Antinukleárny faktor na bunkovej línii HEp-2 (ANF) je test na dôkaz antinukleárnych protilátok nepriamou imunofluorescenciou.

Pri systémovom lupus erythematosus (SLE) a iných systémových reumatických ochoreniach je imunitná odpoveď namierená proti nukleoproteínovým antigénom, t.j. komplexy nukleových kyselín a proteínov. Tieto endogénne nukleoproteínové komplexy sa tvoria počas procesu apoptózy epitelových buniek a pripomínajú cudzie vírusové častice. Urýchlenie procesov apoptózy pod vplyvom ultrafialového žiarenia, vírusové infekcie A lieky, spúšťa autoimunitné reakcie pri SLE. Počas apoptózy hlavné antigény protilátok kondenzujú v apoptotických telách, ktoré sa stávajú cieľom pre autoprotilátky. V súčasnosti je popísaných asi 200 druhov protilátok proti nukleoproteínom a ribonukleovým kyselinám, ktoré sa nazývajú antinukleárne protilátky. Pri autoimunitných ochoreniach nemajú autoprotilátky proti jadrovým antigénom priamy cytotoxický účinok na ľudské bunky, imunitné komplexy sú však schopné spustiť imunologický zápal najmä v miestach, kde sú cievy obzvlášť tenké, vrátane obličiek, kože, centrálneho nervového systému, synoviálnej membrány kĺbov, pleury.

Test antinukleárneho faktora (ANF) je hlavnou metódou detekcie antinukleárnych protilátok, ktorá umožňuje detekciu autoprotilátok proti nukleovým kyselinám (dsDNA, ssDNA, RNA), ribonukleoproteínov, ako aj väčšiny konformačných a nerozpustných antigénov.

Antinukleárne protilátky sa detegujú ich väzbou na intracelulárne antigény kontinuálnej ľudskej epiteliálnej bunkovej línie (HEp-2). Jadro a cytoplazma buniek HEp-2 obsahujú všetky charakteristické antigény Ľudské telo, čo umožňuje odhaliť všetky hlavné antinukleárne protilátky v jednom teste. Metódu nepriamej imunofluorescencie na bunkovej línii HEp2 odporúčajú ako zlatý štandard na detekciu antinukleárnych protilátok poprední európski (EASIgroup2010) a americkí odborníci (ACRANATaskforce2008). Kvôli rôznorodosti antinukleárnych protilátkových antigénov nie všetky z nich môžu byť purifikované alebo syntetizované na použitie v enzýmových imunoanalytických testoch na detekciu antinukleárnych protilátok.

ANF ​​​​pozitivita na bunkovej línii HEp-2 sa pozoruje pri systémovom lupus erythematosus (SLE), systémových reumatických ochoreniach a mnohých autoimunitných ochoreniach, čo z neho robí univerzálny test pri vyšetrovaní pacientov s autoimunitnou patológiou. Pozitívny výsledok ANF ​​​​ sa vyskytuje u viac ako 90 % pacientov s difúzne ochorenia spojivové tkanivo ako je systémový lupus erythematosus a kožné formy tohto ochorenia, sklerodermia a jej odrody, zmiešané ochorenie spojivového tkaniva, Sjögrenov syndróm. Detekcia ANF má veľký význam v diagnostike mladistvých reumatoidná artritída A autoimunitné ochorenia pečeň. Zástupcovia tejto rodiny autoprotilátok možno nájsť v mnohých iných autoimunitných (tyreoiditída, diabetes), infekčných ( vírusová hepatitída), zápalové a onkologické ochorenia. Incidencia ANF dosahuje klinicky 1–3 %. zdravých ľudí a mierne stúpa u osôb nad 65 rokov. Jedinci s vysokými titrami ANF majú zvýšené riziko vzniku autoimunitných ochorení.

Indikácie:

• Systémový lupus erythematosus.
• Subakútny kožný lupus a iné typy kožného lupusu.
• zmiešané ochorenie spojivové tkanivo.
• Sjögrenov syndróm a pridružené ochorenia.
• Difúzna a lokalizovaná sklerodermia, syndróm CREST.
• Zápalové myopatie (polymyozitída a dermatomyozitída).
• Juvenilná chronická artritída.
• autoimunitná hepatitída.
• Primárna biliárna cirhóza a sklerotizujúca cholangitída.
• polyneuropatia a myelitída.

Príprava


Krv sa odporúča darovať ráno, medzi 8. a 12. hodinou. Krv sa odoberá nalačno alebo 4-6 hodín po poslednom jedle. Pitná voda bez plynu a cukru je povolená. V predvečer vyšetrenia sa treba vyhnúť preťaženiu jedlom.

Interpretácia výsledkov
Jednotky merania: titer.

Referenčné hodnoty:<1:160 (отрицательно).

Výsledkom stanovenia ANF je titer, čo je hodnota konečného zriedenia séra, pri ktorej je zachovaná významná fluorescencia jadra. Čím vyšší je menovateľ frakcie, tým väčšie je riedenie séra, tým viac protilátok v sére pacienta. Vysoké titre riedenia séra odrážajú vysokú afinitu a koncentráciu autoprotilátok.

Detekcia vysokých titrov (1/640 a viac) naznačuje vysokú pravdepodobnosť systémového reumatického ochorenia alebo autoimunitného ochorenia pečene a vyžaduje starostlivé klinické, laboratórne a inštrumentálne vyšetrenie. Absencia zvýšených titrov antinukleárneho faktora výrazne znižuje pravdepodobnosť systémových autoimunitných ochorení.

