Ang indirect o passive hemagglutination test (IRHA o RPHA) ay mas sensitibo at partikular kaysa sa agglutination test. Ang reaksyong ito ay ginagamit din sa dalawang direksyon.

1) Upang makita ang mga antibodies sa serum ng dugo ng pasyente, ginagamit ang mga diagnostic ng erythrocyte, kung saan ang antigen ay na-adsorbed sa ibabaw ng mga erythrocyte na ginagamot ng tannin. Kaugnay ng reaksyong ito, mas madalas na ginagamit ang terminong RPHA.

Ang test serum ay diluted sa mga balon ng mga plastic plate at idinagdag ang erythrocyte diagnosticum. Kung positibo ang reaksyon, lumilitaw ang isang manipis na pelikula sa kahabaan ng mga dingding ng butas sa anyo ng isang "payong na puntas"; negatibong reaksyon- isang siksik na sediment ng mga pulang selula ng dugo sa anyo ng isang "button".

2) Upang makita ang mga toxin at bacterial antigens sa test material, ginagamit ang antibody erythrocyte diagnostics, na nakuha sa pamamagitan ng adsorption ng antibodies sa erythrocytes. Kaugnay ng reaksyong ito, mas madalas na ginagamit ang terminong RNGA. Halimbawa, sa tulong ng mga diagnostic ng antibody, ang salot na bacillus antigen, diphtheria exotoxin, at botulinum exotoxin ay nakita.

Coombs test (aptiglobulin test)

Ang reaksyon ay ginagamit upang makita ang mga hindi kumpletong antibodies, halimbawa, mga antibodies sa Rh factor. Ang test serum ay idinagdag sa Rh + erythrocytes, kung saan ang pagkakaroon ng hindi kumpletong antibodies sa Rh factor ay ipinapalagay. Ang pagkakaroon ng nakakabit sa mga pulang selula ng dugo, ang mga hindi kumpletong antibodies ay hindi nagiging sanhi ng aglutinasyon, dahil mayroon lamang silang isang aktibong sentro. Pagkatapos ay idinagdag ang antiglobulin serum na naglalaman ng mga antibodies sa mga globulin ng tao. Ang pagsasama sa hindi kumpletong antibodies, ang antiglobulin serum ay nagdudulot ng agglutination ng mga pulang selula ng dugo.

Reaksyon ng ulan

Ang kakanyahan ng reaksyon ay ang sedimentation (precipitation) ng antigen sa ilalim ng impluwensya ng mga tiyak na antibodies. Upang makakuha ng isang nakikitang reaksyon, ang pagkakaroon ng isang electrolyte ay kinakailangan. Ang antigen sa reaksyon ng precipitation ay mga molekular na dispersed substance.

Reaksyon ng pag-ulan ng singsing inilagay sa makitid na mga tubo ng ulan. Ang immune serum ay ibinubuhos sa isang test tube, at ang materyal na pansubok ay maingat na nilalagay dito. Kung mayroong isang antigen sa loob nito, isang opaque ring ng precipitate forms sa hangganan ng dalawang likido.

Ang reaksyon ay ginagamit sa forensic na gamot upang matukoy ang mga species ng mga protina sa mga mantsa ng dugo, tabod, atbp.; upang matukoy ang antigen sa diagnosis ng anthrax (reaksyon ng Ascoli), meningitis at iba pang mga impeksiyon; sa sanitary at hygienic na pag-aaral - upang magtatag ng palsipikasyon produktong pagkain. Ang immune precipitating sera ay nakukuha sa pamamagitan ng pagbabakuna sa mga hayop na may kaukulang antigen. Halimbawa, ang human protein precipitating serum ay nakukuha sa pamamagitan ng pagbabakuna sa isang kuneho ng protina ng tao. Ang titer ng precipitating serum ay ang pinakamataas na dilution ng antigen kung saan ito tumutugon. Ang serum ay kadalasang ginagamit na hindi natunaw o sa isang pagbabanto ng 1:5.

Reaksyon ng pag-ulan ng agar gel isinasagawa gamit ang ilang mga pamamaraan. Ito ang double immunodiffusion reaction, radial immunodiffusion reaction, at immunoelectrophoresis reaction.

Dobleng reaksyon ng immunodiffusion(ayon kay Ouchterlony). Natunaw agar gel ibinuhos sa isang Petri dish at pagkatapos tumigas, pinutol ang mga butas dito. Ang antigen ay inilalagay sa ilang mga balon, at ang immune sera ay inilalagay sa iba, na nagkakalat sa agar at bumubuo ng isang namuo sa anyo ng mga puting guhit sa tagpuan.

Radial immunodiffusion reaksyon(ayon kay Mancini). Ang immune serum ay idinagdag sa tinunaw na agar gel at ibinuhos sa isang tasa. Matapos tumigas ang agar, ang mga balon ay pinutol at ang mga antigen ay inilalagay sa mga ito, na, na nagkakalat sa agar, ay bumubuo ng mga hugis-singsing na mga zone ng pag-ulan sa paligid ng mga balon. Kung mas mataas ang konsentrasyon ng antigen, mas malaki ang diameter ng singsing. Ang reaksyon ay ginagamit, halimbawa, upang matukoy ang mga immunoglobulin ng iba't ibang klase sa dugo. Ang mga immunoglobulin ng mga klase na IgG, IgM, IgA ay kumikilos bilang mga antigen sa reaksyong ito, at ang mga antibodies laban sa kanila ay nakapaloob sa tiyak na monoreceptor sera.

