V roku 2013 utrpela pri jazde na kolieskových korčuliach zlomeninu fibuly. Keďže som nevedel, čo mám robiť, obrátil som sa na BSPM, kde mi dali sadru. O týždeň neskôr som si uvedomil, že niečo nie je v poriadku a moji priatelia mi poradili, aby som kontaktoval Olega Arkadyeviča Jukhimčuka.
O pár dní som prišla na konzultáciu, kde som zistila, že kosti nezrastú správne a potrebujem operáciu platničky.
Služba a prístup k pacientovi Olega Arkadyeviča a jeho tímu sú prvotriedne! Všetko je rýchle, prehľadné, profesionálne a vtipné. Po operácii - plnohodnotná "servisná" podpora. Členok sa zotavil, funguje ako predtým, žiadna bolesť ani známky zlomeniny, okrem najtenšej jazvy. V roku 2018 došlo k zraneniu kolena a nepochybne som sa opäť obrátil na Olega Arkadyeviča. Netreba dodávať, že to opäť opravili, pomohli a upokojili ma! Celkovo vzaté, skvelý lekár a skvelý človek! Úprimne odporúčam!
Irina Životko
Pred rokom som sa vážne zranil.
Pred rokom utrpela vážne zranenie členka, zloženú zlomeninu 2 kostí s posunutím, pretrhnutie väzov a čiastočné poškodenie svalov.
žijem v Európe. Hlásila som sa do mnohých ambulancií... Po mnohých konzultáciách a diagnostike som, žiaľ, nedostala od lekárov jednoznačné stanovisko. Záver, ktorý mi zaznel, bol: "Je nepravdepodobné, že budete chodiť ako predtým."
Na odporúčanie svojich priateľov sa obrátila o odbornú pomoc na ukrajinskú kliniku, na jedného z najlepších chirurgov/traumatológov, konkrétne na Juchimčuka Olega Arkadieviča.
výsledok:
1. Jasné, rýchle odborné vyšetrenie a rozhodol som sa o operácii.
2. Operácia dopadla dobre. Implantáty boli nainštalované.
3. Dostal som vysokú úroveň pooperačnej rehabilitačnej konzultácie.
4. ÚPLNE zotavený bez najmenšieho náznaku zranenia!
BRAVO NAŠIM LEKÁROM!!!
Pani doktorku pozname dlho, likuvav opakovane
S lekárom sa poznáme už dlho, opakovane sme si užili všetkých členov vlasti, ale mama po nehode v roku 2006. so zlomeninami všetkých mojich kostí (rameno, gomilka, rebrá) bola operovaná ďaleko, dlho pracovala, opatrovala onukiv, vyrástla mesto na vidieku. Zdravie pre vás, doktor, a sila vašej vlasti! Určite viete, je to škaredé - de force slamku!
Citovať
Už viac ako 10 rokov
Už viac ako 10 rokov sa celá moja vlasť obrátila na Olega Arkadiyoviča. Buďte vždy kvalifikovaní a efektívne pomáhajte. 21. decembra 2017 si zlomila nohu, zlomila dve kosti predkolenia, ostatné kosti mala vypitvané v strede a zlomila sa „ružou“. Jedného dňa sme išli k Olegovi Arkadiyovichovi, zlomili dôležitú operáciu, dali mi dve platničky... Už som chodil bez milície, no zároveň som začal ísť až do zlomeniny. Pre dobro tohto doktora.
Antonina
Viac ako rok trpel zápalom achilovky,
Z času na čas využívam služby Olega Arkadieviča a odporúčam svojim priateľom.
Vyše roka som trpel zápalom achilovky, už som ráno chodil ako Charlie Chaplin 🙁
Oleg Arkadyevich ma o mesiac položil na parket. Obrovský zážitok, zlaté ruky, bystrá hlava a len dobrý človek. Ďakujem mnohokrát!!!
P.S. Pre tých, ktorí sa aktívne venujú športu a v dôsledku toho sa zrania, dôrazne odporúčam Olega Arkadyevicha.
Alexander
Oleg Arkadievich, ďakujem veľmi pekne!!!
Oleg Arkadievich, ďakujem veľmi pekne!!! V roku 2015 bol môj otec operovaný, sám je lekár, v práci trávi 99% času na nohách a vďaka vám pokračuje v rovnakom duchu, ale už na protéze bedrový kĺb. Sám som chirurg a pamätám si, ako všetko prebiehalo, môžem povedať, že predoperačné aj pooperačné obdobie prebehlo veľmi „hladko“. Po 1,5 mesiaci bol ocko už na operačnej sále (pôrodník-gynekológ), aj keď si pamätám, že si to hovorila skoro :)) ale nevydržal. Už tento rok som po 3. krát dobyl Hoverlu) Spomíname si na vás každý 14. február, v deň operácie. ĎAKUJEM!!!
Už 30 rokov sa predpokladá, že angiogenéza - proces tvorby nových krvných ciev - by sa mohla stať dôležitým cieľom protirakovinovej terapie. A len nedávno bola táto príležitosť realizovaná. Klinické údaje ukázali, že humanizovaná monoklonálna protilátka, bevacizumab, ktorá sa zameriava na kľúčovú proangiogénnu molekulu, vaskulárny endoteliálny rastový faktor (VEGF), môže predĺžiť očakávanú dĺžku života u pacientov s metastatickým kolorektálnym karcinómom, ak sa podáva ako liečba prvej línie v kombinácii s chemoterapiou drogy. Tu diskutujeme o funkciách a význame VECF, aby sme ukázali, že VEGF je platným bodom pôsobenia pre protirakovinovú terapiu.
čo je VEGF?
VEGF je jedným členom rodiny štruktúrne príbuzných proteínov, ktoré sú ligandmi pre rodinu receptorov VEGF. VEGF ovplyvňuje vývoj nových krvných ciev (angiogenéza) a prežitie nezrelých krvných ciev (podpora ciev) väzbou na dva blízko príbuzné receptory membránovej tyrozínkinázy (VEGF receptor-1 a VEGF receptor-2) a ich aktiváciou. Tieto receptory sú exprimované endotelovými bunkami steny krvných ciev (tabuľka 1). Väzba VEGF na tieto receptory spúšťa signálnu kaskádu, ktorá v konečnom dôsledku stimuluje rast, prežitie a proliferáciu vaskulárnych endotelových buniek. Endotelové bunky sa podieľajú na takých rôznorodých procesoch, ako je vazokonstrikcia a vazodilatácia, prezentácia antigénu a tiež slúžia ako veľmi dôležité prvky všetkých krvných ciev – kapilár aj žíl alebo tepien. Stimuláciou endotelových buniek teda VEGF hrá ústrednú úlohu v procese angiogenézy.
Prečo je dôležité robiť vaskulárny endoteliálny rastový faktor (VEGF ľudský)?
VEGF je mimoriadne dôležitý pre tvorbu adekvátne fungujúceho cievneho systému počas embryogenézy a v ranom postnatálnom období, ale jeho fyziologická aktivita je u dospelých obmedzená. Pokusy na myšiach ukázali nasledovné:
- Cielené poškodenie jednej alebo dvoch alel génu VEGF vedie k smrti embrya
- Inaktivácia VEGF počas skorého postnatálneho vývoja tiež vedie k smrti
- Poškodenie VEGF u dospelých myší nie je sprevádzané žiadnymi zjavnými abnormalitami, pretože jeho úloha je obmedzená na vývoj folikulov, hojenie rán a reprodukčný cyklus u samíc.
Obmedzená hodnota angiogenézy u dospelých znamená, že potlačenie aktivity VEGF je uskutočniteľným terapeutickým cieľom.
vaskulárny endoteliálny rastový faktor (VEGF; Angličtina Vaskulárny endoteliálny rastový faktor) je signálny proteín produkovaný bunkami na stimuláciu vaskulogenézy (tvorba embryonálneho cievneho systému) a angiogenézy (rast nových ciev v už existujúcom cievnom systéme). V súčasnosti sú známe viaceré rôzne faktory tejto rodiny (ktorá je dnes podtriedou pomerne rozsiahlej triedy rastových faktorov).
Proteíny VEGF slúžia ako súčasť systému zodpovedného za obnovenie prísunu kyslíka do tkanív v situácii, keď je krvný obeh nedostatočný. Koncentrácia VEGF v krvnom sére je zvýšená pri bronchiálnej astme a diabetes mellitus. Hlavnými funkciami VEGF sú tvorba nových krvných ciev v embryonálnom vývoji alebo po úraze, zvýšený rast svalov po cvičení a zabezpečenie kolaterálnej cirkulácie (tvorba nových krvných ciev, keď sú existujúce zablokované).
Zvýšená aktivita VEGF môže viesť k rôznym ochoreniam. Pevné rakovinové nádory teda nemôžu rásť väčšie ako určitá obmedzená veľkosť bez dostatočného zásobovania krvou; nádory schopné exprimovať VEGF môžu rásť a metastázovať. Nadmerná expresia VEGF môže spôsobiť vaskulárne ochorenie v určitých častiach tela (najmä v sietnici). Niektoré lieky vyvinuté v posledných rokoch (napríklad bevacizumab) sú schopné kontrolovať alebo spomaliť priebeh takýchto ochorení inhibíciou VEGF.
Súčasný výskum naznačuje, že proteíny VEGF nie sú jediným aktivátorom angiogenézy. najmä FGF2 A HGF sú tiež silné angiogénne faktory.
Klasifikácia
Najdôležitejšiu úlohu v ľudskom tele zohráva proteín z rodiny VEGF tzv VEGF-A. Do tejto rodiny patrí aj placentárny rastový faktor (PGF) a bielkoviny VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D. Všetky boli objavené neskôr ako VEGF-A (pred ich objavením sa proteín VEGF-A jednoducho nazýval VEGF). Spolu s vyššie uvedeným proteínom VEGF kódovaným vírusmi ( VEGF-E) a proteín VEGF nachádzajúci sa v jede niektorých hadov ( VEGF-F).
| Typ | Funkcia |
|---|---|
| VEGF-A |
|
| VEGF-B | Embryonálna angiogenéza (najmä tkanivá myokardu) |
| VEGF-C | Angiogenéza lymfatických ciev |
| VEGF-D | Vývoj lymfatických ciev v pľúcach |
| PIGF | Vaskulogenéza (rovnako ako angiogenéza pri ischémii, zápale, hojení rán a rakovine) |
Aktivita proteínu VEGF-A bola študovaná (ako už názov napovedá) najmä vo vaskulárnych endotelových bunkách, aj keď má vplyv na fungovanie iných typov buniek (napr. stimuluje migráciu monocytov/makrofágov, pôsobí na neuróny, rakovinové bunky renálne epitelové bunky). Vo výskume in vitro Ukázalo sa, že VEGF-A stimuluje mitogenézu a migráciu endotelových buniek. VEGF-A tiež zvyšuje a zvyšuje mikrovaskulárnu permeabilitu a bol pôvodne nazvaný "faktor vaskulárnej permeability".
Alternatívna klasifikácia
Pojem "VEGF proteíny" je široký pojem zahŕňajúci dve skupiny proteínov, ktoré sú výsledkom alternatívneho zostrihu messengerovej RNA (mRNA) jedného génu obsahujúceho 8 exónov. Tieto dve skupiny sa líšia v mieste zostrihu terminálneho exónu 8: proteíny s proximálnym miestom sú označené ako VEGFxxx a proteíny s distálnym miestom sú označené ako VEGFxxxb. Okrem toho, alternatívne zostrihanie exónov 6 a 7 mení ich vlastnosti viažuce heparín a zloženie aminokyselín (u ľudí: VEGF121, VEGF121b, VEGF145, VEGF165, VEGF165b, VEGF189, VEGF206; u hlodavcov obsahujú ortológy menej aminokyselín z týchto proteínov ). Tieto oblasti majú dôležité funkčné dôsledky pre varianty VEGF, pretože miesto zostrihu terminálnej oblasti (exón 8) určuje, či proteíny budú proangiogénne (proximálne miesto zostrihu používané počas angiogenézy) alebo antiangiogénne (vzdialené miesto zostrihu používané v normálne tkanivo). Okrem toho zahrnutie alebo vylúčenie exónov 6 a 7 poskytuje interakcie s heparánsulfátovými proteoglykánmi a koreceptormi neuropilínu na bunkovom povrchu, čím sa zvyšuje ich schopnosť viazať a aktivovať receptory VEGF ( VEGFR). U myší sa nedávno ukázalo, že proteín VEGF-C je dôležitým induktorom neurogenézy v subventrikulárnych zónach bez angiogénnych účinkov.
VEGF receptor
Všetci členovia rodiny proteínov VEGF stimulujú bunkovú odpoveď väzbou na receptory s tyrozínkinázovou aktivitou na bunkovom povrchu; k aktivácii týchto proteínov dochádza ich transfosforyláciou. Všetky receptory VEGF majú extracelulárnu časť pozostávajúcu zo 7 oblastí podobných imunoglobulínu, jednu transmembránovú oblasť a intracelulárnu časť obsahujúcu doménu tyrozínkinázy.
Sú známe tri typy receptorov, ktoré sú označené ako VEGFR-1, VEGFR-2 a VEGFR-3. V závislosti od alternatívneho zostrihu sú receptory viazané na membránu a sú voľné.
Proteín VEGF-A sa viaže na receptory VEGFR-1 (Flt-1) a VEGFR-2 (KDR/Flk-1); zatiaľ čo receptor VEGFR-2 pôsobí ako mediátor v takmer všetkých známych bunkových reakciách na VEGF. Funkcie receptora VEGFR-1 sú menej dobre definované (hoci sa predpokladá, že moduluje signály VEGFR-2). Ďalšou funkciou VEGFR-1 je, že môže pôsobiť ako "prázdny" receptor, izolujúci proteín VEGF od receptora VEGFR-2 (čo sa zdá byť obzvlášť dôležité pri angiogenéze počas embryonálneho vývoja).
Proteíny VEGF-C a VEGF-D (ale nie VEGF-A) sú ligandy pre tretí receptor (VEGFR-3), ktorý sprostredkúva lymfangiogenéza.
Produkcia bunkami
Produkcia proteínov VEGFxxx môže byť indukovaná v bunkách, ktoré nedostávajú dostatok kyslíka. Keď má bunka nedostatok kyslíka, produkuje jeden z transkripčných faktorov, faktor indukovateľný hypoxiou ( HIF). Tento faktor (okrem iných funkcií - najmä modulácie erytropoézy, t.j. procesu tvorby červených krviniek v kostnej dreni) stimuluje uvoľňovanie proteínov VEGFxxx. Cirkulujúci proteín VEGFxxx sa potom viaže na receptor VEGF na endotelových bunkách a aktivuje činnosť tyrozínkinázy, čím sa spustí angiogenéza.
U pacientov trpiacich pľúcnym emfyzémom sa zistilo zníženie hladiny VEGF v pľúcnych artériách.
V obličkách zvýšená expresia VEGFxxx v glomerulách priamo spôsobuje glomerulárnu hypertrofiu spojenú s proteinúriou.
Zmeny hladín VEGF môžu naznačovať skoré štádiá preeklampsie.
Anti-VEGF terapia
Anti-VEGF terapie zohrávajú dôležitú úlohu pri liečbe určitých typov rakoviny (najmä -
Obsah
1. Regulácia neoangiogenézy
2. Nádorová angiogenéza
Vaskuloendoteliálny rastový faktor
. Vaskuloendoteliálny rastový faktor C
. Vaskuloendoteliálny rastový faktor D
. VEGF receptory
. Fibroblastový rastový faktor
. epidermálny rastový faktor
. Transformujúci rastový faktor α
. Transformujúci rastový faktor β
. rastový faktor krvných doštičiek
. placentárny rastový faktor
. Hepatocytový rastový faktor
. Angiogenin
. Angiopoetíny-1 a -2
. Pigmentový faktor epitelového pôvodu
. Oxid dusnatý
. Matricové metaloproteinázy
. Endostatin
. faktor kmeňových buniek
. Faktor, ktorý inhibuje leukemické bunky
. mozgový neurotropný faktor
Časť Skratky
EGF – epidermálny rastový faktor
FGF - fibroblastový rastový faktor
HGF - hepatocytový rastový faktor
IGF – inzulínu podobné rastové faktory
MMRS - matricové metaloproteinázy
PDGF - Rastový faktor krvných doštičiek
PLGF – placentárny rastový faktor
TGF – transformujúce rastové faktory
TIMP - inhibítory
MMP SCF - faktor kmeňových buniek
VEGF - Vaskuloendoteliálny rastový faktor
Rastové faktory – polypeptidy s molekulovej hmotnosti 5-50 kDa, spojené do skupiny trofických regulačných látok. Podobne ako hormóny majú tieto faktory široké spektrum biologických účinkov na mnohé bunky – stimulujú alebo inhibujú mitogenézu, chemotaxiu a diferenciáciu. Na rozdiel od hormónov rastové faktory zvyčajne produkujú nešpecializované bunky nachádzajúce sa vo všetkých tkanivách a majú endokrinné, parakrinné a autokrinné účinky. Endokrinné faktory sú produkované a transportované do vzdialených cieľových buniek cez krvný obeh. Pri dosiahnutí svojho „cieľa“ interagujú so špecializovanými vysokoafinitnými receptormi cieľových buniek. Parakrinné faktory sa líšia tým, že sa šíria difúziou. Receptory cieľových buniek sa zvyčajne nachádzajú v blízkosti produkčných buniek. Autokrinné faktory ovplyvňujú bunky, ktoré sú priamym zdrojom týchto faktorov. Väčšina polypeptidových rastových faktorov pôsobí parakrinným alebo autokrinným spôsobom. Avšak určité faktory, ako je rastový faktor podobný inzulínu (IGF), sú schopné prejavovať endokrinné účinky.
