Testi i hemaglutinimit indirekt ose pasiv (IRHA ose RPHA) është më i ndjeshëm dhe specifik se testi i aglutinimit. Ky reagim përdoret gjithashtu në dy drejtime.

1) Për të zbuluar antitrupat në serumin e gjakut të pacientit, përdoret diagnostifikimi i eritrociteve, në të cilin antigjeni absorbohet në sipërfaqen e eritrociteve të trajtuara me taninë. Në lidhje me këtë reagim, termi RPHA përdoret më shpesh.

Serumi i provës hollohet në pusetat e pllakave plastike dhe shtohet diagnostikimi i eritrociteve. Nëse reagimi është pozitiv, një film i hollë shfaqet përgjatë mureve të vrimës në formën e një "ombrellë dantelle"; reagim negativ- një sediment i dendur i qelizave të kuqe të gjakut në formën e një "butoni".

2) Për zbulimin e toksinave dhe antigjeneve bakteriale në materialin e provës, përdoret diagnostifikimi i eritrociteve të antitrupave, i marrë nga adsorbimi i antitrupave në eritrocite. Në lidhje me këtë reagim, termi RNGA përdoret më shpesh. Për shembull, me ndihmën e diagnostikimit të antitrupave, zbulohet antigjeni i bacilit të murtajës, ekzotoksina e difterisë dhe ekzotoksina botulinum.

Testi Coombs (testi i aptiglobulinës)

Reagimi përdoret për të zbuluar antitrupa jo të plotë, për shembull, antitrupa ndaj faktorit Rh. Serum testues i shtohet eritrociteve Rh +, në të cilat supozohet prania e antitrupave jo të plotë ndaj faktorit Rh. Duke u lidhur me qelizat e kuqe të gjakut, antitrupat jo të plotë nuk shkaktojnë aglutinim, pasi ato kanë vetëm një qendër aktive. Pastaj shtohet serumi antiglobulin që përmban antitrupa ndaj globulinave njerëzore. Kombinuar me antitrupa jo të plota, serumi antiglobulin shkakton aglutinimin e qelizave të kuqe të gjakut.

Reagimi i reshjeve

Thelbi i reaksionit është sedimentimi (precipitimi) i antigjenit nën ndikimin e antitrupave specifikë. Për të marrë një reagim të dukshëm, prania e një elektroliti është e nevojshme. Antigjeni në reaksionin e precipitimit janë substanca të shpërndara molekularisht.

Reaksioni i reshjeve të unazës të vendosura në tuba të ngushtë reshjesh. Serumi imunitar derdhet në një provëz dhe materiali i provës vendoset me kujdes mbi të. Nëse ka një antigjen në të, një unazë e errët precipitati formohet në kufirin e dy lëngjeve.

Reagimi përdoret në mjekësia ligjore për të përcaktuar llojin e proteinave në njollat ​​e gjakut, spermën etj.; për të përcaktuar antigjenin në diagnostikimin e antraksit (reaksioni Ascoli), meningjitit dhe infeksioneve të tjera; në studimet sanitare dhe higjienike - për të vendosur falsifikimin produkte ushqimore. Serumet precipituese imune fitohen duke imunizuar kafshët me antigjenin përkatës. Për shembull, serumi i precipitimit të proteinave njerëzore merret duke imunizuar një lepur me proteina njerëzore. Titri i serumit precipitues është hollimi më i lartë i antigjenit me të cilin ai reagon. Serumi zakonisht përdoret i paholluar ose në një hollim 1:5.

Reagimi i precipitimit të xhelit të agarit kryhet duke përdorur disa metoda. Këto janë reaksioni i imunodifuzionit të dyfishtë, reaksioni i imunodifuzionit radial dhe reaksioni i imunoelektroforezës.

Reagimi i imunodifuzionit të dyfishtë(sipas Ouchterlony). I shkrirë xhel agar hidhet në një enë Petri dhe pas ngurtësimit i janë bërë vrima. Në disa puse vendoset antigjeni dhe në të tjera serumet imune, të cilat shpërndahen në agar dhe formojnë një precipitat në formën e vijave të bardha në pikën e takimit.

Reagimi i imunodifuzionit radial(sipas Mancinit). Serumi imunitar shtohet në xhelin e shkrirë të agarit dhe derdhet në një filxhan. Pasi agari të ngurtësohet, priten puse dhe në to vendosen antigjene, të cilat, duke u shpërndarë në agar, formojnë zona reshjeje në formë unaze rreth puseve. Sa më i lartë të jetë përqendrimi i antigjenit, aq më i madh është diametri i unazës. Reagimi përdoret, për shembull, për të përcaktuar imunoglobulinat e klasave të ndryshme në gjak. Imunoglobulinat e klasave IgG, IgM, IgA veprojnë si antigjene në këtë reaksion, dhe antitrupat kundër tyre përmbahen në serumet specifike të monoreceptorëve.