Immunoelectrophoresis. Ang electrophoresis ng mga antigen ng protina ay isinasagawa sa isang agar gel. Ang precipitating serum ay ipinakilala sa uka, na tumatakbo parallel sa direksyon ng paggalaw ng mga protina. Ang mga antigen at antibodies ay nagkakalat sa agar at nabubuo ang mga linya ng pag-ulan kung saan sila nagtatagpo.

Mga reaksyon ng immune lysis

Ang isang antigen (erythrocytes o bakterya), na pinagsama sa mga tiyak na antibodies, ay bumubuo ng isang immune complex kung saan ang complement (C1) ay nakakabit, at ang complement ay isinaaktibo sa kahabaan ng klasikal na landas. Ang activated complement lyses red blood cells (hemolysis) o bacteria (bacteriolysis). Ang reaksyon ng bacteriolysis ay ginagamit upang makilala ang Vibrio cholerae.

Reaksyon ng hemolysis. Ang antigen sa reaksyon ay mga erythrocytes, ang mga antibodies (hemolysins) ay nakapaloob sa hemolytic serum. Ang mga hemolysin ay nakakabit sa mga pulang selula ng dugo, at ang pandagdag ay isinaaktibo, na nagli-lyses ng mga pulang selula ng dugo. Ang maulap na suspensyon ng mga pulang selula ng dugo ay nagiging isang transparent na maliwanag na pulang likido - "lacquer blood". Dahil ang reaksyon ng hemolysis ay nangyayari lamang sa pagkakaroon ng pandagdag, ginagamit ito bilang isang tagapagpahiwatig para sa pagtuklas ng pandagdag.

Lokal na hemolysis reaksyon sa gel(Erne reaction) - isang variant ng hemolysis reaction. Nagsisilbi upang matukoy ang bilang ng mga antibody-forming cells (AFC) sa spleen at lymph nodes.

Ang natunaw na agar gel ay hinaluan ng isang suspensyon ng mga spleen cells at red blood cells, at pagkatapos na ang agar ay tumigas, ang pandagdag ay idinagdag. Nabubuo ang isang hemolysis zone sa paligid ng bawat cell na gumagawa ng hemolysin. Ang bilang ng mga selulang gumagawa ng hemolysin ay tinutukoy ng bilang ng mga naturang zone.

Ang indirect (passive) hemagglutination reaction (IRHA) ay batay sa katotohanan na ang mga pulang selula ng dugo, kung ang isang natutunaw na antigen ay na-adsorbed sa kanilang ibabaw, ay nakakakuha ng kakayahang mag-aglutinate kapag nakikipag-ugnayan sa mga antibodies sa adsorbed antigen. Ang diagram ng RNGA ay ipinapakita sa Fig. 34. Ang RNGA ay malawakang ginagamit sa pagsusuri ng ilang mga impeksiyon.

kanin. 34. Scheme ng passive hemagglutination reaction (RPHA). A - pagkuha ng erythrocyte diagnosticum: B - RPGA: 1 - erythrocyte: 2 - antigen na pinag-aaralan; 3 - erythrocyte diagnosticum; 4 - antibody sa antigen na pinag-aaralan: 5 - agglutinate

Pag-set up ng isang reaksyon. Ang test serum ay pinainit sa loob ng 30 minuto sa 56° C, diluted na sunud-sunod sa isang ratio na 1:10 - 1:1280 at ibinuhos sa 0.25 ml sa mga test tube o balon, kung saan 2 patak ng erythrocyte diagnosticum (erythrocytes na may antigen adsorbed sa kanila. ) ay pagkatapos ay idinagdag.

Mga kontrol: isang suspensyon ng erythrocyte diagnosticum na may kilalang immune serum; suspensyon ng diagnosticum na may normal na suwero; isang suspensyon ng mga normal na pulang selula ng dugo na may test serum. Sa unang kontrol, dapat mangyari ang agglutination, sa pangalawa at pangatlo hindi ito dapat mangyari.

Gamit ang RIGA, maaari mong makita ang isang hindi kilalang antigen kung ang mga kilalang antibodies ay na-adsorbed sa mga pulang selula ng dugo.

Ang reaksyon ng hemagglutination ay maaaring isagawa sa dami ng 0.025 ml (micromethod) gamit ang Takachi microtitrator.

Kontrolin ang mga tanong

1. Ano ang ipinahihiwatig ng isang positibong resulta ng pagsusuri sa X-ray sa pagitan ng mga pulang selula ng dugo at ng materyal na sinusuri para sa pagkakaroon ng virus?

2. Magaganap ba ang agglutination ng mga pulang selula ng dugo kung ang isang virus at ang kaukulang serum nito ay idinagdag sa kanila? Ano ang pangalan ng reaksyon na nagpapakita ng hindi pangkaraniwang bagay na ito?

Mag-ehersisyo

Isaalang-alang at irehistro ang resulta ng RIGA.

Reaksyon ng ulan

Sa reaksyon ng precipitation, ang isang tiyak na immune complex ay namuo, na binubuo ng isang natutunaw na antigen (lysate, extract, hapten) at isang tiyak na antibody sa pagkakaroon ng mga electrolytes.

Ang maulap na singsing o precipitate na nabuo bilang resulta ng reaksyong ito ay tinatawag na precipitate. Ang reaksyong ito ay higit na naiiba sa reaksyon ng aglutinasyon sa laki ng mga partikulo ng antigen.

