الصفحة الرئيسية → التحليلات → الطريقة المناعية → تفاعلات التراص الدموي (الطريقة المناعية)

تفاعلات التراصتعتمد على تفاعل الكاشف (الأجسام المضادة) مع المستضدات الموجودة على سطح الخلايا أو الجزيئات الأجنبية. ونتيجة لذلك تتشكل كتل كبيرة تترسب ويمكن رؤيتها حتى بالعين المجردة. وبهذه الطريقة يتم تحديد فصيلة الدم وفقًا لنظام ABO، ووجود عامل Rh فيها، وما إلى ذلك. وهذه طريقة تشخيصية أكثر حساسية مقارنة بتفاعلات الترسيب، نظرًا لأن حجم الرواسب (التراص) يتجاوز حجم ترسب.

التراص الدموي المباشر

يستخدم تفاعل التراص الدموي المباشر (DHR) للكشف عن المستضدات السطحية للكائنات الحية الدقيقة وخلايا الدم الحمراء، وكذلك الأجسام المضادة لها.
ل الأمصال القياسيةالتي تحتوي على أجسام مضادة، تضاف مادة الاختبار (الدم). ترتبط سرعة تفاعل التراص المباشر بكمية المادة التي يتم اختبارها، وكمية المصل وتركيزه، ودرجة الحرارة المحيطة.

التراص الدموي غير المباشر

رد فعل التراص الدموي غير المباشريتم إجراؤها للكشف عن الأجسام المضادة في دم المريض باستخدام اختبار تشخيصي لكرات الدم الحمراء. يتكون الكاشف من خلايا الدم الحمراء التي يوجد على سطحها مستضد (بروتينات الكائنات الحية الدقيقة والسموم والمواد المسببة للحساسية وما إلى ذلك).
يتم تخفيف مصل دم المريض بمحلول كلوريد الصوديوم بنسبة 0.9%، ثم يتم إضافة تشخيص كريات الدم الحمراء ومراقبة النتيجة. تكتشف طريقة التشخيص الحساسة للغاية هذه المستضدات حتى في التركيزات الصغيرة.

تفاعل التراص الدموي (HRA).

في المختبر، يتم استخدام تفاعلين من تفاعلات التراص الدموي مع آليات عمل مختلفة.

أول RGA هو مصلي. في هذا التفاعل، يتم تراص خلايا الدم الحمراء عند التفاعل مع الأجسام المضادة المناسبة (الهيماجلوتينين). يستخدم التفاعل على نطاق واسع لتحديد فصائل الدم.

RGA الثاني ليس مصليا. في ذلك، لا يحدث التصاق خلايا الدم الحمراء

الأجسام المضادة، ولكن المواد الخاصة التي تشكلها الفيروسات. على سبيل المثال، يقوم فيروس الأنفلونزا بتجميع خلايا الدم الحمراء في الدجاج و خنازير غينيا- فيروس شلل الأطفال - خلايا الدم الحمراء في الأغنام. هذا التفاعل يجعل من الممكن الحكم على وجود فيروس معين في المادة قيد الدراسة.

يتم التفاعل في أنابيب اختبار أو على ألواح خاصة ذات آبار. يتم تخفيف المادة التي تم اختبارها لوجود الفيروس بمحلول متساوي التوتر من 1:10 إلى 1:1280؛ يتم خلط 0.5 مل من كل تخفيف مع كمية متساوية من 1-2% من معلق خلايا الدم الحمراء. في السيطرة، يتم خلط 0.5 مل من كريات الدم الحمراء مع 0.5 مل من محلول متساوي التوتر. توضع أنابيب الاختبار في منظم الحرارة لمدة 30 دقيقة، وتترك الألواح في درجة حرارة الغرفة لمدة 45 دقيقة.

المحاسبة عن النتائج.في نتيجة ايجابيةرد الفعل، تظهر رواسب من خلايا الدم الحمراء ذات حواف صدفية ("مظلة") في قاع أنبوب الاختبار أو البئر، وتغطي قاع البئر بالكامل. إذا كانت النتيجة سلبية، فإن خلايا الدم الحمراء تشكل رواسب كثيفة ذات حواف ناعمة ("الزر"). يجب أن تكون نفس الرواسب في السيطرة. يتم التعبير عن شدة التفاعل بعلامة "+".

رد فعل التراص الدموي

عيار الفيروس هو الحد الأقصى لتخفيف المادة التي يحدث فيها التراص.

رد فعل تثبيط التراص الدموي

هذا هو رد الفعل المصلي الذي محدد الأجسام المضادة للفيروسات، التفاعل مع الفيروس (المستضد)، وتحييده وحرمانه من القدرة على تراص خلايا الدم الحمراء، أي منع تفاعل التراص الدموي. يتيح لك هذا التفاعل تحديد نوع ونوع الفيروسات.

إعداد رد الفعل.يتم خلط 0.25 مل من المصل المضاد للفيروسات مع كمية متساوية من المادة التي تحتوي على الفيروس. يرج الخليط ويوضع في منظم الحرارة لمدة 30 دقيقة، وبعد ذلك يضاف 0.5 مل من معلق خلايا الدم الحمراء 1-2%.

المحاسبة عن النتائج.إذا تم إجراء التجربة بشكل صحيح، فيجب تشكيل "زر" للتحكم في مصل الدم وكريات الدم الحمراء - لا يوجد عامل تراص كريات الدم الحمراء؛ في السيطرة على المستضد، يتم تشكيل "مظلة" - تسبب الفيروس في تراص خلايا الدم الحمراء. إذا كان المصل متماثلًا للفيروس قيد الدراسة، فسيتم تشكيل "زر" - حيث يقوم المصل بتحييد الفيروس.

رد فعل التراص الدموي غير المباشر

يعتمد تفاعل التراص الدموي غير المباشر (السلبي) (RIHA) على حقيقة أن خلايا الدم الحمراء، إذا تم امتصاص مستضد قابل للذوبان على سطحها، تكتسب القدرة على التراص عند التفاعل مع الأجسام المضادة للمستضد الممتز.