V nízkych titroch (do 1/160) možno antinukleárny faktor pozorovať u 1-2 % zdravých jedincov a príbuzných pacientov so systémovými ochoreniami. Frekvencia pozitívnych titrov v populácii mierne stúpa s vekom. Nízke titre antinukleárnych protilátok sa môžu vyskytnúť pri mnohých autoimunitných, infekčných a onkologických ochoreniach. Neprítomnosť vysokých titrov antinukleárnych protilátok výrazne znižuje pravdepodobnosť systémového reumatického procesu a môže sa použiť skôr na vylúčenie ako potvrdenie diagnózy.

Existuje množstvo chorôb, pri ktorých obranný systém berie bunky vlastného tela ako cudzie, po čom ich začne omylom napádať. Väčšina autoimunitných patológií je chronická a predstavuje vážnu hrozbu pre zdravie. Aby bolo možné identifikovať tieto ochorenia v najskoršom štádiu ich vývoja, lekári predpisujú analýzu ANF. Táto skratka znamená "antinukleárny faktor". Niektoré správy označujú štúdiu ako ANA. Význam znamená „analýza antinukleárnych protilátok“. ANF ​​​​je klinicky významný indikátor, ktorý pomáha lekárovi vytvoriť najefektívnejší liečebný režim a zabrániť rozvoju komplikácií.

Podstata metódy

Biologickým materiálom na výskum je krv. Keď sa do tela dostane akýkoľvek patogénny mikroorganizmus, imunitný systém začne produkovať špecifické protilátky, ktorých úlohou je ničiť cudzie antigény. Podstatou metódy je detekcia a kvantifikácia týchto látok v tekutom spojivovom tkanive.

Lekári hovoria, že krvný test ANF je laboratórny, ktorý má vysoký stupeň informačného obsahu. S jeho pomocou je možné identifikovať akékoľvek autoimunitné patológie aj v počiatočnom štádiu ich vývoja.

Špecifické protilátky sa často zisťujú aj u ľudí trpiacich ťažkou hepatitídou, onkológiou a niektorými infekčnými ochoreniami. Tieto látky možno nájsť aj u zdravých ľudí. Táto situácia si vyžaduje integrovaný prístup na identifikáciu príčiny.

Analýza ANF niekedy zahŕňa hodnotenie kvantitatívneho obsahu imunoglobulínov. Ich prítomnosť môže naznačovať rozvoj kolagenózy a reumatických ochorení.

Indikácie

Je dôležité vedieť, že krvný test ANF je štúdia, ktorá je predpísaná na potvrdenie alebo vylúčenie prítomnosti autoimunitných patológií, ako aj na vyhodnotenie účinnosti liečby.

Lekár môže mať podozrenie na ochorenie podľa nasledujúcich príznakov:

• Dlhotrvajúci stav horúčky bez zjavných príčin.
• Bolesť v kĺboch.
• Zvýšený stupeň únavy.
• Bolesti svalov a kĺbov.
• Kožné prejavy bez zjavných príčin.
• Časté epizódy svalových kŕčov.
• Zvýšená telesná teplota.
• Zníženie telesnej hmotnosti.
• Pravidelné epizódy nevoľnosti.
• Bolesť hlavy.
• Porucha sluchu.
• Hnačka.

Okrem toho je pri podozrení na reumatické ochorenie predpísaná analýza ANF. Štúdia sa uskutočňuje po obdržaní výsledkov laboratórnej diagnostiky, v ktorej sa zvyšujú ukazovatele ESR, CEC a C-reaktívneho proteínu.

Čo ukazuje

ANF-analýza krvi odhaľuje patológie autoimunitnej povahy. Štúdia je informatívna vo vzťahu k nasledujúcim chorobám:

• Systémový lupus erythematosus.
• Akútna diseminovaná encefalomyelitída.
• Sjögrenova choroba.
• Reumatoidná artritída.
• Ohnisková alopécia.
• Addisonova choroba.
• Ankylozujúca spondylitída.
• Antifosfolipidový syndróm.
• Autoimunitná hemolytická anémia.
• bulózny pemfigoid.
• autoimunitná hepatitída.
• celiakia.
• Autoimunitné patológie vnútorného ucha.
• Chagasova choroba.
• Churgov-Straussovej syndróm.
• Chronická obštrukčná choroba pľúc.
• Dermatomyozitída.
• Crohnova choroba.
• Diabetes mellitus typu I.
• Goodpastureov syndróm.
• Hashimotova tyreoiditída.
• Gravesova choroba.
• Guillain-Barrého syndróm.
• Kawasakiho choroba.
• Hnisavá hydradenitída.
• primárna nefropatia.
• Idiopatická trombocytopenická purpura.
• Intersticiálna cystitída.
• Erytematózny lupus.
• Sharpov syndróm.
• Sklerodermia v tvare prstenca.
• Roztrúsená skleróza.
• Narkolepsia.
• Neuromyotónia.
• Pemphigus vulgaris.
• Psoriáza.
• Raynaudov fenomén.
• Vaskulitída.
• Wegenerova granulomatóza.

Toto je neúplný zoznam chorôb. Je dôležité, aby analýza ANF ukázala vývoj autoimunitných patológií v najskoršom štádiu ich priebehu. To umožňuje lekárovi rozhodnúť o taktike liečby av budúcnosti vyhodnotiť jej účinnosť.

Príprava

Odber biomateriálu sa vykonáva v ranných hodinách. Je potrebné darovať krv na prázdny žalúdok. Posledné jedlo sa má užiť najmenej 4 hodiny pred. Zároveň je dovolené piť vodu kedykoľvek a v akomkoľvek množstve. Používanie alkoholu je zakázané.

