Антинуклеарен фактор на клетъчната линия HEp-2 (ANF)е тест за откриване на антинуклеарни антитела чрез индиректна имунофлуоресценция.

При системен лупус еритематозус (SLE) и други системни ревматични заболявания имунният отговор е насочен срещу нуклеопротеинови антигени, т.е. комплекси от нуклеинови киселини и протеини. Тези ендогенни нуклеопротеинови комплекси се образуват по време на процеса на апоптоза на епителните клетки и приличат на чужди вирусни частици. Ускоряване на процесите на апоптоза под въздействието на ултравиолетово лъчение, вирусни инфекцииИ лекарства, предизвиква автоимунни реакции при SLE. По време на апоптоза основните антигени на антителата се кондензират в апоптотични тела, които стават мишени за автоантитела. Понастоящем са описани около 200 вида антитела срещу нуклеопротеини и рибонуклеинови киселини, които се наричат ​​антинуклеарни антитела. При автоимунни заболявания автоантителата към ядрените антигени нямат директен цитотоксичен ефект върху човешките клетки, но имунните комплекси са способни да предизвикат имунологично възпаление, особено на места, където съдовете са особено тънки, включително бъбреците, кожата, централната нервна система, синовиум на ставите и плеврата.

Изследването с антинуклеарен фактор (ANF) е основният метод за откриване на антинуклеарни антитела, позволяващ откриването на автоантитела към нуклеинови киселини (dsDNA, ssDNA, RNA), рибонуклеопротеини, както и повечето конформационни и неразтворими антигени.

Антинуклеарните антитела се откриват чрез свързването им с вътреклетъчни антигени на непрекъсната човешка епителна клетъчна линия (HEp-2). Ядрото и цитоплазмата на HEp-2 клетките съдържат всички антигени, характерни за човешкото тяло, което прави възможно откриването на всички основни антинуклеарни антитела в един тест. Методът на индиректна имунофлуоресценция върху клетъчна линия HEp2 се препоръчва като златен стандарт за откриване на антинуклеарни антитела от водещи европейски (EASIgroup2010) и американски експерти (ACRANATaskforce2008). Поради разнообразието от антинуклеарни антитела антигени, не всички от тях могат да бъдат пречистени или синтезирани за използване в ензимни имуноанализи за откриване на антинуклеарни антитела.

Положителност за ANF върху клетъчната линия HEp-2 се наблюдава при системен лупус еритематозус (SLE), системни ревматични заболявания и много автоимунни заболявания, което го прави универсален тест при изследване на пациенти с автоимунна патология. Положителен резултат ANF ​​се наблюдава при повече от 90% от пациентите с дифузни заболявания съединителната тъкан, като системен лупус еритематозус и кожни форми на това заболяване, склеродермия и нейните разновидности, смесено заболяване на съединителната тъкан, синдром на Sjogren. Идентификация на ANF има голямо значениепри диагностицирането на непълнолетни ревматоиден артритИ автоимунни заболяваниячерен дроб. Представители на това семейство автоантитела могат да бъдат открити в много други автоимунни (тиреоидит, диабет), инфекциозни ( вирусен хепатит), възпалителни и онкологични заболявания. Честотата на ANF достига 1–3% клинично здрави хораи леко се увеличава при лица над 65 години. Индивиди с високи титри на ANF са изложени на повишен риск от развитие на автоимунни заболявания.

Показания:

• Системен лупус еритематозус.
• Подостър кожен лупус и други видове кожен лупус.
• Смесено заболяванесъединителната тъкан.
• Синдром на Sjögren и свързаните с него заболявания.
• Дифузна и локализирана склеродермия, CREST синдром.
• Възпалителни миопатии (полимиозит и дерматомиозит).
• Ювенилен хроничен артрит.
• Автоимунен хепатит.
• Първична билиарна цироза и склерозиращ холангит.
• Полиневропатия и миелит.

Подготовка


Препоръчва се кръводаряване сутрин, между 8 и 12 часа. Кръвта се взема на празен стомах или 4-6 часа след последното хранене. Разрешено е да се пие вода без газ и захар. В навечерието на изследването трябва да се избягва претоварването с храна.

Тълкуване на резултатите
Мерни единици: титър.

Референтни стойности:<1:160 (отрицательно).

Резултатът от определянето на ANF е титърът, който е стойността на крайното разреждане на серума, при което остава значителна флуоресценция на ядрото. Колкото по-висок е знаменателят на фракцията, толкова по-голямо е разреждането на серума, толкова повече антитела има в серума на пациента. Високите титри на серумно разреждане отразяват висок афинитет и концентрация на автоантитела.

Откриването на високи нива (1/640 и повече) показва висока вероятност от системно ревматично заболяване или автоимунно чернодробно заболяване и изисква внимателно клинично, лабораторно и инструментално изследване. Липсата на повишени титри на антинуклеарен фактор значително намалява вероятността от системни автоимунни заболявания.