Ang reaksyon ng pag-ulan ay karaniwang ginagamit upang matukoy ang antigen sa pagsusuri ng isang bilang ng mga impeksiyon ( anthrax, meningitis, atbp.); sa forensic medicine - upang matukoy ang mga species ng dugo, tamud, atbp.; sa sanitary at hygienic studies - kapag nagtatatag ng falsification ng mga produkto; sa tulong nito, natutukoy ang phylogenetic na relasyon ng mga hayop at halaman. Para sa reaksyon na kailangan mo:

1. Antibodies (precipitin) - immune serum na may mataas na titer ng antibodies (hindi mas mababa sa 1:100,000). Ang titer ng precipitating serum ay tinutukoy ng pinakamataas na pagbabanto ng antigen kung saan ito tumutugon. Ang serum ay kadalasang ginagamit na undiluted o sa isang dilution na 1:5 - 1:10.

2. Antigen - dissolved substances ng protina o lipoid polysaccharide nature (full antigens at haptens).

3. Isotonic solution.

Ang mga pangunahing pamamaraan para sa pagsasagawa ng reaksyon ng pag-ulan ay: reaksyon ng pag-ulan ng singsing at reaksyon ng pag-ulan sa agar (gel).

Pansin! Ang lahat ng mga sangkap na kasangkot sa reaksyon ng pag-ulan ay dapat na ganap na transparent.

Reaksyon ng pag-ulan ng singsing. Gamit ang isang Pasteur pipette, magdagdag ng 0.2-0.3 ml (5-6 patak) ng serum sa precipitation tube (hindi dapat makuha ang serum sa mga dingding ng tubo). Ang antigen sa parehong dami ay maingat na nilalagay sa serum, na ibinubuhos ito ng manipis na Pasteur pipette sa dingding ng test tube. Ang test tube ay pinananatili sa isang hilig na posisyon. Kapag maayos na naka-layer, dapat mayroong malinaw na hangganan sa pagitan ng serum at ng antigen. Maingat, upang hindi paghaluin ang likido, ilagay ang test tube sa isang stand. Sa positibong resulta reaksyon, isang maulap na "singsing" ay nabuo sa hangganan ng antigen at antibody - isang precipitate (tingnan ang Fig. 48).

Ang reaksyon ay sinamahan ng isang bilang ng mga kontrol (Talahanayan 18). Ang pagkakasunud-sunod ng pagdaragdag ng mga sangkap ng reaksyon sa test tube ay napakahalaga. Hindi mo maaaring i-layer ang serum sa antigen (sa control - sa isang isotonic solution), dahil mas malaki ang relative density ng serum, lulubog ito sa ilalim ng test tube, at ang hangganan sa pagitan ng mga likido ay hindi mabubunyag.

Talahanayan 18. Scheme para sa pag-set up ng ring precipitation reaction

Tandaan. + pagkakaroon ng isang "singsing"; - kawalan ng "singsing".

Ang mga resulta ay naitala pagkatapos ng 5-30 minuto, sa ilang mga kaso pagkatapos ng isang oras, gaya ng nakasanayan na nagsisimula sa mga kontrol. Ang "singsing" sa 2nd test tube ay nagpapahiwatig ng kakayahan ng immune serum na pumasok sa isang partikular na reaksyon na may kaukulang antigen. Dapat ay walang "singsing" sa 3-5 test tubes - walang mga antibodies at antigens na naaayon sa bawat isa. Ang isang "singsing" sa 1st tube - isang positibong resulta ng reaksyon - ay nagpapahiwatig na ang test antigen ay tumutugma sa kinuha na immune serum, ang kawalan ng isang "singsing" (isang "singsing" lamang sa 2nd tube) ay nagpapahiwatig ng kanilang hindi pagkakapare-pareho - isang negatibo resulta ng reaksyon.

Reaksyon ng pag-ulan sa agar (gel). Ang kakaiba ng reaksyon ay ang pakikipag-ugnayan ng antigen at antibody ay nangyayari sa isang siksik na daluyan, ibig sabihin, sa isang gel. Ang resultang precipitate ay nagbibigay ng malabo na guhit sa kapal ng daluyan. Ang kawalan ng banda ay nagpapahiwatig ng pagkakaiba sa pagitan ng mga bahagi ng reaksyon. Ang reaksyong ito ay malawakang ginagamit sa biomedical na pananaliksik, lalo na sa pag-aaral ng pagbuo ng toxin sa causative agent ng dipterya.

Kontrolin ang mga tanong

1. Ano ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng agglutination at precipitation reactions?

2. Bakit hindi maaaring gamitin ang maulap na sangkap sa reaksyon ng pag-ulan?

Mag-ehersisyo

1. I-set up ang ring precipitation reaction at i-sketch ang resulta.

2. Pag-aralan ang likas na katangian ng pakikipag-ugnayan ng antigen sa antibody sa reaksyon ng precipitation sa agar, i-sketch ang resulta (kumuha ng isang tasa mula sa iyong guro).

Reaksyon ng Lysis (immune cytolysis)

Ang immune lysis ay ang paglusaw ng mga selula sa ilalim ng impluwensya ng mga antibodies na may sapilitan na pakikilahok ng pandagdag. Para sa reaksyon na kailangan mo:

1. Antigen - microbes, pulang selula ng dugo o iba pang mga selula.

2. Antibody (lysine) - immune serum, mas madalas na pasyente serum. Ang bacteriaolytic serum ay naglalaman ng mga antibodies na kasangkot sa lysis ng bakterya; hemolytic - mga hemolysin na nagtataguyod ng lysis ng mga pulang selula ng dugo; para sa lysis ng spirochetes, spirochetolysins ay kinakailangan, mga cell - itolysins, atbp.

