هدف: إتقان تقنية إجراء تفاعلات التراص وتفاعلات الترسيب لتشخيص الأمراض المعدية.

وحدة 1.مورفولوجيا وفسيولوجيا الكائنات الحية الدقيقة. عدوى. حصانة.

الموضوع السادس عشر:رد فعل التراص. معادلة الترسيب.

أهمية الموضوع.تحت حصانةتعني مناعة الجسم ضد العوامل المعدية وغير المعدية ( الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراضوالبروتينات الأجنبية وغيرها من المواد). وتسمى هذه العوامل المستضدات. المناعة يمكن أن تكون خلقية أو مكتسبة. خلقي– عندما تتكون أجهزة حماية الأنسجة والخلطات مما يسبب مناعة ضد الأمراض المعدية التي تنتقل بالوراثة.

مكتسب– يقوم بها جهاز المناعة في الجسم على شكل إنتاج أجسام مضادة أو تراكم الخلايا الليمفاوية الحساسة. وهي مقسمة الى الطبيعية والاصطناعية. وفقا لآلية العمل يتم تقسيمها إلى نشط وسلبي. في جميع التفاعلات المناعية، المكون الرئيسي هو المستضد.

الوظيفة الأساسية الجهاز المناعيالذي يتكون من الأنسجة اللمفاوية، هو التعرف على العوامل الأجنبية (المستضدات) وتحييدها.

يمكن للمستضدات دخول الجسم من خلاله الخطوط الجوية, السبيل الهضمي، من خلال الجلد والأغشية المخاطية. يحفز كل مستضد تكوين مواد بروتينية خاصة - الأجسام المضادة.

المستضداتوتنقسم إلى كاملة وأدنى (haptens). مستضدات كاملةتحفيز الاستجابة المناعية الكاملة. المستضدات المعيبةوهي لا تحفز الاستجابة المناعية من تلقاء نفسها، ولكنها تكتسب في بعض الأحيان هذه القدرة عندما تقترن بحاملات البروتين ذات الوزن الجزيئي العالي. بالإضافة إلى ذلك، هناك مستضدات: hemihaptens، proantigens، heteroantigens وisoantigens.

الأجسام المضادةهي الجلوبيولين المناعي من مصل الدم البشري أو الحيواني. تتشكل الأجسام المضادة بعد الإصابة بالعدوى ونتيجة للتحصين بالبكتيريا الضعيفة أو المقتولة، والريكتسيا، والفيروسات، والسموم، وغيرها من العوامل. الأجسام المضادة– بروتينات الغلوبولين المناعي التركيب الكيميائيتنتمي إلى البروتينات السكرية. بناءً على بنيتها وخصائصها المناعية، يتم تقسيم الغلوبولين المناعي إلى: 5 فصول: IgM، IgG، IgA، IgE، IgD.

الأجسام المضادة الطبيعيةوجدت في الناس والحيوانات التي لم يتم تحصينها. أجسام مضادة محددةتتشكل نتيجة العدوى أو التحصين.

يسمى التفاعل بين الجسم المضاد والمستضد مصلية. الاختبارات المصلية محددة للغاية وتستخدم في تشخيص العديد من الأمراض المعدية. يتم التمييز بين تفاعلات التراص وهطول الأمطار.

1. رد فعل التراص (RA) يعتمد على تفاعل المستضد (الراصة) والجسم المضاد (الراصة)، حيث تلتصق الأجسام الميكروبية معًا وتترسب في وجود المنحل بالكهرباء. هناك تعديلات مختلفة لتفاعل التراص.

أعلى قيمةيملك:

- التراص العياني (الموسع) في أنابيب الاختبار.يضاف تعليق الميكروبات (التشخيص) إلى مصل المريض وبعد ساعة واحدة في منظم الحرارة عند درجة حرارة 37 درجة، تتم ملاحظة التخفيف (عيار) المصل الذي حدث فيه التفاعل. يعتبر تفاعل التراص إيجابيا عندما يتشكل راسب مع تصفية واضحة للسائل الطافي في الجزء السفلي من أنبوب الاختبار. ويسمى هذا الراسب تراص.

بناءً على طبيعة التراص، يتم التمييز بين الحبيبات الدقيقة (O) والحبيبات الخشنة (H). يتم استخدام منظار الراصات لتحديد الراصات ذات الحبيبات الدقيقة. يبدأ تسجيل النتائج بأنابيب التحكم. يعتبر التخفيف الأخير للمصل الذي لوحظ فيه التراص عياره.

الغرض من التفاعل: الكشف عن الأجسام المضادة في مصل المريض.

- مجهرية (متسارعة ) التراص التقريبي على الزجاج.تضاف قطرة من الثقافة البكتيرية إلى قطرة من مصل المناعة التشخيصي وتخلط بالتساوي. يحدث التفاعل في درجة حرارة الغرفة خلال 5-10 دقائق. ومن ثم تتم المحاسبة. إذا كان التفاعل إيجابيا، يلاحظ تراكم البكتيريا على شكل حبوب أو رقائق في قطرة المصل. الغرض من التفاعل: تحديد نوع الممرض باستخدام مصل تشخيصي معروف.

- تفاعل التراص الدموي غير المباشر (السلبي) (IRHA).جوهر هذا التفاعل هو أن خلايا الدم الحمراء للأغنام قادرة على امتصاص المستضدات على سطحها. تحت تأثير أجسام مضادة محددة، تلتصق خلايا الدم الحمراء ببعضها البعض وتترسب، وتشكل تراصًا دمويًا في القاع. رد الفعل حساس للغاية ومحدد. يسمح لك RNGA باكتشاف الحد الأدنى من الأجسام المضادة والمستضدات المعيبة ذات طبيعة السكاريد. يستخدم هذا التفاعل في تشخيص العديد من الأمراض المعدية (التيفوئيد والتيفوس والحمى نظيرة التيفية والسل وغيرها).

2. تفاعل الهطول (RP ) – ترسيب مجمع الأجسام المضادة. الفرق الرئيسي بين RP و RA هو أنه في RA يتم استخدام مستضد جسيمي، بينما في RP يكون المستضد عبارة عن مادة غروانية من البروتين أو طبيعة السكاريد. في هذا التفاعل، يسمى المستضد بريسيبيتينوجين وتسمى الأجسام المضادة بريسيبيتين. يتم إجراء التفاعل في أنابيب الاختبار عن طريق وضع محلول المستضد على المصل المناعي. مع نسبة مثالية من المستضد والأجسام المضادة على الحدود

تشكل هذه المحاليل حلقة من الراسب. إذا تم استخدام مستخلصات الأعضاء والأنسجة المغلية والمفلترة كمستضد، فإن التفاعل يسمى تفاعل الهطول الحراري (تفاعل أسكولي، والذي يستخدم في التشخيص الجمرة الخبيثة، الطاعون، التوليميا، الخ).

أصبحت تفاعلات الترسيب في الآجار واسعة الانتشار: طريقة الانتشار البسيطة، طريقة الانتشار المزدوج.

وهناك نوع من هطول الأمطار رد فعل التلبد- لتحديد نشاط المصل المضاد للسموم. بالإضافة إلى ذلك، يمكن استخدام هذا التفاعل لتحديد مدى سمية سلالات الوتدية الخناقية.

أهداف محددة:

· شرح دور المستضدات كمحفزات للاستجابة المناعية.

· وصف بنية المستضدات، بما في ذلك مستضدات الكائنات الحية الدقيقة.

· وصف آلية تفاعل التراص.

· وصف آلية تفاعل الهطول.

يكون قادرا على:

· شرح دور المستضدات كمحفزات للاستجابة المناعية.

· وصف بنية الأجسام المضادة (فئات مختلفة من الغلوبولين المناعي)؛

· تحليل آلية تفاعل الأجسام المضادة مع المستضدات.

· تفسير نتائج تفاعل التراص.

· تفسير نتائج تفاعل الهطول.

· تحليل النتائج التي تم الحصول عليها.

القضايا النظرية:

1. تعريف مفهوم "المستضدات"، "الأجسام المضادة".

2. دور المستضدات كمحفزات للاستجابة المناعية.

3. هيكل الأجسام المضادة (فئات مختلفة من الغلوبولين المناعي).

4. آلية تفاعل الأجسام المضادة مع المستضدات.

5. التفاعلات المناعية ودورها في الاستجابة المناعية وتشخيص الأمراض المعدية.