При ниски титри (до 1/160) антинуклеарен фактор може да се наблюдава при 1-2% от здрави индивиди и роднини на пациенти със системни заболявания. Честотата на положителните титри в популацията се увеличава леко с възрастта. Ниски титри на антинуклеарни антитела могат да се появят при много автоимунни, инфекциозни и онкологични заболявания. Липсата на високи титри на антинуклеарни антитела значително намалява вероятността от системен ревматичен процес и може да се използва за изключване, а не за потвърждаване на диагнозата.

Има редица заболявания, при които защитната система приема клетките на собственото тяло за чужди, след което започва по погрешка да ги атакува. Повечето автоимунни патологии са хронични и представляват сериозна заплаха за здравето. За да идентифицират тези заболявания на най-ранния етап от тяхното развитие, лекарите предписват анализ на ANF. Това съкращение означава „антинуклеарен фактор“. Някои доклади обозначават проучването като AHA. Значението означава „тест за антинуклеарни антитела“. ANF ​​​​е клинично значим показател, който помага на лекаря да създаде най-ефективния режим на лечение и да предотврати развитието на усложнения.

Същността на метода

Биологичният материал за изследване е кръвта. Когато всеки патогенен микроорганизъм навлезе в тялото, имунната система започва да произвежда специфични антитела, чиято задача е да унищожават чужди антигени. Същността на метода е откриването и количественото определяне на тези вещества в течна съединителна тъкан.

Лекарите казват, че кръвният тест за ANF е лабораторен тест с висока степен на информационно съдържание. С негова помощ е възможно да се идентифицират всякакви автоимунни патологии дори на ранен етап от тяхното развитие.

Специфични антитела също често се откриват при хора, страдащи от тежки форми на хепатит, онкология и някои инфекциозни заболявания. Тези вещества могат да бъдат открити и при здрави хора. Тази ситуация изисква интегриран подход за идентифициране на причината.

Анализът на ANF понякога включва оценка на количественото съдържание на имуноглобулини. Наличието им може да показва развитието на колагеноза и ревматични заболявания.

Показания

Важно е да знаете, че кръвният тест за ANF е изследване, което се предписва за потвърждаване или изключване на наличието на автоимунни патологии, както и за оценка на ефективността на лечението.

Лекарят може да подозира заболяване въз основа на следните симптоми:

• Дълготрайно състояние на треска без видими причини.
• Болезнени усещания в ставите.
• Повишена степен на умора.
• Болки в мускулите и ставите.
• Кожни прояви без видими причини.
• Чести епизоди на мускулни крампи.
• Повишена телесна температура.
• Намаляване на телесното тегло.
• Редовни епизоди на гадене.
• Главоболие.
• Увреждане на слуха.
• диария

В допълнение, анализът на ANF се предписва при съмнение за ревматично заболяване. Изследването се провежда след получаване на резултатите от лабораторната диагностика, при която се повишават показателите на ESR, CEC и С-реактивен протеин.

Какво показва

Кръвният тест за ANF ви позволява да идентифицирате патологии с автоимунен характер. Изследването е информативно за следните заболявания:

• Системен лупус еритематозус.
• Остър дисеминиран енцефаломиелит.
• Болест на Sjögren.
• Ревматоиден артрит.
• Алопеция ареата.
• Болест на Адисон.
• Анкилозиращ спондилит.
• Антифосфолипиден синдром.
• Автоимунна хемолитична анемия.
• Булозен пемфигоид.
• Автоимунен хепатит.
• Цьолиакия.
• Автоимунни патологии на вътрешното ухо.
• Болести на Чагас.
• Синдром на Churg-Strauss.
• Хронична обструктивна белодробна болест.
• Дерматомиозит.
• Болест на Крон.
• Захарен диабет тип I.
• Синдром на Гудпасчър.
• Тиреоидит на Хашимото.
• Болест на Грейвс.
• Синдром на Guillain-Barre.
• Болести на Кавазаки.
• Хидраденит супуратива.
• Първична нефропатия.
• Идиопатична тромбоцитопенична пурпура.
• Интерстициален цистит.
• Еритематозен лупус.
• Синдром на Шарп.
• Пръстенообразна склеродермия.
• Множествена склероза.
• Нарколепсия.
• Невромиотония.
• Пемфигус вулгарис.
• Псориазис.
• Феноменът на Рейно.
• Васкулит.
• Грануломатоза на Wegener.

Това е непълен списък от заболявания. Важно е анализът на ANF да показва развитието на автоимунни патологии в най-ранния стадий на тяхното протичане. Това позволява на лекаря да вземе решение за тактиката на лечение и впоследствие да оцени неговата ефективност.

Подготовка

Събирането на биоматериал се извършва сутрин. Необходимо е да се дарява кръв на празен стомах. Последното хранене трябва да бъде поне 4 часа преди това. В същото време питейната вода е приемлива по всяко време и във всяко количество. Консумацията на алкохол е забранена.

