يعد اختبار التراص الدموي غير المباشر أو السلبي (IRHA أو RPHA) أكثر حساسية وتحديدًا من اختبار التراص. يستخدم رد الفعل هذا أيضًا في اتجاهين.

1) للكشف عن الأجسام المضادة في مصل دم المريض، يتم استخدام تشخيصات كريات الدم الحمراء، حيث يتم امتصاص المستضد على سطح كريات الدم الحمراء المعالجة بالتانين. فيما يتعلق بهذا التفاعل، يُستخدم مصطلح RPHA في أغلب الأحيان.

يتم تخفيف مصل الاختبار في آبار الألواح البلاستيكية ويتم إضافة تشخيص كريات الدم الحمراء. إذا كان رد الفعل إيجابيا، تظهر طبقة رقيقة على طول جدران الحفرة على شكل “مظلة من الدانتيل”؛ رد فعل سلبي- رواسب كثيفة من خلايا الدم الحمراء على شكل "زر".

2) للكشف عن السموم والمستضدات البكتيرية في مادة الاختبار، يتم استخدام تشخيصات كريات الدم الحمراء للأجسام المضادة، والتي يتم الحصول عليها عن طريق امتزاز الأجسام المضادة على كريات الدم الحمراء. فيما يتعلق برد الفعل هذا، يتم استخدام مصطلح RNGA في كثير من الأحيان. على سبيل المثال، بمساعدة تشخيص الأجسام المضادة، يتم اكتشاف مستضد عصية الطاعون، والسموم الخارجية للدفتيريا، والسموم الخارجية للبوتولينوم.

اختبار كومبس (اختبار أبتيجلوبيولين)

يتم استخدام التفاعل للكشف عن الأجسام المضادة غير المكتملة، على سبيل المثال، الأجسام المضادة لعامل Rh. يضاف مصل الاختبار إلى كريات الدم الحمراء Rh +، حيث يفترض وجود أجسام مضادة غير كاملة لعامل Rh. بعد أن تعلق على خلايا الدم الحمراء، فإن الأجسام المضادة غير المكتملة لا تسبب التراص، حيث أنها تحتوي على مركز نشط واحد فقط. ثم يضاف مصل مضاد الجلوبيولين الذي يحتوي على أجسام مضادة للجلوبيولين البشري. يؤدي مصل مضاد الغلوبولين، بالاشتراك مع الأجسام المضادة غير المكتملة، إلى تراص خلايا الدم الحمراء.

معادلة الترسيب

جوهر التفاعل هو ترسيب (ترسيب) المستضد تحت تأثير أجسام مضادة محددة. للحصول على رد فعل واضح، وجود المنحل بالكهرباء ضروري. المستضد في تفاعل الهطول عبارة عن مواد مشتتة جزيئيًا.

رد فعل هطول الأمطار الدائريوضعت في أنابيب هطول الأمطار الضيقة. يتم سكب مصل المناعة في أنبوب اختبار، ويتم وضع مادة الاختبار فوقه بعناية. إذا كان هناك مستضد فيه، تتشكل حلقة غير شفافة من الراسب على حدود السائلين.

يستخدم رد الفعل في الطب الشرعيلتحديد أنواع البروتينات الموجودة في بقع الدم، والسائل المنوي، وما إلى ذلك؛ لتحديد المستضد في تشخيص الجمرة الخبيثة (تفاعل أسكولي) والتهاب السحايا والتهابات أخرى. في الدراسات الصحية والنظافة - لإثبات التزوير منتجات الطعام. يتم الحصول على الأمصال المناعية عن طريق تحصين الحيوانات بالمستضد المقابل. على سبيل المثال، يتم الحصول على مصل ترسيب البروتين البشري عن طريق تحصين أرنب بالبروتين البشري. عيار المصل المترسب هو أعلى تخفيف للمستضد الذي يتفاعل معه. عادة ما يستخدم المصل غير مخفف أو في تخفيف بنسبة 1:5.

رد فعل هطول هلام أجاريتم تنفيذها باستخدام عدة طرق. هذه هي تفاعل الانتشار المناعي المزدوج، وتفاعل الانتشار المناعي الشعاعي، وتفاعل الرحلان الكهربائي المناعي.

رد فعل الانتشار المناعي المزدوج(بحسب أوتشتيرلوني). ذاب هلام أجاريُسكب في طبق بتري وبعد التصلب يتم قطع الثقوب فيه. يوضع المستضد في بعض الآبار، وتوضع الأمصال المناعية في آبار أخرى، فتنتشر في الأجار وتشكل راسباً على شكل خطوط بيضاء عند نقطة الالتقاء.

تفاعل الانتشار المناعي الشعاعي(بحسب مانشيني). يضاف مصل المناعة إلى هلام الأجار المذاب ويسكب في كوب. بعد أن يتصلب الآجار، يتم قطع الآبار ووضع المستضدات فيها، والتي تنتشر في الآجار وتشكل مناطق هطول على شكل حلقة حول الآبار. كلما زاد تركيز المستضد، زاد قطر الحلقة. يتم استخدام التفاعل، على سبيل المثال، لتحديد الغلوبولين المناعي من مختلف الفئات في الدم. تعمل الغلوبولينات المناعية من فئات IgG وIgM وIgA كمستضدات في هذا التفاعل، ويتم احتواء الأجسام المضادة ضدها في أمصال مستقبلات أحادية محددة.

