Реакція непрямої чи пасивної гемаглютинації (РНГА чи РПГА) більш чутлива та специфічна, ніж реакція аглютинації. Цю реакцію також використовують у двох напрямках.

1) Для виявлення антитіл у сироватці крові хворого застосовуються еритроцитарні діагностикуми, у яких антиген адсорбований на поверхні оброблених таніном еритроцитів. Щодо цієї реакції найчастіше вживають термін РПГА.

Досліджувану сироватку розводять у лунках пластмасових планшетів та додають еритроцитарний діагностикум. При позитивній реакції з'являється тонка плівка по стінках лунки у вигляді мереживної парасольки, при негативної реакції- щільний осад еритроцитів у вигляді "гудзика".

2) Для виявлення токсинів та бактеріальних антигенів у досліджуваному матеріалі застосовують антильні еритроцитарні діагностикуми, отримані шляхом адсорбції антитіл на еритроцитах. Щодо цієї реакції найчастіше вживається термін РНГА. Наприклад, за допомогою антільних діагностикумів виявляють антиген палички чуми, дифтерійний екзотоксин, ботулінічний екзотоксин.

Реакція Кумбса (аптіглобуліновий тест)

Реакцію застосовують для виявлення неповних антитіл, наприклад антитіл до резус-фактору. До Rh + еритроцитів додають сироватку, що досліджується, в якій передбачається присутність неповних антитіл до резус-фактору. Приєднавшись до еритроцитів, неповні антитіла не викликають аглютинації, оскільки мають лише один активний центр. Потім додають антиглобулінову сироватку, що містить антитіла до глобулінів людини. Поєднавшись з неповними антитілами, антиглобулінова сироватка викликає аглютинацію еритроцитів.

Реакція преципітації

Сутність реакції полягає в осадженні (преципітації) антигену під дією специфічних антитіл. Для отримання видимої реакції потрібна присутність електроліту. Антигеном реакції преципітації є молекулярно-дисперсні речовини.

Реакція кільцепреципітаціїставиться у вузьких преципітаційних пробірках. У пробірку наливають імунну сироватку, її обережно нашаровують досліджуваний матеріал. За наявності в ньому антигену на межі двох рідин утворюється непрозоре кільце преципітату.

Реакцію застосовують у судовій медицинідля визначення видової приналежності білків у кров'яних плямах, спермі і т.д.; для визначення антигену при діагностиці сибірки (реакція Асколі), менінгіту та інших інфекцій; у санітарно-гігієнічних дослідженнях – для встановлення фальсифікації харчових продуктів. Імунні преципітуючі сироватки одержують шляхом імунізації тварин відповідним антигеном. Наприклад, сироватка, преципітуюча білок людини, отримана шляхом імунізації кролика білком людини. Титр преципітуючої сироватки – це найбільше розведення антигену, з яким вона дає реакцію. Сироватку зазвичай застосовують нерозведеною або у розведенні 1:5.

Реакція преципітації в агаровому геліпроводиться декількома методами. Це реакція подвійної імунодифузії, реакція радіальної імунодифузії, реакція імуноелектрофорезу.

Реакція подвійної імунодифузії(По Оухтерлоні). Розтоплений агаровий гельвиливають у чашку Петрі та після затвердіння в ньому вирізують лунки. В одні лунки поміщають антиген, в інші - імунні сироватки, які дифундують в агар, утворюють у місці зустрічі преципітату у вигляді білих смуг.

Реакція радіальної імунодифузії(По Манчіні). У розтоплений агаровий гель вносять імунну сироватку, виливають у чашку. Після застигання агару у ньому вирізують лунки і поміщають у яких антигени, які, дифузуючи в агар, утворюють кільцеві зони преципітації навколо лунок. Чим вище концентрація антигену, тим більший діаметр кільця. Реакцію застосовують, наприклад, визначення в крові імуноглобулінів різних класів. Імуноглобуліни класів IgG, IgM, IgA діють у цій реакції як антигени, а антитіла проти них містяться в специфічних монорецепторних сироватках.