1 ден преди изследването е показана почивка. Физическият и психо-емоционалният стрес често водят до фалшиви резултати. Пушенето е забранено половин час преди кръводаряване.

Необходимо е да информирате лекаря за лекарствата, които приемате, когато предписвате изследване за ANF. Това се дължи на факта, че активните компоненти на някои лекарства провокират производството на антитела и също могат да причинят лекарствен лупус. Фалшиво-отрицателните резултати често са следствие от приема на глюкокортикостероиди.

Ако на пациента са предписани физически процедури или инструментални изследвания, те трябва да се извършват само след кръводаряване.

Събиране на биоматериал

Провежда се сутрин. Биологичният материал е венозна кръв. Събирането му се извършва по стандартния алгоритъм. По правило кръвта се взема от вена, разположена на лакътя.

След като се получи течната съединителна тъкан, от нея се извлича серум. Това е необходимо за извършване на анализа.

Видове изследвания и тяхното описание

Понастоящем е възможно да се открият антитела в биоматериал по няколко начина:

1. Използване на индиректна имунофлуоресцентна микроскопия. Ако в кръвта присъстват специфични вещества, те ще започнат да се свързват със специфични ядрени антигени. В лабораториите се използват елементи, които могат да светят в отделен спектър. След това биоматериалът се изследва внимателно под микроскоп. Заболяването може да се подозира по вида на блясъка. Този метод е признат за най-информативен при определяне на стойността на антинуклеарните антитела. Един вид техника е изследване с помощта на HEp клетки. Анализът на ANF в този случай включва вземане на биоматериал от ларинкса. Процесът не е свързан с болезнени или други дискомфортни усещания. Важно е да знаете, че кръвният тест ANF HEr-2 в момента е най-точният тест. Епителните клетки от ларинкса се инкубират със серум, след което също се комбинират с флуоресцентни вещества.
2. С негова помощ същността е, че когато настъпи взаимодействие на антитела и антигени, цветът на разтвора се променя. Наличието на един или друг нюанс позволява да се подозира наличието на определена патология.

Анализът на ANF трябва да бъде дешифриран от лекуващия лекар. Ако има положителни резултати от теста, се предписват допълнителни тестове. Окончателната диагноза не се поставя въз основа на заключението на един анализ.

Нормални стойности

Най-добрият резултат е този, при който липсват антинуклеарни антитела. Струва си обаче да се помни, че те могат да бъдат намерени и при напълно здрави хора. В този случай е показано повторно изследване.

Стандартът за анализ на ANF е титър не повече от 1:160. Освен това този показател е от значение както за възрастни, така и за деца.

Когато дешифрирате кръвния тест за ANF, е важно да вземете предвид следната информация:

• Ниските титри не гарантират, че няма автоимунна патология. Според статистиката 5% от пациентите имат отрицателни резултати от теста.
• Ако човек има всички симптоми на автоимунно заболяване и анализът показва обратното, лекарят не изключва наличието на заболяването. В такива ситуации допълнително се извършва ензимен имуноанализ.

Анализът на ANF, извършен с помощта на HEp-2 клетки, се счита за нормален, ако титърът не е по-висок от 1:160. Резултат от повече от 1: 640 показва обостряне на ревматични патологии. По време на ремисия на заболяването титърът намалява до 1:320. В този случай само лекар ще може да определи факта какво показва такъв нисък показател въз основа на данните от анамнезата и индивидуалните характеристики на здравето на пациента.

ANF ​​се увеличава

Свързвайки се с антигени, те образуват имунен комплекс. Последният от своя страна е отключващ фактор за развитието на възпалителния процес в стените на кръвоносните съдове. В резултат на това човек развива първите тревожни симптоми на системни заболявания. Анализът показва високи титри.

В този случай патологията може да бъде идентифицирана чрез определяне на вида на блясъка. Тълкуване на резултатите:

• Хомогенна. Такова сияние може да показва наличието на системен лупус еритематозус, хроничен хепатит и склеродермия.
• Периферен. Винаги говорим за развитие
• Гранулиран. Възможни заболявания: синдром на Sjogren, системен лупус еритематозус, ревматоиден артрит, смесена патология на съединителната тъкан.
• Нуклеоларна. Този тип блясък е характерен за системен лупус еритематозус, полимиозит, синдром на Sjogren и склеродермия.
• центромерни. Възможни патологии: калцификация на кожата, езофагеална дисфункция, синдром на Рейно, телеангиектазия, склеродактилия.
• Цитоплазмен. Такова сияние показва автоимунни чернодробни заболявания или полимиозит.

ANF ​​е понижен

Намаляването на нивото на антинуклеарните антитела е клинично важно изключително за прогнозиране и наблюдение на съществуващи и предварително идентифицирани системни заболявания.