إعداد رد الفعل.يتم تسخين المصل لمدة 30 دقيقة عند 56 درجة مئوية، ويتم تخفيفه بالتتابع بنسبة 1:10 - 1:1280 ويصب في 0.25 مل في أنابيب الاختبار أو الآبار، حيث يتم بعد ذلك وضع قطرتين من خلايا الدم الحمراء مع المستضدات الممتزة عليها. وأضاف.

ضوابط:تعليق كريات الدم الحمراء مع المستضدات الممتزة عليها بمصل مناعي واضح، تعليق كريات الدم الحمراء مع المستضدات الممتزة عليها بالمصل الطبيعي؛ تعليق خلايا الدم الحمراء الطبيعية مع مصل الاختبار. في التحكم الأول، يجب أن يحدث التراص، في الثانية والثالثة لا ينبغي أن يحدث.

أسئلة التحكم.

1. ما الذي تشير إليه نتيجة تحليل الأشعة السينية الإيجابية بين خلايا الدم الحمراء والمادة التي يتم فحصها لوجود الفيروس؟

2. هل سيحدث تفاعل تراص لخلايا الدم الحمراء إذا أضيف إليها الفيروس والمصل المقابل له؟ ما اسم التفاعل الذي يكشف هذه الظاهرة؟

العمل العملي رقم 12.

رد فعل التثبيت المكمل.

يعتمد تفاعل تثبيت المتمم (FFR) على حقيقة أن مركب جسم مضاد محدد يمتص دائمًا (يربط) المكمل لنفسه.

يستخدم هذا التفاعل على نطاق واسع في تحديد المستضدات والتشخيص المصلي للعدوى، وخاصة الأمراض التي تسببها اللولبيات (تفاعل فاسرمان)، والريكتسيا والفيروسات.

RKS هو تفاعل مصلي معقد. أنها تنطوي على نظامين مكملين وجسم مضاد للمستضد. في الأساس، هذين هما التفاعلان المصليان.

يتكون النظام الرئيسي الصحيح من مستضد وجسم مضاد (أحدهما معروف والآخر غير معروف). يتم إضافة كمية معينة من المكملات إليه. إذا تطابق المستضد والجسم المضاد لهذا النظام، فسوف يتصلان ويربطان مجاملة. المجمع الناتج مشتت بدقة وغير مرئي.

تم الكشف عن تكوين هذا المجمع باستخدام نظام انحلالي أو نظام مؤشر ثانٍ. ويشمل خلايا الدم الحمراء للأغنام (المستضد) والمصل الانحلالي المقابل (الجسم المضاد)، أي. مجمع المناعي الجاهز. في هذا النظام، لا يمكن أن يحدث تحلل خلايا الدم الحمراء إلا في وجود المكمل. إذا كان المكمل مرتبطًا بالنظام الأول، فلن يكون هناك انحلال للدم في النظام الثاني، لأن لا يوجد تكملة مجانية. يتم تسجيل غياب انحلال الدم (محتويات الأنبوب غائمة أو وجود رواسب من كريات الدم الحمراء في الأسفل) كنتيجة RSC إيجابية.

إذا كان المستضد في النظام الأول لا يتوافق مع الجسم المضاد، فلن يتشكل المركب المناعي وسيظل المكمل حرًا. تبقى المجاملة حرة، وتشارك في النظام الثاني، مما يسبب انحلال الدم، وتكون نتيجة RSC سلبية (محتويات الأنابيب شفافة - "الدم المطلي").

مكونات تفاعلات التثبيت المكملة:

1. المستضد - عادة المحللة، استخراج، الناشب،

في كثير من الأحيان تعليق الكائنات الحية الدقيقة.

2. الأجسام المضادة - مصل المريض.

3. المكمل - مصل خنزير غينيا.

4. المستضد - كريات الدم الحمراء في الأغنام.

5. الأجسام المضادة - الهيموليزين إلى كريات الدم الحمراء في الأغنام.

6. محلول متساوي التوتر.

بسبب حقيقة أن RSK تشارك عدد كبير منمكونات معقدة،

يجب أولاً معايرتها وتفاعلها بكميات محددة وبأحجام متساوية: 0.5 أو 0.25، وفي كثير من الأحيان 0.2 أو 1.25 أو 1.0 مل (الأحجام الأكبر تعطي نتيجة أكثر دقة). يتم إجراء معايرة مكونات التفاعل بنفس حجم التجربة، مع استبدال المكونات المفقودة بمحلول متساوي التوتر.

معلومات ذات صله:

البحث في الموقع:

يعد اختبار التراص الدموي غير المباشر أو السلبي (IRHA أو RPHA) أكثر حساسية وتحديدًا من اختبار التراص. يستخدم رد الفعل هذا أيضًا في اتجاهين.

1) للكشف عن الأجسام المضادة في مصل دم المريض، يتم استخدام تشخيصات كريات الدم الحمراء، حيث يتم امتصاص المستضد على سطح كريات الدم الحمراء المعالجة بالتانين. فيما يتعلق برد الفعل هذا، يُستخدم مصطلح RPGA في أغلب الأحيان.

يتم تخفيف مصل الاختبار في آبار الألواح البلاستيكية ويتم إضافة تشخيص كريات الدم الحمراء. إذا كان رد الفعل إيجابيا، تظهر طبقة رقيقة على طول جدران الحفرة على شكل “مظلة من الدانتيل”؛ رد فعل سلبي- رواسب كثيفة من كريات الدم الحمراء على شكل "زر".

2) للكشف عن السموم والمستضدات البكتيرية في المادة قيد الدراسة، يتم استخدام تشخيصات كريات الدم الحمراء للأجسام المضادة، والتي يتم الحصول عليها عن طريق امتزاز الأجسام المضادة على كريات الدم الحمراء. فيما يتعلق برد الفعل هذا، يتم استخدام مصطلح RNGA في كثير من الأحيان. على سبيل المثال، بمساعدة تشخيص الأجسام المضادة، يتم الكشف عن مستضد عصية الطاعون، والسموم الخارجية للدفتيريا، والسموم الخارجية للبوتولينوم.