Імуноелектрофорез.В агаровому гелі проводять електрофорез білкових антигенів. У канавку, яка йде паралельно напрямку руху білків, вносять сироватку, що преципітує. Антигени та антитіла дифундують в агар, і в місці їх зустрічі утворюються лінії преципітації.

Реакції імунного лізису

Антиген (еритроцити або бактерії), з'єднавшись зі специфічними антитілами, утворює імунний комплекс, до якого приєднується комплемент (С1), і відбувається активація комплементу класичним шляхом. Активований комплемент лізує еритроцити (гемоліз) чи бактерії (бактеріоліз). Реакція бактеріолізу застосовується для ідентифікації холерного вібріона.

Реакція гемолізу.Антигеном у реакції служать еритроцити, антитіла (гемолізини) містяться в гемолітичній сироватці. Гемолізини приєднуються до еритроцитів, відбувається активація комплементу, що лізує еритроцити. Мутна завись еритроцитів перетворюється на прозору яскраво-червону рідину – «лакову кров». Оскільки реакція гемолізу відбувається лише у присутності комплементу, її застосовують як індикаторну виявлення комплементу.

Реакція локального гемолізу у гелі(реакція Ерне) – варіант реакції гемолізу. Служить для визначення кількості антитілоутворюючих клітин (АОК) у селезінці та лімфатичних вузлах.

Розтоплений агаровий гель змішують із суспензією клітин селезінки та еритроцитами і після застигання агару додають комплемент. Навколо кожної клітини, що продукує гемолізину, утворюється зона гемолізу. За кількістю таких зон визначають кількість клітин, які продукують гемолізини.

Реакція непрямої (пасивної) гемаглютинації (РНГА) заснована на тому, що еритроцити, якщо на їхній поверхні адсорбувати розчинний антиген, набувають здатності аглютинуватися при взаємодії з антитілами до адсорбованого антигену. Схема РНДА представлена ​​на рис. 34. РНГА широко застосовують при діагностиці низки інфекцій.

Мал. 34. Схема реакції пасивної гемаглютинації (РПГА). А - отримання еритроцитарного діагностикуму: Б - РПГА: 1 - еритроцит: 2 - антиген, що вивчається; 3 – еритроцитарний діагностикум; 4 - антитіло до антигену, що вивчається: 5 - аглютинат

Постановка реакції. Випробувану сироватку прогрівають 30 хв при 56° С, розводять послідовно у співвідношенні 1:10 - 1:1280 і розливають по 0,25 мл у пробірки або лунки, куди потім додають по 2 краплі еритроцитарного діагностикуму (еритроцити з адсорбованим).

Контролі: завись еритроцитарного діагностикуму із свідомо імунною сироваткою; завись діагностикуму з нормальною сироваткою; завись нормальних еритроцитів з випробуваною сироваткою. У першому контролі має відбутися аглютинація, у другому та третьому її не повинно бути.

За допомогою РІГА можна визначати невідомий антиген, якщо адсорбувати на еритроцити свідомо відомі антитіла.

Реакцію гемаглютинації можна ставити в об'ємі 0,025 мл (мікрометод), користуючись мікротитратором Такачі.

Контрольні питання

1. Про що свідчить позитивний результат РДА між еритроцитами та досліджуваним на наявність вірусу матеріалом?

2. Чи відбудеться аглютинація еритроцитів, якщо до них додати вірус та відповідну йому сироватку? Як називається реакція, яка виявляє цей феномен?

Завдання

Врахуйте та зареєструйте результат РІГА.

Реакція преципітації

У реакції преципітації відбувається випадання осад специфічного імунного комплексу, що складається з розчинного антигену (лізату, екстракту, гаптена) і специфічного антитіла в присутності електролітів.

Утворене в результаті цієї реакції каламутне кільце або осад називають преципітатом. Від реакції аглютинації ця реакція переважно відрізняється розміром частинок антигену.