Imunoelektroforeza. Elektroforeza e antigjeneve proteinike kryhet në një xhel agar. Serumi precipitues futet në brazdë, e cila shkon paralelisht me drejtimin e lëvizjes së proteinave. Antigjenet dhe antitrupat shpërndahen në agar dhe linjat e reshjeve formohen aty ku takohen.

Reaksionet e lizës imune

Një antigjen (eritrocitet ose bakteret), duke u kombinuar me antitrupa specifikë, formon një kompleks imunitar të cilit i bashkohet komplementi (C1) dhe komplementi aktivizohet përgjatë rrugës klasike. Komplementi i aktivizuar lizon qelizat e kuqe të gjakut (hemoliza) ose bakteret (bakteroliza). Reaksioni i bakterolizës përdoret për të identifikuar Vibrio cholerae.

Reagimi i hemolizës. Antigjeni në reaksion janë eritrocitet, antitrupat (hemolizinat) përmbahen në serumin hemolitik. Hemolizinat ngjiten në qelizat e kuqe të gjakut dhe aktivizohet komplementi, i cili lizon qelizat e kuqe të gjakut. Pezullimi i turbullt i qelizave të kuqe të gjakut shndërrohet në një lëng transparent të kuq të ndezur - "gjak llak". Meqenëse reaksioni i hemolizës ndodh vetëm në prani të komplementit, ai përdoret si një tregues për zbulimin e komplementit.

Reagimi lokal i hemolizës në xhel(Reaksioni Erne) - një variant i reaksionit të hemolizës. Shërben për të përcaktuar numrin e qelizave që formojnë antitrupa (AFC) në shpretkë dhe nyjet limfatike.

Xheli i shkrirë i agarit përzihet me një pezullim të qelizave të shpretkës dhe qelizave të kuqe të gjakut dhe pasi agari të jetë ngurtësuar, shtohet komplementi. Një zonë hemolize formohet rreth çdo qelize që prodhon hemolizinë. Numri i qelizave që prodhojnë hemolizinë përcaktohet nga numri i zonave të tilla.

Reaksioni indirekt (pasiv) i hemaglutinimit (IRHA) bazohet në faktin se qelizat e kuqe të gjakut, nëse një antigjen i tretshëm absorbohet në sipërfaqen e tyre, fitojnë aftësinë për të aglutinuar kur ndërveprojnë me antitrupat ndaj antigjenit të adsorbuar. Diagrami RNGA është paraqitur në Fig. 34. RNGA përdoret gjerësisht në diagnostikimin e një sërë infeksionesh.

Oriz. 34. Skema e reaksionit pasiv të hemaglutinimit (RPHA). A - marrja e një diagnoze të eritrociteve: B - RPGA: 1 - eritrociti: 2 - antigjeni që studiohet; 3 - eritrocitet diagnosticum; 4 - antitrupi ndaj antigjenit që studiohet: 5 - aglutinoni

Vendosja e një reagimi. Serumi i provës nxehet për 30 minuta në 56°C, hollohet në mënyrë sekuenciale në një raport 1:10 - 1:1280 dhe derdhet në 0,25 ml në epruveta ose puse, ku 2 pika eritrocite diagnosticum (eritrocite me antigjen të përthithur mbi to. ) shtohen më pas.

Kontrollet: një pezullim i eritrociteve diagnosticum me serum të njohur imunitar; pezullimi i diagnostifikimit me serum normal; një pezullim i qelizave normale të kuqe të gjakut me serum testues. Në kontrollin e parë duhet të ndodhë aglutinimi, në të dytin dhe të tretën nuk duhet të ndodhë.

Duke përdorur RIGA, ju mund të zbuloni një antigjen të panjohur nëse antitrupat e njohur absorbohen në qelizat e kuqe të gjakut.

Reaksioni i hemaglutinimit mund të kryhet në një vëllim prej 0,025 ml (mikrometodë) duke përdorur një mikrotitrator Takachi.

Pyetje kontrolli

1. Çfarë tregon një rezultat pozitiv i analizës me rreze X midis rruazave të kuqe të gjakut dhe materialit që testohet për praninë e virusit?

2. A do të ndodhë aglutinimi i rruazave të kuqe të gjakut nëse atyre u shtohet një virus dhe serumi i tij përkatës? Si quhet reagimi që zbulon këtë fenomen?

Ushtrimi

Merrni parasysh dhe regjistroni rezultatin RIGA.

Reagimi i reshjeve

Në reaksionin e precipitimit, precipitohet një kompleks imunitar specifik, i përbërë nga një antigjen i tretshëm (lizat, ekstrakt, hapten) dhe një antitrup specifik në prani të elektroliteve.

Unaza e turbullt ose precipitati i formuar si rezultat i këtij reaksioni quhet precipitat. Ky reagim ndryshon kryesisht nga reaksioni i aglutinimit në madhësinë e grimcave të antigjenit.

