Schickova reakcija ukazuje na prisutnost ili odsutnost potrebne razine antitoksina u krvi za zaštitu tijela od difterije. Trenutno se ova reakcija rjeđe koristi zbog uvođenja osjetljivijih metoda (RPHA).

Schickova reakcija provodi se u djece cijepljene protiv difterije s završenim cijepljenjem i najmanje jednom revakcinacijom. U dobi od 13 godina i više, reakcija se također može postaviti s nepoznatom poviješću cijepljenja. Stanje imuniteta protiv difterije provjerava se ne ranije od 6 mjeseci nakon posljednje revakcinacije i ne prije 2 mjeseca nakon akutne bolesti.

Schickova reakcija također se stavlja u skupine koje su nepovoljne za difteriju, novopridošlu djecu, kada nema podataka o cijepljenju. Djeca s negativnom Schickovom reakcijom ne primaju dodatna cijepljenja. Dodatna cijepljenja, bez obzira na imunološki sloj u timu, provode se za djecu s pozitivnim i sumnjivim reakcijama.

Rezultati Shikove reakcije upisuju se u evidencionu karticu preventivna cijepljenja(f. 63) s naznakom datuma postavljanja i ispitivanja reakcije, serije otrova i instituta koji je toksin proizveo.

Za postavljanje Shikove reakcije koristi se razrijeđeni aktivni (nezagrijani) toksin difterije. 0,2 ml sadrži jednu Shik-dozu.

Za postavljanje Schickove reakcije treba koristiti jednogramske (tuberkulinske), pažljivo provjerene štrcaljke s točnim stupnjevanjem, koje ne dopuštaju prolaz tekućine između stijenki štrcaljke i njenog klipa.

Strogo je zabranjeno provoditi Schickovu reakciju u prostorijama u kojima se taj dan provodi docjepljivanje protiv tuberkuloze, kao i koristiti štrcaljke, igle i druge alate koji se koriste u imunizaciji protiv tuberkuloze.

Koža na mjestu ubrizgavanja se obriše vatom navlaženom 70% etilnim alkoholom. Toksin (0,2 ml) se ubrizgava intradermalno u srednji dio palmarna površina obično na lijevoj podlaktici. Uvođenje se provodi polako s poznatim naponom, karakterističnim za intradermalno ubrizgavanje tekućine. Injekcija se vrši pod vrlo blagim nagibom štrcaljke prema podlaktici, gotovo paralelno s površinom kože. Rez igle trebao bi potpuno ući u kožu i sjajiti kroz epidermu. Na mjestu ubrizgavanja trebala bi se formirati bjelkasta, dobro ograničena vezikula (papula) promjera oko 1 cm, koja ima utisak na mjestu folikula dlake („limunova kora“). Ovaj mjehurić (papula) nestaje za 10-15 minuta. Ako se vezikula (papula) ne formira ili prebrzo nestane prilikom ubrizgavanja toksina, to znači da je ubrizgavanje učinjeno nepravilno, duboko, a toksin koji je ušao potkožno možda neće izazvati reakciju. Kao rezultat toga, može se dobiti netočan rezultat.

Reakcija se bilježi nakon 72 ili 96 sati. Rezultati se vrednuju na sljedeći način:

a) Shikova reakcija je pozitivna ako se na mjestu ubrizgavanja toksina pojavi crvenilo i infiltracija. Označen je stupanj reakcije: "+" - ako crvenilo ima promjer od 1 -1,5 cm, (+ +" - ako je 1,5 - 3 cm, "+ + +" - ako je više od 3 cm;

b) Shikova reakcija je negativna, kada nema crvenila i infiltracije na mjestu uboda toksina;

c) Schickova reakcija je dvojbena ako crvenilo i infiltrat tijekom unošenja toksina ili nisu jasno izraženi, ili uz izraženu reakciju, promjer crvenila je približno 0,5 cm (označeno sa "±").

Kontraindikacije za formulaciju Schickove reakcije: spazmofilija, epilepsija, pustularne bolesti, kontakt s pacijentima virusni hepatitis, Bronhijalna astma.

Alergeni i toksini

Dijagnostički lijekovi

Imunoglobulin antipertusis antitoksični ljudski (Rusija)

Pročišćeni koncentrirani tekući konjski serum protiv difterije (Rusija)

Serumi i imunoglobulini

Cjepivo protiv tuberkuloze BCG-M suho (za poštednu primarnu imunizaciju, Rusija)

Cjepivo protiv tuberkuloze (BCG) suho za intradermalnu primjenu (Rusija)

Akt-Khib (Hib-wak, Južna Korea)

Monovakcina protiv pertusisa (Rusija)

Sadrži bakterije pertusisa, konzervans - mertiolat. Koristiti samo prema epidemiološkim indikacijama u žarištima hripavca.