Реакцію преципітації зазвичай застосовують визначення антигену при діагностиці низки інфекцій ( сибірська виразка, менінгіт та ін); у судовій медицині - для визначення видової приналежності крові, сперми та ін; у санітарно-гігієнічних дослідженнях – при встановленні фальшування продуктів; з її допомогою визначають філогенетичну спорідненість тварин та рослин. Для реакції необхідні:

1. Антитіла (преципітіни) – імунна сироватка з високим титром антитіл (не нижче 1:100000). Титр преципітуючої сироватки встановлюють за найбільшим розведенням антигену, з яким вона дає реакцію. Сироватку зазвичай застосовують нерозведеною або у розведенні 1:5 – 1:10.

2. Антиген - розчинені речовини білкової або ліпоїднополісахаридної природи (повні антигени та гаптени).

3. Ізотонічний розчин.

Основні методи проведення реакції преципітації: реакція кільцепреципітації та реакція преципітації в агарі (гелі).

Увага! Усі компоненти, що беруть участь у реакції преципітації, повинні бути прозорими.

Реакція кільцепреципітації. До преципітаційної пробірки за допомогою пастерівської піпетки вносять 0,2-0,3 мл (5-6 крапель) сироватки (сироватка не повинна потрапляти на стінки пробірки). На сироватку обережно нашаровують антиген у такому ж обсязі, наливаючи його тонкою пастерівською піпеткою по стінці пробірки. Пробірку при цьому тримають у похилому положенні. При правильному нашаруванні між сироваткою та антигеном має вийти чітка межа. Обережно, щоб не перемішати рідини, ставлять пробірку в штатив. При позитивному результатіреакції на межі антигену та антитіла утворюється каламутне "кільце" - преципітат (див. рис. 48).

Реакцію супроводжують поряд контролів (табл. 18). Дуже важливою є послідовність внесення в пробірку інгредієнтів реакції. Не можна нашарувати сироватку на антиген (у контролі - на ізотонічний розчин), оскільки відносна щільність сироватки більше, вона опуститься на дно пробірки, і межа між рідинами не виявиться.

Таблиця 18. Схема постановки реакції кільцепреципітації

Примітка. + наявність "кільця"; - Відсутність "кільця".

Облік результатів проводять через 5-30 хв, у деяких випадках через годину, як завжди, починаючи з контролів. "Кільце" у 2-й пробірці свідчить про здатність імунної сироватки вступати в специфічну реакцію з відповідним антигеном. У 3-5 пробірках "кілець" не повинно бути - там немає відповідних один одному антитіл і антигенів. "Кільце" в 1-й пробірці - позитивний результат реакції - говорить про те, що випробуваний антиген відповідає взятій імунній сироватці, відсутність "кільця" ("кільце" тільки у 2-й пробірці) свідчить про їх невідповідність - негативний результат реакції.

Реакція преципітації в агарі (гелі). Особливість реакції в тому, що взаємодія антигену та антитіла відбувається в щільному середовищі, тобто в гелі. Преципітат, що утворюється, дає в товщі середовища каламутну смугу. Відсутність лінії свідчить про невідповідність компонентів реакції. Цю реакцію широко застосовують при медико-біологічних дослідженнях, зокрема щодо токсинообразования у збудника дифтерії.

Контрольні питання

1. У чому основна відмінність між реакцією аглютинації та преципітації?

2. Чому не можна застосовувати каламутні інгредієнти у реакції преципітації?

Завдання

1. Поставте реакцію кільцепреципітації та замалюйте результат.

2. Вивчіть характер взаємодії антигену з антитілом у реакції преципітації в агарі, замалюйте результат (чашку отримайте у викладача).

Реакція лізису (імунний цитоліз)

Імунний лізис – це розчинення клітин під впливом антитіл за обов'язкової участі комплементу. Для реакції необхідні:

1. Антиген – мікроби, еритроцити або інші клітини.

2. Антитіло (лізин) – імунна сироватка, рідше сироватка хворого. Бактеріолітична сироватка містить антитіла, що беруть участь у лізисі бактерій; гемолітична – гемолізини, що сприяють лізису еритроцитів; для лізису спірохет потрібні спірохетолізини, клітин – ітолізини тощо.

