Netiesioginis arba pasyvus hemagliutinacijos testas (IRHA arba RPHA) yra jautresnis ir specifiškesnis nei agliutinacijos testas. Ši reakcija taip pat naudojama dviem kryptimis.

1) Antikūnams paciento kraujo serume nustatyti naudojama eritrocitų diagnostika, kurios metu antigenas adsorbuojamas taninais apdorotų eritrocitų paviršiuje. Kalbant apie šią reakciją, dažniau vartojamas terminas RPHA.

Tiriamasis serumas praskiedžiamas plastikinių plokštelių šulinėliuose ir pridedama eritrocitų diagnostinė medžiaga. Jei reakcija teigiama, išilgai skylės sienelių atsiranda plona plėvelė „nėrinių skėčio“ pavidalu; neigiama reakcija- tankios raudonųjų kraujo kūnelių nuosėdos „mygtuko“ pavidalu.

2) Toksinams ir bakterijų antigenams tiriamojoje medžiagoje aptikti naudojama antikūnų eritrocitų diagnostika, gaunama adsorbuojant antikūnus ant eritrocitų. Kalbant apie šią reakciją, dažniau vartojamas terminas RNGA. Pavyzdžiui, antikūnų diagnostikos pagalba nustatomas maro bacilos antigenas, difterijos egzotoksinas, botulino egzotoksinas.

Kumbso testas (aptiglobulino testas)

Reakcija naudojama nepilniems antikūnams, pavyzdžiui, antikūnams prieš Rh faktorių, aptikti. Tiriamasis serumas pridedamas prie Rh + eritrocitų, kuriuose daroma prielaida, kad yra nepilnų Rh faktoriaus antikūnų. Nebaigti antikūnai, prisijungę prie raudonųjų kraujo kūnelių, nesukelia agliutinacijos, nes turi tik vieną aktyvų centrą. Tada pridedamas antiglobulino serumas, kuriame yra antikūnų prieš žmogaus globulinus. Antiglobulino serumas, derinamas su nepilnais antikūnais, sukelia raudonųjų kraujo kūnelių agliutinaciją.

Kritulių reakcija

Reakcijos esmė – antigeno nusėdimas (nusėdimas) veikiant specifiniams antikūnams. Norint gauti matomą reakciją, būtinas elektrolito buvimas. Antigenas nusodinimo reakcijoje yra molekuliškai dispersinės medžiagos.

Žiedo kritulių reakcija dedamas į siaurus kritulių vamzdelius. Imuninis serumas pilamas į mėgintuvėlį ir ant jo atsargiai sluoksniuojama tiriamoji medžiaga. Jei jame yra antigeno, dviejų skysčių ribose susidaro nepermatomas nuosėdų žiedas.

Reakcija naudojama teismo medicinos nustatyti baltymų rūšis kraujo dėmėse, spermoje ir kt.; nustatyti antigeną diagnozuojant juodligę (Ascoli reakcija), meningitą ir kitas infekcijas; sanitariniuose ir higieniniuose tyrimuose – nustatyti falsifikaciją maisto produktai. Imuniniai nusodinimo serumai gaunami imunizuojant gyvūnus atitinkamu antigenu. Pavyzdžiui, žmogaus baltymus nusodinantis serumas gaunamas imunizuojant triušį žmogaus baltymu. Nusodinančio serumo titras yra didžiausias antigeno, su kuriuo jis reaguoja, skiedimas. Serumas dažniausiai naudojamas neskiestas arba atskiestas santykiu 1:5.

Agaro gelio nusodinimo reakcija atliekami naudojant kelis metodus. Tai yra dvigubos imunodifuzijos reakcija, radialinė imunodifuzijos reakcija ir imunoelektroforezės reakcija.

Dviguba imunodifuzijos reakcija(pagal Ouchterlony). Ištirpęs agaro gelis supylė į Petri lėkštelę ir sukietėjus joje buvo išpjautos skylutės. Antigenas dedamas į vienus šulinėlius, o į kitus dedamas imuniniai serumai, kurie difunduoja į agarą ir susitikimo vietoje sudaro nuosėdas baltų juostelių pavidalu.

Radialinė imunodifuzijos reakcija(pagal Mancini). Imuninis serumas dedamas į ištirpintą agaro gelį ir supilamas į puodelį. Agarui sukietėjus, išpjaunamos duobutės ir į jas dedami antigenai, kurie, pasklidę į agarą, aplink šulinėlius suformuoja žiedo formos kritulių zonas. Kuo didesnė antigeno koncentracija, tuo didesnis žiedo skersmuo. Reakcija naudojama, pavyzdžiui, norint nustatyti įvairių klasių imunoglobulinus kraujyje. IgG, IgM, IgA klasių imunoglobulinai šioje reakcijoje veikia kaip antigenai, o antikūnai prieš juos yra specifiniuose monoreceptorių serumuose.