Sadrži 10 mcg polisaharida po dozi hemofilus influence tip b, konjugiran s toksoidom tetanusa, konzervans - trometamol. Koristi se za cijepljenje djece od 2 mjeseca starosti prema epidemiološkim indikacijama.

Mycobacterium bovis BCG-1. Cjepni soj dobiven je dugotrajnim (13 godina) uzgojem tuberkuloznih goveđih mikobakterija u nepovoljnim uvjetima na krumpir-glicerinskoj podlozi s dodatkom žuči. Prijaviti se za specifična prevencija tuberkuloza. Cijepljenje se provodi 5-7 dana života, kada je tijelo slobodno od mikobakterijske infekcije. Sva zdrava djeca, adolescenti i odrasli ispod 30 godina koji negativno reagiraju na tuberkulin podliježu revakcinaciji. Mehanizam imuniteta kod tuberkuloze nije u potpunosti shvaćen. U klinička praksa Glavni kriterij za intenzitet imuniteta cjepiva je prijelaz negativne kožne reakcije na tuberkulin u pozitivnu.

Sadrži žive bakterije cjepnog soja osušene smrzavanjem u 1,2% otopini natrijeva glutamata Mycobacterium bovis BCG-1. Koristi se za štednu specifičnu prevenciju tuberkuloze (primarno cijepljenje) u novorođenčadi u područjima s nepovoljnom situacijom za tuberkulozu.

Sadrži antitijela protiv egzotoksina bacila difterije. Antitoksično djelovanje izražava se u međunarodnim jedinicama (10 000 i 20 000 IU/ml). Koristi se za liječenje bolesnika s difterijom. Osim u terapijske svrhe, antidifterijski serum koristi se za određivanje toksigenosti kultura bacila difterije u reakciji taloženja u gelu.

Sadrži imunološki aktivnu frakciju krvne plazme davatelja s protutijelima na egzotoksin mikroba pertusisa (najmanje 750 IU antitoksičnih antipertusisnih protutijela). Koristi se za liječenje hripavca.

Sadrži pročišćeni toksin difterije u 0,2 ml 1/40 DLM toksina zamorca. Koristi se za intradermalne testove u svrhu imunodijagnostike. Pojedinci razvijaju upalnu reakciju na mjestu ubrizgavanja. Ako krv sadrži više od 0,03 IU antitoksina, test je negativan. Ranije se Schickov test često koristio za identifikaciju osoba osjetljivih na difteriju. Trenutno je, zbog mogućnosti komplikacija, njegova primjena ograničena na stroge epidemijske indikacije.