3. Комплемент. Найбільше комплементу у сироватці морських свинок. Цю сироватку (суміш від кількох тварин) зазвичай використовують як комплемент. Свіжий (нативний) комплемент нестійкий і легко руйнується при нагріванні, струшуванні, зберіганні, тому користуватися ним можна не більше двох днів після отримання. Для консервації комплементу до нього додають 2% борної кислотита 3% сульфату натрію. Такий комплемент можна зберігати при 4 ° С до двох тижнів. Найчастіше застосовують сухий комплемент. Перед вживанням розчиняють в ізотонічному розчині до початкового об'єму (вказаний на етикетці).

4. Ізотонічний розчин.

Реакція гемолізу(Табл. 19). Для реакції необхідні:

1. Антиген - 3% завись відмитих еритроцитів барана з розрахунку 0,3 мл осаду еритроцитів та 9,7 мл ізотонічного розчину.

2. Антитіло – гемолітична сироватка (гемолізин) проти еритроцитів барана; зазвичай готують на виробництві, ліофілізують і на етикетці вказують титр.

Титр гемолізину - найбільше розведення сироватки, при якому відбувається повний гемоліз 3% суспензії еритроцитів у присутності комплементу. Для реакції гемолізу гемолізин беруть у потрійному титрі, тобто розводять у 3 рази менше, ніж до титру. Наприклад, при титрі сироватки 1:1200, розводять сироватку 1:400 (0,1 мл сироватки * і 39,9 мл ізотонічного розчину). Надлишок гемолізину необхідний, оскільки його можуть адсорбувати інші компоненти реакції.

* (Менше 0,1 мл сироватки брати не слід - страждає на точність вимірювання.)

3. Комплемент розводять 1:10 (0,2 мл комплементу та 1,8 мл ізотонічного розчину).

4. Ізотонічний розчин.

Таблиця 19. Схема реакції гемолізу

Облік результатів. При правильно поставленій реакції в 1 пробірці відбудеться гемоліз - вміст її стане прозорим. У контролю рідина залишається каламутною: у 2-й пробірці для наступу гемолізу немає комплементу, в 3-й - немає гемолізину, в 4-й - немає ні гемолізину, ні комплементу, в 5-й - антиген не відповідає антитілу,

У разі потреби гемолітичну сироватку титрують за наступною схемою (табл. 20).

Перед титруванням готують вихідне розведення сироватки 1:100 (0,1 мл сироватки та 9,9 мл ізотонічного розчину), з якого роблять необхідні розведення, наприклад:

З цих розведень вносять по 0,5 мл сироватки пробірки досвіду титрування, як показано в табл. 20.

Таблиця 20. Схема титрування гемолітичної сироватки (гемолізину)

У прикладі, наведеному у табл. 20 титр гемолітичної сироватки дорівнює 1:1200.

При використанні свіжої гемолітичної сироватки її необхідно інактивувати, щоб зруйнувати комплемент, що є в ній. Для цього її прогрівають 30 хв при 56° на водяній бані або в інактиваторі з терморегулятором. Останній спосіб кращий: він унеможливлює перегрівання сироватки, тобто її денатурації. Денатуровані сироватки непридатні до досвіду.

Реакція бактеріолізу. У цій реакції комплемент лізує бактерії у присутності відповідної (гомологічної) сироватки. Схема реакції важливо схожа зі схемою реакції гемолізу. Відмінність полягає в тому, що після двогодинної інкубації з усіх пробірок роблять висів на чашки Петрі з середовищем, сприятливим для взятого в досвід мікроорганізму, щоб дізнатися, чи він лізований. При правильно поставленому досвіді в посівах з 2-5 пробірок (контролі) має бути рясне зростання. Відсутність зростання або слабке зростання у посіві з 1-ї пробірки (досвід) говорить про загибель мікробів, тобто про те, що вони гомологічні антитілу.

Увага! Реакцію бактеріолізу слід проводити в асептичних умовах.