Regulácia neoangiogenézy
Normálne fungovanie tkanív závisí od pravidelného dodávania kyslíka krvnými cievami. Pochopenie toho, ako sa krvné cievy tvoria, bolo v poslednom desaťročí predmetom veľkej časti výskumného úsilia. Vaskulogenéza v embryách je proces, pri ktorom sa krvné cievy tvoria de novo z prekurzorov endotelových buniek. Angiogenéza je proces tvorby nových krvných ciev z už existujúceho cievneho systému. Zohráva dôležitú úlohu vo vývoji, normálnom raste tkanív, hojení rán, reprodukčnom cykle u žien (vývoj placenty a žltého telieska, ovulácia) a tiež hrá veľkú úlohu pri rôznych ochoreniach. Obzvlášť zaujímavý je rast nádorov. Ide o vytvorenie nového systému zásobovania krvou, ktorý umožňuje rast nádoru. Tento proces, označovaný ako nádorová angiogenéza, je tiež integrálnou súčasťou šírenia nádorových buniek a rastu metastáz. Proces neoangiogenézy je nevyhnutný pre dlhodobú adaptáciu tkanív v podmienkach poškodenia. V tomto prípade dochádza k čiastočnému vstupu rastových faktorov do krvi, čo má diagnostickú hodnotu.
Rozlišujú sa tieto štádiá neoangiogenézy:
1. zvýšenie endotelovej permeability a deštrukcia bazálnej membrány;
2. migrácia endotelových buniek;
3. proliferácia endotelových buniek;
4. „dozrievanie“ endotelových buniek a vaskulárna remodelácia.
Hlavným mechanizmom regulácie procesov neoangiogenézy je uvoľňovanie angiogénnych faktorov, ktorých zdrojom môžu byť endotelové a žírne bunky, makrofágy a pod. Pod vplyvom angiogénnych faktorov sa aktivujú endoteliocyty (hlavne v postkapilárnych venulách) a migrujú za hranice bazálna membrána s tvorbou vetiev hlavných ciev. Predpokladá sa, že aktivácia expresie endotelových adhéznych molekúl, napríklad E-selektínu, má veľký význam v mechanizme migrácie endoteliocytov. V stabilnom stave endoteliocyty neproliferujú a delia sa len príležitostne (raz za 7-10 rokov). Pôsobením angiogénnych rastových faktorov a cytokínov sa aktivuje proliferácia endoteliocytov, ktorá končí prestavbou cievy, po ktorej novovytvorená cieva nadobudne stabilný stav.
Rast nových ciev je určený rovnováhou medzi jeho stimulantmi a inhibítormi. Pri nízkej hodnote pomeru stimulantov k inhibítorom tvorby ciev je neoangiogenéza blokovaná alebo nízkej intenzity, naopak, pri vysokých hodnotách pomeru sa neoangiogenéza aktívne spúšťa.
Stimulátory neoangiogenézy: vaskuloendoteliálny rastový faktor (VEGF), fibroblastový rastový faktor (FGF), angiogenín, epidermálny rastový faktor (EGF), rastový faktor odvodený od krvných doštičiek (PDGF), transformujúce rastové faktory α (TGF-α) a β (TGF-β ), inzulínu podobný rastový faktor 1 (IGF-1), NO, interleukín-8 a nešpecifické faktory, ako sú matricové metaloproteinázy (MMP).
Inhibítory neoangiogenézy: endostatín, rozpustné receptory VEGF (sVEGFR), trombospondín, angiostatín (fragment plazminogénu), vazostatín, restín, inhibítory MMP (TIMP-1, TIMP-2).
Nádorová angiogenéza
Na rozdiel od bežnej, normálnej vaskulatúry, ktorá rýchlo dozrieva a stabilizuje sa, majú nádorové cievy štrukturálne a funkčné abnormality. Neobsahujú pericyty, bunky, ktoré sú funkčne spojené s cievnym endotelom a sú mimoriadne dôležité pre stabilizáciu a dozrievanie cievnych štruktúr. Okrem toho plavidlo1. 2. 3. 4. Táto sieť nádorov má chaotickú organizáciu s tortuozitou a zvýšenou vaskulárnou permeabilitou a jej prežitie a proliferácia závisí od rastových faktorov. Tieto cievne anomálie, ktoré sú z veľkej časti spôsobené nadmernou produkciou rastových faktorov, vytvárajú podmienky priaznivé pre rast nádoru.
Rakovinové bunky sú charakterizované zvýšením hladiny stimulátorov neoangiogenézy. Pri absencii krvného zásobenia nádory získavajú kyslík a živiny difúziou a zvyčajne nerastú o viac ako 1–2 mm v priemere. Nástup angiogenézy vedie k vytvoreniu nového krvného zásobenia a uľahčuje rýchly rast a metastázovanie nádoru, čím sa stáva aktívnym. Hoci sa na nádorovej angiogenéze podieľa mnoho rastových faktorov, zistilo sa, že VEGF je z nich najsilnejší a dominantný. Porucha prekrvenia nádoru môže potlačiť jeho následný rast. Predpokladá sa, že blokovanie nádorového rastu je možné potlačením tvorby a aktivity angiogenéznych rastových faktorov alebo priamym pôsobením na novovzniknuté, nezrelé cievy. Táto metóda ovplyvňovania nádoru nespôsobuje jeho eradikáciu, ale iba obmedzuje jeho rast, čím sa choroba mení na pomalý chronický proces. Anti-VEGF terapia inhibuje rast nových nádorových ciev a vyvoláva regresiu novovytvoreného cievneho riečiska.
Vaskuloendoteliálny rastový faktor (VEGF, VEGF A)
VEGF je heterodimérny glykoproteínový rastový faktor produkovaný rôznymi typmi buniek. Identifikovalo sa najmenej 5 variantov VEGF-A: VEGF121, VEGF165, VEGF183, VEGF189, VEGF206. Ďalšie varianty VEGF sú označované ako VEGF-B, -C, -D. VEGF 165 je prevládajúcou formou vo väčšine tkanív. Kaposiho sarkóm exprimuje VEGF 121 a VEGF 165. VEGF 121 a VEGF 165 sú rozpustné formy, zatiaľ čo VEGF 189 a VEGF 206 sú viazané na membránové proteoglykány obsahujúce heparín. Na rozdiel od iných mitogénov endotelových buniek, ako je bFGF (základná forma) a PDGF, VEGF sa syntetizuje ako prekurzor s 226 aminokyselinami.
VEGF je potenciálny mitogén pre vaskulárne epitelové bunky. Má silný vplyv na vaskulárnu permeabilitu, je silným angiogénnym proteínom v rôznych experimentálnych systémoch a podieľa sa na neovaskularizačných procesoch v patologických situáciách. Medzi VEGF a bFGF existuje synergický účinok na indukciu angiogenézy. Zo schopnosti VEGF ovplyvňovať vaskulárnu permeabilitu vyplýva možnosť zapojenia tohto rastového faktora do zmeny funkcií hematoencefalickej bariéry pri subnormálnych a patologických stavoch. VEGF-A tiež spôsobuje vazodilatáciu prostredníctvom NO syntetázovej dráhy v endotelových bunkách a môže aktivovať migráciu monocytov.
VEGF-A možno detegovať v plazme a sére pacientov, ale jeho hladina v sére je oveľa vyššia. Mimoriadne vysoké hladiny možno nájsť v obsahu cýst vytvorených u pacientov s nádormi na mozgu alebo v ascitickej tekutine. Krvné doštičky uvoľňujú VEGFA po agregácii a môžu byť ďalším hlavným zdrojom pre nádorové bunky. Rôzne štúdie ukázali, že spojenie vysokých hladín VEGF-A v sére so zlou prognózou u pacientov s rakovinou môže korelovať so zvýšenými krvnými doštičkami. Nádory môžu vylučovať cytokíny a rastové faktory, ktoré stimulujú produkciu megakaryocytov v kostnej dreni a zvyšujú počet krvných doštičiek. To zase môže viesť k ďalšiemu, nepriamemu zvýšeniu dodávania VEGF-A do nádoru. Okrem toho sa VEGF-A podieľa na mnohých ďalších patologických procesoch spojených so zvýšenou angiogenézou alebo zvýšenou vaskulárnou permeabilitou. Príklady, kde VEGF-A hrá dôležitú úlohu, sú psoriáza a reumatoidná artritída, ako aj ovariálny hyperstimulačný syndróm. Diabetická retinopatia je tiež spojená s vysokými vnútroočnými hladinami VEGF-A a inhibícia funkcie VEGFA môže viesť k neplodnosti v dôsledku blokovania funkcie žltého telieska. Dôležitosť VEGF-A pre rast nádoru bola jasne preukázaná použitím receptorov VEGF na blokovanie proliferácie in vivo, ako aj blokovaním protilátok proti VEGF alebo proti jednému z receptorov VEGF. V dôsledku toho sa interferencia s funkciou VEGF-A stala hlavným záujmom vývoja liekov zameraných na blokovanie angiogenézy a metastáz. V súčasnosti sa na vývoji takýchto antagonistov podieľa viac ako 110 farmaceutických spoločností na celom svete. Ich prístupy zahŕňajú antagonisty VEGF-A alebo jeho receptorov, selektívne inhibítory tyrozínkináz. Zameranie signalizácie VEGF môže mať veľmi dôležité terapeutické dôsledky pre mnohé choroby a môže slúžiť ako základ pre vývoj budúcich (anti)angiogénnych terapií.
Vaskuloendoteliálny rastový faktor C (VEGF-C)
VEGF-C patrí do rodiny VEGF. Ukázalo sa, že má angiogénne a lymfangiogénne vlastnosti. Rodina VEGF a ich receptory sa podieľajú na vývoji a raste vaskulárneho endotelu. Dva proteíny tejto rodiny, VEGF-C a -D, majú regulačný účinok na endotelové bunky lymfatických ciev prostredníctvom receptora VEGFR3, pričom pôsobia ako mitogény.
Expresia VEGF-C je spojená s onkohematologickými ochoreniami. Expresia VEGF-C spolu s receptormi podporuje prežitie a proliferáciu nádorových buniek. Zvýšená expresia VEGF-C bola preukázaná pri malígnych nádoroch gastrointestinálneho traktu, kde koreluje s inváziou, metastázami do lymfatických uzlín a zníženým prežívaním.
Vaskuloendoteliálny rastový faktor D (VEGF-D)
VEGF-D (tiež známy ako c-fos-indukovateľný faktor alebo FIGF) je veľmi blízky VEGF-C. Má štrukturálnu homológiu a receptorovú špecifickosť podobnú VEGF-C, takže sa predpokladá, že VEGF-D a VEGF-C možno rozdeliť do podrodiny VEGF. VEGF-D sa spočiatku syntetizuje ako prekurzorový proteín obsahujúci okrem centrálnej homológnej domény viažucej receptor VEGF (VHD) jedinečné N- a C-koncové propeptidy. N a C-koncové propeptidy neboli nájdené u iných členov rodiny VEGF. Tieto propeptidy sú proteolyticky štiepené počas biosyntézy, čo vedie k zrelej, sekretovanej forme pozostávajúcej z monovalentných VHD dimérov.
Podobne ako VEGF-C, aj VEGF-D sa viaže na bunkovom povrchu na VEGF tyrozínkinázový receptor 2 (VEGF R2/Flk-1/KDR) a VEGFR3. Tieto receptory sú lokalizované na vaskulárnych a lymfatických endotelových bunkách a sú zodpovedné za angiogenézu a lymfogenézu. Zrelá forma VEGFD sa viaže na tieto receptory s väčšou afinitou ako pôvodná forma VEGF-D. Expresia génu VEGF-D bola preukázaná vo vyvíjajúcich sa embryách, najmä v mezenchýme pľúc. VEGF-D je tiež lokalizovaný v nádorových bunkách. V dospelých tkanivách sa mRNA VEGF-D exprimuje v srdci, pľúcach, kostrovom svale a tenkom čreve.
VEGF receptory (sVEGFR-1, sVEGFR-2)
Mnohé cytokínové receptory existujú v rozpustnej forme po ich proteolytickom štiepení a oddelení od bunkového povrchu. Tieto rozpustné receptory sú schopné viazať a neutralizovať cytokíny v obehu. Existujú tri receptory pre VEGF-A: VEGFR-1 (Flt-1), -2 (KDR) a -3 (Flt-4). Všetky obsahujú vo svojich extracelulárnych doménach sedem opakovaní podobných Ig. VEGFR1-R3 je prevažne exprimovaný v proliferujúcom endoteli cievnej výstelky a/alebo infiltrujúcich pevných nádoroch. VEGFR2 je však viac prítomný ako VEGFR1 a je exprimovaný vo všetkých endotelových bunkách vaskulárneho pôvodu. VEGFR2 je tiež prítomný v endotelových a perivaskulárnych kapilárnych bunkách v tenkej vrstve semenných tubulov, Leydigových bunkách a Sertoliho bunkách. VEGFR2 viaže VEGF-A, -C a -D. Na rozdiel od VEGFR1, ktorý viaže PlGF aj VEGF s vysokou afinitou, VEGFR2 viaže len VEGF s vysokou afinitou, ale nie PIGF.
Tieto receptory hrajú dôležitú úlohu v angiogenéze. sVEGFR-1 je inhibítorom tohto procesu. Väzbou na VEGF bráni VEGF v interakcii s cieľovými bunkami. Funkčná inaktivácia VEGFR2 protilátkami môže narušiť angiogenézu a zabrániť invázii nádorových buniek. Vo vaskulárnych endotelových bunkách je angiogenéza indukovaná HIV-1 Tat proteínom sprostredkovaná VEGFR2. Tat špecificky viaže a aktivuje VEGFR2. Tat-indukovaná angiogenéza je inhibovaná činidlami schopnými blokovať VEGFR2.
Fibroblastový rastový faktor (FGF)
Rodina FGF v súčasnosti zahŕňa 19 rôznych proteínov. Spočiatku boli charakterizované dve formy: kyslá (aFGF) a zásaditá (bFGF).
a a bFGF sú produkty rôznych génov a zdieľajú až 53 % homológiu. Molekula aFGF je reprezentovaná jednoduchým polypeptidovým reťazcom s m.m. 16,8 kDa. Mm. rôzne formy bFGF sa pohybujú od 16,8 do 25 kDa. Funkčné rozdiely medzi formami bFGF sa nezistili.
Biologická aktivita FGF je rôznorodá. Sú to mitogény pre rôzne bunky neuroektodermálneho a mezenchymálneho pôvodu, potenciálne mitogény a stimulátory angiogenézy, podporujú a stimulujú diferenciáciu buniek rôznych typov neurónov in vivo a in vitro. Okrem a a bFGF táto rodina zahŕňa onkoproteíny int-2 (FGF-3) a hst (FGF-4), FGF-5, keratinocytový rastový faktor a vaskulárny endotelový rastový faktor. FGF-3 a -4 sú úzko spojené s bFGF, ktorý je pravdepodobne potenciálnym onkogénom. Klinické údaje podporujú úlohu bFGF v neoangiogenéze nádoru. Zvýšenie hladiny tohto faktora teda koreluje so stupňom agresivity procesu pri mnohých solídnych nádoroch, leukémiách a lymfómoch u detí a dospelých a môže slúžiť ako prognostický faktor agresivity nádorového procesu. bFGF je nevyhnutný pre vývoj a udržiavanie vaskulárneho systému počas embryogenézy a je tiež hlavným angiogénnym faktorom pri skorej rekonvalescencii a kardiovaskulárnych ochoreniach.
Epidermálny rastový faktor (EGF)
EGF - globulárny proteín s m.m. 6,4 kDa, skladajúci sa z 53 aminokyselinových zvyškov, ktorý pôsobí ako silný mitogén na rôzne bunky endodermálneho, ektodermálneho a mezodermálneho pôvodu. EGF sa nachádza v krvi, cerebrospinálnej tekutine, mlieku, slinách, žalúdočných a pankreatických šťavách. Močový rastový faktor známy ako urogastron je tiež identický s EGF. Hlavným miestom syntézy EGF sú slinné žľazy. EGF kontroluje a stimuluje proliferáciu epidermálnych a epitelových buniek, vrátane fibroblastov, renálneho epitelu, gliových buniek, ovariálnych granulóznych buniek a buniek štítnej žľazy in vitro. EGF tiež stimuluje proliferáciu embryonálnych buniek a zvyšuje uvoľňovanie vápnika z kostného tkaniva. Podporuje kostnú resorpciu a je silným chemoatraktantom pre fibroblasty a epitelové bunky. EGF samotný a v kombinácii s inými cytokínmi je kritickým faktorom sprostredkujúcim hojenie rán a angiogenézu. Pôsobí tiež ako inhibítor sekrécie žalúdočnej kyseliny. Niektoré telesné tekutiny, ako sú sliny, moč, žalúdočná šťava, semenná tekutina a mlieko, obsahujú vysoké hladiny EGF.
EGF hrá dôležitú úlohu v karcinogenéze. Za určitých podmienok môže spôsobiť malignitu buniek. EGF indukuje protoonkogény c-fos a c-myc. Biologické účinky imunoreaktívneho EGF sú podobné účinkom TGF-a. Je dôležité poznamenať, že oba faktory sa viažu na rovnaké receptory. EGF je však o 50 % účinnejší ako TGF-α.
Transformujúci rastový faktor α (TGF-α)
Hlavným zdrojom TGF-α sú karcinómy. Makrofágy a keratinocyty (možno iné epitelové bunky) tiež vylučujú TGF-α. TGF-α stimuluje fibroblasty, vývoj endotelu. Je to angiogénny faktor. Podobne ako EGF, aj TGF-a sa podieľa na regulácii bunkovej proliferácie, ako aj na regulácii rastu nádorových buniek.
Transformujúci rastový faktor β (TGF-β)
Rodina TGF-p zahŕňa skupinu homológnych heterodimérnych proteínov TGFp-1, -2, -3 a -4. Hlavná izoforma vylučovaná bunkami imunitný systém je TGF-pi. Všetky TGF-p pozostávajú zo 112 aminokyselinových zvyškov. Štruktúra TGF-p2 zdieľa 50 % homológiu s TGF-pi v prvých 20 aminokyselinových zvyškoch a 85 % pre fragment 21-36. Nezistili sa žiadne rozdiely vo funkčnej aktivite medzi TGF-pi a -p2. TGF-β je produkovaný mnohými typmi buniek a tkanív: aktivované T-lymfocyty a makrofágy, krvné doštičky, obličky, placenta.