Toksini (od grčkog toxikon - otrov), tvari bakterijskog podrijetla koje mogu inhibirati fiziološke funkcije, što dovodi do bolesti ili smrti životinja i ljudi. Po kemijskoj prirodi svi su toksini proteini ili polipeptidi. Za razliku od ostalih organskih i anorganskih otrovne tvari Kada toksini uđu u tijelo, uzrokuju stvaranje antitijela.
Kod nekih zaraznih bolesti (difterija, šarlah) djeca se koriste za određivanje intenziteta imuniteta i osjetljivosti djece. intradermalni testovi koristeći odgovarajuće razrijeđene toksine. Pozitivna reakcija (lokalna upala kože u području ubrizgavanja toksina) posljedica je toksičnog djelovanja toksina na kožna tkiva. Negativan rezultat reakcije objašnjava se neutralizacijom toksina ubrizganog u kožu odgovarajućim sadržanim antitoksinom imunološki organizam dovoljno za ovo.
Toksini se dobivaju iz toksigenih sojeva mikroba (bacila difterije ili skarlatinalnog streptokoka) inokulacijom na tekuću hranjivu podlogu (bujon otvorenog ognjišta) nakon čega slijedi filtracija kroz bakterijske filtre. Od dobivenih otrova pripremaju se dijagnostički otrovi Shika (difterija) i Dick (šarlah). Toksini se ubrizgavaju intradermalno, u količini od 0,2 ml (Shika) i 0,1 ml (Dick), u srednji dio unutarnje površine podlaktice.
Anatoksini su filtrati bujonskih kultura toksigenih mikroorganizama koji su posebnim tretmanom izgubili svoju toksičnost, ali su u velikoj mjeri zadržali antigenska i imunogena svojstva izvornih toksina.
Kada se unesu u ljudsko ili životinjsko tijelo, toksoidi uzrokuju stvaranje antitoksičnog imuniteta, ovo im svojstvo omogućuje da se koriste za sprječavanje onih zarazne bolesti, koji se temelje na djelovanju egzotoksina koje izlučuju patogeni, kao i za hiperimunizaciju životinja – proizvođača antitoksičnih seruma.
Bez obzira na vrstu toksoida, njegova imunogenost i antigenost određuju se odgovarajućim svojstvima izvornog toksina. Stoga se u laboratorijima koji proizvode ove lijekove velika pozornost posvećuje stvaranju optimalnih uvjeta za stvaranje toksina.
Za dobivanje toksina visoke čvrstoće potrebni su sojevi koji se odlikuju posebno izraženom sposobnošću stvaranja toksina u umjetnim uvjetima. Nemaju svi sojevi toksigenih bakterija ta svojstva. Za potrebe proizvodnje koriste se sojevi koji su prilagođeni umjetnim okolišima i trajno zadržavaju sposobnost stvaranja toksina.
Kulture tvoraca toksina pohranjuju se ili u osušenom stanju ili na podlogama koje su optimalne za ovu vrstu bakterija. Prije upotrebe za inokulaciju masovnih serija, sojevi se pasiviziraju na mediju koji se koristi za dobivanje toksina.
Uz ostale uvjete, jačina toksina određena je kvalitetom podloge za kulturu, pa laboratoriji obraćaju pažnju na pripremu podloge za kulturu. Sirovine, kemikalije i ostali sastojci koji čine medij podvrgnuti su najtemeljitijoj kontroli u biokemijskim laboratorijima proizvodnih instituta.
Za stvaranje toksina koriste se tekuće hranjive podloge koje uključuju mesnu vodu i proizvode peptičke (Martinova juha, Ramonova podloga) ili triptične (Popeova podloga) digestije mesa.
Proces hidrolize mesa kontrolira se određivanjem ukupnog aminskog dušika i koeficijenta cijepanja proteina koji se izračunava iz omjera aminskog dušika prema ukupnom. Također se koriste kazein bez mesa, polusintetski mediji.
Hranjivoj podlozi namijenjenoj stvaranju toksina dodaju se ugljikohidrati (glukoza, maltoza ili njihova mješavina). Kada se ugljikohidrati fermentiraju, oslobađa se velika količina energije koja je neophodna za procese sinteze koji se odvijaju u kulturi u razvoju. Dodavanje ugljikohidrata dramatično povećava snagu toksina proizvedenih u okolišu.
Osim ugljikohidrata, za stvaranje toksina potrebni su i određeni metali u minimalnim dozama. Stvaranje toksina bacila difterije inhibirano je viškom željeza u okolišu u istoj mjeri kao i njegovom odsutnošću. U prisutnosti optimalne količine željeza u okolišu, stvaranje toksina je naglo pojačano.