الرحلان الكهربائي المناعي.يتم إجراء الرحلان الكهربائي لمستضدات البروتين في هلام أجار. يتم إدخال المصل المترسب في الأخدود، الذي يمتد بالتوازي مع اتجاه حركة البروتينات. تنتشر المستضدات والأجسام المضادة في الأجار وتتشكل خطوط هطول الأمطار حيث تلتقي.

تفاعلات التحلل المناعي

يشكل المستضد (كريات الدم الحمراء أو البكتيريا)، الذي يتحد مع أجسام مضادة محددة، مركبًا مناعيًا يرتبط به المكمل (C1)، ويتم تنشيط المكمل على طول المسار الكلاسيكي. المكمل المنشط يتحلل خلايا الدم الحمراء (انحلال الدم) أو البكتيريا (التحلل الجرثومي). يتم استخدام تفاعل التحلل الجرثومي لتحديد ضمة الكوليرا.

رد فعل انحلال الدم.المستضد في التفاعل هو كريات الدم الحمراء، والأجسام المضادة (الهيموليزينات) موجودة في المصل الانحلالي. ترتبط الهيموليزينات بخلايا الدم الحمراء، ويتم تنشيط المكمل الذي يحلل خلايا الدم الحمراء. يتحول التعليق الغائم لخلايا الدم الحمراء إلى سائل أحمر ساطع وشفاف - "دم ورنيش". وبما أن تفاعل انحلال الدم يحدث فقط في وجود المتمم، فإنه يستخدم كمؤشر للكشف عن المتمم.

رد فعل انحلال الدم المحلي في الجل(رد فعل إيرني) - أحد أشكال تفاعل انحلال الدم. يعمل على تحديد عدد الخلايا المكونة للأجسام المضادة (AFC) في الطحال والغدد الليمفاوية.

يتم خلط هلام الأجار المذاب مع معلقة من خلايا الطحال وخلايا الدم الحمراء، وبعد أن يتصلب الأجار، تتم إضافة المكمل. تتشكل منطقة انحلال الدم حول كل خلية منتجة للهيموليزين. يتم تحديد عدد الخلايا المنتجة للهيموليزين من خلال عدد هذه المناطق.

يعتمد تفاعل التراص الدموي غير المباشر (السلبي) (IRHA) على حقيقة أن خلايا الدم الحمراء، إذا تم امتصاص مستضد قابل للذوبان على سطحها، تكتسب القدرة على التراص عند التفاعل مع الأجسام المضادة للمستضد الممتز. يظهر مخطط RNGA في الشكل. 34. يستخدم RNGA على نطاق واسع في تشخيص عدد من حالات العدوى.

أرز. 34. مخطط تفاعل التراص الدموي السلبي (RPHA). أ - الحصول على تشخيص كريات الدم الحمراء: ب - RPGA: 1 - كريات الدم الحمراء: 2 - المستضد قيد الدراسة؛ 3 - تشخيص كرات الدم الحمراء. 4- الأجسام المضادة للمستضد محل الدراسة: 5- متراصة

إعداد رد الفعل. يتم تسخين مصل الاختبار لمدة 30 دقيقة عند 56 درجة مئوية، ويتم تخفيفه بالتتابع بنسبة 1:10 - 1:1280 ويصب في 0.25 مل في أنابيب الاختبار أو الآبار، حيث يتم وضع قطرتين من كريات الدم الحمراء التشخيصية (كريات الدم الحمراء مع المستضد الممتز عليها). ) ثم يتم إضافتها.

الضوابط: تعليق تشخيص كريات الدم الحمراء مع مصل المناعة المعروف؛ تعليق التشخيص مع المصل الطبيعي. تعليق خلايا الدم الحمراء الطبيعية مع مصل الاختبار. في التحكم الأول، يجب أن يحدث التراص، في الثانية والثالثة لا ينبغي أن يحدث.

باستخدام RIGA، يمكنك اكتشاف مستضد غير معروف إذا تم امتصاص الأجسام المضادة المعروفة على خلايا الدم الحمراء.

يمكن إجراء تفاعل التراص الدموي في حجم 0.025 مل (الطريقة الدقيقة) باستخدام جهاز المعايرة الدقيقة Takachi.

أسئلة التحكم

1. ما الذي تشير إليه نتيجة تحليل الأشعة السينية الإيجابية بين خلايا الدم الحمراء والمادة التي يتم فحصها لوجود الفيروس؟

2. هل يحدث تراص لخلايا الدم الحمراء إذا أضيف إليها الفيروس والمصل المقابل له؟ ما اسم التفاعل الذي يكشف هذه الظاهرة؟

يمارس

تأخذ في الاعتبار وتسجيل النتيجة RIGA.

معادلة الترسيب

في تفاعل الترسيب، يتم ترسيب مركب مناعي محدد، يتكون من مستضد قابل للذوبان (ليسات، مستخلص، هابتن) وجسم مضاد محدد في وجود الشوارد.

وتسمى الحلقة الغائمة أو الراسب المتكون نتيجة لهذا التفاعل بالراسب. ويختلف هذا التفاعل بشكل أساسي عن تفاعل التراص في حجم جزيئات المستضد.