3. Komplemento. Karamihan sa mga pandagdag sa serum mga guinea pig. Ang serum na ito (isang halo mula sa ilang mga hayop) ay kadalasang ginagamit bilang pandagdag. Ang sariwang (katutubong) complement ay hindi matatag at madaling masira sa pamamagitan ng pag-init, pag-alog, o pag-iimbak, kaya maaari itong magamit nang hindi hihigit sa dalawang araw pagkatapos matanggap. Upang mapanatili ang pandagdag, 2% ang idinagdag dito boric acid at 3% sodium sulfate. Ang pandagdag na ito ay maaaring maimbak sa 4°C nang hanggang dalawang linggo. Ang dry complement ay kadalasang ginagamit. Bago gamitin, ito ay natunaw sa isang isotonic na solusyon sa orihinal na dami (ipinahiwatig sa label).

4. Isotonic solution.

Reaksyon ng hemolysis(Talahanayan 19). Para sa reaksyon na kailangan mo:

1. Antigen - 3% na suspensyon ng mga hugasan na erythrocytes ng tupa sa rate na 0.3 ml ng erythrocyte sediment at 9.7 ml ng isotonic solution.

2. Antibody - hemolytic serum (hemolysin) laban sa mga erythrocytes ng tupa; karaniwang inihanda sa produksyon, lyophilized at ang titer na nakasaad sa label.

Ang Hemolysin titer ay ang pinakamataas na dilution ng serum kung saan ang kumpletong hemolysis ng isang 3% na suspensyon ng mga pulang selula ng dugo ay nangyayari sa pagkakaroon ng complement. Para sa reaksyon ng hemolysis, ang hemolysin ay kinuha sa triple titer, i.e. diluted 3 beses na mas mababa kaysa bago ang titer. Halimbawa, na may serum titer na 1:1200, ang serum ay natunaw ng 1:400 (0.1 ml ng serum * at 39.9 ml ng isotonic solution). Ang labis na hemolysin ay kinakailangan, dahil ang ilan sa mga ito ay maaaring ma-adsorbed ng iba pang mga bahagi ng reaksyon.

* (Hindi ka dapat kumuha ng mas mababa sa 0.1 ml ng suwero - ang katumpakan ng pagsukat ay magdurusa.)

3. Ang komplemento ay diluted 1:10 (0.2 ml ng complement at 1.8 ml ng isotonic solution).

4. Isotonic solution.

Talahanayan 19. Hemolysis reaction scheme

Accounting para sa mga resulta. Kung ang reaksyon ay natupad nang tama, ang hemolysis ay magaganap sa 1st test tube - ang mga nilalaman nito ay magiging transparent. Sa mga kontrol, ang likido ay nananatiling maulap: sa ika-2 tubo ay walang sapat na pandagdag para sa hemolysis, sa ika-3 tubo ay walang hemolysin, sa ika-4 na tubo ay walang hemolysin o pandagdag, sa ika-5 na tubo ang antigen ay gumagawa hindi tumutugma sa antibody,

Kung kinakailangan, ang hemolytic serum ay titrated ayon sa sumusunod na pamamaraan (Talahanayan 20).

Bago ang titration, maghanda ng paunang serum dilution na 1:100 (0.1 ml ng serum at 9.9 ml ng isotonic solution), kung saan ang mga kinakailangang dilution ay ginawa, halimbawa:

Mula sa mga dilution na ito, magdagdag ng 0.5 ml ng serum sa titration test tubes, tulad ng ipinapakita sa Table. 20.

Talahanayan 20. Titration scheme para sa hemolytic serum (hemolysin)

Sa halimbawang ibinigay sa talahanayan. 20, ang titer ng hemolytic serum ay 1:1200.

Kapag gumagamit ng sariwang hemolytic serum, dapat itong hindi aktibo upang sirain ang pandagdag na nasa loob nito. Upang gawin ito, pinainit ito ng 30 minuto sa 56 ° C sa isang paliguan ng tubig o sa isang inactivator na may termostat. Ang huling paraan ay mas mahusay: inaalis nito ang posibilidad ng sobrang pag-init ng whey, ibig sabihin, ang denaturation nito. Ang denatured sera ay hindi angkop para sa pagsubok.

Reaksyon ng Bacteriolysis. Sa reaksyong ito, umakma ang lyses bacteria sa pagkakaroon ng naaangkop (homologous) serum. Ang scheme ng reaksyon sa panimula ay katulad ng scheme ng reaksyon ng hemolysis. Ang kaibahan ay pagkatapos ng dalawang oras na pagpapapisa ng itlog, ang lahat ng mga test tube ay ibinhi sa mga Petri dish na may medium na paborable para sa microorganism na kinuha sa eksperimento upang malaman kung ito ay lysed. Kung ang eksperimento ay natupad nang tama, ang mga kultura mula sa 2-5 test tubes (mga kontrol) ay dapat magpakita ng masaganang paglaki. Ang kakulangan ng paglaki o mahinang paglaki sa inoculation mula sa 1st test tube (eksperimento) ay nagpapahiwatig ng pagkamatay ng mga microbes, ibig sabihin, na sila ay homologous sa antibody.

Pansin! Ang reaksyon ng bacteriolysis ay dapat isagawa sa ilalim ng mga kondisyong aseptiko.

Kontrolin ang mga tanong

1. Ano ang mangyayari sa mga pulang selula ng dugo kung distilled water ang gagamitin sa halip na isotonic sodium chloride solution? Ano ang batayan ng hindi pangkaraniwang bagay na ito?