Stvaranje toksina se u punoj mjeri odvija pri određenom pH medija. U međuvremenu, tijekom rasta kulture, pH vrijednost se mijenja i može doseći takve pokazatelje koji će spriječiti stvaranje toksina.
Kako bi se eliminiralo ovo okruženje, dodaju se puferske tvari za održavanje željene pH vrijednosti. Jedna od takvih tvari s puferskim svojstvima je natrijev acetat, koji se dodaje juhi u količini od 0,5-0,75%.
Ovisno o biološkim karakteristikama mikroba koji proizvodi toksine, različitim uvjetima reguliran je uzgoj, a posebno prozračivanje okoliša. Bacil difterije stvara toksin u uvjetima maksimalne aeracije, naprotiv, bacil tetanusa i drugi toksigeni anaerobi ne trebaju kisik. Prema ovo je prvi put U drugom slučaju kultura se uzgaja u tankom sloju podloge s velikom površinom kontakta sa zrakom, u drugom slučaju podloga se izlije u visoki sloj i dodaju se razni adsorbenti kisika (vata, suhi eritrociti). dodao.
Temperatura rasta i njezino trajanje variraju za različite mikrobe. Zajedničko procesu stvaranja toksina je potreba za savršenom kontrolom temperature u inkubatoru. Oscilacije u temperaturi nepovoljno utječu na snagu toksina. Stoga su termostati u kojima dolazi do stvaranja otrova opremljeni preciznim termostatima.
U svakom pojedinačnom slučaju trajanje uzgoja kulture određeno je intenzitetom stvaranja toksina na određenoj seriji medija. Kako bi se riješio problem vremena završetka uzgoja, određuje se jačina toksina u mediju u različitim razdobljima uzgoja.
Kada jačina otrova dostigne maksimum, on se odvaja od mikrobnih tijela, filtriranjem kroz posebne bakterijske filtere (anaerobni mikroorganizmi) ili obične papirnate (bacil difterije).
Prevođenje toksičnih filtrata vanatoksina provodi se dugotrajnim izlaganjem formalinu na temperaturi od 39-40 °C. Formalin se spaja sa slobodnim amino skupinama aminokiselina, polipeptidima i proteinima toksina, te stoga gubi svoja toksična svojstva. Prijelaz toksina vanatoksina događa se unutar 3-4 tjedna. Za pravilno stvaranje toksoida važan je pH toksina. Najpovoljnija je neutralna ili blago alkalna reakcija medija.
Anatoksine karakterizira potpuna neškodljivost za životinje. No, kod nepotpune neutralizacije u njima mogu ostati ostaci toksina koji uzrokuju kasna oštećenja u osjetljivom organizmu. Stoga se kod provjere sigurnosti toksoida životinje promatraju dulje vrijeme. Bezopasnost toksoida je nepovratna. Nikakvi učinci ne dovode do obnove izgubljene toksičnosti.
Anatoksini se zadržavaju gotovo u potpunosti antigenska svojstva toksina. Ovo se može provjeriti razne metode in vitro (reakcija flokulacije, reakcija vezanja toksoida) i pokusi na životinjama, u kojima uvođenje toksoida uzrokuje stvaranje odgovarajućih antitoksina i stvaranje antitoksične imunosti.
Anatoksini su postojani; podnose opetovano smrzavanje i odmrzavanje, odolijevaju djelovanju visoka temperatura stabilan tijekom dugotrajnog skladištenja.
Anatoksini osim specifičnih proteina sadrže i balastne tvari iz kojih se mogu osloboditi različitim metodama. Temelje se na sposobnosti toksoida da se talože kada su zasićeni neutralnim solima, solima teški metali, kiseline (klorovodična, trikloroctena, metafosforna), kao i u prisutnosti etilnog i metilnog alkohola na niskim temperaturama. Ove se metode trenutno koriste za dobivanje pročišćenih koncentriranih toksoida.
Toksoidi se adsorbiraju na različite netopljive tvari (fosforne soli, aluminijev hidroksid), od toga se pripremaju sorbirani toksoidi, koji se odlikuju usporenom apsorpcijom u organizmu, zbog čega se može postići intenzivniji imunitet.
Zbog svoje neškodljivosti, visoke antigenosti i imunogenosti, toksoidi su najvrjednije sredstvo u prevenciji i liječenju niza bolesti.
Trenutno su dobiveni toksoidi: difterije, tetanusa, botulina, stafilokoka, dizenterije, iz toksina koje proizvode uzročnici plinske gangrene, kao i iz zmijskog otrova.

