يشير تفاعل شيك إلى وجود أو عدم وجود المستوى المطلوب من مضادات السموم في الدم لحماية الجسم من الخناق. حاليًا، يتم استخدام رد الفعل هذا بشكل أقل تكرارًا بسبب إدخال أساليب أكثر حساسية (RPGA) موضع التنفيذ.
يتم تنفيذ رد فعل شيك على الأطفال الذين تم تطعيمهم ضد الدفتيريا والذين أكملوا التطعيم وإعادة التطعيم مرة واحدة على الأقل. في سن 13 عامًا أو أكثر، يمكن تشخيص التفاعل حتى مع وجود تاريخ تطعيم غير معروف. يتم فحص حالة المناعة ضد الدفتيريا في موعد لا يتجاوز 6 أشهر بعد آخر إعادة تطعيم وفي موعد لا يتجاوز شهرين بعد الإصابة بمرض حاد.
يُعطى رد فعل شيك أيضًا للأطفال الوافدين حديثًا في المجموعات المحرومة من مرض الدفتيريا، عندما لا تكون هناك معلومات حول التطعيمات. الأطفال الذين يعانون من رد فعل شيك السلبي لا يتلقون تطعيمات إضافية. يتم إعطاء تطعيمات إضافية، بغض النظر عن الطبقة المناعية في الفريق، للأطفال الذين لديهم ردود فعل إيجابية ومشكوك فيها.
يتم إدخال نتائج رد فعل شيك في بطاقة المحاسبة التطعيمات الوقائية(ص. ٦٣) يوضح تاريخ إجراء التفاعل واختباره، دفعة السم والمعهد الذي أنتج السم.
لإجراء تفاعل Schick، يتم استخدام سم الخناق النشط المخفف (غير المسخن). 0.2 مل يحتوي على جرعة واحدة شيك.
لإجراء تفاعل شيك، ينبغي استخدام محاقن سعة جرام واحد (توبركولين)، واختبارها بعناية وبتدريجات دقيقة، لا تسمح بمرور السائل بين جدران المحقنة ومكبسها.
يُمنع منعا باتا إجراء تفاعل شيك في الأماكن التي تم فيها إعادة التطعيم ضد مرض السل في ذلك اليوم، وكذلك استخدام المحاقن والإبر وغيرها من الأدوات المستخدمة للتحصين ضد مرض السل.
يُمسح الجلد في مكان الحقن بقطعة قطن مبللة بالكحول الإيثيلي بنسبة 70٪. يتم حقن السم (0.2 مل) داخل الأدمة الجزء الأوسط سطح راحيعادة الساعد الأيسر. يتم الإدخال ببطء بجهد معروف، وهو ما يميز حقن السائل داخل الأدمة. يتم الحقن مع ميل طفيف جدًا للمحقنة نحو الساعد، بشكل موازٍ تقريبًا لسطح الجلد. يجب أن يدخل قطع الإبرة إلى الجلد بالكامل ويكون مرئيًا من خلال البشرة. في موقع الحقن، يجب أن تتشكل حويصلة بيضاء محددة جيدًا (حطاطة) يبلغ قطرها حوالي 1 سم، مع مسافة بادئة بدلاً من بصيلات الشعر ("قشر الليمون"). يتم حل هذه الحويصلة (الحطاطة) خلال 10 إلى 15 دقيقة. إذا لم تتشكل الحويصلة (الحطاطية) عند حقن مادة سامة أو تختفي بسرعة كبيرة، فهذا يشير إلى أن الحقن تم بشكل غير صحيح وعميق وأن السم الذي دخل تحت الجلد قد لا يسبب رد فعل. ونتيجة لذلك، قد يتم الحصول على نتائج غير صحيحة.
ويؤخذ التفاعل في الاعتبار بعد 72 أو 96 ساعة ويتم تقييم النتائج على النحو التالي:
أ) يكون تفاعل شيك إيجابياً إذا ظهر احمرار وارتشاح في مكان حقن السم. تتم الإشارة إلى درجة التفاعل: "+" - إذا كان قطر الاحمرار 1 -1.5 سم، (+ + " - إذا كان 1.5 - 3 سم، "+ + + " - إذا كان أكثر من 3 سم؛
ب) يكون تفاعل شيك سلبياً عندما لا يكون هناك احمرار أو ارتشاح في مكان حقن السم.