عادة ما يستخدم تفاعل الترسيب لتحديد المستضد في تشخيص عدد من الالتهابات ( الجمرة الخبيثة، التهاب السحايا، وما إلى ذلك)؛ في الطب الشرعي - لتحديد أنواع الدم والحيوانات المنوية وما إلى ذلك؛ في الدراسات الصحية والنظافة - عند إثبات تزوير المنتجات؛ وبمساعدتها يتم تحديد العلاقة التطورية بين الحيوانات والنباتات. لرد الفعل تحتاج:

1. الأجسام المضادة (الرواسب) - مصل مناعي ذو عيار مرتفع من الأجسام المضادة (لا يقل عن 1: 100000). يتم تحديد عيار المصل المترسب بواسطة أعلى تخفيف للمستضد الذي يتفاعل معه. عادة ما يستخدم المصل غير مخفف أو في تخفيف بنسبة 1:5 - 1:10.

2. المستضد - المواد الذائبة من البروتين أو عديد السكاريد الدهني (المستضدات الكاملة والنشابات).

3. الحل متساوي التوتر.

الطرق الرئيسية لتنفيذ تفاعل الترسيب هي: تفاعل الترسيب الحلقي وتفاعل الترسيب في الأجار (الجيل).

انتباه! يجب أن تكون جميع المكونات المشاركة في تفاعل الهطول شفافة تمامًا.

رد فعل هطول الأمطار الدائري. باستخدام ماصة باستور، أضف 0.2-0.3 مل (5-6 قطرات) من المصل إلى أنبوب الترسيب (يجب ألا يصل المصل إلى جدران الأنبوب). يتم وضع المستضد الموجود في نفس الحجم بعناية على المصل، ثم يتم سكبه باستخدام ماصة باستور رفيعة على طول جدار أنبوب الاختبار. يتم الاحتفاظ بأنبوب الاختبار في وضع مائل. عندما يتم وضع الطبقات بشكل صحيح، يجب أن يكون هناك حدود واضحة بين المصل والمستضد. بعناية، حتى لا يختلط السائل، ضع أنبوب الاختبار في الحامل. في نتيجة ايجابيةرد الفعل، يتم تشكيل "حلقة" غائمة على حدود المستضد والجسم المضاد - راسب (انظر الشكل 48).

ويرافق رد الفعل عدد من الضوابط (الجدول 18). يعد تسلسل إضافة مكونات التفاعل إلى أنبوب الاختبار أمرًا مهمًا للغاية. لا يمكنك وضع طبقة من المصل على المستضد (في التحكم - على محلول متساوي التوتر)، نظرًا لأن الكثافة النسبية للمصل أكبر، فسوف تغوص في قاع أنبوب الاختبار، ولن يتم الكشف عن الحدود بين السوائل.

الجدول 18. مخطط لإعداد رد فعل هطول الأمطار الحلقة

ملحوظة. + وجود "الحلقة"؛ - غياب "الخاتم".

يتم تسجيل النتائج بعد 5-30 دقيقة، وفي بعض الحالات بعد ساعة، كما هو الحال دائمًا بدءًا من أدوات التحكم. تشير "الحلقة" الموجودة في أنبوب الاختبار الثاني إلى قدرة المصل المناعي على الدخول في تفاعل محدد مع المستضد المقابل. يجب ألا تكون هناك "حلقات" في أنابيب الاختبار 3-5 - لا توجد أجسام مضادة ومستضدات تتوافق مع بعضها البعض. تشير "الحلقة" في الأنبوب الأول - نتيجة رد فعل إيجابية - إلى أن مستضد الاختبار يتوافق مع المصل المناعي المأخوذ، ويشير عدم وجود "الحلقة" ("الحلقة" في الأنبوب الثاني فقط) إلى عدم اتساقها - وهو سلبي نتيجة رد الفعل.

تفاعل الترسيب في الآجار (الجيل). تكمن خصوصية التفاعل في أن تفاعل المستضد والجسم المضاد يحدث في وسط كثيف، أي في مادة هلامية. يعطي الراسب الناتج خطًا عكرًا في سمك الوسط. يشير عدم وجود شريط إلى وجود تناقض بين مكونات التفاعل. يستخدم هذا التفاعل على نطاق واسع في أبحاث الطب الحيوي، وخاصة في دراسة تكوين السم في العامل المسبب للدفتيريا.

أسئلة التحكم

1. ما هو الفرق الرئيسي بين تفاعلات التراص وهطول الأمطار؟

2. لماذا لا يمكن استخدام المكونات الغائمة في تفاعل الهطول؟

يمارس

1. قم بإعداد تفاعل الهطول الحلقي ورسم النتيجة.

2. دراسة طبيعة تفاعل المستضد مع الجسم المضاد في تفاعل الترسيب في الأجار ورسم النتيجة (احصل على كوب من معلمك).

تفاعل التحلل (التحلل الخلوي المناعي)

التحلل المناعي هو انحلال الخلايا تحت تأثير الأجسام المضادة مع المشاركة الإجبارية للمكمل. لرد الفعل تحتاج:

1. المستضد - الميكروبات وخلايا الدم الحمراء أو الخلايا الأخرى.

2. الأجسام المضادة (ليسين) - مصل المناعة، في كثير من الأحيان مصل المريض. يحتوي المصل المحلل للبكتيريا على أجسام مضادة تشارك في تحلل البكتيريا. الانحلالي - الهيموليزينات التي تعزز تحلل خلايا الدم الحمراء. لتحلل اللولبيات، هناك حاجة إلى spirochetolysins، والخلايا - itolysins، وما إلى ذلك.