REAKCIJA ŠIKA(Schick) predložio je 1913. godine odrediti stupanj osjetljivosti na difteriju. Š. r. izvodi se striktno intradermalnom injekcijom toksina difterije u volumenu od 0,2 cm 3, zaključno s 1/40 Dim (vidi Difterija). Toksin se ubrizgava u kožu lijeve ruke; u kožu desna ruka za kontrolu se unosi ista količina toksina zagrijavana na 100°C 10 minuta. Rezultati injekcije bilježe se nakon 24 i 96 sati, a mogu se primijetiti sljedeći fenomeni: 1. U nedostatku reaktivnih fenomena na mjestu injekcije "kontrolnog" (zagrijanog) toksina, crvenilo i infiltracija se pojavljuju na mjestu injekcije. mjesto aktivnog toksina, popraćeno blagim peckanjem i svrbežom. Ovi se fenomeni razvijaju prvog dana, dostižu maksimum četvrtog dana, zatim nestaju, ostavljajući pigmentaciju kože neko vrijeme. Po veličini crvenila i infiltracije može se procijeniti stupanj reakcije, što je označeno na sljedeći način: + ("sumnjiva" reakcija - s nejasnom infiltracijom i blagim crvenilom), + (s crvenilom u promjeru ne većem od 1,5 cm), + +(ako crvenilo ima promjer od 1,5 do 3 cm) i + + + (ako je crvenilo veće od 3 cm); ova vrsta reakcije naziva se "pozitivna" Sh. 2. U nedostatku bilo kakvih reaktivnih pojava na mjestu ubrizgavanja i zagrijanog i aktivnog toksina, govori se o "negativnom" Shch. 3. Ako su reaktivni fenomeni zabilježeni na obje ruke u istoj mjeri, tada se takav fenomen označava kao "lažni" Sh. Stupanj lažne (s grijanim toksinom) reakcije označava se (kao i pozitivna) s jednim, dva, tri znaka. Reakcija na zagrijani toksin ima neke kvalitativne razlike od reakcije na aktivni toksin: brza pojava i nestanak (obično unutar 36-48 sati) i prevladavanje eksudativnih fenomena nad infiltrativnim. 4. Ako se reaktivni fenomeni bilježe na obje ruke, ali je njihov stupanj različit, tada se govori o "kombiniranom" Sh. toksinu. Zajedničke ideje o suštini Sh. svode se na sljedeće: ako u krvi ispitanika nema antitoksina ili ga sadrži količina manja od / zo -A-E u 1,0 serumu, tada intradermalno ubrizgan toksin uzrokuje reaktivne pojave, koje se nazivaju "pozitivne". III Ako pak postoji dovoljna količina antitoksina u krvi ispitivanog subjekta (po Shiku 1/30, po Beringu 1/hoo i više od AE u 1,0 serumu), tada ovaj potonji neutralizira uneseni toksin. , i "negativan" Sh. Ove izjave su potvrđene sljedećim opažanjem: ako se neutralna mješavina toksina i antitoksina ubrizga subjektu osjetljivom na toksin difterije, tada se u pravilu ne opaža nikakva reakcija na mjestu ubrizgavanja te mješavine. Osim toga, učinjen je niz istovremenih izravnih određivanja količine antitoksina u krvi prema Remerovoj metodi paralelno sa S. R. (Shik, Ramon, Veksel, itd.) Ovi pokusi u većini slučajeva otkrivaju izrazitu ovisnost o rezultat S. R. o količini antitoksina u krvi. Ponekad uočene nedosljednosti između ovih pojava ne mogu poljuljati opće pravilo, jer su prilično rijetke: Jensen, na primjer. uočio prisutnost negativnih Sh. s neznatnim sadržajem antitoksina "I /i 00 AE u 1.0 serumu) u 9% slučajeva. Prilikom ocjenjivanja rezultata Sh. potrebno je uzeti u obzir da se u ranom djetinjstvu negativni Sh. u nedostatku antitoksina u krvi. To je zbog inherentnog ranog djetinjstvo anergija kože. Što se tiče tzv. lažni Sh. i njegove varijante (kombinirani, izopačeni Sh. r.), tj. reakcija kože na zagrijani toksin, onda se objašnjava osjetljivošću tijela na termostabilne metaboličke produkte bacila difterije i hranjive tvari u bujonu. Ova osjetljivost je alergijske prirode. Kao što je pokazao Siegl, sastoji se od dvije komponente - specifične i nespecifične u odnosu na difteriju. Zellerova opažanja (Zoller) pokazala su