Контрольні питання

1. Що станеться з еритроцитами, якщо замість ізотонічного розчину натрію хлориду застосувати дистильовану воду? Що є основою цього феномена?

2. Яка реакція відбудеться при взаємодії еритроцитів із гомологічною імунною сироваткою без комплементу?

Завдання

Поставте реакцію гемолізу. Зафіксуйте та замалюйте результат.

Подібна інформація.

Реакція непрямої гемаглютинації (РІГА).

РІГА застосовують у двох варіантах: з відомими АГ для виявлення АТ з відомими АТ для виявлення АГ. Ця реакція специфічна і застосовують її для діагностики захворювань, викликаних бактеріями та рикетсіями. Для проведення РІГА використовують еритроцитарні діагностикуми, приготовані шляхом адсорбції на еритроцитах артеріальної гіпертензії або АТ – залежно від мети дослідження (рис. 10.3). У позитивних випадках рівень аглютинації еритроцитів відзначають плюсами. Чотирьма плюсами оцінюють реакцію, що має вигляд тонкої плівки з еритроцитів, що склеюються (парасолька), що покриває дно пробірки; Наявність плівки з фестончастими мереживними краями позначають двома плюсами. За титр приймають граничне розведення досліджуваного матеріалу, що викликало аглютинацію еритроцитів на два плюси.

Мал. 10.3.

1 - еритроцити, 2 - АГ еритроциту, 3 - кон'югований АГ, 4-АТ

РДА та реакція гальмування гемаглютинації (РТГА).

Як зазначалося, основу РГА лежить здатність еритроцитів склеюватися при адсорбції ними певних АГ. Як досліджуваний матеріал при гемаглютинації використовують алантоїсну, амніотичну рідину, суспензію хоріон-алантоїсних оболонок курячих ембріонів, суспензії та екстракти з культур або органів тварин, заражених вірусами, нативний інфекційний матеріал. РДА не є серологічною реакцією, оскільки відбувається без участі імунної сироватки та використовується для вибору робочого розведення АГ для постановки РТГА або наявності АГ (вірусу) у досліджуваному матеріалі (наприклад, при грипі). У реакції використовуються еритроцити тварин, птахів, людини з І (0) групою крові. Для постановки орієнтовної РДА на предметне скло наносять краплю 5% суспензії еритроцитів і краплю випробуваного матеріалу, ретельно змішують. При позитивному результаті через 1-2 хв макроскопічно спостерігають появу пластівцеподібної аглютинації еритроцитів. Для постановки РДА у розгорнутому ряду в лунках полістиролових планшетів готують дворазово зростаючі розведення досліджуваного матеріалу на фізіологічному розчиніобсягом 0,5 мл. У всі пробірки вносять по 0,5 мл 0,25-1% суспензії еритроцитів. Результати враховують після повного осідання еритроцитів у контролі (еритроцити + фізіологічний розчин). Реакцію враховують характером осаду еритроцитів. У позитивних випадках рівень аглютинації відзначають плюсами. Чотирьома плюсами оцінюють реакцію, що має вигляд тонкої плівки з склеєних еритроцитів, окулярів аглютинованих еритроцитів, відповідає одному плюсу. Різко окреслений осад еритроцитів, що не відрізняється від контролю, показує відсутність аглютинації. За титр приймають граничне розведення досліджуваного матеріалу, що спричинило аглютинацію еритроцитів на два плюси. За позитивного результату РГА дослідження продовжують, визначаючи тип виділеного вірусу за допомогою РТ ГА типоспецифічними сироватками. РТГА заснована на властивості антисироватки пригнічувати вірусну гемаглютинацію, так як нейтралізований специфічними АТ вірус втрачає здатність аглютинувати еритроцити. При орієнтовному типуванні вірусів використовують крапельний метод на склі. Для остаточного встановлення типової приналежності виділеного вірусу та титрування АТ у сироватках ставлять розгорнуту РТГА у пробірках чи лунках. З цією метою готують дворазові розведення сироваток на фізіологічному розчині та розливають по 0,25 мл. До розведень сироватки додають по одній краплі матеріалу, що містить вірус, і по одній краплі 1% суспензії еритроцитів. При використанні РТГА для визначення типу вірусу використовують типоспецифічні сироватки, що додають до рівного обсягу робочого розведення АГ. Типову належність виділеного вірусу встановлюють за специфічною імунною сироваткою, що показала найвищий титр АТ до цього вірусу. РДА та РТГА широко застосовуються для діагностики вірусних інфекцій (кліщового енцефаліту, грипу та ін) з метою виявлення специфічних АТ та для ідентифікації багатьох вірусів за їх АГ.