2. Anong reaksyon ang magaganap kapag ang mga erythrocytes ay nakikipag-ugnayan sa homologous immune serum sa kawalan ng complement?

Mag-ehersisyo

I-set up ang reaksyon ng hemolysis. Itala at i-sketch ang resulta.

Kaugnay na impormasyon.

Indirect hemagglutination reaction (RIHA).

Ang RIGA ay ginagamit sa dalawang bersyon: na may mga kilalang antibodies upang makita ang mga antibodies na may mga kilalang antibodies upang makita ang mga antibodies. Ang reaksyong ito ay tiyak, at ito ay ginagamit upang masuri ang mga sakit na dulot ng bacteria at rickettsia. Upang maisagawa ang RIGA, ginagamit ang mga diagnostic ng erythrocyte, na inihanda sa pamamagitan ng adsorption ng AG o AT sa mga erythrocytes, depende sa layunin ng pag-aaral (Larawan 10.3). Sa mga positibong kaso, ang antas ng erythrocyte agglutination ay minarkahan ng mga plus. Sinusuri ng apat na plus ang isang reaksyon na may anyo ng isang manipis na pelikula ng malagkit na pulang selula ng dugo (payong) na sumasaklaw sa ilalim ng test tube; ang pagkakaroon ng isang pelikula na may scalloped lace na mga gilid ay ipinahiwatig ng dalawang plus. Ang titer ay itinuturing na pinakamataas na pagbabanto ng materyal na pagsubok na nagdulot ng pagsasama-sama ng mga erythrocytes sa pamamagitan ng dalawang plus.

kanin. 10.3.

1 - pulang selula ng dugo, 2 - erythrocyte AG, 3 - conjugated AG, 4-AT

RHA at hemagglutination inhibition reaction (HAI).

Gaya ng nabanggit na, ang RHA ay nakabatay sa kakayahan ng mga erythrocytes na magkadikit kapag ang ilang antigens ay na-adsorbed sa kanila. Ang allantoic at amniotic fluid, isang suspensyon ng chorion-allantoic membranes ng mga embryo ng manok, mga suspensyon at mga extract mula sa mga kultura o organo ng mga hayop na nahawaan ng mga virus, at ang katutubong nakakahawang materyal ay ginagamit bilang materyal sa pagsubok para sa hemagglutination. Ang RGA ay hindi isang serological na reaksyon, dahil ito ay nangyayari nang walang paglahok ng immune serum at ginagamit upang piliin ang gumaganang pagbabanto ng isang antigen para sa pagtatanghal ng isang RGA o ang pagkakaroon ng isang antigen (virus) sa materyal ng pagsubok (halimbawa, para sa trangkaso. ). Gumagamit ang reaksyon ng mga pulang selula ng dugo mula sa mga hayop, ibon, at tao na may pangkat ng dugo I (0). Upang mag-set up ng tinatayang RGA, ang isang patak ng 5% na suspensyon ng mga erythrocytes at isang patak ng materyal na pansubok ay inilalapat sa isang glass slide at pinaghalo nang lubusan. Kung positibo ang resulta, pagkatapos ng 1-2 minuto ang hitsura ng flocculent agglutination ng mga erythrocytes ay sinusunod sa macroscopically. Upang i-set up ang RGA sa isang nakabukang hilera sa mga balon ng mga polystyrene plate, maghanda ng dobleng pagtaas ng mga dilution ng materyal sa pagsubok bawat solusyon sa asin sa dami ng 0.5 ml. Ang 0.5 ml ng isang 0.25-1% na suspensyon ng mga pulang selula ng dugo ay idinagdag sa lahat ng mga tubo ng pagsubok. Ang mga resulta ay isinasaalang-alang pagkatapos ng kumpletong sedimentation ng mga erythrocytes sa kontrol (mga pulang selula ng dugo + solusyon sa asin). Ang reaksyon ay isinasaalang-alang ng likas na katangian ng erythrocyte sediment. Sa mga positibong kaso, ang antas ng aglutinasyon ay minarkahan ng mga plus. Ang isang reaksyon na mukhang isang manipis na pelikula ng malagkit na mga pulang selula ng dugo na sumasaklaw sa ilalim ng isang test tube (payong) ay tinasa na may apat na plus; isang reaksyon na may mga puwang sa pelikula ay minarkahan ng tatlong plus; ang pagkakaroon ng isang pelikula na may scalloped lacy Ang mga gilid ng malagkit na pulang selula ng dugo ay minarkahan ng dalawang plus; isang flocculent sediment ng mga pulang selula ng dugo na napapalibutan ng isang zone ng agglutinated lumps erythrocytes, ay tumutugma sa isang plus. Ang isang malinaw na tinukoy na erythrocyte sediment, na hindi makilala mula sa kontrol, ay nagpapahiwatig ng kawalan ng agglutination. Ang titer ay itinuturing na pinakamataas na pagbabanto ng materyal na pagsubok na nagdulot ng pagsasama-sama ng mga erythrocytes sa pamamagitan ng dalawang plus. Kung positibo ang resulta ng RGA, ipagpapatuloy ang pag-aaral, na tinutukoy ang uri ng nakahiwalay na virus gamit ang RT GA na may sera na partikular sa uri. Ang RTGA ay batay sa pag-aari ng antiserum upang sugpuin ang viral hemagglutination, dahil ang virus na na-neutralize ng mga partikular na antibodies ay nawawalan ng kakayahang pagsama-samahin ang mga pulang selula ng dugo. Para sa pansamantalang pag-type ng mga virus, ginagamit ang droplet method sa salamin. Upang tiyak na maitatag ang uri ng nakahiwalay na virus at ma-titrate ang mga antibodies sa sera, isang pinalawak na X-ray test ang inilalagay sa mga test tube o mga balon. Para sa layuning ito, ang double dilutions ng sera ay inihanda sa physiological solution at ibinibigay sa 0.25 ml. Sa serum dilutions magdagdag ng isang patak ng materyal na naglalaman ng virus at isang patak ng 1% na suspensyon ng mga pulang selula ng dugo. Kapag gumagamit ng RTGA upang matukoy ang uri ng virus, ginagamit ang sera na partikular sa uri, na idinagdag sa isang pantay na dami ng gumaganang pagbabanto ng AG. Ang uri ng nakahiwalay na virus ay tinutukoy ng partikular na immune serum na nagpakita ng pinakamataas na titer ng antibody sa virus na ito. Ang RGA at RTGA ay malawakang ginagamit para sa mga diagnostic mga impeksyon sa viral (tick-borne encephalitis, influenza, atbp.) upang matukoy ang mga partikular na antibodies at makilala ang maraming mga virus sa pamamagitan ng kanilang mga antibodies.