Odpočinok je zobrazený 1 deň pred štúdiou. Fyzický a psycho-emocionálny stres často vedie k falošnému výsledku. Pol hodiny pred darovaním krvi je zakázané fajčiť.

V čase predpisovania analýzy ANF je potrebné informovať lekára o užívaných liekoch. Je to spôsobené tým, že aktívne zložky niektorých liekov vyvolávajú tvorbu protilátok a môžu tiež spôsobiť lupus vyvolaný liekmi. Falošne negatívne výsledky sú často výsledkom užívania glukokortikosteroidov.

Ak bola pacientovi predpísaná fyzioterapia alebo inštrumentálne vyšetrenia, mali by sa vykonať až po darovaní krvi.

Odber biomateriálov

Odohráva sa ráno. Biologickým materiálom je venózna krv. Jeho vzorkovanie sa vykonáva podľa štandardného algoritmu. Krv sa spravidla odoberá z žily umiestnenej na lakti.

Po získaní tekutého spojivového tkaniva sa z neho izoluje sérum. To je potrebné na analýzu.

Typy štúdií a ich popis

V súčasnosti je možné detegovať protilátky v biomateriáli niekoľkými spôsobmi:

1. Pomocou nepriamej imunofluorescenčnej mikroskopie. Ak sú v krvi prítomné špecifické látky, začnú sa viazať na špecifické jadrové antigény. V laboratóriách sa používajú prvky, ktoré sú schopné žiariť v samostatnom spektre. Potom sa biomateriál starostlivo študuje pod mikroskopom. Choroba môže byť podozrivá podľa typu žiary. Táto metóda je uznávaná ako najinformatívnejšia vo vzťahu k určovaniu hodnoty antinukleárnych protilátok. Jednou z variácií techniky je štúdia využívajúca bunky HEp. Analýza ANF v tomto prípade zahŕňa odber vzoriek biomateriálu z hrtana. Proces nie je spojený s výskytom bolestivých a iných nepríjemných pocitov. Je dôležité vedieť, že krvný test ANF HEp-2 je v súčasnosti najpresnejším testom. Epitelové bunky z hrtana sa inkubujú so sérom, potom sa kombinujú aj s fluorescenčnými látkami.
2. S pomocou Jeho podstata spočíva v tom, že keď dôjde k vzťahu protilátok a antigénov, zmení sa farba roztoku. Prítomnosť jedného alebo druhého odtieňa umožňuje podozrenie na prítomnosť určitej patológie.

Interpretáciou analýzy ANF by sa mal zaoberať ošetrujúci lekár. Ak sú výsledky testov pozitívne, predpíšu sa ďalšie testy. Konečná diagnóza sa nerobí na základe záveru jednej analýzy.

Normálne hodnoty

Najlepší výsledok je taký, v ktorom chýbajú antinukleárne protilátky. Je však potrebné pripomenúť, že ich možno nájsť aj u úplne zdravých ľudí. V tomto prípade je indikované opätovné vyšetrenie.

Normou analýzy ANF je titer nie väčší ako 1:160. Tento ukazovateľ je relevantný pre dospelých aj deti.

Pri prepise krvného testu ANF je dôležité zvážiť nasledujúce informácie:

• Nízke titre nie sú zárukou, že neexistuje patológia autoimunitnej povahy. Podľa štatistík je 5% pacientov s výsledkami štúdie negatívnych.
• Ak má osoba všetky príznaky autoimunitného ochorenia a analýza naznačuje opak, lekár nevylučuje prítomnosť ochorenia. V takýchto situáciách sa dodatočne vykonáva enzýmový imunotest.

Analýza ANF vykonaná s použitím buniek HEp-2 sa považuje za normálnu, ak titer nie je vyšší ako 1:160. Výsledok viac ako 1:640 naznačuje exacerbáciu reumatických patológií. Počas obdobia remisie ochorenia titer klesá na 1:320. V tomto prípade bude len lekár schopný identifikovať skutočnosť, o čom svedčí taká nízka miera, na základe histórie a individuálnych charakteristík zdravia pacienta.

ANF ​​zvýšil

Väzbou na antigény vytvárajú imunitný komplex. Ten je zase spúšťacím faktorom pre rozvoj zápalového procesu v stenách ciev. V dôsledku toho sa u človeka objavujú prvé alarmujúce príznaky systémových ochorení. Analýza ukazuje vysoké titre.

V tomto prípade môže byť patológia identifikovaná určením typu žiary. Interpretácia výsledkov:

• Homogénne. Takáto žiara môže naznačovať prítomnosť systémového lupus erythematosus, chronickej hepatitídy a sklerodermie.
• Periférne. Vždy hovoríme o rozvoji
• Granulovaný. Možné ochorenia: Sjögrenov syndróm, systémový lupus erythematosus, reumatoidná artritída, zmiešaná patológia spojivového tkaniva.
• Nukleárny. Tento typ žiary je charakteristický pre systémový lupus erythematosus, polymyozitídu, Sjögrenov syndróm a sklerodermiu.
• Centromeric. Možné patológie: kalcifikácia kože, dysfunkcia pažeráka, Raynaudov syndróm, telangiektázia, sklerodaktýlia.
• Cytoplazmatický. Takáto žiara naznačuje autoimunitné ochorenia pečene alebo polymyozitídu.