Faktor sa vyrába v neaktívnej forme obsahujúcej spolu s hlavným dimérom fragmenty ďalších reťazcov prekurzorovej molekuly. K aktivácii dochádza vo forme štiepenia týchto fragmentov pomocou proteináz (plazmín, katepsín atď.). Rôzne bunky tiež slúžia ako ciele pre TGF-p, pretože expresia jeho vysokoafinitného receptora je rozšírená. Keď TGFβ pôsobí na imunitný systém, prevládajú inhibičné účinky. Faktor inhibuje hematopoézu, syntézu zápalových cytokínov, odpoveď lymfocytov na IL-2, -4 a -7, tvorbu cytotoxických NK a T buniek. Zároveň zvyšuje syntézu proteínov v medzibunkovom matrixe, podporuje hojenie rán a pôsobí anabolicky.
Pokiaľ ide o polymorfonukleárne leukocyty, TGF-β pôsobí ako antagonista zápalových cytokínov. Vypnutie génu TGF-β vedie k rozvoju fatálnej generalizovanej zápalovej patológie, ktorá je založená na autoimunitnom procese. Ide teda o prvok inverznej regulácie imunitnej odpovede a predovšetkým zápalovej odpovede. TGF-β je zároveň dôležitý aj pre rozvoj humorálnej odpovede: prepína biosyntézu imunoglobulínov na izotyp IgA. Stimuluje angiogenézu. Hladina TGF-β v krvnej plazme pozitívne koreluje s vaskularizáciou nádoru.
Rastový faktor krvných doštičiek (PDGF)
PDGF je jedným z potenciálnych mitogénnych polypeptidov nachádzajúcich sa v ľudskej krvi. Pozostáva z dvoch reťazcov: A a B, spojených v izoformách AA-, BB- a AB. Tieto tri izoformy sa líšia funkčnými vlastnosťami aj spôsobom sekrécie. Zatiaľ čo formy AA a AB sa rýchlo vylučujú z produkčnej bunky, forma BB zostáva do značnej miery spojená s produkčnou bunkou. Len dimérne formy PDGF sa môžu viazať na receptory. Boli identifikované dva rôzne typy receptorov. α receptor viaže buď A alebo B polypeptid, zatiaľ čo β receptor viaže len B polypeptid. Celý rozsah biologických účinkov je spôsobený týmito tromi molekulami PDGF a dvoma receptormi, ich odlišnou expresiou a zložitými intracelulárnymi mechanizmami regulácie ich aktivity. Zdrojom PDGF v sére sú a-granule krvných doštičiek, hoci tento faktor môžu produkovať aj makrofágy a endotelové bunky. V určitých štádiách slúžia ako zdroj PDGF aj bunky placenty a bunky hladkého svalstva neonatálnej aorty.
Izoforma AA je prednostne vylučovaná fibroblastmi, bunkami hladkého svalstva ciev, osteoblastmi, astrocytmi, bunkovými líniami COLO (karcinóm hrubého čreva) a WLM (Wilmov nádor). Syntéza BB je spojená s makrofágmi, bunkami Langerhansových ostrovčekov, neangiogénnym epitelom a bunkovou líniou SW (karcinóm štítnej žľazy). Medzi bunkami produkujúcimi oba reťazce (A a B) sú známe neuróny, mezangiálne bunky obličiek, bunkové línie gliómu a mezoteliómu a krvné doštičky. Počiatočné údaje naznačujú, že ľudské krvné doštičky obsahovali približne 70 % PDGF-AB a 30 % -BB. Najnovšie štúdie však ukázali, že je možných až 70 % PDGF-AA a staršie údaje sú artefaktom. Typ vylučovaného diméru (dimérov) PDGF závisí od produkovanej mRNA a môže byť ovplyvnený aj účinnosťou translácie, sekréciou a intracelulárnou degradáciou.
Štrukturálna identita B reťazca a c-sis protoonkogénu naznačuje, že PDGF môže hrať úlohu vo vírusom indukovanej malígnej transformácii infikovaných buniek. PDGF sa podieľa na regulácii akútneho zápalu, hojení rán a tvorbe jaziev. PDGF uvoľnený z alveolárnych makrofágov sa podieľa na rozvoji pľúcnej fibrózy. Tiež sa zistilo, že rozvoj aterosklerózy, glomerulonefritídy, myelofibrózy a tvorba keloidov je spojená s PDGF. Podobne ako EGF, PDGF indukuje expresiu protoonkogénov, ako sú fos, myc a jun. PDGF je tiež všadeprítomný v neurónoch CNS, kde sa predpokladá, že hrá dôležitú úlohu pri prežívaní a regenerácii buniek a pri sprostredkovaní proliferácie a diferenciácie gliových buniek.
Placentárny rastový faktor (PLGF)
PlGF - glykoproteín c m.m. 46-50 kDa, patriace do rodiny VEGF (42 % homológia s VEGF). PlGF je tiež homológny, aj keď vzdialenejší, s rodinou rastových faktorov PDGF. Existujú dve izoformy PIGF: -1 a -2, ktoré sa líšia prítomnosťou domény viažucej heparín v PIGF-2. PlGF zabezpečuje proliferáciu extravilózneho trofoblastu. Ako už názov napovedá, PlGF bol prvýkrát identifikovaný za normálnych podmienok v ľudskej placente. Je tiež exprimovaný v iných tkanivách, ako sú kapiláry a endotel pupočnej žily, kostná dreň, maternica, NK bunky a keratinocyty. PlGF je tiež zvýšený pri rôznych patologických stavoch, vrátane hojenia rán a tvorby nádorov. V porovnaní s VEGF je úloha PlGF pri neovaskularizácii menej dobre pochopená. Môže zvýšiť životnosť, rast a migráciu endotelových buniek in vitro a podporovať vaskularizáciu v niektorých modeloch in vivo. Aktivita PlGF sa môže prejaviť priamou interakciou faktora s VEGFR1. Navrhlo sa, že VEGFR1 pôsobí ako rezervoár pre VEGF a že PIGF väzbou na receptor nahrádza VEGF a uvoľňuje ho, aby aktivoval VEGFR2. PlGF môže synergicky zvyšovať VEGF-indukovanú angiogenézu a vaskulárnu permeabilitu. Koncentrácia PlGF sa zvyšuje 4-krát od konca prvého do konca druhého trimestra fyziologicky prebiehajúceho tehotenstva.
Hepatocytový rastový faktor (HGF)
HGF, tiež nazývaný faktor rozptylu (SF), pozostáva z dvoch podjednotiek spojených disulfidovou väzbou: α (69 kDa) a β (34 kDa). HGF je multifunkčný cytokín, ktorý pôsobí ako mitogén, ktorý je spojený s jeho funkciou pri organogenéze a oprave tkaniva. Má schopnosť stimulovať tvorbu krvných ciev a proliferáciu buniek, čo naznačuje jeho účasť na malígnom raste a metastázach v pľúcach, prsníku, pankrease, adenokarcinóme, mnohopočetnom myelóme a hepatocelulárnom karcinóme. V nádorových bunkách rakoviny prsníka HGF silne indukuje expresiu bcl-x a tým inhibuje apoptózu. HGF je neustále produkovaný stromálnymi bunkami kostná dreň a stimuluje hematopoézu.
Angiogenín (ANG)
ANG je jednoreťazcový neglykozylovaný polypeptid s m.m. 14 kDa, ktorý patrí do rodiny ribonukleáz RISBASE (ribonukleázy so špeciálnymi biologickými funkciami). Molekuly tejto rodiny vykazujú nielen ribonukleázovú aktivitu, ale majú aj špeciálne biologické účinky. Sekvencia ANG je z 35 % identická s pankreatickou ribonukleázou. Ukázalo sa, že ľudský angiogenín je na 75 % identický s myšacím ANG na úrovni aminokyselín a „funguje“ v myšacích systémoch. ANG je exprimovaný endotelom, bunkami hladkého svalstva, fibroblastmi, stĺpcovým črevným epitelom, lymfocytmi, bunkami primárneho adenokarcinómu a niektorými nádorovými bunkovými líniami. Receptor angiogenínu nie je známy. Predpokladá sa, že aktín ako receptor alebo väzbová molekula je nevyhnutný na prejavenie účinkov angiogenínu.
Funkčne je ANG najčastejšie spojený s procesom angiogenézy. Predpokladá sa, že spočiatku sa viaže na aktín a potom nastáva disociácia komplexu aktín-ANG, po ktorej nasleduje aktivácia aktivátora tkanivového plazminogénu. V dôsledku toho sa tvorí plazmín, ktorý prispieva k degradácii zložiek bazálnej membrány, ako je laminín a fibronektín. Deštrukcia bazálnej membrány je predpokladom migrácie endotelových buniek počas neovaskularizácie. Hoci sa zdá, že ANG pôsobí prevažne extravaskulárne alebo perivaskulárne, cirkulujúci ANG bol detegovaný v normálnom sére v koncentráciách rádovo ng/ml. V patologických procesoch boli zistené zvýšené hladiny ANG u pacientov s rakovinou pankreasu a arteriálnym uzáverom.
Angiopoetíny-1 a -2 (Ang)
Ang-1 a -2 sú glykoproteíny patriace do rodiny rastových faktorov, ktoré regulujú vývoj vaskulárneho tkaniva. Ang-1 pozostáva zo 498 aminokyselinových zvyškov, Ang-2 - zo 467. AA sekvencie Ang-1 a -2 sú na 60 % identické. Oba Angs interagujú s receptorom tyrozínkinázy-2 (Tie-2), ktorý je prítomný prevažne na endotelových bunkách. Existujú však aspoň tri alternatívne zostrihové varianty Ang-1, pričom dve alternatívne formy nie sú schopné aktivovať Tie-2. Pôsobia teda ako endogénne supresory hlavnej aktívnej formy Ang-1. Okrem toho Ang-1 a -2 pôsobia ako konkurenti v interakcii s Tie-2 receptorom, preto Ang-2, v závislosti od typu bunky, pôsobí buď ako supresor alebo aktivátor Tie-2 receptora.
Ang-1 a -2 sú aktívne exprimované v embryu s rýchlym vývojom vaskulárneho tkaniva. Delécia génu Ang-1 vedie k smrteľným následkom v embryu v dôsledku vážnych malformácií vo vývoji srdca a krvných ciev. Ang-2 síce nehrá takú významnú úlohu ako Ang-1 pri tvorbe cievneho systému embrya, no pri jeho absencii je narušená aj vaskularizácia, čo spôsobuje skorú smrť. V dospelom organizme je Ang-1 syntetizovaný hlavne endotelovými bunkami, megakaryocytmi a krvnými doštičkami, zatiaľ čo Ang-2 je exprimovaný lokálne: vaječníkmi, maternicou a placentou. Ang-1 reguluje vývoj a prestavbu krvných ciev, zvyšuje prežívanie endotelových buniek. Prežitie endotelových buniek počas interakcie Ang-1 s Tie-2 zahŕňa mechanizmus PI3K/AKT a migrácia buniek počas rovnakej interakcie (ligand/receptor) nastáva za účasti niekoľkých kináz (PI3K, PAK, FAK). Naopak, Ang-2, pôsobiaci samostatne, iniciuje smrť endotelových buniek a regresiu ciev, hoci synergicky s VEGF môže podporovať tvorbu nových ciev. Ak Ang-1 pôsobí synergicky s VEGF, jeho nadprodukcia vedie k zvýšenej vaskularizácii tkaniva. Ang-1 a -2 majú teda tendenciu pôsobiť ako antagonisty koregulujúce vaskulárny rast.
Účinok angiopoetínov sa neobmedzuje len na vaskulárny endotel krvného obehu - môžu sa podieľať na tvorbe ciev lymfoidného systému. Ang-1 má ďalšie biologické účinky, napríklad zvyšuje adhéziu a migráciu neutrofilov a eozinofilov, reguluje permeabilitu cievnej steny. Ang-1 môže tiež spôsobiť rast a prežitie nervových buniek, reguluje organizáciu dendritických buniek. Zvýšené hladiny Ang-1 a -2 zvyšujú rakovinovú angiogenézu. Vysoké koncentrácie cirkulujúceho Ang-1 sú spojené s hypertenziou a rakovinou.
Pigmentový faktor epitelového pôvodu (PEDF)
PEDF (50 kDa MW, patrí do rodiny serpínov) bol prvýkrát identifikovaný ako faktor vylučovaný epitelovými bunkami sietnice a podporujúci prežitie neurónov in vitro a in vivo. Na druhej strane sa ukázalo, že PEDF má vlastnosť indukovať apoptózu kapilárnych endotelových buniek, čím zachováva avaskulárnu povahu sietnice. Pri mnohých očných ochoreniach charakterizovaných dysreguláciou inervácie a mikrovaskulatúry sietnice je PEDF dôležitým regulátorom pri očných ochoreniach. Okrem toho sa ukázalo, že PEDF má multifunkčnú protinádorovú aktivitu pri experimentálnom neuroblastóme, keďže PEDF produkovaný Schwannovými bunkami indukuje diferencovaný, menej malígny fenotyp v neuroblastómových bunkách, podporuje ďalší rast a prežitie Schwannových buniek a inhibuje angiogenézu.
oxid dusnatý (NO)
Biologický účinok NO bol všeobecne uznávaný od jeho identifikácie ako endotel-dependentný relaxačný faktor (EDRF) zodpovedný za silné vazodilatačné vlastnosti. Odvtedy bol NO identifikovaný ako pleiotropný biologický mediátor, ktorý reguluje rôzne funkcie: od nervovej činnosti po reguláciu imunitného systému. Je to voľný radikál s krátkym polčasom rozpadu in vivo, približne niekoľko sekúnd. V tomto smere sa na nepriame stanovenie NO v biologických tekutinách využíva hladina stabilnejších metabolitov NO, dusitanov (NO 2-) a dusičnanov (NO 3-). Príklady zahŕňajú zmenené hladiny spojené so sepsou, reprodukciou, infekciami, hypertenziou, fyzická aktivita, diabetes typu 2, hypoxia a rakovina.
NO vzniká pri oxidácii L-arginínu za účasti NADPH. K oxidácii dochádza za účasti jednej z troch izoforiem enzýmov rodiny NO-syntázy (NOS) za vzniku citrulínu. Členovia rodiny NOS zahŕňajú neuronálne (nNOS/NOS1), endotelové (eNOS/NOS3) a indukovateľné (iNOS/NOS2) NO syntázy. Ako naznačuje názov, nNOS je vysoko exprimovaný v neurónoch CNS a PNS a nachádza sa aj v iných tkanivových bunkách, vrátane myocytov kostrového svalstva, pľúcnych epitelových bunkách a kožných žírnych bunkách; eNOS je exprimovaný v endoteli a môže byť tiež detekovaný v neurónoch, kožných fibroblastoch, keratinocytoch a folikulárnych bunkách. štítna žľaza hepatocyty a bunky hladkého svalstva. iNOS je exprimovaný v rôznych tkanivách, vrátane chondrocytov, epitelových buniek, hepatocytov, gliového tkaniva a v rôznych typoch buniek imunitného systému. Vo všeobecnosti je expresia eNOS a nNOS kontinuálna a regulovaná kalmodulínom závislým od Ca2+, zatiaľ čo syntéza iNOS je indukovaná endotoxínom a zápalovými cytokínmi a je relatívne necitlivá na pôsobenie Ca2+.
Vzhľadom na to, že NO je rozpustný v lipidoch, neukladá sa, ale syntetizuje sa de novo a voľne difunduje cez membrány. Účinky NO v cieľových bunkách sú sprostredkované rôznymi mechanizmami. Napríklad NO-sprostredkovaná aktivácia enzýmu guanylylcyklázy (GC) katalyzuje tvorbu druhého posla 3',5'-cyklického guanozínmonofosfátu (cGMP). cGMP sa podieľa na množstve biologických funkcií, ako je regulácia kontrakcie hladkého svalstva, bunková životnosť, proliferácia, axonálna funkcia, synaptická plasticita, zápal, angiogenéza a aktivita cyklických nukleotidových kanálov. NO je tiež protinádorové a antimikrobiálne činidlo prostredníctvom mechanizmov konverzie na peroxydusitan (ONOO-), tvorby S-nitrózotiolov a vyčerpania zásob arginínu. Ďalšou navrhovanou úlohou NO je inhibícia mitochondriálneho dýchania prostredníctvom inhibície cytochróm oxidázy. NO môže tiež modifikovať aktivitu proteínu prostredníctvom posttranslačnej nitrozylácie prostredníctvom jeho adície cez tiolovú skupinu cysteínových zvyškov.
Matricové metaloproteinázy (MMP)
Ľudské MMP sú rodinou enzýmov degradujúcich matricu. MMP majú degradačnú schopnosť vzhľadom na takmer všetky zložky extracelulárnej matrice nachádzajúce sa v spojivových tkanivách (kolagén, fibronektín, laminín, proteoglykány atď.). Okrem podobnosti na úrovni aminokyselinovej sekvencie sa všetky MMP tvoria z neaktívnych prekurzorov, ktoré sa vplyvom extracelulárnych faktorov premieňajú na aktívne proteinázy degradujúce substrát. Zdrojmi tvorby MMP sú fibroblasty, makrofágy, bunky hladkého svalstva cievnej steny a neutrofily. Akýkoľvek nádor je silným induktorom tvorby MMP v stromálnych bunkách. Zatiaľ čo podporujú inváziu rastu nádorov a metastáz, MMP sú súčasne silnými stimulátormi neoangiogenézy. Endogénne a syntetické inhibítory MMP sa používajú ako potenciálne protinádorové látky, ktorých hlavným účelom je potlačenie neoangiogenézy.