Hindi direkta o passive hemagglutination reaction (IPHA)

Ang reaksyong ito ay mas sensitibo kaysa sa reaksyon ng aglutinasyon at ginagamit ito sa pagsusuri ng mga impeksyon na dulot ng bacteria, rickettsia, protozoa at iba pang microorganism.

Pinapayagan ka ng RPGA na makita ang isang maliit na konsentrasyon ng mga antibodies.

Ang reaksyong ito ay nagsasangkot ng mga tannis na erythrocyte ng tupa o mga erythrocyte ng tao na may pangkat I na dugo, na sensitized sa mga antigen o antibodies.

Kung ang mga antibodies ay nakita sa test serum, pagkatapos ay ang mga pulang selula ng dugo na sensitized na may mga antigen ay ginagamit (erythrocyte diagnosticum).

Sa ilang mga kaso, kung kinakailangan upang matukoy ang iba't ibang mga antigen sa materyal ng pagsubok, ang mga erythrocytes na sensitized sa immune globulin ay ginagamit.

Ang mga resulta ng RPGA ay isinasaalang-alang ng likas na katangian ng erythrocyte sediment.

Ang resulta ng isang reaksyon ay itinuturing na positibo kapag ang mga pulang selula ng dugo ay pantay na sumasakop sa buong ilalim ng test tube (isang baligtad na payong).

Sa isang negatibong reaksyon, ang mga pulang selula ng dugo sa anyo ng isang maliit na disk (button) ay matatagpuan sa gitna ng ilalim ng test tube.

Agglutination reaction (RA)

Dahil sa pagiging tiyak nito, kadalian ng pagganap at demonstrativeness, ang reaksyon ng agglutination ay naging laganap sa microbiological practice para sa pagsusuri ng maraming Nakakahawang sakit: tipus at paratyphoid fever (Vidal reaction), tipus (Weigl reaction), atbp.

Ang reaksyon ng agglutination ay batay sa pagtitiyak ng pakikipag-ugnayan ng mga antibodies (agglutinins) sa buong microbial o iba pang mga cell (agglutinogens). Bilang resulta ng pakikipag-ugnayan na ito, ang mga particle ay nabuo - mga agglomerates na namuo (agglutinate).

Ang reaksyon ng agglutination ay maaaring kasangkot sa parehong buhay at napatay na bakterya, spirochetes, fungi, protozoa, rickettsia, pati na rin ang mga pulang selula ng dugo at iba pang mga selula.

Ang reaksyon ay nangyayari sa dalawang yugto: ang una (invisible) - tiyak, ang kumbinasyon ng antigen at antibodies, ang pangalawa (nakikita) - nonspecific, gluing ng antigens, i.e. pagbuo ng agglutinate.

Ang isang agglutinate ay nabuo kapag ang isang aktibong sentro ng isang divalent antibody ay pinagsama sa determinant na grupo ng isang antigen.

Ang reaksyon ng agglutination, tulad ng anumang reaksyon ng serological, ay nangyayari sa pagkakaroon ng mga electrolyte.

Sa panlabas, ang pagpapakita ng isang positibong reaksyon ng agglutination ay may dalawang katangian. Sa flagellated microbes na mayroon lamang somatic O-antigen, ang mga microbial cell mismo ay direktang nakadikit. Ang agglutination na ito ay tinatawag na fine-grained. Ito ay nangyayari sa loob ng 18 - 22 na oras.

Ang flagellate microbes ay may dalawang antigens - somatic O-antigen at flagellar H-antigen. Kung ang mga selula ay pinagdikit ng flagella, mabubuo ang malalaki at maluwag na mga natuklap at ang reaksyong ito ng agglutination ay tinatawag na coarse-grained. Ito ay nangyayari sa loob ng 2 - 4 na oras.

Ang reaksyon ng agglutination ay maaaring isagawa kapwa para sa layunin ng qualitative at quantitative na pagpapasiya ng mga tiyak na antibodies sa serum ng dugo ng pasyente, at para sa layunin ng pagtukoy ng mga species ng nakahiwalay na pathogen. hemagglutination microbiological infectious

Ang reaksyon ng agglutination ay maaaring isagawa pareho sa isang pinalawak na bersyon, na nagbibigay-daan sa iyo upang gumana sa serum na diluted sa isang diagnostic titer, at sa isang indicative na bersyon ng reaksyon, na nagbibigay-daan sa iyo, sa prinsipyo, upang makita ang mga tiyak na antibodies o matukoy ang mga species ng pathogen. .