ما هو تشخيص كريات الدم الحمراء؟ ما هو تشخيص الأجسام المضادة لكرات الدم الحمراء؟

تشخيصات كريات الدم الحمراء هي خلايا دم حمراء (تُعالج بالتانين أو الفورمالين) مع مستضدات مستخرجة من البكتيريا الممتصة عليها، وتستخدم في تفاعلات التراص الدموي السلبي (RPHA). في حالة استخدام RPGA للكشف عن المستضد في إفرازات المرضى، في الأنسجة، وما إلى ذلك، يتم استخدام "تشخيصات الأجسام المضادة"، أي خلايا الدم الحمراء الحساسة للأجسام المضادة.

في RNGA، يتم الكشف عن الأجسام المضادة في مصل الدم باستخدام تشخيص كريات الدم الحمراء المستضدية، وهي كريات الدم الحمراء التي تحتوي على مستضدات ممتصة عليها.

منهجية إعداد ردود الفعل. رد فعل التخثر.

- تثبيت خلايا الدم الحمراء بالفورمالدهيد أو الألدهيدات الجلوتارية أو الأكريليكية. يتم تخزين خلايا الدم الحمراء المعالجة هذه لفترة طويلة. في كثير من الأحيان، يتم استخدام كريات الدم الحمراء من الأغنام والبشر والدجاج وما إلى ذلك لهذا الغرض؛
- علاج كريات الدم الحمراء الثابتة بمحلول التانين. ونتيجة لذلك، تكتسب خلايا الدم الحمراء القدرة على امتصاص البروتينات (الفيروسات والأجسام المضادة) الموجودة على سطحها بشكل لا رجعة فيه؛
- تحسس كريات الدم الحمراء التانيزية بالفيروسات أو الأجسام المضادة.

تفاعل التراص (CAR)

يتم استخدام تفاعل التخثر لتحديد المستضدات باستخدام الأجسام المضادة الممتصة على البروتين A في خلايا المكورات العنقودية (تشخيص الأجسام المضادة).
البروتين A لديه تقارب لجزء Fc من الغلوبولين المناعي، وبالتالي فإن هذه البكتيريا المعالجة بمصل التشخيص المناعي تمتز بشكل غير محدد الأجسام المضادة في المصل، والتي تتفاعل بعد ذلك مع المراكز النشطة مع الميكروبات المقابلة المعزولة من المرضى. نتيجة للتخثر، يتم تشكيل رقائق تتكون من المكورات العنقودية والأجسام المضادة في المصل التشخيصي والميكروب المكتشف.

الأمصال المتلاصقة: ما تحتويه؛ كيف يتم الحصول عليها، وفيما يتم استخدامها؛ ما هو عيار المصل المتراص؟

يتم الحصول على المصل المتراص عن طريق تحصين الأرانب (عن طريق الوريد أو تحت الجلد أو داخل الصفاق) بمعلق من البكتيريا الميتة، بدءاً بجرعة 200 مليون، ثم 500 مليون، و1 مليار، و2 مليار جسم ميكروبي في 1 مل، على فترات 5 أيام. وبعد 7-8 أيام من آخر تطعيم، يتم أخذ الدم وتحديد عيار الأجسام المضادة.

عيار المصل المتراص هو الحد الأقصى للتخفيف من المصل الذي يحدث عنده التراص مع الكائنات الحية الدقيقة المقابلة.

تُستخدم الأمصال التراصية لتحديد الميكروبات في تفاعل التراص واسع النطاق.

تفاعل التراص الدموي (HRA)

إذا كانت الكائنات الحية الدقيقة قيد الدراسة ملتصقة بالمصل إلى العيار أو إلى نصف قيمة العيار، فيمكن اعتبارها تنتمي إلى الأنواع التي يشار اسمها إلى ملصق الأمبولة.

ما هي الاختلافات بين الأمصال المتراصة متعددة التكافؤ وأحادية التكافؤ (أحادية المستقبل)؟ لماذا يؤدي تحصين الأرنب بميكروبات من نوع واحد إلى إنتاج مصل يحتوي على أجسام مضادة لعدة مستضدات؟

الأمصال أحادية المستقبل هي أمصال تحتوي على أجسام مضادة لمستضد واحد فقط، وأمصال متعددة التكافؤ تعطي تفاعلات تراص مع اثنين أو ثلاثة من البكتيريا ذات الصلة التي لها مستضد مشترك. تستخدم الأمصال التراصية لتحديد الكائنات الحية الدقيقة في تفاعل التراص. عيب هذه الأمصال هو أنها قادرة على إعطاء تفاعلات تراص جماعية، لأن أنها تحتوي على أجسام مضادة للبكتيريا التي لها مستضدات مشتركة.

رد فعل التراص الدموي. الوصف والتطبيق

يعتمد ذلك على حقيقة أن خلايا الدم الحمراء، التي تم امتصاص المستضدات عليها سابقًا، تكتسب القدرة على التراص في وجود الأمصال المتماثلة (الأجسام المضادة).

في هذه الحالة، تعمل خلايا الدم الحمراء كحاملات بمحددات محددة، والتي يحدث تراصها نتيجة تفاعل المستضد + الجسم المضاد.

تسمى خلايا الدم الحمراء التي ترتبط المستضدات بقوة بسطحها بتشخيص مستضد كريات الدم الحمراء، أو كريات الدم الحمراء الحساسة للمستضد.

نوع آخر من RNGA - يتم امتصاص الأجسام المضادة على سطح كريات الدم الحمراء ويحدث تراصها اللاحق في وجود مستضد متماثل. في هذه الحالة، تسمى كريات الدم الحمراء هذه تشخيص الأجسام المضادة لكريات الدم الحمراء، أو كريات الدم الحمراء المتحسسة بالأجسام المضادة.

واستنادا إلى هذين النهجين المنهجيين الأساسيين، تم تطوير واستخدام العديد من التعديلات على RNGA. وبالتالي، يتم استخدام جزيئات اللاتكس القياسية الصغيرة كحاملات. في هذه الحالة، يسمى التفاعل تفاعل تراص اللاتكس (RLA) أو يتم استخدامه المكورات العنقودية الذهبية- تفاعل التراص، وما إلى ذلك. عادة، يتم إعداد تشخيصات كريات الدم الحمراء في مؤسسات الصناعة البيولوجية، ويتم تنفيذ الخبرة الرئيسية لـ RNGA في مختبرات التشخيص.