Endostatin
Biologicky aktívny C-koncový fragment kolagénu VIII c m.m. 20 kDa. Patrí do rodiny proteínov podobných kolagénu. Aby sa za normálnych podmienok zabránilo nadmernému rastu krvných ciev, procesy tvorby nových a prestavby pôvodných ciev sú pod kontrolou zodpovedajúcich rastových faktorov. Počas nádorovej angiogenézy sa pozoruje prienik ciev do rastúcej nádorovej hmoty. Endostatín špecificky inhibuje proliferáciu endotelových buniek. V súlade s tým inhibuje angiogenézu a rast nádoru. Liečba endostatínom je v súčasnosti vo fáze I klinických skúšok.
Ďalšie diagnostické rastové faktory
Faktor kmeňových buniek (SCF)
Producentmi SCF sú stromálne bunky kostnej drene, fibroblasty, endotelové bunky, Sertoliho bunky. Jeho hlavnými cieľovými bunkami sú hematopoetické kmeňové bunky, včasné predchodcovia rôznych hematopoetických línií a žírne bunky. SCF aktivuje diferenciáciu multipotentných progenitorových buniek synergicky s IL-3, GM-CSF a IL-7 a erytropoetínom. Podieľa sa na udržiavaní proliferácie najmladších foriem prekurzorov T-lymfocytov v týmuse. Vo vzťahu k mastocytom je hlavným rastovým faktorom a chemotaktickým činidlom.
SCF má dôležitý klinický význam ako induktor diferenciácie progenitorov lymfocytov a erytrocytov. Definícia SCF je veľmi zaujímavá pri liečbe myelodysplastického syndrómu a po transplantácii kostnej drene.
Inhibičný faktor leukemických buniek (LIF)
LIF zvyšuje proliferáciu hematopoetických progenitorov. Ukázalo sa, že LIF spôsobuje syndróm kachexie u pacientov s rakovinou. Zložka LIF receptora gp130 (CD130) je súčasťou receptorov pre IL-6 a -11.
Mozgový neurotropný faktor (BDNF)
Spolu s týmto faktorom rodina zahŕňa nervový rastový faktor, neurotropíny-3 a -4. BDNF stimuluje rast nervového tkaniva, najmä cholinergných neurónov v mozgu. Ukázalo sa, že BDNF ovplyvňuje rast, metabolizmus a vnútornú štruktúru týchto buniek. Hlavným účelom neurotropných faktorov je chrániť neuróny pred apoptózou.UDK 616-006
CIEVNY ENDOTELIÁLNY RASTOVÝ FAKTOR JE KLINICKÝ VÝZNAMNÝ UKAZOVATEĽ PRI MALÍGNYCH NEOPLAZMOCH
© E.S. Gershtein, D.N. Kushlinsky, L.V. Adamyan, N.A. Ognerubov
Kľúčové slová: VEGF; VEGF-R; angiogenéza; nádory; predpoveď.
Prezentované sú výsledky vlastných štúdií a najvýznamnejšie literárne údaje, ktoré naznačujú, že kľúčový pozitívny regulátor neoangiogenézy, vaskulárny endoteliálny rastový faktor (VEGF), je klinicky významným prognostickým faktorom pri rôznych onkologických ochoreniach, ako aj cieľom moderných cielené lieky s rôznym mechanizmom účinku. Jeho úloha ako sérologického markera na diagnostiku a monitorovanie si vyžaduje ďalšie štúdium.
Všeobecné predstavy o regulácii angiogenézy.
Angiogenéza je proces vetvenia nových kapilárnych procesov z už existujúcich krvných ciev. Tento komplexný proces zahŕňa najmenej štyri stupne: proteolytickú deštrukciu bazálnej membrány krvných ciev a extracelulárnej matrice, migráciu a uchytenie endotelových buniek, ich proliferáciu a napokon tvorbu tubulárnych štruktúr.
V súčasnosti sa problematike neoangiogenézy u malígnych nádorov venuje veľká pozornosť, pretože niet pochýb o tom, že nádor sa nemôže vyvinúť a rásť bez vytvorenia rozsiahlej siete ciev, ktoré zásobujú bunky kyslíkom a živinami. Záujem o tento problém vznikol pred viac ako 30 rokmi, ale až do relatívne nedávnej doby bolo hlavnou charakteristikou aktivity neoangiogenézy v nádoroch mikroskopické hodnotenie hustoty ciev v nádorovom tkanive (mikrovaskulárna hustota). A to len relatívne nedávno, ako výsledok štúdia molekulárne mechanizmy angiogenézy, ktorá sa v posledných 10-15 rokoch intenzívne rozvíja, je preukázaná prítomnosť množstva regulačných angiogénnych a antiangiogénnych faktorov, ktorých dynamická rovnováha zabezpečuje vznik a šírenie nových ciev vnútri nádoru.
Mnohé známe rastové faktory a cytokíny sa tak či onak podieľajú na regulácii angiogenézy, ako napríklad zásadité a kyslé fibroblastové rastové faktory (bFGF a cFGF), epidermálny rastový faktor (EGF), a- a P-transformujúce rastové faktory (TGF ), doštičkový endotelový rastový faktor/tymidínfosforyláza, tumor nekrotizujúci faktor, interleukíny atď. Najdôležitejším pozitívnym regulátorom angiogenézy je však nepochybne vaskulárny endoteliálny rastový faktor (VEGF), nazývaný aj vaskulárny faktor permeability. Jedinečnosť tohto proteínu spočíva v tom, že na rozdiel od všetkých ostatných rastových faktorov je mitogénny iba vo vzťahu k endotelovým bunkám, hoci najnovšie údaje naznačujú, že je možný aj autokrinný.
účinok VEGF na nádorové bunky, ktoré ho produkujú.
VEGF je homodimérny, vysoko glykozylovaný proteín s mol. s hmotnosťou 46-48 ^a, existujúci v najmenej piatich izoformách s podobnou biologickou aktivitou, ale výrazne odlišnou biologickou dostupnosťou. Biologická dostupnosť VEGF je do značnej miery určená veľkosťou molekuly a je regulovaná na genetickej úrovni počas alternatívneho zostrihu mRNA, ako aj epigenomicky počas proteolytického štiepenia syntetizovaných molekúl za účasti systému aktivácie plazminogénu. Kľúčovým regulátorom rastu krvných ciev je VEGF A, zatiaľ čo VEGF C reguluje prevažne lymfangiogenézu. Hlavné rozpustné formy VEGF A sú molekuly s veľkosťou 121 a 165 aminokyselinových zvyškov, sú tiež hlavnými biologicky aktívnymi formami VEGF. Predpokladá sa, že v tkanivách je hlavnou izoformou VEGF VEGF-165.
Na povrchu endotelových buniek sa nachádzajú 3 receptory pre VEGF, čo sú typické receptorové tyrozínkinázy. Receptor VEGF typu 1 (VEGFR1) je produktom génu flt-1, receptor typu 2 (VEGFR2) sa nazýva KDR a je ľudským homológom myšacieho génového produktu flk-1 a napokon receptor typu 3 (VEGFR3 ) je produktom génu flt-4. Na rozdiel od VEGFR1 a 2 neinteraguje s klasickým VEGF (VEGF A), ale s jeho homológom -VEGF C. Všetky receptory sú transmembránové glykoproteíny s mol. omša 170235 ^a. Účinná väzba VEGF na receptory vyžaduje jeho interakciu so zložkami extracelulárnej matrice podobnými heparínu.
Okrem mitogénom aktivovanej proteínkinázovej kaskády spoločnej pre väčšinu receptorových kináz, ktorá reguluje expresiu génov spojených s proliferáciou, medzi najdôležitejšie gény regulované VEGF v endotelových bunkách patrí protoonkogén c-ets-1 kódujúci transkripčný faktor. Ets-1. Štúdie využívajúce in situ hybridizáciu ukázali, že c-ets-1 je exprimovaný v endotelových bunkách v skorých štádiách tvorby krvi.
žilových ciev. Jeho produkt Ets-1 prispieva k manifestácii angiogénneho fenotypu týchto buniek, aktivácii génovej transkripcie a následnej syntéze proteínov najdôležitejších proteáz, ktoré štiepia extracelulárnu matricu (ECM), ako je aktivátor plazminogénu urokinázového typu, stromelyzín, kolagenáza 1, MMP-1, 3 a 9, ako aj p2-integrín. Tieto účinky dosahujú maximálne 2 hodiny po pridaní VEGF (ako aj iných angiogénnych faktorov – cFGF, bFGF a EGF) a sú inhibované antisense oligonukleotidmi k ets-1. Aktivácia proteáz má tri dôležité dôsledky pre stimuláciu angiogenézy: uľahčuje dezintegráciu endotelových buniek a ich inváziu do bazálnej vrstvy krvných ciev, vytvára produkty degradácie ECM, ktoré podporujú chemotaxiu endotelových buniek, a tiež aktivuje a mobilizuje rastové faktory lokalizované v ECM.
Úloha VEGF pri regulácii angiogenézy pri rakovine prsníka. Prvý dôkaz o vzťahu medzi expresiou VEGF a aktivitou angiogenézy v nádoroch prsníka bol získaný z klinického materiálu a publikovaný v rokoch 1994-1995. skupina japonských výskumníkov. V prvej imunohistochemickej štúdii, do ktorej bolo zaradených 103 pacientok s rakovinou prsníka, ukázali, že hustota mikrociev a jej zvýšenie, stanovené imunochemickým farbením na antigén faktora VIII, bolo výrazne vyššie u nádorov s intenzívnym farbením na VEGF ako u nádorov so slabým zafarbením. . VEGF je lokalizovaný prevažne v cytoplazme nádorových buniek. Následne rozšírili skúmaný súbor pacientov na 328 osôb a po potvrdení vyššie uvedených vzorcov tiež ukázali, že expresia VEGF koreluje s expresiou ďalšieho angiogénneho faktora, rastového faktora endotelových buniek krvných doštičiek. Neskôr títo autori vykonali kvantitatívny enzýmový imunotest na obsah VEGF v tkanivách primárneho karcinómu prsníka a ukázali, že koncentrácia VEGF vo vysoko vaskularizovaných nádoroch bola významne vyššia ako v málo vaskularizovaných. Zároveň sa nezistil žiadny vzťah medzi hladinami VEGF v tkanivách a dvoma ďalšími potenciálne angiogénnymi faktormi – bFGF a hepatocytovým rastovým faktorom. Koncentrácia týchto dvoch faktorov tiež nekorelovala s hustotou mikrociev.
Získali sa aj zaujímavé údaje. Pomocou imunohistochemickej metódy porovnávali expresiu VEGF, jeho receptora flt-1, ako aj bFGF a a- a P-TGF v rakovine prsníka a okolitom intaktnom tkanive prsníka. Ukázalo sa, že zo všetkých skúmaných parametrov bola v nádorových bunkách v porovnaní s normálnymi významne zvýšená iba expresia VEGF. Zvýšenie expresie VEGF v tkanive rakoviny prsníka v porovnaní s nenádorovým tkanivom prsníka bolo preukázané aj metódami hybridizácie RNA. Všetky tieto štúdie poskytli prvý dôkaz o dôležitej úlohe VEGF v neoangiogenéze pri rakovine prsníka a jeho význame pre rast nádoru. Na priamejšie potvrdenie tejto hypotézy boli potrebné experimentálne štúdie na potvrdenie účinku VEGF produkovaného bunkami rakoviny prsníka na angiogenézu. Za jeden z prvých takýchto dôkazov možno považovať prácu
H. Zhang a kol. v ktorých bol gén VEGF-121 transfekovaný na estrogén-
závislá bunková línia rakoviny prsníka MCF-7. Expresia a sekrécia VEGF transfekovanými bunkami (V12) bola potvrdená tromi nezávislými metódami: kompetitívnym rádioreceptorovým testom,
stimulácia rastu ľudských endotelových buniek in vitro a aktivácia angiogenézy v králičej rohovke. Keď sa transplantovali do atymických myší, bunky klonu V12 vyvolali viac vaskularizovaných nádorov s heterogénnejšou vaskulárnou distribúciou ako pôvodné bunky MCF-7. Rýchlosť rastu nádorov, ktoré vznikli z buniek V12, bola vyššia ako u nádorov z pôvodnej bunkovej línie, pričom hormonálna závislosť buniek a ich citlivosť na tamoxifén zostali zachované. Ukázalo sa teda, že bunky rakoviny prsníka, ktoré neustále produkujú VEGF, majú určité rastové výhody.
Ďalším dôkazom účinku VEGF na rast a metastázovanie rakoviny prsníka sú experimenty s protilátkami proti tomuto faktoru. V pokusoch na myšiach so spontánnym karcinómom prsníka, charakterizovaným vysokou frekvenciou metastáz do pľúc, sa teda ukázalo, že polyklonálne protilátky proti VEGF inhibujú rast nádoru o 44 % a znižujú počet a veľkosť pľúcnych metastáz o 73 a 84 %. , resp.
Zaujímavý model na testovanie angiogénneho potenciálu rôznych tkanív prsníka in vivo vyvinuli H. Lichtenbeld a kol. . Umiestnili kúsky nádoru a normálneho prsného tkaniva do komory vytvorenej dorzálnym kožným záhybom u nahých myší a vyhodnotili indukciu angiogenézy. Zistilo sa, že všetky vzorky rakoviny prsníka, ako aj tkanivá prsníka s hyperpláziou a apokrinnou metapláziou, významne aktivujú angiogenézu. Histologicky nezmenené oblasti tkaniva prsníka u pacientov s BC stimulovali angiogenézu v 66 % prípadov, zatiaľ čo tkanivá zdravých žliaz získané s kozmetická chirurgia neovplyvnil angiogenézu. Vo všetkých prípadoch sa indukcia angiogenézy vyskytla paralelne s produkciou VEGF bunkami nádoru alebo mliečnej žľazy.
Klasický model regulácie angiogenézy pri rakovine prsníka (rovnako ako pri akomkoľvek inom nádore) zabezpečuje prítomnosť parakrinného systému, v ktorom rastový faktor (VEGF) produkujú nádorové bunky a jeho receptory vnímajúce signál sú umiestnené na vaskulárnych endotelových bunkách. . Existenciu takéhoto parakrinného systému pri rakovine prsníka dobre ilustrujú údaje L. Browna a kol. ktorí študovali vzorky tkaniva 68 pacientov s rakovinou prsníka in situ hybridizáciou RNA a ukázali, že v bunkách invazívneho, metastatického a intraduktálneho karcinómu prsníka je výrazná expresia VEGF a v bunkách vaskulárneho endotelu prenikajúceho týmito nádormi výrazná expresia VEGFR1 a VEGFR2. Podobné údaje boli získané a
A. Kranz a kol. títo autori však našli VEGFR2 aj na duktálnych epiteliálnych bunkách mliečnej žľazy. Existuje ďalší dôkaz, že receptory VEGF sa nachádzajú na bunkách rakoviny prsníka a úroveň expresie VEGF a VEGFR2 koreluje s indexom proliferácie nádorových buniek, určeným expresiou antigénu Ki-67. Ukázalo sa, že nádorové aj stromálne bunky izolované z primárnych ľudských karcinómov prsníka produkujú VEGF in vitro a jeho hladina
produkcia je výrazne vyššia ako u zodpovedajúcich buniek izolovaných z normálnej mliečnej žľazy. V čom PCR metóda Analýza ukázala, že VEGFR2 prevažuje v nádorových bunkách, zatiaľ čo iba VEGFR1 je exprimovaný v stromálnych bunkách. Teda okrem svojej priamej funkcie stimulácie neoangiogenézy môže VEGF pri rakovine prsníka hrať aj úlohu auto/parakrinného regulátora proliferácie nádorových a/alebo stromálnych buniek.
Predpokladá sa, že VEGF môže hrať ďalšiu úlohu pri rakovine prsníka: prostredníctvom receptorov flt-1 stimuluje migráciu makrofágov do nádorového tkaniva, ktoré sú zase stimulátormi aniogenézy, pretože syntetizujú rôzne angiogénne faktory, vrátane a samotný VEGF. Najmä R. Leek a kol. pri skúmaní vzoriek tkaniva 96 pacientov s rakovinou prsníka preukázali pozitívnu koreláciu medzi indexom infiltrácie nádorového tkaniva makrofágmi a úrovňou expresie VEGF.
Sekrécia VEGF bunkami rakoviny prsníka je indukovaná rôznymi vonkajšími a vnútornými faktormi. P. Scott a kol. Štúdium účinku hypoxie, hypoglykémie, kyslosti, ženských pohlavných steroidných hormónov a vitamínu D na expresiu 4 hlavných izoforiem VEGF kultivovanými bunkami rakoviny prsníka s rôznymi biologickými fenotypmi, ukázalo, že tieto bunky sa významne líšia v bazálnej expresii mRNA VEGF a vo svojej citlivosti na rôzne podnety. Súčasne sa ukázalo, že hypoxia je najsilnejším stimulom indukujúcim VEGF pre všetky typy buniek a steroidné hormóny nemali prakticky žiadny vplyv na expresiu VEGF. R. Bos a kol. ukázali, že HIF-1, transkripčný faktor indukovaný v podmienkach hypoxie, hrá dôležitú úlohu pri stimulácii neoangiogenézy pôsobením hypoxie, ktorej vysoká hladina v tkanive rakoviny prsníka koreluje s vysokým indexom proliferácie, zvýšenou expresiou VEGF a estrogénové receptory (ER). Expresia HIF-1 a VEGF v bunkách rakoviny prsníka nie je spojená s úrovňou expresie induktora apoptózy p53. Inhibítor apoptózy bcl-2 zároveň zvyšuje stimulačný účinok hypoxie na syntézu VEGF v bunkách rakoviny prsníka. Hybridizačná analýza ukázala, že bunkové klony MCF-7 nadmerne exprimujúce bcl-2 a so zvýšeným metastatickým potenciálom a rezistenciou na adriamycín majú vyššiu úroveň expresie mRNA najangiogénnejších izoforiem VEGF - VEGF-121 a VEGF-165 - ako pôvodné klon MCF-7. V experimentoch in vivo bunky transfekované bcl-2 vytvorili nádory s vyšším stupňom vaskularizácie a vyššou expresiou VEGF ako pôvodné bunky.