Imunoelektroforezė. Baltymų antigenų elektroforezė atliekama agaro gelyje. Nusodinantis serumas įvedamas į griovelį, kuris eina lygiagrečiai baltymų judėjimo krypčiai. Antigenai ir antikūnai difunduoja į agarą, o ten, kur jie susitinka, susidaro kritulių linijos.

Imuninės lizės reakcijos

Antigenas (eritrocitai arba bakterijos), susijungęs su specifiniais antikūnais, sudaro imuninį kompleksą, prie kurio prisijungia komplementas (C1), o komplementas aktyvuojamas klasikiniu būdu. Aktyvuotas komplementas lizuoja raudonuosius kraujo kūnelius (hemolizė) arba bakterijas (bakteriolizė). Bakteriolizės reakcija naudojama Vibrio cholerae nustatyti.

Hemolizės reakcija. Reakcijos antigenas yra eritrocitai, antikūnai (hemolizinai) yra hemoliziniame serume. Hemolizinai prisijungia prie raudonųjų kraujo kūnelių, aktyvuojamas komplementas, kuris lizuoja raudonuosius kraujo kūnelius. Drumsta raudonųjų kraujo kūnelių suspensija virsta skaidriu ryškiai raudonu skysčiu - „lako krauju“. Kadangi hemolizės reakcija vyksta tik esant komplementui, ji naudojama kaip komplemento nustatymo indikatorius.

Vietinė hemolizės reakcija gelyje(Erne reakcija) - hemolizės reakcijos variantas. Naudojamas antikūnus formuojančių ląstelių (AFC) skaičiui blužnyje ir limfmazgiuose nustatyti.

Ištirpęs agaro gelis sumaišomas su blužnies ląstelių ir raudonųjų kraujo kūnelių suspensija, o agarui sustingus, pridedamas komplementas. Aplink kiekvieną hemoliziną gaminančią ląstelę susidaro hemolizės zona. Hemoliziną gaminančių ląstelių skaičius nustatomas pagal tokių zonų skaičių.

Netiesioginė (pasyvi) hemagliutinacijos reakcija (IRHA) pagrįsta tuo, kad raudonieji kraujo kūneliai, jei jų paviršiuje adsorbuojamas tirpus antigenas, sąveikaudami su antikūnais prieš adsorbuotą antigeną įgyja gebėjimą agliutinuotis. RNGA diagrama parodyta fig. 34. RNGA plačiai naudojamas diagnozuojant daugybę infekcijų.

Ryžiai. 34. Pasyviosios hemagliutinacijos reakcijos (RPHA) schema. A - eritrocitų diagnostikos gavimas: B - RPGA: 1 - eritrocitas: 2 - tiriamas antigenas; 3 - eritrocitų diagnostika; 4 - antikūnas prieš tiriamą antigeną: 5 - agliutinatas

Reakcijos nustatymas. Tiriamasis serumas kaitinamas 30 minučių 56°C temperatūroje, paeiliui skiedžiamas santykiu 1:10 - 1:1280 ir supilamas po 0,25 ml į mėgintuvėlius ar šulinėlius, kuriuose įlašinami 2 lašai eritrocitų diagnostikos (eritrocitų su adsorbuotu antigenu). ) tada pridedami.

Kontrolės: eritrocitų diagnostikos suspensija su žinomu imuniniu serumu; diagnostikos su normaliu serumu sustabdymas; normalių raudonųjų kraujo kūnelių suspensija su tiriamuoju serumu. Pirmoje kontrolėje turėtų atsirasti agliutinacija, antroje ir trečioje – ne.

Naudodami RIGA galite aptikti nežinomą antigeną, jei žinomi antikūnai yra adsorbuoti ant raudonųjų kraujo kūnelių.

Hemagliutinacijos reakciją galima atlikti 0,025 ml tūryje (mikrometodas), naudojant Takachi mikrotitratorių.

Kontroliniai klausimai

1. Ką rodo teigiamas rentgeno analizės rezultatas tarp raudonųjų kraujo kūnelių ir tiriamos medžiagos, ar nėra viruso?

2. Ar įvyks raudonųjų kraujo kūnelių agliutinacija, jei prie jų bus pridėtas virusas ir jį atitinkantis serumas? Kaip vadinasi reakcija, atskleidžianti šį reiškinį?

Pratimas

Atsižvelgti ir užregistruoti rezultatą RYGA.

Kritulių reakcija

Nusodinimo reakcijoje nusodinamas specifinis imuninis kompleksas, susidedantis iš tirpaus antigeno (lizato, ekstrakto, hapteno) ir specifinio antikūno, esant elektrolitams.

Dėl šios reakcijos susidaręs drumstas žiedas arba nuosėdos vadinamos nuosėdomis. Ši reakcija nuo agliutinacijos reakcijos daugiausia skiriasi antigeno dalelių dydžiu.