Reaksyon ng aglutinasyon - RA(mula sa lat. agglutinatio- adhesion) ay isang simpleng reaksyon kung saan ang mga antibodies ay nagbubuklod sa mga corpuscular antigens (bacteria, erythrocytes o iba pang mga cell, hindi matutunaw na mga particle na may mga antigen na na-adsorbed sa kanila, pati na rin ang mga macromolecular aggregates). Ito ay nangyayari sa pagkakaroon ng mga electrolyte, halimbawa, kapag ang isotonic sodium chloride solution ay idinagdag.

Ang iba't ibang mga opsyon para sa agglutination reaction ay ginagamit: malawak, indicative, indirect, atbp. Ang agglutination reaction ay ipinapakita sa pamamagitan ng pagbuo ng mga natuklap o sediment

Ginagamit ang RA para sa:

pagpapasiya ng mga antibodies sa serum ng dugo ng mga pasyente, halimbawa, na may brucellosis (mga reaksyon ng Wright, Heddelson), typhoid fever at paratyphoid fever (Vidal reaction) at iba pa Nakakahawang sakit;

pagpapasiya ng pathogen na nakahiwalay sa pasyente;

pagpapasiya ng mga pangkat ng dugo gamit ang monoclonal antibodies laban sa erythrocyte alloantigens.

Upang matukoy ang mga antibodies sa isang pasyente ilagaydetalyadong agglutination reaksyon: idagdag sa mga dilution ng serum ng dugo ng pasyente diagnosticum(suspensyon ng mga napatay na mikrobyo) at pagkatapos ng ilang oras ng pagpapapisa ng itlog sa 37 °C, ang pinakamataas na serum dilution (serum titer) ay nabanggit, kung saan naganap ang agglutination, ibig sabihin, nabuo ang isang precipitate.

Ang kalikasan at bilis ng agglutination ay nakasalalay sa uri ng antigen at antibodies. Ang isang halimbawa ay ang mga kakaibang pakikipag-ugnayan ng diagnosticums (O- at R-antigens) na may mga tiyak na antibodies. Agglutination reaksyon sa O-diagnosticum(bacteria na pinatay ng init, pinapanatili ang init-stable O-antigen) ay nangyayari sa anyo ng fine-grained agglutination. Ang agglutination reaction na may H-diagnosticum (bacteria na pinatay ng formaldehyde, na pinapanatili ang thermolabile flagellar H-antigen) ay magaspang at mas mabilis na nagpapatuloy.

Kung kinakailangan upang matukoy ang pathogen na nakahiwalay sa pasyente, ilagay nagpapahiwatig na reaksyon ng agglutination, gamit ang diagnostic antibodies (agglutinating serum), i.e., ang serotyping ng pathogen ay isinasagawa. Tinatayang reaksyon isinasagawa sa isang glass slide. Ang isang purong kultura ng pathogen na nakahiwalay mula sa pasyente ay idinagdag sa isang patak ng diagnostic agglutinating serum sa isang pagbabanto ng 1:10 o 1:20. Ang isang kontrol ay inilalagay sa malapit: sa halip na serum, isang patak ng sodium chloride solution ang inilapat. Kapag lumitaw ang flocculent sediment sa isang patak na naglalaman ng serum at microbes, a malawak na reaksyon ng agglutination sa mga test tube na may pagtaas ng mga dilution ng agglutinating serum, kung saan idinagdag ang 2-3 patak ng suspensyon ng pathogen. Ang aglutination ay isinasaalang-alang ng dami ng sediment at ang antas ng linaw ng likido. Ang reaksyon ay itinuturing na positibo kung ang agglutination ay sinusunod sa isang pagbabanto na malapit sa titer ng diagnostic serum. Kasabay nito, ang mga kontrol ay isinasaalang-alang: ang serum na diluted na may isotonic sodium chloride solution ay dapat na transparent, ang suspensyon ng microbes sa parehong solusyon ay dapat na pantay na maulap, nang walang sediment.

Ang iba't ibang kaugnay na bakterya ay maaaring pagsama-samahin ng parehong diagnostic agglutinating serum, na nagpapahirap sa kanilang pagkakakilanlan. Samakatuwid ginagamit nila adsorbed agglutinating sera, kung saan ang mga cross-reacting antibodies ay tinanggal sa pamamagitan ng adsorption sa mga kaugnay na bakterya. Ang nasabing sera ay nagpapanatili ng mga antibodies na partikular lamang sa isang partikular na bacterium. Ang paggawa ng espesyal na monoreceptor diagnostic agglutinating sera ay iminungkahi ni A. Castellani (1902).

Hindi direktang (passive) hemagglutination reaksyon(RNGA, RPGA) ay batay sa paggamit ng mga erythrocytes na may mga antigen o antibodies na na-adsorbed sa kanilang ibabaw, ang pakikipag-ugnayan nito sa mga kaukulang antibodies o antigens ng serum ng dugo ay nagiging sanhi ng mga erythrocytes na magkadikit at mahulog sa ilalim ng pagsubok. tubo o cell V sa anyo ng scalloped sediment (Larawan 13.2). Sa kaso ng isang negatibong reaksyon, ang mga pulang selula ng dugo ay tumira ■ sa anyo ng isang "button". Karaniwan, ang mga antibodies ay nakikita sa RNGA gamit ang isang antigenic erythrocyte diagnosticum, na mga erythrocytes na may adsorbed. sa ang mga ito ay may mga antigens. Minsan ginagamit ang mga diagnostic na anti-A erythrocyte, kung saan na-adsorbed ang mga antibodies. Halimbawa, ang botulinum toxin ay maaaring matukoy sa pamamagitan ng pagdaragdag ng erythrocyte antibody botulinum toxin dito (ang reaksyong ito ay tinatawag na baligtarin ang hindi direktang reaksyon ng hemagglutination- RONG). Ginagamit ang RNGA upang masuri ang mga nakakahawang sakit, matukoy gonadotropin hormone V ihi kapag nagtatag ng pagbubuntis, upang makita hypersensitivity Upang mga gamot, hormones at sa ilang iba pang mga kaso.