potpuni identitet lažne reakcije s intradermalnom reakcijom na toksoid (0,2 toksoida, razrijeđen u omjeru 1: 100) je takozvana Zellerova reakcija. Ovisno o rezultatu reakcija na toksin i na toksoid, Zeller sve ljude dijeli u 4 skupine (vidi tablicu). Zeller zamišlja proces imunizacije protiv difterije na sljedeći način: osobe osjetljive na difteriju (I grupa sa Karakteristike grupe Reakcija | Zeller Schlck reakcija f 1 Osjetljivi na II f dlfterija III 1 Imuni na DVF- IV / theria + + + 1 Stadij + ) alergija pozitivna Sh. R.) pri susretu s bacilom difterije (b-n ili prijevoz) ili tijekom umjetne imunizacije, oni su senzibilizirani u odnosu na mikrob i njegove proizvode. Njihova koža izaziva alergijsku reakciju; ali budući da u isto vrijeme još nije razvijena dovoljna količina antitoksina, koža također reagira na aktivni toksin (skupina II s lažnim ili kombiniranim Sh. p.). U budućnosti se količina antitoksina u krvi povećava toliko da reakcija na aktivni toksin postaje negativna, ali alergija i dalje ostaje (skupina III s izopačenim Sh. p.); naposljetku posljednji nestaje i dolazi do snažnog imuniteta karakterističnog za osobe IV skupine (s negativnim Sh. rijeke). Vrijednost Sh. kako su imuno-reakcije određene prevladavajućim pogledima na prirodu imuniteta kod difterije. Po moderne ideje potonji se temelji na prisutnosti dovoljne količine antitoksina u krvi. Ove ideje, kao što je poznato, određuju suvremenu praksu imunizacijske prevencije difterije (toksin-antitoksinske smjese, toksoid). S ove točke gledišta, Sh.R., koji povoljno zamjenjuje glomazan izravna definicija antitoksina u krvi po Re-mer metodi, može se smatrati idealnim načinom utvrđivanja stanja imuniteta, odn. osjetljivost, ljudska na difteriju. Kontroverzno je pitanje minimalne količine antitoksina u krvi potrebnog za postizanje trajne imunosti na difteriju; u svakom slučaju, potrebno je napomenuti relativnu rijetkost difterije u osoba s negativnim Sh. osim toga, može se ukazati na izravnu eksperimentalnu potvrdu ovog problema: Getri, Marshal i Moss (Gu-tnrie, Marshall i Moss) zarazili su osam dobrovoljaca mazanjem grla virulentnom kulturom difterije, od kojih su četiri imala pozitivan Sh. str., a četiri negativna. Kao rezultat toga, 4 osobe prve skupine prošle su kroz tipičnu bolest, od 4 osobe s negativnim Sh. 3 su imala privremeno nositeljstvo bacila difterije bez ikakvih znakova bolesti. Za epidemiološku vrijednost Sh. posvetio velikom broju radova. Iz njih je jasno da GL. R. predstavlja pouzdanu metodu za određivanje stupnja imunološkog sloja kolektiva u odnosu na difteriju. Pokazalo se da ako distribuiramo pozitivne Sh. po dobi, tada se dobiva krivulja (Zingher) dobne osjetljivosti na difteriju, koja se dosta točno podudara s dobnom raspodjelom incidencije difterije. Relativno visok imunitet male dojenčadi (do šest mjeseci) može se objasniti pasivnim prijenosom imunoloških tijela kroz majčino mlijeko. Što se tiče smanjenja osjetljivosti na difteriju s dobi (počevši od prve godine), praćenog nakupljanjem antitoksina u krvi, neki autori (Friedberger i sur.) ovu pojavu smatraju izrazom "fiziološke serogeneze", tj. akumulacija antitoksina događa se u fiziološkom redu, prateći takav od. sazrijevajući odjednom ljudsko tijelo, i drugi autori (Zinger, Dedley, Ramon i drugi) vjeruju da ljudi nakupljaju antitoksin u krvi kao rezultat očite, a češće "tihe infekcije> difterije (vidi sliku). Epidemiološka vrijednost Sh. sastoji se također u činjenici da ga je zgodno koristiti za odabir osoba koje su predmet (u slučaju pozitivan rezultat) aktivna imunizacija protiv difterije. Obično se koristi kod djece

