Schick reakcija rodo, kad kraujyje yra arba nėra reikiamo antitoksino kiekio, apsaugančio organizmą nuo difterijos. Šiuo metu ši reakcija naudojama rečiau, nes praktikoje diegiami jautresni metodai (RPGA).
Schick reakcija atliekama vaikams, paskiepytiems nuo difterijos ir baigusiems vakcinaciją ir bent vieną pakartotinę vakcinaciją. Sulaukus 13 metų ir vyresnio amžiaus, reakcija gali būti diagnozuota net ir neturint žinomos vakcinacijos istorijos. Imuniteto prieš difteriją būklė tikrinama ne anksčiau kaip praėjus 6 mėnesiams po paskutinės revakcinacijos ir ne anksčiau kaip po dviejų mėnesių po ūmios ligos.
Schicko reakcija taip pat taikoma naujai atvykusiems vaikams į grupes, kenčiančias nuo difterijos, kai nėra informacijos apie skiepus. Vaikai, kuriems pasireiškė neigiama Schick reakcija, papildomai neskiepijami. Papildomi skiepai, neatsižvelgiant į imuninį sluoksnį komandoje, skiriami vaikams, kurių reakcija teigiama ir abejotina.
Schicko reakcijos rezultatai įrašomi į apskaitos kortelę profilaktiniai skiepai(f. 63), nurodant reakcijos atlikimo ir tyrimo datą, toksino partiją ir toksiną pagaminusį institutą.
Schick reakcijai atlikti naudojamas praskiestas aktyvus (nekaitintas) difterijos toksinas. 0,2 ml yra viena Chic dozė.
Schick reakcijai atlikti reikia naudoti vieno gramo (tuberkulino) švirkštus, kruopščiai patikrintus su tiksliomis padalomis, kurios neleidžia skysčiui prasiskverbti tarp švirkšto sienelių ir jo stūmoklio.
Griežtai draudžiama atlikti Schick reakciją patalpose, kuriose tą dieną buvo atlikta revakcinacija nuo tuberkuliozės, taip pat naudoti švirkštus, adatas ir kitus imunizacijai nuo tuberkuliozės instrumentus.
Oda injekcijos vietoje nuvaloma vata, sudrėkinta 70% etilo alkoholiu. Toksinas (0,2 ml) įšvirkščiamas į odą vidurinė dalis delno paviršius dažniausiai kairysis dilbis. Įvedimas atliekamas lėtai, naudojant žinomą įtampą, būdingą skysčio injekcijai į odą. Injekcija atliekama labai nežymiai pakreipus švirkštą link dilbio, beveik lygiagrečiai odos paviršiui. Adatos pjūvis turi visiškai patekti į odą ir būti matomas per epidermį. Injekcijos vietoje turi susidaryti maždaug 1 cm skersmens balkšva, aiškiai išreikšta pūslelė (papulė), kurios vietoje plauko folikulų yra įdubimas („citrinos žievelė“). Ši pūslelė (papulė) išnyksta per 10–15 minučių. Jei suleidus toksiną pūslelė (papulė) nesusidaro arba išnyksta per greitai, tai rodo, kad suleista neteisingai, giliai, o po oda patekęs toksinas reakcijos gali ir nesukelti. Dėl to gali būti gauti neteisingi rezultatai.
Į reakciją atsižvelgiama po 72 arba 96 valandų Rezultatai vertinami taip:
a) Schick reakcija yra teigiama, jei toksino injekcijos vietoje atsiranda paraudimas ir infiltracija. Reakcijos laipsnis nurodomas: "+" - jei paraudimas yra 1 -1,5 cm skersmens, (+ + " - jei 1,5 - 3 cm, "+ + + " - jei didesnis nei 3 cm;
b) Schick reakcija yra neigiama, kai toksino injekcijos vietoje nėra paraudimo ar infiltrato;
c) Schick reakcija yra abejotina, jei paraudimas ir infiltratas pavartojus toksiną yra neaiškiai išreikštas arba jei reakcija yra ryški, paraudimo skersmuo yra maždaug 0,5 cm (žymimas „±“).
