Home → Pagsusuri → Immunological method → Mga reaksyon ng hematglutination (immunological method)

Mga reaksyon ng aglutinasyon ay batay sa pakikipag-ugnayan ng isang reagent (antibodies) sa mga antigen na matatagpuan sa ibabaw ng mga selula o mga dayuhang particle. Bilang isang resulta, ang malalaking aggregate ay nabuo, na namuo at makikita kahit sa mata. Sa ganitong paraan, ang pangkat ng dugo ay tinutukoy ayon sa sistema ng ABO, ang pagkakaroon ng Rh factor sa loob nito, atbp. Ito ay isang mas sensitibong pamamaraan ng diagnostic kumpara sa mga reaksyon ng pag-ulan, dahil ang dami ng sediment (agglutinate) ay lumampas sa dami ng namuo.

Direktang hematglutination

Ang direktang hemagglutination reaction (DHR) ay ginagamit upang makita ang mga antigen sa ibabaw ng mga microorganism at pulang selula ng dugo, pati na rin ang mga antibodies sa kanila.
SA karaniwang mga serum na naglalaman ng mga antibodies, ang materyal ng pagsubok (dugo) ay idinagdag. Ang bilis ng direktang reaksyon ng agglutination ay nauugnay sa dami ng materyal na sinusuri, ang dami at konsentrasyon ng suwero, at temperatura ng kapaligiran.

Hindi direktang hemagglutination

Reaksyon hindi direktang hemagglutination isinasagawa upang makita ang mga antibodies sa dugo ng pasyente gamit ang isang erythrocyte diagnostic test. Ang reagent ay binubuo ng mga pulang selula ng dugo sa ibabaw kung saan mayroong isang antigen (mga protina ng mga microorganism, toxins, allergens, atbp.).
Ang serum ng dugo ng pasyente ay diluted na may 0.9% sodium chloride solution, pagkatapos ay idinagdag ang erythrocyte diagnosticum at ang resulta ay sinusubaybayan. Ang napakasensitibong pamamaraang diagnostic na ito ay nakakakita ng mga antigen kahit sa maliliit na konsentrasyon.

Hemagglutination reaction (HRA).

Sa laboratoryo, dalawang reaksyon ng hemagglutination na may magkakaibang mekanismo ng pagkilos ang ginagamit.

Ang unang RGA ay serological. Sa reaksyong ito, ang mga pulang selula ng dugo ay pinagsama-sama kapag nakikipag-ugnayan sa naaangkop na mga antibodies (hemagglutinins). Ang reaksyon ay malawakang ginagamit upang matukoy ang mga pangkat ng dugo.

Ang pangalawang RGA ay hindi serological. Sa loob nito, ang pagdirikit ng mga pulang selula ng dugo ay hindi sanhi ng

antibodies, ngunit mga espesyal na sangkap na nabuo ng mga virus. Halimbawa, ang influenza virus ay nagsasama-sama ng mga pulang selula ng dugo ng manok at mga guinea pig, polio virus - mga pulang selula ng dugo ng tupa. Ginagawang posible ng reaksyong ito na hatulan ang pagkakaroon ng isang partikular na virus sa materyal na pinag-aaralan.

Ang reaksyon ay isinasagawa sa mga test tube o sa mga espesyal na plato na may mga balon. Ang materyal na nasubok para sa pagkakaroon ng virus ay diluted na may isotonic solution mula 1:10 hanggang 1:1280; Ang 0.5 ml ng bawat pagbabanto ay halo-halong may pantay na dami ng 1-2% red blood cell suspension. Sa kontrol, ang 0.5 ml ng erythrocytes ay halo-halong may 0.5 ml ng isotonic solution. Ang mga test tube ay inilalagay sa isang termostat sa loob ng 30 minuto, at ang mga plato ay iniiwan sa temperatura ng silid sa loob ng 45 minuto.

Accounting para sa mga resulta. Sa positibong resulta reaksyon, isang sediment ng mga pulang selula ng dugo na may scalloped na mga gilid ("payong") ay lumilitaw sa ilalim ng test tube o balon, na sumasakop sa buong ilalim ng balon. Kung negatibo ang resulta, ang mga pulang selula ng dugo ay bumubuo ng isang siksik na sediment na may makinis na mga gilid ("button"). Ang parehong sediment ay dapat na nasa kontrol. Ang intensity ng reaksyon ay ipinahayag ng "+" na mga palatandaan.

Hemagglutination reaksyon

Ang titer ng virus ay ang pinakamataas na pagbabanto ng materyal kung saan nangyayari ang aglutinasyon.

Hemagglutination inhibition reaction

Ito ay isang serological reaksyon kung saan tiyak antiviral antibodies, nakikipag-ugnayan sa virus (antigen), neutralisahin ito at alisin ang kakayahang pagsamahin ang mga pulang selula ng dugo, ibig sabihin, pagbawalan ang reaksyon ng hemagglutination. Ang reaksyong ito ay nagpapahintulot sa iyo na matukoy ang uri at uri ng mga virus.

Pag-set up ng isang reaksyon. Ang 0.25 ml ng antiviral serum ay halo-halong may pantay na dami ng materyal na naglalaman ng virus. Ang halo ay inalog at inilagay sa isang termostat sa loob ng 30 minuto, pagkatapos ay idinagdag ang 0.5 ml ng 1-2% na suspensyon ng red blood cell.

Accounting para sa mga resulta. Kung ang eksperimento ay natupad nang tama, ang isang "button" ay dapat mabuo sa kontrol ng serum at erythrocytes - walang kadahilanan na agglutinating erythrocytes; sa kontrol ng antigen, isang "payong" ang nabuo - ang virus ay nagdulot ng aglutinasyon ng mga pulang selula ng dugo. Kung ang serum ay homologous sa virus na pinag-aaralan, isang "button" ang nabuo - ang serum ay na-neutralize ang virus.

Hindi direktang reaksyon ng hemagglutination

Ang indirect (passive) hemagglutination reaction (RIHA) ay batay sa katotohanan na ang mga pulang selula ng dugo, kung ang isang natutunaw na antigen ay na-adsorbed sa kanilang ibabaw, ay nakakakuha ng kakayahang mag-aglutinate kapag nakikipag-ugnayan sa mga antibodies sa adsorbed antigen.