Na druhej strane sa ukázalo, že VEGF, ktorý je faktorom prežitia endotelových buniek, nielen stimuluje ich proliferáciu, ale tiež potláča apoptózu indukciou expresie bcl-2. Je zaujímavé, že VEGF poskytol podobná akcia a na bunkách rakoviny prsníka, t.j. bol antiapoptickým faktorom nielen pre endotelové bunky, ale aj pre samotné nádorové bunky.
Na regulácii expresie VEGF v bunkách rakoviny prsníka sa podieľajú rôzne rastové faktory a signalizačné systémy. Najmä niekoľko štúdií preukázalo dôležitú úlohu rodiny erbB receptorových tyrozínkináz a niektorých ich ligandov. L. Yen a kol. skúmaním panelu bunkových línií
Rakovina prsníka so stabilnou nadmernou expresiou „dispečerského receptora“ erbB-2 bez ligandu ukázala, že heregulín-P1, interagujúci s receptormi erbB-3 a erbB-4, indukuje sekréciu VEGF vo väčšine študovaných bunkových línií rakoviny prsníka, ale nie v bunkách normálnych mliečnych žliaz. Bazálna sekrécia VEGF bola zvýšená v bunkách so zvýšenými hladinami erbB-2 a v bunkách T47D s funkčne inaktivovaným erbB-2 bola znížená nielen bazálna sekrécia VEGF, ale aj jeho indukcia pôsobením heregulínu. Následne sa ukázalo, že účinok heregulínu na syntézu VEGF zahŕňa jednu z klasických signálnych dráh zahŕňajúcu fosfatidylinozitol 3-kinázu a proteínkinázu B (Akt) s následnou indukciou transkripčného faktora HIF-1, ktorý stimuluje expresiu VEGF gén.
Zdá sa, že niektoré rastové faktory z rodiny TGF-β pôsobia aj ako regulátory expresie VEGF v bunkách rakoviny prsníka. Koncentrácie TGF-P1 a VEGF v nádoroch a krvnom sére pacientov s BC spolu pozitívne korelovali a v in vitro experimentoch TGF-R1 indukoval produkciu VEGF kultivovanými bunkami MDA-MB-231. Ďalšia štúdia ukázala, že súčasná vysoká expresia TGF-β2 a jeho receptorov je charakteristická pre nádory s vysokou hustotou mikrociev.
Doposiaľ zostáva otázka hormonálnej regulácie syntézy VEGF v bunkách rakoviny prsníka pohlavnými steroidmi, najmä estrogénmi, kontroverzná. Hoci estrogénová indukcia VEGF-sprostredkovanej angiogenézy v endometriu je prakticky istá, existencia podobného mechanizmu pri rakovine prsníka nebola jednoznačne dokázaná. J. Rujhola a kol. na bunkovej kultúre MCF-7 ukázali, že 17P-estradiol (E2) spôsobuje dvojfázové zvýšenie syntézy VEGF mRNA, sprevádzané akumuláciou zodpovedajúceho proteínu v kultivačnom médiu. Tento účinok bol blokovaný čistým antiestrogénom ICI 182.780, čo naznačuje, že RE sa podieľal na jeho implementácii. Súčasne klasické antiestrogény ako tamoxifén a toremifén, ktoré majú čiastočný estrogénny účinok, nielenže neinhibovali VEGF-indukujúci účinok E2, ale tiež sami o sebe indukovali syntézu VEGF. Účasť ER na regulácii syntézy VEGF v bunkách rakoviny prsníka potvrdzujú aj molekulárne biologické štúdie S. Hyder et al. ktorí preukázali, že gén VEGF obsahuje dve sekvencie, ktoré sú homológne s klasickými estrogén-senzitívnymi prvkami a špecificky viažu obe formy ER - ER-a a ER-r.
Zdá sa však, že povaha účinku estrogénov a antiestrogénov na syntézu VEGF závisí od typu buniek rakoviny prsníka. Napríklad J. Kurebayashi a kol. opísali ľudskú bunkovú líniu rakoviny prsníka KPL-1, ktorej rast bol stimulovaný pomocou ICI 182.780 a suprimovaný pomocou E2 in vivo. Súčasne E2-propionát potláčal angiogenézu a stimuloval apoptózu v nádoroch tvorených bunkami KPL-1. V podmienkach in vitro E2 neovplyvnil ani syntézu VEGF, ani rýchlosť bunkovej proliferácie. Je zaujímavé, že expresia VEGF v bunkách KPL-1 bola indukovaná medroxyprogesterónacetátom.
Indukčný účinok progestínov na syntézu VEGF bunkami rakoviny prsníka tiež zaznamenali S. Hyder a kol. . Pri skúmaní bunkovej línie T47-D zistili
ukázali, že progesterón zvýšil hladinu VEGF v kultivačnom médiu spôsobom závislým od dávky 3-4 krát s maximálny účinok v koncentrácii 10 nM. Zároveň ostatné steroidné hormóny (estrogény, androgény a glukokortikoidy) neovplyvňovali tvorbu VEGF a účinok progestínov sa neprejavil ani v iných BC bunkových líniách - hormonálne závislých MCF-7, ZR-75 a hormonálnych- nezávislý MDA-MB^L Účinok progesterónu na T47-bunky D bol blokovaný antiprogestínom RU-486, čo naznačuje zapojenie klasického receptorového mechanizmu. Zaujímavé je, že podľa K. Heera a kol. , hladina VEGF v krvnom sére žien je výrazne znížená v luteálnej fáze menštruačného cyklu a je v inverzný vzťah na sérové hladiny progesterónu. Sérum získané počas tohto obdobia stimulovalo produkciu VEGF bunkami MCF-7 v menšom rozsahu ako sérum získané v prvej fáze menštruačného cyklu.
Zaujímavé vzorce týkajúce sa hormonálnej regulácie angiogenézy v mliečnej žľaze demonštrovali R. Greb a kol. . Po štúdiu expresie hlavných izoforiem VEGF-A v nádoroch a okolitých intaktných tkanivách prsníka 19 pacientok s rakovinou prsníka pomocou analýzy PCR zistili, že hladiny expresie VEGF v nezmenenej žľaze boli významne vyššie u pacientok pred menopauzou ako u pacientok po menopauze a výrazne klesajú so zvyšujúcim sa vekom pacientov. Zároveň expresia VEGF v nádorovom tkanive nezávisela od veku a menopauzálneho stavu pacientok. Autori sa domnievajú, že angiogenéza je v normálnej mliečnej žľaze pod hormonálnou kontrolou, zatiaľ čo táto kontrola sa stráca pri malígnej transformácii.
Okrem najznámejšieho a najrozšírenejšieho angiogénneho faktora VEGF-A, opísaného vyššie, existuje niekoľko ďalších členov rodiny VEGF – VEGF-B, C a D. Funkcia VEGF-C bola doteraz najjasnejšie definovaná : predpokladá sa, že stimuluje lymfangiogenézu interakciou s receptormi VEGF typu 3 (flt-4) umiestnenými na lymfatických endoteliálnych bunkách. V experimentálnych štúdiách na atymických myšiach s použitím nového markera lymfatického endotelu LYVE-1 sa ukázalo, že nadmerná expresia VEGF-C v bunkách rakoviny prsníka výrazne zvyšuje intratumorálnu lymfangiogenézu a stimuluje tvorbu metastáz v regionálnych lymfatických uzlinách a pľúcach. Predtým J. Kurebayashi a kol. PCR analýza ukázala, že na rozdiel od VEGF-A a B, ktoré sú prítomné v tkanive rakoviny prsníka bez ohľadu na jej štádium, VEGF-C sa deteguje iba v nádoroch, ktoré metastázovali do lymfatických uzlín, a VEGF-D sa nachádza iba v zápalovom prsníku. rakovina. Na druhej strane, podľa R. Valtola a kol. Expresia receptora VEGF-C je skutočne zvýšená pri invazívnych a intraduktálnych karcinómoch prsníka v porovnaní s normálnymi prsníkovými a fibroadenómami, ale zvýšená expresia receptorov VEGF typu 3 bola pozorovaná na endotelových bunkách krvných ciev, a nie lymfatických. V tejto súvislosti sa autori domnievajú, že VEGF-C, podobne ako VEGF-A, je angiogénnym faktorom najmä pre krvné cievy, aj keď nevylučujú jeho účasť na regulácii lymfangiogenézy.
Vo všeobecnosti je úloha lymfangiogenézy a systémov ligand-receptor, ktoré ju regulujú v procesoch metastázovania solídnych nádorov a najmä rakoviny prsníka, daná v V poslednej dobe stále viac pozornosti.
VEGF teda hrá dôležitú a rôznorodú úlohu pri rakovine prsníka, stimuluje rast nádoru a jeho šírenie prostredníctvom komplexných parakrinných a autokrinných účinkov priamo na endotel krvných ciev a na nádorové bunky a nádorovú strómu, makrofágy infiltrujúce nádor a bunky lymfatických ciev. . To všetko nám umožňuje považovať VEGF za veľmi sľubný biologický marker pre prognózu rakoviny prsníka a jeden z hlavných cieľov antiangiogénnej protinádorovej terapie.
Klinický význam stanovenia VEGF pri rakovine prsníka. Vyššie sme už citovali množstvo prác, v ktorých klinický materiál rôzne metódy(imunohistochemická, enzýmová imunoanalýza, hybridizácia) preukázali zvýšenú expresiu VEGF v tkanive rakoviny prsníka a jej vzťah s tradičnými ukazovateľmi charakterizujúcimi aktivitu neoangiogenézy v nádorovom tkanive. Celkovo, podľa výsledkov analýzy databázy Medline, štúdiu klinického významu tkanivovej hladiny VEGF pri rakovine prsníka uskutočnilo 14 skupín výskumníkov. Ešte raz treba poznamenať, že takmer všetci výskumníci, ktorí takéto porovnania uskutočnili, bez ohľadu na použité metódy, zaznamenali zvýšenie expresie VEGF v tkanive rakoviny prsníka v porovnaní s okolitým histologicky nezmeneným tkanivom prsníka, ako aj nezhubné nádory. V otázke priamej korelácie úrovne expresie VEGF s aktivitou neoangiogenézy v nádorovom tkanive nie sú žiadne rozpory.
Prvýkrát nepriaznivú prognostickú hodnotu vysokej expresie VEGF pri rakovine prsníka zaznamenali M. Toi a kol. . Po retrospektívnej analýze výsledkov pozorovania 328 pacientov, u ktorých bola expresia VEGF hodnotená imunohistochemickou metódou, ukázali, že v univariačnej analýze bola prognóza prežitia bez relapsu u pacientov s VEGF-pozitívnymi nádormi výrazne horšia ako u pacientov s VEGF-negatívnymi nádormi. Hodnotu VEGF pre prognózu prežívania bez ochorenia preukázali aj M. Relf et al. , ktorý stanovil expresiu zodpovedajúcej RNA v nádorových tkanivách 64 pacientov s rakovinou prsníka. Zároveň podľa A. Obermaira a kol. , hladina VEGF, meraná enzýmovou imunoanalýzou, nemala významný vplyv na prognózu prežitia bez relapsu u 89 nimi vyšetrených pacientok s rakovinou prsníka.
Za najzaujímavejšie treba považovať štúdie, v ktorých sa hodnotila prognostická hodnota VEGF u rôznych klinických skupín pacientok s karcinómom prsníka s prihliadnutím na prebiehajúcu liečbu. Výsledky takejto podrobnej analýzy publikujú dve skupiny G. Gasparini et al. a B. Linderholm a kol. . V práci z roku 1997 G. Gasparini a kol. prezentovali výsledky kvantitatívneho ELISA stanovenia koncentrácie VEGF v cytosoloch nádorov 260 pacientok s karcinómom prsníka bez metastáz do lymfatických uzlín. Pacienti boli sledovaní v priemere 66 mesiacov. Zároveň VEGF v širokom rozsahu
koncentračná zóna (od 5 do 6523 pg/mg proteínu) bola zistená u 95 % nádorov. Jeho hladina nekorelovala so známymi prognostickými faktormi: vekom a menopauzálnym stavom pacientok, histologickým typom, veľkosťou a receptorovým stavom nádoru, avšak podľa výsledkov sa ukázala ako štatisticky významný prediktor bezrelapsu a celkového prežívania. jednofaktorovej aj viacrozmernej analýzy. Cytosolická hladina VEGF je teda indikátorom prognózy u pacientok s včasnými štádiami rakoviny prsníka, čo umožňuje vytvoriť skupinu so zvýšeným rizikom recidívy a metastáz.
V ďalšej publikácii tejto skupiny autorov porovnávacie hodnotenie prognostická hodnota VEGF a ďalšieho angiogénneho faktora tymidínfosforylázy (TF - trombocytový endotelový bunkový rastový faktor) u pacientov s karcinómom prsníka s metastázami do lymfatických uzlín, ktorí dostávali chemoterapiu podľa schémy CMP (137 pacientov) alebo hormonálnu liečbu tamoxifénom (164 pacientov). ). Cytosolické koncentrácie VEGF boli podobné v oboch skupinách. V skupine pacientok liečených tamoxifénom hladina VEGF pozitívne korelovala s vekom pacientok a bola nepriamo úmerná hladine receptorov steroidných hormónov. V tejto skupine bola hladina VEGF spolu s počtom postihnutých lymfatických uzlín a koncentráciami ER a RP významným nezávislým prognostickým faktorom podľa výsledkov univariačnej a multivariačnej analýzy. Najlepšie výsledky liečby tamoxifénom by sa mali očakávať u pacientov s nízky level VEGF v nádoroch a zapojenie menej ako troch lymfatických uzlín do nádorového procesu. Nízka hladina VEGF sa ukázala ako nezávislý faktor priaznivej prognózy v skupine pacientov liečených chemoterapiou. V tejto skupine je významným prognostickým faktorom aj TF, pričom pri vysokej hladine tohto proteínu je prognóza priaznivá.
V jednej z najnovších štúdií O. Oa8ragipiho a spol. prirodzené inhibítory angiogenézy, trombospondíny 1 a 2, boli tiež zahrnuté do modelu multivariačnej prognózy u pacientok s včasnými štádiami rakoviny prsníka, avšak ich príspevok k predikcii prežitia bez ochorenia a celkového prežívania nebol štatisticky významný.
Podľa údajov tejto výskumnej skupiny, zhrnutých v niekoľkých prehľadových článkoch, je teda VEGF najsľubnejším prediktorom aktivity angiogenézy pri rakovine prsníka. Jeho vysoká úroveň naznačuje
o zlej prognóze včasného aj pokročilého karcinómu prsníka. Z ostatných regulátorov angiogenézy má na prognóze určitý podiel iba TF a jej význam sa prejavuje až pri chemoterapii pokročilého karcinómu prsníka.
Prognostická hodnota VEGF pri nepokročilom karcinóme prsníka bola tiež študovaná a potvrdená B. buchiergoit et al. . Enzýmovou imunoanalýzou stanovili obsah VEGF v cytosóloch nádoru u 525 pacientov bez metastáz v lymfatických uzlinách (T1.2K0M0), z ktorých 500 nedostalo žiadnu pooperačnú liečbu. Medián sledovania bol 46 mesiacov. Na rozdiel od vyššie uvedených výskumníkov zistili priamu koreláciu medzi úrovňou VEGF a veľkosťou nádoru, ako aj stupňom jeho malignity a inverznú koreláciu.
regulácia hladín VEGF a RE. Prežívanie pacientov s cytosolickými hladinami VEGF pod strednou úrovňou (2,4 pg/μg DNA) bolo významne vyššie ako u pacientov s nižšími hladinami VEGF. Pri multivariačnej analýze sa zistilo, že hladiny VEGF sú najvýznamnejším nezávislým prognostickým faktorom, ktorý prevyšuje ostatné známe merania. Významný pokles prežívania s vysokou hladinou VEGF v nádore bol zistený aj v prognosticky priaznivej skupine EC-pozitívnych pacientov.
Podľa tých istých autorov má vysoká hladina VEGF aj nepriaznivú prognostickú hodnotu, keď pacientky s včasným štádiom karcinómu prsníka podstupujú locoreginálnu radiačnú terapiu. Vyšetrených bolo 302 pacientov s mediánom sledovania 56 mesiacov. Ukázalo sa, že VEGF je jediným nezávislým prediktorom celkového prežívania (relatívne riziko 3,6) v celej skupine, ako aj prežívania bez ochorenia u prognosticky najpriaznivejších skupín pacientov s malými tumormi (T1) as EC-pozitívnymi tumormi. Autori sa domnievajú, že vysoká intratumorálna hladina VEGF môže zodpovedať rádiorezistentnému fenotypu a naznačuje potrebu ďalšej systémovej liečby.
B. Linderholm a kol. skúmali aj skupinu 362 pacientok s karcinómom prsníka s metastázami v lymfatických uzlinách, z ktorých 250 dostávalo adjuvantnú hormonálnu terapiu a 112 adjuvantnú chemoterapiu. V univariačnej analýze sa VEGF ukázal ako významný prognostický faktor pre prežitie bez relapsu a celkové prežitie v celej populácii pacientov, ako aj v skupine s endokrinnou terapiou. V skupine pacientov liečených chemoterapiou mala hladina VEGF vplyv len na celkové prežívanie. V multivariačnej analýze si VEGF zachoval svoj význam iba pre celkové prežitie.
Táto skupina výskumníkov teda preukázala aj predikčnú hodnotu VEGF pre rôzne klinické skupiny pacientov s rakovinou prsníka, čo bolo zhrnuté v publikácii z roku 2000, ktorá obsahovala údaje o 833 pacientoch s rôznymi štádiami rakoviny prsníka. Táto práca tiež preukázala prognostickú hodnotu simultánnej štúdie VEGF a mutantného p53. Relatívne riziko úmrtia sa zvýšilo 2,7-krát v skupine s vysokým obsahom VEGF a p53 pozitívnych a len v r.
1,7 v skupinách s jedným z týchto nepriaznivých faktorov.