يتضمن إعداد تشخيص كريات الدم الحمراء الخطوات التالية:

• تثبيت خلايا الدم الحمراء بالفورمالدهيد أو الألدهيدات الجلوتاريكية أو الأكريليكية. يتم تخزين خلايا الدم الحمراء المعالجة هذه لفترة طويلة. في كثير من الأحيان، يتم استخدام كريات الدم الحمراء من الأغنام والبشر والدجاج وما إلى ذلك لهذا الغرض؛
• علاج كريات الدم الحمراء الثابتة بمحلول التانين. ونتيجة لذلك، تكتسب خلايا الدم الحمراء القدرة على امتصاص البروتينات (الفيروسات والأجسام المضادة) الموجودة على سطحها بشكل لا رجعة فيه؛
• تحسس كريات الدم الحمراء التانيزية بواسطة الفيروسات أو الأجسام المضادة.

تجدر الإشارة إلى أن طرق تحضير كريات الدم الحمراء التشخيصية اصابات فيروسيةمختلف.

الإجراء الخاص بإجراء RNGA للكشف عن عيار الجسم المضاد وتحديده هو كما يلي:

• تضاف جرعات متساوية من كريات الدم الحمراء المتحسسة بالمستضد إلى التخفيفات المتتالية من المصل؛
• يُترك الخليط لمدة 2-3 ساعات عند درجة حرارة الغرفة أو لمدة 16-18 ساعة عند 4 درجات مئوية؛
• تأخذ في الاعتبار النتائج. إذا كان المصل يحتوي على أجسام مضادة للفيروس الذي تم تحسس خلايا الدم الحمراء به، يتم ملاحظة التراص الدموي، والذي يتم تقييمه بالتهجين.

يعتبر عيار الجسم المضاد الموجود في المصل هو أعلى تخفيف في المصل والذي لا يزال يوفر التراص الدموي بواسطة تهجينين على الأقل.

ويرافق RNGA جميع الضوابط ذات الصلة. عادةً ما يتم التفاعل باستخدام الطريقة الدقيقة.

يتيح لك RNGA حل المشكلات التشخيصية التالية:

• الكشف عن الأجسام المضادة وتحديد عيارها في مصل الدم باستخدام تشخيص مستضد كريات الدم الحمراء المعروف؛
• اكتشاف وتحديد فيروس غير معروف باستخدام تشخيص الأجسام المضادة المعروفة لكرات الدم الحمراء.

مزايا RNGA: الحساسية العالية، وبساطة تقنية التنسيب، وسرعة الاستجابة. ومع ذلك، من المهم ملاحظة أنه تنشأ صعوبات كبيرة في إعداد تشخيصات كريات الدم الحمراء المستقرة (الاعتماد الكبير على نقاء المكونات المستخدمة، والحاجة إلى اختيار طريقة التثبيت، والتانيزة، وتوعية كريات الدم الحمراء لكل نوع من الفيروسات).

إذا وجدت خطأ، فيرجى تحديد جزء من النص والضغط على Ctrl+Enter.

في تواصل مع

تفاعل التلقيح الدموي غير المباشر، RNGA
(اختبار التراص الدموي غير المباشر)

طريقة للكشف عن المستضدات والأجسام المضادة، بناءً على قدرة خلايا الدم الحمراء، التي تم امتصاص المستضدات أو الأجسام المضادة على سطحها مسبقًا، على التراص في وجود الأمصال المتماثلة أو المستضدات المقابلة.

عندما يتم الكشف عن المستضدات، تتم الإشارة إلى التفاعل عن طريق اختبار التراص الدموي السلبي العكسي، وعندما يتم الكشف عن الأجسام المضادة، عن طريق اختبار التراص الدموي السلبي. وقد وجدت RNGA تطبيقًا واسع النطاق لتحديد العلامات المصلية للعدوى بفيروس التهاب الكبد B، وخاصة HBsAg والأجسام المضادة له.

المتقدمة حاليا أساليب مختلفةإنتاج تشخيصات كريات الدم الحمراء، والتي تختلف في طرق توعية كريات الدم الحمراء (باستخدام التانين، الغلوتارالدهيد، كلوريد الكروم، الريفانول، إلخ)، وأنواعها (الإنسان، الأغنام، الدجاج، الديك الرومي، إلخ)، خيارات تنظيم التفاعل ( في العيار الميكروي). اللوحات وأنابيب الاختبار والشعيرات الدموية وما إلى ذلك) وتسجيل النتائج (المرئية والفعالة). يتم إنتاج مجموعات تشخيص كريات الدم الحمراء للكشف عن HBsAg ومضادات HBs من قبل العديد من المؤسسات والشركات في بلدنا وخارجها.

في كثير من الأحيان، يتم إجراء RNGA في لوحات ميكروتيتر، حيث يتم تحضير تخفيفات مصل الاختبار وعينات التحكم مسبقًا. بعد إضافة كريات الدم الحمراء التشخيصية والحضانة، يتم تسجيل نتائج التفاعل. تعتبر العينات التي يحدث فيها تراص لخلايا الدم الحمراء، والتي تبدو وكأنها "مظلة" مقلوبة، إيجابية. إذا كان رد الفعل سلبيا، تستقر خلايا الدم الحمراء في قاع الحفرة على شكل حلقة أو قرص.

لتأكيد خصوصية النتائج التي تم الحصول عليها، يتم إجراء التفاعل باستخدام تشخيص كريات الدم الحمراء "التجريبي" (أي كريات الدم الحمراء المتحسسة بالمستضد أو الأجسام المضادة) ومع تشخيص "التحكم" (أي كريات الدم الحمراء غير المتحسسة بالمستضد أو الأجسام المضادة). يشير وجود تفاعل إيجابي مع دواء تشخيصي "مراقب" إلى تفاعل إيجابي كاذب. للتخلص من التفاعلات غير النوعية، يتم معالجة مصل الاختبار بكريات الدم الحمراء غير الحساسة. الشرط الأساسي لإجراء RNGA هو رد فعل التعادل، أي اختبار التأكيد.

بالمقارنة مع طرق مثل RPG وVIEF وRSK، فإن تفاعل التراص الدموي غير المباشر له حساسية أعلى (200 - 400 مرة). وبالتالي، يمكن اكتشاف HBsAg في RPGA بتركيزات 6-10 نانوغرام/مل. إن بساطة التفاعل وسرعته (20 - 30 دقيقة) هي التي حددت استخدامه على نطاق واسع هذه الطريقةفي خدمة نقل الدم للكشف عن HBsAg.