Pag-set up ng isang reaksyon. Ang serum ay pinainit sa loob ng 30 minuto sa 56 °C, diluted nang sunud-sunod sa isang ratio na 1:10 - 1:1280 at ibinuhos sa 0.25 ml sa mga test tube o mga balon, kung saan ang 2 patak ng mga pulang selula ng dugo na may mga antigen na naka-adsorb sa mga ito ay pagkatapos. idinagdag.

Mga kontrol: isang suspensyon ng mga erythrocytes na may mga antigens na naka-adsorbed sa kanila na may malinaw na immune serum, isang suspensyon ng mga erythrocytes na may mga antigens na naka-adsorbed sa kanila na may normal na serum; isang suspensyon ng mga normal na pulang selula ng dugo na may test serum. Sa unang kontrol, dapat mangyari ang agglutination, sa pangalawa at pangatlo hindi ito dapat mangyari.

Kontrolin ang mga tanong.

1. Ano ang ipinahihiwatig ng isang positibong resulta ng pagsusuri sa X-ray sa pagitan ng mga pulang selula ng dugo at ng materyal na sinusuri para sa pagkakaroon ng virus?

2. Magkakaroon ba ng agglutination reaction ng mga pulang selula ng dugo kung ang isang virus at ang kaukulang serum nito ay idinagdag sa kanila? Ano ang pangalan ng reaksyon na nagpapakita ng hindi pangkaraniwang bagay na ito?

PRAKTIKAL NA GAWAIN Blg. 12.

Makadagdag sa reaksyon ng fixation.

Ang complement fixation reaction (FFR) ay nakabatay sa katotohanan na ang isang partikular na antigen-antibody complex ay laging nag-adsorb (nagbibigkis) ng complement sa sarili nito.

Ang reaksyong ito ay malawakang ginagamit sa pagtukoy ng mga antigen at serodiagnosis ng mga impeksiyon, lalo na ang mga sakit na dulot ng spirochetes (Wassermann reaction), rickettsia at mga virus.

Ang RKS ay isang komplikadong serological reaction. Ito ay nagsasangkot ng pandagdag at dalawang antigen-antibody system. Mahalaga, ang mga ito ay dalawang serological reaksyon.

Ang tamang pangunahing sistema ay binubuo ng isang antigen at isang antibody (kilala ang isa, ang isa ay hindi). Ang isang tiyak na halaga ng pandagdag ay idinagdag dito. Kung magkatugma ang antigen at antibody ng system na ito, magkokonekta sila at magbibigkis ng papuri. Ang resultang kumplikado ay pinong dispersed at hindi nakikita.

Ang pagbuo ng complex na ito ay nakita gamit ang pangalawang hemolytic o indicator system. Kabilang dito ang mga pulang selula ng dugo ng tupa (antigen) at ang kaukulang hemolytic serum (antibody), i.e. yari na immune complex. Sa sistemang ito, ang lysis ng mga pulang selula ng dugo ay maaari lamang mangyari sa pagkakaroon ng pandagdag. Kung ang pandagdag ay nakatali sa unang sistema, pagkatapos ay sa pangalawang sistema ay walang hemolysis, dahil walang libreng pandagdag. Ang kawalan ng hemolysis (ang mga nilalaman ng tubo ay maulap o may sediment ng mga erythrocytes sa ibaba) ay naitala bilang isang positibong resulta ng RSC.

Kung sa unang sistema ang antigen ay hindi tumutugma sa antibody, kung gayon ang immune complex ay hindi bubuo at ang pandagdag ay mananatiling libre. Nananatiling libre, ang papuri ay nakikilahok sa pangalawang sistema, na nagiging sanhi ng hemolysis, ang resulta ng RSC ay negatibo (ang mga nilalaman ng mga tubo ay transparent - "lacquered blood").

Mga bahagi, umakma sa mga reaksyon ng pag-aayos:

1. Antigen - karaniwang lysate, extract, hapten,

mas madalas na isang suspensyon ng mga microorganism.

2. Antibody - suwero ng pasyente.

3. Complement - guinea pig serum.

4. Antigen - mga erythrocytes ng tupa.

5. Antibody - hemolysin sa mga erythrocytes ng tupa.

6. Isotonic solution.

Dahil sa ang katunayan na ang RSK ay nakikilahok malaking bilang ng kumplikadong mga bahagi,

dapat muna silang i-titrate at i-react sa eksaktong dami at sa pantay na volume: 0.5 o 0.25, mas madalas na 0.2, 1.25 o 1.0 ml (ang mas malalaking volume ay nagbibigay ng mas tumpak na resulta). Ang titration ng mga bahagi ng reaksyon ay isinasagawa sa parehong dami ng eksperimento, na pinapalitan ang mga nawawalang sangkap ng isotonic solution.

Kaugnay na impormasyon:

Maghanap sa site:

Ang indirect o passive hemagglutination test (IRHA o RPHA) ay mas sensitibo at partikular kaysa sa agglutination test. Ang reaksyong ito ay ginagamit din sa dalawang direksyon.

1) Upang makita ang mga antibodies sa serum ng dugo ng pasyente, ginagamit ang mga diagnostic ng erythrocyte, kung saan ang antigen ay na-adsorbed sa ibabaw ng mga erythrocyte na ginagamot ng tannin. Kaugnay ng reaksyong ito, mas madalas na ginagamit ang terminong RPGA.

Ang test serum ay diluted sa mga balon ng mga plastic plate at idinagdag ang erythrocyte diagnosticum. Kung positibo ang reaksyon, lumilitaw ang isang manipis na pelikula sa kahabaan ng mga dingding ng butas sa anyo ng isang "payong na puntas"; negatibong reaksyon- isang siksik na sediment ng mga erythrocytes sa anyo ng isang "button".

2) Upang makita ang mga toxin at bacterial antigens sa materyal na pinag-aaralan, ginagamit ang mga diagnostic ng antibody erythrocyte, na nakuha sa pamamagitan ng adsorption ng mga antibodies sa erythrocytes. Kaugnay ng reaksyong ito, mas madalas na ginagamit ang terminong RNGA. Halimbawa, sa tulong ng antibody diagnostics, ang salot na bacillus antigen, diphtheria exotoxin, at botulinum exotoxin ay nakita.

Ano ang isang erythrocyte diagnosticum? Ano ang isang antibody erythrocyte diagnosticum?