Kontraindikacijos Schick reakcijai: spazmofilija, epilepsija, pustulinės ligos, kontaktas su pacientais virusinis hepatitas, bronchų astma.
Alergenai ir toksinai
Diagnostiniai vaistai
Antitoksinis žmogaus imunoglobulinas nuo kokliušo (Rusija)
Išgrynintas koncentruotas skystas antidifterinis serumas arkliams (Rusija)
Serumai ir imunoglobulinai
Sausa tuberkuliozės vakcina BCG-M (švelniai pirminei imunizacijai, Rusija)
Sausa tuberkuliozės vakcina (BCG), skirta intraderminiam vartojimui (Rusija)
Akt-Hib (Hib-vac, Pietų Korėja)
Monovakcina nuo kokliušo (Rusija)
Sudėtyje yra kokliušo bakterijų, konservantas – mertiolatas. Vartoti tik esant epidemiologinėms indikacijoms kokliušo infekcijos srityse.
Vienoje dozėje yra 10 mcg polisacharido Haemophilus influenzae b tipo, konjuguotas su stabligės toksoidu, konservantas – trometamolis. Naudojamas vaikų nuo 2 mėnesių vakcinacijai pagal epidemiologines indikacijas.
Mycobacterium bovis BCG-1. Vakcinos padermė gauta ilgai (13 metų) auginant galvijų mikobakterijų tuberkuliozę nepalankiomis sąlygomis bulvių glicerino terpėje, pridedant tulžies. Naudojama specifinė prevencija tuberkuliozės. Vakcinacija atliekama 5-7 gyvenimo dienomis, kai organizme nėra mikobakterinės infekcijos. Revakcinuojami visi sveiki vaikai, paaugliai ir suaugusieji iki 30 metų, kurie neigiamai reaguoja į tuberkuliną. Imuniteto mechanizmas sergant tuberkulioze nebuvo iki galo atskleistas. IN klinikinė praktika Pagrindinis vakcinos imuniteto intensyvumo kriterijus – neigiamos odos reakcijos į tuberkuliną perėjimas prie teigiamos.
Sudėtyje yra gyvų vakcinos padermės bakterijų, liofilizuotų 1,2 % natrio glutamato tirpale Mycobacterium bovis BCG-1. Naudojamas švelniai specifinei tuberkuliozės profilaktikai (pirminė vakcinacija) naujagimiams vietovėse, kuriose tuberkuliozei padėtis nepalanki.
Sudėtyje yra antikūnų prieš difterijos bacilų egzotoksiną. Antitoksinis aktyvumas išreiškiamas tarptautiniais vienetais (10 000 ir 20 000 TV/ml). Vartojamas difterija sergantiems pacientams gydyti. Be terapinių tikslų, antidifterinis serumas naudojamas difterijos bacilų kultūrų toksiškumui nustatyti gelio nusodinimo reakcijoje.
Sudėtyje yra imunologiškai aktyvi donoro kraujo plazmos frakcija su antikūnais prieš kokliušo mikrobo egzotoksiną (ne mažiau kaip 750 vienetų antitoksinių antikokliušo antikūnų). Vartojamas kokliušo gydymui.
Sudėtyje yra išgryninto difterijos toksino 0,2 ml 1/40 DLM jūrų kiaulytės toksino. Naudojamas intraderminiams tyrimams imuninės diagnostikos tikslais. Asmenims injekcijos vietoje išsivysto uždegiminė reakcija. Jei kraujyje yra daugiau nei 0,03 TV antitoksino, testas yra neigiamas. Anksčiau Schick testas dažnai buvo naudojamas difterijai jautriems asmenims nustatyti. Šiuo metu dėl komplikacijų galimybės jo vartojimas apsiriboja griežtomis epidemijos indikacijomis.
Toksinai (iš graikų toxikon – nuodai), bakterinės kilmės medžiagos, galinčios slopinti fiziologines funkcijas, dėl kurių gyvūnai ir žmonės susirgo ar miršta. Pagal cheminę prigimtį visi toksinai yra baltymai arba polipeptidai. Tai skiriasi nuo kitų organinių ir neorganinių toksiškos medžiagosĮ organizmą patekę toksinai sukelia antikūnų susidarymą.