Индикаторът ANF директно зависи от интензивността на патологичния процес. В тази връзка намаляването му е благоприятен знак, който показва, че лечението е било успешно и заболяването е навлязло в стадия на ремисия.

Лечение

Всяка автоимунна патология изисква специфичен терапевтичен подход. Целта на кръвния тест за ANF е да идентифицира антитела в течна съединителна тъкан и да оцени естеството на тяхното взаимодействие със специфични антигени. Въз основа на резултатите от диагностиката лекарят може да направи предварителна диагноза. Необходими са допълнителни изследвания, за да се потвърди това. И едва след това лекарят изготвя схема на лечение. Изборът на лекарства зависи пряко от това каква патология е идентифицирана при дадено лице.

Цена

Можете да направите тест за ANF в независима лаборатория, частна клиника или обществено медицинско заведение. Важно е да знаете, че не всички бюджетни клиники предоставят такава услуга. Необходимо е да се уточни на рецепция за наличността му.

Изследването се заплаща дори в държавните лечебни заведения. Цената на анализа директно зависи от ценовата политика на клиниката, която се състои от много фактори. Минималната цена е 1000 рубли, максималната не надвишава 1700 рубли. Освен това трябва допълнително да платите за вземане на кръв. Цената на тази услуга, като правило, не надвишава 200 рубли.

Накрая

Съкращението ANF означава антинуклеарен фактор. Обикновено не трябва да присъства в кръвта на здрав човек или концентрацията му трябва да бъде под 1:160. Предписва се анализ за ANF, за да се идентифицират автоимунни патологии при пациент в най-ранния стадий на тяхното развитие.

Същността на метода: когато провокиращи агенти проникнат в тялото, защитната система започва да произвежда антитела. Тяхната задача е да атакуват антигените и да ги унищожават. За да се идентифицира тази реакция, от пациента се взема венозна кръв, последвано от отделяне на серума. Към последните се добавят специфични антигени и се оценяват по-нататъшните реакции.

Антинуклеарни антитела- общото наименование на група антитела, насочени срещу различни компоненти на клетката, появата им се свързва главно с автоимунни заболявания.

Синоними: антинуклеарни антитела, антинуклеарен фактор, антинуклеарен фактор, антитела срещу извличащи се ядрени (ядрени) антигени, антинуклеарни антитела, Hep-2 субстрат, ANA-Hep2, флуоресцентно откриване на антинуклеарни антитела, ANA, FANA

Антинуклеарните антитела са

комплекс от антитела (повече от 200), главно имуноглобулини G (по-рядко IgM и IgA), се появяват в резултат на нарушение на механизма на автотолерантност при автоимунни и ревматични заболявания.

В някои случаи имунният отговор е насочен не срещу непознати, а срещу собствените тъкани. В този случай те говорят за автоимунно заболяване. И се наричат ​​антитела, които се произвеждат към собствените им клетки или техните компоненти автоимунни.

Повечето хора имат малко (!) количество автоантитела в кръвта, които не са проява на заболяването.

Само при сериозен срив в имунната система нивото на автоантителата става повишено и достатъчно за поставяне на диагноза.

ANA може да бъде положителен още преди да се появят първите симптоми на заболяването. Около 95% от пациентите със системен лупус еритематозус имат антинуклеарни антитела в кръвта. Наличието на симптоми на лупус потвърждава диагнозата.

Образователен механизъм

• излагането на кожата на ултравиолетови лъчи води до активиране на програмирана клетъчна смърт (апоптоза), което е нормална реакция на организма, но при системни заболявания те едновременно мигрират масово
• Клетъчните компоненти, които преди са били недостъпни и невидими за имунната система, като нуклеоли, хистони, ядрената мембрана и т.н., са „голи“ и макрофагите, вместо просто да „изхвърлят“ този материал, предават сигнал за него по веригата на имунния отговор
• В-лимфоцитите, в отговор на сигнал от макрофаг, започват да произвеждат антинуклеарни антитела, които се свързват със съответния антиген и образуват имунни комплекси (ядрен антиген + антитяло IgG, IgM, IgA)
• имунните комплекси се установяват върху базалната мембрана на различни органи и тъкани, особено на кръвоносните съдове, и активират системата на комплемента - локален възпалителен отговор
• резултатът е увреждане и дисфункция на органа

Антинуклеарните антитела са насочени срещу различни структури на нормалната клетка.

Видове антинуклеарни антитела:

• анти-Ro (SS-A) - антитела срещу протеини, свързани с РНК Y1-Y5 в сплайсозоми
• анти-Jo1 - антитела към цитоплазмения антиген Jo-1
• анти-Sm
• анти-La (SS-B) - антитела срещу протеин, свързан с РНК полимераза-3
• anti-Sci 70 - антитела към ядрена топоизомераза
• анти-U1 RNP - антитела срещу U1 рибонуклеопротеин
• антицентромерни антитела
• антихистонови антитела

Показания

• диагностика на системен лупус еритематозус, синдром на Шерген

Системен лупус еритематозус

Системен лупус еритематозус- автоимунно заболяване на съединителната тъкан и кръвоносните съдове. Това е най-тежкото заболяване на съединителната тъкан, което причинява силна болка в ставите, увреждане на кожата ("пеперуда"), серозни мембрани, сърце, бъбреци, нервна система, бели дробове и трофични нарушения.