Ang mga erythrocyte diagnosticum ay mga pulang selula ng dugo (ginagamot sa tannin o formalin) na may mga antigen na nakuha mula sa bakterya na na-adsorb sa mga ito, at ginagamit sa RPHA (passive hemagglutination reactions). Sa kaso kapag ang RPGA ay ginagamit upang makita ang antigen sa mga pagtatago ng mga pasyente, sa mga tisyu, atbp., ang "antibody diagnosticums" ay ginagamit, ibig sabihin, ang mga pulang selula ng dugo ay na-sensitize sa mga antibodies.

Sa RNGA, ang mga serum antibodies ng dugo ay natukoy gamit ang isang antigenic erythrocyte diagnosticum, na mga erythrocytes na may mga antigen na naka-adsorbed sa kanila.

Pamamaraan para sa pag-set up ng mga reaksyon. Reaksyon ng coagglutination.

- pag-aayos ng mga pulang selula ng dugo na may formaldehyde o glutaric o acrylic aldehydes. Ang mga naturang ginagamot na pulang selula ng dugo ay nakaimbak nang mahabang panahon. Mas madalas, ang mga erythrocytes mula sa tupa, tao, manok, atbp ay ginagamit para sa layuning ito;
— paggamot ng mga nakapirming erythrocytes na may solusyon sa tannin. Bilang isang resulta, ang mga pulang selula ng dugo ay nakakakuha ng kakayahang irreversibly adsorb protina (mga virus at antibodies) sa kanilang ibabaw;
- sensitization ng tanized erythrocytes sa pamamagitan ng mga virus o antibodies.

Coagglutination reaction (CAR)

Ang reaksyon ng coagglutination ay ginagamit upang matukoy ang mga antigen gamit ang mga antibodies na naka-adsorb sa protina A ng mga staphylococcal cells (antibody diagnosticum).
Ang Protein A ay may kaugnayan sa Fc fragment ng mga immunoglobulin, samakatuwid ang naturang bacteria na ginagamot ng immune diagnostic serum na hindi partikular na nag-adsorb ng serum antibodies, na pagkatapos ay nakikipag-ugnayan sa mga aktibong sentro na may kaukulang microbes na nakahiwalay sa mga pasyente. Bilang resulta ng coagglutination, ang mga natuklap ay nabuo na binubuo ng staphylococci, diagnostic serum antibodies at ang nakitang microbe.

Agglutinating serum: kung ano ang nilalaman nito; paano sila nakukuha, para saan ang mga ito ginagamit; Ano ang titer ng agglutinating serum?

Ang aglutinating serum ay nakuha sa pamamagitan ng pagbabakuna ng mga kuneho (intravenously, subcutaneously o intraperitoneally) na may suspensyon ng mga napatay na bakterya, na nagsisimula sa isang dosis na 200 milyon, pagkatapos ay 500 milyon, 1 bilyon, 2 bilyong microbial na katawan sa 1 ml, sa pagitan ng 5 araw. 7-8 araw pagkatapos ng huling pagbabakuna, kukuha ng dugo at tinutukoy ang titer ng antibody.

Ang titer ng isang agglutinating serum ay ang pinakamataas na dilution ng serum kung saan nangyayari ang agglutination sa kaukulang microorganism.

Ang agglutinating sera ay ginagamit upang makilala ang mga mikrobyo sa isang buong-scale na reaksyon ng agglutination.

Hemagglutination reaction (HRA)

Kung ang microorganism na pinag-aaralan ay pinagsasama-sama ng serum sa titer o sa kalahati ng halaga ng titer, maaari itong ituring na kabilang sa mga species na ang pangalan ay ipinahiwatig sa label ng ampoule.

Ano ang mga pagkakaiba sa pagitan ng polyvalent at monovalent (monoreceptor) agglutinating sera; Bakit ang pagbabakuna ng isang kuneho na may microbes ng isang uri ay gumagawa ng serum na naglalaman ng mga antibodies sa ilang antigens?

Ang Monoreceptor sera ay sera na naglalaman ng mga antibodies sa isang antigen lamang, at polyvalent sera na nagbibigay ng mga reaksiyong aglutinasyon sa dalawa o tatlong magkakaugnay na bakterya na may isang karaniwang antigen. Ang aglutinating sera ay ginagamit upang makilala ang mga microorganism sa isang agglutination reaction. Ang kawalan ng naturang sera ay kaya nilang magbigay ng mga reaksyon ng agglutination ng grupo, dahil naglalaman sila ng mga antibodies sa bakterya na may mga karaniwang antigens.

Hemagglutination reaksyon. Paglalarawan at Aplikasyon

Ito ay batay sa katotohanan na ang mga pulang selula ng dugo, kung saan ang mga antigen ay dating adsorbed, ay nakakakuha ng kakayahang mag-aglutinate sa pagkakaroon ng homologous sera (antibodies).

Sa kasong ito, ang mga pulang selula ng dugo ay kumikilos bilang mga carrier na may mga tiyak na determinant, ang agglutination na nangyayari bilang isang resulta ng reaksyon ng antigen + antibody.

Ang mga pulang selula ng dugo sa ibabaw kung saan ang mga antigen ay mahigpit na nakakabit ay tinatawag na erythrocyte antigen diagnosticum, o mga erythrocyte na sensitized sa antigen.

Ang isa pang uri ng RNGA - ang mga antibodies ay na-adsorbed sa ibabaw ng mga erythrocytes at ang kanilang kasunod na agglutination ay nangyayari sa pagkakaroon ng isang homologous antigen. Sa kasong ito, ang mga naturang erythrocyte ay tinatawag na erythrocyte antibody diagnosticum, o mga erythrocyte na na-sensitize ng mga antibodies.

Batay sa dalawang pangunahing pamamaraang pamamaraang ito, maraming pagbabago ng RNGA ang binuo at ginamit. Kaya, ang mga maliliit na karaniwang latex na particle ay ginagamit bilang mga carrier. Sa kasong ito, ang reaksyon ay tinatawag na latex agglutination reaction (RLA) o ginagamit Staphylococcus aureus- reaksyon ng coagglutination, atbp. Karaniwan, ang mga erythrocyte diagnosticum ay inihahanda sa mga negosyo sa industriya ng biyolohikal, at ang pangunahing karanasan ng RNGA ay isinasagawa sa mga diagnostic laboratories.