ج) يكون تفاعل شيك مشكوكًا فيه إذا كان الاحمرار والارتشاح عند تناول السم إما واضحًا بشكل غير واضح، أو إذا كان التفاعل واضحًا، فإن قطر الاحمرار يبلغ حوالي 0.5 سم (يشار إليه بـ "±").
موانع لرد فعل شيك: التشنج، والصرع، والأمراض البثرية، والاتصال بالمرضى التهاب الكبد الفيروسيالربو القصبي.
المواد المسببة للحساسية والسموم
الأدوية التشخيصية
الغلوبولين المناعي المضاد للسعال البشري (روسيا)
مصل سائل مركز منقى مضاد للدفتيريا للخيول (روسيا)
الأمصال والجلوبيولين المناعي
لقاح السل الجاف BCG-M (للتحصين الأولي اللطيف، روسيا)
لقاح السل (BCG) جاف للإعطاء داخل الأدمة (روسيا)
أكت-هيب (هيب-فاك، كوريا الجنوبية)
لقاح السعال الديكي الأحادي (روسيا)
يحتوي على بكتيريا السعال الديكي، مادة حافظة – ميرثيولات. يستخدم فقط للمؤشرات الوبائية في مناطق الإصابة بالسعال الديكي.
يحتوي على 10 ميكروغرام من السكاريد لكل جرعة المستدمية النزليةالنوع ب، مترافق مع ذوفان الكزاز، مادة حافظة – تروميتامول. يستخدم لتطعيم الأطفال من عمر شهرين حسب المؤشرات الوبائية.
المتفطرة البقرية BCG-1.تم الحصول على سلالة اللقاح من خلال زراعة طويلة الأمد (لمدة 13 عامًا) لبكتيريا السل البقري في ظل ظروف غير مواتية على وسط البطاطس والجليسرين مع إضافة الصفراء. يستعمل ل الوقاية المحددةمرض الدرن. يتم التطعيم في الأيام 5-7 من الحياة، عندما يكون الجسم خاليا من العدوى الفطرية. جميع الأطفال الأصحاء والمراهقين والبالغين الذين تقل أعمارهم عن 30 عامًا والذين يتفاعلون سلبًا مع السل يخضعون لإعادة التطعيم. لم يتم الكشف بشكل كامل عن آلية المناعة في مرض السل. في الممارسة السريريةالمعيار الرئيسي لشدة مناعة اللقاح هو انتقال تفاعل الجلد السلبي مع السلين إلى تفاعل إيجابي.
يحتوي على بكتيريا حية من سلالة اللقاح مجففة بالتجميد في محلول جلوتامات الصوديوم 1.2% المتفطرة البقرية BCG-1.يستخدم للوقاية اللطيفة من مرض السل (التطعيم الأولي) عند الأطفال حديثي الولادة في المناطق ذات الوضع غير المواتي لمرض السل.
يحتوي على أجسام مضادة ضد عصيات الدفتيريا الخارجية. يتم التعبير عن النشاط المضاد للسموم بالوحدات الدولية (10000 و 20000 وحدة دولية / مل). يستخدم لعلاج مرضى الدفتيريا. بالإضافة إلى الأغراض العلاجية، يتم استخدام مصل مضاد للدفتيريا لتحديد مدى سمية مزارع عصيات الخناق في تفاعل الترسيب الهلامي.
يحتوي على جزء نشط مناعيًا من بلازما دم المتبرع مع أجسام مضادة للسموم الخارجية لميكروب السعال الديكي (750 وحدة على الأقل من الأجسام المضادة المضادة للسعال الديكي). يستخدم لعلاج السعال الديكي.