بالإضافة إلى تشخيص كريات الدم الحمراء للكشف عن HBsAg ومضادات HBs، تم أيضًا تطوير الاستعدادات التشخيصية لـ تعريف anti-HBc، anti-HBc class IgM (إصدار المرحلة الصلبة)، HBeAg، مستضد فيروس التهاب الكبد A والأجسام المضادة له، ومع ذلك، لم يتم العثور على كل منهم تطبيق في الرعاية الصحية العملية.

تفاعل التراص الدموي غير المباشر (RIHA).

يتم استخدام RIGA في نسختين: مع الأجسام المضادة المعروفة للكشف عن الأجسام المضادة مع الأجسام المضادة المعروفة للكشف عن الأجسام المضادة. هذا التفاعل محدد، ويستخدم لتشخيص الأمراض التي تسببها البكتيريا والريكتسيا. لتنفيذ RIGA، يتم استخدام تشخيصات كريات الدم الحمراء، التي يتم إعدادها عن طريق امتزاز AG أو AT على كريات الدم الحمراء، اعتمادًا على الغرض من الدراسة (الشكل 10.3). في الحالات الإيجابية، يتم وضع علامة على درجة تراص كرات الدم الحمراء بالإيجابيات. تقوم أربع إيجابيات بتقييم التفاعل الذي يكون على شكل طبقة رقيقة من خلايا الدم الحمراء اللاصقة (المظلة) التي تغطي الجزء السفلي من أنبوب الاختبار؛ يُشار إلى وجود فيلم ذو حواف دانتيل صدفية بإيجابيتين. يعتبر العيار هو الحد الأقصى للتخفيف من مادة الاختبار التي تسببت في تراص كريات الدم الحمراء بواسطة إيجابيتين.

أرز. 10.3.

1 - خلايا الدم الحمراء، 2 - كريات الدم الحمراء AG، 3 - مترافق AG، 4-AT

RHA وتفاعل تثبيط التراص الدموي (HAI).

كما ذكرنا سابقًا، يعتمد RHA على قدرة كريات الدم الحمراء على الالتصاق ببعضها البعض عندما يتم امتصاص مستضدات معينة عليها. يتم استخدام السائل السقاء والسلوي، وتعليق الأغشية المشيمية السقاءية لأجنة الدجاج، والمعلقات والمستخلصات من المزارع أو أعضاء الحيوانات المصابة بالفيروسات، والمواد المعدية المحلية كمواد اختبار للتراص الدموي. RGA ليس تفاعلًا مصليًا، لأنه يحدث دون مشاركة المصل المناعي ويستخدم لتحديد التخفيف العامل لمستضد لتحديد مرحلة RGA أو وجود مستضد (فيروس) في مادة الاختبار (على سبيل المثال، للأنفلونزا ). يستخدم التفاعل خلايا الدم الحمراء من الحيوانات والطيور والبشر ذوي فصيلة الدم I (0). لإعداد RGA تقريبي، يتم تطبيق قطرة من تعليق 5٪ من كريات الدم الحمراء وقطرة من مادة الاختبار على شريحة زجاجية وتخلط جيدًا. إذا كانت النتيجة إيجابية، بعد 1-2 دقيقة يتم ملاحظة ظهور تراص كريات الدم الحمراء بشكل مجهري. لإعداد RGA في صف غير مطوي في آبار ألواح البوليسترين، قم بإعداد التخفيفات المتزايدة بشكل مضاعف لمواد الاختبار لكل محلول ملحيفي حجم 0.5 مل. يضاف 0.5 مل من معلق 0.25-1% من خلايا الدم الحمراء إلى جميع أنابيب الاختبار. تؤخذ النتائج في الاعتبار بعد الترسيب الكامل لكريات الدم الحمراء في السيطرة (خلايا الدم الحمراء + المحلول الملحي). يؤخذ التفاعل في الاعتبار حسب طبيعة رواسب كرات الدم الحمراء. في الحالات الإيجابية، يتم وضع علامة على درجة التراص بالإيجابيات. يتم تقييم التفاعل الذي يشبه طبقة رقيقة من خلايا الدم الحمراء اللزجة التي تغطي الجزء السفلي من أنبوب الاختبار (المظلة) بأربع إيجابيات؛ ويتم تمييز التفاعل الذي يحتوي على فجوات في الفيلم بثلاث إيجابيات؛ ووجود فيلم مزود بشريط صدفي تتميز حواف خلايا الدم الحمراء اللزجة بإيجابيتين: رواسب ندفية من خلايا الدم الحمراء محاطة بمنطقة من كتل كرات الدم الحمراء المتراصة، تتوافق مع علامة زائد واحدة. تشير رواسب كريات الدم الحمراء المحددة بشكل حاد، والتي لا يمكن تمييزها عن التحكم، إلى عدم وجود تراص. يعتبر العيار هو الحد الأقصى للتخفيف من مادة الاختبار التي تسببت في تراص كريات الدم الحمراء بواسطة إيجابيتين. إذا كانت نتيجة RGA إيجابية، تستمر الدراسة لتحديد نوع الفيروس المعزول باستخدام RT GA مع الأمصال الخاصة بالنوع. يعتمد RTGA على خاصية المصل المضاد لقمع تراص الدم الفيروسي، حيث أن الفيروس الذي يتم تحييده بواسطة أجسام مضادة معينة يفقد القدرة على تراص خلايا الدم الحمراء. بالنسبة للكتابة المبدئية للفيروسات، يتم استخدام طريقة القطرات على الزجاج. لتحديد نوع الفيروس المعزول بشكل نهائي ومعايرة الأجسام المضادة في الأمصال، يتم وضع اختبار الأشعة السينية الموسع في أنابيب الاختبار أو الآبار. لهذا الغرض، يتم تحضير التخفيفات المزدوجة للأمصال في محلول فسيولوجي وتوزيعها في 0.25 مل. أضف إلى تخفيفات المصل قطرة واحدة من مادة تحتوي على الفيروس وقطرة واحدة من معلق 1% من خلايا الدم الحمراء. عند استخدام RTGA لتحديد نوع الفيروس، يتم استخدام الأمصال الخاصة بالنوع، والتي تتم إضافتها إلى حجم متساوٍ من التخفيف العامل لـ AG. يتم تحديد نوع الفيروس المعزول من خلال المصل المناعي النوعي الذي أظهر أعلى عيار للأجسام المضادة لهذا الفيروس. يتم استخدام RGA وRTGA على نطاق واسع لتشخيص الالتهابات الفيروسية ( إلتهاب الدماغ المعدي، والأنفلونزا، وما إلى ذلك) من أجل اكتشاف أجسام مضادة محددة والتعرف على العديد من الفيروسات عن طريق أجسامها المضادة.