Ang paghahanda ng erythrocyte diagnosticum ay kinabibilangan ng mga sumusunod na hakbang:

• pag-aayos ng mga pulang selula ng dugo na may formaldehyde o glutaric o acrylic aldehydes. Ang mga naturang ginagamot na pulang selula ng dugo ay nakaimbak nang mahabang panahon. Mas madalas, ang mga erythrocytes mula sa tupa, tao, manok, atbp ay ginagamit para sa layuning ito;
• paggamot ng mga nakapirming erythrocytes na may solusyon sa tannin. Bilang isang resulta, ang mga pulang selula ng dugo ay nakakakuha ng kakayahang irreversibly adsorb protina (mga virus at antibodies) sa kanilang ibabaw;
• sensitization ng tanized erythrocytes sa pamamagitan ng mga virus o antibodies.

Dapat pansinin na ang mga pamamaraan para sa paghahanda ng erythrocyte diagnosticums para sa mga impeksyon sa viral magkaiba.

Ang pamamaraan para sa pagsasagawa ng RNGA upang matukoy at matukoy ang titer ng antibody ay ang mga sumusunod:

• pantay na dosis ng mga erythrocytes na na-sensitize sa antigen ay idinagdag sa sunud-sunod na 2-tiklop na dilution ng serum;
• ang timpla ay naiwan sa loob ng 2-3 oras sa temperatura ng silid o para sa 16-18 na oras sa 4 °C;
• isaalang-alang ang mga resulta. Kung ang serum ay naglalaman ng mga antibodies sa virus kung saan ang mga pulang selula ng dugo ay naging sensitibo, ang hemagglutination ay sinusunod, na sinusuri sa mga krus.

Ang titer ng antibody sa serum ay itinuturing na pinakamataas na serum dilution na nagbibigay pa rin ng hemagglutination ng hindi bababa sa dalawang krus.

Ang RNGA ay sinamahan ng lahat ng nauugnay na kontrol. Karaniwan ang reaksyon ay isinasagawa gamit ang micromethod.

Binibigyang-daan ka ng RNGA na lutasin ang mga sumusunod na problema sa diagnostic:

• tuklasin ang mga antibodies at matukoy ang kanilang titer sa serum ng dugo gamit ang isang kilalang erythrocyte antigen diagnosticum;
• tuklasin at kilalanin ang isang hindi kilalang virus gamit ang isang kilalang erythrocyte antibody diagnostic.

Mga kalamangan ng RNGA: mataas na sensitivity, pagiging simple ng diskarte sa paglalagay at bilis ng pagtugon. Gayunpaman, mahalagang tandaan na ang mga malalaking kahirapan ay lumitaw sa paghahanda ng matatag na mga diagnostic ng erythrocyte (mahusay na pagtitiwala sa kadalisayan ng mga sangkap na ginamit, ang pangangailangan na pumili ng isang paraan ng pag-aayos, tanization at sensitization ng mga erythrocytes para sa bawat uri ng virus).

Kung makakita ka ng error, mangyaring pumili ng isang piraso ng teksto at pindutin ang Ctrl+Enter.

Sa pakikipag-ugnayan sa

INDIRECT HEMAGGLUTINATION REACTION, RNGA
(Indirect hemagglutination test)

Isang paraan para sa pag-detect ng mga antigen at antibodies, batay sa kakayahan ng mga pulang selula ng dugo, sa ibabaw kung saan ang mga antigen o antibodies ay pre-adsorbed, upang magsama-sama sa pagkakaroon ng homologous sera o kaukulang antigens.

Kapag nakita ang mga antigen, ang reaksyon ay ipinapahiwatig ng reverse passive hemagglutination test, at kapag natukoy ang antibodies, sa pamamagitan ng passive hemagglutination test. Natagpuan ng RNGA ang malawak na aplikasyon para sa pagtukoy ng mga serological marker ng impeksyon sa hepatitis B virus, lalo na ang HBsAg at mga antibodies dito.

Kasalukuyang binuo iba't ibang pamamaraan produksyon ng erythrocyte diagnosticums, naiiba sa mga paraan ng sensitization ng erythrocytes (gamit ang tannin, glutaraldehyde, chromium chloride, rivanol, atbp.), ang kanilang mga species (tao, tupa, manok, pabo, atbp.), mga pagpipilian para sa pagtatanghal ng reaksyon ( sa microtiter plates, test tubes, capillaries, atbp.) at pagtatala ng mga resulta (visual at instrumental). Ang mga erythrocyte diagnostic kit para sa pag-detect ng HBsAg at anti-HBs ay ginawa ng maraming negosyo at kumpanya sa ating bansa at sa ibang bansa.

Mas madalas, ang RNGA ay isinasagawa sa mga microtiter plate, kung saan ang mga dilution ng test serum at control sample ay paunang inihanda. Matapos idagdag ang erythrocyte diagnosticum at incubation, ang mga resulta ng reaksyon ay naitala. Ang mga sample kung saan nagaganap ang agglutination ng mga pulang selula ng dugo, na mukhang baligtad na "payong", ay itinuturing na positibo. Kung ang reaksyon ay negatibo, ang mga pulang selula ng dugo ay tumira sa ilalim ng butas sa anyo ng isang singsing o disk.

Upang kumpirmahin ang pagtitiyak ng mga resultang nakuha, ang reaksyon ay isinasagawa kapwa gamit ang isang "eksperimental" na erythrocyte diagnosticum (ibig sabihin, mga erythrocytes na na-sensitize sa antigen o antibodies) at may isang "control" diagnosticum (ibig sabihin, mga erythrocyte na hindi sensitized sa antigen o antibodies). Ang pagkakaroon ng isang positibong reaksyon na may "kontrol" na diagnostic na gamot ay nagpapahiwatig ng isang maling positibong reaksyon. Upang maalis ang mga hindi tiyak na reaksyon, ang test serum ay ginagamot sa mga hindi sensitibong erythrocytes. Ang isang kinakailangan para sa pagsasagawa ng RNGA ay isang reaksyon ng neutralisasyon, ibig sabihin, pagsubok sa pagkumpirma.