Kai kurioms infekcinėms ligoms (difterijai, skarlatinai) nustatyti imuninės sistemos stiprumą ir vaikų jautrumą, intraderminiai testai naudojant tinkamus atskiestus toksinus. Teigiamą reakciją (vietinį odos uždegimą toksino injekcijos srityje) sukelia toksinis toksino poveikis odos audiniams. Neigiamas reakcijos rezultatas paaiškinamas į odą patekusio toksino neutralizavimu atitinkamu esančiu antitoksinu imuniniame organizme pakankamas kiekis šiam tikslui.
Toksinai gaunami iš toksikogeninių mikrobų padermių (difterijos bacilos arba skarlatinos streptokoko), sėjant ant skystos maistinės terpės (atviro židinio sultinio), po to filtruojant per bakterinius filtrus. Iš gautų toksinų ruošiami diagnostiniai toksinai Schick (difterija) ir Dika (skarlatina). Toksinai įvedami į odą 0,2 ml (Shika) ir 0,1 ml (Dika) į dilbio vidinio paviršiaus vidurinę dalį.
Anatoksinai – tai toksinių mikroorganizmų sultinio kultūrų filtratai, kurie dėl specialaus apdorojimo prarado toksiškumą, tačiau iš esmės išlaikė pirminių toksinų antigenines ir imunogenines savybes.
Į žmogaus ar gyvūno organizmą patekę toksoidai sukelia antitoksinio imuniteto formavimąsi, ši savybė leidžia juos panaudoti tų ligų profilaktikai. užkrečiamos ligos, kurios yra pagrįstos patogenų išskiriamų egzotoksinų veikimu, taip pat gyvūnų, gaminančių antitoksinius serumus, hiperimunizacijai.
Nepriklausomai nuo toksoido tipo, jo imunogeniškumą ir antigeniškumą lemia atitinkamos pradinio toksino savybės. Todėl šiuos vaistus gaminančios laboratorijos didelį dėmesį skiria optimalioms toksinų susidarymo sąlygoms sudaryti.
Norint gauti didelio stiprumo toksinus, reikalingos padermės, kurios pasižymi ypač ryškiu gebėjimu dirbtinėmis sąlygomis gaminti toksinus. Ne visos toksinių bakterijų padermės turi šias savybes. Gamybos tikslams naudojamos padermės, kurios yra pritaikytos dirbtinei aplinkai ir nuolat išlaiko gebėjimą formuoti toksinus.
Toksinus sudarančių medžiagų kultūros laikomos išdžiovintos arba tam tikro tipo bakterijoms optimalioje terpėje. Prieš naudojant sėjos masėms, štamai paskirstomi ant terpės, naudotos toksinui gauti.
Visiems kitiems lygiams esant, toksinų stiprumą lemia auginimo terpės kokybė, todėl laboratorijos daug dėmesio skiria auginimo terpės paruošimui. Gamybos institutų biocheminėse laboratorijose kruopščiausiai kontroliuojamos žaliavos, chemikalai ir kiti į aplinką patenkantys ingredientai.
Toksinų susidarymui naudojamos skystos maistinės terpės, į kurias įeina mėsos vanduo ir pepsinio (Martino sultinio, Ramono terpė) arba triptinio (popiežiaus terpė) mėsos virškinimo produktai.
Mėsos hidrolizės procesas kontroliuojamas nustatant bendrą aminų azotą ir baltymų skilimo koeficientą, kuris apskaičiuojamas pagal amino azoto ir bendrojo santykį. Taip pat naudojamas kazeinas be mėsos, pusiau sintetinės terpės.
Į maistinę terpę, skirtą toksinams susidaryti, dedama angliavandenių (gliukozės, maltozės ar jų mišinio). Fermentuojant angliavandenius, išsiskiria didelis kiekis energijos, reikalingos besivystančioje kultūroje vykstantiems sintezės procesams. Pridėjus angliavandenių, labai padidėja aplinkoje susidarančių toksinų stiprumas.