Reaksioni i precipitimit zakonisht përdoret për të përcaktuar antigjenin në diagnostikimin e një numri infeksionesh ( antraksit, meningjiti, etj.); në mjekësinë ligjore - për të përcaktuar llojin e gjakut, spermës etj.; në studimet sanitare dhe higjienike - kur vendoset falsifikimi i produkteve; me ndihmën e saj përcaktohet marrëdhënia filogjenetike e kafshëve dhe bimëve. Për reagimin ju nevojitet:

1. Antitrupat (precipitina) - serum imunitar me një titër të lartë antitrupash (jo më të ulët se 1:100.000). Titri i serumit precipitues përcaktohet nga hollimi më i lartë i antigjenit me të cilin ai reagon. Serumi zakonisht përdoret i paholluar ose në një hollim 1:5 - 1:10.

2. Antigjen - substanca të tretura me natyrë proteinike ose polisakaride lipoide (antigjene dhe haptene të plota).

3. Tretësirë ​​izotonike.

Metodat kryesore për kryerjen e reaksionit të precipitimit janë: reaksioni i precipitimit unazor dhe reaksioni i precipitimit në agar (xhel).

Kujdes! Të gjithë përbërësit e përfshirë në reaksionin e precipitimit duhet të jenë plotësisht transparent.

Reaksioni i reshjeve të unazës. Duke përdorur një pipetë Pasteur, shtoni 0,2-0,3 ml (5-6 pika) serum në tubin e precipitimit (serumi nuk duhet të futet në muret e tubit). Antigjeni në të njëjtin vëllim vendoset me kujdes në serum, duke e derdhur me një pipetë të hollë Pasteur përgjatë murit të epruvetës. Provëza mbahet në një pozicion të pjerrët. Kur shtresohet siç duhet, duhet të ketë një kufi të qartë midis serumit dhe antigjenit. Me kujdes, që të mos përzihet lëngu, vendoseni epruvetën në një stendë. Në rezultat pozitiv reaksioni, një "unazë" e turbullt formohet në kufirin e antigjenit dhe antitrupit - një precipitat (shih Fig. 48).

Reagimi shoqërohet nga një numër kontrollesh (Tabela 18). Sekuenca e shtimit të përbërësve të reagimit në epruvetën është shumë e rëndësishme. Ju nuk mund të vendosni serum në antigjen (në kontroll - në një tretësirë ​​izotonike), pasi densiteti relativ i serumit është më i madh, ai do të zhytet në fund të epruvetës dhe kufiri midis lëngjeve nuk do të zbulohet.

Tabela 18. Skema për vendosjen e reaksionit të precipitimit unazor

Shënim. + prania e një "unaze"; - mungesa e një "unaze".

Rezultatet regjistrohen pas 5-30 minutash, në disa raste pas një ore, si gjithmonë duke filluar me kontrollet. "Unaza" në epruvetën e dytë tregon aftësinë e serumit imunitar për të hyrë në një reaksion specifik me antigjenin përkatës. Nuk duhet të ketë "unaza" në 3-5 tubat e provës - nuk ka antitrupa dhe antigjenë që korrespondojnë me njëri-tjetrin. Një "unazë" në tubin e parë - një rezultat pozitiv i reagimit - tregon që antigjeni i testit korrespondon me serumin imunitar të marrë, mungesa e një "unaze" (një "unazë" vetëm në tubin e 2-të) tregon mospërputhjen e tyre - një negativ. rezultati i reagimit.

Reagimi i precipitimit në agar (xhel). E veçanta e reagimit është se ndërveprimi i antigjenit dhe antitrupave ndodh në një mjedis të dendur, d.m.th., në një xhel. Precipitati që rezulton jep një brez të turbullt në trashësinë e mediumit. Mungesa e një brezi tregon një mospërputhje midis përbërësve të reagimit. Ky reagim përdoret gjerësisht në kërkimet biomjekësore, veçanërisht në studimin e formimit të toksinave në agjentin shkaktar të difterisë.

Pyetje kontrolli

1. Cili është ndryshimi kryesor midis reaksioneve të aglutinimit dhe precipitimit?

2. Pse përbërësit e turbullt nuk mund të përdoren në reaksionin e reshjeve?

Ushtrimi

1. Vendosni reaksionin e precipitimit të unazës dhe skiconi rezultatin.

2. Studioni natyrën e ndërveprimit të antigjenit me antitrupat në reaksionin e precipitimit në agar, skiconi rezultatin (merrni një filxhan nga mësuesi juaj).

Reagimi i lizës (citoliza imune)

Liza imune është shpërbërja e qelizave nën ndikimin e antitrupave me pjesëmarrjen e detyrueshme të komplementit. Për reagimin ju nevojitet:

1. Antigjen - mikrobe, qeliza të kuqe të gjakut ose qeliza të tjera.

2. Antitrupa (lizina) - serum imunitar, më rrallë serumi i pacientit. Serumi bakterolitik përmban antitrupa të përfshirë në lizën e baktereve; hemolitik - hemolizina që nxisin lizën e qelizave të kuqe të gjakut; për lizën e spiroketeve nevojiten spiroketolizinat, qelizat - itolizina etj.

