλη C και η αμιδόλη. Η διαδικασία ευαισθητοποίησης με χλωριούχο χρώμιο συμβαίνει πολύ γρήγορα - από 4 έως 10 λεπτά, γεγονός που προσελκύει την προσοχή των ερευνητών. Σε αυτή την περίπτωση, χρησιμοποιούνται συγκεντρώσεις χλωριούχου χρωμίου από 0,05 έως 2%, το pH δεν είναι χαμηλότερο από 5,0 σε θερμοκρασία μίγματος αντίδρασης 20-250 C. Στη διαδικασία ευαισθητοποίησης με χλωριούχο χρώμιο, ενεργοποιούνται οι καρβοξυλομάδες των πρωτεϊνών της μεμβράνης των ερυθροκυττάρων . Ως αποτέλεσμα, σχηματίζεται ένας ομοιοπολικός δεσμός μεταξύ της μεμβράνης των ερυθρών αιμοσφαιρίων και της ευαισθητοποίησης.

Η έμμεση αντίδραση αιμοσυγκόλλησης είναι εξαιρετικά ειδική, αφού η προσκόλληση των ερυθροκυττάρων συμβαίνει ως αποτέλεσμα της αλληλεπίδρασης του αντιγόνου με τα αντισώματα που απορροφώνται στα ερυθροκύτταρα. Το ιδιαίτερο χαρακτηριστικό του είναι η υψηλή ευαισθησία του: ανιχνεύει 0,02-0,05 μg πρωτεΐνης αντισωμάτων. Όσον αφορά την ευαισθησία, είναι σημαντικά ανώτερη από τις αντιδράσεις της ανοσοδιάχυσης, του ανοσοφθορισμού, της ακτινικής ανοσοδιάχυσης, της στερέωσης του συμπληρώματος και της εξουδετέρωσης. Το RNGA είναι λιγότερο ευαίσθητο από τις μεθόδους ραδιοανοσοηλεκτροφόρησης, τον προσδιορισμό της ποσότητας πρωτεΐνης των ραδιενεργών αντισωμάτων σε ένα ανοσοροφητικό και την ενζυμική ανοσοδοκιμασία.

Τα πλεονεκτήματα του RNGA περιλαμβάνουν αρκετά υψηλή αναπαραγωγιμότητα, ευκολία υλοποίησης και ανάγκη για ελάχιστες ποσότητες συστατικών, ειδικά όταν χρησιμοποιείται η μικρομέθοδος.

RNGA σε τα τελευταία χρόνιαέχει βρει ευρεία χρήση στη διάγνωση της λοιμώδους ρινοτραχειίτιδας, της διάρροιας, λοίμωξη από αδενοϊό, λοιμώξεις rota και κοροναϊού, παραγρίπη - 3 και αναπνευστική συγκυτιακή λοίμωξη.

Δίνουμε ένα παράδειγμα παραγωγής και χρήσης διαγνωστικού ερυθροκυττάρου για την ανίχνευση αντισωμάτων κατά των λοιμώξεων rota και κορωνοϊού.

Η μέθοδος για την προετοιμασία διαγνωστικών αντισωμάτων για την ταυτοποίηση των αντιγόνων περιστροφικού και κοροναϊού στο RNGA είναι η εξής: λήψη εναιωρήματος ερυθροκυττάρων. στερέωση των ακρολεϊνών τους. μαυρίσματος, που επιτρέπει τη σταθερή απορρόφηση της απαιτούμενης πρωτεΐνης στα ερυθρά αιμοσφαίρια. ευαισθητοποίηση μαυρισμένων ερυθροκυττάρων με ανοσοσφαιρίνες. προσδιορισμός της ειδικότητας του προετοιμασμένου διαγνωστικού. Η παρασκευή ενός εναιωρήματος ερυθροκυττάρων πραγματοποιείται με τη συλλογή του αίματος ενός κλινικά υγιούς προβάτου σε μια φιάλη με γυάλινες χάντρες. Μετά την απινίδωση του αίματος, τα ερυθρά αιμοσφαίρια πρέπει να πλυθούν 3-5 φορές με ισοτονικό (0,9%) διάλυμα χλωριούχου νατρίου με φυγοκέντρηση για 15-20 λεπτά στα 400 g.