3. تكملة. الأكثر تكملة في المصل خنازير غينيا. عادة ما يستخدم هذا المصل (خليط من عدة حيوانات) كمكمل. المكمل الطازج (الأصلي) غير مستقر ويمكن تدميره بسهولة عن طريق التسخين أو الرج أو التخزين، لذلك يمكن استخدامه لمدة لا تزيد عن يومين بعد الاستلام. وللحفاظ على المكمل يضاف إليه 2% حمض البوريكو3% سلفات الصوديوم. يمكن تخزين هذا المكمل عند درجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى أسبوعين. يتم استخدام المكمل الجاف في أغلب الأحيان. قبل الاستخدام، يتم إذابته في محلول متساوي التوتر إلى الحجم الأصلي (المشار إليه على الملصق).

4. الحل متساوي التوتر.

رد فعل انحلال الدم(الجدول 19). لرد الفعل تحتاج:

1. المستضد - تعليق 3٪ من كريات الدم الحمراء للأغنام المغسولة بمعدل 0.3 مل من رواسب كريات الدم الحمراء و 9.7 مل من محلول متساوي التوتر.

2. الأجسام المضادة - مصل الدم الانحلالي (الهيموليزين) ضد كريات الدم الحمراء في الأغنام. يتم تحضيره عادةً في مرحلة الإنتاج، ويُجفف بالتجميد، ويُشار إلى العيار على الملصق.

عيار الهيموليزين هو أعلى تخفيف للمصل حيث يحدث انحلال الدم الكامل لتعليق 3٪ من خلايا الدم الحمراء في وجود المكمل. بالنسبة لتفاعل انحلال الدم، يتم أخذ الهيموليزين بعيار ثلاثي، أي مخفف 3 مرات أقل مما كان عليه قبل العيار. على سبيل المثال، مع عيار مصل 1:1200، يتم تخفيف المصل 1:400 (0.1 مل من المصل * و 39.9 مل من محلول متساوي التوتر). يعد الهيموليزين الزائد ضروريًا، حيث يمكن امتصاص بعض منه بواسطة مكونات التفاعل الأخرى.

* (لا ينبغي أن تأخذ أقل من 0.1 مل من المصل - ستتأثر دقة القياس.)

3. يتم تخفيف المكمل بنسبة 1:10 (0.2 مل من المكمل و1.8 مل من المحلول متساوي التوتر).

4. الحل متساوي التوتر.

الجدول 19. مخطط تفاعل انحلال الدم

المحاسبة عن النتائج. إذا تم تنفيذ التفاعل بشكل صحيح، سيحدث انحلال الدم في أنبوب الاختبار الأول - ستصبح محتوياته شفافة. في عناصر التحكم، يظل السائل غائمًا: في الأنبوب الثاني لا يوجد مكمل كافٍ لحدوث انحلال الدم، في الأنبوب الثالث لا يوجد هيموليزين، في الأنبوب الرابع لا يوجد هيموليزين ولا مكمل، في الأنبوب الخامس لا يوجد مستضد لا تتطابق مع الأجسام المضادة،

إذا لزم الأمر، يتم معايرة المصل الانحلالي وفقا للمخطط التالي (الجدول 20).

قبل المعايرة، قم بإعداد تخفيف مصل أولي بنسبة 1:100 (0.1 مل من المصل و 9.9 مل من محلول متساوي التوتر)، والذي يتم عمل التخفيفات اللازمة منه، على سبيل المثال:

من هذه التخفيفات، أضف 0.5 مل من المصل إلى أنابيب اختبار المعايرة، كما هو موضح في الجدول. 20.

الجدول 20. نظام معايرة المصل الانحلالي (الهيموليزين)

في المثال الوارد في الجدول. 20، عيار المصل الانحلالي هو 1:1200.

عند استخدام مصل الدم الانحلالي الطازج، يجب تعطيله لتدمير المكمل الموجود فيه. للقيام بذلك، يتم تسخينه لمدة 30 دقيقة عند 56 درجة مئوية في حمام مائي أو في المنشط مع الحرارة. الطريقة الأخيرة هي الأفضل: فهي تقضي على إمكانية ارتفاع درجة حرارة مصل اللبن، أي تمسخه. الأمصال المشوهة غير صالحة للاختبار.

رد فعل التحلل البكتيري. في هذا التفاعل، يتم تكملة البكتيريا في وجود المصل المناسب (المتماثل). مخطط التفاعل يشبه بشكل أساسي مخطط تفاعل انحلال الدم. الفرق هو أنه بعد حضانة لمدة ساعتين، يتم زرع جميع أنابيب الاختبار في أطباق بيتري مع وسط مناسب للكائنات الحية الدقيقة المأخوذة في التجربة لمعرفة ما إذا كانت قد تم تحللها. إذا تم إجراء التجربة بشكل صحيح، يجب أن تظهر الثقافات من 2-5 أنابيب اختبار (الضوابط) نموًا وفيرًا. يشير عدم النمو أو النمو الضعيف في التلقيح من أنبوب الاختبار الأول (التجربة) إلى موت الميكروبات، أي أنها متجانسة مع الجسم المضاد.

انتباه! يجب أن يتم تفاعل التحلل الجرثومي تحت ظروف معقمة.

أسئلة التحكم

1. ماذا سيحدث لخلايا الدم الحمراء إذا تم استخدام الماء المقطر بدلا من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر؟ ما هو أساس هذه الظاهرة؟

2. ما هو التفاعل الذي سيحدث عندما تتفاعل كريات الدم الحمراء مع مصل المناعة المتماثل في غياب المكمل؟

يمارس

إعداد رد فعل انحلال الدم. سجل ورسم النتيجة.