6. آلية تفاعل التراص.

7. آلية تفاعل الهطول.

المهام العملية التي يتم تنفيذها في الفصل:

1. إجراء تفاعل التراص للكشف عن الأجسام المضادة في مصل المريض.

2. إعداد تفاعل التراص الدقيق على الزجاج مع الأمصال التشخيصية لتحديد مزرعة البكتيريا النقية.

3. تقييم نتائج تفاعل التراص.

4. إعداد تفاعل الترسيب للكشف عن المستضد البكتيري.

5. تقييم نتائج تفاعل الهطول.

6. تقييم نتائج تفاعل التراص الدموي غير المباشر.

7. إعداد البروتوكول.

الأدب:

1. بياتكين ك.د.، كريفوشين يو.إس. علم الأحياء الدقيقة مع علم الفيروسات والمناعة.- كييف: المدرسة العليا، 1992.- 431 ص.

2. فوروبيوف إيه في، بيكوف إيه إس، باشكوف إي بي، ريباكوفا إيه إم علم الأحياء الدقيقة.- ماجستير: الطب، 1998.- 336 ص.

3. الأحياء الدقيقة الطبية / تحرير ف.ب. بوكروفسكي – م.: GEOTAR-MED، 2001. – 768 ص.

4. كوروتيايف إيه آي، بابيتشيف إس. إيه. علم الأحياء الدقيقة الطبية والمناعة وعلم الفيروسات / كتاب مدرسي الجامعات الطبية، سانت بطرسبورغ: "الأدب الخاص"، 1998.- 592 ص.

5. تيماكوف في.د.، ليفاشيف في.س.، بوريسوف إل.بي. علم الأحياء الدقيقة / الكتاب المدرسي - الطبعة الثانية، المنقحة. و إضافية – م: الطب، 1983.- 512 ص.

6. ملاحظات المحاضرة.

الأدب الإضافي:

1. تيتوف م. أمراض معدية.- ك.، 1995.– 321 ص.

2. شوفالوفا إي.بي. الأمراض المعدية.- م.: الطب، 1990.- 559 ص.

يعتمد تفاعل التراص على التفاعل المحدد للأجسام المضادة (الراصات) مع الخلايا الميكروبية الكاملة أو الخلايا الأخرى. ونتيجة لهذا التفاعل، تتشكل جزيئات متكتلة تترسب (تراص). يمكن للبكتيريا والطفيليات والفطريات والخميرة والريكتسيا وخلايا الدم الحمراء والخلايا الأخرى، الحية والمقتولة، أن تشارك في تفاعل التراص. يحدث التفاعل على مرحلتين: الأولى عبارة عن مزيج محدد من المستضد والجسم المضاد، والثانية غير محددة، أي تكوين تراص مرئي. يحدث ترسيب الراصات في وجود الشوارد الكهربائية، مثل كلوريد الصوديوم. تبقى الكائنات الحية الدقيقة الموجودة في المادة المتراصة على قيد الحياة، ولكنها تفقد قدرتها على الحركة.

يستخدم تفاعل التراص على نطاق واسع في التشخيص المصلي للأمراض المعدية وتحديد التركيب المستضدي للميكروبات المعزولة. لتحديد التركيب المستضدي للعامل الممرض المعزول من جسم المريض أو الناقل، يتم استخدام مصل مناعي محدد، يتم الحصول عليه عن طريق تحصين الحيوانات (الأرنب، الحمير، الأغنام) مع بعض الكائنات الحية الدقيقة. يتم التعرف على الميكروب من خلال تفاعل تراص على الزجاج باستخدام أمصال ممتزة أو أحادية المستقبلة أو في أنابيب اختبار ذات أمصال تراص محددة. تحتوي الأمصال الممتزة على أجسام مضادة فقط لمستضدات محددة لميكروب معين، وتحتوي الأمصال أحادية المستقبلة على أجسام مضادة لمستضد واحد محدد فقط من العامل الممرض.

تحتوي أمصال الأنواع على أجسام مضادة لجميع المستضدات الخاصة بميكروب معين.

ما إذا كانت ثقافة الكائنات الحية الدقيقة المعزولة تنتمي إليها هذا النوعيتم تحديده عن طريق التراص مع مصل معروف لعيار الجسم المضاد الموضح على ملصق أمبولة المصل. يعتبر عيار الجسم المضاد للمصل هو التخفيف الأخير، حيث لا يزال يتم ملاحظة تراص ثقافة الميكروبات المستخدمة لتحصين الحيوان. عادةً ما يتم استخدام الأمصال الممتزة والمستقبلة الأحادية غير مخففة في تفاعل التراص الزجاجي.

عند تحديد وجود الأجسام المضادة في مصل دم المريض، يتم تخفيفها بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر بدءاً من تخفيف 1: 50 إلى 1: 800 أو أكثر. يضاف معلق من الميكروبات الحية أو المقتولة إلى كل تخفيف. تسمى المستحضرات التي تحتوي على ميكروبات تم قتلها بالحرارة أو الفورمالديهايد بالتشخيصات. تحتوي نتائج التشخيص التي يتم الحصول عليها عن طريق تسخين مزارع الكائنات الحية الدقيقة على مستضدات جسدية فقط. عند استخدام الفورمالديهايد فقط، تحتفظ الميكروبات بمستضداتها السوطية.

في حالة وجود أجسام مضادة في دم المريض، فإن الاختبار التشخيصي المأخوذ في التفاعل يلتصق ببعضه البعض ويتشكل راسب (تراص) على أنبوبي اختبار. وفي هذه الحالة تعتبر نتائج تفاعل التراص إيجابية. في أنبوب التحكم، الذي يضاف إليه محلول كلوريد الصوديوم المتساوي التوتر والتشخيص، يجب أن يكون تعليق الميكروبات متجانسًا ( رد فعل سلبيالتلصيق).

يتم أخذ نتائج تفاعل التراص في بعض الأمراض، مثل داء البريميات، في الاعتبار فقط مجهريا في مجال رؤية مظلم للمجهر (التراص الدقيق). لإجراء التشخيص المصلي للمرض، يتم أخذ المرض التشخيصي بعين الاعتبار. وهو يتوافق عادةً مع تخفيف المصل بنسبة 1:100 أو 1:200.

يمكن الكشف عن الأجسام المضادة في مصل دم المريض باستخدام تفاعل التراص في حالات حمى التيفوئيد والحمى نظيرة التيفية (تفاعل فيدال)، وداء البروسيلات (تفاعل رايت)، والتولاريميا، وما إلى ذلك.
رد فعل كاستيلاني. بالنسبة للبعض أمراض معديةأو التحصين بالكائنات الحية الدقيقة التي تحتوي على مستضدات المجموعة، في مصل الدم، بالإضافة إلى الأجسام المضادة الخاصة بهذا النوع، تظهر أيضًا الأجسام المضادة الجماعية. في هذه الحالة، سيتم تراص الأنواع البكتيرية ذات الصلة بواسطة الأمصال الناتجة.

اقترح كاستيلاني طريقة لامتصاص الأجسام المضادة الجماعية من الأمصال المناعية، على أساس إزالتها بمساعدة الكائنات الحية الدقيقة من الأنواع ذات الصلة التي لديها مستضدات جماعية ولكنها تفتقر إلى مستضدات محددة. إن ثقافة هذه الكائنات الحية الدقيقة المضافة إلى المصل تمتص الأجسام المضادة للمجموعة غير المحددة، وبعد إزالة مجمع الأجسام المضادة للمستضد عن طريق الطرد المركزي، تبقى الجلوبيولينات المناعية المحددة فقط في المصل. يمكن استخدام الأمصال المعالجة وفقًا لطريقة كاستيلاني في تفاعل التراص باعتباره محددًا للغاية.

ردود الفعل المناعية. تفاعلات الأجسام المضادة للمستضد وردود الفعل مع المكونات المسمى. يستخدم لتحديد الكائنات الحية الدقيقة وتشخيص الأمراض المعدية.

تستخدم التفاعلات المناعية في الدراسات التشخيصية والمناعية لدى المرضى و الأشخاص الأصحاء. ولهذا الغرض يستخدمون الطرق المصلية (من اللات. مصل - مصل اللبن و الشعارات - التدريس)، أي طرق دراسة الأجسام المضادة والمستضدات باستخدام تفاعلات الأجسام المضادة ضد المستضدات المحددة في مصل الدم والسوائل الأخرى، وكذلك أنسجة الجسم.