يحتوي على سم الخناق المنقى لكل 0.2 مل من 1/40 DLM من سم خنزير غينيا. يستخدم للاختبارات داخل الأدمة لغرض التشخيص المناعي. في الأفراد، يتطور رد فعل التهابي في موقع الحقن. إذا كان الدم يحتوي على أكثر من 0.03 وحدة دولية من مضادات السموم، فإن الاختبار سلبي. في السابق، كان اختبار شيك يستخدم غالبًا لتحديد الأفراد المعرضين للإصابة بالدفتيريا. حاليًا، نظرًا لاحتمال حدوث مضاعفات، يقتصر استخدامه على مؤشرات وبائية صارمة.
السموم (من الكلمة اليونانية toxikon - السم)، وهي مواد ذات أصل بكتيري يمكنها تثبيط الوظائف الفسيولوجية، مما يؤدي إلى المرض أو الوفاة لدى الحيوانات والبشر. بطبيعتها الكيميائية، جميع السموم هي بروتينات أو ببتيدات. وهذا يختلف عن غيرها من العضوية وغير العضوية المواد السامةعندما تدخل السموم الجسم، فإنها تسبب تكوين الأجسام المضادة.
بالنسبة لبعض الأمراض المعدية (الدفتيريا، الحمى القرمزية) لتحديد قوة جهاز المناعة ومدى قابلية الأطفال للإصابة بها، اختبارات داخل الأدمةباستخدام السموم المخففة المناسبة. يحدث رد الفعل الإيجابي (التهاب موضعي للجلد في منطقة حقن السم) بسبب التأثير السام للسموم على أنسجة الجلد. يتم تفسير النتيجة السلبية للتفاعل من خلال تحييد السم الذي يتم إدخاله إلى الجلد بواسطة مضاد السموم المقابل الموجود في الجسم المناعيكمية كافية لهذا الغرض.
يتم الحصول على السموم من سلالات الميكروبات السامة (عصية الخناق أو المكورات العقدية للحمى القرمزية) عن طريق التلقيح في وسط مغذي سائل (مرق الموقد المفتوح)، يليه الترشيح من خلال المرشحات البكتيرية. من السموم التي تم الحصول عليها، يتم إعداد السموم التشخيصية شيك (الدفتيريا) وديكا (الحمى القرمزية). يتم حقن السموم داخل الأدمة، بكمية 0.2 مل (شيكا) و 0.1 مل (ديكا)، في الجزء الأوسط من السطح الداخلي للساعد.
الأناتوكسينات عبارة عن مرشحات من مزارع مرق الكائنات الحية الدقيقة السامة التي فقدت سميتها بسبب المعالجة الخاصة، ولكنها احتفظت إلى حد كبير بالخصائص المستضدية والمناعية للسموم الأصلية.
عندما تدخل السموم إلى جسم الإنسان أو الحيوان، فإنها تسبب تكوين مناعة مضادة للسموم، وهذه الخاصية تسمح باستخدامها للوقاية من تلك السموم. أمراض معدية، والتي تعتمد على عمل السموم الخارجية التي تفرزها مسببات الأمراض، وكذلك على فرط التحصين للحيوانات التي تنتج الأمصال المضادة للسموم.
بغض النظر عن نوع التوكسويد، يتم تحديد مناعته واستضداده من خلال الخصائص المقابلة للسم الأصلي. ولذلك فإن المختبرات المنتجة لهذه الأدوية تولي اهتماما كبيرا لتهيئة الظروف المثلى لتكوين السموم.
للحصول على سموم عالية القوة، هناك حاجة إلى سلالات تتميز بقدرة واضحة بشكل خاص على إنتاج السموم في ظل ظروف اصطناعية. وليست كل سلالات البكتيريا المسببة للسموم تمتلك هذه الخصائص. ولأغراض الإنتاج، يتم استخدام سلالات تتكيف مع البيئات الاصطناعية وتحتفظ باستمرار بالقدرة على تكوين السموم.
يتم تخزين مزارع العوامل المكونة للسموم إما في حالة جافة أو على الوسائط المثالية لنوع معين من البكتيريا. قبل الاستخدام لبذر دفعات جماعية، يتم تمرير السلالات على الوسط المستخدم للحصول على السم.