Nusodinimo reakcija paprastai naudojama antigenui nustatyti diagnozuojant daugybę infekcijų ( juodligė, meningitas ir kt.); teismo medicinoje – nustatyti kraujo, spermos ir kt. rūšį; atliekant sanitarinius ir higieninius tyrimus - nustatant gaminių falsifikavimą; jo pagalba nustatomas filogenetinis gyvūnų ir augalų ryšys. Reakcijai jums reikia:

1. Antikūnai (precipitinai) – imuninis serumas su dideliu antikūnų titru (ne mažesniu kaip 1:100 000). Nusodinančio serumo titras nustatomas pagal didžiausią antigeno, su kuriuo jis reaguoja, praskiedimą. Serumas dažniausiai naudojamas neskiestas arba atskiestas santykiu 1:5 – 1:10.

2. Antigenas – ištirpusios baltyminio arba lipoidinio polisacharidinio pobūdžio medžiagos (pilni antigenai ir haptenai).

3. Izotoninis tirpalas.

Pagrindiniai nusodinimo reakcijos vykdymo būdai yra: žiedo nusodinimo reakcija ir nusodinimo reakcija agare (gele).

Dėmesio! Visi komponentai, dalyvaujantys nusodinimo reakcijoje, turi būti visiškai skaidrūs.

Žiedo kritulių reakcija. Pasteur pipete įpilkite 0,2–0,3 ml (5–6 lašus) serumo į nusodinimo mėgintuvėlį (serumas neturi patekti ant mėgintuvėlio sienelių). To paties tūrio antigenas atsargiai sluoksniuojamas ant serumo, plona Pasteur pipete pilamas išilgai mėgintuvėlio sienelės. Mėgintuvėlis laikomas pasvirusioje padėtyje. Tinkamai sluoksniuojant, tarp serumo ir antigeno turi būti aiški riba. Atsargiai, kad nesusimaišytų skystis, mėgintuvėlį padėkite į stovą. At teigiamas rezultatas reakcija, ant antigeno ir antikūno ribos susidaro drumstas „žiedas“ – nuosėdos (žr. 48 pav.).

Reakciją lydi keletas kontrolinių priemonių (18 lentelė). Reakcijos ingredientų įdėjimo į mėgintuvėlį seka yra labai svarbi. Serumo negalima sluoksniuoti ant antigeno (kontrolinėje – ant izotoninio tirpalo), kadangi serumo santykinis tankis yra didesnis, jis nugrims į mėgintuvėlio dugną, o riba tarp skysčių nebus atskleista.

18 lentelė. Žiedo nusodinimo reakcijos nustatymo schema

Pastaba. + „žiedo“ buvimas; - „žiedo“ nebuvimas.

Rezultatai registruojami po 5-30 minučių, kai kuriais atvejais po valandos, kaip visada pradedant nuo kontrolinių elementų. „Žiedas“ 2-ajame mėgintuvėlyje rodo imuninio serumo gebėjimą pradėti specifinę reakciją su atitinkamu antigenu. 3–5 mėgintuvėliuose neturėtų būti „žiedų“ - nėra vienas kitą atitinkančių antikūnų ir antigenų. „Žiedas“ 1-ajame mėgintuvėlyje – teigiamas reakcijos rezultatas – rodo, kad tiriamasis antigenas atitinka paimtą imuninį serumą, „žiedo“ nebuvimas („žiedas“ tik 2-ajame mėgintuvėlyje) rodo jų nenuoseklumą – neigiamą. reakcijos rezultatas.

Nusodinimo reakcija agare (gele). Reakcijos ypatumas yra tas, kad antigeno ir antikūno sąveika vyksta tankioje terpėje, t.y., gelyje. Susidariusios nuosėdos suteikia drumstą terpės storio ruožą. Juostos nebuvimas rodo reakcijos komponentų neatitikimą. Ši reakcija plačiai naudojama biomedicininiuose tyrimuose, ypač tiriant toksinų susidarymą difterijos sukėlėjoje.

Kontroliniai klausimai

1. Koks pagrindinis skirtumas tarp agliutinacijos ir nusodinimo reakcijų?

2. Kodėl nusodinimo reakcijoje negalima naudoti drumstų ingredientų?

Pratimas

1. Nustatykite žiedo nusodinimo reakciją ir nubraižykite rezultatą.

2. Ištirkite antigeno sąveikos su antikūnu pobūdį nusodinimo reakcijoje agare, nubraižykite rezultatą (pasiimkite puodelį iš mokytojo).

Lizės reakcija (imuninė citolizė)

Imuninė lizė yra ląstelių ištirpimas, veikiant antikūnams, privalomai dalyvaujant komplementui. Reakcijai jums reikia:

1. Antigenas – mikrobai, raudonieji kraujo kūneliai ar kitos ląstelės.

2. Antikūnas (lizinas) – imuninis serumas, rečiau pacientų serumas. Bakteriolitiniame serume yra antikūnų, dalyvaujančių bakterijų lizėje; hemoliziniai - hemolizinai, skatinantys raudonųjų kraujo kūnelių lizę; spirochetų lizei reikalingi spirochetolizinai, ląstelės - itolizinai ir kt.