إن اكتشاف الأجسام المضادة ضد المستضدات المسببة للأمراض في مصل دم المريض يسمح بتشخيص المرض. تُستخدم الدراسات المصلية أيضًا لتحديد المستضدات الميكروبية، والمواد النشطة بيولوجيًا المختلفة، وفصائل الدم، ومستضدات الأنسجة والأورام، والمجمعات المناعية، ومستقبلات الخلايا، وما إلى ذلك.

عندما يتم عزل ميكروب من مريض، يتم التعرف على العامل الممرض من خلال دراسته خصائص مستضديةاستخدام الأمصال التشخيصية المناعية، أي أمصال الدم للحيوانات شديدة المناعة والتي تحتوي على أجسام مضادة محددة. هذا هو ما يسمى تحديد المصليةالكائنات الدقيقة.

في علم الأحياء الدقيقة والمناعة، يتم استخدام التراص، والترسيب، وتفاعلات التعادل، والتفاعلات التي تتضمن المتممات، باستخدام الأجسام المضادة والمستضدات الموسومة (المناعة الإشعاعية، والمقايسة المناعية الإنزيمية، وطرق الفلورسنت المناعي) على نطاق واسع. تختلف التفاعلات المذكورة في التأثير المسجل وتقنية الإنتاج، إلا أنها كلها أساسية. تعتمد على تفاعل تفاعل المستضد مع الجسم المضاد وتستخدم للكشف عن كل من الأجسام المضادة والمستضدات. تتميز التفاعلات المناعية بحساسية وخصوصية عالية.

فيما يلي المبادئ والرسوم البيانية للتفاعلات التشخيصية الرئيسية. وترد في تقنية مفصلة لإعداد ردود الفعل. المبادئ التوجيهية العملية للتشخيص المناعي.

رد فعل التراص - RA(من اللات. aggluti- الأمة- الالتصاق) هو تفاعل بسيط تقوم فيه الأجسام المضادة بربط المستضدات الجسيمية (البكتيريا أو كريات الدم الحمراء أو الخلايا الأخرى، والجزيئات غير القابلة للذوبان مع المستضدات الممتصة عليها، وكذلك المجاميع الجزيئية). ويحدث ذلك في وجود الشوارد، على سبيل المثال، عند إضافة محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر.

يتم استخدام خيارات مختلفة لتفاعل التراص: واسع النطاق، إرشادي، غير مباشر، وما إلى ذلك. ويتجلى تفاعل التراص في تكوين رقائق أو رواسب

يستخدم RA ل:

تحديد الأجسام المضادة في مصل الدم لدى المرضى، على سبيل المثال، المصابين بداء البروسيلات (تفاعل رايت وهيدلسون)، وحمى التيفوئيد والحمى نظيرة التيفية (تفاعل فيدال) والأمراض المعدية الأخرى؛

تحديد العامل الممرض المعزول من المريض؛

تحديد فصائل الدم باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ضد مستضدات كريات الدم الحمراء.

لتحديد الأجسام المضادة لدى المريض يضعتفاعل التراص التفصيلي:إضافة إلى التخفيفات من مصل الدم للمريض التشخيص(تعليق الميكروبات المقتولة) وبعد عدة ساعات من الحضانة عند 37 درجة مئوية، لوحظ أعلى تخفيف في المصل (عيار المصل)، حيث حدث التراص، أي تشكل راسب.

تعتمد طبيعة وسرعة التراص على نوع المستضد والأجسام المضادة. ومن الأمثلة على ذلك خصوصيات تفاعل المستضدات التشخيصية (مستضدات O و R) مع أجسام مضادة محددة. رد فعل التراص مع يا التشخيص(تقتل البكتيريا بالحرارة، وتحافظ على ثباتها الحراري المستضد O)يحدث في شكل تراص دقيق الحبيبات. يكون تفاعل التراص مع H-diagnosticum (البكتيريا التي يتم قتلها بواسطة الفورمالديهايد، مع الاحتفاظ بمستضد H السوطي القابل للحرارة) خشنًا ويستمر بشكل أسرع.

إذا كان من الضروري تحديد العامل الممرض المعزول من المريض، ضع رد فعل التراص الإرشادي،باستخدام الأجسام المضادة التشخيصية (المصل المتراص)، أي يتم إجراء التنميط المصلي للعامل الممرض. يتم إجراء رد فعل إرشادي على شريحة زجاجية. تتم إضافة مزرعة نقية من العامل الممرض المعزول من المريض إلى قطرة من المصل المتراص التشخيصي عند تخفيف بنسبة 1:10 أو 1:20. يتم وضع عنصر التحكم في مكان قريب: بدلا من المصل، يتم تطبيق قطرة من محلول كلوريد الصوديوم. عندما تظهر رواسب ندفية في قطرة تحتوي على مصل وميكروبات، أ رد فعل التراص واسعة النطاقفي أنابيب الاختبار مع زيادة التخفيفات من المصل المتراص، والتي تضاف إليها 2-3 قطرات من معلق العامل الممرض. ويؤخذ التراص بعين الاعتبار بكمية الرواسب ودرجة نقاء السائل. يعتبر التفاعل إيجابيًا إذا لوحظ التراص في تخفيف قريب من عيار المصل التشخيصي. في الوقت نفسه، يتم أخذ الضوابط في الاعتبار: يجب أن يكون المصل المخفف بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر شفافًا، ويجب أن يكون تعليق الميكروبات في نفس المحلول غائمًا بشكل موحد، بدون رواسب.

يمكن أن يتم تراص البكتيريا المختلفة ذات الصلة بواسطة نفس مصل التلصيق التشخيصي، مما يجعل التعرف عليها صعبًا. ولذلك يستخدمون الأمصال المتراصة الممتزة,والتي تمت إزالة الأجسام المضادة المتفاعلة منها عن طريق الامتزاز بالبكتيريا ذات الصلة. تحتفظ هذه الأمصال بأجسام مضادة خاصة ببكتيريا معينة فقط. تم اقتراح إنتاج الأمصال التشخيصية الخاصة ذات المستقبل الأحادي بواسطة أ. كاستيلاني (1902).

تفاعل التراص الدموي غير المباشر (السلبي). (RNGA، RPGA) يعتمد على استخدام كريات الدم الحمراء مع المستضدات أو الأجسام المضادة الممتزة على سطحها، والتي يؤدي تفاعلها مع الأجسام المضادة المقابلة أو المستضدات في مصل الدم إلى التصاق كريات الدم الحمراء ببعضها البعض وسقوطها إلى قاع الاختبار أنبوب أو خلية الخامسعلى شكل رواسب صدفية (الشكل 13.2). وفي حالة حدوث رد فعل سلبي، تستقر خلايا الدم الحمراء ■ على شكل "زر". عادة، يتم الكشف عن الأجسام المضادة في RNGA باستخدام تشخيص كريات الدم الحمراء المستضدية، وهي كريات الدم الحمراء الممتزة. علىلهم المستضدات. في بعض الأحيان يتم استخدام تشخيصات كريات الدم الحمراء بالأجسام المضادة، حيث يتم امتصاص الأجسام المضادة. على سبيل المثال، يمكن الكشف عن توكسين البوتولينوم عن طريق إضافة توكسين البوتولينوم إلى كريات الدم الحمراء (يسمى هذا التفاعل رد فعل التراص الدموي العكسي غير المباشر- رونج). يستخدم RNGA لتشخيص الأمراض المعدية وتحديدها هرمون الغدد التناسلية الخامسالبول عند إثبات الحمل للكشف فرط الحساسيةل الأدويةوالهرمونات وفي بعض الحالات الأخرى.

رد فعل التخثر . يتم تحديد الخلايا المسببة للأمراض باستخدام المكورات العنقودية المعالجة مسبقًا بمصل التشخيص المناعي. المكورات العنقودية التي تحتوي على البروتين أ،وجود تقارب لنادي - جزء من الغلوبولين المناعي، يمتص بشكل غير محدد الأجسام المضادة المضادة للميكروبات، والتي تتفاعل بعد ذلك مع المراكز النشطة مع الميكروبات المقابلة المعزولة من المرضى. نتيجة للتخثر، يتم تشكيل رقائق تتكون من المكورات العنقودية والأجسام المضادة في المصل التشخيصي والميكروب المكتشف.