ANF ​​znížená úroveň

Pokles hladiny antinukleárnych protilátok má klinický význam len pri predikcii a monitorovaní existujúcich a predtým identifikovaných systémových ochorení.

Indikátor ANF priamo závisí od intenzity patologického procesu. V tomto ohľade je jeho pokles priaznivým znakom, čo naznačuje, že liečba bola úspešná a ochorenie prešlo do remisie.

Liečba

Každá patológia autoimunitnej povahy si vyžaduje špecifický terapeutický prístup. Účelom vykonania krvného testu na ANF je identifikácia protilátok v tekutom spojivovom tkanive a vyhodnotenie povahy ich interakcie so špecifickými antigénmi. Na základe výsledkov diagnózy môže lekár predbežne stanoviť diagnózu. Na potvrdenie je potrebný ďalší výskum. A až potom lekár vypracuje plán liečby. Výber liekov priamo závisí od toho, aký druh patológie je zistený u osoby.

cena

Test ANF môžete absolvovať v nezávislom laboratóriu, súkromnej klinike alebo vo verejnej zdravotníckej inštitúcii. Je dôležité vedieť, že nie všetky rozpočtové kliniky poskytujú takúto službu. Pokiaľ ide o jeho dostupnosť, musíte si to overiť v registri.

Štúdium je platené aj vo verejných zdravotníckych zariadeniach. Náklady na analýzu priamo závisia od cenovej politiky kliniky, ktorá pozostáva z mnohých faktorov. Minimálna cena je 1 000 rubľov, maximálna nepresahuje 1 700 rubľov. Okrem toho si treba priplatiť za odber krvi. Náklady na túto službu spravidla nepresahujú 200 rubľov.

Konečne

Skratka ANF znamená antinukleárny faktor. Normálne by sa v krvi zdravého človeka nemal vyskytovať, prípadne by jeho koncentrácia mala byť menšia ako 1:160. Analýza na ANF je predpísaná s cieľom identifikovať patológie autoimunitnej povahy u pacienta v najskoršom štádiu ich vývoja.

Podstata metódy: keď provokujúce činidlá vstupujú do tela, obranný systém začína produkovať protilátky. Ich úlohou je napadnúť antigény a zničiť ich. Na zistenie tejto reakcie u pacienta sa odoberie venózna krv, po ktorej nasleduje separácia séra. K tomu sa pridajú špecifické antigény a vyhodnotia sa ďalšie reakcie.

Antinukleárne protilátky- všeobecný názov skupiny protilátok namierených proti rôznym zložkám bunky, ich výskyt je spojený najmä s autoimunitnými ochoreniami.

Synonymá: antinukleárne protilátky, antinukleárny faktor, antinukleárny faktor, protilátky proti extrahovateľným jadrovým (jadrovým) antigénom, antinukleárne protilátky, Hep-2 substrát, ANA-Hep2, fluorescenčná detekcia antinukleárnych protilátok, ANA, FANA

Antinukleárne protilátky sú

komplex protilátok (viac ako 200), najmä imunoglobulínov G (menej často IgM a IgA), sa objavuje v dôsledku porušenia mechanizmu autotolerancie pri autoimunitných a reumatických ochoreniach.

V niektorých prípadoch nie je imunitná odpoveď namierená proti cudzím ľuďom, ale proti vlastným tkanivám. V tomto prípade sa hovorí o autoimunitné ochorenie. A protilátky, ktoré sa vytvárajú proti vlastným bunkám alebo ich zložkám, sa nazývajú autoimunitné.

Väčšina ľudí má v krvi malé (!) množstvo autoprotilátok, ktoré nie sú prejavom ochorenia.

Iba v prípade vážneho zlyhania imunitného systému sa hladina autoprotilátok zvýši a postačuje na stanovenie diagnózy.

ANA môže byť pozitívna ešte skôr, ako sa objavia prvé príznaky ochorenia. Asi 95 % pacientov so systémovým lupus erythematosus má v krvi antinukleárne protilátky. Prítomnosť príznakov lupusu potvrdzuje diagnózu.

Mechanizmus vzdelávania

• vystavenie ultrafialovým lúčom na koži vedie k aktivácii programovanej bunkovej smrti (apoptózy), čo je normálna reakcia organizmu, no pri systémových ochoreniach súčasne hromadne migrujú
• predtým nedostupné a pre imunitný systém neviditeľné zložky bunky, ako sú jadierka, históny, obal jadra atď., sú „holé“ a makrofágy namiesto toho, aby jednoducho „využívali“ tento materiál, prenášajú o ňom signál v reťazci imunitnej odpovede.
• B-lymfocyty ako odpoveď na signál z makrofágu začnú produkovať antinukleárne protilátky, ktoré naviazaním na príslušný antigén vytvárajú imunitné komplexy (jadrový antigén + protilátka IgG, IgM, IgA)
• imunitné komplexy sa usadzujú na bazálnej membráne rôznych orgánov a tkanív, najmä ciev, aktivujú komplementový systém – lokálna zápalová odpoveď
• v dôsledku toho - poškodenie a dysfunkcia orgánu

Antinukleárne protilátky sú namierené proti rôznym štruktúram normálnej bunky.