مع تساوي جميع الأشياء الأخرى، يتم تحديد قوة السموم من خلال جودة وسط الاستزراع، لذلك تهتم المختبرات بإعداد وسط الاستزراع. تخضع المواد الخام والمواد الكيميائية والمكونات الأخرى الموجودة في البيئة لرقابة شديدة الدقة في مختبرات الكيمياء الحيوية التابعة لمعاهد الإنتاج.
لتكوين السم، يتم استخدام الوسائط المغذية السائلة، والتي تشمل ماء اللحوم ومنتجات الهضم الهضمي (مرق مارتن، وسط رامون) أو التريبتيك (وسط البابا) للحوم.
يتم التحكم في عملية التحلل المائي للحوم عن طريق تحديد إجمالي النيتروجين الأميني ومعامل انهيار البروتين، والذي يتم حسابه من نسبة النيتروجين الأميني إلى الإجمالي. كما يتم استخدام الكازين الخالي من اللحوم والوسائط شبه الاصطناعية.
تضاف الكربوهيدرات (الجلوكوز أو المالتوز أو خليط منهما) إلى الوسط الغذائي المخصص لتكوين السم. عندما يتم تخمير الكربوهيدرات، يتم إطلاق كمية كبيرة من الطاقة، وهو أمر ضروري لعمليات التوليف التي تحدث في الثقافة النامية. إن إضافة الكربوهيدرات يزيد بشكل كبير من قوة السموم المنتجة في البيئة.
بالإضافة إلى الكربوهيدرات، هناك حاجة إلى بعض المعادن بجرعات قليلة لتكوين السم. يتم منع تكوين سموم عصية الخناق عن طريق زيادة الحديد في البيئة بقدر ما يتم تثبيطه عن طريق غيابه. وفي وجود الكميات المثلى من الحديد، يزداد تكوين السموم بشكل حاد.
يحدث تكوين السم بشكل كامل عند درجة حموضة معينة للبيئة. وفي الوقت نفسه، أثناء نمو الثقافة، تتغير قيمة الرقم الهيدروجيني ويمكن أن تصل إلى القيم التي تمنع تكوين السم.
وللتخلص من ذلك، تتم إضافة مواد عازلة للحفاظ على قيمة الرقم الهيدروجيني المطلوبة. إحدى هذه المواد التي لها خصائص عازلة هي خلات الصوديوم، والتي تضاف إلى المرق بنسبة 0.5-0.75٪.
اعتمادًا على الخصائص البيولوجية للميكروب المنتج للسموم، ظروف مختلفةويتم تنظيم الزراعة، وعلى وجه الخصوص، تهوية البيئة. تشكل عصية الخناق مادة سامة في ظل ظروف التهوية القصوى؛ وعلى العكس من ذلك، فإن عصية الكزاز وغيرها من اللاهوائيات السامة لا تحتاج إلى الأكسجين. حسب هذه اول مرةفي الحالة الثانية، تتم زراعة الثقافة في طبقة رقيقة من الوسط مع سطح ملامس كبير للهواء، وفي الحالة الثانية، يتم سكب الوسط في طبقة عالية ويتم إضافة مواد ماصة للأكسجين (الصوف القطني وخلايا الدم الحمراء الجافة) وأضاف.
تختلف درجة حرارة الزراعة ومدتها باختلاف الميكروبات. من الأمور الشائعة في عملية تكوين السم الحاجة إلى التحكم المثالي في درجة الحرارة في منظم الحرارة. تؤثر تقلبات درجات الحرارة سلبًا على قوة السم. ولذلك، فإن منظمات الحرارة التي يحدث فيها تكوين السم تكون مجهزة بمنظمات حرارة دقيقة.
في كل حالة على حدة، يتم تحديد مدة نمو المزرعة من خلال كثافة تكوين السم في سلسلة معينة من الوسائط. لحل مشكلة متى يتم التوقف عن الزراعة، يتم تحديد قوة الرقم الهيدروجيني السمي للوسط في أوقات مختلفة من الزراعة.