Kung ikukumpara sa mga pamamaraan tulad ng RPG, VIEF at RSK, ang hindi direktang reaksyon ng hemagglutination ay may mas mataas na sensitivity (200 - 400 beses). Kaya, ang HBsAg sa RPGA ay maaaring makita sa mga konsentrasyon ng 6-10 ng / ml. Ang pagiging simple ng reaksyon at bilis (20 - 30 minuto) ay natukoy ang malawakang paggamit nito ang pamamaraang ito sa serbisyo ng pagsasalin ng dugo upang matukoy ang HBsAg.

Bilang karagdagan sa mga diagnostic ng erythrocyte para sa pagtuklas ng HBsAg at anti-HBs, ang mga diagnostic na paghahanda ay binuo din para sa pagkakakilanlan anti-HBc, anti-HBc class na IgM (solid-phase version), HBeAg, hepatitis A virus antigen at mga antibodies dito, gayunpaman, lahat ng mga ito ay hindi nakahanap ng aplikasyon sa praktikal na pangangalagang pangkalusugan.

Indirect hemagglutination reaction (RIHA).

Ang RIGA ay ginagamit sa dalawang bersyon: na may mga kilalang antibodies upang makita ang mga antibodies na may mga kilalang antibodies upang makita ang mga antibodies. Ang reaksyong ito ay tiyak, at ito ay ginagamit upang masuri ang mga sakit na dulot ng bacteria at rickettsia. Upang maisagawa ang RIGA, ginagamit ang mga diagnostic ng erythrocyte, na inihanda sa pamamagitan ng adsorption ng AG o AT sa mga erythrocytes, depende sa layunin ng pag-aaral (Larawan 10.3). Sa mga positibong kaso, ang antas ng erythrocyte agglutination ay minarkahan ng mga plus. Sinusuri ng apat na plus ang isang reaksyon na may anyo ng isang manipis na pelikula ng malagkit na pulang selula ng dugo (payong) na sumasaklaw sa ilalim ng test tube; ang pagkakaroon ng isang pelikula na may scalloped lace na mga gilid ay ipinahiwatig ng dalawang plus. Ang titer ay itinuturing na pinakamataas na pagbabanto ng materyal na pagsubok na nagdulot ng pagsasama-sama ng mga erythrocytes sa pamamagitan ng dalawang plus.

kanin. 10.3.

1 - pulang selula ng dugo, 2 - erythrocyte AG, 3 - conjugated AG, 4-AT

RHA at hemagglutination inhibition reaction (HAI).

Gaya ng nabanggit na, ang RHA ay nakabatay sa kakayahan ng mga erythrocytes na magkadikit kapag ang ilang antigens ay na-adsorbed sa kanila. Ang allantoic at amniotic fluid, isang suspensyon ng chorion-allantoic membranes ng mga embryo ng manok, mga suspensyon at mga extract mula sa mga kultura o organo ng mga hayop na nahawaan ng mga virus, at ang katutubong nakakahawang materyal ay ginagamit bilang materyal sa pagsubok para sa hemagglutination. Ang RGA ay hindi isang serological na reaksyon, dahil ito ay nangyayari nang walang paglahok ng immune serum at ginagamit upang piliin ang gumaganang pagbabanto ng isang antigen para sa pagtatanghal ng isang RGA o ang pagkakaroon ng isang antigen (virus) sa materyal ng pagsubok (halimbawa, para sa trangkaso. ). Gumagamit ang reaksyon ng mga pulang selula ng dugo mula sa mga hayop, ibon, at tao na may pangkat ng dugo I (0). Upang mag-set up ng tinatayang RGA, ang isang patak ng 5% na suspensyon ng mga erythrocytes at isang patak ng materyal na pansubok ay inilalapat sa isang glass slide at pinaghalo nang lubusan. Kung positibo ang resulta, pagkatapos ng 1-2 minuto ang hitsura ng flocculent agglutination ng mga erythrocytes ay sinusunod sa macroscopically. Upang i-set up ang RGA sa isang nakabukang hilera sa mga balon ng mga polystyrene plate, maghanda ng dobleng pagtaas ng mga dilution ng materyal sa pagsubok bawat solusyon sa asin sa dami ng 0.5 ml. Ang 0.5 ml ng isang 0.25-1% na suspensyon ng mga pulang selula ng dugo ay idinagdag sa lahat ng mga tubo ng pagsubok. Ang mga resulta ay isinasaalang-alang pagkatapos ng kumpletong sedimentation ng mga erythrocytes sa kontrol (mga pulang selula ng dugo + solusyon sa asin). Ang reaksyon ay isinasaalang-alang ng likas na katangian ng erythrocyte sediment. Sa mga positibong kaso, ang antas ng aglutinasyon ay minarkahan ng mga plus. Ang isang reaksyon na mukhang isang manipis na pelikula ng malagkit na mga pulang selula ng dugo na sumasaklaw sa ilalim ng isang test tube (payong) ay tinasa na may apat na plus; isang reaksyon na may mga puwang sa pelikula ay minarkahan ng tatlong plus; ang pagkakaroon ng isang pelikula na may scalloped lacy Ang mga gilid ng malagkit na pulang selula ng dugo ay minarkahan ng dalawang plus; isang flocculent sediment ng mga pulang selula ng dugo na napapalibutan ng isang zone ng agglutinated lumps erythrocytes, ay tumutugma sa isang plus. Ang isang malinaw na tinukoy na erythrocyte sediment, na hindi makilala mula sa kontrol, ay nagpapahiwatig ng kawalan ng agglutination. Ang titer ay itinuturing na pinakamataas na pagbabanto ng materyal na pagsubok na nagdulot ng pagsasama-sama ng mga erythrocytes sa pamamagitan ng dalawang plus. Kung positibo ang resulta ng RGA, ipagpapatuloy ang pag-aaral, na tinutukoy ang uri ng nakahiwalay na virus gamit ang RT GA na may sera na partikular sa uri. Ang RTGA ay batay sa pag-aari ng antiserum upang sugpuin ang viral hemagglutination, dahil ang virus na na-neutralize ng mga partikular na antibodies ay nawawalan ng kakayahang pagsama-samahin ang mga pulang selula ng dugo. Para sa pansamantalang pag-type ng mga virus, ginagamit ang droplet method sa salamin. Upang tiyak na maitatag ang uri ng nakahiwalay na virus at ma-titrate ang mga antibodies sa sera, isang pinalawak na X-ray test ang inilalagay sa mga test tube o mga balon. Para sa layuning ito, ang double dilutions ng sera ay inihanda sa physiological solution at ibinibigay sa 0.25 ml. Sa serum dilutions magdagdag ng isang patak ng materyal na naglalaman ng virus at isang patak ng 1% na suspensyon ng mga pulang selula ng dugo. Kapag gumagamit ng RTGA upang matukoy ang uri ng virus, ginagamit ang sera na partikular sa uri, na idinagdag sa isang pantay na dami ng gumaganang pagbabanto ng AG. Ang uri ng nakahiwalay na virus ay tinutukoy ng partikular na immune serum na nagpakita ng pinakamataas na titer ng antibody sa virus na ito. Ang RGA at RTGA ay malawakang ginagamit para sa pagsusuri ng mga impeksyon sa viral ( tick-borne encephalitis, influenza, atbp.) upang matukoy ang mga partikular na antibodies at makilala ang maraming mga virus sa pamamagitan ng kanilang mga antibodies.