Симптоми

• артрит - възпаление на ставата, проявяващо се с болка, подуване, нарушена подвижност, зачервяване на кожата и повишена температура над нея
• възпаление на външната обвивка на сърцето или плеврата (или) с неизвестен произход
• промени в резултатите (, - протеин или червени кръвни клетки в урината)
• - унищожаване с повишаване на нивото
• тромбоцитопения - намален брой в
• - намален брой в
• кожни симптоми - обрив, удебеляване на кожата, особено след активно
• Синдром на Рейно - периодично обезцветяване на пръстите на краката и ръцете (посиняване и зачервяване) с нарушена чувствителност и болка
• атипични неврологични и психиатрични симптоми
• повишена телесна температура, умора, загуба на тегло,

Методи

Има два метода за определяне на антинуклеарни антитела в кръвта.

Индиректна имунофлуоресцентна микроскопия(FANA - флуоресцентен тест за антинуклеарни антитела) върху препарат от Hep-2 клетки (клетъчна линия, получена от аденокарцином на ларинкса) - антинуклеарните антитела (ако има) се свързват с антигените на Hep-2 клетките, добавят специални светещи етикети, които прикрепят към образувания комплекс и под Интензитетът и видът на сиянието се изследват с помощта на микроскоп. Най-добрият метод за изследване на антинуклеарни антитела. Друго име - .

Резултатът от изследването се изписва под формата на титър - максималното разреждане на кръвта, при което се вижда блясъкът; също се описва видът на флуоресценцията (в случай на положителен резултат). Колкото повече антитела, толкова по-висок е титърът. Ниските титри се считат за отрицателни, докато високите титри показват повишена концентрация на антинуклеарни антитела.

Видове флуоресценция при оценка на ANA:

• хомогенен (дифузен, хомогенен) - за системен лупус еритематозус, смесени заболявания на съединителната тъкан (СМКБ)
• гранулиран (гранулиран) - за системен лупус еритематозус, синдром на Sjögren, склеродермия, ревматоиден артрит и MCTD - най-неспецифичният
• нуклеоларен (нуклеоларен) - при склеродермия и полимиозит
• центромерни - за склеродермия и CREST синдром
• цитоплазмени - дерматомиозит, полимиозит, автоимунни чернодробни заболявания, първична билиарна цироза

Пример за положителен резултат от тест за антинуклеарни антитела: „ Положително разреждане/титър 1:320, хомогенна картина“.

Алгоритъм на действията на лекаря след тестване на антинуклеарни антитела по метода FANA

• отрицателен резултат от теста за антинуклеарни антитела + симптоми - направете тестове: anti-Ro и anti-Jo1
• положителен резултат от теста за антинуклеарни антитела + наличие/липса на симптоми - провеждане на тестове за анти-ДНК, анти-Sm, анти-Ro, антихистонови и антицентромерни антитела, анти-Sci-70, анти-U1 RNP, анти-Jo1 - зависи от прояви на болести

Ензимен имуноанализ

Ензимен имуноанализ (ELISA)) - наличните в кръвта антитела се свързват със съответния антиген, което води до промяна в цвета на разтвора.

• по-малко от 1,0 U - отрицателен резултат (нормален)
• 1.1-2.9 U - слабо положителен (изисква повторение)
• 3.0-5.9 U - положителен
• повече от 6,0 - рязко положителен

Положителен резултат от теста за антинуклеарни антитела- това не е диагноза, а удивителен знак за необходимостта от допълнителни изследвания. Изисква периодично, по-задълбочено изследване, за да се идентифицира възможно заболяване възможно най-рано.

Отрицателният резултат от теста за антинуклеарни антитела показва липсата им в кръвта, но не изключва диагнозата автоимунно заболяване.

норма

Обикновено в кръвта няма антинуклеарни антитела.

Допълнителни изследвания

• общ анализ на урината
• ревматични тестове - скорост на утаяване на еритроцитите (СУЕ),
• циркулиращи имунни комплекси
• Допълнителен компонент C3
• Допълнителен компонент C4

Какво влияе на резултата?