رد فعل تثبيط التراص الدموي يعتمد (RTGA) على الحصار، وقمع المستضدات الفيروسية بواسطة الأجسام المضادة في المصل المناعي، ونتيجة لذلك تفقد الفيروسات قدرتها على تراص خلايا الدم الحمراء (الشكل 13.3). يستخدم RTGA لتشخيص العديد من الأمراض الفيروسية، التي يمكن للعوامل المسببة لها (فيروسات الأنفلونزا، الحصبة، الحصبة الألمانية، التهاب الدماغ الذي ينقله القراد، وما إلى ذلك) أن تتراكم خلايا الدم الحمراء لمختلف الحيوانات.

تفاعل التراص لتحديد فصائل الدم يستخدم لإنشاء نظام ABO (انظر القسم 10.1.4.1) باستخدام تراص خلايا الدم الحمراء مع الأجسام المضادة في المصل المناعي ضد مستضدات فصيلة الدم A (II)، B (III). والضابط هو: المصل الذي لا يحتوي على أجسام مضادة، أي المصل أب (غو)فصائل الدم؛ المستضدات الموجودة في خلايا الدم الحمراء للمجموعات A (II)، B (III). لا يحتوي التحكم السلبي على مستضدات، أي يتم استخدام كريات الدم الحمراء من المجموعة 0 (I).

في تفاعلات التراص لتحديد عامل Rh(انظر القسم 10.1.4.1) استخدم الأمصال المضادة للريسوس (سلسلتان مختلفتان على الأقل). إذا كان هناك مستضد Rh على غشاء كريات الدم الحمراء قيد الدراسة، يحدث تراص هذه الخلايا. تعمل كريات الدم الحمراء القياسية الإيجابية والسلبية Rh لجميع فصائل الدم كعنصر تحكم.

تفاعل التراص لتحديد الأجسام المضادة للريسوس ( رد فعل غير مباشركومبس)يستخدم في المرضى الذين يعانون من انحلال الدم داخل الأوعية الدموية. في بعض هؤلاء المرضى، يتم الكشف عن الأجسام المضادة للريسوس، وهي غير كاملة وأحادية التكافؤ. وهي تتفاعل على وجه التحديد مع كريات الدم الحمراء الموجبة لعامل Rh، ولكنها لا تسبب تراصها. يتم تحديد وجود مثل هذه الأجسام المضادة غير المكتملة عن طريق اختبار كومبس غير المباشر. للقيام بذلك، يتم إضافة مصل مضاد الجلوبيولين (الأجسام المضادة ضد الجلوبيولين المناعي البشري) إلى نظام الأجسام المضادة لـ Rh + كريات الدم الحمراء الموجبة لـ Rh، مما يسبب تراص كريات الدم الحمراء (الشكل 13.4). باستخدام تفاعل كومبس، يتم تشخيص الحالات المرضية المرتبطة بتحلل كريات الدم الحمراء ذات الأصل المناعي داخل الأوعية، على سبيل المثال، مرض انحلال الدم عند الوليد: تتحد كريات الدم الحمراء لجنين إيجابي العامل الريسوسي مع أجسام مضادة غير مكتملة لعامل الريسوسي المنتشر في الدم، والتي لها يمر عبر المشيمة من أم سلبية الـRh.

ردود الفعل هطول الأمطار

معادلة الترسيب - RP (منخطوط العرض. praecipito- راسب) - هذا هو تكوين وترسيب مجمع من المستضد الجزيئي القابل للذوبان مع الأجسام المضادة في شكل غيوم يسمى ترسب.ويتكون عن طريق خلط المستضدات والأجسام المضادة بكميات متساوية؛ فائض واحد منهم يقلل من مستوى تكوين المركب المناعي.

يتم إجراء تفاعلات الترسيب في أنابيب الاختبار (تفاعل الهطول الدائري)،في المواد الهلامية، والوسائط المغذية، وما إلى ذلك. أصبحت أنواع مختلفة من تفاعلات الترسيب في المواد الهلامية شبه السائلة من الآجار أو الأغاروز منتشرة على نطاق واسع: الانتشار المناعي المزدوج وفقًا لـ Ouchterlony. الانتشار المناعي الشعاعي، الرحلان الكهربائي المناعيوإلخ.

رد فعل هطول الأمطار الدائري . يتم إجراء التفاعل في أنابيب ترسيب ضيقة تحتوي على مصل مناعي، حيث يتم وضع طبقات من المستضد القابل للذوبان. مع وجود نسبة مثالية من المستضد والأجسام المضادة، تتشكل حلقة غير شفافة من الراسب عند حدود هذين المحلولين (الشكل 13.5). لا يؤثر فائض المستضد على نتيجة تفاعل الترسيب الحلقي بسبب الانتشار التدريجي للكواشف إلى حدود السائل. إذا تم استخدام المستخلصات المائية المغلية والمرشحة للأعضاء أو الأنسجة كمستضدات في تفاعل الترسيب الحلقي، فإن هذا التفاعل يسمى تفاعل الهطول الحراري (تفاعل أسكولي،مع الجمرة الخبيثة /

تفاعل الانتشار المناعي المزدوج وفقًا لـ Ouchteruny . لإعداد التفاعل، ذاب هلام أجارتُسكب طبقة رقيقة على لوح زجاجي وبعد أن تتصلب يتم قطع ثقوب بحجم 2-3 مم فيها. يتم وضع المستضدات والأمصال المناعية بشكل منفصل في هذه الآبار، والتي تنتشر تجاه بعضها البعض. عند نقطة الالتقاء، بنسب متساوية، فإنها تشكل راسبًا على شكل شريط أبيض. في الأنظمة متعددة المكونات، تظهر عدة خطوط من الراسب بين الآبار التي تحتوي على مستضدات مختلفة وأجسام مضادة في المصل؛ بالنسبة للمستضدات المتماثلة، تندمج الخطوط الراسبة؛ أما بالنسبة لغير المتطابقة فإنها تتقاطع (الشكل 13.6).

تفاعل الانتشار المناعي الشعاعي . يُسكب مصل المناعة مع هلام الأجار المنصهر بالتساوي على الزجاج. بعد التصلب في الهلام، يتم عمل الآبار التي يتم وضع المستضد فيها التخفيفات المختلفة. المستضد، المنتشر في الجل، يشكل مناطق هطول على شكل حلقة حول الآبار مع الأجسام المضادة (الشكل 13.7). يتناسب قطر حلقة الهطول مع تركيز المستضد. يتم استخدام التفاعل لتحديد محتوى الغلوبولين المناعي من مختلف الفئات ومكونات النظام التكميلي وما إلى ذلك في الدم.

الرحلان الكهربائي المناعي- مزيج من الرحلان الكهربائي والهطول المناعي: يتم إدخال خليط من المستضدات في آبار الهلام وفصله في الجل باستخدام الرحلان الكهربائي. بعد ذلك، يتم إدخال مصل المناعة في الأخدود الموازي لمناطق الرحلان الكهربائي، حيث تشكل الأجسام المضادة، التي تنتشر في الجل، خطوط ترسيب عند نقطة الالتقاء مع المستضد.

رد فعل التلبد(بحسب رامون) (من اللات. الندفة -رقائق الصوف) - ظهور كتلة بلورية أو ندفية (هطول مناعي) في أنبوب اختبار أثناء تفاعل مضادات السموم أو مضادات السموم. يتم استخدامه لتحديد نشاط المصل المضاد للسموم أو التوكسويد.

منيع المجهر الإلكتروني - الفحص المجهري الإلكتروني للميكروبات، وغالباً الفيروسات، ويتم علاجها بالأجسام المضادة المناسبة. تشكل الفيروسات المعالجة بالمصل المناعي مجاميع مناعية (رواسب دقيقة). يتم تشكيل "تويج" من الأجسام المضادة حول الفيروسات، على النقيض من حمض الفوسفوتونجستيك أو المستحضرات الأخرى ذات الكثافة الإلكترونية الضوئية.

ردود الفعل التي تنطوي على تكملة

ردود الفعل التي تنطوي على تكملةتعتمد على تنشيط المكمل بواسطة مركب المستضد والجسم المضاد (تفاعل تثبيت المتمم، انحلال الدم الشعاعي، وما إلى ذلك).