3. Komplement. Pjesa më e madhe e komplementit në serum derra nga Guinea. Ky serum (përzierje nga disa kafshë) zakonisht përdoret si plotësues. Komplementi i freskët (vendas) është i paqëndrueshëm dhe shkatërrohet lehtësisht nga ngrohja, shkundja ose ruajtja, kështu që mund të përdoret jo më shumë se dy ditë pas marrjes. Për të ruajtur komplementin, i shtohet 2%. acid borik dhe 3% sulfat natriumi. Ky komplement mund të ruhet në 4°C deri në dy javë. Komplementi i thatë përdoret më shpesh. Para përdorimit, ajo shpërndahet në një zgjidhje izotonike në vëllimin origjinal (treguar në etiketë).

4. Tretësirë ​​izotonike.

Reagimi i hemolizës(Tabela 19). Për reagimin ju nevojitet:

1. Antigjen - 3% suspension i eritrociteve të lara të deleve në masën 0,3 ml sediment eritrocitar dhe 9,7 ml tretësirë ​​izotonike.

2. Antitrupa - serum hemolitik (hemolizina) kundër eritrociteve të deleve; zakonisht përgatitet në prodhim, liofilizohet dhe titri tregohet në etiketë.

Titri i hemolizinës është hollimi më i lartë i serumit në të cilin ndodh hemoliza e plotë e një pezullimi prej 3% të qelizave të kuqe të gjakut në prani të komplementit. Për reaksionin e hemolizës, hemolizina merret në titër të trefishtë, pra e holluar 3 herë më pak se para titrit. Për shembull, me një titër serumi prej 1:1200, serumi hollohet 1:400 (0.1 ml serum * dhe 39.9 ml tretësirë ​​izotonike). Teprica e hemolizinës është e nevojshme, pasi një pjesë e saj mund të absorbohet nga përbërës të tjerë të reaksionit.

* (Ju nuk duhet të merrni më pak se 0,1 ml serum - saktësia e matjes do të vuajë.)

3. Komplementi hollohet 1:10 (0.2 ml komplement dhe 1.8 ml tretësirë ​​izotonike).

4. Tretësirë ​​izotonike.

Tabela 19. Skema e reaksionit të hemolizës

Kontabiliteti për rezultatet. Nëse reaksioni kryhet si duhet, hemoliza do të ndodhë në epruvetën e parë - përmbajtja e saj do të bëhet transparente. Në kontrollet, lëngu mbetet i turbullt: në tubin e dytë nuk ka komplement të mjaftueshëm që të ndodhë hemoliza, në tubin e 3-të nuk ka hemolizinë, në tubin e 4-të nuk ka as hemolizinë dhe as komplement, në tubin e 5-të antigjeni. nuk përputhet me antitrupat,

Nëse është e nevojshme, serumi hemolitik titrohet sipas skemës së mëposhtme (Tabela 20).

Përpara titrimit, përgatitni një hollim fillestar të serumit prej 1:100 (0,1 ml serum dhe 9,9 ml tretësirë ​​izotonike), nga i cili bëhen hollimet e nevojshme, për shembull:

Nga këto hollime, shtoni 0,5 ml serum në epruvetat e titrimit, siç tregohet në tabelë. 20.

Tabela 20. Skema e titrimit për serumin hemolitik (hemolizina)

Në shembullin e dhënë në tabelë. 20, titri i serumit hemolitik është 1:1200.

Kur përdorni serum të freskët hemolitik, ai duhet të çaktivizohet për të shkatërruar komplementin e pranishëm në të. Për ta bërë këtë, ajo nxehet për 30 minuta në 56 ° C në një banjë uji ose në një inaktivues me një termostat. Metoda e fundit është më e mirë: eliminon mundësinë e mbinxehjes së hirrës, d.m.th., denatyrimin e saj. Serumet e denatyruara janë të papërshtatshme për testim.

Reaksioni i bakterolizës. Në këtë reagim, komplementi lizon bakteret në prani të serumit të përshtatshëm (homolog). Skema e reagimit është thelbësisht e ngjashme me skemën e reaksionit të hemolizës. Dallimi është se pas një inkubimi dy-orësh, të gjitha epruvetat futen në enët Petri me një medium të favorshëm për mikroorganizmin e marrë në eksperiment për të zbuluar nëse ai është lizuar. Nëse eksperimenti kryhet në mënyrë korrekte, kulturat nga 2-5 epruveta (kontrollet) duhet të tregojnë rritje të bollshme. Mungesa e rritjes ose rritja e dobët në inokulimin nga epruveta e parë (eksperimenti) tregon vdekjen e mikrobeve, d.m.th., se ato janë homologe me antitrupat.

Kujdes! Reaksioni i bakterolizës duhet të kryhet në kushte aseptike.

Pyetje kontrolli

1. Çfarë do të ndodhë me qelizat e kuqe të gjakut nëse në vend të tretësirës izotonike të klorurit të natriumit përdoret ujë i distiluar? Cila është baza e këtij fenomeni?

2. Çfarë reagimi do të ndodhë kur eritrocitet ndërveprojnë me serumin homolog imunitar në mungesë të komplementit?