عندما تصل قوة السم إلى الحد الأقصى، يتم فصله عن الأجسام الميكروبية، ويتم ذلك عن طريق الترشيح من خلال مرشحات بكتيرية خاصة (الكائنات الحية الدقيقة اللاهوائية) أو مرشحات ورقية عادية (عصية الخناق).
يتم نقل المرشحات السامة إلى فاناتوكسين عن طريق التعرض لفترة طويلة للفورمالدهيد عند درجة حرارة 39-40 درجة مئوية. يتم دمج الفورمالين مع المجموعات الأمينية الحرة من الأحماض الأمينية والبوليبتيدات والبروتينات السامة، وبالتالي يفقد خصائصه السامة. يحدث انتقال توكسين الفاناتوكسين خلال 3-4 أسابيع. لتكوين ذوفان مناسب، يكون الرقم الهيدروجيني للسم مهمًا. الأكثر ملاءمة هو رد فعل محايد أو قلوي قليلاً للبيئة.
تتميز الأناتوكسينات بأنها غير ضارة تمامًا بالحيوانات. ومع ذلك، إذا لم يتم تحييدها بالكامل، فقد تحتفظ ببقايا السموم، مما يسبب ضررًا متأخرًا للجسم الحساس. ولذلك، عند التحقق من عدم ضرر السموم، تتم مراقبة الحيوانات على مدى فترة طويلة من الزمن. إن ضرر التوكسويدات لا رجعة فيه. لا يوجد تأثير يؤدي إلى استعادة السمية المفقودة.
يتم الاحتفاظ بالسموم بشكل كامل تقريبًا خصائص مستضديةالسموم. يمكن التحقق من ذلك أساليب مختلفةفي المختبر (تفاعل التلبد، تفاعل ربط التوكسويد) وفي التجارب على الحيوانات التي يؤدي فيها إعطاء التوكسويد إلى تكوين مضادات السموم المقابلة وإنشاء مناعة مضادة للسموم.
السموم ثابتة. إنهم يتسامحون مع التجميد والذوبان المتكرر، ويقاومون العمل درجة حرارة عاليةوتكون مستقرة أثناء التخزين على المدى الطويل.
بالإضافة إلى بروتينات محددة، تحتوي التوكسويدات أيضًا على مواد صابورة يمكن إطلاقها منها بطرق مختلفة. وهي تعتمد على قدرة التوكسويدات على الترسيب عند تشبعها بالأملاح المحايدة والأملاح معادن ثقيلة، الأحماض (الهيدروكلوريك، ثلاثي كلورو أسيتيك، ميتافوسفوريك)، وكذلك في وجود كحول الإيثيل وكحول الميثيل في درجات حرارة منخفضة. تُستخدم هذه الطرق حاليًا للحصول على السموم المنقاة والمركزة.
يتم امتصاص السموم على مواد غير قابلة للذوبان (أملاح الفوسفور، هيدروكسيد الألومنيوم)، ويستخدم هذا لتحضير السموم الممتزة، والتي تتميز ببطء امتصاصها في الجسم، ونتيجة لذلك يمكن الحصول على جهاز مناعة أكثر قوة.
نظرًا لعدم ضررها وقابليتها العالية للاستضداد والمناعة، تعد التوكسويدات من أكثر الوسائل قيمة للوقاية والعلاج لعدد من الأمراض.
حاليًا، تم الحصول على السموم: الخناق، والكزاز، والوشيقية، والمكورات العنقودية، والدوسنتاريا، من السموم التي تنتجها مسببات الأمراض الغرغرينا الغازية، وكذلك من سم الثعبان.