Προκειμένου να σταθεροποιηθούν τα ερυθρά αιμοσφαίρια, αντιμετωπίζονται με ακρολεΐνη. Όπως είναι γνωστό, η δράση του είναι κάπως πιο ήπια από τη φορμαλδεΰδη, και παρέχει σταθερότητα και όχι μόνο υψηλή δραστηριότηταερυθρά αιμοσφαίρια Για να γίνει αυτό, ίσοι όγκοι ενός εναιωρήματος ερυθροκυττάρων 10% αναμιγνύονται με ένα διάλυμα ακρολεΐνης 0,2% που παρασκευάζεται σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών (PBS) με ρΗ 7,2. Το προκύπτον εναιώρημα διατηρείται για 30 λεπτά στους 37°C, αναδεύοντας επιμελώς, ακολουθούμενο από αφαίρεση της ακρολεΐνης με επαναλαμβανόμενη φυγοκέντρηση για 5 λεπτά στα 600-800 g μέχρι να εξαφανιστεί τελείως η συγκεκριμένη οσμή. Το πλεονέκτημα των ερυθρών αιμοσφαιρίων που παρασκευάζονται με αυτόν τον τρόπο είναι ότι αποθηκεύονται για μελλοντική χρήση και μπορούν πολύ καιρόδιατηρείται χωρίς να υποστεί αιμόλυση.

Στη συνέχεια, σταθεροποιημένα ερυθρά αιμοσφαίρια σε συγκέντρωση 10% διατηρούνται στους 2-4 °C σε PBS με pH 7,2 για δύο μήνες.

Για να αυξηθεί η ικανότητα προσρόφησης και η καθίζηση των ερυθρών αιμοσφαιρίων, είναι απαραίτητο να μαυριστούν με ανάμειξη ίσων μερών ενός εναιωρήματος 10% πλυμένων ερυθρών αιμοσφαιρίων και ενός διαλύματος τανίνης σε PBS και pH 7,2 σε αραίωση 1:30.000. Το μίγμα αναμιγνύεται επιμελώς και διατηρείται στους 370 C για 15 λεπτά, μετά τα οποία τα ερυθρά αιμοσφαίρια πλένονται καλά από τανίνη δύο φορές σε PBS με ρΗ 7,2 και τρεις φορές με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου με ρΗ 7,2-7,4.

Η βέλτιστη περίοδος για την εξασφάλιση της λήψης υψηλής ποιότητας διαγνωστικών ερυθροκυττάρων είναι η ευαισθητοποίησή τους εντός 24-48 ωρών μετά τη θεραπεία τους με τανίνη.

Στη διαδικασία παρασκευής διαγνωστικών, 0,3% φαινολυμένο διάλυμα χλωριούχου νατρίου με 0,1% κανονικό ορό κουνελιού ή αλόγου, προηγουμένως αδρανοποιημένο στους 56°C για 30 λεπτά και προσροφημένο από κανονικά ερυθροκύτταρα προβάτου, χρησιμοποιείται ως διαλύτης και συντηρητικό για 30 λεπτά.

Η ευαισθητοποίηση των μαυρισμένων ερυθροκυττάρων θα πρέπει να πραγματοποιείται με υπεράνοσο ορό, αντιστοίχως, έναντι των rota και των μεγάλων κοροναϊών βοοειδή(παράγεται στο Πανρωσικό Ερευνητικό Ινστιτούτο Πειραματικής Κτηνιατρικής με το όνομα Y.R. Kovalenko). Σε αυτήν την περίπτωση, η δόση ευαισθητοποίησης (συγκέντρωση πρωτεΐνης) του ανοσοποιητικού ορού κατά του ροταϊού είναι 280 μg/ml και του ανοσοποιητικού ορού έναντι του κορωνοϊού είναι 260 μg/ml.