Typy antinukleárnych protilátok:

• anti-Ro (SS-A) – protilátky proti proteínom spojeným s Y1-Y5 RNA v spliceozómoch
• anti-Jo1 - protilátky proti cytoplazmatickému antigénu Jo-1
• anti-Sm
• anti-La (SS-B) - protilátky proti proteínu spojenému s RNA polymerázou-3
• anti-Sci 70 — protilátky proti jadrovej topoizomeráze
• anti-U1 RNP - protilátky proti ribonukleoproteínu U1
• anticentromérne protilátky
• antihistónové protilátky

Indikácie

• diagnostika systémového lupus erythematosus, Schergenov syndróm

Systémový lupus erythematosus

Systémový lupus erythematosus- autoimunitné ochorenie spojivového tkaniva a krvných ciev. Toto je najťažšie ochorenie spojivového tkaniva, pri ktorom dochádza k ostrým bolestiam kĺbov, poškodeniu kože ("motýľ"), seróznych membrán, srdca, obličiek, nervového systému, pľúc, trofických porúch.

Symptómy

• artritída - zápal kĺbu, prejavujúci sa bolesťou, opuchom, zhoršenou pohyblivosťou, začervenaním kože a horúčkou nad ňou
• zápal vonkajšej výstelky srdca alebo pleury (alebo) neznámeho pôvodu
• zmeny vo výsledkoch (- bielkoviny alebo červené krvinky v moči)
• - Level Up Destruction
• trombocytopénia je pokles v
• - znížený počet
• kožné prejavy – vyrážka, zhrubnutie kože, najmä po aktív
• Raynaudov syndróm - periodické sfarbenie prstov na nohách a rukách (modré a začervenané) so zhoršenou citlivosťou a bolesťou
• atypické neurologické a psychiatrické symptómy
• horúčka, únava, strata hmotnosti,

Metódy

Existujú dva spôsoby stanovenia antinukleárnych protilátok v krvi.

Nepriama imunofluorescenčná mikroskopia(FANA - test fluorescenčných antinukleárnych protilátok) na preparáte buniek Hep-2 (bunková línia odvodená z adenokarcinómu hrtana) - antinukleárne protilátky (ak existujú) sa viažu na antigény buniek Hep-2, pridávajú špeciálne svietiace značky, ktoré sa prichytia na vytvorený komplex a pod mikroskopom sledujú intenzitu a typ luminiscencie. Najlepšia metóda na štúdium antinukleárnych protilátok. Iné meno - .

Výsledok štúdie je zapísaný vo forme titra - maximálne zriedenie krvi, pri ktorom je viditeľná luminiscencia, je opísaný aj typ fluorescencie (v prípade pozitívneho výsledku). Čím viac protilátok, tým vyšší titer. Nízke titre sa považujú za negatívne, zatiaľ čo vysoké titre naznačujú zvýšenú koncentráciu antinukleárnych protilátok.

Typy fluorescencie pri hodnotení ANA:

• homogénne (difúzne, homogénne) - so systémovým lupus erythematosus, zmiešané ochorenia spojivového tkaniva (MCTD)
• granulárne (granulárne) - so systémovým lupus erythematosus, Sjögrenovým syndrómom, sklerodermiou, reumatoidnou artritídou a MCTD - najviac nešpecifické
• nukleárne (nukleárne) - so sklerodermiou a polymyozitídou
• centromerické - so sklerodermiou a syndrómom CREST
• cytoplazmatická - dermatomyozitída, polymyozitída, autoimunitné ochorenia pečene, primárna biliárna cirhóza

Príklad pozitívneho výsledku testu na antinukleárne protilátky: „ Pozitívne riedenie/titer 1:320, homogénny obraz“.

Algoritmus činnosti lekára po štúdiu antinukleárnych protilátok metódou FANA

• negatívny výsledok testu na antinukleárne protilátky + príznaky - urobte testy: anti-Ro a anti-Jo1
• pozitívny výsledok testu na antinukleárne protilátky + prítomnosť/neprítomnosť príznakov - test na anti-DNA, anti-Sm, anti-Ro, antihistónové a anticentromérové ​​protilátky, anti-Sci-70, anti-U1 RNP, anti-Jo1 - závisí od prejavov ochorenia

Enzýmová imunoanalýza

Enzýmová imunoanalýza (ELISA)) - protilátky prítomné v krvi sa viažu na zodpovedajúci antigén, čo vedie k zmene farby roztoku.

• menej ako 1,0 U - negatívny výsledok (normálne)
• 1,1-2,9 U - slabo pozitívny (vyžaduje opakovanie)
• 3,0-5,9 U - pozitívne
• viac ako 6,0 - výrazne pozitívne

Pozitívny výsledok testu na antinukleárne protilátky- to nie je diagnóza, ale výkričník o potrebe ďalšieho výskumu. Vyžaduje pravidelné, dôkladnejšie vyšetrenie na čo najskoršie odhalenie možnej choroby.

Negatívny výsledok testu na antinukleárne protilátky naznačuje ich neprítomnosť v krvi, ale nevylučuje diagnózu autoimunitného ochorenia.

Norm

Normálne v krvi nie sú žiadne antinukleárne protilátky.

Dodatočný výskum

• všeobecný rozbor moču
• reumatické testy - rýchlosť sedimentácie erytrocytov (ESR),
• cirkulujúce imunitné komplexy
• zložka komplementu C3
• zložka komplementu C4

Čo ovplyvňuje výsledok?