رد فعل التثبيت المكمل (RSK) هو أنه عندما تتوافق المستضدات والأجسام المضادة مع بعضها البعض، فإنها تشكل مجمعًا مناعيًا يتم من خلالهنادي - جزء الجسم المضاد مرتبط بالمكمل (C)، أي أن المكمل يرتبط بمركب المستضد والجسم المضاد. إذا لم يتم تكوين مركب المستضد والجسم المضاد، فسيظل المكمل حرًا (الشكل 13.8). يتم تنفيذ RSK على مرحلتين: المرحلة الأولى - حضانة خليط يحتوي على ثلاثة مكونات مستضد + جسم مضاد + مكمل؛ المرحلة الثانية (المؤشر) - الكشف عن المتممة الحرة في الخليط بإضافة نظام انحلالي يتكون من كريات الدم الحمراء في الأغنام ومصل انحلالي يحتوي على أجسام مضادة لها. في المرحلة الأولى من التفاعل، عندما يتم تكوين مركب المستضد والجسم المضاد، يرتبط المتمم، ثم في المرحلة الثانية، لن يحدث انحلال الدم في كريات الدم الحمراء المتحسسة بواسطة الأجسام المضادة؛ رد الفعل إيجابي. إذا لم يتطابق المستضد والجسم المضاد مع بعضهما البعض (لا يوجد مستضد أو جسم مضاد في عينة الاختبار)، فسيظل المكمل حرًا وفي المرحلة الثانية سوف ينضم إلى مجمع الأجسام المضادة لكرات الدم الحمراء، مما يسبب انحلال الدم؛ رد الفعل سلبي.

يستخدم RSC لتشخيص العديد من الأمراض المعدية، وخاصة مرض الزهري (رد فعل فاسرمان).

تفاعل انحلال الدم الشعاعي (RRH) ) توضع في آبار هلام أجار يحتوي على خلايا الدم الحمراء للأغنام ومكملها. بعد إدخال مصل الدم الانحلالي (الأجسام المضادة ضد خلايا الدم الحمراء للأغنام) في آبار الجل، تتشكل منطقة انحلال الدم حولها (نتيجة للانتشار الشعاعي للأجسام المضادة). وبهذه الطريقة، يمكن تحديد نشاط المصل التكميلي والانحلالي، وكذلك الأجسام المضادة في مصل الدم لدى مرضى الأنفلونزا والحصبة الألمانية، إلتهاب الدماغ المعدي. للقيام بذلك، يتم امتصاص المستضدات المقابلة للفيروس على كريات الدم الحمراء، ويضاف مصل دم المريض إلى آبار الجل التي تحتوي على كريات الدم الحمراء هذه. تتفاعل الأجسام المضادة المضادة للفيروسات مع المستضدات الفيروسية الممتصة على كريات الدم الحمراء، وبعد ذلك

ثم تنضم المكونات المتممة إلى هذا المركب مسببة انحلال الدم.

رد فعل الالتزام المناعي (IAR) ) يعتمد على تنشيط النظام التكميلي بواسطة المستضدات الجسيمية (البكتيريا والفيروسات) المعالجة بالمصل المناعي. ونتيجة لذلك، يتم تشكيل المكون الثالث المنشط للمكمل (C3b)، والذي يرتبط بالمستضد الجسيمي كجزء من المجمع المناعي. تحتوي كريات الدم الحمراء والصفائح الدموية والبلاعم على مستقبلات لـ C3b، ونتيجة لذلك، عندما يتم خلط هذه الخلايا مع المجمعات المناعية التي تحمل C3b، يحدث مزيجها وتراصها.

تفاعل التعادل

الأجسام المضادة للمصل المناعي قادرة على تحييد التأثير الضار للميكروبات أو سمومها على الخلايا والأنسجة الحساسة، والذي يرتبط بحصار المستضدات الميكروبية بواسطة الأجسام المضادة، أي. تحييد. تفاعل التعادليتم تنفيذ (RN) عن طريق إدخال خليط من الأجسام المضادة للمستضد في الحيوانات أو في كائنات الاختبار الحساسة (ثقافة الخلية، الأجنة). في غياب الآثار الضارة للكائنات الحية الدقيقة أو مستضداتها أو سمومها في الحيوانات وأشياء الاختبار، يتحدثون عن التأثير المعادل للمصل المناعي، وبالتالي، خصوصية تفاعل مجمع الأجسام المضادة للمستضد (الشكل 13.9).

تفاعل التألق المناعي - RIF (طريقة الكونز)

هناك ثلاثة أنواع رئيسية من الطرق: المباشرة، وغير المباشرة (الشكل 13.10)، والمكملة. يعد تفاعل كونز طريقة تشخيصية سريعة لتحديد المستضدات الميكروبية أو تحديد الأجسام المضادة.

طريقة RIF المباشرة يعتمد على حقيقة أن مستضدات الأنسجة أو الميكروبات المعالجة بالأمصال المناعية بالأجسام المضادة الموسومة بالفلوروكرومات قادرة على التوهج في الأشعة فوق البنفسجية للمجهر الفلوري.

تتوهج البكتيريا الموجودة في اللطاخة المعالجة بمثل هذا المصل المضيء على طول محيط الخلية على شكل حدود خضراء.

طريقة RIF غير المباشرة يتكون من تحديد مركب المستضد والجسم المضاد باستخدام مصل مضاد الجلوبيولين (المضاد للأجسام المضادة) المسمى بالفلوروكروم. للقيام بذلك، يتم التعامل مع المسحات من تعليق الميكروبات بالأجسام المضادة من مصل تشخيص الأرانب المضاد للميكروبات. ثم يتم غسل الأجسام المضادة غير المرتبطة بالمستضدات الميكروبية، ويتم اكتشاف الأجسام المضادة المتبقية على الميكروبات عن طريق معالجة اللطاخة بمصل مضاد الجلوبيولين (مضاد للأرنب) المسمى بالفلوروكروم. ونتيجة لذلك، يتم تشكيل مجمع من الميكروبات + الأجسام المضادة للأرنب المضادة للميكروبات + الأجسام المضادة للأرنب الموسومة بالفلوروكروم. ويلاحظ هذا المجمع في المجهر الفلوري، كما هو الحال في الطريقة المباشرة.

طريقة أو تحليل الإنزيم المناعي (ELISA)

إليسا -الكشف عن المستضدات باستخدام الأجسام المضادة المقابلة لها المرتبطة بإنزيم العلامة (بيروكسيداز الفجل، بيتا جالاكتوزيداز أو الفوسفاتيز القلوي). بعد دمج المستضد مع المصل المناعي المسمى بالإنزيم، تتم إضافة الركيزة/الكروموجين إلى الخليط. يتم تشقق الركيزة بواسطة الإنزيم، ويتغير لون منتج التفاعل - تتناسب شدة اللون بشكل مباشر مع عدد جزيئات المستضد والجسم المضاد المرتبطة.

المرحلة الصلبة ELISA - الشكل الأكثر شيوعًا للاختبار المناعي، عندما يتم امتصاص أحد مكونات التفاعل المناعي (المستضد أو الأجسام المضادة) على مادة حاملة صلبة، على سبيل المثال، في فتحات ألواح البوليسترين

عند تحديد الأجسام المضادة، تتم إضافة مصل دم المريض ومصل مضاد الجلوبيولين المسمى بالإنزيم والركيزة (الكروموجين) للإنزيم بشكل تسلسلي إلى آبار الصفائح التي تحتوي على المستضد الممتص.

في كل مرة بعد إضافة مكون آخر، تتم إزالة الكواشف غير المرتبطة من الآبار عن طريق الغسيل الشامل. في نتيجة ايجابيةيتغير لون محلول الكروموجين. يمكن توعية حامل الطور الصلب ليس فقط بالمستضد، ولكن أيضًا بالأجسام المضادة. ثم تتم إضافة المستضد المطلوب إلى الآبار التي تحتوي على الأجسام المضادة الممتصة، ويضاف المصل المناعي ضد المستضد المسمى بالإنزيم، ثم تتم إضافة الركيزة للإنزيم.

خيار ELISA التنافسي . يتنافس المستضد المستهدف والمستضد المسمى بالإنزيم مع بعضهما البعض لربط كمية محدودة من الأجسام المضادة في المصل المناعي. اختبار آخر - الأجسام المضادة التي تبحث عنها

وتتنافس الأجسام المضادة الموسومة مع بعضها البعض على المستضدات.