3. Papildyti. Daugiausia papildo serume jūrų kiaulytės. Šis serumas (kelių gyvūnų mišinys) dažniausiai naudojamas kaip papildas. Šviežias (vietinis) papildas yra nestabilus ir lengvai sunaikinamas kaitinant, purtant ar laikant, todėl jį galima naudoti ne ilgiau kaip dvi dienas nuo gavimo. Norint išsaugoti komplementą, į jį pridedama 2 proc boro rūgštis ir 3% natrio sulfato. Šį papildą galima laikyti 4 °C temperatūroje iki dviejų savaičių. Dažniausiai naudojamas sausas priedas. Prieš naudojimą jis ištirpinamas izotoniniame tirpale iki pradinio tūrio (nurodytas etiketėje).

4. Izotoninis tirpalas.

Hemolizės reakcija(19 lentelė). Reakcijai jums reikia:

1. Antigenas – 3 % nuplautų avių eritrocitų suspensija 0,3 ml eritrocitų nuosėdų ir 9,7 ml izotoninio tirpalo.

2. Antikūnas – hemolizinis serumas (hemolizinas) prieš avies eritrocitus; paprastai paruoštas gamyboje, liofilizuotas ir etiketėje nurodytas titras.

Hemolizino titras yra didžiausias serumo praskiedimas, kuriam esant komplementui įvyksta visiška 3 % raudonųjų kraujo kūnelių suspensijos hemolizė. Hemolizės reakcijai hemolizinas vartojamas trigubu titru, t.y. atskiestas 3 kartus mažiau nei prieš titrą. Pavyzdžiui, kai serumo titras yra 1:1200, serumas skiedžiamas santykiu 1:400 (0,1 ml serumo * ir 39,9 ml izotoninio tirpalo). Hemolizino perteklius yra būtinas, nes dalį jo gali adsorbuoti kiti reakcijos komponentai.

* (Neturėtumėte vartoti mažiau nei 0,1 ml serumo – nukentės matavimo tikslumas.)

3. Komplementas skiedžiamas santykiu 1:10 (0,2 ml komplemento ir 1,8 ml izotoninio tirpalo).

4. Izotoninis tirpalas.

19 lentelė. Hemolizės reakcijos schema

Rezultatų apskaita. Jei reakcija bus atlikta teisingai, 1-ajame mėgintuvėlyje įvyks hemolizė - jo turinys taps skaidrus. Kontroliniuose mėgintuvėliuose skystis išlieka drumstas: 2-ame mėgintuvėlyje nepakanka komplemento hemolizei įvykti, 3-iame mėgintuvėlyje hemolizino nėra, 4-ame mėgintuvėlyje nėra nei hemolizino, nei komplemento, 5-ame mėgintuvėlyje antigenas veikia. neatitinka antikūnų,

Jei reikia, hemolizinis serumas titruojamas pagal šią schemą (20 lentelė).

Prieš titravimą paruoškite pradinį serumo praskiedimą santykiu 1:100 (0,1 ml serumo ir 9,9 ml izotoninio tirpalo), iš kurio paruošiami reikiami skiedimai, pavyzdžiui:

Iš šių skiedimų į titravimo mėgintuvėlius įpilkite 0,5 ml serumo, kaip parodyta lentelėje. 20.

20 lentelė. Hemolizinio serumo (hemolizino) titravimo schema

Lentelėje pateiktame pavyzdyje. 20, hemolizinio serumo titras yra 1:1200.

Naudojant šviežią hemolizinį serumą, jis turi būti inaktyvuotas, kad būtų sunaikintas jame esantis komplementas. Norėdami tai padaryti, jis 30 minučių kaitinamas 56 ° C temperatūroje vandens vonioje arba inaktyvatoriuje su termostatu. Pastarasis būdas yra geresnis: jis pašalina išrūgų perkaitinimo, t.y. jų denatūravimo, galimybę. Denatūruoti serumai yra netinkami tyrimui.

Bakteriolizės reakcija. Šioje reakcijoje komplementas lizuoja bakterijas, esant atitinkamam (homologiniam) serumui. Reakcijos schema iš esmės panaši į hemolizės reakcijos schemą. Skirtumas tas, kad po dviejų valandų inkubacijos visi mėgintuvėliai pasėjami į Petri lėkšteles su terpe, palankia į eksperimentą paimtam mikroorganizmui, siekiant išsiaiškinti, ar jis lizuotas. Jei eksperimentas atliktas teisingai, kultūros iš 2–5 mėgintuvėlių (kontrolinių bandinių) turėtų turėti gausų augimą. Augimo trūkumas arba silpnas inokuliacijos augimas iš 1-ojo mėgintuvėlio (eksperimento) rodo mikrobų žūtį, t.y., kad jie yra homologiški antikūnui.

Dėmesio! Bakteriolizės reakcija turi būti atliekama aseptinėmis sąlygomis.