Ushtrimi

Vendosni reaksionin e hemolizës. Regjistroni dhe skiconi rezultatin.

Informacione të lidhura.

Reaksioni indirekt i hemaglutinimit (RIHA).

RIGA përdoret në dy versione: me antitrupa të njohur për zbulimin e antitrupave me antitrupa të njohur për zbulimin e antitrupave. Ky reagim është specifik dhe përdoret për të diagnostikuar sëmundjet e shkaktuara nga bakteret dhe rikecia. Për të kryer RIGA, përdoret diagnostifikimi i eritrociteve, i përgatitur me adsorbim të AG ose AT në eritrocite, në varësi të qëllimit të studimit (Fig. 10.3). Në raste pozitive, shkalla e aglutinimit të eritrociteve shënohet me pluse. Katër pluse vlerësojnë një reaksion që ka formën e një filmi të hollë të qelizave të kuqe të gjakut ngjitës (ombrellë) që mbulon pjesën e poshtme të epruvetës; prania e një filmi me skajet e dantellave të pjekura tregohet nga dy pluse. Titri merret si hollimi maksimal i materialit testues që shkaktoi aglutinimin e eritrociteve me dy pluse.

Oriz. 10.3.

1 - qelizat e kuqe te gjakut, 2 - eritrociti AG, 3 - AG konjuguar, 4-AT

RHA dhe reaksioni i frenimit të hemaglutinimit (HAI).

Siç është përmendur tashmë, RHA bazohet në aftësinë e eritrociteve për t'u ngjitur së bashku kur disa antigjene absorbohen në to. Lëngu allantoik dhe amniotik, një pezullim i membranave korion-alantoike të embrioneve të pulës, pezullime dhe ekstrakte nga kulturat ose organet e kafshëve të infektuara me viruse dhe materiali infektiv vendas përdoren si material provë për hemaglutinimin. RGA nuk është një reaksion serologjik, pasi ndodh pa pjesëmarrjen e serumit imunitar dhe përdoret për të zgjedhur hollimin e punës së një antigjeni për vendosjen e një RGA ose praninë e një antigjeni (virusi) në materialin e testimit (për shembull, për gripin. ). Reagimi përdor qelizat e kuqe të gjakut nga kafshët, zogjtë dhe njerëzit me grupin e gjakut I (0). Për të vendosur një RGA të përafërt, një pikë e një suspensioni prej 5% të eritrociteve dhe një pikë e materialit testues aplikohen në një rrëshqitje xhami dhe përzihen plotësisht. Nëse rezultati është pozitiv, pas 1-2 minutash vërehet në mënyrë makroskopike shfaqja e aglutinimit flokulent të eritrociteve. Për të vendosur RGA në një rresht të shpalosur në puset e pllakave të polistirenit, përgatitni hollime dyfish në rritje të materialit testues për tretësirë ​​fiziologjike në një vëllim prej 0.5 ml. 0,5 ml e një suspensioni 0,25-1% të qelizave të kuqe të gjakut shtohet në të gjitha epruvetat. Rezultatet merren parasysh pas sedimentimit të plotë të eritrociteve në kontroll (rruazat e kuqe të gjakut + tretësirë ​​fiziologjike). Reagimi merret parasysh nga natyra e sedimentit të eritrociteve. Në raste pozitive, shkalla e aglutinimit shënohet me pluse. Një reagim që duket si një shtresë e hollë qelizash ngjitëse të kuqe të gjakut që mbulojnë pjesën e poshtme të një epruvetë (ombrellë) vlerësohet me katër pluse; një reagim me boshllëqe në film shënohet me tre pluse; prania e një filmi me dantellë të pjekur skajet e rruazave të kuqe ngjitëse të gjakut shënohen me dy pluse; një sediment flokulent i qelizave të kuqe të gjakut i rrethuar nga një zonë eritrocitesh me gunga të aglutinuara, korrespondon me një plus. Një sediment i eritrociteve i përcaktuar qartë, i padallueshëm nga kontrolli, tregon mungesën e aglutinimit. Titri merret si hollimi maksimal i materialit testues që shkaktoi aglutinimin e eritrociteve me dy pluse. Nëse rezultati i RGA është pozitiv, studimi vazhdon, duke përcaktuar llojin e virusit të izoluar duke përdorur RT GA me serum tip-specifik. RTGA bazohet në vetinë e antiserumit për të shtypur hemaglutinimin viral, pasi virusi i neutralizuar nga antitrupa specifikë humbet aftësinë për të aglutinuar qelizat e kuqe të gjakut. Për tipizimin tentativ të viruseve, përdoret metoda e pikave në xhami. Për të përcaktuar përfundimisht llojin e virusit të izoluar dhe për të titruar antitrupat në serum, një test i zgjeruar me rreze X vendoset në epruveta ose puse. Për këtë qëllim, hollimet e dyfishta të serumeve përgatiten në tretësirë ​​fiziologjike dhe shpërndahen në 0,25 ml. Hollimeve të serumit shtoni një pikë materiali që përmban virusin dhe një pikë suspension 1% të qelizave të kuqe të gjakut. Kur përdorni RTGA për të përcaktuar llojin e virusit, përdoren serume specifike të tipit, të cilat i shtohen një vëllimi të barabartë të hollimit të punës të AG. Lloji i virusit të izoluar përcaktohet nga serumi specifik imunitar që tregoi titrin më të lartë të antitrupave ndaj këtij virusi. RGA dhe RTGA përdoren gjerësisht për diagnostikim infeksionet virale (encefaliti i lindur nga rriqrat, gripi, etj.) për të zbuluar antitrupa specifikë dhe për të identifikuar shumë viruse nga antitrupat e tyre.