Be angliavandenių, kai kurių metalų reikia minimaliomis dozėmis toksinams susidaryti. Difterijos bacilos toksinų susidarymą slopina geležies perteklius aplinkoje ir jos nebuvimas. Esant optimaliems geležies kiekiams, toksinų susidarymas smarkiai padidėja.
Toksinų susidarymas visiškai vyksta esant tam tikram aplinkos pH. Tuo tarpu kultūros augimo metu pH vertė kinta ir gali pasiekti tokias vertes, kurios stabdys toksino susidarymą.
Norint tai pašalinti, norint palaikyti norimą pH vertę, pridedamos buferinės medžiagos. Viena iš šių buferinių savybių turinčių medžiagų yra natrio acetatas, kurio į sultinį dedama 0,5-0,75 %.
Priklausomai nuo toksinus gaminančio mikrobo biologinių savybių, skirtingos sąlygos reguliuojamas auginimas ir ypač aplinkos aeracija. Difterijos bacila susidaro toksinus esant maksimaliai aeracijai, priešingai, stabligės bacilai ir kitiems toksiškiems anaerobams deguonies nereikia. Pagal tai pirmas kartas Antruoju atveju kultūra auginama ploname terpės sluoksnyje, turinčiame didelį kontaktinį paviršių su oru, antruoju atveju terpė pilama į aukštą sluoksnį ir surenkami įvairūs deguonies adsorbentai (vata, sausi raudonieji kraujo kūneliai). pridėta.
Auginimo temperatūra ir trukmė skirtingiems mikrobams skiriasi. Toksinų susidarymo procesui būdingas poreikis tobulai kontroliuoti termostatą. Temperatūros svyravimai neigiamai veikia toksino stiprumą. Todėl termostatuose, kuriuose susidaro toksinai, yra sumontuoti tikslūs termostatai.
Kiekvienu atskiru atveju kultūros auginimo trukmę lemia toksino susidarymo intensyvumas tam tikroje terpių serijoje. Norint išspręsti klausimą, kada sustabdyti auginimą, terpės toksino pH stiprumas nustatomas skirtingu auginimo laiku.
Pasiekus maksimalų toksino stiprumą, jis atskiriamas nuo mikrobų kūnų, tai daroma filtruojant per specialius bakterinius filtrus (anaerobinius mikroorganizmus) arba paprastus popierinius filtrus (difterijos bacila).
Toksiškų filtratų perkėlimas į vanatoksiną atliekamas ilgai veikiant formaldehidą 39-40 °C temperatūroje. Formalinas derinamas su laisvomis amino rūgščių amino grupėmis, polipeptidais ir toksinų baltymais, todėl praranda toksines savybes. Vanatoksino toksino perėjimas įvyksta per 3-4 savaites. Tinkamam toksoidų susidarymui svarbus toksino pH. Palankiausia yra neutrali arba silpnai šarminė aplinkos reakcija.
Anatoksinai pasižymi visišku nekenksmingumu gyvūnams. Tačiau jei jie nėra visiškai neutralizuoti, juose gali likti toksinų likučių, dėl kurių jautrus kūnas vėluoja. Todėl, tikrinant toksoidų nekenksmingumą, gyvūnai stebimi ilgą laiką. Toksoidų nekenksmingumas yra negrįžtamas. Joks poveikis nesukelia prarasto toksiškumo atkūrimo.
Toksoidai išlieka beveik visiškai antigeninės savybės toksinai. Tai galima patikrinti įvairių metodų in vitro (flokuliacijos reakcija, toksoidų surišimo reakcija) ir eksperimentuose su gyvūnais, kurių metu toksoidas sukelia atitinkamų antitoksinų susidarymą ir antitoksinio imuniteto susidarymą.
Toksoidai yra patvarūs; jie toleruoja pakartotinį šaldymą ir atšildymą, priešinasi veiksmui aukštos temperatūros ir yra stabilūs ilgai laikant.
Toksoiduose, be specifinių baltymų, yra ir balastinių medžiagų, iš kurių juos galima išskirti įvairiais būdais. Jie pagrįsti toksoidų gebėjimu nusodinti, kai jie yra prisotinti neutraliomis druskomis, druskomis sunkieji metalai, rūgštys (vandenilio chlorido, trichloracto, metafosforo), taip pat esant etilo ir metilo alkoholiui žemoje temperatūroje. Šiuo metu šie metodai naudojami išgrynintiems, koncentruotiems toksoidams gauti.