• lieky - prokaínamid, fenytoín, penicilín, hydralazín
• ARI a prechladnutie, akékoľvek akútne alebo chronické infekčné ochorenie

Príčiny ANA

1. Systémové ochorenia spojivového tkaniva

• - 95-100%, detekcia antinukleárnych protilátok určuje diagnózu
• (5-25%)
• (100%)
• (30-50%)
• juvenilná reumatoidná artritída (20-50%)
• (40-70%)
• (30-80%)
• (Sharpeov syndróm) 100%
• autoimunitná hepatitída (

Antinukleárne protilátky (ANA, ANA, antinukleárne protilátky, antinukleárny faktor-ANF) - NIF metóda na bunkových líniách HEp-2 s určením typu luminiscencie.- indikátor autoimunitných ochorení spojivového tkaniva. ANA je skupina autoprotilátok proti proteínom a ďalším zložkám (vrátane DNA), ktoré sa nachádzajú v jadrách buniek. Hlavné indikácie na použitie: vylúčenie diagnózy - systémový lupus erythematosus (predpokladá sa, že ANA sa objaví v 90% prípadov SLE, inými slovami, negatívny výsledok s pravdepodobnosťou asi 90% vylučuje diagnózu SLE), diferenciálna diagnostika systémových kolagenóz (systémový lupus erythematosus, sklerodermia, nodulárna periarteritída, dermatomyozitída), chronická aktívna hepatitída.

K dnešnému dňu bolo opísaných viac ako 200 ANA, ktoré sa zameriavajú na nukleové kyseliny, históny, proteíny jadrovej membrány, spliceozómové zložky, ribonukleoproteíny, nukleárne proteíny a centroméry. Zároveň poškodzujú väzivo, čo prispelo k zavedeniu definície antinukleárneho faktora ako testu na systémové ochorenia väziva. Termín "antinukleárny faktor" znamená test na detekciu antinukleárnych protilátok metódou nepriamej imunofluorescencie.

Jednou z metód detekcie antinukleárneho faktora v krvi (antinukleárnych protilátok) je metóda nepriamej imunofluorescencie aplikáciou séra pacienta na tkanivové bunky transplantovateľnej ľudskej bunkovej línie HEp-2 (bunková línia ľudského laryngeálneho epiteliálneho karcinómu Hep-2 obsahujúca rôzne jadrové antigény), s použitím značeného konjugátu s ľudskými protilátkami. Ako substráty možno použiť aj iné ľudské bunkové línie, avšak vďaka dobrej morfológii a ľahkej kultivácii sa práve línie Hep-2 stali všeobecne uznávaným substrátom pre nepriamu imunofluorescenciu. Detekčnú metódu pre ANF vyvinul Tan v roku 1982 s použitím ľudskej transplantovateľnej epiteloidnej bunkovej línie HEp-2 ako substrátu. Táto bunková línia, odvodená z ľudského laryngeálneho adenokarcinómu, je veľká, polyploidná, nekeratinizovaná, skvamózna epiteliálna bunka, ktorá tvorí monovrstvu na skle. Sérum pacienta sa inkubuje s tkanivovým substrátom a antinukleárne protilátky zo séra pacienta (ak sú prítomné) sa viažu na zodpovedajúce jadrové antigény. Väzbové miesta autoprotilátok sa detegujú pomocou fluoresceínom značeného anti-ľudského antiséra. Výsledky reakcie sa vyhodnotia mikroskopiou s použitím fluorescenčného mikroskopu a vizuálnym hodnotením povahy luminiscencie naviazaných protilátok. Medzi výhody HEp-2 (v porovnaní s kryosekciami živočíšnych tkanív) možno zaznamenať vysokú frekvenciu bunkového delenia, ktorá umožňuje detegovať protilátky proti antigénom exprimovaným iba počas bunkového delenia, a absenciu matrice tkanivových buniek. , čo sťažuje vizualizáciu špecifickej luminiscencie v porovnaní s histologickými rezmi. Pri niektorých ochoreniach, ako je SLE, systémová sklerodermia (systémová skleróza), niektoré infekcie, imunitný systém pacientov vníma jadrá (jadrové proteíny) buniek vlastných tkanív ako cudzie a vytvára si proti nim protilátky (antinukleárne protilátky - AHA). . Zároveň poškodzujú väzivo, čo prispelo k zavedeniu definície antinukleárneho faktora ako testu na systémové ochorenia väziva.

Pri interpretácii údajov je potrebné vziať do úvahy, že spektrum AHA zahŕňa veľkú skupinu autoprotilátok proti DNA, nukleoproteínov, histónov, jadrových ribonukleoproteínov a iných jadrových zložiek. Cieľom testu je teda odhaliť rôzne protilátky proti zložkám jadra a cytoplazmy, ktoré boli prvýkrát zistené pri SLE. V budúcnosti boli diagnostické kritériá testu rozšírené v súvislosti s detekciou týchto protilátok pri iných ochoreniach spojivového tkaniva.

Skríningové testy na stanovenie celkovej ANA zvyčajne využívajú súbor nasledujúcich antigénov, ktoré sú hlavnými markermi autoimunitných ochorení spojivového tkaniva: SS-A (Ro), SS-B (La), BNP70, Sm, RNP/Sm, J01, centroméra B.
Hlavné antigény používané v moderných súpravách na detekciu jadrových protilátok triedy IgG sú reprezentované nasledujúcim súborom:

1. SS-A (Ro) - jadrové ribonukleoproteíny, (polypeptidy). Protilátky proti nim sa vyskytujú častejšie pri systémovej sklerodermii (60 % prípadov), Sjögrenovom syndróme (až 70 % prípadov) a pri SLE (až 30 % prípadov). Predpokladá sa, že ak sa tieto protilátky nachádzajú v krvi tehotných žien, je to indikátor rizika zvýšeného výskytu syndrómu podobného neonatálneho lupusu u novorodenca (syndróm neonatálneho lupusu). Tieto materské protilátky prechádzajú placentou a spôsobujú poškodenie plodu, čo vedie k hemolytickej anémii a trombocytopénii. K závažným následkom patrí poškodenie prevodového systému srdca dieťaťa (až trvalá stimulácia). Zistilo sa, že u žien, ktoré mali počas tehotenstva významný titer týchto protilátok, bez zjavných klinických príznakov, sa v budúcnosti rozvinie akékoľvek autoimunitné ochorenie, vrátane SLE.
2. SS-B (La) - jadrové proteíny. Protilátky proti nim sú zistené až v 60 % prípadov pri Sjögrenovom syndróme a v 15 % prípadov pri SLE.
3. Scl-70 je enzýmový proteín zapojený do metabolizmu nukleových kyselín (topoizomeráza-1). Protilátky proti tomuto proteínu sú najšpecifickejšie pri systémovej sklerodermii (až v 70 % prípadov).
4. Dvojvláknová DNA je natívna DNA. Protilátky proti DNA sú najšpecifickejšie pri SLE (až 80 % prípadov) a pri reumatoidnej artritíde a sklerodermii sa prakticky nezistia.
5. RNP/Sm - komplex antigénov RNP/Sm tvoria U1-ribonukleoproteíny: U1-68, U1-A, U1-C, U5, U6; a tiež z Sm-polypeptidov: SmA | , SMB | B, SmD, SME, SmF, SmG. Protilátky vytvorené proti týmto antigénom sú najšpecifickejšie pre zmiešané ochorenia spojivového tkaniva – t.j. v prítomnosti symptómov sklerodermie, reumatoidnej artritídy, SLE, polymyozitídy (asi 95 % prípadov) a v menšej miere pri SLE (až 30 % prípadov).
6. Jo-1 - enzým - aminoacyltransportná RNA syntetáza. Autoprotilátky proti tomuto proteínu sú diagnosticky významné pri myozitíde (polymyozitída/dermatomyozitída).
7. CENP-B (Centromere) - na detekciu Anti-Centromerických protilátok (Anti-Centromer B), za účelom diagnostiky syndrómu CREST (tento syndróm je kombináciou kalcifikácie kože, Raynaudovho syndrómu, porúch motility pažeráka, sklerodaktýlie, teleangiektázie). CREST syndróm sa vzťahuje na variant systémovej sklerodermie (systémová skleróza). Tieto protilátky u pacientov naznačujú priaznivý priebeh systémovej sklerodermie a naznačujú malú léziu vnútorných orgánov.
8. Bunky Hep-2 sú bunky ľudského laryngeálneho epitelového karcinómu Hep-2 obsahujúce mnoho rôznych jadrových antigénov, vrátane antigénu SS-A (Ro) a centromérových antigénov. Protilátky proti Hep-2 sa nachádzajú u pacientov s polymyozitídou a dermatomyozitídou až v 90 % prípadov.
9. Mitochondrie (PDC) - PDC - komplex pyruvátdehydrogenázy. Veľkú skupinu antimitochondriálnych protilátok tvoria autoprotilátky, ktoré sa vytvorili proti enzýmom pyruvátdehydrogenázového komplexu, ktorý sa nachádza v mitochondriách buniek a podieľa sa na oxidačnej dekarboxylácii pyruvátu.

ANA sa často nachádzajú pri biliárnej cirhóze pečene.

AHA kyseliny normálne neprenikajú do živých buniek, a preto sú neškodné. Niekedy však tvoria komplexy antigén-protilátka, ktoré spôsobujú poškodenie tkaniva (ako napríklad pri poškodení obličiek SLE). Vzhľadom na zapojenie mnohých orgánov do patologického procesu je diagnostická hodnota stanovenia AHA nízka a výsledky analýzy len čiastočne potvrdzujú klinické údaje.

Okrem reumatických ochorení sa ANA až v 50 % prípadov nachádzajú aj pri chronickej aktívnej hepatitíde. Vzhľad (nízke titre) je možný pri zápalových ochoreniach, onkológii a vírusových infekciách.

• Porovnávacia frekvencia detekcie antinukleárnych protilátok.
  

  Choroba a stav	Frekvencia detekcie, %
  SLE	95-100
  Lupoidná hepatitída (nový názov - chronická autoimunitná hepatitída)	70 -80%
  Feltyho syndróm (Felty. 1924) - reumatoidná artritída + splenomegália + neutropénia + leukopénia + lymfadenopatia.	95-100
  Systémová sklerodermia	75-80
  Lupus drogový syndróm (hydralazín, prokaínamid, izoniazid)	Asi 50
  Sjögrenov syndróm (Autoimunitné systémové postihnutie spojivového tkaniva. Je charakterizované zapojením do patologického procesu žliaz vonkajšej sekrécie, hlavne slinných a slzných a chronickým progresívnym priebehom).	40-75
  Klinicky zdraví príbuzní pacienta so SLE	Okolo 25
  Diskoidný lupus erythematosus	15-50
  Chronická juvenilná artritída, reumatoidná artritída	15-30
  Nodulárna periarteritída	15-25
  Dermatomyozitída a polymyozitída	10-30
  Reuma	Okolo 5
  Raynaudov syndróm	15-20

Všeobecné informácie o štúdiu

Stanovenie antinukleárneho faktora (ANF) je „zlatým štandardom“ na detekciu antinukleárnych protilátok (ANA) a diagnostiku autoimunitných ochorení.