Indirect hemagglutination reaction (IRHA)

Ang paggamit ng mga sorbed diagnostic na gamot ay batay sa prinsipyo ng immunological na pagkilala sa mga istruktura sa ibabaw, na patuloy na natanto sa kalikasan. Mula sa puntong ito, walang mga pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng paggamit ng, halimbawa, isang microbial cell o isang artipisyal na carrier na puno ng antigen (antibodies). Ang iba't ibang mga carrier ay ginagamit bilang batayan para sa mga sorbed na gamot - microbial cells, erythrocytes, latex, bentonin, cholesterol, Sephadex, dermatol, Naka-activate na carbon, fungal spores, atbp.

Matapos ang gawain ng A.T. Kravchenko (1945), ang mga erythrocyte na nawalan ng kakayahang mabuhay at naayos na may iba't ibang mga kemikal na reagents ay naging pinakalaganap bilang isang carrier ng antigens o antibodies. Batay sa prinsipyo ng paggamit ng mga erythrocytes (parehong native at fixed) bilang isang antigen carrier, ang hindi direktang (passive) na reaksyon ng hemagglutination ay naging laganap.

Ang panukala na gamitin ang indirect hemagglutination reaction (IRHA) para sa mga layuning diagnostic ay lumitaw batay sa dati nang binuo na kaalaman tungkol sa mataas na aktibidad ng sorption ng erythrocytes. Kung ikukumpara sa maraming iba pang mga carrier ng antigens at antibodies, ang mga erythrocytes ay may ilang mga pakinabang sa hindi direktang reaksyon ng hemagglutination. Una, sa isotonic mga solusyon sa asin bumubuo sila ng isang medyo matatag na pagdirikit at hindi tumira sa likod maikling panahon. Pangalawa, ang mga pulang selula ng dugo ng parehong species ng hayop ay magkapareho sa laki. At sa wakas, ito ay medyo madali para sa mga erythrocytes na ilakip ang iba't ibang serologically active component nang direkta o bilang isang resulta ng espesyal na pagproseso.

Ang paglikha ng mga diagnostic ng erythrocyte mula sa mga nagpapatatag na erythrocytes ay ginagawang posible na malampasan ang mga paghihirap na lumitaw kapag gumagamit ng mga katutubong erythrocytes.

Kapag nag-aaral ng mga erythrocytes na ginagamot sa iba't ibang mga sangkap ng pag-aayos, ang ilan sa kanilang mga karaniwang katangian ay itinatag:

Sa mga tuntunin ng morpolohiya, halos hindi sila naiiba sa mga sariwa;

Huwag mag-hemolyze sa mga hipotonik na solusyon, sa tubig at pagkatapos ng pagyeyelo-pagtunaw;

Maaaring i-freeze tuyo;

Ang kanilang mga istraktura sa ibabaw ay nagpapanatili ng kakayahang mabago ng kemikal (halimbawa, tannin, diazo compound) at tumutugon sa mga antigen at antibodies.

Ang pangunahing criterion para sa kalidad ng mga fixed erythrocytes ay ang posibilidad na gamitin ang mga ito upang makakuha ng mga sensitized na gamot sa kawalan ng nonspecific na gluing sa stabilizing liquids.

Ang paghahanda ng ibabaw ng mga erythrocytes upang madagdagan ang kapasidad ng sorption para sa mga antigens ay mahalaga sa disenyo ng mga diagnostic na gamot. Ang paggamot sa mga pulang selula ng dugo na may tannin ay naging lalong laganap.

Sa ilalim ng impluwensya nito nagbabago sila mga katangian ng antigenic erythrocytes (permeability, sedimentation rate), ang kanilang paglaban sa hemolytic effect ng ilang mga fatty acid. Gayunpaman, ang pangunahing bagay ay nakamit - ang mga tanized erythrocytes ay may mas malaking kapasidad ng pagsipsip ng mga protina, na kasalukuyang malawakang ginagamit sa paggawa ng mataas na kalidad na antigen at antibody diagnostics.

Kasama ng mga tanning erythrocytes, ang mga kemikal na reagents tulad ng bromelain, tryopsin, potassium periodate, na nagbabago rin sa mga erythrocyte membrane, ay ginagamit upang makagawa ng mga erythrocyte diagnosticum at maghanda ng mga carrier ng antigen.

Pagkatapos ihanda ang ibabaw ng mga pulang selula ng dugo, ang pinaka mahalagang proseso- proseso ng hemosensitization - huling yugto paggawa ng mga diagnostic ng erythrocyte.

Upang palakasin ang koneksyon sa pagitan ng carrier at antigen, ginagamit ang iba't ibang mga conjugating substance - bisdiazobenzidine, difluorodinitrobenzine, cyanogen chloride, cadmium chloride at acetate, bromine chloride, formaldehyde, glutaraldehyde, cyanogen bromide, rivanol, amidol, atbp.

Ang paggamit ng mga conjugating substance ay tumutulong upang maalis ang mga disadvantages na tanized erythrocytes, na ginagamit para sa sensitization nang walang conjugating substance, mayroon.