Toksoidai adsorbuojami ant įvairių netirpių medžiagų (fosforo druskų, aliuminio hidroksido), iš to ruošiami sorbuoti toksoidai, kuriems būdingas lėtas įsisavinimas organizme, ko pasekoje galima gauti intensyvesnę imuninę sistemą.
Dėl savo nekenksmingumo, didelio antigeniškumo ir imunogeniškumo toksoidai yra vertingiausia daugelio ligų profilaktikos ir gydymo priemonė.
Šiuo metu toksoidai yra gauti: difterijos, stabligės, botulino, stafilokokų, dizenterijos, iš toksinų, kuriuos gamina dujinės gangrenos sukėlėjai, taip pat iš gyvačių nuodų.
"-~-" $asmenys, kurių kraujyje yra antitoksino (pagal Greer)
°--«> % žmonių apie teigiamą reakciją. Schick (pagal Parką ir Tskngerį) barai - sergamumas difterija Pasiskirstymas pagal amžių: asmenys, kurių kraujyje yra antitoksino (%); asmenys, kurių Schick reakcija teigiama (%); sergamumas difterija (°/ooo kiekviename amžiuje). vyresniems nei 5 metų amžiaus, turint omenyje santykinį neigiamo Š. iki 5 metų amžiaus. Galiausiai III. R. Jis taip pat naudojamas kaip objektyvi profilaktinių skiepų nuo difterijos veiksmingumo kontrolė. Šį efektyvumą įrodo teigiamo (prieš vakcinaciją) Sh perėjimas. neigiamas po vakcinacijos (dažniausiai praėjus 6 savaitėms po paskutinės vakcinacijos). Sh.r. gamybos technika: 1. Norint paruošti reikiamą toksino praskiedimą reikiamu tūriu, pradėti nuo Dim toksino. Tarkime, toksino silpnumas = 0,0032. Norėdami paruošti toksiną, kurio sudėtyje yra I/4l) Dim 0,2 tūrio, elkitės taip: paimkite lOODlm, šiuo atveju = 0,32, ir pridėkite fiziologinį tirpalą iki 10,0, ty 9,68. Paimkite 1,0 šio praskiedimo (t. y. 10 Dim) ir pridėkite prie 79,0 fiziolio. sprendimas. Tada 80,0 antrojo skiedimo yra 10.Dim; 1 cm 3 todėl - V" Dim, o 0,2 - Vio Dim. Kiekvienam skiedimui reikia paimti šviežią, sausą pipetę, plauti ją bent 10 kartų. Šiuo atveju reikalingas ypatingas matavimo tikslumas ir pipečių tikslumas (pusė paruošto toksinų skiedinio supilama į atskirą kolbą ir dedama į verdančio vandens vonią 10 minučių; taip „kontrolei“ gaunamas pašildytas toksinas) . Atsižvelgiant į tai, kad toksinas, praskiestas fiziol. tirpalo, greitai praranda aktyvumą, praskiedimui patogiau imti ir pan. borato buferinis tirpalas (žr. Dicko reakcija) kuriame praskiestas toksinas išlaiko savo stiprumą kelis mėnesius. 2. Injekcija atliekama griežtai intradermiškai, patogiausia naudojant tuberkulino švirkštą su labai plona platinos adata (Nr. 18, 19). Adata turi turėti trumpą spygliuką. Švirkščiant barzdą reikia laikyti į išorę. Toksinas suleidžiamas lėtai su tam tikra įtampa, būdinga intradermalinei skysčio injekcijai, todėl injekcijos vietoje susidaro gerai atskirtas burbulas (Quaddel), o plaukų folikulų vietoje yra įdubimai. 3. Aktyvus toksinas suleidžiamas į kairės rankos dilbio odą, įkaitintas toksinas – į dešinės rankos dilbio odą. Masinės gamybos metu III. R. Ją rekomenduojama atlikti dviem gydytojams vienu metu – vienas suleidžia aktyvų, kitas šildomą toksiną. 