Kontroliniai klausimai

1. Kas atsitiks su raudonaisiais kraujo kūneliais, jei vietoj izotoninio natrio chlorido tirpalo bus naudojamas distiliuotas vanduo? Kas yra šio reiškinio pagrindas?

2. Kokia reakcija įvyks, kai eritrocitai sąveikaus su homologiniu imuniniu serumu, kai nėra komplemento?

Pratimas

Nustatykite hemolizės reakciją. Įrašykite ir nubraižykite rezultatą.

Susijusi informacija.

Netiesioginė hemagliutinacijos reakcija (RIHA).

RIGA yra naudojama dviem versijomis: su žinomais antikūnais antikūnams aptikti su žinomais antikūnais antikūnams aptikti. Ši reakcija yra specifinė ir naudojama diagnozuojant bakterijų ir riketsijos sukeltas ligas. RIGA atlikti naudojama eritrocitų diagnostika, paruošta adsorbuojant AG arba AT ant eritrocitų, priklausomai nuo tyrimo tikslo (10.3 pav.). Teigiamais atvejais eritrocitų agliutinacijos laipsnis pažymimas pliusais. Keturi pliusai įvertina reakciją, kuri yra plonos lipnių raudonųjų kraujo kūnelių plėvelės (skėčio), dengiančios mėgintuvėlio dugną, formą; plėvelės su nupjautais nėrinių kraštais buvimą rodo du pliusai. Titras laikomas didžiausiu tiriamosios medžiagos praskiedimu, sukėlusiu eritrocitų agliutinaciją dviem pliusais.

Ryžiai. 10.3.

1 - raudonieji kraujo kūneliai, 2 - eritrocitų AG, 3 - konjuguotas AG, 4-AT

RHA ir hemagliutinacijos slopinimo reakcija (HAI).

Kaip jau minėta, RHA pagrįsta eritrocitų gebėjimu sulipti, kai ant jų adsorbuojami tam tikri antigenai. Hemagliutinacijai tirti naudojamas alantoinis ir amniono skystis, vištų embrionų choriono-alantojo membranų suspensija, suspensijos ir ekstraktai iš virusais užkrėstų gyvūnų kultūrų ar organų bei vietinė infekcinė medžiaga. RGA nėra serologinė reakcija, nes ji įvyksta nedalyvaujant imuniniam serumui ir naudojama norint parinkti antigeno darbinį skiedimą RGA nustatymui arba antigeno (viruso) buvimą tiriamojoje medžiagoje (pavyzdžiui, sergant gripu). ). Reakcijai naudojami I (0) kraujo grupės gyvūnų, paukščių ir žmonių raudonieji kraujo kūneliai. Norint nustatyti apytikslę RGA, ant stiklelio užlašinamas lašas 5% eritrocitų suspensijos ir lašas tiriamosios medžiagos ir gerai išmaišoma. Jei rezultatas teigiamas, po 1-2 minučių makroskopiškai stebimas flokuliuojantis eritrocitų agliutinacija. Norėdami nustatyti RGA išskleistoje eilėje polistireno plokščių šuliniuose, paruoškite dvigubai didėjančius tiriamosios medžiagos skiedimus druskos tirpalas 0,5 ml tūrio. Į visus mėgintuvėlius įpilama 0,5 ml 0,25–1 % raudonųjų kraujo kūnelių suspensijos. Į rezultatus atsižvelgiama po visiško eritrocitų nusėdimo kontrolės (raudonieji kraujo kūneliai + druskos tirpalas). Į reakciją atsižvelgiama atsižvelgiant į eritrocitų nuosėdų pobūdį. Teigiamais atvejais agliutinacijos laipsnis pažymimas pliusais. Reakcija, kuri atrodo kaip plona lipnių raudonųjų kraujo kūnelių plėvelė, dengianti mėgintuvėlio (skėčio) dugną, vertinama keturiais pliusais; reakcija su tarpeliais plėvelėje – trimis pliusais; plėvelės su raišteliu buvimas. lipnių raudonųjų kraujo kūnelių kraštai pažymėti dviem pliusais, flokuliuojančios raudonųjų kraujo kūnelių nuosėdos, apsuptos agliutinuotų eritrocitų gabalėlių zonos, atitinka vieną pliusą. Aiškiai apibrėžtos eritrocitų nuosėdos, nesiskiriančios nuo kontrolinės, rodo, kad agliutinacijos nėra. Titras laikomas didžiausiu tiriamosios medžiagos praskiedimu, sukėlusiu eritrocitų agliutinaciją dviem pliusais. Jei RGA rezultatas teigiamas, tyrimas tęsiamas, nustatant izoliuoto viruso tipą naudojant RT GA su tipui būdingais serumais. RTGA pagrįsta antiserumo savybe slopinti virusinę hemagliutinaciją, nes specifiniais antikūnais neutralizuotas virusas praranda gebėjimą agliutinuoti raudonuosius kraujo kūnelius. Preliminariai virusų tipavimui naudojamas lašelių metodas ant stiklo. Norint galutinai nustatyti išskirto viruso tipą ir titruoti antikūnus serume, į mėgintuvėlius arba šulinėlius įdedamas išplėstinis rentgeno tyrimas. Šiuo tikslu fiziologiniame tirpale paruošiami dvigubi serumo skiedimai ir išpilstomi į 0,25 ml. Į serumo skiedimus įlašinkite vieną lašą medžiagos, kurioje yra viruso, ir vieną lašą 1% raudonųjų kraujo kūnelių suspensijos. Naudojant RTGA viruso tipui nustatyti, naudojami specifiniai tipo serumai, kurie pridedami prie vienodo tūrio AG darbinio skiedimo. Išskirto viruso tipas nustatomas pagal specifinį imuninį serumą, kuriame buvo didžiausias šio viruso antikūnų titras. RGA ir RTGA plačiai naudojami diagnostikai virusinės infekcijos (erkinio encefalito, gripas ir kt.), kad būtų galima aptikti specifinius antikūnus ir pagal jų antikūnus identifikuoti daugelį virusų.