معلومات ذات صله.

تفاعل التراص الدموي غير المباشر (RIHA).

يتم استخدام RIGA في نسختين: مع الأجسام المضادة المعروفة للكشف عن الأجسام المضادة مع الأجسام المضادة المعروفة للكشف عن الأجسام المضادة. هذا التفاعل محدد، ويستخدم لتشخيص الأمراض التي تسببها البكتيريا والريكتسيا. لتنفيذ RIGA، يتم استخدام تشخيصات كريات الدم الحمراء، التي يتم إعدادها عن طريق امتزاز AG أو AT على كريات الدم الحمراء، اعتمادًا على الغرض من الدراسة (الشكل 10.3). في الحالات الإيجابية، يتم وضع علامة على درجة تراص كرات الدم الحمراء بالإيجابيات. تقوم أربع إيجابيات بتقييم التفاعل الذي يكون على شكل طبقة رقيقة من خلايا الدم الحمراء اللاصقة (المظلة) التي تغطي الجزء السفلي من أنبوب الاختبار؛ يُشار إلى وجود فيلم ذو حواف دانتيل صدفية بإيجابيتين. يعتبر العيار هو الحد الأقصى للتخفيف من مادة الاختبار التي تسببت في تراص كريات الدم الحمراء بواسطة إيجابيتين.

أرز. 10.3.

1 - خلايا الدم الحمراء، 2 - كريات الدم الحمراء AG، 3 - مترافق AG، 4-AT

RHA وتفاعل تثبيط التراص الدموي (HAI).

كما ذكرنا سابقًا، يعتمد RHA على قدرة كريات الدم الحمراء على الالتصاق ببعضها البعض عندما يتم امتصاص مستضدات معينة عليها. يتم استخدام السائل السقاء والسلوي، وتعليق الأغشية المشيمية السقاءية لأجنة الدجاج، والمعلقات والمستخلصات من المزارع أو أعضاء الحيوانات المصابة بالفيروسات، والمواد المعدية المحلية كمواد اختبار للتراص الدموي. RGA ليس تفاعلًا مصليًا، لأنه يحدث دون مشاركة المصل المناعي ويستخدم لتحديد التخفيف العامل لمستضد لتحديد مرحلة RGA أو وجود مستضد (فيروس) في مادة الاختبار (على سبيل المثال، للأنفلونزا ). يستخدم التفاعل خلايا الدم الحمراء من الحيوانات والطيور والبشر ذوي فصيلة الدم I (0). لإعداد RGA تقريبي، يتم تطبيق قطرة من تعليق 5٪ من كريات الدم الحمراء وقطرة من مادة الاختبار على شريحة زجاجية وتخلط جيدًا. إذا كانت النتيجة إيجابية، بعد 1-2 دقيقة يتم ملاحظة ظهور تراص كريات الدم الحمراء بشكل مجهري. لإعداد RGA في صف غير مطوي في آبار ألواح البوليسترين، قم بإعداد التخفيفات المتزايدة بشكل مضاعف لمواد الاختبار لكل محلول ملحيفي حجم 0.5 مل. يضاف 0.5 مل من معلق 0.25-1% من خلايا الدم الحمراء إلى جميع أنابيب الاختبار. تؤخذ النتائج في الاعتبار بعد الترسيب الكامل لكريات الدم الحمراء في السيطرة (خلايا الدم الحمراء + المحلول الملحي). يؤخذ التفاعل في الاعتبار حسب طبيعة رواسب كرات الدم الحمراء. في الحالات الإيجابية، يتم وضع علامة على درجة التراص بالإيجابيات. يتم تقييم التفاعل الذي يشبه طبقة رقيقة من خلايا الدم الحمراء اللزجة التي تغطي الجزء السفلي من أنبوب الاختبار (المظلة) بأربع إيجابيات؛ ويتم تمييز التفاعل الذي يحتوي على فجوات في الفيلم بثلاث إيجابيات؛ ووجود فيلم مزود بشريط صدفي تتميز حواف خلايا الدم الحمراء اللزجة بإيجابيتين: رواسب ندفية من خلايا الدم الحمراء محاطة بمنطقة من كتل كرات الدم الحمراء المتراصة، تتوافق مع علامة زائد واحدة. تشير رواسب كريات الدم الحمراء المحددة بشكل حاد، والتي لا يمكن تمييزها عن التحكم، إلى عدم وجود تراص. يعتبر العيار هو الحد الأقصى للتخفيف من مادة الاختبار التي تسببت في تراص كريات الدم الحمراء بواسطة إيجابيتين. إذا كانت نتيجة RGA إيجابية، تستمر الدراسة لتحديد نوع الفيروس المعزول باستخدام RT GA مع الأمصال الخاصة بالنوع. يعتمد RTGA على خاصية المصل المضاد لقمع تراص الدم الفيروسي، حيث أن الفيروس الذي يتم تحييده بواسطة أجسام مضادة معينة يفقد القدرة على تراص خلايا الدم الحمراء. بالنسبة للكتابة المبدئية للفيروسات، يتم استخدام طريقة القطرات على الزجاج. لتحديد نوع الفيروس المعزول بشكل نهائي ومعايرة الأجسام المضادة في الأمصال، يتم وضع اختبار الأشعة السينية الموسع في أنابيب الاختبار أو الآبار. لهذا الغرض، يتم تحضير التخفيفات المزدوجة للأمصال في محلول فسيولوجي وتوزيعها في 0.25 مل. أضف إلى تخفيفات المصل قطرة واحدة من مادة تحتوي على الفيروس وقطرة واحدة من معلق 1% من خلايا الدم الحمراء. عند استخدام RTGA لتحديد نوع الفيروس، يتم استخدام الأمصال الخاصة بالنوع، والتي تتم إضافتها إلى حجم متساوٍ من التخفيف العامل لـ AG. يتم تحديد نوع الفيروس المعزول من خلال المصل المناعي النوعي الذي أظهر أعلى عيار للأجسام المضادة لهذا الفيروس. يتم استخدام RGA وRTGA على نطاق واسع للتشخيص اصابات فيروسية (إلتهاب الدماغ المعدي، والأنفلونزا، وما إلى ذلك) من أجل اكتشاف أجسام مضادة محددة والتعرف على العديد من الفيروسات عن طريق أجسامها المضادة.