• лекарства - прокаинамид, фенитоин, пеницилин, хидралазин
• Остри респираторни инфекции и настинки, всяко остро или хронично инфекциозно заболяване

Причини за АНА

1. Системни заболявания на съединителната тъкан

• — 95-100%, откриването на антинуклеарни антитела определя диагнозата
• (5-25%)
• (100%)
• (30-50%)
• ювенилен ревматоиден артрит (20-50%)
• (40-70%)
• (30-80%)
• (синдром на Шарп) 100%
• автоимунен хепатит (

Антинуклеарни антитела (ANA, ANA, антинуклеарни антитела, антинуклеарен фактор-ANF) - NIF метод върху клетъчна линия HEp-2 с определяне на вида на луминесценцията.- индикатор за автоимунни заболявания на съединителната тъкан. ANA е група от автоантитела срещу протеини и други компоненти (включително ДНК), открити в клетъчните ядра. Основни показания за употреба: изключване на диагнозата - системен лупус еритематозус (смята се, че ANA се появяват в 90% от случаите на SLE, с други думи, отрицателен резултат с вероятност от около 90% изключва диагнозата SLE), диф. диагностика на системни колагенози (системен лупус еритематозус, склеродермия, нодуларен периартериит, дерматомиозит), хроничен активен хепатит.

Към днешна дата са описани повече от 200 разновидности на ANA, насочени срещу нуклеинови киселини, хистони, протеини на ядрената мембрана, компоненти на сплайсозоми, рибонуклеоропротеини, нуклеоларни и центромерни протеини. В същото време те увреждат съединителната тъкан, което допринесе за въвеждането на определянето на антинуклеарния фактор като тест за системни заболявания на съединителната тъкан. Терминът "антинуклеарен фактор" се отнася до тест за откриване на антинуклеарни антитела чрез метода на индиректна имунофлуоресценция.

Един от методите за откриване на антинуклеарен фактор в кръвта (антинуклеарни антитела) е методът на индиректна имунофлуоресценция чрез прилагане на пациентски серум върху тъканни клетки от непрекъснатата човешка клетъчна линия HEp-2 (човешки епителен карцином на клетките на ларинкса на Hep-2 линия, съдържаща различни ядрени антигени), използвайки белязан конюгат с човешки антитела. Други човешки клетъчни линии също могат да се използват като субстрати, но поради тяхната добра морфология и лекота на култивиране, Hep-2 се превърна в общоприет субстрат за индиректна имунофлуоресценция. Метод за откриване на ANF е разработен от Tan през 1982 г., използвайки човешка непрекъсната епителиоидна клетъчна линия HEp-2 като субстрат. Тази клетъчна линия, получена от човешки ларингеален аденокарцином, е голяма полиплоидна некератинизираща плоскоклетъчна епителна клетка, която образува монослой върху стъкло. Серумът на пациента се инкубира с тъканния субстрат и антинуклеарните антитела от серума на пациента (ако има такива) се свързват със съответните ядрени антигени. Местата на свързване на автоантитела се откриват с помощта на белязан с флуоресцеин античовешки антисерум. Резултатите от реакцията се оценяват чрез микроскопия с помощта на луминисцентен микроскоп и визуална оценка на естеството на луминесценцията на свързаните антитела. Сред предимствата на HEp-2 (в сравнение с криосекциите на животински тъкани) може да се отбележи високата честота на клетъчно делене, което прави възможно откриването на антитела срещу антигени, експресирани само по време на клетъчното делене, и липсата на тъканна клетъчна матрица, което затруднява визуализирането на специфична луминесценция в сравнение с хистологичните срезове. При някои заболявания, като SLE, системна склеродермия (системна склероза) и някои инфекции, имунната система на пациента възприема ядрата (ядрените протеини) на собствените тъканни клетки като чужди и произвежда антитела към тях (антинуклеарни антитела - AHA). В същото време те увреждат съединителната тъкан, което допринесе за въвеждането на определянето на антинуклеарния фактор като тест за системни заболявания на съединителната тъкан.

При интерпретиране на данните трябва да се има предвид, че спектърът на AHA включва голяма група автоантитела срещу ДНК, нуклеопротеини, хистони, ядрени рибонуклеопротеини и други ядрени компоненти. По този начин тестът има за цел да открие различни антитела срещу ядрени и цитоплазмени компоненти, които са открити за първи път при SLE. Впоследствие диагностичните критерии на теста бяха разширени поради откриването на тези антитела при други заболявания на съединителната тъкан.

Скрининговите тестове за определяне на общата ANA обикновено използват набор от следните антигени, които са основните маркери на автоимунни заболявания на съединителната тъкан: SS-A (Ro), SS-B (La), BNP70, Sm, RNP/Sm, J01, центромер Б.
Основните антигени, използвани в съвременните комплекти за откриване на ядрени антитела от клас IgG, са представени от следния набор:

1. SS-A (Ro) - ядрени рибонуклеопротеини (полипептиди). Антителата към тях се откриват по-често при системна склеродермия (60% от случаите), синдром на Sjögren (до 70% от случаите) и SLE (до 30% от случаите). Смята се, че ако тези антитела се открият в кръвта на бременни жени, това е индикатор за риска от увеличаване на появата на неонатален лупус-подобен синдром при новородено дете (синдром на неонатален лупус). Тези майчини антитела преминават през плацентата и причиняват увреждане на плода, което води до хемолитична анемия и тромбоцитопения. Сериозните последици включват увреждане на проводната система на сърцето на детето (до постоянна сърдечна стимулация). Беше отбелязано, че жени, които са имали значителен титър на тези антитела по време на бременност, без очевидни клинични признаци, впоследствие развиват автоимунно заболяване, включително SLE.
2. SS-B (La) - ядрени протеини. Антитела срещу тях се откриват в до 60% от случаите със синдрома на Sjogren и в 15% от случаите със SLE.
3. Scl-70 е ензимен протеин, участващ в метаболизма на нуклеиновите киселини (топоизомераза-1). Антителата към този протеин са най-специфични за системна склеродермия (до 70% от случаите).
4. Двуверижната ДНК е естествена ДНК. Антителата срещу ДНК са най-специфични при SLE (до 80% от случаите) и практически не се откриват при ревматоиден артрит и склеродермия.
5. RNP/Sm - RNP/Sm антигенният комплекс се състои от U1-рибонуклеопротеини: U1-68, U1-A, U1-C, U5, U6; а също и от Sm-полипептиди: SmA | , SmB | B, SmD, SmE, SmF, SmG. Образуваните антитела към тези антигени са най-специфични за смесените заболявания на съединителната тъкан – т.е. при наличие на симптоми на склеродермия, ревматоиден артрит, СЛЕ, полимиозит (около 95% от случаите) и в по-малка степен за СЛЕ (до 30% от случаите).
6. Jo-1 е ензим - аминоацил транспортна РНК синтетаза. Автоантителата към този протеин са диагностично значими за миозит (полимиозит/дерматомиозит).
7. CENP-B (Centromere) - за откриване на анти-центромерни антитела (Anti-Centromer B), за целите на диагностицирането на синдрома CREST (този синдром е комбинация от кожна калцификация, синдром на Рейно, нарушения на подвижността на хранопровода, склеродактилия, телеангиектазия). Синдромът CREST се отнася до вариант на системна склероза (системна склероза). Тези антитела при пациенти показват благоприятен ход на системна склеродермия и показват леко увреждане на вътрешните органи.
8. Hep-2 клетките са човешки ларингеални епителни карциномни клетки от Hep-2 линията, съдържащи много различни ядрени антигени, включително SS-A (Ro) антиген и центромерни антигени. Антитела срещу Hep-2 се откриват при пациенти с полимиозит и дерматомиозит в до 90% от случаите.
9. Митохондрии (PDC) - PDC - пируват дехидрогеназен комплекс. Голяма група антимитохондриални антитела са автоантитела, които се образуват срещу ензимите на комплекса пируват дехидрогеназа, разположени в митохондриите на клетките и участващи в окислителното декарбоксилиране на пируват.

ANA често се срещат при билиарна цироза.

AHA обикновено не проникват в живите клетки и следователно са безвредни. Но понякога те образуват комплекси антиген-антитяло, които причиняват увреждане на тъканите (както при SLE, увреждане на бъбреците). Поради включването на много органи в патологичния процес, диагностичната стойност на определянето на AHA е малка и резултатите от анализа само частично потвърждават клиничните данни.

Освен при ревматични заболявания, ANA се срещат и при хроничен активен хепатит в до 50% от случаите. Възможна е поява (ниски титри) при възпалителни заболявания, онкология и вирусни инфекции.

• Сравнителна честота на откриване на антинуклеарни антитела.
  

  Заболяване и състояние	Честота на откриване, %
  SLE	95-100
  Лупоиден хепатит (ново име - хроничен автоимунен хепатит)	70 -80%
  Синдром на Felty (Felty. 1924) - ревматоиден артрит + спленомегалия + неутропения + левкопения + лимфаденопатия.	95-100
  Системна склеродермия	75-80
  Лупусен синдром, предизвикан от лекарства (хидралазин, прокаинамид, изониазид)	Около 50
  Синдром на Sjögren (Автоимунно системно увреждане на съединителната тъкан. Характеризира се с участието на екзокринните жлези, главно слюнчените и слъзните, в патологичния процес и хронично прогресиращо протичане).	40-75
  Клинично здрави роднини на пациент със СЛЕ	Около 25
  Дискоиден лупус еритематозус	15-50
  Хроничен ювенилен артрит, ревматоиден артрит	15-30
  Нодозен периартериит	15-25
  Дерматомиозит и полимиозит	10-30
  ревматизъм	Около 5
  Синдром на Рейно	15-20

Обща информация за изследването

Определянето на антинуклеарен фактор (ANF) е „златен стандарт“ за откриване на антинуклеарни антитела (ANA) и диагностициране на автоимунни заболявания.