Netiesioginė arba pasyvi hemagliutinacijos reakcija (IPHA)

Ši reakcija yra jautresnė nei agliutinacijos reakcija ir jis naudojamas diagnozuojant bakterijų, riketsijų, pirmuonių ir kitų mikroorganizmų sukeltas infekcijas.

RPGA leidžia aptikti nedidelę antikūnų koncentraciją.

Ši reakcija apima raugintus avies eritrocitus arba žmogaus eritrocitus su I grupės krauju, įjautrintus antigenais arba antikūnais.

Jei tiriamajame serume aptinkami antikūnai, naudojami antigenais įjautrinti raudonieji kraujo kūneliai (eritrocitų diagnostika).

Kai kuriais atvejais, jei reikia nustatyti įvairius antigenus tiriamojoje medžiagoje, naudojami eritrocitai, įjautrinti imunoglobulinais.

Į RPGA rezultatus atsižvelgiama atsižvelgiant į eritrocitų nuosėdų pobūdį.

Reakcijos rezultatas laikomas teigiamu, kai raudonieji kraujo kūneliai tolygiai padengia visą mėgintuvėlio dugną (apverstas skėtis).

Esant neigiamai reakcijai, raudonieji kraujo kūneliai mažo disko (mygtuko) pavidalu yra mėgintuvėlio dugno centre.

Agliutinacijos reakcija (RA)

Dėl savo specifiškumo, lengvumo ir demonstratyvumo agliutinacijos reakcija tapo plačiai paplitusi mikrobiologinėje praktikoje diagnozuojant daugelį užkrečiamos ligos: vidurių šiltinė ir paratifos (Vidal reakcija), šiltinė (Weigl reakcija) ir kt.

Agliutinacijos reakcija pagrįsta antikūnų (agliutininų) sąveikos su ištisomis mikrobinėmis ar kitomis ląstelėmis (agliutinogenais) specifiškumu. Dėl šios sąveikos susidaro dalelės – aglomeratai, kurie nusėda (agliutinuoja).

Agliutinacijos reakcija gali apimti ir gyvas, ir žuvusias bakterijas, spirochetas, grybus, pirmuonis, riketsijas, taip pat raudonuosius kraujo kūnelius ir kitas ląsteles.

Reakcija vyksta dviem fazėmis: pirmoji (nematoma) – specifinė, antigeno ir antikūnų derinys, antroji (matoma) – nespecifinė, antigenų klijavimas, t.y. agliutinato susidarymas.

Agliutinatas susidaro, kai vienas aktyvus dvivalenčio antikūno centras susijungia su determinante antigeno grupe.

Agliutinacijos reakcija, kaip ir bet kuri serologinė reakcija, vyksta esant elektrolitams.

Išoriškai teigiamos agliutinacijos reakcijos pasireiškimas turi dvejopą pobūdį. Žievelėmis apaugusiuose mikrobuose, kurie turi tik somatinį O-antigeną, pačios mikrobų ląstelės prilimpa tiesiogiai. Ši agliutinacija vadinama smulkiagrūdžiu. Tai įvyksta per 18-22 valandas.

Flagellate mikrobai turi du antigenus – somatinį O-antigeną ir flagellarinį H-antigeną. Jei ląsteles suklijuoja žvyneliai, susidaro dideli, birūs dribsniai ir ši agliutinacijos reakcija vadinama stambiagrūdžiais. Tai įvyksta per 2-4 valandas.

Agliutinacijos reakcija gali būti atliekama tiek kokybiniam, tiek kiekybiniam specifinių antikūnų nustatymui paciento kraujo serume, tiek išskirto patogeno rūšies nustatymui. hemagliutinacija mikrobiologinis infekcinis

Agliutinacijos reakcija gali būti atliekama tiek išplėstoje versijoje, kuri leidžia dirbti su serumu, atskiestu iki diagnostinio titro, tiek orientacine reakcijos versija, kuri leidžia iš esmės aptikti specifinius antikūnus arba nustatyti patogeno rūšį. .