Reaksioni indirekt ose pasiv i hemaglutinimit (IPHA)

Ky reagim është më i ndjeshëm se reaksioni i aglutinimit dhe përdoret në diagnostikimin e infeksioneve të shkaktuara nga bakteret, rikecia, protozoarët dhe mikroorganizmat e tjerë.

RPGA ju lejon të zbuloni një përqendrim të vogël të antitrupave.

Ky reagim përfshin eritrocite dele të tannizuara ose eritrocite të njeriut me gjak të grupit I, të sensibilizuar me antigjene ose antitrupa.

Nëse në serumin e testit zbulohen antitrupa, atëherë përdoren qelizat e kuqe të gjakut të sensibilizuara me antigjene (erythrocyte diagnosticum).

Në disa raste, nëse është e nevojshme të përcaktohen antigjene të ndryshme në materialin e testimit, përdoren eritrocite të sensibilizuara me imunoglobulina.

Rezultatet e RPGA merren parasysh nga natyra e sedimentit të eritrociteve.

Rezultati i një reagimi konsiderohet pozitiv kur qelizat e kuqe të gjakut mbulojnë në mënyrë të barabartë të gjithë fundin e epruvetës (një çadër e përmbysur).

Në një reagim negativ, qelizat e kuqe të gjakut në formën e një disku (butoni) të vogël ndodhen në qendër të pjesës së poshtme të epruvetës.

Reaksioni i aglutinimit (RA)

Për shkak të specifikës së tij, lehtësisë së performancës dhe demonstrueshmërisë, reaksioni i aglutinimit është bërë i përhapur në praktikën mikrobiologjike për diagnostikimin e shumë sëmundjet infektive: ethet tifoide dhe paratifoide (reaksioni Vidal), tifoja (reaksioni Weigl) etj.

Reaksioni i aglutinimit bazohet në specifikën e ndërveprimit të antitrupave (aglutininave) me qeliza të plota mikrobike ose të tjera (aglutinogens). Si rezultat i këtij ndërveprimi, formohen grimca - aglomerate që precipitojnë (aglutinojnë).

Reaksioni i aglutinimit mund të përfshijë baktere të gjalla dhe të vrarë, spiroketa, kërpudha, protozoa, rikeci, si dhe qeliza të kuqe të gjakut dhe qeliza të tjera.

Reagimi ndodh në dy faza: e para (e padukshme) - specifike, kombinimi i antigjenit dhe antitrupave, e dyta (e dukshme) - jo specifike, ngjitja e antigjeneve, d.m.th. formimi i aglutinimit.

Një aglutinat formohet kur një qendër aktive e një antitrupi dyvalent kombinohet me grupin përcaktues të një antigjeni.

Reaksioni i aglutinimit, si çdo reaksion serologjik, ndodh në prani të elektroliteve.

Nga jashtë, manifestimi i një reaksioni pozitiv të aglutinimit ka një karakter të dyfishtë. Në mikrobet me flagjella që kanë vetëm O-antigjen somatik, vetë qelizat mikrobike ngjiten drejtpërdrejt. Ky aglutinim quhet i imët. Ndodh brenda 18-22 orëve.

Mikrobet flagjellarë kanë dy antigjene - antigjen somatik O dhe antigjen flagjelar H. Nëse qelizat janë ngjitur së bashku nga flagjelat, formohen thekon të mëdha e të lirshme dhe ky reaksion aglutinimi quhet i trashë. Ndodh brenda 2-4 orësh.

Reaksioni i aglutinimit mund të kryhet si për qëllimin e përcaktimit cilësor dhe sasior të antitrupave specifikë në serumin e gjakut të pacientit, ashtu edhe për qëllimin e përcaktimit të llojit të patogjenit të izoluar. hemaglutinimi mikrobiologjik infektiv

Reaksioni i aglutinimit mund të kryhet si në një version të zgjeruar, i cili ju lejon të punoni me serum të holluar në një titër diagnostikues, ashtu edhe në një version të reagimit tregues, i cili ju lejon, në parim, të zbuloni antitrupa specifikë ose të përcaktoni speciet e patogjenit. .