Реакція непрямої чи пасивної гемаглютинації (РПГА)

Ця реакція щодо чутливості перевищує реакцію аглютинаціїта її використовують при діагностиці інфекцій, викликаних бактеріями, рикетсіями, найпростішими та іншими мікроорганізмами.

РПГА дозволяє виявити невелику концентрацію антитіл.

У цій реакції беруть участь таннізовані баранячі еритроцити або еритроцити людини з кров'ю I групи, сенсибілізовані антигенами або антитілами.

Якщо в сироватці, що досліджується, визначаються антитіла, то використовуються еритроцити, сенсибілізовані антигенами (еритроцитарний діагностикум).

У деяких випадках, при необхідності визначення різних антигенів у досліджуваному матеріалі використовують еритроцити, сенсибілізовані імунними глобулінами.

Результати РПГА враховують характером осаду еритроцитів.

Позитивним вважають результат реакції, у якому еритроцити поступово покривають все дно пробірки (перевернутий парасольку).

При негативної реакції еритроцити як маленького диска (гудзик) розташовуються у центрі дна пробірки.

Реакція аглютинації (РА)

Завдяки своїй специфічності, простоті постановки та демонстративності, реакція аглютинації набула широкого поширення в мікробіологічній практиці для діагностики багатьох інфекційних захворювань: черевного тифу та паратифів (реакція Відаля), висипного тифу (реакція Вейгля) та ін.

Реакція аглютинації заснована на специфічності взаємодії антитіл (аглютинінів) з цілими мікробними або іншими клітинами (аглютиногенами). Внаслідок такої взаємодії утворюються частинки - агломерати, що випадають в осад (аглютинат).

У реакції аглютинації можуть брати участь як живі, так і вбиті бактерії, спірохети, гриби, найпростіші, рикетсії, а також еритроцити та інші клітини.

Реакція протікає дві фази: перша (невидима) - специфічна, з'єднання антигену і антитіл, друга (видима) - неспецифічна, склеювання антигенів, тобто. утворення аглютинату.

Аглютинат утворюється при з'єднанні одного активного центру двовалентного антитіла з групою детермінантної антигену.

Реакція аглютинації, як будь-яка серологічна реакція, протікає у присутності електролітів.

Зовнішній прояв позитивної реакції аглютинації має двоякий характер. У безжгутикових мікробів, що мають лише соматичний О-антиген, відбувається склеювання безпосередньо самих мікробних клітин. Така аглютинація називається дрібнозернистою. Він відбувається протягом 18 – 22 годин.

У джгутикових мікробів є два антигени - соматичний О-антиген і джгутиковий Н-антиген. Якщо клітини склеюються джгутиками, утворюються великі пухкі пластівці і така реакція аглютинації називається крупнозернистою. Вона настає протягом 2 – 4 годин.

Реакцію аглютинації можна ставити як з метою якісного та кількісного визначення специфічних антитіл у сироватці крові хворого, так і з метою визначення видової приналежності виділеного збудника. гемаглютинація мікробіологічний інфекційний

Реакцію аглютинації можна ставити як у розгорнутому варіанті, що дозволяє працювати з сироваткою, розведеної до діагностичного титру, так і у варіанті постановки орієнтовної реакції, що дозволяє в принципі виявити специфічні антитіла або визначити видову приналежність збудника.