Agliutinacijos reakcija – RA(iš lat. agliutinacija- adhezija) – tai paprasta reakcija, kurios metu antikūnai suriša korpuskulinius antigenus (bakterijas, eritrocitus ar kitas ląsteles, netirpias daleles su ant jų adsorbuotais antigenais, taip pat stambiamolekulinius agregatus). Jis atsiranda esant elektrolitams, pavyzdžiui, kai pridedamas izotoninis natrio chlorido tirpalas.

Naudojami įvairūs agliutinacijos reakcijos variantai: ekstensyvi, orientacinė, netiesioginė ir kt. Agliutinacijos reakcija pasireiškia dribsnių ar nuosėdų susidarymu

RA naudojamas:

antikūnų nustatymas pacientų kraujo serume, pavyzdžiui, sergančių brucelioze (Wright, Heddelson reakcijos), vidurių šiltinės ir paratifus (Vidal reakcija) ir kt užkrečiamos ligos;

iš paciento išskirto patogeno nustatymas;

kraujo grupių nustatymas naudojant monokloninius antikūnus prieš eritrocitų aloantigenus.

Paciento antikūnams nustatyti įdėtiišsami agliutinacijos reakcija: pridėti prie paciento kraujo serumo skiedimų diagnostika(žuvusių mikrobų suspensija) ir po kelių valandų inkubavimo 37 °C temperatūroje pažymimas didžiausias serumo praskiedimas (serumo titras), kuriam esant įvyko agliutinacija, t.y. susidarė nuosėdos.

Agliutinacijos pobūdis ir greitis priklauso nuo antigeno ir antikūnų tipo. Pavyzdys – diagnostinių medžiagų (O ir R antigenų) sąveikos su specifiniais antikūnais ypatumai. Agliutinacijos reakcija su O-diagnostika(bakterijos žūsta karščio metu, išlaiko šilumą stabiliai O-antigenas) atsiranda smulkiagrūdės agliutinacijos pavidalu. Agliutinacijos reakcija su H-diagnosticum (bakterijos, naikinamos formaldehidu, išlaikančios termolabų žiuželinį H-antigeną) yra šiurkšti ir vyksta greičiau.

Jei reikia nustatyti iš paciento išskirtą sukėlėją, įdėti orientacinė agliutinacijos reakcija, naudojant diagnostinius antikūnus (agliutinuojantį serumą), t.y. atliekamas patogeno serotipų nustatymas. Apytikslė reakcija atliekamas ant stiklinės stiklelio. Iš paciento išskirta grynoji patogeno kultūra įlašinama į lašą diagnostinio agliutinuojančio serumo, praskiedus santykiu 1:10 arba 1:20. Šalia dedama kontrolė: vietoj serumo užlašinamas lašas natrio chlorido tirpalo. Kai laše, kuriame yra serumo ir mikrobų, atsiranda flokuliuojančių nuosėdų, a plati agliutinacijos reakcija mėgintuvėliuose su didėjančiais agliutinuojančio serumo praskiedimais, į kuriuos įlašinami 2-3 lašai patogeno suspensijos. Į agliutinaciją atsižvelgiama pagal nuosėdų kiekį ir skysčio skaidrumo laipsnį. Reakcija laikoma teigiama, jei agliutinacija stebima praskiedimu, artimu diagnostinio serumo titrui. Tuo pačiu metu atsižvelgiama į kontrolę: izotoniniu natrio chlorido tirpalu praskiestas serumas turi būti skaidrus, mikrobų suspensija tame pačiame tirpale turi būti tolygiai drumsta, be nuosėdų.

Skirtingos susijusios bakterijos gali būti agliutinuojamos naudojant tą patį diagnostinį agliutinuojantį serumą, todėl jas sunku nustatyti. Todėl jie naudoja adsorbuoti agliutinuojantys serumai, iš kurių kryžmiškai reaguojantys antikūnai buvo pašalinti adsorbuojant giminingoms bakterijoms. Tokie serumai išlaiko antikūnus, būdingus tik tam tikrai bakterijai. Specialių monoreceptorių diagnostinių agliutinuojančių serumų gamybą pasiūlė A. Castellani (1902).

Netiesioginė (pasyvi) hemagliutinacijos reakcija(RNGA, RPGA) yra pagrįstas eritrocitų panaudojimu su antigenais arba ant jų paviršiaus adsorbuotais antikūnais, kurių sąveika su atitinkamais kraujo serumo antikūnais ar antigenais priverčia eritrocitus sulipti ir iškristi į tyrimo dugną. vamzdelis ar ląstelė Všukuotų nuosėdų pavidalu (13.2 pav.). Neigiamos reakcijos atveju raudonieji kraujo kūneliai nusėda ■ „mygtuko“ pavidalu. Paprastai antikūnai RNGA aptinkami naudojant antigeninę eritrocitų diagnostiką, tai yra eritrocitai su adsorbuota. įjungta juos su antigenais. Kartais naudojama anti-A eritrocitų diagnostika, ant kurios adsorbuojami antikūnai. Pavyzdžiui, botulino toksiną galima aptikti į jį įdėjus eritrocitų antikūnų botulino toksino (ši reakcija vadinama atvirkštinė netiesioginė hemagliutinacijos reakcija- RONG). RNGA naudojamas infekcinėms ligoms diagnozuoti, nustatyti gonadotropino hormonas Všlapimas nustatant nėštumą, nustatyti padidėjęs jautrumasĮ vaistai, hormonai ir kai kuriais kitais atvejais.