Reaksioni i aglutinimit - RA(nga lat. aglutinimi- ngjitja) është një reaksion i thjeshtë në të cilin antitrupat lidhin antigjenet korpuskulare (bakteret, eritrocitet ose qelizat e tjera, grimcat e patretshme me antigjene të absorbuara në to, si dhe agregatet makromolekulare). Ndodh në prani të elektroliteve, për shembull, kur shtohet një zgjidhje izotonike e klorurit të natriumit.

Përdoren opsione të ndryshme për reaksionin e aglutinimit: ekstensiv, indikativ, indirekt etj. Reaksioni i aglutinimit manifestohet me formimin e thekoneve ose sedimentit.

RA përdoret për:

përcaktimi i antitrupave në serumin e gjakut të pacientëve, për shembull, me brucelozë (reaksionet Wright, Heddelson), ethet tifoide dhe ethet paratifoide (reaksioni Vidal) dhe të tjera sëmundjet infektive;

përcaktimi i patogjenit të izoluar nga pacienti;

përcaktimi i grupeve të gjakut duke përdorur antitrupa monoklonale kundër aloantigjeneve të eritrociteve.

Për të përcaktuar antitrupat në një pacient vënëReagimi i detajuar i aglutinimit: shtoni në hollimet e serumit të gjakut të pacientit diagnosticum(pezullimi i mikrobeve të vrarë) dhe pas disa orësh inkubimi në 37 °C, vërehet hollimi më i lartë i serumit (titri i serumit), në të cilin ndodhi aglutinimi, d.m.th. u formua një precipitat.

Natyra dhe shpejtësia e aglutinimit varen nga lloji i antigjenit dhe antitrupave. Një shembull është veçoritë e ndërveprimit të diagnostifikimit (antigjenet O- dhe R) me antitrupa specifikë. Reaksioni i aglutinimit me O-diagnostikum(bakteret e vrarë nga nxehtësia, duke mbajtur të qëndrueshme ndaj nxehtësisë O-antigjen) paraqitet në formë aglutinimi të imët. Reaksioni i aglutinimit me H-diagnosticum (bakteret e vrarë nga formaldehidi, që mbajnë antigjenin H-flagjelar termolabil) është i trashë dhe vazhdon më shpejt.

Nëse është e nevojshme të përcaktohet patogjeni i izoluar nga pacienti, vendosni reaksion tregues i aglutinimit, duke përdorur antitrupa diagnostikues (serum aglutinues), d.m.th., kryhet serotipizimi i patogjenit. Reagimi i përafërt kryhet në një rrëshqitje xhami. Një kulturë e pastër e patogjenit të izoluar nga pacienti i shtohet një pikë serumi diagnostikues aglutinues në një hollim prej 1:10 ose 1:20. Një kontroll vendoset afër: në vend të serumit, aplikohet një pikë tretësirë ​​e klorurit të natriumit. Kur një sediment flokulent shfaqet në një pikë që përmban serum dhe mikrobe, a reaksion i gjerë i aglutinimit në provëza me hollime në rritje të serumit aglutinues, të cilit i shtohen 2-3 pika suspension patogjen. Aglutinimi merret parasysh nga sasia e sedimentit dhe shkalla e pastërtisë së lëngut. Reagimi konsiderohet pozitiv nëse aglutinimi vërehet në një hollim afër titrit të serumit diagnostik. Në të njëjtën kohë, merren parasysh kontrollet: serumi i holluar me tretësirë ​​izotonike të klorurit të natriumit duhet të jetë transparent, suspensioni i mikrobeve në të njëjtën tretësirë ​​duhet të jetë uniformisht i turbullt, pa sediment.

Bakteret e ndryshme të lidhura mund të aglutinohen nga i njëjti serum aglutinues diagnostik, gjë që e bën të vështirë identifikimin e tyre. Prandaj përdorin serum aglutinues të absorbuar, nga të cilat janë hequr antitrupat me reaksion të kryqëzuar me anë të adsorbimit në bakteret përkatëse. Serumet e tilla ruajnë antitrupa që janë specifikë vetëm për një bakter të caktuar. Prodhimi i serumeve të veçanta diagnostikuese aglutinuese me monoreceptorë u propozua nga A. Castellani (1902).

Reaksioni indirekt (pasiv) i hemaglutinimit(RNGA, RPGA) bazohet në përdorimin e eritrociteve me antigjene ose antitrupa të adsorbuar në sipërfaqen e tyre, ndërveprimi i të cilave me antitrupat ose antigjenet përkatëse të serumit të gjakut bën që eritrocitet të ngjiten së bashku dhe të bien deri në fund të testit. tub ose qelizë V në formë sedimenti të skallopuar (Fig. 13.2). Në rast të një reagimi negativ, qelizat e kuqe të gjakut vendosen ■ në formën e një "butoni". Në mënyrë tipike, antitrupat zbulohen në RNGA duke përdorur një diagnosticum antigjenik të eritrociteve, që janë eritrocite me adsorbuar në ato me antigjene. Ndonjëherë përdoret diagnostifikimi i eritrociteve anti-A, mbi të cilat absorbohen antitrupat. Për shembull, toksina botulinum mund të zbulohet duke shtuar toksina botulinum antitrupave të eritrociteve (ky reaksion quhet reaksioni i kundërt i hemaglutinimit indirekt- RONG). RNGA përdoret për të diagnostikuar sëmundjet infektive, për të përcaktuar hormoni gonadotropin V urinë kur vendoset shtatzënia, për të zbuluar mbindjeshmëria për të barna, hormonet dhe në disa raste të tjera.