"-~-" $ osobe s antitoksinom u krvi (prema Greeru)

°--«>% osoba o pozitivnoj, reakciji. Shika (prema Parku i Zkngeru) šipke - incidencija difterije Raspodjela prema dobi: osobe s antitoksinom u krvi (u %); osobe s pozitivnom Schickovom reakcijom (u %); učestalost difterije (°/ooo svake dobi). starijih od 5 godina, imajući u vidu relativnu rijetkost negativnih Sh. mlađi od 5 godina. Konačno III. R. Također se koristi kao objektivna kontrola učinkovitosti zaštitnih cijepljenja protiv difterije. Ovu učinkovitost dokazuje prijelaz pozitivnog (prije cijepljenja) Sh. negativan nakon cijepljenja (obično 6 tjedana nakon zadnjeg cijepljenja). Tehnika proizvodnje Sh.R.: 1. Da biste pripremili potrebno razrjeđenje toksina u potrebnom volumenu, počnite s Dim toksinom. Recimo toksin Dim = 0,0032. Za pripremu toksina koji sadrži I / 4l) Dim u 0,2 volumena, postupite na sljedeći način: uzmite 1OODlm, u ovom slučaju = 0,32, i dodajte fiziološku otopinu do 10,0, tj. 9,68. Uzmite 1,0 ovog razrjeđenja (tj. 10 Dim) i dodajte u 79,0 fiziol. riješenje. Tada se u 80,0 drugog razrjeđenja nalazi 10.Dim; u 1 cm 3 dakle -V" Dim, a u 0,2-Vio Dim. Pri svakom razrjeđivanju potrebno je uzeti svježu suhu pipetu, oprati je najmanje 10 puta. Za to je potrebna posebna preciznost u mjerenju i točnost pipeta (polovica tako pripremljene otopine toksina ulije se u posebnu tikvicu i stavi u kipuću vodenu kupelj na 10 minuta; tako se dobije zagrijani toksin za “kontrolu”) . S obzirom na to da je toksin, razrijeđena fiziol. otopine, brzo gubi svoju aktivnost, pogodnije je uzimati t. otopina boratnog pufera (vidi kurac reakcija) u kojoj razrijeđeni toksin zadržava snagu nekoliko mjeseci. 2. Injekcija se provodi strogo intradermalno, najprikladnije pomoću tuberkulinske štrcaljke s vrlo tankom platinastom iglom (br. 18, 19). Igla bi trebala imati kratku bradu. Brada se mora držati prema van tijekom ubrizgavanja. Uvođenje toksina se vrši polako uz poznatu napetost, karakterističnu za intradermalno ubrizgavanje tekućine, a kao rezultat toga na mjestu ubrizgavanja nastaje dobro ograničena vezikula (Quaddel) koja ima udubljenja na mjestu dlake. folikula. 3. Aktivni toksin se ubrizgava u kožu podlaktice lijeve ruke, zagrijani toksin se ubrizgava u kožu podlaktice desne ruke. U masovnoj proizvodnji III. R. preporuča se imati dva liječnika istovremeno - jedan ubrizgava aktivni, drugi zagrijani toksin. 4. Brojanje Sh. radi se dva puta: u 24 sata zbog lažnih reakcija i u 96 sati u slučaju prave Sh. doseže vrhunac. Lit.: Zdrodovsky P., Moderni problemi specifične profilakse difterije, Arkh. biol. Sciences, vol. XXXV, ser. Ah, sv. 2, 1934.; Doull J., Čimbenici koji utječu na selektivnu distribuciju difterije, Journ. ol spriječiti, med., v. IV, 1930.; Frost W., Infekcija, imunitet i bolest u epidemiologiji difterije, Ibid., v. II, 1928.; Meerseman, Fries et Renard, La diphterie chez les suits a reakcija de Schick negative, Compt. rend, de la soc. de biol., v. CXII, 1933.; Park W., Imunizacija toksinom i antitoksinom protiv difterije, Journ. amer. med. Ass., v. LXXIX, str. 1584, 1922; Rosling E., Die Schickreaktion und Ihre Bedeutung, Seuchen-bekamp-fung, B. VII, 1930.; Schick B., Die Diphtherietoxin- Hautreaktion des Menschen als Vorprobe des prophylak-tisohen Diphlherieheilseruminielition, M "inch. med. Wo-chenschr., 1913, br. 47; S iegl J., Zur Frage der Entste-hung der Pseudoreaktion bei der Diphtherietoxinreaktion nach Schick, Arch. f. Kinderheilk., B. XCVÍII, 1932; Z i n g he r A., ​​​​The Schickov test, Journal of Amer. med. Ass., v. LXXVÍII, 1922; Zoeller C, L "intradermo-reaction al "anatoxine diphterique ou anatoxf-reaction, Compt. rend. de la Soc. de biol., v. XCI, 1924. Vidi također lit. uz čl. Šarlah. G. Orlov.