طريقة المناعة الإشعاعية أو التحليل (RIA)

طريقة حساسة للغاية تعتمد على تفاعل المستضد والجسم المضاد باستخدام المستضدات أو الأجسام المضادة الموسومة بالنويدات المشعة (125 J، 14 C، 3 H، 51 Cr، وما إلى ذلك). بعد التفاعل بينهما، يتم فصل المجمع المناعي المشع الناتج ويتم تحديد نشاطه الإشعاعي في العداد المناسب (أشعة بيتا أو جاما):

تتناسب شدة الإشعاع بشكل مباشر مع عدد جزيئات المستضد والجسم المضاد المرتبطة.

في نسخة RIA ذات المرحلة الصلبة يتم امتصاص أحد مكونات التفاعل (المستضد أو الأجسام المضادة) على دعامة صلبة، على سبيل المثال، في آبار ألواح البوليسترين الدقيقة. خيار آخر هو الأسلوب ريا تنافسية.يتنافس المستضد المرغوب والمستضد المسمى بالنويدات المشعة مع بعضهما البعض لربط كمية محدودة من الأجسام المضادة في المصل المناعي. يستخدم هذا الخيار لتحديد كمية المستضد في مادة الاختبار.

يستخدم RIA لتحديد المستضدات الميكروبية، وتحديد الهرمونات والإنزيمات، المواد الطبيةوالجلوبيولين المناعي، بالإضافة إلى المواد الأخرى الموجودة في مادة الاختبار بتركيزات بسيطة - 10~ |0 -I0~ 12 جم/لتر. تشكل هذه الطريقة مخاطر بيئية معينة.

اللطخة المناعية

اللطخة المناعية (IB)- طريقة حساسة للغاية تعتمد على مزيج من الرحلان الكهربائي وELISA أو RIA.

يتم عزل المستضد باستخدام الرحلان الكهربائي في هلام بولي أكريلاميد، ثم يتم نقله (النشاف - من الإنجليزية. لطخة, وصمة عار) من الجل على الورق المنشط أو غشاء النيتروسليلوز وتطويرها باستخدام ELISA. تنتج الشركات مثل هذه الشرائط بـ "البقع"

المستضدات. يتم وضع مصل المريض على هذه الشرائط. بعد ذلك، بعد الحضانة، يتم غسل المريض من الأجسام المضادة غير المرتبطة ويتم تطبيق مصل ضد الغلوبولين المناعي البشري الموسوم بالإنزيم. يتم اكتشاف المستضد المركب + الجسم المضاد للمريض + الجسم المضاد ضد Ig البشري المتكون على الشريط عن طريق إضافة ركيزة/مولد اللون الذي يتغير لونه تحت تأثير الإنزيم (الشكل 13.12).

يتم استخدام IB كوسيلة لتشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية، وما إلى ذلك.

التراص هو لصق البكتيريا نتيجة تفاعل ATs معينة معها. لتنفيذ التهاب المفاصل الروماتويدي، هناك حاجة إلى ثلاثة مكونات: 1) AG (الراصات)؛ 2) ال (راصة) ؛ 3) محلول الإلكتروليت (محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر). فقط المستضدات الجسيمية (البكتيريا، وخلايا الدم الحمراء، وجزيئات اللاتكس المحملة بالمستضد) تشارك في تفاعل التراص.

رد فعل التراص على الزجاج. يتم وضع قطرة من المصل التشخيصي على شريحة زجاجية خالية من الدهون باستخدام ماصة (تخفيف المصل 1:10 - 1:20). باستخدام الحلقة البكتريولوجية، يتم أخذ مزرعة نقية للكائن الدقيق قيد الدراسة من سطح الأجار المائل، ونقلها إلى قطرة من المصل وخلطها. تؤخذ نتيجة التفاعل بعين الاعتبار بالعين المجردة بعد 3-5 دقائق. إذا كان التفاعل إيجابيا، يتم ملاحظة ظهور رقائق (كبيرة أو صغيرة) في قطرة من المصل، ويمكن رؤيتها بوضوح على خلفية داكنة عند رج الشريحة. في حالة حدوث تفاعل سلبي، يظل السائل غائما بشكل موحد.

رد فعل التراص في أنابيب الاختبار. يضاف 1 مل من المحلول الفسيولوجي إلى صف من أنابيب الاختبار. تتم إضافة كمية متساوية من مصل الدم الذي يتم اختباره إلى أنبوب الاختبار الأول. يتم تحضير التخفيفات التسلسلية ذات الشقين من المصل (معايرة المصل)، وبعد ذلك يتم إضافة قطرتين من معلق البكتيريا المعطلة (التشخيص) إلى كل أنبوب اختبار. يتم وضع الأنابيب في منظم الحرارة عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين. يستمر التفاعل بتكوين رقائق صغيرة غير مرئية للعين المجردة، لذلك يتم تسجيل النتائج تحت تكبير طفيف في جهاز خاص - منظار الراصات. يتم أخذ شدة التراص في الاعتبار وفقًا لنظام "أربعة زائد": تراص كامل - 4+، تراص جزئي - 3+ أو 2+، نتيجة مشكوك فيها - +. يتم أخذ التخفيف الأخير الذي يتم فيه ملاحظة تراص 2+ على أنه عيار الجسم المضاد في مصل الاختبار.

يتم إجراء تفاعل تراص في أنابيب الاختبار (تفاعل تراص واسع النطاق) لتحديد عيار الأجسام المضادة لمسببات الأمراض حمى التيفودوالحمى نظيرة التيفية (تفاعل فيدال)، وداء البروسيلات (تفاعل رايت)، والتيفوس (تفاعل ويجل).

التلصيق (من اللاتينية agglutinatio - الإلتصاق) هو لصق (اتصال) الجسيمات الجسيمية الحاملة للمستضد (الخلايا الكاملة، جزيئات اللاتكس، وما إلى ذلك) مع جزيئات من أجسام مضادة محددة في وجود إلكتروليتات، والتي تنتهي بتكوين رقائق أو رواسب (تراص) يمكن رؤيته بالعين المجردة. تعتمد طبيعة الرواسب على طبيعة المستضد: تنتج البكتيريا السوطية رواسب خشنة، والبكتيريا السوطية وغير المحفظة تنتج رواسب دقيقة الحبيبات، وتنتج البكتيريا المحفظة رواسب خيطية. يتم التمييز بين التراص المباشر، حيث تشارك المستضدات الخاصة بالخلية البكتيرية أو أي خلية أخرى، مثل كريات الدم الحمراء، بشكل مباشر في التفاعل مع أجسام مضادة محددة؛ وغير المباشرة، أو السلبية، حيث تكون الخلايا البكتيرية أو كريات الدم الحمراء، أو جزيئات اللاتكس حاملة ليست خاصة بها، ولكن لمستضدات أجنبية (أو أجسام مضادة) ممتصة عليها لتحديد الأجسام المضادة (أو المستضدات) الخاصة بها. يتضمن تفاعل التراص بشكل أساسي أجسامًا مضادة تنتمي إلى فئتي IgG وIgM. ويحدث على مرحلتين: أولاً، يحدث تفاعل محدد بين المركز النشط للأجسام المضادة ومحدد المستضد، ويمكن أن تحدث هذه المرحلة في غياب الإلكتروليتات ولا تكون مصحوبة بتغيرات مرئية في نظام التفاعل. بالنسبة للمرحلة الثانية - تكوين الراصات - من الضروري وجود الشوارد، مما يقلل الشحنة الكهربائيةمجمعات المستضد + الأجسام المضادة وتسريع عملية لصقها. تنتهي هذه المرحلة بتكوين مادة تراصية.