V kolaboratívnej štúdii, ktorá zahŕňala celkovo 495 pacientov z dvoch rôznych kliník, na základe údajov z univariačnej a multivariačnej analýzy, ktorá okrem tradičných indikátorov zahŕňala aj aktivátory angiogenínu, bFGF a plazminogénu, sa ukázalo, že VEGF je najdôležitejším prognostickým parametrom. pre pacientov s rakovinou prsníka bez metastáz v lymfatických uzlinách. A nedávno ďalšia skupina výskumníkov potvrdila, že intratumorálna hladina VEGF dodatočne prispieva k takzvanému Nottinghamskému prognostickému indexu, ktorý sa používa na vytváranie vysoko rizikových skupín medzi pacientmi s počiatočnými štádiami rakoviny prsníka.
Osobitné miesto zaujíma štúdia J. Foekensa a kol. [b1], ktorí stanovili koncentráciu VEGF v konzervovaných extraktoch enzýmovým imunotestom.
max 845 pacientok s pokročilým karcinómom prsníka s rozvinutou recidívou ochorenia. Z týchto pacientov dostalo 618 adjuvantnú pooperačnú hormonálnu liečbu tamoxifénom a 227 pacientov pooperačnú chemoterapiu. Ukázalo sa, že cytosolická koncentrácia VEGF v nádoroch pacientov, u ktorých došlo k relapsu počas prvého roka pozorovania, bola významne vyššia ako u pacientov s dlhším obdobím bez relapsu. Tiež sa zistilo, že hladina VEGF v primárnom nádore je vyššia u pacientov s primárnymi metastázami do vnútorných orgánov ako u pacientov s metastázami do kostí a mäkkých tkanív. Vysoká hladina VEGF bola podľa jednorozmernej a multivariačnej analýzy nezávislým indikátorom nízkej citlivosti na tamoxifén aj chemoterapiu.
Vo všeobecnosti 13 zo 14 štúdií publikovaných 8 nezávislými skupinami výskumníkov preukázalo, že vysoká hladina VEGF je nezávislým faktorom pri zlej prognóze rakoviny prsníka v skorých štádiách a/alebo jej nízkej citlivosti na tradičné typy hormonálnej alebo chemoterapie. v pokročilom procese. V tomto ohľade bolo navrhnuté zvážiť možnosť zahrnutia rôznych antiangiogénnych liečiv do režimov adjuvantnej terapie pre pacientov s vysokými intratumorálnymi koncentráciami VEGF. Je potrebné poznamenať, že jednotné metodologické prístupy a kritériá na identifikáciu pacientov s vysokými hladinami VEGF ešte neboli vyvinuté a na ich vytvorenie budú potrebné ďalšie spoločné štúdie.
Súbežne so štúdiom klinického významu tkanivovej hladiny VEGF pri rakovine prsníka sa rieši otázka, či sa zvýšená expresia VEGF v nádore odráža na hladine tohto proteínu v sére/plazme krvi a či koncentrácia cirkulujúceho VEGF je adekvátnou charakteristikou jeho obsahu a skúma sa aktivita angiogenézy v nádore. V rokoch 1996-1997 Boli publikované prvé štúdie, v ktorých sa preukázalo zvýšenie hladiny VEGF v krvi onkologických pacientov. Y. Yamamoto a kol. [b2] po vyšetrení veľkej skupiny pacientov a darcov, vrátane 137 pacientov s rakovinou prsníka, zistili, že hladina VEGF v krvnom sére u 8,8 % pacientok s rakovinou prsníka prekračuje nimi stanovenú prahovú hodnotu 180 pg/ ml. V tomto prípade hladina VEGF v sére korelovala s prevalenciou procesu a s hladinou expresie VEGF v nádorovom tkanive a hlavnou izoformou VEGF v sére bol VEGF-γ5.
L. Dirix a kol. [b3] skúmali skupinu 132 pacientov s metastatickým karcinómom s rôznymi primárnymi diagnózami. Hladinu VEGF považovali za zvýšenú, presahujúcu 95 % interval spoľahlivosti kontrolnej skupiny a dosahujúcu 500 pg/ml. VEGF bol zvýšený u 57 % pacientov s neliečeným metastatickým karcinómom, bez ohľadu na jeho lokalizáciu. Počas liečby sa hladina VEGF zvýšila u 2/3 pacientov s progresiou ochorenia a u menej ako 10 % pacientov s pozitívnou dynamikou.
P. Salven a kol. [b4] tiež ukázali, že pri rôznych typoch nádorov (vrátane rakoviny prsníka) je sérová hladina VEGF pri diseminovanej rakovine (171711 pg/ml; medián - 214 pg/ml) výrazne vyššia ako u zdravých darcov (1-177 pg / ml; medián - 17 pg / ml) a u pacientov s lokalizovaným procesom (8-664 pg / ml; medián - 158 pg / ml). U 74 % neliečených pacientov
s diseminovanou rakovinou hladina VEGF v krvnom sére presiahla 200 pg/ml a po úspešnej liečbe klesla. Podobné vzory zaznamenali A. Kraft a kol. [b5]: podľa ich údajov sa pozoruje zvýšená hladina VEGF v sére u 0-2G % pacientov s lokalizovaným nádorovým procesom a 11-65 % pacientov s metastatickým procesom. Treba však poznamenať, že v tejto štúdii boli hladiny VEGF u zdravých darcov (30–1 752 pg/ml; medián 294 pg/ml; horný 95 % interval spoľahlivosti, 883 pg/ml) významne vyššie ako hladiny uvádzané inými darcami. autorov. V tejto štúdii, ako aj v práci B. Zebrowski et al. [bb], preukázali významné zvýšenie koncentrácie VEGF v ascitických tekutinách u pacientov s rakovinou v porovnaní s ascitom nenádorového pôvodu.
V neskoršej práci P. Salven a kol. [b7] uvádza výsledky stanovenia koncentrácie VEGF v krvnom sére 105 pacientok s benígnymi a malígnymi nádormi prsníka. Ukázalo sa, že hladiny VEGF v krvnom sére pacientok s metastatickým karcinómom prsníka (7 – 1347 pg/ml; medián – 186 pg/ml) sú významne zvýšené v porovnaní s pacientkami s benígnymi nádormi (2 – 328 pg/ml; medián -57 pg/ml). Hladiny VEGF u pacientok s lokálne pokročilým karcinómom prsníka (11-539 pg/ml; medián – 104 pg/ml) sú tiež vyššie ako u pacientok s benígnymi nádormi, rozdiel však nie je štatisticky významný. U pacientov s metastatickým karcinómom, ktorí dostávali špecifickú liečbu, bola hladina VEGF významne nižšia ako u pacientov, ktorí dostávali iba jedinú liečbu symptomatická liečba. Je tiež zaujímavé, že pri lokálne pokročilom procese bola hladina VEGF v krvnom sére pacientov s invazívnym duktálnym karcinómom (medián – 107 pg/ml) významne vyššia ako u pacientov s invazívnym lobulárnym karcinómom (medián – 44 pg/ml ), a v druhom prípade bola dokonca nižšia ako u benígnych nádorov. Toto pozorovanie je v dobrej zhode s údajmi A. Lee et al. [b8], ktorí ukázali, že obsah VEGF mRNA a proteínu v tkanive duktálneho karcinómu prsníka bol signifikantne vyšší ako v tkanive lobulárneho karcinómu. Zároveň sa duktálny a lobulárny karcinóm nelíšili v hustote mikrociev a iba pri duktálnom karcinóme existovala priama korelácia medzi hladinou VEGF mRNA a indexmi proteínovej a vaskulárnej hustoty. Dá sa predpokladať, že VEGF je regulátorom angiogenézy hlavne pri duktálnom karcinóme prsníka.
Zaujímavé sú porovnávacie štúdie, v ktorých sa súčasne určoval obsah/expresia VEGF v nádorovom tkanive a krvnom sére. G. Callagy a kol. [b9], ktorí stanovili tkanivovú expresiu VEGF imunohistochemickou metódou, dospeli k záveru, že tento parameter, nie však koncentrácia VEGF v sére, koreluje s hustotou mikrociev a štádiom rakoviny prsníka, a preto je spoľahlivejším prognostickým faktorom ako hladina VEGF v krvnom sére. Tiež nezistili žiadny vzťah medzi hladinami VEGF v sére a jeho expresiou v nádore.
Najreprezentatívnejšiu porovnávaciu štúdiu vykonali J. Adams a kol. . Stanovili obsah VEGF v sére a krvnej plazme a expresiu VEGF v nádore (imunohistochemicky) u 201 pacientok s lokalizovaným a pokročilým karcinómom prsníka, benígnymi nádormi prsníka.
Leza a zdravé ženy. Pri metastatickej rakovine prsníka sa zaznamenalo významné zvýšenie hladiny VEGF v plazme aj v krvnom sére v porovnaní s normou. Obsah VEGF v krvnej plazme u pacientok s metastatickým karcinómom prsníka bol tiež významne zvýšený v porovnaní s pacientkami s benígnymi tumormi a lokalizovaným karcinómom prsníka. Pri lokalizovanom karcinóme prsníka bolo v porovnaní s kontrolou pozorované len zvýšenie hladiny VEGF v krvnej plazme. Autori sa domnievajú, že meranie VEGF v krvnej plazme vo väčšej miere odráža jeho produkciu nádorom, keďže sérový VEGF je prevažne doštičkového pôvodu. Paradoxne najvyššie sérové a plazmatické hladiny VEGF boli zistené u pacientok s rakovinou prsníka v remisii liečby tamoxifénom. Hladina cirkulujúceho VEGF nekorelovala so žiadnym zo známych klinicko-patologických faktorov, vrátane mikrovaskulárnej hustoty a tkanivovej expresie VRPP.
Teda možnosť využitia indikátorov hladín VEGF v krvi (v sére aj plazme) ako adekvátnej náhrady tkanivovej expresie tohto proteínu pri hodnotení aktivity angiogenézy pri rakovine prsníka a predikcii výsledku ochorenia a účinnosti terapia zatiaľ nebola preukázaná.
Angiogenéza závislá od UECE ako cieľ protirakovinovej terapie pri rakovine prsníka. Vzhľadom na kritickú úlohu angiogenézy pri udržiavaní rastu a šírenia rakoviny prsníka a kľúčovú úlohu VEGF v tomto procese mnohí autori už dlho dospeli k záveru, že cielená supresia expresie VEGF a/alebo jeho účinkov môže byť sľubným prístupom k rozvoju nové režimy adjuvantnej terapie tohto ochorenia. Navrhlo sa použiť ako antiangiogénne látky látky, ktoré relatívne nešpecificky blokujú interakciu rôznych rastových faktorov s tyrozínkinázovými receptormi, najmä menej toxické analógy suramínu. Predpokladalo sa tiež, že antiangiogénne činidlá môžu byť obzvlášť účinné, keď sa kombinujú s liečivami aktivovanými za hypoxických podmienok, pretože potlačenie angiogenézy by vytvorilo podmienky priaznivé pre aktiváciu týchto liečiv. Zvlášť zdôraznená bola skutočnosť, že čisto antiangiogénna terapia s najväčšou pravdepodobnosťou nevedie k regresii nádoru, ale k zastaveniu jeho ďalšieho rastu. V tejto súvislosti sa poukázalo na potrebu vyvinúť klinické a biochemické kritériá na hodnotenie účinnosti antiangiogénnych liekov.
V súčasnosti, iba v Spojených štátoch, viac ako 20 liekov prechádza klinickými skúškami, najmä fáza I, ktoré ovplyvňujú angiogenézu tak či onak. Patria medzi ne také pomerne špecifické lieky, ako sú monoklonálne protilátky vo VEOP (GeneIeeI) a jeho receptoroch (IMC-1C11), inhibítory vnútornej tyrozínkinázy receptora VEGF (napríklad 7B6474), blokátory prenosu mitogénneho signálu VEGF (SIII668 a 8III416), prírodné (Neoya8-M ) a syntetické (Magita8Ia1;, Prinita8Ia1;, BMB-275291, COb-3) inhibítory matrixových proteináz, prírodné (angiostatín a endostatín) a syntetické (TYP-470) inhibítory proliferácie alebo induktory apoptóza (Combre8Ia1m) endotelových buniek a
množstvo liekov s odlišným alebo nejasným mechanizmom účinku.
I Royctap rozdeľuje antiangiogénne lieky na priame a nepriame inhibítory angiogenézy. Hovorí o priamych inhibítoroch látok, ktoré priamo ovplyvňujú endotelové bunky. Ide o už spomínaný angiostatín, endostatín, TYP-470, Cob-NxaNn, ako aj také prírodné inhibítory angiogenézy ako trombospondíny, faktor pigmentový epitel. Charakteristickým znakom takýchto liečiv je, že vo všeobecnosti nespôsobujú rezistenciu v endotelových bunkách, a preto sa môžu používať dlhodobo. Nepriame inhibítory zahŕňajú lieky, ktoré ovplyvňujú produkciu angiogénnych faktorov nádorovými bunkami alebo blokujú pôsobenie týchto faktorov v jednom alebo druhom štádiu. Sú to monoklonálne protilátky alebo antisense nukleotidy voči VEGF a jeho receptorom. Keďže pôsobenie nepriamych inhibítorov priamo súvisí s nádorovou bunkou a jej schopnosťou produkovať angiogénne faktory, pravdepodobnosť rezistencie na tieto liečivá je približne rovnaká ako u tradičných protinádorových látok.
Záujem o antiangiogénnu protinádorovú liečbu je v súčasnosti taký veľký, že počet publikácií venovaných predklinickým a klinickým štúdiám v tejto oblasti sa meria v stovkách, preto sa v tomto prehľade zameriame len na práce priamo súvisiace s rakovinou prsníka.
Klinicky najpokročilejší je liek s neznámym mechanizmom antiangiogénneho účinku – talidomid. V 70. rokoch 20. storočia používal sa ako sedatívum a bol zakázaný pre jeho teratogénny vedľajší účinok, ktorý bol spôsobený jeho antiangiogénnymi vlastnosťami. V súčasnosti sa uskutočňujú pokusy o využitie antiangiogénneho potenciálu talidomidu pri liečbe malígnych nádorov a už prechádza klinickými skúškami fázy II. Medzi 66 pacientmi zahrnutými do tejto štúdie, ktorí dostávali 100 mg talidomidu každú noc, bolo 12 pacientov s rakovinou prsníka. U pacientov s rakovinou prsníka nebola žiadna objektívna odpoveď na liek, hoci čiastočná odpoveď alebo stabilizácia sa pozorovala u 6 z 18 pacientov s rakovinou obličiek zaradených do tej istej štúdie.
Zároveň sa skôr v experimentoch na indukciu angiogenézy v rohovke králika pôsobením klonu buniek MCP-7 produkujúceho UEOP ukázalo, že analóg talidomidu linomid v dávke 100 mg /kg telesnej hmotnosti tento proces účinne brzdí.
M. A8apo e1 a1. ukázali, že anti-VEGF monoklonálna protilátka MU833 inhibovala rast xenoimplantátov ľudskej rakoviny prsníka u nahých myší. Inhibičný účinok MU833 však nekoreloval ani s množstvom VEGF vylučovaným nádorom, ani s expresiou receptora VEGF. V iných experimentoch transplantácia sféroidov vytvorených bunkami rakoviny prsníka línií MCP-7, 7R-75 a BK-VR-3 do subkutánnej dorzálnej komory atymických myší ukázala, že monoklonálna protilátka proti VEGF A.4.6.1 na denná dávka 200 μg významne inhibuje angiogénnu aktivitu týchto bunkových línií a zvyšuje protinádorovú aktivitu doxorubicínu v týchto modeloch.
Významná protinádorová aktivita na xenoimplantátoch rakoviny prsníka bola tiež zaznamenaná u nízkomolekulárneho špecifického inhibítora vEGF receptorovej tyrozínkinázy (oba typy 1 a 2) - 7B4190. Jednorazové perorálne podanie tohto liečiva v dávkach, ktoré nemali priamy antiproliferatívny účinok na nádorové bunky, významne inhibovalo rast vytvorených nádorov o veľkosti asi 0,5 cm3. Antiangiogénnu aktivitu proti xenoimplantátom rakoviny prsníka má ďalší inhibítor tyrozínkinázy – pomerne dobre známy a už klinicky skúšaný liek 7B1839 (Ire88a), ktorý je selektívnym inhibítorom tyrozínkinázy receptora EGF. Predpokladá sa, že tento liek nepôsobí priamo na receptory VEGF, ale potláča indukciu syntézy VEGF pôsobením ligandov receptora EGF. Ďalší blokátor mitogénnej signálnej transdukčnej dráhy závislej od EGF, Herceptin, humanizovaná monoklonálna protilátka proti ErbB2/neu, má zrejme podobný nepriamy účinok na angiogenézu.
Účinnými inhibítormi angiogenézy sú aj lieky, ktoré narúšajú funkciu mikrotubulov. Takže už v roku 1997 Klauber N. ei a1. ukázali, že 2-metoxyestradiol a taxol, ktoré majú podobné vlastnosti, inhibujú VEGF-indukovanú angiogenézu o 54 %, respektíve o 37 %. Súčasne 2-metoxyestradiol potlačil rast ľudskej rakoviny prsníka implantovanej do nahých myší o 60%. Antiangiogénne vlastnosti taxolu demonštrovali aj B. bau et al. u myší s dobre vaskularizovaným transgénnym nádorom prsníka MeL. Účinok bol pozorovaný pri necytotoxických dávkach taxolu (3-6 mg/kg/deň) a bol spojený so supresiou sekrécie VEGF.