Η ευαισθητοποίηση πραγματοποιείται με ανάμιξη ίσων όγκων μαυρισμένων ερυθροκυττάρων και ανοσοποιητικού ορού που έχει προθερμανθεί για 30 λεπτά στους 560 C σε βέλτιστη συγκέντρωση. Επιπλέον, προσθέστε 3 μέρη ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου με pH 7,2 και 5 μέρη διαλύματος χλωριούχου χρωμίου 0,1%. Το μείγμα διατηρείται σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά, ανακατεύοντας κατά διαστήματα. Μετά τον καθορισμένο χρόνο, το μείγμα πλένεται καλά χρησιμοποιώντας PBS με ρΗ 7,2 και στη συνέχεια τα παρασκευασμένα διαγνωστικά ερυθροκυττάρων επαναιωρούνται σε ένα συντηρητικό σε συγκέντρωση 1%. Το παρασκευασμένο διαγνωστικό διατηρεί τις βασικές του ιδιότητες για 8 μήνες, υπό την προϋπόθεση ότι φυλάσσεται στους 4°C.

Σε όλα τα στάδια της διαγνωστικής παραγωγής, παρακολουθείται η αυτοσυγκόλληση. Η ειδικότητα των παρασκευασμένων διαγνωστικών προσδιορίζεται με τη σταδιοποίηση του RNGA, όπου χρησιμοποιήθηκαν ως αντιγόνα τυπικά διαγνωστικά ιών IRT, AI - 3, αδενοϊών, ιικής διάρροιας, καθώς και αντιγόνα rota και κοροναϊού.

Κατά την εκτέλεση RNGA, παρασκευάζονται διαδοχικές διπλές αραιώσεις του υλικού που περιέχει τον ιό δοκιμής (20-50% εναιώρημα δειγμάτων κοπράνων) και στη συνέχεια προστίθεται ίσος όγκος διαγνωστικού υγρού ερυθροκυττάρων σε κάθε φρεάτιο. Οι πλάκες πρέπει να ανακινούνται καλά αρκετές φορές και να αφήνονται σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι να κατακαθίσουν τελείως τα ερυθροκύτταρα στο μάρτυρα. Δείκτης θετική αντίδραση- συγκόλληση του διαγνωστικού ερυθροκυττάρου με ένταση συγκόλλησης 2+ σε τίτλο 1:4 και άνω.

Παθητική αντίδραση αιμοσυγκόλλησης)

μέθοδος ανίχνευσης και ταυτοποίησης αντιγόνων ή αντισωμάτων, βασισμένη στο φαινόμενο της συγκόλλησης ερυθρών αιμοσφαιρίων που συμβαίνει παρουσία τους, στην επιφάνεια των οποίων έχουν προηγουμένως προσροφηθεί το αντίστοιχο ειδικό ή αντιγόνα.

1. Μικρή ιατρική εγκυκλοπαίδεια. - Μ.: Ιατρική εγκυκλοπαίδεια. 1991-96 2. Πρώτον ιατρική φροντίδα. - Μ.: Μεγάλη Ρωσική Εγκυκλοπαίδεια. 1994 3. Εγκυκλοπαιδικό Λεξικό ιατρικούς όρους. - Μ.: Σοβιετική Εγκυκλοπαίδεια. - 1982-1984.

Δείτε τι είναι η "Έμμεση αντίδραση αιμοσυγκόλλησης" σε άλλα λεξικά:

έμμεση αντίδραση αιμοσυγκόλλησης- Εργαστηριακός έλεγχος RNGA με χρήση διαγνωστικών ερυθροκυττάρων. [Αγγλο-ρωσικό γλωσσάρι βασικών όρων στην εμβολιολογία και την ανοσοποίηση. Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας, 2009] Θέματα εμβολιολογία, ανοσοποίηση Συνώνυμα RNGA EN... ... Οδηγός Τεχνικού Μεταφραστή