تفاعل التراص الدموي غير المباشر أو السلبي (IPHA)

رد الفعل هذا أكثر حساسية من رد فعل تراصويستخدم في تشخيص الالتهابات التي تسببها البكتيريا والريكتسيا والأوالي والكائنات الحية الدقيقة الأخرى.

يسمح لك RPGA باكتشاف تركيز صغير من الأجسام المضادة.

يتضمن هذا التفاعل كريات الدم الحمراء للأغنام المدبوغة أو كريات الدم الحمراء البشرية مع دم المجموعة الأولى، الحساسة بالمستضدات أو الأجسام المضادة.

إذا تم اكتشاف أجسام مضادة في مصل الاختبار، يتم استخدام خلايا الدم الحمراء المتحسسة للمستضدات (تشخيص كريات الدم الحمراء).

في بعض الحالات، إذا كان من الضروري تحديد المستضدات المختلفة في مادة الاختبار، يتم استخدام كريات الدم الحمراء المتحسسة بالجلوبيولين المناعي.

يتم أخذ نتائج RPGA في الاعتبار حسب طبيعة رواسب كرات الدم الحمراء.

تعتبر نتيجة التفاعل إيجابية عندما تغطي خلايا الدم الحمراء الجزء السفلي بالكامل من أنبوب الاختبار بالتساوي (مظلة مقلوبة).

في رد الفعل السلبي، توجد خلايا الدم الحمراء على شكل قرص صغير (زر) في منتصف الجزء السفلي من أنبوب الاختبار.

تفاعل التراص (RA)

نظرًا لخصوصيته وسهولة أدائه وإظهاره، أصبح تفاعل التراص واسع الانتشار في الممارسة الميكروبيولوجية لتشخيص العديد من الأمراض. أمراض معدية: حمى التيفوئيد وحمى نظيرة التيفية (تفاعل فيدال)، والتيفوس (تفاعل ويغل)، إلخ.

يعتمد تفاعل التراص على خصوصية تفاعل الأجسام المضادة (الراصات) مع الخلايا الميكروبية الكاملة أو الخلايا الأخرى (الراصات). ونتيجة لهذا التفاعل، يتم تشكيل الجزيئات - التكتلات التي تترسب (تتراص).

يمكن أن يشمل تفاعل التراص كلاً من البكتيريا الحية والمقتولة، واللولبيات، والفطريات، والأوالي، والريكتسيا، بالإضافة إلى خلايا الدم الحمراء والخلايا الأخرى.

يحدث التفاعل على مرحلتين: الأولى (غير مرئية) - محددة، مزيج من المستضد والأجسام المضادة، والثانية (مرئية) - غير محددة، لصق المستضدات، أي. تشكيل تراص.

يتم تشكيل الراصة عندما يتحد مركز نشط من الجسم المضاد ثنائي التكافؤ مع المجموعة المحددة للمستضد.

يحدث تفاعل التراص، مثل أي تفاعل مصلي، في وجود الشوارد.

خارجيا، مظهر رد فعل تراص إيجابي له طابع مزدوج. في الميكروبات ذات السوط التي تحتوي على مستضد O جسدي فقط، تلتصق الخلايا الميكروبية نفسها بشكل مباشر. ويسمى هذا التراص بالحبيبات الدقيقة. يحدث خلال 18 - 22 ساعة.

تحتوي الميكروبات السوطية على مستضدين - المستضد الجسدي O والمستضد السوطي H. إذا تم لصق الخلايا معًا بواسطة السوط، تتشكل رقائق كبيرة فضفاضة ويسمى تفاعل التراص هذا بالحبيبات الخشنة. يحدث خلال 2 - 4 ساعات.

يمكن إجراء تفاعل التراص لغرض التحديد النوعي والكمي لأجسام مضادة محددة في مصل دم المريض، ولغرض تحديد نوع العامل الممرض المعزول. التراص الدموي الميكروبيولوجي المعدي

يمكن إجراء تفاعل التراص في نسخة موسعة، مما يسمح لك بالعمل مع المصل المخفف إلى عيار تشخيصي، وفي نسخة تفاعل إرشادية، والتي تسمح لك، من حيث المبدأ، باكتشاف أجسام مضادة معينة أو تحديد نوع العامل الممرض .