Táto vlastnosť taxolu bola navrhnutá na použitie na hodnotenie účinnosti liečby pacientok s metastatickým karcinómom prsníka. Ich štúdia zahŕňala 14 pacientov, ktorí dostávali monoterapiu taxolom v dávke 175 mg/m2 IV počas troch cyklov po 21 dní. U všetkých pacientov bola hladina VEGF v sére stanovená enzýmovým imunotestom pred začiatkom liečby a po každom z 21-dňových cyklov. U 3 pacientov bola zaznamenaná čiastočná odpoveď na liečbu, u 6 - stabilizácia au 5 - progresia ochorenia. Hladiny VEGF v sére pred liečbou boli významne zvýšené u 8 zo 14 pacientov. Priemerná hladina VEGF sa po liečbe znížila u pacientov s čiastočnou odpoveďou a stabilizáciou a významne sa nezmenila u pacientov s progresiou. Navyše percento normalizácie hladiny VEGF alebo jej pokles o viac ako 50 % bol signifikantne vyšší u pacientov s čiastočným efektom (5/9) ako u pacientov s progresiou (0/5). Autori sa domnievajú, že stabilizačný účinok taxolu u pacientok s pokročilým karcinómom prsníka môže byť spojený so supresiou sekrécie VEGF, a teda s inhibíciou angiogenézy.
Publikované experimenty na imunodeficientných myšiach preukázali možnosť použitia génovej terapie na potlačenie angiogenézy a inhibíciu rastu rakoviny prsníka. Myšiam so zrelými nádormi Mca-4 sa dvakrát v intervale 7 dní injikoval do nádoru plazmid obsahujúci gén endostatínu, prirodzeného inhibítora angiogenézy. 14 dní po prvej injekcii,
zníženie hmotnosti nádorov u pokusných myší o 51 % v porovnaní s kontrolnou skupinou. Súčasne sa pozorovalo zvýšenie vzdialenosti medzi nádorovými bunkami a najbližšími cievami, zníženie celkovej hustoty ciev a zvýšenie apoptózy v nádoroch obsahujúcich a exprimujúcich endostatínový gén.
Ďalším prístupom genetického inžinierstva k antiangiogénnej terapii rakoviny prsníka je použitie anti-sense cDNA k VEGF. S.A. Im a kol. ľudské bunky rakoviny prsníka línie MDA231-MB boli transfekované adenovírusovým vektorom obsahujúcim takúto cDNA na VEGF-165 (Ad5CMV-alfaVEGF). V systéme in vitro táto transfekcia viedla k zníženiu sekrécie VEGF bez významného účinku na rast buniek. In vivo injekcia Ad5CMV-alfaVEGF do nádorov vytvorených bunkami MDA231-MB u nahých myší viedla k potlačeniu ich rastu, zníženiu expresie proteínu VEGF v nádorovom tkanive a zníženiu mikrovaskulárnej hustoty v porovnaní so skupinou, ktorej bola injekčne podaná vektor, ktorý neobsahoval anti-VEGF cDNA.
Experimentálne je teda dokázaná možnosť využitia rôznych typov priamej a nepriamej antiangiogénnej terapie v liečbe pacientok s karcinómom prsníka. Žiaľ, žiadna z týchto metód zatiaľ nebola preukázaná ako účinná na klinike. Väčšina autorov sa navyše prikláňa k názoru, že antiangiogénna terapia (najmä priama), ktorá je u veľkých nádorov skôr cytostatická než cytotoxická, by sa nemala používať ako nezávislá metóda liečby, ale ako dôležitý doplnok k štandardným liečebným režimom.
LITERATÚRA
1. Pintucci G., Bikfalvi A., Klein S., Rifkin D.B. Angiogenéza a fibrinolytický systém // Semin. Thromb. hemost. 1996. V. 22. Číslo 6. S. 517-524.
2. Ferrara N. Úloha vaskulárneho endotelového rastového faktora v patologickej angiogenéze // Breast Cancer Res. zaobchádzať. 1995. V. 36. Číslo 2. S. 127137.
3. Vandenbunder B., Wernert N., Queva C., Desbiens X., Stehelin D. Podieľa sa transkripčný faktor c-ets1 na regulácii angiogenézy a nádorovej invázie? // Folia Biol. (Praha). 1994. V. 40. Číslo 5. S. 301-313.
4. Sato Y. Transkripčný faktor ETS-1 ako molekulárny cieľ pre inhibíciu angiogenézy // Hum. bunka. 1998. V. 11. Číslo 4. S. 207-214.
5. Iwasaka C., Tanaka K., Abe M., Sato Y. Ets-1 reguluje angiogenézu indukciou expresie aktivátora plazminogénu urokinázového typu a matricovej metaloproteinázy-1 a migráciou vaskulárnych endotelových buniek // J. Cell Physiol . 1996. V. 169. Číslo 3. S. 522-531.
6. Mignatti P., Rifkin D.B. Plazminogénové aktivátory a matricové metaloproteinázy v angiogenéze // Enzyme Protein. 1996. V. 49. S. 117-137.
7. Toi M., Hoshina S., Takayanagi T., Tominaga T. Asociácia expresie vaskulárneho endotelového rastového faktora s nádorovou angiogenézou a so skorým relapsom primárnej rakoviny prsníka // Jpn. J. Cancer Res. 1994. V. 85. Číslo 10. S. 1045-1049.
8. Toi M., Inada K., Hoshina S., Suzuki H., Kondo S., Tominaga T. Vaskulárny endotelový rastový faktor a rastový faktor endotelových buniek odvodený od krvných doštičiek sú často koexprimované vo vysoko vaskularizovanom ľudskom karcinóme prsníka // Clin. Cancer Res. 1995. V. 1. Číslo 9. S. 961-964.
9. Toi M., Inada K., Suzuki H., Tominaga T. Nádorová angiogenéza pri rakovine prsníka: jej význam ako prognostický indikátor a súvislosť s expresiou vaskulárneho endotelového rastového faktora // Breast Cancer Res. zaobchádzať. 1995. V. 36. Číslo 2. S. 193-204.
10. Toi M., Kondo S., Suzuki H., Yamamoto Y., Inada K., Imazawa T., Taniguchi T., Tominaga T. Kvantitatívna analýza vaskulárneho endotelového rastového faktora pri primárnej rakovine prsníka // Rakovina. 1996. V. 77. Číslo 6. S. 1101-1106.
11. Toi M., Yamamoto Y., Taniguchi T., Saji S., Hayashi K., Tominaga T. Regulácia expresie endotelového rastového faktora pri rakovine prsníka // Gan To Kagaku Ryoho. 1996. V. 23. Suppl. 1. S. 75-79.
12. Yoshiji H., Gomez D.E., Shibuya M., Thorgeirsson U.P. Expresia vaskulárneho endotelového rastového faktora, jeho receptora a iných angiogénnych látok
faktory pri rakovine prsníka u ľudí // Cancer Res. 1996. V. 56. Číslo 9. P. 2013-2016.
13. Anan K., Morisaki T., Katano M., Ikubo A., Kitsuki H., Uchiyama A., Kuroki S., Tanaka M., Torisu M. Vaskulárny endotelový rastový faktor a rastový faktor odvodený od krvných doštičiek sú potenciálne angiogénne a metastatické faktory pri rakovine prsníka u ľudí // Chirurgia. 1996. V. 119. Číslo 3.
14. Anan K., Morisaki T., Katano M., Ikubo A., Tsukahara Y., Kojima M., Uchiyama A., Kuroki S., Torisu M., Tanaka M. Hodnotenie c-erbB2 a vaskulárneho endotelového rastu expresia faktora mRNA v tenkoihlových aspirátoch zo skorých karcinómov prsníka: predoperačné stanovenie malígneho potenciálu // Eur. J. Surg. oncol. 1998. V. 24. Číslo 1. S. 28-33.
15. Guidi A.J., Schnitt S.J., Fischer L., Tognazzi K., Harris J.R., Dvořák H.F., Brown L.F. Expresia a angiogenéza faktora vaskulárnej permeability (vaskulárny endoteliálny rastový faktor) u pacientov s duktálnym karcinómom prsníka in situ // Rakovina. 1997. V. 80. Číslo 10. S. 1945-1953.
16. Zhang H.T., Craft P., Scott P.A., Ziche M., Weich H.A., Harris A.L., Bicknell R. Zvýšenie rastu nádoru a vaskulárnej hustoty transfekciou rastového faktora vaskulárnych endotelových buniek do buniek ľudského karcinómu prsníka MCF-7 // J. Natl. Cancer Inst. 1995. V. 87. Číslo 3. S. 213-219.
17. Wang G., Dong Z., Xu G., Yang Z., Shou C., WangN., Liu T. Účinok protilátky proti vaskulárnemu endotelovému rastovému faktoru na rast nádoru a metastázy // J. Cancer Res. Clin. oncol. 1998. V. 124. Číslo 11. S. 615-620.
18. Wang G., Yang Z., Shou C. // Chung Hua Chung Liu Tsa Chih. 1997. V. 19. Číslo 6. S. 407-409.
19. Lichtenbeld H.C., Barendsz-Janson A.F., van Essen H., Struijker Boudier H., Grifioen A.W., Hillen H.F. Angiogénny potenciál malígnych a nemalígnych ľudských prsných tkanív v modeli angiogenézy in vivo // Int. J. Cancer. 1998. V. 77. Číslo 3. S. 455-459.
20. Brown L.F., Guidi A.J., Schnitt S.J., Van De Water L., Iruela-Arispe M.L., Yeo T.K., Tognazzi K., Dvorak H.F. Tvorba vaskulárnej strómy pri karcinóme in situ, invazívnom karcinóme a metastatickom karcinóme prsníka // Clin. Cancer Res. 1999. V. 5. Číslo 5. S. 1041-1056.
21. Kranz A., Mattfeldt T., Waltenberger J. Molekulárne mediátory nádorovej angiogenézy: zvýšená expresia a aktivácia receptora vaskulárneho endotelového rastového faktora KDR pri primárnej rakovine prsníka // Int. J. Cancer. 1999. V. 84. Číslo 3. S. 293-298.
22. Xie B., Tam N.N., Tsao S.W., Wong Y.C. Koexpresia vaskulárneho endotelového rastového faktora (VEGF) a jeho receptorov (flk-1 a flt-1) pri rakovine prsníka vyvolanej hormónmi u potkanov Noble // Br. J. Cancer.
1999. V. 81. Číslo 8. S. 1335-1343.
23. Speirs V., Atkin S.L. Produkcia VEGF a expresia VEGF receptorov Flt-1 a KDR v primárnych kultúrach epitelových a stromálnych buniek odvodených z nádorov prsníka // Br. J. Cancer. 1999. V. 80. Číslo 5-6. S. 898-903.
24. Leek R.D., Hunt N.C., Landers R.J., Lewis C.E., Royds J.A., Harris A.L. Infiltrácia makrofágov je spojená s expresiou VEGF a EGFR pri rakovine prsníka // J. Pathol. 2000. V. 190. Číslo 4. S. 430-436.
25. Scott P.A., Gleadle J.M., Bicknell R., Harris A.L. Úloha systému snímania hypoxie, kyslosti a reprodukčných hormónov vo variabilite indukcie vaskulárneho endotelového rastového faktora v bunkových líniách ľudského karcinómu prsníka // Int. J. Cancer. 1998. V. 75. Číslo 5. S. 706-712.
26. Bos R., Zhong H., Hanrahan C.F., Mommers E.C., Semenza G.L., Pinedo H.M., Abeloff M.D., Simons J.W., van Diest P.J., van der Wall
E. Hladiny hypoxiou indukovateľného faktora-1 alfa počas karcinogenézy prsníka // J. Natl. Cancer Inst. 2001. V. 93. Číslo 4. S. 309-314.
27. Biroccio A., Candiloro A., Mottolese M., Sapora O., Albini A., Zupi G., Del Bufalo D. Nadmerná expresia Bcl-2 a hypoxia synergicky pôsobia na moduláciu expresie vaskulárneho endotelového rastového faktora a in vivo an- giogenéza v línii karcinómu prsníka // FASEB J. 2000. V. 14. č. 5. S. 652-660.
28. Pidgeon G.P., Barr M.P., Harmey J.H., Foley D.A., Bouchier Hayes D.J. Vaskulárny endoteliálny rastový faktor (VEGF) upreguluje BCL-2 a inhibuje apoptózu v ľudských a myších bunkách adenokarcinómu prsníka // Br. J. Cancer. 2001. V. 85. Číslo 2. S. 273-278.
29. Yen L., You X.L., Al Moustafa A.E., Batist G., Hynes N.E., Mader S., Meloche S., Alaoui-Jamali M.A. Heregulín selektívne zvyšuje sekréciu vaskulárneho endotelového rastového faktora v rakovinových bunkách a stimuluje angiogenézu // Onkogén. 2000. V. 19. Číslo 31. S. 3460-3469.
30. Laughner E., Taghavi P., Chiles K., Mahon P.C., Semenza G.L. HER2 (neu) signalizácia zvyšuje rýchlosť syntézy hypoxiou indukovateľného faktora 1alfa (HIF-1alfa): nový mechanizmus expresie vaskulárneho endotelového rastového faktora sprostredkovaného HIF-1 // Mol. Bunkový biol. 2001. V. 21. Číslo 12. S. 3995-4004.
31. Blancher C., Moore J.W., Robertson N., Harris A.L. Účinky génových mutácií ras a von Hippel-Lindau (VHL) na hypoxiou indukovateľný faktor (HIF)-1alfa, HIF-2alfa a expresiu vaskulárneho endotelového rastového faktora a ich reguláciu fosfatidylinozitolom 3"-
Kinase/Akt Signaling Pathway // Cancer Res. 2001. V. 61. Číslo 19. S. 7349-7355.
32. Donovan D., Harmey J.H., Toomey D., Osborne D.H., Redmond H.P., Bouchier-Hayes D.J. TGF beta-1 regulácia produkcie VEGF bunkami rakoviny prsníka // Ann. Surg. oncol. 1997. V. 4. Číslo 8. S. 621-627.
33. de Jong J.S., van Diest P.J., van der Valk P., Baak J.P. Expresia rastových faktorov, faktorov inhibujúcich rast a ich receptorov pri invazívnom karcinóme prsníka. I: Inventár pri hľadaní autokrinných a parakrinných slučiek // J. Pathol. 1998. V. 184. Číslo 1. S. 44-52.
34. de Jong J.S., van Diest P.J., van der Valk, P., Baak, J.P. Expresia rastových faktorov, faktorov inhibujúcich rast a ich receptorov pri invazívnom karcinóme prsníka. II: Korelácie s proliferáciou a angiogenézou // J. Pathol. 1998. V. 184. Číslo 1. S. 53-57.
35. De Jong J.S., van Diest P.J., van der Valk P., Baak J.P. Expresia rastových faktorov, receptorov rastových faktorov a proteínov súvisiacich s apoptózou pri invazívnom karcinóme prsníka: vzťah k apoptotickej rýchlosti // Breast Cancer Res. zaobchádzať. 2001. V. 66. Číslo 3. S. 201-208.
36. Hyder S.M., Stancel G.M. Regulácia VEGF v reprodukčnom trakte pohlavnými steroidnými hormónmi // Histol. histopathol. 2000. V. 15. Číslo 1. S. 325-234.
37. Ruohola J.K., Valve E.M., Karkkainen M.J., Joukov V., Alitalo K., Harkonen P.L. Vaskulárne endotelové rastové faktory sú rozdielne regulované steroidnými hormónmi a antiestrogénmi v bunkách rakoviny prsníka // Mol. Cell Endocrinol. 1999. V. 149. Číslo 1-2. S. 29-40.
38. Hyder S.M., Nawaz Z., Chiappetta C., Stancel G.M. Identifikácia funkčných prvkov estrogénovej odozvy v géne kódujúcom silný angiogénny faktor vaskulárny endoteliálny rastový faktor // Cancer Res. 2000. V. 60. Číslo 12. S. 3183-3190.
39. Kurebayashi J., Kunisue H., Yamamoto S., Kurosumi M., Otsuki T., Sonoo H. Paradoxné hormonálne reakcie buniek rakoviny prsníka KPL-1 in vivo: významná úloha angiogenézy pri raste nádoru // Onkológia. 2000. V. 59. Číslo 2. S. 158-165.
40. Hyder S.M., Murthy L., Stancel G.M. Progestínová regulácia vaskulárneho endotelového rastového faktora v ľudských bunkách rakoviny prsníka // Cancer Res.
1998. V. 58. Číslo 3. S. 392-395.
41. Hyder S.M., Chiappetta C., Stancel G.M. Farmakologické a endogénne progestíny indukujú expresiu vaskulárneho endotelového rastového faktora v ľudských bunkách rakoviny prsníka // Int. J. Cancer. 2001. V. 92. č. 4. P. 469473.
42. Heer K., Kumar H., Speirs V., Greenman J., Drew P.J., Fox J.N., Carleton P.J., Monson J.R., Kerin M.J. Vaskulárny endoteliálny rastový faktor u žien pred menopauzou - indikátor najlepšieho času na operáciu rakoviny prsníka? // Br. J. Cancer. 1998. V. 78. Číslo 9. S. 1203-1207.
43. Greb R.R., Maier I., Wallwiener D., Kiesel L. Hladiny expresie mRNA vaskulárneho endotelového rastového faktora A (VEGF-A) klesajú po menopauze v normálnom tkanive prsníka, ale nie v léziách rakoviny prsníka // Br. J. Cancer. 1999. V. 81. Číslo 2. S. 225-231.
44. Skobe M., Hawighorst T., Jackson D.G., Prevo R., Janes L., Velasco P., Riccardi L., Alitalo K., Claffey K., DetmarM. Indukcia nádorovej lymfangiogenézy pomocou VEGF-C podporuje metastázy rakoviny prsníka // Nat. Med. 2001. V. 7. Číslo 2. S. 192-198.
45. Kurebayashi J., Otsuki T., Kunisue H., Mikami Y., Tanaka K., Yamamoto S., Sonoo H. Expresia členov rodiny vaskulárneho endotelového rastového faktora (VEGF) pri rakovine prsníka // Jpn. J. Cancer Res. 1999. V. 90. Číslo 9. S. 977-981.
46. Valtola R., Salven P., Heikkila P., Taipale J., Joensuu H., Rehn M., Pihlajaniemi T., Weich H., deWaal R., Alitalo K. VEGFR-3 a jeho ligand VEGF -C sú spojené s angiogenézou pri rakovine prsníka // Am. J. Pathol. 1999. V. 154. Číslo 5. S. 1381-1390.