يتم إجراء تفاعلات التراص إما على ألواح زجاجية أو من الورق المقوى الملساء، أو في أنابيب تراص معقمة. عادة ما تستخدم تفاعلات التراص (المباشرة والسلبية) على الزجاج طريقة معجلةالكشف عن أجسام مضادة محددة في مصل المريض (على سبيل المثال، داء البروسيلات) أو للتعرف المصلي على العامل الممرض. في الحالة الأخيرة، عادة ما يتم استخدام الأمصال التشخيصية النقية (الممتصة) التي تحتوي فقط على الأجسام المضادة أحادية المستقبل أو مجموعة منها لمستضدات مختلفة. إن الميزة التي لا شك فيها لتفاعل التراص على الزجاج هي بساطة تنفيذه وحقيقة أنه يستغرق عدة دقائق أو حتى ثواني، حيث يتم استخدام كلا المكونين في شكل مركز. ومع ذلك، فهو ذو قيمة نوعية فقط وأقل حساسية من أنبوب الاختبار. يعطي تفاعل التراص الشامل في أنابيب الاختبار نتائج أكثر دقة، لأنه يسمح لك بتحديد المحتوى الكمي للأجسام المضادة في المصل (تحديد عيارها)، وإذا لزم الأمر، تسجيل حقيقة الزيادة في عيار الأجسام المضادة، والتي لها قيمة تشخيصية . لإعداد التفاعل، تتم إضافة محلول مخفف بنسبة 0.85% إلى أنابيب التراص بطريقة معينة. محلول كلوريد الصوديوممصل وحجم متساو (عادة 0.5 مل) من معلق تشخيصي قياسي (أو مزرعة اختبار) يحتوي على مليار بكتيريا في 1 مل. يتم تسجيل نتائج تفاعل التراص أولاً بعد ساعتين من حضانة الأنابيب عند 37 درجة مئوية وأخيراً بعد 20-24 ساعة وفقاً لمعيارين: وجود وحجم الراسب ودرجة شفافية السائل الطافي. يتم التقييم وفق النظام الرباعي. يصاحب التفاعل بالضرورة التحكم في المصل والمستضد. في الحالات التي يتم فيها إجراء تفاعل التراص التفصيلي في أنبوب اختبار للتعرف المصلي على العامل الممرض، يكون له قيمة تشخيصية إذا تم تقييم التفاعل على أنه إيجابي عندما يتم تخفيف المصل التشخيصي إلى نصف عياره على الأقل.

يجب أن يؤخذ في الاعتبار أنه عند خلط محاليل المستضدات والأجسام المضادة المتماثلة، لا يتم دائمًا ملاحظة المظاهر المرئية لتفاعل التراص. يتشكل الراسب فقط عند نسب مثالية معينة لكلا مكونات التفاعل. خارج هذه الحدود، مع وجود فائض كبير في المستضد أو الأجسام المضادة، لا يلاحظ أي تفاعل. وتسمى هذه الظاهرة "ظاهرة البروزون". ويلاحظ في كل من تفاعل التراص وفي تفاعل الهطول. يتم تفسير ظهور البروزون في التفاعلات المناعية من خلال حقيقة أن المستضدات المشاركة فيها، كقاعدة عامة، تكون متعددة المحددات، والجزيئات الأجسام المضادة IgGلديها مركزين نشطين. مع وجود فائض من الأجسام المضادة، يتم تغطية سطح كل جسيم مستضد بجزيئات الجسم المضاد بحيث لا تبقى مجموعات محددة حرة، وبالتالي لا يمكن للمركز النشط الثاني غير المنضم للأجسام المضادة أن يتفاعل مع جسيم مستضد آخر ويربطها ببعضها البعض. يتم أيضًا قمع تكوين تراص أو راسب مرئي عندما يكون هناك فائض من المستضد، عندما لا يبقى مركز نشط حر واحد للأجسام المضادة، وبالتالي لم يعد من الممكن تكبير مستضد + جسم مضاد + مجمعات مستضد.

خيارات لتفاعلات التراص المتسارعة. رد فعل التراص الدموي السلبيومتغيراته

يتضمن تفاعل التراص الكلاسيكي استخدام المستضدات الجسيمية. ومع ذلك، قد تشارك أيضًا المستضدات القابلة للذوبان. ولجعل ذلك ممكنًا، يتم امتصاص هذه المستضدات على جزيئات خاملة مناعيًا. يمكن استخدام جزيئات اللاتكس أو البنتونيت كحامل، ولكن حاليًا يتم استخدام كريات الدم الحمراء الحيوانية أو البشرية في أغلب الأحيان، مما يحسن خصائصها الممتصة عن طريق معالجتها بمحلول التانين أو الفورمالين أو البنزيدين. تسمى خلايا الدم الحمراء التي امتصت مستضدًا على نفسها بأنها حساسة لهذا المستضد و رد الفعل المناعيالذي تشارك فيه هو تفاعل التراص الدموي غير المباشر أو السلبي (IRHA، أو RPHA)، حيث تشارك خلايا الدم الحمراء فيه بشكل سلبي.

يتم وضع RPGA في ألواح خاصة من البوليسترين مع فتحات ذات قاع نصف كروي. عند استخدامه للتشخيص المصلي، يتم إعداد التخفيفات ذات شقين في هذه الآبار محلول ملحيمصل الاختبار، ثم يضاف إليه تعليق كريات الدم الحمراء الحساسة كعامل تشخيصي. يتم تسجيل النتائج بعد ساعتين من الحضانة عند 37 درجة مئوية باستخدام النظام الرباعي. مع رد فعل إيجابي، تستقر خلايا الدم الحمراء المتراصة في قاع الحفرة وتغطيها بالتساوي على شكل مظلة مقلوبة. وإذا كان رد الفعل سلبيا، تستقر خلايا الدم الحمراء أيضا، ويصبح السائل صافيا، وتبدو الرواسب وكأنها "قرص" صغير في وسط البئر. يعتبر عيار المصل في RPHA هو التخفيف الأخير، والذي لا يزال يعطي تراصًا دمويًا واضحًا دون علامات هامةوجود "القرص".

يمكن أيضًا استخدام RPGA كوسيلة سريعة للتشخيص البكتريولوجي للكشف مباشرة في مادة الاختبار عن البكتيريا والفيروسات والسموم غير المعروفة، على سبيل المثال، مسببات أمراض الطاعون والسموم المعوية للمكورات العنقودية، وما إلى ذلك. مع هذا الإصدار من RPGA، تُعرف كريات الدم الحمراء الممتصة بخصائصها. يتم استخدام الخصوصية كعنصر معروف في الأجسام المضادة للتفاعل - الأجسام المضادة لتشخيص كريات الدم الحمراء. إذا كانت مادة الاختبار تحتوي على كمية كافية من مستضد معروف، فستكون مادة RPGA إيجابية.

خيارات استخدام RPHA هي: تفاعل تحييد المستضد (RNAg)، تفاعل تحييد الأجسام المضادة (RNAb)، تفاعل تثبيط التراص الدموي السلبي (PHA). لهذه التفاعلات، يتم استخدام تشخيص كريات الدم الحمراء المستضد والأجسام المضادة. يمكن استخدام تفاعلين أحادي الاتجاه يتم التحكم فيهما بشكل متبادل في وقت واحد، على سبيل المثال، RPHA مع تشخيص المستضد وRNAg مع تشخيص كريات الدم الحمراء المضاد.

يتكون تفاعل تحييد الأجسام المضادة (RNAb) من خلط معلق يحتوي على المستضد المطلوب مع مصل مناعي محدد يحتوي على أجسام مضادة معروفة بأحجام مناسبة وحضانة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة ساعتين. بعد ذلك، يتم إضافة تشخيص كريات الدم الحمراء المستضدية. يرج الخليط ويترك في درجة حرارة الغرفة. تؤخذ النتائج في الاعتبار بعد 3-4 ساعات وأخيراً بعد 18-24 ساعة، فإذا كانت مادة الاختبار تحتوي على مستضد فإنها سترتبط بالأجسام المضادة (تحييدها)، وبالتالي لن يحدث التراص الدموي.

يتم إجراء تفاعل تحييد المستضد (RNAg) باستخدام نفس المبدأ. فقط في هذه الحالة يتم اكتشاف الأجسام المضادة في مادة الاختبار. سوف يرتبط مستضد محدد يضاف إلى مادة الاختبار هذه بالأجسام المضادة الموجودة فيها، أي أنه سيتم تحييد المستضد بواسطة الأجسام المضادة، وبالتالي لن يحدث التراص الدموي عند إضافة جسم مضاد لتشخيص كريات الدم الحمراء.