رد فعل التراص - RA(من اللات. التراص- الالتصاق) هو تفاعل بسيط تقوم فيه الأجسام المضادة بربط المستضدات الجسيمية (البكتيريا أو كريات الدم الحمراء أو الخلايا الأخرى، والجزيئات غير القابلة للذوبان مع المستضدات الممتصة عليها، وكذلك المجاميع الجزيئية). ويحدث ذلك في وجود الشوارد، على سبيل المثال، عند إضافة محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر.

يتم استخدام خيارات مختلفة لتفاعل التراص: واسع النطاق، إرشادي، غير مباشر، وما إلى ذلك. ويتجلى تفاعل التراص في تكوين رقائق أو رواسب

يستخدم RA ل:

تحديد الأجسام المضادة في مصل الدم لدى المرضى، على سبيل المثال، المصابين بداء البروسيلات (تفاعلات رايت وهيدلسون)، حمى التيفودوالحمى نظيرة التيفية (رد فعل فيدال) وغيرها أمراض معدية;

تحديد العامل الممرض المعزول من المريض؛

تحديد فصائل الدم باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ضد مستضدات كريات الدم الحمراء.

لتحديد الأجسام المضادة لدى المريض يضعتفاعل التراص التفصيلي:إضافة إلى التخفيفات من مصل الدم للمريض التشخيص(تعليق الميكروبات المقتولة) وبعد عدة ساعات من الحضانة عند 37 درجة مئوية، لوحظ أعلى تخفيف في المصل (عيار المصل)، حيث حدث التراص، أي تشكل راسب.

تعتمد طبيعة وسرعة التراص على نوع المستضد والأجسام المضادة. ومن الأمثلة على ذلك خصوصيات تفاعل المستضدات التشخيصية (مستضدات O و R) مع أجسام مضادة محددة. رد فعل التراص مع يا التشخيص(تقتل البكتيريا بالحرارة، وتحافظ على ثباتها الحراري المستضد O)يحدث في شكل تراص دقيق الحبيبات. يكون تفاعل التراص مع H-diagnosticum (البكتيريا التي يتم قتلها بواسطة الفورمالديهايد، مع الاحتفاظ بمستضد H السوطي القابل للحرارة) خشنًا ويستمر بشكل أسرع.

إذا كان من الضروري تحديد العامل الممرض المعزول من المريض، ضع رد فعل التراص الإرشادي،باستخدام الأجسام المضادة التشخيصية (المصل المتراص)، أي يتم إجراء التنميط المصلي للعامل الممرض. رد فعل تقريبييتم إجراؤها على شريحة زجاجية. تتم إضافة مزرعة نقية من العامل الممرض المعزول من المريض إلى قطرة من المصل المتراص التشخيصي عند تخفيف بنسبة 1:10 أو 1:20. يتم وضع عنصر التحكم في مكان قريب: بدلا من المصل، يتم تطبيق قطرة من محلول كلوريد الصوديوم. عندما تظهر رواسب ندفية في قطرة تحتوي على مصل وميكروبات، أ رد فعل التراص واسعة النطاقفي أنابيب الاختبار مع زيادة التخفيفات من المصل المتراص، والتي تضاف إليها 2-3 قطرات من معلق العامل الممرض. ويؤخذ التراص بعين الاعتبار بكمية الرواسب ودرجة نقاء السائل. يعتبر التفاعل إيجابيًا إذا لوحظ التراص في تخفيف قريب من عيار المصل التشخيصي. في الوقت نفسه، يتم أخذ الضوابط في الاعتبار: يجب أن يكون المصل المخفف بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر شفافًا، ويجب أن يكون تعليق الميكروبات في نفس المحلول غائمًا بشكل موحد، بدون رواسب.

يمكن أن يتم تراص البكتيريا المختلفة ذات الصلة بواسطة نفس مصل التلصيق التشخيصي، مما يجعل التعرف عليها صعبًا. ولذلك يستخدمون الأمصال المتراصة الممتزة,والتي تمت إزالة الأجسام المضادة المتفاعلة منها عن طريق الامتزاز بالبكتيريا ذات الصلة. تحتفظ هذه الأمصال بأجسام مضادة خاصة ببكتيريا معينة فقط. تم اقتراح إنتاج الأمصال التشخيصية الخاصة ذات المستقبل الأحادي بواسطة أ. كاستيلاني (1902).

تفاعل التراص الدموي غير المباشر (السلبي).(RNGA، RPGA) يعتمد على استخدام كريات الدم الحمراء مع المستضدات أو الأجسام المضادة الممتزة على سطحها، والتي يؤدي تفاعلها مع الأجسام المضادة المقابلة أو المستضدات في مصل الدم إلى التصاق كريات الدم الحمراء ببعضها البعض وسقوطها إلى قاع الاختبار أنبوب أو خلية الخامسعلى شكل رواسب صدفية (الشكل 13.2). وفي حالة حدوث رد فعل سلبي، تستقر خلايا الدم الحمراء ■ على شكل "زر". عادة، يتم الكشف عن الأجسام المضادة في RNGA باستخدام تشخيص كريات الدم الحمراء المستضدية، وهي كريات الدم الحمراء الممتزة. علىلهم المستضدات. في بعض الأحيان يتم استخدام تشخيصات كريات الدم الحمراء المضادة لـ A، حيث يتم امتصاص الأجسام المضادة. على سبيل المثال، يمكن الكشف عن توكسين البوتولينوم عن طريق إضافة توكسين البوتولينوم إلى كريات الدم الحمراء (يسمى هذا التفاعل رد فعل التراص الدموي العكسي غير المباشر- رونج). يستخدم RNGA لتشخيص الأمراض المعدية وتحديدها هرمون الغدد التناسلية الخامسالبول عند إثبات الحمل للكشف فرط الحساسيةل الأدويةوالهرمونات وفي بعض الحالات الأخرى.