4. Countdown Sh.r. atliekama du kartus: po 24 valandų, kad būtų atsižvelgta į klaidingas reakcijas ir po 96 valandų, kai tikroji Š. pasiekia kulminaciją. Lit.: Zdrodovskij P., Šiuolaikinės specifinės difterijos profilaktikos problemos, Arch. biol. Mokslai, t. XXXV, ser. A, klausimas. 2, 1934; Doull J., Veiksniai, darantys įtaką selektyviam difterijos paplitimui, Journ. ol užkirsti kelią, med., v. IV, 1930; Frost W., Infekcija, imunitetas ir ligos difterijos epidemiologijoje, Ibid., v. II, 1928 m.; Meerseman, Fries et Renard, La difte-rie chez les suiets a reakcija de Schick negatyvas, Compt. rend, de la soc. de biol., v. CXII, 1933; Park W., Imunizacija nuo toksinų ir antitoksinų nuo difterijos, Journ. Amer. med. As., v. LXXIX, p. 1584, 1922 m.; Rosl ing E., Die Schickreaktion und Ihre Bedeutung, Seuchen-bekamp-fung, B. VII, 1930; Schick V., Die Diphtherietoxin-Hautreaktion des Menschen als Vorprobe des profhylak-tisohen Diphlherieheilseruminielition, M "col. med. Wo-chenschr., 1913, Nr. 47; S iegl J., Zur Frage der Entste-hung der P beise der Entste-hung der Diphtherietoxinreaktion nach Schick, Arch. f. Kinderheilk., B. XCVІII, 1932; Z i n g he r A., The Schick test, Journ. of Amer. med. Ass., v. LXXVІII, 1922; Zoeller C, L "intradermo-reaction al"anatoxine diphterique ou anatoxf-reaction, Compt. rend. de la Soc. de biol., v. XCI, 1924. Taip pat žr. str. Skarlatina. G. Orlovas.
Citocheminiai metodai siekti cheminių ir fermentinių medžiagų identifikavimo ląstelėse, tam naudojant spalvų reakcijas. Citocheminiai vaistai konservuoti ląstelių struktūra, kuri leidžia identifikuoti ląsteles ir nustatyti tiriamo junginio lokalizaciją ląstelėse. Štai kodėl hematologijoje pirmenybė teikiama ne biocheminei, daug darbo reikalaujančiai, destruktyviai ląstelių struktūrai ir susijusiai su labai nevienalyte ląstelių populiacija, o citocheminiams metodams.
Citochemijaįrodė, kad tarp morfologiškai identiškų ląstelių yra reikšmingų cheminių ir fermentinių skirtumų.
Glikogenas (CHIK reakcija) (PAS) – Hotchkiss metodas – Mac Minus
CHIC reakcijos principas. Polisacharidai identifikuojami pagal reakciją, kuri oksiduoja alkoholio grupes, kurios paverčiamos aldehidinėmis grupėmis, o pastarąsias identifikuoja pagal spalvos reakciją su Schiff reagentu.
CHIC reakcijos reagentai: 1. Fiksuojantis alkoholio-formalino mišinys: 9 dalys absoliutaus etilo alkoholis+1 dalis 40% formaldehido; laikyti +4° temperatūroje.
2. Periodinė rūgštis, 1 proc. vandens tirpalas. Tirpalas yra bespalvis. Laikyti rudo stiklo butelyje, tamsoje, laboratorinėje temperatūroje. Gelsvas tirpalas yra netinkamas naudoti.
3. Šifo reagentas. 1 g bazinio fuksino praskieskite 200 ml distiliuoto vandens iki virimo temperatūros. Maišykite 5 minutes, atvėsinkite iki 50°, filtruokite ir įpilkite 20 ml normalios druskos rūgšties. Atvėsinkite iki 25°, įpilkite 2 g natrio arba kalio metabisulfito, kuris visiškai ištirps. Tirpalas turi stovėti parą tamsioje ir šaltoje temperatūroje (+4°). Tada įpilkite 2 g aktyvuota anglis, pokalbis 1 min. ir filtruoti.