رد فعل التخثر. إنه أحد الخيارات لتفاعل التراص السلبي، أي المتسارع على الزجاج بوساطة الخلايا الحاملة للأجسام المضادة. يعتمد رد الفعل هذا على خاصية فريدة من نوعها المكورات العنقودية الذهبية، الذي يحتوي على البروتين A في جداره الخلوي، يرتبط بأجزاء Fc من IgG وIgM. في هذه الحالة، تبقى المراكز النشطة للأجسام المضادة حرة ويمكن أن تتفاعل مع محددات محددة للمستضدات. يتم وضع قطرة من معلق 2% من المكورات العنقودية، المحسسة بالأجسام المضادة المناسبة، على شريحة زجاجية، وتضاف قطرة من معلق البكتيريا قيد الدراسة. إذا تطابق المستضد مع الأجسام المضادة، يحدث تراص واضح للمكورات العنقودية المحملة بالأجسام المضادة خلال 30-60 ثانية.

تفاعل تراص اللاتكس (LAR). حامل الأجسام المضادة في هذا النظام التشخيصي عبارة عن جزيئات لاتكس قياسية صغيرة. يتم إجراء التفاعل باستخدام الطريقة الدقيقة في الآبار الموجودة على الزجاج. الشرط الرئيسي للتدريج الناجح للـ PAH هو الالتزام الصارم بالنسب الكمية لمكونات النظام: تتم إضافة 10 ميكرولتر من مستحضر اللاتكس الحساس بالأجسام المضادة إلى 50 ميكرولتر من مادة الاختبار. يتم التحكم في خصوصية PAH باستخدام ثلاثة اختبارات تحكم موجودة في أنظمة الاختبار التجارية: تفاعل إيجابي معروف، وتفاعل سلبي معروف، ومراقبة جودة معلقات اللاتكس باستخدام اللاتكس غير المحسس (لا يحمل أجسامًا مضادة) مع مادة الاختبار. في بلدنا، يتم استخدام اللاتكس أحادي التشتت من البوليسترين بأقطار جسيمات مختلفة (0.3؛ 0.66؛ 0.75؛ 0.8 ميكرومتر) كحاملات لأجسام مضادة محددة. يستخدم LAG للكشف السريع عن الكائنات الحية الدقيقة أو مستضداتها في مادة الاختبار.

الكشف المناعي المغناطيسي للمستضدات. يرتبط أحد خيارات تفاعل التراص المتسارع على الزجاج باستخدام جزيئات البوليمر فائقة المغناطيسية المطلية بأجسام مضادة محددة. يرتبط أحد هذه الجسيمات بما يصل إلى 107-108 خلية من الكائنات الحية الدقيقة، بسبب الحساسية هذه الطريقةيصل إلى 5 CFU/ml. يمكن استخدام الكشف المناعي المغناطيسي للكائنات الحية الدقيقة مع الإنعاش القلبي الرئوي.

تفاعل التراص الدموي الكلي (AHA). يسمح لك بالكشف السريع في دم المرضى عن المستضدات المتداولة بحرية (مستضدات الدم) والمستضدات المرتبطة بالأجسام المضادة - المجمعات المناعية المنتشرة (CIC). بالنسبة لـ RAHA، يتم استخدام خلايا الدم الحمراء المحسسة بالأجسام المضادة المناسبة. تؤدي إضافة مصل دم المريض، الذي يحتوي على مستضدات، إلى كريات الدم الحمراء الحساسة التي يتم تثبيت الأجسام المضادة عليها، إلى التصاق (تراص) كريات الدم الحمراء والمجمعات المناعية.

اختبار كومبس المضاد للجلوبيولين (رد فعل كومبس). يتم تحديد الأجسام المضادة الكاملة (ثنائية التكافؤ) باستخدام تفاعلات التراص المباشرة والسلبية. لا يتم الكشف عن الأجسام المضادة غير الكاملة (أحادية التكافؤ، المعيقة) بهذه الطرق، لأنها عندما تتحد مع المستضد، فإنها تحجبه، ولكن لا يمكنها التسبب في تجميع المستضد في تكتلات كبيرة. الأجسام المضادة غير الكاملة (المانعة) هي تلك التي يعمل فيها مركز نشط واحد فقط؛ المركز النشط الثاني لا يعمل لسبب غير معروف. للكشف عن الأجسام المضادة غير المكتملة، يتم استخدام تفاعل كومبس خاص (الشكل 72). يتضمن التفاعل: مصل المريض، حيث يتم تحديد الأجسام المضادة غير المكتملة، وتشخيص المستضد الجسيمي، ومصل مضاد الجلوبيولين الذي يحتوي على أجسام مضادة للجلوبيولين البشري. يحدث التفاعل على مرحلتين:

تفاعل المستضد مع الأجسام المضادة غير الكاملة. لا توجد مظاهر مرئية. تنتهي المرحلة الأولى بغسل المستضد من المصل المتبقي للمريض.

تفاعل مصل مضاد الجلوبيولين الذي تم الحصول عليه نتيجة تحصين حيوان بالجلوبيولين البشري مع أجسام مضادة غير كاملة ممتصة على المستضد. نظرًا لأن الأجسام المضادة للجلوبيولين ثنائية التكافؤ، فإنها تربط بين جسمين مضادين أحادي التكافؤ من مجمعات AG + منفصلة جسم مضاد غير مكتملمما يؤدي إلى التصاقها وظهور الرواسب المرئية.

جدول محتويات موضوع "المعدلات المناعية. التشخيص المناعي للأمراض المعدية.":

رد فعل تراص مفصل (را). لتحديد AT في مصل دم المريض، أ تفاعل تراص واسع النطاق (RA). للقيام بذلك، يتم إضافة التشخيص إلى سلسلة من التخفيفات من مصل الدم - تعليق الكائنات الحية الدقيقة المقتولة أو الجزيئات مع Ag الممتص. الحد الأقصى لإعطاء التخفيف التلصيق Ag يسمى عيار المصل.

أنواع تفاعل التراص (را) للكشف عن AT - اختبار قطرة الدم لمرض التولاريميا (مع تشخيص مطبق على قطرة دم وظهور تراصات بيضاء مرئية) واختبار هادلسون لداء البروسيلات (مع تشخيص ملطخ بالبنفسج الجنطياني مطبق على قطرة دم المصل).

تفاعل التراص التقريبي (RA)

للتعرف على الكائنات الحية الدقيقة المعزولة، يتم وضع RA تقريبي على شرائح زجاجية. وللقيام بذلك، تتم إضافة ثقافة العامل الممرض إلى قطرة من المصل المضاد التشخيصي القياسي (المخفف 1:10، 1:20). إذا كانت النتيجة إيجابية، يتم إجراء تفاعل مفصل مع زيادة التخفيفات من المصل المضاد.

رد فعليعتبر إيجابيا إذا لوحظ التراص في التخفيفات القريبة من عيار المصل التشخيصي.

منظمة الدول الأمريكية. الجسدية O- Agsتتميز بأنها مستقرة للحرارة ويمكنها تحمل الغليان لمدة ساعتين، وعند تفاعلها مع AT، فإنها تشكل كتلًا دقيقة الحبيبات.

تذمر. N-Ag (السوطيات)وهي قابلة للحرارة وتتحلل بسرعة عند 100 درجة مئوية، وكذلك تحت تأثير الإيثانول. في التفاعلات مع المصل المضاد H، بعد ساعتين من الحضانة، تتشكل رقائق كبيرة فضفاضة (تتكون من البكتيريا الملتصقة مع الأسواط).

السادس آربكتيريا التيفوئيد مستقرة نسبيًا للحرارة (تتحمل درجات حرارة تتراوح بين 60-62 درجة مئوية لمدة ساعتين)؛ عندما يتم احتضانها مع مصل Vi المضاد، يتم تشكيل تراص ذو حبيبات دقيقة.

تفاعلات التراص الدموي المباشر

أبسط هذه تفاعلات - التلصيقخلايا الدم الحمراء، أو التراص الدموي، تستخدم لتحديد فصائل الدم في نظام ABO. لتحديد التلصيق(أو عدم وجودها) استخدم الأمصال المضادة القياسية مع الراصات المضادة لـ A وB. يسمى التفاعل مباشرا، حيث أن العناصر التي تتم دراستها هي مكونات طبيعية لخلايا الدم الحمراء.

مشترك مع التراص الدموي المباشرالتراص الفيروسي له آليات. العديد من الفيروسات قادرة على التصاق كريات الدم الحمراء في الطيور والثدييات تلقائيًا، وإضافتها إلى معلق كريات الدم الحمراء تؤدي إلى تكوين مجاميع منها.