تفاعل التراص الدموي غير المباشر (IRHA)

يعتمد استخدام الأدوية التشخيصية الممتزة على مبدأ التعرف المناعي على الهياكل السطحية، والذي يتحقق باستمرار في الطبيعة. ومن هذا المنطلق، لا توجد فروق جوهرية بين استخدام خلية ميكروبية مثلا أو حامل اصطناعي محمل بالمستضد (الأجسام المضادة). يتم استخدام ناقلات مختلفة كأساس للأدوية الممتصة - الخلايا الميكروبية، كريات الدم الحمراء، اللاتكس، البنتونين، الكولسترول، سيفاديكس، ديرماتول، كربون مفعل، الجراثيم الفطرية، الخ.

بعد عمل A. T. Kravchenko (1945)، أصبحت خلايا الدم الحمراء المحرومة من الحيوية والمثبتة بالكواشف الكيميائية المختلفة هي الأكثر انتشارًا باعتبارها حاملًا للمستضدات أو الأجسام المضادة. استنادًا إلى مبدأ استخدام كريات الدم الحمراء (الأصلية والثابتة) كحامل للمستضد، أصبح تفاعل التراص الدموي غير المباشر (السلبي) منتشرًا على نطاق واسع.

نشأ اقتراح استخدام تفاعل التراص الدموي غير المباشر (IRHA) لأغراض التشخيص على أساس المعرفة التي تم تطويرها مسبقًا حول نشاط الامتصاص العالي لكريات الدم الحمراء. بالمقارنة مع العديد من حاملات المستضدات والأجسام المضادة الأخرى، تتمتع كريات الدم الحمراء بمزايا معينة في تفاعل التراص الدموي غير المباشر. أولا، في متساوي التوتر المحاليل الملحيةإنهم يشكلون التصاقًا مستقرًا إلى حد ما ولا يستقرون في الخلف وقت قصير. ثانيا، خلايا الدم الحمراء من نفس النوع الحيواني لها نفس الحجم. وأخيرًا، من السهل نسبيًا أن تقوم كريات الدم الحمراء بربط مختلف المكونات النشطة مصليًا بشكل مباشر أو نتيجة للمعالجة الخاصة.

إن إنشاء تشخيصات كريات الدم الحمراء من كريات الدم الحمراء المستقرة يجعل من الممكن التغلب على الصعوبات التي تنشأ عند استخدام كريات الدم الحمراء الأصلية.

عند دراسة كريات الدم الحمراء المعالجة بمواد تثبيت مختلفة، تم تحديد بعض خصائصها المشتركة:

من حيث التشكل، فهي لا تختلف عمليا عن الطازجة؛

لا تتحلل في المحاليل منخفضة التوتر، في الماء وبعد ذوبان التجميد.

يمكن تجميده وتجفيفه؛

تحتفظ الهياكل السطحية لها بالقدرة على التعديل كيميائيًا (على سبيل المثال، التانين ومركبات الديازو) والتفاعل مع المستضدات والأجسام المضادة.

المعيار الرئيسي لجودة كريات الدم الحمراء الثابتة هو إمكانية استخدامها للحصول على أدوية حساسة في حالة عدم وجود لصق غير محدد في السوائل المثبتة.

يعد تحضير سطح كريات الدم الحمراء من أجل زيادة قدرة امتصاص المستضدات أمرًا مهمًا في تصميم الأدوية التشخيصية. أصبح علاج خلايا الدم الحمراء بالتانين واسع الانتشار بشكل خاص.

تحت تأثيرها يتغيرون خصائص مستضديةكريات الدم الحمراء (النفاذية، معدل الترسيب)، ومقاومتها للتأثيرات الانحلالية لبعض أنواع الأحماض الدهنية. ومع ذلك، فقد تم تحقيق الشيء الرئيسي - تتمتع كريات الدم الحمراء المدبوغة بقدرة امتصاص أكبر بكثير للبروتينات، والتي تستخدم حاليًا على نطاق واسع في تصنيع تشخيصات المستضدات والأجسام المضادة عالية الجودة.

جنبا إلى جنب مع كريات الدم الحمراء الدباغة، يتم استخدام الكواشف الكيميائية مثل البروميلين، والتريبسين، وبيريودات البوتاسيوم، والتي تعمل أيضًا على تعديل أغشية كريات الدم الحمراء، لإنتاج تشخيصات كريات الدم الحمراء وإعداد حاملات المستضد.

بعد تحضير سطح خلايا الدم الحمراء أكثر عملية مهمة- عملية التحسس الدموي - المرحلة الأخيرةإنتاج تشخيص كريات الدم الحمراء.

لتعزيز الاتصال بين الناقل والمستضد، يتم استخدام مواد مترافقة مختلفة - بيسديازوبنزيدين، ديفلورودينيتروبنزين، كلوريد السيانوجين، كلوريد الكادميوم وخلات، كلوريد البروم، الفورمالديهايد، الغلوتارالدهيد، بروميد السيانوجين، ريفانول، أميدول، إلخ.

يساعد استخدام المواد المترافقة في التخلص من العيوب التي تعاني منها كريات الدم الحمراء المدبوغة المستخدمة للتوعية دون مواد مترافقة.