"-~-" $الأشخاص الذين لديهم مضادات السموم في الدم (حسب جرير)
°--«> % من الأشخاص حول رد فعل إيجابي. قضبان شيك (وفقًا لبارك وتسكنجر) - حالات الإصابة بالدفتيريا التوزيع حسب العمر: الأشخاص الذين لديهم مضادات السموم في الدم (٪)؛ الأشخاص الذين لديهم رد فعل إيجابي لـ Schick (في المائة)؛ الإصابة بالدفتيريا (°/ooo لكل عمر). في عمر أكثر من 5 سنوات، مع الأخذ في الاعتبار الندرة النسبية لـ Sh السلبي. أقل من 5 سنوات من العمر. وأخيرا ثالثا. ر. كما أنه يستخدم كمراقبة موضوعية لفعالية التطعيمات الوقائية ضد الخناق. تم إثبات هذه الفعالية من خلال انتقال إيجابية (قبل التطعيم) ش. سلبي بعد التطعيم (عادة بعد 6 أسابيع من آخر تطعيم). تقنية إنتاج Sh.r.: 1. من أجل تحضير التخفيف اللازم من السم بالحجم المطلوب، ابدأ من السم الخافت. لنفترض أن ديم السم = 0.0032. لتحضير سم يحتوي على I/4l) Dim في حجم 0.2، اتبع ما يلي: خذ lOODlm، في هذه الحالة = 0.32، وأضف المحلول الفسيولوجي إلى 10.0، أي 9.68. خذ 1.0 من هذا التخفيف (أي 10 ديم) وأضفه إلى 79.0 فيزيول. حل. ثم في 80.0 من التخفيف الثاني هناك 10.Dim؛ في 1 سم 3لذلك - V" Dim، وفي 0.2 - Vio Dim. لكل تخفيف، من الضروري تناول ماصة جديدة وجافة، وغسلها 10 مرات على الأقل. في هذه الحالة، يلزم دقة خاصة في القياس ودقة الماصات (يُسكب نصف تخفيف السم المحضر في دورق منفصل ويوضع في حمام ماء مغلي لمدة 10 دقائق، وبالتالي يتم الحصول على سم ساخن من أجل "التحكم") . في ضوء حقيقة أن السم، الفيزيول المخفف. الحل، يفقد نشاطه بسرعة، وهو أكثر ملاءمة لاتخاذ وما إلى ذلك للتخفيف. محلول بورات العازل (انظر. رد فعل ديك)حيث يحتفظ السم المخفف بفاعليته لعدة أشهر. 2. يتم الحقن بشكل صارم داخل الأدمة، والأكثر ملاءمة باستخدام حقنة السلين بإبرة بلاتينية رفيعة جدًا (رقم 18، 19). يجب أن يكون للإبرة شوكة قصيرة. عند الحقن يجب أن تكون اللحية متجهة للخارج. يتم إعطاء السم ببطء مع توتر معين مميز لحقن السائل داخل الأدمة، ونتيجة لذلك، يتم تشكيل فقاعة محددة جيدًا (Quaddel) في موقع الحقن، مع انخفاضات في مكان بصيلات الشعر. 3. يتم حقن السم النشط في جلد ساعد اليد اليسرى، ويتم حقن السم الساخن في جلد ساعد اليد اليمنى. أثناء الإنتاج الضخم III. ر. من المستحسن أن يقوم طبيبان بإجراء ذلك في نفس الوقت - يقوم أحدهما بحقن السم النشط والآخر الساخن. 4. العد التنازلي يتم إجراؤه مرتين: بعد 24 ساعة لحساب التفاعلات الكاذبة وبعد 96 ساعة، عندما يكون Sh الحقيقي. يصل إلى ذروته. أشعل.: Zdrodovsky P.، المشاكل الحديثة للوقاية المحددة من الدفتيريا، القوس. بيول. العلوم، المجلد الخامس والثلاثون، سر. أ، قضية. 2، 1934؛ دول جيه، العوامل المؤثرة على التوزيع الانتقائي للدفتيريا، جورن. رأ منع، الطب، v. الرابع، 1930؛ فروست دبليو، العدوى والمناعة والمرض في وبائيات الخناق، المرجع نفسه، ضد. الثاني، 1928؛ Meerseman، Fries et Renard، La difte-rie chez les suiets a رد فعل سلبي من Schick، Compt. رند، دي لا سوك. دي بيول.، ضد. الثاني عشر، 1933؛ بارك دبليو، التحصين ضد السموم ومضادات السموم ضد الخناق، جورن. عامر. ميد. الحمار، ضد. التاسع والعشرون، ص. 1584، 1922؛ Rosl ing E., Die Schickreaktion und Ihre Bedeutung, Seuchen-bekamp-fung, B. VII, 1930; Schick V., Die Diphtherietoxin-Hautreaktion des Menschen als Vorprobe des prophylak-tisohen Diphlherieheilseruminielition, M "inch. med. Wo-chenschr., 1913, No. 47; S iegl J., Zur Frage der Entste-hung der Pseudoreaktion bei der تفاعل الدفتريتوكسين ناتش شيك، آرتش إف كيندرهايلك، ب. XCVІII، 1932؛ زي إن جي هي آر أ.، اختبار شيك، مجلة عامر ميد. آس، ضد LXXVІII، 1922؛ زويلر سي، إل "التفاعل داخل الأدمة مع الأناتوكسين الخناقي أو التفاعل التشريحي، Compt. rend. de la Soc. de biol., v. XCI, 1924. انظر أيضًا مضاءة إلى الفن. حمى قرمزية. جي أورلوف.