47. Ohhashi T. // Nippon Geka Gakkai Zasshi. 2001. V. 102. Číslo 6. S. 435-439.
48. Obermair A., Kučera E., Mayerhofer K., Speiser P., Seifert M., Czerwenka K., Kaider A., Leodolter S., Kainz C., Zeillinger R. Vaskulárny endoteliálny rastový faktor ( VEGF) pri rakovine prsníka u ľudí: korelácia s prežitím bez ochorenia // Int. J. Cancer. 1997. V. 74. Číslo 4. P. 455458.
49. Relf M., LeJeune S., Scott P.A., Fox S., Smith K., Leek R., Moghaddam A., Whitehouse R., Bicknell R., Harris A.L. Expresia angiogénnych faktorov rastového faktora vaskulárnych endotelových buniek, kyslého a zásaditého fibroblastového rastového faktora, nádorového rastového faktora beta-1, rastového faktora endotelových buniek odvodených od krvných doštičiek, rastového faktora placenty a pleiotrofínu pri primárnej rakovine prsníka u ľudí a ich vzťah k angiogenéza // Cancer Res. 1997. V. 57. Číslo 5. S. 963-969.
50. Gasparini G., Toi M., Gion M., Verderio P., Dittadi R., Hanatani M., Matsubara I., Vinante O., Bonoldi E., Boracchi P., Gatti C., Suzuki H., Tominaga T. Prognostický význam proteínu vaskulárneho endotelového rastového faktora pri karcinóme prsníka s negatívnymi uzlinami // J. Natl. Cancer Inst.
1997. V. 89. Číslo 2. S. 139-147.
51. Gasparini G., Toi M., Miceli R., Vermeulen P.B., Dittadi R., Bigan-zoli E., Morabito A., Fanelli M., Gatti C., Suzuki H., Tominaga T., Di-rix L.Y., Gion M. Klinický význam vaskulárneho endotelového rastového faktora a tymidínfosforylázy u pacientov s prsníkmi s pozitívnymi uzlinami
rakovina liečená buď adjuvantnou chemoterapiou alebo hormonálnou terapiou // Cancer J. Sci. Am. 1999. V. 5. Číslo 2. S. 101-111.
52. Gasparini G. Prognostická hodnota vaskulárneho endotelového rastového faktora pri rakovine prsníka // Onkológ. 2000. V. 5. Suppl. 1. S. 37-44.
53. Gasparini G. Klinický význam stanovenia náhradných markerov angiogenézy pri rakovine prsníka, Crit. Rev. oncol. Hematol. 2001. V. 37. Číslo 2. S. 97-114.
54. Gasparini G., ToiM., Biganzoli E., Dittadi R., Fanelli M., Morabito A., Boracchi P., Gion M. Trombospondin-1 a -2 pri rakovine prsníka s negatívnymi uzlinami: korelácia s angiogénnymi faktormi, p53, katepsín D, hormonálne receptory a prognóza // Onkológia. 2001. V. 60. č. 1. S. 72-
55. Linderholm B., Tavelin B., Grankvist K., Henriksson R. Predpovedá vaskulárny endoteliálny rastový faktor (VEGF) lokálny relaps a prežívanie pri rádioterapiou liečenej rakovine prsníka s negatívnou uzlinou? // Br. J. Cancer.
1999. V. 81. Číslo 4. S. 727-732.
56. Linderholm B., Lindh B., Tavelin B., Grankvist K., Henriksson R. expresia p53 a vaskulárneho endotelového rastového faktora (VEGF) predpovedá výsledok u 833 pacientov s primárnym karcinómom prsníka // Int. J. Cancer.
2000. V. 89. Číslo 1. S. 51-62.
57. Linderholm B., Grankvist K., Wilking N., Johansson M., Tavelin B., Henriksson R. Korelácia obsahu vaskulárneho endotelového rastového faktora s recidívami, prežitím a prvým miestom relapsu pri primárnom nodepozitívnom karcinóme prsníka po adjuvantnej liečbe. / J.Clin. oncol.
2000. V. 18. Číslo 7. S. 1423-1431.
58. Locopo N., Fanelli M., Gasparini G. Klinický význam angiogénnych faktorov pri rakovine prsníka // Breast Cancer Res. zaobchádzať. 1998. V. 52. Číslo 1-3. S. 159-173.
59. Eppenberger U., Kueng W., Schlaeppi J.M., Roesel J.L., Benz C., Mueller H., Matter A., Zuber M., Luescher K., Litschgi M., SchmittM., Foekens J.A., Eppenberger- Castori S Markery nádorovej angiogenézy a proteolýzy nezávisle definujú vysoko a nízkorizikové podskupiny pacientov s rakovinou prsníka s negatívnymi uzlinami // J. Clin. oncol. 1998. V. 16. Číslo 9. S. 3129-3136.
60. Coradini D., Boracchi P., Daidone M.G., Pellizzaro C., Miodini P., Ammatuna M., Tomasic G., Biganzoli E. Príspevok vaskulárneho endotelového rastového faktora k Nottinghamskému prognostickému indexu pri nodenegatívnej rakovine prsníka // Br . J. Cancer. 2001. V. 85. Číslo 6. S. 795-797.
61. Foekens J.A., Peters H.A., Grebenchtchikov N., LookM.P., Meijer van Gelder M.E., Geurts Moespot A., van der Kwast T.H., Sweep C.G., Klijn J.G. Vysoké hladiny vaskulárneho endotelového rastového faktora v nádore predpovedajú slabú odpoveď na systémovú terapiu pri pokročilom karcinóme prsníka // Cancer Res. 2001. V. 61. Číslo 14. S. 5407-5414.
62. Yamamoto Y., Toi M., Kondo S., Matsumoto T., Suzuki H., Kitamu-raM., Tsuruta K., Taniguchi T., Okamoto A., Mori T., Yoshida M., Ike-da T., Tominaga T. Koncentrácie vaskulárneho endotelového rastového faktora v sére normálnych kontrol a pacientov s rakovinou // Clin. Cancer Res. 1996. V. 2. Číslo 5. S. 821-826.
63. Dirix L.Y., Vermeulen P.B., Pawinski A., Prove A., Benoy I., De Pooter C., Martin M., Van Oosterom A.T. Zvýšené hladiny základného fibroblastového rastového faktora angiogénnych cytokínov a vaskulárneho endotelového rastového faktora v sére pacientov s rakovinou // Br. J. Cancer. 1997. V. 76. Číslo 2. S. 238-243.
64. Salven P., Manpaa H., Orpana A., Alitalo K., Joensuu H. Sérový vaskulárny endoteliálny rastový faktor je často zvýšený pri diseminovanej rakovine // Clin. Cancer Res. 1997. V. 3. Číslo 5. S. 647-651.
65. Kraft A., Weindel K., Ochs A., Marth C., Zmija J., Schumacher P., Unger C., Marme D., Gastl G. Vaskulárny endoteliálny rastový faktor v sére a výpotkoch pacientov s malígnym a nezhubné ochorenie // Rakovina. 1999. V. 85. Číslo 1. S. 178-187.
66. Zebrowski B.K., Yano S., Liu W., Shaheen R.M., Hicklin D.J., Putnam J.B. Jr., Ellis L.M. Hladiny vaskulárneho endotelového rastového faktora a indukcia permeability pri malígnych pleurálnych výpotkoch // Clin. Cancer Res. 1999. V. 5. Číslo 11. S. 3364-3368.
67. Salven P., Perhoniemi V., Tykka H., Maenpaa H., Joensuu H. Hladiny VEGF v sére u žien s benígnym nádorom prsníka alebo rakovinou prsníka // Breast Cancer Res. zaobchádzať. 1999. V. 53. Číslo 2. S. 161-166.
68. Lee A.H., Dublin E.A., Bobrow L.G., Poulsom R. Invazívny lobulárny a invazívny duktálny karcinóm prsníka vykazujú odlišné vzorce expresie vaskulárneho endotelového rastového faktora a angiogenézy // J. Pathol.
1998. V. 185. Číslo 4. S. 394-401.
69. Callagy G., Dimitriadis E., Harmey J., Bouchier-Hayes D., vedúci M., Kay E. Imunohistochemické meranie nádorového vaskulárneho endotelového rastového faktora pri rakovine prsníka. Spoľahlivejší prediktor štádia nádoru ako hustota mikrociev alebo sérový vaskulárny endoteliálny rastový faktor // Appl. Imunohistochem. Molecul. morfol. 2000. V. 8. Číslo 2. S. 104-109.
70. Adams J., Carder P.J., Downey S., Forbes M.A., MacLennan K., Allgar V., Kaufman S., Hallam S., Bicknell R., Walker J.J., Cairnduff
F., Selby P.J., Perren T.J., Lansdown M., Banks R.E. Vaskulárny endoteliálny rastový faktor (VEGF) pri rakovine prsníka: porovnanie plazmy, séra a tkaniva VEGF a hustoty mikrociev a účinky tamoxifénu // Cancer Res. 2000. V. 60. Číslo 11. S. 2898-2905.
71. Harris A.L. Antiangiogenézna terapia a stratégie na jej integráciu s adjuvantnou terapiou // Nedávne výsledky Cancer Res. 1998. V. 152. S. 341-352.
72. Harris A.L., Zhang H., Moghaddam A., Fox S., Scott P., Pattison A., Gatter K., Stratford I., Bicknell R. Angiogenéza rakoviny prsníka – nové prístupy k terapii prostredníctvom antiangiogenézy, hypoxicky aktivovaná lieky a cievne cielenie // Breast Cancer Res. zaobchádzať. 1996. V. 38. Číslo 1. P. 97108.
73. Kerbel R.S., Viloria Petit A., Klement G., Rak J. "Náhodné" antiangiogénne lieky. anti-onkogénne riadené inhibítory prenosu signálu a konvenčné chemoterapeutické činidlá ako príklady // Eur. J. Cancer. 2000. V. 36. Číslo 10. S. 1248-1257.
74. Folkman J. Angiogenesis // Harrison's Textbook of Internal Medicine, 15. vyd. / vyd. od E. Braunwalda, A.S. Fauci, D.L. Kasper, S.L. Hauser, D.L. Longo, J.L. Jameson. N.Y.: McGraw-Hill, 2001. S. 517-530.
75. Eisen T., Boshoff C., Mak I., Sapunar F., Vaughan M.M., Pyle L., Johnston S.R., Ahern R., Smith I.E., Gore M.E. Kontinuálna nízka dávka talidomidu: štúdia fázy II pri pokročilom melanóme, obličkových bunkách, rakovine vaječníkov a prsníka // Br. J. Cancer. 2000. V. 82. Číslo 4. S. 812-817.
76. Ziche M., Donnini S., Morbidelli L., Parenti A., Gasparini G., Ledda F. Linomid blokuje angiogenézu transfektantmi vaskulárneho endotelového rastového faktora karcinómu prsníka // Br. J. Cancer. 1998. V. 77. Číslo 7. P. 11231129.
77. Asano M., Yukita A., Suzuki H. Široké spektrum protinádorovej aktivity neutralizačnej monoklonálnej protilátky proti ľudskému vaskulárnemu endotelovému rastovému faktoru // Jpn. J. Cancer Res. 1999. V. 90. Číslo 1. S. 93-100.
78. Borgstrom P., Gold D.P., Hillan K.J., Ferrara N. Význam VEGF pre angiogenézu rakoviny prsníka in vivo: dôsledky z intravitálnej mikroskopie kombinovanej liečby s anti-VEGF neutralizujúcou monoklonálnou protilátkou a doxorubicínom // Anticancer Res. 1999. V. 19. Číslo 5B. P. 4203-4214.
79. Wedge S.R., Ogilvie D.J., DukesM., Kendrew J., Curwen J.O., Hennequin L.F., Thomas A.P., Stokes E.S., Curry B., Richmond G.H., Wadsworth P.F. ZD4190: perorálne aktívny inhibítor signalizácie vaskulárneho endotelového rastového faktora so širokospektrálnou protinádorovou účinnosťou // Cancer Res. 2000. V. 60. Číslo 4. S. 970-975.
80. Ciardiello F., Caputo R., Bianco R. Damiano V., Fontanini G., Cuccato S., De Placido S., Bianco A.R., Tortora G. Inhibícia produkcie rastových faktorov a angiogenézy v ľudských rakovinových bunkách pomocou ZD1839 ( Iressa), selektívny inhibítor tyrozínkinázy receptora epidermálneho rastového faktora, Clin. Cancer Res. 2001. V. 7. Číslo 5. S. 1459-1465.
81. Kerbel R.S. Získaná rezistencia voči protinádorovému účinku protilátok blokujúcich receptor epidermálneho rastového faktora in vivo: úloha pre zmenenú angiogenézu nádoru // Cancer Res. 2001. V. 61. č. 13. S. 5090-5101.
82. KlauberN., Parangi S., Flynn E., Hamel E., D "Amato R.J. Inhibícia angiogenézy a rakoviny prsníka u myší inhibítormi mikrotubulov 2-metoxyestradiolom a taxolom // Cancer Res. 1997. V. 57. No 1. S. 81-86.
83. Lau D.H., Xue L., Young L.J., Burke P.A., Cheung A.T. Paclitaxel (Taxol): inhibítor angiogenézy pri vysoko vaskularizovanej transgénnej rakovine prsníka // Cancer Biother. Radiopharm. 1999. V. 14. Číslo 1. S. 31-36.
84. Lissoni P., Fugamalli E., Malugani F., Ardizzoia A., Secondino S., Tancini G., Gardani G.S. Chemoterapia a angiogenéza pri pokročilej rakovine: pokles vaskulárneho endotelového rastového faktora (VEGF) ako prediktor kontroly ochorenia počas liečby taxolom pri metastatickej rakovine prsníka // Int. J Biol. značky. 2000. V. 15. Číslo 4. S. 308-311.
85. Ding I., Sun J.Z., Fenton B., Liu W.M., Kimsely P., Okunieff P., Min W. Intratumorálne podanie endostatínového plazmidu inhibuje vaskulárny rast a perfúziu u MCa-4 myších prsných karcinómov // Cancer Res. 2001. V. 61. Číslo 2. S. 526-531.
86. Jm S.A., Kim J.S., Gomez Manzano C., Fueyo J., Liu T.J., Cho M.S., Seong C.M., Lee S.N., Hong Y.K., Yung W.K. Inhibícia rastu rakoviny prsníka in vivo antiangiogenéznou génovou terapiou s adenovírusom sprostredkovaným antisense-VEGF // Br. J. Cancer. 2001. V. 84. Číslo 9. P. 12521257.
nocTynma b pegaKunro 16 Hoa6pa 2013 r.
Gershtein E.S., Kushlinskiy D.N., Adamyan L.V., Ognerubov N.A. CIEVNY ENDOTELIÁLNY RASTOVÝ FAKTOR - KLINICKÝ HODNOTNÝ MARKER U MALÍGNYCH NOVOPLAZMOV
Výsledky výskumov autorov a najreprezentatívnejšie údaje z literatúry naznačujúce, že kľúčovým pozitívnym regulátorom neoangiogénnej tvorby – vaskulárnym endotelovým rastovým faktorom (VEGF) – je
demonštruje klinicky významný prognostický faktor pri rôznych onkologických ochoreniach a molekulárny cieľ pre viaceré moderné lieky s rôznym mechanizmom účinku. Jeho úloha ako sérologického faktora pre diagnostiku a monitorovanie si vyžaduje ďalšie skúmanie.
Kľúčové slová: VEGF; VEGF-R; angiogenéza; nádory; predpoveď.
Gershtein Elena Sergeevna, Ruské centrum pre výskum rakoviny. N.N. Blokhin RAMS, Moskva, Ruská federácia, doktor biologických vied, profesor, vedúci výskumník, Laboratórium Výskumného ústavu klinickej biochémie klinická onkológia, e-mail: [chránený e-mailom]
Gerstein Elena Sergejevna, N.N. Blokhin Ruské onkologické vedecké centrum RAMS, Moskva, Ruská federácia, doktor biológie, profesor, vedúci výskumný pracovník klinickej biochémie SRI laboratória klinickej onkológie, e-mail: [chránený e-mailom]
Kushlinsky Dmitrij Nikolaevič, Ruské vedecké centrum pre pôrodníctvo, gynekológiu a perinatológiu pomenované po A.I. IN AND. Kulakova, Moskva, Ruská federácia, onkogynekológ, e-mail: [chránený e-mailom]
Kushlinskiy Dmitriy Nikolajevič, Výskumné centrum pre pôrodníctvo, gynekológiu a perinatológiu pomenované po V.I. Kulakov, Moskva, Ruská federácia, gynekologický onkológ, e-mail: [chránený e-mailom]
Adamyan Leyla Vladimirovna, Ruské vedecké centrum pre pôrodníctvo, gynekológiu a perinatológiu pomenované po A.I.
IN AND. Kulakov, Moskva, Ruská federácia, doktor lekárskych vied, profesor, akademik Ruskej akadémie lekárskych vied, zástupca. riaditeľ, email: [chránený e-mailom]
Adamyan Leyla Vladimirovna, Výskumné centrum pre pôrodníctvo, gynekológiu a perinatológiu pomenované po V.I. Kulakov, Moskva, Ruská federácia, doktor medicíny, profesor, akademik RAMS, zástupca riaditeľa, e-mail: [chránený e-mailom]
Ognerubov Nikolay Alekseevič, Štátna univerzita Tambov. G.R. Derzhavin, Tambov, Ruská federácia, doktor lekárskych vied, profesor, prednosta. Klinika onkológie, operačnej chirurgie a topografická anatómia, email: [chránený e-mailom]
Ognerubov Nikolay Aleksejevič, Štátna univerzita Tambov pomenovaná po G.R. Derzhavin, Tambov, Ruská federácia, doktor medicíny, profesor, primár oddelenia onkológie, chirurgie a topografickej anatómie, e-mail: [chránený e-mailom]