Gautas filtratas yra skaidrus ir bespalvis. Leidžiamas šiek tiek gelsvas atspalvis; jei tirpalas pasidaro rausvas, jis tampa netinkamas naudoti. Laikyti +4° temperatūroje hermetiškai uždarytame rudo stiklo butelyje.
4. Žalia šviesa -1% vandeninis tirpalas.
5. Diastazė: nesuskystintos žmogaus seilės arba 0,1 % amilolitinio-diastatinio fermento tirpalas fiziologiniame fiziologiniame tirpale.
CHIC reakcijos atlikimo technika
1) 10 minučių tepinėlių fiksavimas alkoholio ir formalino mišiniu; nuplauti distiliuotu vandeniu;
2) oksidacija 1% periodinės rūgšties tirpalu, 10 min.; nuplauti distiliuotu vandeniu;
3) dažymas Šifo reagentu uždengtame inde, tamsoje ir šaltyje, 2 valandas; nuplauti tekančiu vandeniu;
4) kontrastinis dažymas 1 % žalia šviesa 1 minutę; nuplauti tekančiu vandeniu.
Valdymas priskirtas tepinėlis inkubuojamas su diastaze, 60 min. kambario temperatūroje, kad selektyviai pašalintų glikogeną. Nuplovus distiliuotu vandeniu, jis apdorojamas įprastu būdu.
CHIC reakcijos rezultatų įvertinimas
Glikogenas, dažytos tamsiai raudonos spalvos raudona spalva, pasirodo grūdelių pavidalu arba išsibarstę. Reakcijai stebėti naudojami subrendę granuliocitai. Be glikogeno CHIC teigiama reakcija Jie taip pat gamina kitas angliavandenių medžiagas, tokias kaip mucinas, mukoproteinai, cerebrozidai ir fibrinas. Glikogeno atskyrimas nuo šių komponentų atliekamas iš anksto apdorojant diastaze, po kurio glikogenas nebedažomas.
IN granulocitai glikogenas yra išsklaidytos formos jau promielocitų stadijoje ir bręsdamas pradeda daugėti. Normaliomis sąlygomis limfocitai yra neigiami arba 20% jų gali būti keli maži glikogeno grūdeliai. Monocitai yra neigiami arba smulkiai granuliuoti.
Intensyvumas spalvinimas nustatomas pusiau kiekybiškai. Reakcijoje PAS atsispindi glikogeno indikatoriumi arba vidutiniu reakcijos indikatoriumi (Astaldi). Normalus indikatorius glikogeno svyruoja nuo 0,10 iki 0,30. Paprastai tik patologinių limfocitų apkrovos laipsnis yra didesnis nei 3.
Tai buvo nurodyta CHIC reakcijos metodu:
a) Nustatant diferencinė diagnostika tam tikros citologinės ūminės leukemijos rūšys:
- Mieloblastai ir promieloidai yra PHIK neigiami arba įgauna silpną difuzinę spalvą. Auer kūnai duoda teigiamą reakciją, kuri susilpnėja po virškinimo su seilėmis.
- Limfoblastai sergant ūmine leukemija ir limfosarkoma sukelia aštrią CHIC teigiamą reakciją grūdelių arba didelių glikogeno blokų pavidalu.
- Eritroblastai, sergantys eritremija ir ūmine eritroleukemija, duoda ryškiai teigiamą išsklaidytą arba granuliuotą reakciją, priešingai nei įprasti eritroblastai, kurie yra neigiami PAS;
- Monocitoidiniai blastai yra nenuosekliai silpnai teigiami, smulkaus granuliavimo.
b) Lėtinės limfinės leukemijos diagnozei nustatyti ir gydymo veiksmingumui stebėti: padidėjęs glikogeno rodiklis rodo sunkią ligos formą ir liūdną prognozę.
Glikogeno augimas patologinių limfocitų atveju, leukemijai nebūdingas reiškinys, paaiškinamas metabolinio aktyvumo padidėjimu bet kokio tipo limfoidų proliferacija.
c) Atskirti Gošė ląsteles nuo kitų makrofagų su kaupimu.