Patogenéza systémových ochorení spojivového tkaniva (CCTD) je úzko spojená s poruchami imunitného systému a zvýšenou tvorbou protilátok proti štruktúram vlastných buniek. Autoprotilátky proti zložkám bunkového jadra - antinukleárne protilátky - interagujú s nukleovými kyselinami a proteínmi jadra, cytoplazmatickými antigénmi, čo sa prejavuje zápalovými zmenami v tkanivách a orgánoch, bolesťami kĺbov a svalov, silnou únavou, chudnutím, pokožkou zmeny. ANA sa nachádzajú pri mnohých autoimunitných ochoreniach, ale najčastejšie sa vyskytujú pri systémovom lupus erythematosus (SLE). ANA sa vyskytuje u viac ako 90% pacientov so systémovými ochoreniami spojivového tkaniva, v súčasnosti je popísaných asi 200 odrôd, ktoré spája jediný názov - antinukleárny faktor.

Pri stanovení ANF nepriamou fluorescenciou sa častejšie využíva transplantovaná línia epitelových buniek ľudského laryngeálneho adenokarcinómu HEp-2. Bunky HEp-2 sú veľmi vhodným substrátom pre laboratórny výskum, pretože majú veľké jadrá a rastú v jednej vrstve na sklíčkach. ANA sa detegujú väzbou na intracelulárne antigény buniek HEp-2.

V štúdii sa epitelové bunky HEp-2 pestujú na okuliaroch, fixujú sa a inkubujú so zriedeným krvným sérom pacienta. Po odstránení prebytočného séra sa bunky inkubujú s fluoresceínom značenými protilátkami, potom sa znova premyjú a skúmajú sa pod fluorescenčným mikroskopom. V tomto prípade sa určuje titer protilátky a typ luminiscencie. Titer vyšší ako 1:160 sa považuje za diagnosticky významný. Počas exacerbácie reumatických ochorení presahuje 1:640 a počas obdobia remisie klesá na 1:160-1:320. Čím viac protilátok, tým vyšší titer. Podľa typu luminiscencie je možné stanoviť ciele pre antinukleárne protilátky, čo má veľký klinický význam a určuje taktiku ďalšieho vyšetrenia pacienta. Hlavné sú periférne, granulárne (malé/veľké), nukleárne, centromerické a cytoplazmatické typy farbenia jadier. Každý typ žiary má veľmi charakteristické vlastnosti, ktoré umožňujú rozlíšiť jeden variant od druhého.

Homogénne (difúzne) farbenie je spojené s prítomnosťou protilátok proti dvojvláknovej DNA, histónom a je charakteristické pre SLE a liekmi vyvolaný lupus.

Periférna luminiscencia je spôsobená periférnou distribúciou chromatínu v jadre, je spojená s protilátkami proti DNA a je špecifická pre SLE. Tento typ luminiscencie je dôležité odlíšiť od farbenia jadrovej membrány, ku ktorému dochádza pri autoimunitných ochoreniach pečene.

Granulárne (škvrnité, sieťované) sfarbenie je najbežnejšie a najmenej špecifické, zisťuje sa pri mnohých autoimunitných ochoreniach. Autoantigény sú v tomto prípade nukleoproteínové komplexy v jadre (antigény Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B a PCNA).

Veľmi vysoké titre ANF s veľkogranulárnym typom luminiscencie často naznačujú zmiešané ochorenie spojivového tkaniva.

Nukleárne (nukleárne) farbenie je spôsobené tvorbou protilátok proti zložkám jadierka (RNA polymeráza-1, NOR, U 3 RNP, PM / Scl), je detekované pri sklerodermii, Sjögrenovej chorobe. AHA sa niekedy zvyšuje pri endokrinných ochoreniach (diabetes mellitus 1. typu, tyreoiditída, tyreotoxikóza, polyendokrinný syndróm), kožných ochoreniach (psoriáza, pemfigus), počas tehotenstva, po transplantácii orgánov a tkanív, u pacientov na hemodialýze.

Centromerická luminiscencia sa objavuje v prítomnosti protilátok proti centromérom chromozómov a je charakteristická pre formu sklerodermie – syndróm CREST.

Cytoplazmatický typ luminiscencie je spojený s protilátkami proti tRNA syntetáze, najmä proti Jo-1, čo je typické pre dermatomyozitídu a polymyozitídu. Tento typ farbenia sa určuje aj v prítomnosti protilátok proti iným zložkám cytoplazmy pri autoimunitnej hepatitíde, primárnej biliárnej cirhóze.

Súčasná detekcia rôznych typov luminiscencie indikuje prítomnosť rôznych typov protilátok.

U zdravých jedincov možno jemnozrnnú fluorescenciu detegovať pri nízkych, stredných alebo vysokých titroch AHA, ale normálne by sa nemali detegovať hrubozrnné alebo homogénne typy fluorescencie.

V závislosti od výsledkov hodnotenia typu luminiscencie sa vyvíja ďalšia taktika liečby pacienta a predpisujú sa ďalšie štúdie na objasnenie spektra ANA.

Na čo slúži výskum?

• Na diagnostiku systémových ochorení spojivového tkaniva.
• Na diferenciálnu diagnostiku reumatických ochorení.
• Vyhodnotiť účinnosť terapie autoimunitných ochorení.
• Monitorovať priebeh systémových ochorení spojivového tkaniva.

Kedy je naplánované štúdium?

• S príznakmi autoimunitného ochorenia (dlhotrvajúca horúčka, bolesti kĺbov, únava, strata hmotnosti, kožné zmeny).
• Pri detekcii zmien charakteristických pre systémové ochorenia spojivového tkaniva (zvýšené ESR, hladiny C-reaktívneho proteínu, cirkulujúce imunitné komplexy).