REAKSIONI KOMBES

(Testi Coombs) - një metodë për përcaktimin e antitrupave Rh në sipërfaqen e qelizave të kuqe të gjakut, të cilat shkaktojnë precipitimin e globulinave në serumin e gjakut. Ky test përdoret për diagnostikim anemia hemolitike tek foshnjat me papajtueshmëri Rh që përjetojnë shkatërrimin e qelizave të kuqe të gjakut.

Reaksioni i koaglutinimit. Qelizat patogjene përcaktohen duke përdorur stafilokokë të para-trajtuar me serum imun diagnostikues. Stafilokokët që përmbajnë proteina A, duke pasur një afinitet për fragmentin Fc të imunoglobulinave, thithin në mënyrë jospecifike antitrupat antimikrobikë, të cilët më pas ndërveprojnë me qendrat aktive me mikrobet përkatëse të izoluara nga pacientët. Si rezultat i koaglutinimit, formohen thekon të përbërë nga stafilokokë, antitrupa diagnostikues të serumit dhe mikrobin e zbuluar.

Reagimi i frenimit të hemaglutinimit(RTGA) bazohet në bllokimin, shtypjen e antigjeneve virale nga antitrupat imun të serumit, si rezultat i të cilave viruset humbasin aftësinë e tyre për të aglutinuar qelizat e kuqe të gjakut (Fig. 13.3). RTGA përdoret për të diagnostikuar shumë sëmundje virale, agjentët shkaktarë të të cilave (viruset e gripit, fruthi, rubeola, encefaliti i lindur nga rriqrat, etj.) mund të aglutinojnë qelizat e kuqe të gjakut të kafshëve të ndryshme.

1. Një grup mjekësh nga OBSH mbërritën në Indi për të identifikuar pacientët me poliomielit dhe për të ndihmuar në kryerjen e vaksinimit universal kundër poliomielitit. Në një nga fshatrat e anketuar u soll te mjekët një djalë 6-vjeçar nga një familje e madhe, i cili u sëmur 5 ditë më parë. Temperatura u rrit papritur, pati një dhimbje koke të fortë, të vjella të përsëritura, dhimbje në krahë dhe këmbë. Pas inspektimit: ngrohjes, dobësi e rëndë, simptoma meningeale, në kemba e djathte reduktuar toni i muskujve, reflekset e tendinit janë dobësuar ndjeshëm, këmba varet poshtë. Gjatë punksionit të kanalit kurrizor, lëngu cerebrospinal rrjedh nga poshtë presionin e lartë të gjakut, numri i limfociteve është rritur, bakteret nuk janë të izoluara. U bë një diagnozë paraprake e "formës paralitike të poliomielitit". Si mund të infektohej djali? Si kryhet parandalimi specifik aktiv i poliomielitit? A ekziston rreziku i infektimit të fëmijëve të tjerë në këtë familje, çfarë duhet bërë?

Përgjigje: Djali mund të ishte infektuar përmes rrugës fekalo-orale përmes ushqimit, ujit dhe gjithashtu përmes pikave ajrore. Masa kryesore për parandalimin e poliomielitit është imunizimi me një vaksinë me kulturë të gjallë nga 3 serotipe të shtameve Sabin.Në Rusi përdoret vaksinimi i poliomielitit për administrim oral i prodhuar nga Instituti i Poliomielitit dhe Encefalitit Viral me emrin. M.P. Çumakova. Vaksina është një përgatitje trevalente e shtameve të dobësuara Sabin të virusit të poliomielitit të tipeve 1, 2, 3, të marra nga një kulturë primare e qelizave të veshkave të majmunit jeshil afrikan. . Vaksinimet e planifikuara Fëmijët nga 3 muaj deri në 6 vjeç janë të ndjeshëm ndaj poliomielitit. Vaksinimet me vaksinën orale të poliomielitit kryhen me 2 ose 4 pika të vaksinës nga goja tre herë në 3, 4, 5 dhe 6 muaj me tre rivaksinime në 18, 20 muaj dhe 14 vjeç. Djali i sëmurë duhet të shtrohet në spital dhe të gjithë fëmijët e tjerë të kësaj familjeje duhet të vaksinohen me vaksinën e gjallë të poliomielitit.

1. Përbërja dhe përdorimi i vaksinës së lëngshme të gripit polimer-nënnjësi trivalente (gripi)

Kjo është një vaksinë molekulare. Përbërja: Ag sipërfaqësore e virusit të influencës me tre nëntipe (A/H1N1, A/H3N2, B). Aplikimi: për parandalimin e gripit

Karta e provimit nr.23