Citokemijske metode nastaviti identifikaciju kemijskih i enzimskih tvari u stanicama, koristeći za to reakcije boja. Citokemikalije čuvaju struktura stanice, što omogućuje identifikaciju stanica i intracelularnu lokalizaciju ispitivanog spoja. Zato se u hematologiji prednost ne daje biokemijskim, napornim, razarajućim staničnim strukturama vrlo heterogene stanične populacije, već citokemijskim metodama.

Citokemija dokazao da među morfološki identičnim stanicama postoje značajne kemijske i enzimske razlike.

Glikogen (CHIC reakcija) (PAS) - Hotchkiss - Mac Minus metoda

Schickovo načelo. Polisaharidi se otkrivaju reakcijom koja oksidira alkoholne skupine, koje se pretvaraju u aldehidne skupine, a potonje se identificiraju obojenom reakcijom s Schiffovim reagensom.

Reagensi za PAS reakciju: 1. Alkoholno-formalinska smjesa za fiksiranje: 9 dijelova apsoluta etil alkohol+1 dio 40% formalina; držati na +4°.

2. Periodna kiselina, 1% vodena otopina. Otopina je bezbojna. Čuvati u smeđoj staklenoj boci na tamnom mjestu na laboratorijskoj temperaturi. Požutjela otopina nije primjenjiva.

3. Schiffov reagens. Razrijediti 1 g bazičnog fuksina u 200 ml destilirane vode na točki vrenja. Mućkati 5 minuta, ohladiti na temperaturu od 50°, filtrirati i dodati 20 ml normalne klorovodične kiseline. Ohladi se na 25°, doda se 2 g natrijevog ili kalijevog metabisulfita, čime se potpuno dobije otopina. Otopina treba stajati jedan dan u tami i na hladnom (+4°). Zatim dodajte 2 gr aktivni ugljik, razgovor 1 min. i filter.
Dobiveni filtrat je bistar i bezbojan. Dopuštena je blago žućkasta nijansa; ako otopina postane ružičasta, postaje neprimjenjiva. Čuvati na +4°C u hermetički zatvorenoj bočici od smeđeg stakla.

4. Zeleno svjetlo -1% vodena otopina.

5. Dijastaza: neukapljena ljudska slina ili 0,1% otopina amilolitičko-dijastatskog enzima u fiziološkoj otopini.

Tehnika Schickove reakcije

1) 10-minutna fiksacija razmaza mješavinom alkohola i formalina; pranje destiliranom vodom;
2) oksidacija s 1% otopinom periodne kiseline, 10 min.; pranje destiliranom vodom;
3) bojenje Schiffovim reagensom u poklopljenoj posudi, u tamnim i hladnim uvjetima, 2 sata; pranje tekućom vodom;
4) kontrastno bojenje 1% zeleno svjetlo tijekom 1 minute; ispiranje tekućom vodom.

Kontrola prikvačena mazati podvrgnuti inkubaciji dijastaze, 60 min. na sobnoj temperaturi za selektivno uklanjanje glikogena. Nakon pranja destiliranom vodom, obrađuje se na uobičajeni način.

Procjena rezultata PAS reakcije

Glikogen obojen grimizom crvena boja, pojavljuje se kao zrnca ili raspršena. Za kontrolu reakcije koriste se zreli granulociti razmaza. Izvan glikogena CHIC pozitivna reakcija daju druge tvari ugljikohidratne prirode, kao što su mucin, mukoproteini, cerebrozidi, fibrin. Glikogen se razlikuje od ovih sastojaka prethodnim tretmanom dijastazom, nakon čega se glikogen više ne boji.

U granulociti glikogen je već raspršen u fazi promijelocita i počinje se povećavati kako sazrijeva. U normalnim uvjetima, limfociti su negativni, ili njih 20% može sadržavati nekoliko malih zrnaca glikogena. Monociti su negativni ili imaju finu granulaciju.

Intenzitet bojanje određeno polukvantitativno. U reakciji se CHIC ogleda u obliku glikogenskog indeksa, odnosno prosječnog indeksa reakcije (Astaldi). Normalan glikogen se kreće od 0,10 do 0,30. Obično samo patološki limfociti imaju stupanj opterećenja veći od 3.

Navedena je kao metoda Schickove reakcije:
a) Prilikom postavljanja diferencijalna dijagnoza pojedini citološki tipovi akutne leukemije:
- Mijeloblasti i promijelouitis su PAS-negativni ili dobivaju slabu difuznu boju. Auerova tijela daju pozitivnu reakciju, koja slabi nakon probave sa slinom.
- Limfoblasti kod akutne leukemije i limfosarkoma daju oštru PAS-pozitivnu reakciju u obliku zrnaca ili velikih blokova glikogena.
- Eritroblasti u eritremiji i akutnoj eritroleukemiji daju oštro pozitivnu raspršenu ili granularnu reakciju, za razliku od normalnih eritroblasta koji su PAS-negativni;
- Monocitoidni blasti su nedosljedno slabo pozitivni, s finom granularnošću.

b) U svrhu dijagnostike i praćenja učinkovitosti liječenja kronične limfatične leukemije: povišena razina glikogena ukazuje na teški oblik bolesti i lošu prognozu.
Rast glikogena u patološkim limfocitima, fenomen koji nije karakterističan za leukemiju, objašnjava se povećanjem metaboličke aktivnosti u bilo kojoj vrsti limfoidne proliferacije.

c) Razlikovati Gaucherove stanice od ostalih makrofaga s nakupljanjem.