Ang pinakamalawak na ginagamit na conjugating substance ay chromium chloride, glutaraldehyde, black diazol C, at amidol. Ang proseso ng sensitization na may chromium chloride ay nangyayari nang napakabilis - mula 4 hanggang 10 minuto, na umaakit sa atensyon ng mga mananaliksik. Sa kasong ito, ginagamit ang mga konsentrasyon ng chromium chloride mula 0.05 hanggang 2%, ang pH ay hindi mas mababa sa 5.0 sa temperatura ng halo ng reaksyon na 20-250 C. Sa proseso ng sensitization na may chromium chloride, ang mga carboxyl group ng erythrocyte membrane proteins ay isinaaktibo. . Bilang resulta, nabuo ang isang covalent bond sa pagitan ng lamad ng pulang selula ng dugo at sensitin.

Ang hindi direktang reaksyon ng hemagglutination ay lubos na tiyak, dahil ang pagdirikit ng mga erythrocytes ay nangyayari bilang isang resulta ng pakikipag-ugnayan ng antigen sa mga antibodies na na-adsorbed sa mga erythrocytes. Ang natatanging tampok nito ay ang mataas na sensitivity nito: nakakakita ito ng 0.02-0.05 μg ng antibody protein. Sa mga tuntunin ng pagiging sensitibo, ito ay higit na nakahihigit sa mga reaksyon ng immunodiffusion, immunofluorescence, radial immunodiffusion, complement fixation, at neutralization. Ang RNGA ay hindi gaanong sensitibo kaysa sa mga pamamaraan ng radioimmunoelectrophoresis, pagtukoy ng dami ng protina ng radioactive antibodies sa isang immunosorbent, at enzyme immunoassay.

Kasama sa mga bentahe ng RNGA ang medyo mataas na reproducibility, kadalian ng pagpapatupad, at ang pangangailangan para sa kaunting dami ng mga sangkap, lalo na kapag gumagamit ng micromethod.

RNGA sa mga nakaraang taon ay natagpuan ang malawakang paggamit sa pagsusuri ng nakakahawang rhinotracheitis, pagtatae, impeksyon sa adenovirus, mga impeksyon sa rota at coronavirus, parainfluenza - 3 at respiratory syncytial infection.

Nagbibigay kami ng halimbawa ng paggawa at paggamit ng erythrocyte diagnosticum para sa pag-detect ng mga antibodies sa rota at mga impeksyon sa coronavirus.

Ang paraan para sa paghahanda ng mga diagnostic ng antibody para sa pagtukoy ng mga rota at coronavirus antigens sa RNGA ay ang mga sumusunod: pagkuha ng suspensyon ng mga erythrocytes; pag-aayos ng kanilang mga acroleins; tanization, na nagpapahintulot sa pagkuha ng matatag na pagsipsip ng kinakailangang protina sa mga pulang selula ng dugo; sensitization ng tanized erythrocytes na may immunoglobulins; pagpapasiya ng pagtitiyak ng inihandang diagnosticum. Ang paghahanda ng isang suspensyon ng mga erythrocytes ay isinasagawa sa pamamagitan ng pagkolekta ng dugo ng isang klinikal na malusog na tupa sa isang prasko na may mga kuwintas na salamin. Pagkatapos ng defibrinating ng dugo, ang mga pulang selula ng dugo ay dapat hugasan ng 3-5 beses na may isotonic (0.9%) na solusyon ng sodium chloride sa pamamagitan ng sentripugasyon sa loob ng 15-20 minuto sa 400 g.

Upang patatagin ang mga pulang selula ng dugo, ginagamot sila ng acrolein. Tulad ng nalalaman, ang pagkilos nito ay medyo mas banayad kaysa sa formaldehyde, at nagbibigay ng katatagan at higit pa mataas na aktibidad pulang selula ng dugo Upang gawin ito, ang pantay na dami ng isang 10% na suspensyon ng mga erythrocytes ay halo-halong may 0.2% na solusyon ng acrolein na inihanda sa phosphate buffer solution (PBS) na may pH 7.2. Ang resultang suspensyon ay pinananatili sa loob ng 30 minuto sa 37°C, hinahalo nang lubusan, na sinusundan ng pag-alis ng acrolein sa pamamagitan ng paulit-ulit na sentripugasyon sa loob ng 5 minuto sa 600-800g hanggang sa ganap na mawala ang partikular na amoy. Ang bentahe ng mga pulang selula ng dugo na inihanda sa ganitong paraan ay ang mga ito ay nakaimbak para magamit sa hinaharap at maaari matagal na panahon napanatili nang hindi sumasailalim sa hemolysis.

Kasunod nito, ang mga nagpapatatag na pulang selula ng dugo sa isang 10% na konsentrasyon ay pinananatili sa 2-4 °C sa PBS na may pH na 7.2 sa loob ng dalawang buwan.

Upang madagdagan ang kapasidad ng sorption at sedimentation ng mga pulang selula ng dugo, kinakailangan na i-tannize ang mga ito sa pamamagitan ng paghahalo ng pantay na bahagi ng isang 10% na suspensyon ng mga hugasan na pulang selula ng dugo at isang solusyon ng tannin sa PBS at pH 7.2 sa isang dilution na 1:30,000. Ang timpla ay lubusan na halo-halong at pinananatili sa 370 C sa loob ng 15 minuto, pagkatapos nito ang mga pulang selula ng dugo ay lubusang hugasan mula sa tannin nang dalawang beses sa PBS na may pH na 7.2 at tatlong beses na may isotonic sodium chloride solution na may pH na 7.2-7.4.

Ang pinakamainam na panahon para sa paggarantiya ng pagtanggap ng mataas na kalidad na erythrocyte diagnosticum ay ang kanilang sensitization sa loob ng 24-48 na oras pagkatapos ng kanilang paggamot na may tannin.

Sa proseso ng pagmamanupaktura ng diagnosticums, 0.3% phenolysed isotonic sodium chloride solution na may 0.1% normal na rabbit o horse serum, na dating inactivated sa 56°C sa loob ng 30 minuto at na-adsorb ng normal na sheep erythrocytes, ay ginagamit bilang solvent at preservative. 37°C. sa loob ng 30 minuto.

Ang sensitization ng tanized erythrocytes ay dapat isagawa gamit ang hyperimmune serum, ayon sa pagkakabanggit, laban sa rota at malalaking coronaviruses baka(ginawa sa All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine na ipinangalan kay Y.R. Kovalenko). Sa kasong ito, ang sensitizing dose (konsentrasyon ng protina) ng anti-rotavirus immune serum ay 280 μg/ml, at ang immune serum sa coronavirus ay 260 μg/ml.