- (RNHA; συνώνυμο της αντίδρασης παθητικής αιμοσυγκόλλησης) μέθοδος ανίχνευσης και ταυτοποίησης αντιγόνων ή αντισωμάτων, βασισμένη στο φαινόμενο της συγκόλλησης ερυθροκυττάρων που εμφανίζεται παρουσία τους, στην επιφάνεια των οποίων είχαν προηγουμένως προσροφηθεί... .. . Μεγάλος ιατρικό λεξικό

- (RPHA) βλέπε Έμμεση αντίδραση αιμοσυγκόλλησης... Μεγάλο ιατρικό λεξικό

Αυτή η σελίδα είναι ένα γλωσσάρι. # Α... Βικιπαίδεια

Βασικές συντομογραφίες που υιοθετήθηκαν στο Veterinary Encyclopedic Dictionary- a., aa, artena, arteriae aa ana (εξίσου) Ακαδημία Ιατρικών Επιστημών της ΕΣΣΔ ιατρικές επιστήμεςΕΣΣΔ Ακαδημία Επιστημών της ΕΣΣΔ Ακαδημία Επιστημών της ΕΣΣΔ Bac. Bacillus Bact. Βακτηρίδιο BSSR Λευκορωσική ΣΣΔαιώνας, αιώνας αιώνα, αιώνες v., vv. vena, venae VASKHNIL Πανενωσιακό Τάγμα Λένιν και... ...

Αυτός ο όρος έχει άλλες έννοιες, βλέπε Πανούκλα. Λοιπότητα σαρκοφάγων (νόσος Kare) οξεία ή υποξεία μεταδοτική ιογενής νόσος, που εκδηλώνεται με πυρετό, καταρροή των βλεννογόνων, δερματικές βλάβες, κεντρική ... ... Wikipedia

- (renes) ένα ζευγαρωμένο απεκκριτικό και ενδοκρινικό όργανο που ρυθμίζει τη χημική ομοιόσταση του σώματος μέσω της λειτουργίας του σχηματισμού ούρων. ΑΝΑΤΟΜΙΚΟ ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΟ ΣΚΙΤΣΟ Οι νεφροί βρίσκονται στον οπισθοπεριτοναϊκό χώρο (οπισθοπεριτοναϊκός χώρος) στις... ... Ιατρική εγκυκλοπαίδεια

Ι (τριχινέλωση, συνώνυμο: τριχίνωση, «φουσκωμένη») ελμινθίαση από την ομάδα των νηματωδών, που χαρακτηρίζεται από πυρετό, μυαλγία, οίδημα προσώπου, δερματικά εξανθήματα, ηωσινοφιλία αίματος και σε σοβαρές περιπτώσεις βλάβες εσωτερικά όργανακαι κεντρικό...... Ιατρική εγκυκλοπαίδεια

- (νηματώδεις) ελμινθίες που προκαλούνται από νηματώδεις, στρογγυλούς σκώληκες της κατηγορίας των Νηματωδών. Μεταξύ άλλων ελμινθιών, οι Ν. έχουν υψηλότερη τιμήστην ανθρώπινη παθολογία, τα περισσότερα από αυτά είναι γεωελμινθίαση (βλ. Ελμινθίαση). ανάπτυξη των αυγών ή των προνυμφών τους... ... Ιατρική εγκυκλοπαίδεια

λοιμώδης επιδιδυμίτιδα- Ρύζι. 1. Διεύρυνση του αριστερού όρχεως σε πρόβατο με λοιμώδη επιδιδυμίτιδα. Ρύζι. 1. Διεύρυνση του αριστερού όρχεως σε πρόβατο με λοιμώδη επιδιδυμίτιδα. λοιμώδης επιδιδυμίτιδα προβάτων (Epididymitis infectiosa arietum), χρόνια λοιμώδης... ... Κτηνιατρικό εγκυκλοπαιδικό λεξικό

Δείτε την έμμεση αντίδραση αιμοσυγκόλλησης... Μεγάλο ιατρικό λεξικό