Реакція аглютинації – РА(Від лат. agglutinatio- склеювання) - проста постановка реакція, при якій відбувається зв'язування антитілами корпускулярних антигенів (бактерій, еритроцитів або інших клітин, нерозчинних частинок з адсорбованими на них антигенами, а також макромолекулярних агрегатів). Вона протікає за наявності електролітів, наприклад, при додаванні ізотонічного розчину натрію хлориду.

Застосовуються різні варіанти реакції аглютинації: розгорнута, орієнтовна, непряма та ін. Реакція аглютинації проявляється утворенням пластівців або осаду

РА використовують для:

визначення антитіл у сироватці крові хворих, наприклад, при бруцельозі (реакції Райта, Хеддельсона), черевному тифіта паратифах (реакція Відаля) та інших інфекційних хвороб;

визначення збудника, виділеного від хворого;

визначення груп крові з використанням моноклональних антитіл проти ало-антигенів еритроцитів.

Для визначення у хворого антитіл ставлятьрозгорнуту реакцію аглютинації:до розведення сироватки крові хворого додають діагностикум(завись вбитих мікробів,) і за кілька годин інкубації при 37 °З відзначають найбільше розведення сироватки (титр сироватки), у якому відбулася аглютинація, т. е. утворився осад.

Характер і швидкість аглютинації залежить від виду антигену і антитіл. Прикладом є особливості взаємодії діагностикумів (О та Я-антигенів) зі специфічними антитілами. Реакція аглютинації з О-діагностикумом(бактерії, вбиті нагріванням, що зберегли термостабільний О-антиген)відбувається у вигляді дрібнозернистої аглютинації. Реакція аглютинації з Н-діагностикумом (бактерії, вбиті формаліном, що зберегли термолабільний джгутиковий Н-антиген) - великобавовняна і протікає швидше.

Якщо потрібно визначити збудник, виділений від хворого, ставлять орієнтовну реакцію аглютинації,застосовуючи діагностичні антитіла (аглютинуючу сироватку), тобто проводять серотипування збудника. Орієнтовну реакціюпроводять на предметному склі. До краплі діагностичної аглютинуючої сироватки у розведенні 1:10 або 1:20 додають чисту культуру збудника, виділеного від хворого. Поруч ставлять контроль: замість сироватки наносять краплю розчину хлориду натрію. При появі в краплі із сироваткою та мікробами пластівеподібного осаду ставлять розгорнуту реакцію аглютинаціїв пробірках з розведеннями, що збільшуються, агглютинирующей сироватки, до яких додають по 2-3 краплі суспензії збудника. Аглютинацію враховують за кількістю осаду та ступенем просвітлення рідини. Реакцію вважають позитивною, якщо аглютинація відзначається у розведенні, близькому до титру діагностичної сироватки. Одночасно враховують контролі: сироватка, розведена ізотонічним розчином хлориду натрію, повинна бути прозорою, завись мікробів в тому ж розчині - рівномірно каламутною, без осаду.

Різні споріднені бактерії можуть аглютинуватися однією і тією ж діагностичною аглютинуючою сироваткою, що ускладнює їх ідентифікацію. Тому користуються адсорбованими аглютинуючими сироватками,з яких видалені перехресно реагують антитіла шляхом адсорбції їх родинними бактеріями. У таких сироватках зберігаються антитіла, специфічні лише до цієї бактерії. Отримання таким:^особом монорецепторних діагностичних аглютинуючих сироваток було запропоновано А. Кастеляні (1902).

Реакція непрямої (пасивної) гемаглютинації(РНГА, РПГА) заснована на використанні еритроцитів з адсорбованими на їх поверхні антигенами або антитілами, взаємодія яких з відповідними антитілами або антигенами сироватки крові бальних викликає склеювання та випадання еритроцитів на дно пробірки або комірки ввигляді фестончастого осаду (рис. 13.2). При негативній реакції еритроцити осідають у вигляді «гудзика». Зазвичай у РНГА виявляють антитіла за допомогою антигенного еритроцитарного діагностикуму, який є еритроцитами з адсорбованими. наних антигенами. Іноді застосовують анти--ельні еритроцитарні діагностики, на яких адсорбовані антитіла. Наприклад, можна виявити ботулінічний токсин, додаючи до нього еритроцитарний антильний ботулінічний діагностикум (таку реакцію називають реакцією зворотної непрямої гемаглютинації- РОНГА). РНГА застосовують для діагностики інфекційних хвороб, визначення гонадотропного гормону всечі при встановленні вагітності, для виявлення підвищеної чутливостідо лікарським препаратам, гормонів та в деяких інших випадках.