Isinasagawa ang sensitization sa pamamagitan ng paghahalo ng pantay na dami ng tanned erythrocytes at immune serum na pinainit nang 30 minuto sa 560C sa pinakamainam na konsentrasyon. Bilang karagdagan, magdagdag ng 3 bahagi ng isotonic sodium chloride solution na may pH na 7.2 at 5 bahagi ng 0.1% chromium chloride solution. Ang pinaghalong, paminsan-minsan na pagpapakilos, ay pinananatili sa temperatura ng silid sa loob ng 5 minuto. Pagkatapos ng tinukoy na oras, ang halo ay lubusan na hugasan gamit ang PBS na may pH 7.2, at pagkatapos ay ang inihandang erythrocyte diagnosticums ay muling sinuspinde sa isang preservative sa isang 1% na konsentrasyon. Ang inihandang diagnosticum ay nagpapanatili ng mga pangunahing katangian nito sa loob ng 8 buwan, kung ito ay nakaimbak sa 4°C.

Sa lahat ng mga yugto ng paggawa ng diagnosticum, sinusubaybayan ang self-agglutination. Ang pagiging tiyak ng mga inihandang diagnosticum ay tinutukoy sa pamamagitan ng pagtatanghal ng RNGA, kung saan ang mga karaniwang diagnosticum ng mga virus ng IRT, AI - 3, adenovirus, viral diarrhea, pati na rin ang rota at coronavirus antigens ay ginamit bilang antigens.

Kapag nagsasagawa ng RNGA, inihahanda ang sunud-sunod na double dilution ng test virus-containing material (20-50% suspension ng fecal samples), at pagkatapos ay idinagdag ang pantay na dami ng erythrocyte diagnostic fluid sa bawat balon. Ang mga plato ay dapat na inalog nang lubusan ng maraming beses at iwanan sa temperatura ng silid hanggang sa ganap na manirahan ang mga erythrocytes sa kontrol. Index positibong reaksyon- agglutination ng erythrocyte diagnosticum na may agglutination intensity na 2+ sa titer na 1:4 at mas mataas.

Passive hemagglutination reaction)

isang paraan para sa pag-detect at pagtukoy ng mga antigen o antibodies, batay sa hindi pangkaraniwang bagay ng agglutination ng mga pulang selula ng dugo na nangyayari sa kanilang presensya, sa ibabaw kung saan ang kaukulang mga tiyak o antigens ay dating na-adsorbed.

1. Maliit na medical encyclopedia. - M.: Ensiklopedya sa medisina. 1991-96 2. Una Pangangalaga sa kalusugan. - M.: Great Russian Encyclopedia. 1994 3. Encyclopedic Dictionary mga terminong medikal. - M.: Encyclopedia ng Sobyet. - 1982-1984.

Tingnan kung ano ang "Indirect hemagglutination reaction" sa iba pang mga diksyunaryo:

hindi direktang reaksyon ng hemagglutination- RNGA Laboratory test gamit ang erythrocyte diagnosticums. [English-Russian glossary ng mga pangunahing termino sa bakuna at pagbabakuna. World Health Organization, 2009] Mga Paksa pagbabakuna, pagbabakuna Mga kasingkahulugan RNGA EN... ... Gabay ng Teknikal na Tagasalin

- (RNHA; kasingkahulugan para sa passive hemagglutination reaction) isang paraan para sa pagtuklas at pagkilala ng mga antigens o antibodies, batay sa hindi pangkaraniwang bagay ng agglutination ng mga erythrocytes na nangyayari sa kanilang presensya, sa ibabaw kung saan sila ay dating na-adsorbed... .. . Malaki medikal na diksyunaryo

- (RPHA) tingnan ang Indirect hemagglutination reaction... Malaking medikal na diksyunaryo

Ang pahinang ito ay isang glossary. # A... Wikipedia

Mga pangunahing abbreviation na pinagtibay sa Veterinary Encyclopedic Dictionary- a., aa, artena, arteriae aa ana (pantay) USSR Academy of Medical Sciences Academy Siyensya Medikal USSR Academy of Sciences ng USSR Academy of Sciences ng USSR Bac. Bacillus Bact. Bacterium BSSR Byelorussian SSR siglo, siglo siglo, siglo v., vv. vena, venae VASKHNIL All-Union Order of Lenin at... ...

Ang terminong ito ay may iba pang kahulugan, tingnan ang Salot. Distemper ng mga carnivore (sakit ng Kare) talamak o subacute na nakakahawa sakit na viral, ipinakikita ng lagnat, pamamaga ng catarrhal ng mga mucous membrane, mga sugat sa balat, gitnang ... ... Wikipedia

- (renes) isang ipinares na excretory at endocrine organ na kumokontrol sa kemikal na homeostasis ng katawan sa pamamagitan ng paggana ng pagbuo ng ihi. ANATOMICAL PHYSIOLOGICAL SKETCH Ang mga bato ay matatagpuan sa retroperitoneal space (Retroperitoneal space) sa... ... Ensiklopedya sa medisina

I (trichinellosis; kasingkahulugan: trichinosis, "puffy") helminthiasis mula sa pangkat ng mga nematodes, na nailalarawan sa lagnat, myalgia, pamamaga ng mukha, mga pantal sa balat, eosinophilia ng dugo, at sa malalang kaso, mga sugat lamang loob at sentral...... Ensiklopedya sa medisina

- (nematodoses) helminthiases sanhi ng nematodes, roundworms ng klase ng Nematoda. Sa iba pang helminthiases, ang N. ay mayroon pinakamataas na halaga sa patolohiya ng tao, karamihan sa kanila ay geohelminthiasis (tingnan ang Helminthiasis); pag-unlad ng kanilang mga itlog o larvae... ... Ensiklopedya sa medisina

nakakahawang epididymitis- Bigas. 1. Paglaki ng kaliwang testis sa isang tupa na may nakakahawang epididymitis. kanin. 1. Paglaki ng kaliwang testis sa isang tupa na may nakakahawang epididymitis. nakakahawang epididymitis ng tupa (Epididymitis infectiosa arietum), talamak na nakakahawa... ... Veterinary encyclopedic dictionary

Tingnan ang Indirect hemagglutination reaction... Malaking medikal na diksyunaryo