COMBES REACTION

(Coombs test) - isang paraan para sa pagtukoy ng Rh antibodies sa ibabaw ng mga pulang selula ng dugo, na nagiging sanhi ng pag-ulan ng mga globulin sa serum ng dugo. Ang pagsusulit na ito ay ginagamit para sa diagnosis hemolytic anemia sa mga sanggol na may Rh incompatibility na nakakaranas ng pagkasira ng mga pulang selula ng dugo.

Reaksyon ng coagglutination. Ang mga pathogen cell ay tinutukoy gamit ang staphylococci na paunang ginagamot na may immune diagnostic serum. Staphylococci na naglalaman ng protina A, pagkakaroon ng isang affinity para sa Fc fragment ng immunoglobulins, nonspecifically adsorb antimicrobial antibodies, na pagkatapos ay nakikipag-ugnayan sa mga aktibong sentro na may kaukulang microbes na nakahiwalay mula sa mga pasyente. Bilang resulta ng coagglutination, ang mga natuklap ay nabuo na binubuo ng staphylococci, diagnostic serum antibodies at ang nakitang microbe.

Hemagglutination inhibition reaction(RTGA) ay batay sa blockade, pagsugpo sa mga viral antigen ng immune serum antibodies, bilang resulta kung saan ang mga virus ay nawawalan ng kakayahang pagsama-samahin ang mga pulang selula ng dugo (Larawan 13.3). Ginagamit ang RTGA upang masuri ang maraming mga sakit na viral, ang mga sanhi ng ahente nito (mga virus ng trangkaso, tigdas, rubella, tick-borne encephalitis, atbp.) ay maaaring pagsama-samahin ang mga pulang selula ng dugo ng iba't ibang mga hayop.

1. Isang grupo ng mga doktor mula sa WHO ang dumating sa India upang tukuyin ang mga pasyenteng may polio at tumulong sa pagsasagawa ng unibersal na pagbabakuna laban sa polio. Sa isa sa mga nayon na sinuri, isang 6 na taong gulang na batang lalaki ang dinala sa mga doktor mula sa isang malaking pamilya na nagkasakit 5 araw na ang nakakaraan. Biglang tumaas ang temperatura, nagkaroon ng matinding sakit ng ulo, paulit-ulit na pagsusuka, pananakit ng mga braso at binti. Sa pag-inspeksyon: init, matinding panghihina, sintomas ng meningeal, sa kanang binti nabawasan tono ng kalamnan, ang mga tendon reflexes ay mahinang humina, ang paa ay nakabitin. Sa panahon ng pagbutas ng spinal canal, ang cerebrospinal fluid ay dumaloy sa ilalim altapresyon, ang bilang ng mga lymphocytes ay tumaas, ang bakterya ay hindi nakahiwalay. Ang isang paunang pagsusuri ng "paralytic form ng poliomyelitis" ay ginawa. Paano nahawa ang batang lalaki? Paano isinasagawa ang partikular na aktibong pag-iwas sa polio? May panganib bang makahawa sa ibang mga bata sa pamilyang ito, ano ang dapat gawin?

Sagot: Ang batang lalaki ay maaaring nahawahan sa pamamagitan ng fecal-oral route sa pamamagitan ng pagkain, tubig, at gayundin sa pamamagitan ng airborne droplets. Ang pangunahing hakbang para sa pag-iwas sa polio ay ang pagbabakuna na may live culture vaccine mula sa 3 serotypes ng Sabin strains. Sa Russia ito ay ginagamit pagbabakuna sa polio para sa oral administration na ginawa ng Institute of Poliomyelitis at Viral Encephalitis na pinangalanan. M.P. Chumakova. Ang bakuna ay isang trivalent na paghahanda ng attenuated Sabin strains ng polio virus type 1, 2, 3, na nakuha mula sa isang pangunahing kultura ng African green monkey kidney cells. . Naka-iskedyul na pagbabakuna Ang mga batang may edad na 3 buwan hanggang 6 na taon ay madaling kapitan ng polio. Ang mga pagbabakuna sa oral polio vaccine ay isinasagawa gamit ang 2 o 4 na patak ng bakuna nang pasalita nang tatlong beses sa 3, 4, 5 at 6 na buwan na may tatlong muling pagbabakuna sa 18, 20 buwan at 14 na taon. Ang maysakit na batang lalaki ay dapat na maospital, at lahat ng iba pang mga anak ng pamilyang ito ay dapat mabakunahan ng live na bakunang polio.

1. Komposisyon at paggamit ng trivalent polymer-subunit liquid influenza vaccine (influenza)

Ito ay isang molekular na bakuna. Komposisyon: surface Ag ng influenza virus ng tatlong subtype (A/H1N1, A/H3N2, B). Application: para sa pag-iwas sa trangkaso

Kard ng pagsusulit Blg. 23