РЕАКЦІЯ КУМБСУ

(Coombs test) – метод визначення резус-антитіл на поверхні еритроцитів, які викликають осадження глобулінів у сироватці крові. Цей тест використовується для діагностики гемолітичної анеміїу немовлят з резус-несумісністю, у яких спостерігається руйнування еритроцитів.

Реакція коаглютинації. Клітини збудника визначають за допомогою стафілококів, попередньо оброблених імунною діагностичною сироваткою. Стафілококи, що містять білок А,який має спорідненість з Fc-фрагментом імуноглобулінів, неспецифічно адсорбують антимікробні антитіла, які потім взаємодіють активними центрами з відповідними мікробами, виділеними від хворих. В результаті коаглютинації утворюються пластівці, що складаються зі стафілококів, антитіл діагностичної сироватки та обумовленого мікроба.

Реакція гальмування гемаглютинації(РТГА) заснована на блокаді, придушенні антигенів вірусів антитілами імунної сироватки, внаслідок чого віруси втрачають властивість аглютинувати еритроцити (рис. 13.3). РТГА застосовують для діагностики багатьох вірусних хвороб, збудники яких (віруси грипу, кору, краснухи, кліщового енцефаліту та ін) можуть аглютинувати еритроцити різних тварин.

1. В Індію прибула група лікарів по лінії ВООЗ для виявлення хворих на поліомієліт та надання допомоги у проведенні поголовної вакцинації проти поліомієліту. В одному з обстежених сіл до лікарів принесли із багатодітної родини хлопчика 6 років, який захворів 5 днів тому. Раптом підвищилася температура, сильно захворіла голова, було повторне блювання, біль у руках та ногах. Під час огляду: висока температура, різка слабкість, менінгіальні симптоми, правій нозізнижений м'язовий тонус, різко ослаблені сухожильні рефлекси, стопа звисає. При пункції спинномозкового каналу цереброспінальна рідина випливала під підвищеним тиском, збільшено кількість лімфоцитів, бактерії не виділено Поставлено попередній діагноз «паралітична форма поліомієліту». Яким шляхом міг заразитись хлопчик? Як проводиться специфічна активна профілактика поліомієліту? Чи існує небезпека зараження інших дітей цієї сім'ї, що потрібно зробити?

Відповідь:Хлопчик міг заразитися фекально-оральним шляхом через їжу, воду, а також повітряно-краплинним шляхом. Основним заходом профілактики поліомієліту є імунізація живою культуральною вакциною з 3-х серотипів штамів Себіна. щеплення від поліомієлітудля перорального введення виробництва інституту поліомієліту та вірусних енцефалітів ім. М.П. Чумакова. Щеплення є тривалентним препаратом з атенуйованих штамів Себіна вірусу поліомієліту типів 1, 2, 3, отриманих на первинній культурі клітин нирок африканських зелених мавп. . Плановим щепленнямвід поліомієліту підлягають діти віком від 3 місяців до 6 років. Щеплення оральною поліомієлітною вакциною проводяться по 2 або 4 краплі вакцини внутрішньо триразово в 3, 4, 5 і 6 місяців з триразовою ревакцинацією в 18, 20 міс і 14 років. Хворого хлопчика необхідно помістити в стаціонар, а решті дітей цієї сім'ї необхідно провести вакцинацію живою поліомієлітною вакциною.

1. Склад та застосування вакцини грипозної тривалентної полімерно-субодиничної рідкої (гриппол)

Це молекулярна вакцина. склад: поверхневий АГ вірусу грипу трьох підтипів (А/H1N1, A/H3N2, B). Застосування: для профілактики грипу

Екзаменаційний квиток №23