ŠUKOS REAKCIJA

(Kumbso testas) – metodas, leidžiantis nustatyti Rh antikūnus raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje, kurie sukelia globulinų nusodinimą kraujo serume. Šis testas naudojamas diagnozei nustatyti hemolizinė anemija kūdikiams, turintiems Rh nesuderinamumą ir kuriems sunaikinami raudonieji kraujo kūneliai.

Koagliutinacijos reakcija. Patogeninės ląstelės nustatomos naudojant stafilokokus, iš anksto apdorotus imuninės diagnostikos serumu. Stafilokokai, kurių sudėtyje yra baltymų A, turintys afinitetą imunoglobulinų Fc fragmentui, nespecifiškai adsorbuoja antimikrobinius antikūnus, kurie vėliau sąveikauja su aktyviais centrais su atitinkamais iš pacientų išskirtais mikrobais. Dėl koaguliacijos susidaro dribsniai, susidedantys iš stafilokokų, diagnostinių serumo antikūnų ir aptikto mikrobo.

Hemagliutinacijos slopinimo reakcija(RTGA) paremta blokada, viruso antigenų slopinimu imuninio serumo antikūnais, dėl ko virusai praranda gebėjimą agliutinuoti raudonuosius kraujo kūnelius (13.3 pav.). RTGA naudojama diagnozuoti daugybę virusinių ligų, kurių sukėlėjai (gripo virusai, tymai, raudonukės, erkinis encefalitas ir kt.) gali agliutinuoti įvairių gyvūnų raudonuosius kraujo kūnelius.

1. Grupė gydytojų iš PSO atvyko į Indiją, kad nustatytų poliomielitu sergančius pacientus ir padėtų atlikti visuotinę vakcinaciją nuo poliomielito. Viename iš tirtų kaimų pas gydytojus iš daugiavaikės šeimos buvo atvežtas 6 metų berniukas, kuris prieš 5 dienas susirgo. Staiga pakilo temperatūra, labai skaudėjo galvą, kartojasi vėmimas, skaudėjo rankas ir kojas. Po patikrinimo: karštis, stiprus silpnumas, meninginiai simptomai, ant dešinę koją sumažintas raumenų tonusas, smarkiai susilpnėję sausgyslių refleksai, pėda kabo žemyn. Punkuojant stuburo kanalą, po juo ištekėjo smegenų skystis aukštas kraujo spaudimas, padidėja limfocitų skaičius, neišsiskiria bakterijos. Buvo nustatyta preliminari „paralyžinė poliomielito forma“. Kaip berniukas galėjo užsikrėsti? Kaip vykdoma specifinė aktyvi poliomielito profilaktika? Ar yra pavojus užkrėsti kitus šios šeimos vaikus, ką daryti?

Atsakymas: Berniukas galėjo užsikrėsti išmatomis-oraliniu būdu per maistą, vandenį, taip pat per oro lašelius. Pagrindinė poliomielito profilaktikos priemonė – imunizacija gyvos kultūros vakcina nuo 3 serotipų Sabin padermių.Rusijoje naudojama vakcinacija nuo poliomielito vartojimui per burną, pagamintą Poliomielito ir virusinio encefalito instituto. M.P. Chumakova. Vakcina yra trivalentis susilpnintų 1, 2, 3 poliomielito viruso tipų Sabin padermių preparatas, gautas iš pirminės Afrikos žaliųjų beždžionių inkstų ląstelių kultūros. . Suplanuotos vakcinacijos Vaikai nuo 3 mėnesių iki 6 metų yra jautrūs poliomielitui. Skiepai geriamąja poliomielito vakcina atliekami 2 arba 4 lašais vakcinos per burną tris kartus po 3, 4, 5 ir 6 mėnesių, o trys revakcinacijos po 18, 20 mėnesių ir 14 metų. Susirgęs berniukas turi būti paguldytas į ligoninę, o visi kiti šios šeimos vaikai turi būti paskiepyti gyva vakcina nuo poliomielito.

1. Trivalentės polimero-subvieneto skystos gripo vakcinos (gripo) sudėtis ir naudojimas

Tai molekulinė vakcina. Sudėtis: trijų potipių (A/H1N1, A/H3N2, B) gripo viruso paviršinis Ag. Naudojimas: gripo profilaktikai

Egzamino kortelė Nr.23