المواد المترافقة الأكثر استخدامًا هي كلوريد الكروم، والجلوتارالدهيد، والديازول الأسود C، والأميدول. تتم عملية التحسس بكلوريد الكروم بسرعة كبيرة - من 4 إلى 10 دقائق، مما يجذب انتباه الباحثين. في هذه الحالة، يتم استخدام تركيزات كلوريد الكروم من 0.05 إلى 2٪، ولا يقل الرقم الهيدروجيني عن 5.0 عند درجة حرارة خليط التفاعل 20-250 درجة مئوية. وفي عملية التحسس بكلوريد الكروم، يتم تنشيط مجموعات الكربوكسيل من بروتينات غشاء كرات الدم الحمراء . ونتيجة لذلك، يتم تشكيل رابطة تساهمية بين غشاء خلايا الدم الحمراء والسنسيتين.

تفاعل التراص الدموي غير المباشر محدد للغاية، حيث أن التصاق كريات الدم الحمراء يحدث نتيجة لتفاعل المستضد مع الأجسام المضادة الممتزة على كريات الدم الحمراء. السمة المميزة لها هي حساسيتها العالية: فهي تكتشف 0.02-0.05 ميكروغرام من بروتين الجسم المضاد. من حيث الحساسية، فهو يتفوق بشكل كبير على تفاعلات الانتشار المناعي، والتألق المناعي، والانتشار المناعي الشعاعي، والتثبيت التكميلي، والتحييد. تعتبر RNGA أقل حساسية من طرق الرحلان الكهربائي المناعي الإشعاعي، وتحديد كمية البروتين من الأجسام المضادة المشعة في الممتز المناعي، والمقايسة المناعية الإنزيمية.

تشمل مزايا RNGA إمكانية تكرار نتائج عالية إلى حد ما، وسهولة التنفيذ، والحاجة إلى كميات ضئيلة من المكونات، خاصة عند استخدام الطريقة الدقيقة.

RNGA في السنوات الاخيرةوقد وجد استخداما واسع النطاق في تشخيص التهاب القصبة الهوائية المعدي، والإسهال، عدوى الفيروس الغدي، عدوى الروتا والفيروسات التاجية، نظير الأنفلونزا - 3 والعدوى المخلوية التنفسية.

نعطي مثالاً على إنتاج واستخدام كريات الدم الحمراء التشخيصية للكشف عن الأجسام المضادة لعدوى الروتا وفيروس كورونا.

طريقة إعداد تشخيصات الأجسام المضادة لتحديد مستضدات الروتا والفيروس التاجي في RNGA هي كما يلي: الحصول على تعليق كريات الدم الحمراء؛ تثبيت الأكرولين الخاصة بهم. التنقية، والتي تسمح بالحصول على امتصاص مستقر للبروتين المطلوب على خلايا الدم الحمراء؛ توعية كريات الدم الحمراء المدبوغة بالجلوبيولين المناعي. تحديد خصوصية التشخيص المعد. يتم تحضير معلق كريات الدم الحمراء عن طريق جمع دم الأغنام السليمة سريريًا في دورق به خرزات زجاجية. بعد إزالة رجفان الدم، يجب غسل خلايا الدم الحمراء 3-5 مرات بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر (0.9%) بواسطة الطرد المركزي لمدة 15-20 دقيقة عند 400 جرام.

من أجل تثبيت خلايا الدم الحمراء، يتم علاجها بالأكرولين. وكما هو معروف فإن مفعوله أخف إلى حد ما من الفورمالديهايد، ويوفر الثبات وأكثر نشاط عاليخلايا الدم الحمراء للقيام بذلك، يتم خلط كميات متساوية من تعليق كريات الدم الحمراء بنسبة 10٪ مع محلول 0.2٪ من الأكرولين المحضر في محلول الفوسفات المنظم (PBS) مع درجة حموضة 7.2. يتم الاحتفاظ بالمعلق الناتج لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية، مع التحريك جيدًا، يليه إزالة الأكرولين عن طريق الطرد المركزي المتكرر لمدة 5 دقائق عند 600-800 جم حتى تختفي الرائحة المحددة تمامًا. وميزة خلايا الدم الحمراء المحضرة بهذه الطريقة هي أنها يمكن تخزينها للاستخدام المستقبلي منذ وقت طويلالحفاظ عليها دون الخضوع لانحلال الدم.

وفي وقت لاحق، استقرت خلايا الدم الحمراء في تركيز 10٪ يتم الاحتفاظ بها عند 2-4 درجة مئوية في برنامج تلفزيوني مع درجة حموضة 7.2 لمدة شهرين.

لزيادة قدرة الامتصاص والترسيب لخلايا الدم الحمراء، من الضروري تسميرها عن طريق خلط أجزاء متساوية من معلق 10% من خلايا الدم الحمراء المغسولة ومحلول التانين في برنامج تلفزيوني ودرجة الحموضة 7.2 عند تخفيف 1:30000. يتم خلط الخليط جيدًا وحفظه عند 370 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة، وبعد ذلك يتم غسل خلايا الدم الحمراء جيدًا من التانين مرتين في برنامج تلفزيوني بدرجة حموضة 7.2 وثلاث مرات بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر مع درجة حموضة 7.2-7.4.

إن الفترة المثالية لضمان الحصول على تشخيصات عالية الجودة لكرات الدم الحمراء هي توعيتها خلال 24-48 ساعة بعد علاجها بالتانين.

في عملية تصنيع أدوات التشخيص، يتم استخدام محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر فينولي 0.3% مع 0.1% مصل أرنب أو حصان طبيعي، تم تعطيله مسبقًا عند 56 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة ويتم امتصاصه بواسطة كريات الدم الحمراء الطبيعية للأغنام، كمذيب وكمادة حافظة. لمدة 30 دقيقة.

ينبغي إجراء توعية كريات الدم الحمراء المدبوغة بمصل مفرط المناعة، على التوالي، ضد فيروسات الروتا والفيروسات التاجية الكبيرة. ماشية(تم إنتاجه في معهد أبحاث عموم روسيا للطب البيطري التجريبي الذي يحمل اسم Y.R. Kovalenko). في هذه الحالة، تبلغ جرعة التوعية (تركيز البروتين) للمصل المناعي المضاد لفيروس الروتا 280 ميكروغرام/مل، وجرعة المصل المناعي لفيروس كورونا 260 ميكروغرام/مل.