الطرق الكيميائية الخلويةمتابعة التعرف على المواد الكيميائية والإنزيمية في الخلايا، وذلك باستخدام التفاعلات اللونية لذلك. تحفظ الأدوية الكيميائية الخلوية البنية الخلوية، والذي يسمح بتحديد الخلايا والتوطين داخل الخلايا للمركب قيد الدراسة. وهذا هو السبب في عدم إعطاء الأفضلية في أمراض الدم للبنية الخلوية الكيميائية الحيوية، كثيفة العمالة والمدمرة والمرتبطة بمجموعة خلايا غير متجانسة للغاية، ولكن للطرق الكيميائية الخلوية.
الكيمياء الخلويةأثبت أنه بين الخلايا المتطابقة شكليا هناك اختلافات كيميائية وإنزيمية كبيرة.
الجليكوجين (تفاعل CHIK) (PAS) - طريقة Hotchkiss - Mac Minus
مبدأ رد فعل CHIC. يتم التعرف على السكريات من خلال تفاعل أكسدة مجموعات الكحول التي تتحول إلى مجموعات ألدهيد، ويتم التعرف على الأخيرة من خلال تفاعل اللون مع كاشف شيف.
الكواشف لرد فعل CHIC: 1. خليط الكحول والفورمالين المثبت: 9 أجزاء مطلقة الكحول الإيثيلي+1 جزء 40% فورمالدهايد؛ تخزينها في درجة حرارة +4 درجة.
2. حمض الدوري 1% المحلول المائي. الحل عديم اللون. يخزن في قنينة زجاجية بنية اللون، في الظلام، في درجة حرارة المختبر. الحل المصفر غير صالح للاستخدام.
3. كاشف شيف. تمييع 1 غرام من الفوكسين الأساسي في 200 مل من الماء المقطر عند درجة حرارة الغليان. يقلب لمدة 5 دقائق، يبرد إلى 50 درجة، يصفى ويضاف 20 مل من حمض الهيدروكلوريك العادي. يبرد إلى 25 درجة مئوية، ويضاف 2 جم من ميتابيسلفيت الصوديوم أو البوتاسيوم، الذي يوفر المحلول بالكامل. يجب أن يقف المحلول لمدة يوم في ظروف مظلمة وباردة (+4 درجة). ثم أضف 2 جرام كربون مفعل، الدردشة لمدة 1 دقيقة. والتصفية.
يكون الترشيح الناتج شفافًا وعديم اللون. يُسمح بصبغة صفراء قليلاً. إذا تحول المحلول إلى اللون الوردي، يصبح غير صالح للاستخدام. يخزن عند درجة حرارة +4 درجة مئوية في قنينة زجاجية بنية محكمة الغلق.
4. الضوء الأخضر -1% محلول مائي.
5. الانبساط: لعاب بشري غير مسال أو محلول 0.1% من إنزيم التحلل النشواني الانبساطي في محلول ملحي فسيولوجي.