رد فعل كومز

(اختبار كومبس) - طريقة لتحديد الأجسام المضادة لعامل Rh على سطح خلايا الدم الحمراء، والتي تسبب ترسيب الجلوبيولين في مصل الدم. يستخدم هذا الاختبار للتشخيص فقر الدم الانحلاليعند الرضع الذين يعانون من عدم توافق عامل Rh والذين يعانون من تدمير خلايا الدم الحمراء.

رد فعل التخثر. يتم تحديد الخلايا المسببة للأمراض باستخدام المكورات العنقودية المعالجة مسبقًا بمصل التشخيص المناعي. المكورات العنقودية التي تحتوي على البروتين أ،وجود تقارب لجزء Fc من الغلوبولين المناعي، يمتص بشكل غير محدد الأجسام المضادة المضادة للميكروبات، والتي تتفاعل بعد ذلك مع المراكز النشطة مع الميكروبات المقابلة المعزولة من المرضى. نتيجة للتخثر، يتم تشكيل رقائق تتكون من المكورات العنقودية والأجسام المضادة في المصل التشخيصي والميكروب المكتشف.

رد فعل تثبيط التراص الدموييعتمد (RTGA) على الحصار، وقمع المستضدات الفيروسية بواسطة الأجسام المضادة في المصل المناعي، ونتيجة لذلك تفقد الفيروسات قدرتها على تراص خلايا الدم الحمراء (الشكل 13.3). يستخدم RTGA لتشخيص العديد من الأمراض الفيروسية، التي يمكن للعوامل المسببة لها (فيروسات الأنفلونزا، الحصبة، الحصبة الألمانية، التهاب الدماغ الذي ينقله القراد، وما إلى ذلك) أن تتراكم خلايا الدم الحمراء لمختلف الحيوانات.

1. وصلت مجموعة من أطباء منظمة الصحة العالمية إلى الهند لتحديد المرضى المصابين بشلل الأطفال والمساعدة في تنفيذ التطعيم الشامل ضد شلل الأطفال. في إحدى القرى التي شملتها الدراسة، تم إحضار صبي يبلغ من العمر 6 سنوات إلى الأطباء من عائلة كبيرة أصيب بالمرض منذ 5 أيام. ارتفعت درجة الحرارة فجأة، وكان هناك صداع شديد، وقيء متكرر، وألم في الذراعين والساقين. عند التفتيش: حرارة، ضعف شديد، أعراض سحائية، على الساق اليمنىمخفض قوة العضلات، تضعف ردود أفعال الأوتار بشكل حاد، وتتدلى القدم للأسفل. أثناء ثقب القناة الشوكية، يتدفق السائل النخاعي من الأسفل ضغط دم مرتفعيزداد عدد الخلايا الليمفاوية ولا يتم عزل البكتيريا. تم إجراء تشخيص أولي لـ "الشكل الشللي لشلل الأطفال". كيف يمكن أن يصاب الصبي؟ كيف يتم تنفيذ الوقاية الفعالة المحددة من شلل الأطفال؟ هل هناك خطر من نقل العدوى لأطفال آخرين في هذه العائلة فماذا يجب فعله؟

إجابة:من الممكن أن يصاب الصبي بالعدوى عن طريق البراز والفم من خلال الطعام والماء وأيضًا من خلال الرذاذ المحمول جواً. الإجراء الرئيسي للوقاية من شلل الأطفال هو التحصين بلقاح زرع حي من 3 أنماط مصلية من سلالات سابين، ويستخدم في روسيا تطعيم شلل الأطفالللإعطاء عن طريق الفم من إنتاج معهد شلل الأطفال والتهاب الدماغ الفيروسي الذي سمي باسمه. م.ب. تشوماكوفا. اللقاح عبارة عن مستحضر ثلاثي التكافؤ لسلالات سابين الموهنة من أنواع فيروس شلل الأطفال 1، 2، 3، تم الحصول عليها من مزرعة أولية لخلايا كلية القرد الأخضر الأفريقي. . التطعيمات المجدولةالأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 3 أشهر إلى 6 سنوات معرضون للإصابة بشلل الأطفال. يتم إجراء التطعيمات بلقاح شلل الأطفال عن طريق الفم باستخدام 2 أو 4 قطرات من اللقاح عن طريق الفم ثلاث مرات في 3 و4 و5 و6 أشهر مع ثلاث عمليات إعادة تطعيم في 18 و20 شهرًا و14 عامًا. يجب إدخال الصبي المريض إلى المستشفى، ويجب تطعيم جميع الأطفال الآخرين في هذه العائلة بلقاح شلل الأطفال الحي.

1. تركيب واستخدام لقاح الأنفلونزا السائل ثلاثي البوليمر (الأنفلونزا)

هذا لقاح جزيئي. التركيب: السطح Ag لفيروس الأنفلونزا من ثلاثة أنواع فرعية (A/H1N1، A/H3N2، B). التطبيق: للوقاية من الانفلونزا

بطاقة الامتحان رقم 23