يتم إجراء التحسس عن طريق خلط كميات متساوية من كريات الدم الحمراء المدبوغة والمصل المناعي المسخن لمدة 30 دقيقة عند 560 درجة مئوية بتركيز مثالي. بالإضافة إلى ذلك، أضف 3 أجزاء من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر مع درجة حموضة 7.2 و5 أجزاء من محلول كلوريد الكروم 0.1%. يُحفظ الخليط مع التحريك من حين لآخر في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. بعد الوقت المحدد، يتم غسل الخليط جيدًا باستخدام برنامج تلفزيوني مع درجة حموضة 7.2، ثم يتم إعادة تعليق تشخيصات كرات الدم الحمراء المحضرة في مادة حافظة لتركيز 1٪. يحتفظ التشخيص المحضر بصفاته الأساسية لمدة 8 أشهر، بشرط تخزينه في درجة حرارة 4 درجات مئوية.

في جميع مراحل إنتاج التشخيص، تتم مراقبة التراص الذاتي. يتم تحديد خصوصية التشخيص المُجهز من خلال تنظيم RNGA، حيث تم استخدام التشخيص القياسي لفيروسات IRT، وAI-3، والفيروسات الغدية، والإسهال الفيروسي، بالإضافة إلى مستضدات الروتا والفيروس التاجي كمستضدات.

عند إجراء RNGA، يتم إعداد التخفيفات المزدوجة المتعاقبة للمواد المحتوية على فيروس الاختبار (تعليق 20-50٪ من عينات البراز)، ثم تتم إضافة حجم مساوٍ من سائل تشخيص كريات الدم الحمراء إلى كل بئر. يجب رج الصفائح جيدًا عدة مرات وتركها في درجة حرارة الغرفة حتى تستقر كريات الدم الحمراء الموجودة في المجموعة الضابطة تمامًا. فِهرِس رد فعل إيجابي- تراص كريات الدم الحمراء التشخيصية بكثافة تراص 2+ في عيار 1:4 وما فوق.

تفاعل التراص الدموي السلبي)

طريقة لكشف وتحديد المستضدات أو الأجسام المضادة، تعتمد على ظاهرة تراص خلايا الدم الحمراء التي تحدث في وجودها، والتي تم امتصاص المستضدات المحددة أو المستضدات المقابلة لها مسبقًا على سطحها.

1. الموسوعة الطبية الصغيرة. - م.: الموسوعة الطبية. 1991-96 2. أولا الرعاىة الصحية. - م: الموسوعة الروسية الكبرى. 1994 3. القاموس الموسوعي المصطلحات الطبية. - م: الموسوعة السوفيتية. - 1982-1984.

انظر ما هو "رد فعل تراص الدم غير المباشر" في القواميس الأخرى:

رد فعل التراص الدموي غير المباشر- اختبار RNGA المعملي باستخدام تشخيصات كريات الدم الحمراء. [مسرد إنجليزي-روسي للمصطلحات الأساسية في علم اللقاحات والتحصين. منظمة الصحة العالمية، 2009] المواضيع علم اللقاحات والتحصين المرادفات RNGA EN... ... دليل المترجم الفني

- (RNHA؛ مرادف لتفاعل التراص الدموي السلبي) طريقة لكشف وتحديد المستضدات أو الأجسام المضادة، تعتمد على ظاهرة تراص كريات الدم الحمراء التي تحدث في وجودها، والتي تم امتصاصها على سطحها سابقًا... .. . كبير قاموس طبي

- (RPHA) انظر تفاعل التراص الدموي غير المباشر... قاموس طبي كبير

هذه الصفحة عبارة عن معجم. #أ... ويكيبيديا

الاختصارات الأساسية المعتمدة في القاموس الموسوعي البيطري- a.، aa، artena، arteriae aa ana (بالتساوي) أكاديمية اتحاد الجمهوريات الاشتراكية السوفياتية لأكاديمية العلوم الطبية علوم طبيةأكاديمية اتحاد الجمهوريات الاشتراكية السوفياتية للعلوم أكاديمية اتحاد الجمهوريات الاشتراكية السوفياتية للعلوم في اتحاد الجمهوريات الاشتراكية السوفياتية البكالوريا. بكتيريا العصوية. البكتيريا BSSR جمهورية بيلاروسيا الاشتراكية السوفياتيةقرن، قرن القرن، القرون الخامس، الخامس. الوريد، الوريد VASKHNIL وسام لينين لعموم الاتحاد و... ...

ولهذا المصطلح معاني أخرى، انظر الطاعون. حمى آكلة اللحوم (مرض كاري) معدية حادة أو تحت الحادة مرض فيروسي، تتجلى في الحمى، والتهاب النزلات في الأغشية المخاطية، والآفات الجلدية، المركزية ... ... ويكيبيديا

- (رينيه) عضو إفرازي وغدد صماء مزدوج ينظم التوازن الكيميائي للجسم من خلال وظيفة تكوين البول. رسم فسيولوجي تشريحي تقع الكلى في الحيز خلف الصفاق (الفضاء خلف الصفاق) على... ... الموسوعة الطبية

I (داء الشعرينات؛ مرادف: داء الشعرينات، "منتفخ") الديدان الطفيلية من مجموعة الديدان الخيطية، تتميز بالحمى، وألم عضلي، وتورم الوجه، طفح جلدي- فرط اليوزينيات في الدم، وفي الحالات الشديدة - الآفات اعضاء داخليةو مركزية... ... الموسوعة الطبية

- (الديدان الخيطية) الديدان الطفيلية الناجمة عن الديدان الخيطية والديدان المستديرة من فئة النيماتودا. من بين الديدان الطفيلية الأخرى، N. يكون أعلى قيمةفي علم الأمراض البشرية، معظمهم من داء الديدان الطفيلية (انظر داء الديدان الطفيلية)؛ تطوير بيضها أو يرقاتها ... ... الموسوعة الطبية

التهاب البربخ المعدية- أرز. 1. تضخم الخصية اليسرى في خروف مصاب بالتهاب البربخ المعدي. أرز. 1. تضخم الخصية اليسرى في خروف مصاب بالتهاب البربخ المعدي. التهاب البربخ المعدي في الأغنام (التهاب البربخ المعدية في الأغنام) التهاب البربخ المعدي المزمن... ... القاموس الموسوعي البيطري

انظر تفاعل التراص الدموي غير المباشر... قاموس طبي كبير