Патогенезата на системните заболявания на съединителната тъкан (ССБТ) е тясно свързана с нарушения в имунната система и повишено производство на антитела към структурите на собствените клетки. Автоантителата към компонентите на клетъчното ядро ​​- антинуклеарни антитела - взаимодействат с нуклеинови киселини и ядрени протеини, цитоплазмени антигени, което се проявява с възпалителни промени в тъканите и органите, болки в ставите и мускулите, силна умора, загуба на тегло и кожни промени. ANA се срещат при много автоимунни заболявания, но са най-чести при системен лупус еритематозус (SLE). ANA се срещат при повече от 90% от пациентите със системни заболявания на съединителната тъкан; в момента са описани около 200 разновидности, които са обединени от едно име - антинуклеарен фактор.

При определяне на ANF чрез индиректна флуоресценция най-често се използва непрекъснатата линия от епителни клетки на човешки ларингеален аденокарцином HEp-2. HEp-2 клетките са много удобен субстрат за лабораторни изследвания, тъй като имат големи ядра и растат в един слой върху предметни стъкла. ANAs се откриват чрез свързване с вътреклетъчни антигени на HEp-2 клетки.

По време на изследването епителните клетки HEp-2 се отглеждат върху предметни стъкла, фиксират се и се инкубират с разреден серум на пациента. След отстраняване на излишния серум, клетките се инкубират с белязани с флуоресцеин антитела, след което се промиват отново и се изследват с помощта на флуоресцентен микроскоп. В този случай се определя титърът на антителата и видът на блясъка. Титър по-голям от 1:160 се счита за диагностично значим. По време на обостряне на ревматични заболявания той надвишава 1:640, а по време на ремисия намалява до 1:160-1:320. Колкото повече антитела, толкова по-висок е титърът. Въз основа на вида на сиянието е възможно да се идентифицират мишените на антинуклеарните антитела, което е от голямо клинично значение и определя тактиката за по-нататъшно изследване на пациента. Основните са периферен, гранулиран (малък/голям), нуклеоларен, центромерен и цитоплазмен тип ядрено оцветяване. Всеки тип блясък има много характерни характеристики, които позволяват да се разграничи една опция от друга.

Хомогенното (дифузно) оцветяване е свързано с наличието на антитела срещу двойноверижна ДНК, хистони и е характерно за SLE и медикаментозния лупус.

Периферната луминесценция се причинява от периферното разпределение на хроматина в ядрото, свързва се с антитела срещу ДНК и е специфична за SLE. Важно е да се разграничи този тип луминесценция от оцветяването на ядрената мембрана, което се случва при автоимунни чернодробни заболявания.

Грануларното (петнисто, ретикуларно) оцветяване е най-често срещаното и най-малко специфично; то се открива при много автоимунни заболявания. Автоантигените в този случай са нуклеопротеинови комплекси в ядрото (Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигени и PCNA).

Много високите титри на ANF с грубо-гранулиран тип луминесценция често показват смесено заболяване на съединителната тъкан.

Ядреното (нуклеоларно) оцветяване се причинява от образуването на антитела към компонентите на нуклеола (РНК полимераза-1, NOR, U 3 RNP, PM/Scl), открити при склеродермия, болест на Sjögren. Понякога ANA се повишава при ендокринни заболявания (захарен диабет тип 1, тиреоидит, тиреотоксикоза, полиендокринен синдром), кожни заболявания (псориазис, пемфигус), по време на бременност, след трансплантация на органи и тъкани, при пациенти на хемодиализа.

Центромерната луминесценция се появява в присъствието на антитела към центромерите на хромозомите и е характерна за форма на склеродермия - синдром на CREST.

Цитоплазменият тип луминесценция е свързан с антитела срещу tRNA синтетаза, по-специално към Jo-1, което е характерно за дерматомиозит и полимиозит. Този тип оцветяване се определя и при наличие на антитела към други компоненти на цитоплазмата при автоимунен хепатит и първична билиарна цироза.

Едновременното откриване на различни видове луминесценция показва наличието на различни видове антитела.

При здрави индивиди може да се открие фино-зърнеста луминесценция при ниски, умерени или високи титри на ANA, но обикновено не трябва да се откриват едрозърнести или хомогенни видове луминесценция.

В зависимост от резултатите от оценката на вида на блясъка се разработват допълнителни тактики за лечение на пациента и се предписват допълнителни изследвания за изясняване на спектъра на ANA.

За какво се използва изследването?

• За диагностика на системни заболявания на съединителната тъкан.
• За диференциална диагностика на ревматични заболявания.
• Да се ​​оцени ефективността на терапията при автоимунни заболявания.
• За проследяване на хода на системните заболявания на съединителната тъкан.

Кога е насрочено изследването?

• При симптоми на автоимунно заболяване (продължителна температура, болки в ставите, умора, загуба на тегло, кожни промени).
• При идентифициране на промени, характерни за системни заболявания на съединителната тъкан (повишена ESR, ниво на С-реактивен протеин, циркулиращи имунни комплекси).