تقنية لأداء رد فعل CHIC
1) تثبيت المسحات بمزيج من الكحول والفورمالين لمدة 10 دقائق؛ الشطف بالماء المقطر.
2) الأكسدة بمحلول 1٪ من حمض الدوري، 10 دقائق؛ الشطف بالماء المقطر.
3) التلوين بكاشف شيف في وعاء مغطى، في الظلام والبرد، لمدة ساعتين؛ الشطف بالماء الجاري.
4) تلطيخ التباين مع الضوء الأخضر 1% لمدة 1 دقيقة؛ الشطف بالماء الجاري.
تم تعيين التحكم مسحةتعرض للحضانة مع دياستيز، 60 دقيقة. في درجة حرارة الغرفة لإزالة الجليكوجين بشكل انتقائي. وبعد غسله بالماء المقطر تتم معالجته بالطريقة المعتادة.
تقييم نتائج تفاعل CHIC
الجليكوجين، باللون القرمزي أحمر اللونتظهر على شكل حبوب أو متفرقة. يتم استخدام الخلايا الحبيبية اللطاخة الناضجة لمراقبة التفاعل. بالإضافة إلى الجليكوجين CHIC رد فعل إيجابيكما أنها تنتج مواد كربوهيدراتية أخرى، مثل الميوسين، والبروتينات المخاطية، والسيبروسيدات، والفيبرين. يتم تمييز الجليكوجين عن هذه المكونات عن طريق المعالجة المسبقة بالدياستاز، وبعد ذلك لم يعد الجليكوجين ملطخًا.
في المحبباتالجليكوجين في شكل مشتت بالفعل في مرحلة الخلايا النقوية ويبدأ في الزيادة مع نضوجه. في ظل الظروف العادية، تكون الخلايا الليمفاوية سلبية أو قد يحتوي 20٪ منها على عدة حبيبات صغيرة من الجليكوجين. وحيدات الخلية سلبية أو حبيبية بدقة.
شدة تلوينتحدد بشكل شبه كمي. في التفاعل، ينعكس الـ PAS على شكل مؤشر الجليكوجين، أو مؤشر التفاعل المتوسط (أستالدي). مؤشر عادييتراوح الجليكوجين من 0.10 إلى 0.30. عادةً ما تظهر الخلايا الليمفاوية المرضية فقط درجة حمل تزيد عن 3.
تمت الإشارة إليه بواسطة طريقة تفاعل CHIC:
أ) عند الإعداد تشخيص متباينبعض الأنواع الخلوية من سرطان الدم الحاد:
- تكون الخلايا النقوية والبروميلويدات سلبية لـ PHIK أو تكتسب لونًا منتشرًا ضعيفًا. تعطي أجسام الأور رد فعل إيجابي، يضعف بعد هضمها باللعاب.
- تعطي الخلايا الليمفاوية في سرطان الدم الحاد والساركوما اللمفاوية تفاعلًا حادًا إيجابيًا CHIC على شكل حبيبات أو كتل كبيرة من الجليكوجين.
- كريات الدم الحمراء في كريات الدم الحمراء وكريات الدم الحمراء الحادة تعطي تفاعلًا إيجابيًا حادًا أو حبيبيًا، على عكس كريات الدم الحمراء الطبيعية، والتي تكون سلبية PAS؛
- تكون الأرومات وحيدة الخلية إيجابية بشكل ضعيف بشكل غير متسق، مع حبيبات دقيقة.
ب) لغرض التشخيص ومراقبة فعالية علاج سرطان الدم الليمفاوي المزمن: يشير ارتفاع مؤشر الجليكوجين إلى شكل حاد من المرض وتشخيص وخيم.
نمو الجليكوجينفي الخلايا الليمفاوية المرضية، وهي ظاهرة ليست من سمات سرطان الدم، يتم تفسيرها من خلال زيادة النشاط الأيضي مع أي نوع من انتشار اللمفاوية.
ج) لتمييز خلايا جوشيه عن الخلايا البلعمية الأخرى مع التراكم.