Reakcija neizravne ili pasivne hemaglutinacije (RNHA ili RPHA) osjetljivija je i specifičnija od reakcije aglutinacije. Ova se reakcija također koristi u dva smjera.

1) Za otkrivanje protutijela u krvnom serumu bolesnika koriste se eritrocitni dijagnostikumi u kojima se antigen adsorbira na površini eritrocita tretiranih taninom. U odnosu na ovu reakciju češće se koristi termin RPHA.

Ispitivani serum razrijedi se u jažicama plastičnih pločica i doda eritrocitni dijagnostikum. Uz pozitivnu reakciju, duž stijenki rupice pojavljuje se tanki film u obliku "čipkastog kišobrana", s povratni udar- gusti sediment eritrocita u obliku "gumbića".

2) Za dokazivanje toksina i bakterijskih antigena u ispitivanom materijalu koriste se eritrocitni dijagnostikumi antitijela, dobiveni adsorpcijom antitijela na eritrocite. U odnosu na ovu reakciju češće se koristi termin RNGA. Na primjer, uz pomoć dijagnostikuma antitijela otkriva se antigen bacila kuge, egzotoksin difterije, egzotoksin botulina.

Coombsova reakcija (aptiglobulinski test)

Reakcija se koristi za otkrivanje nepotpunih antitijela, na primjer, antitijela na Rh faktor. Testirani serum dodaje se Rh + eritrocitima, u kojima se očekuje prisutnost nepotpunih antitijela na Rh faktor. Vezana za eritrocite, nepotpuna protutijela ne uzrokuju aglutinaciju, budući da imaju samo jedno aktivno središte. Zatim dodajte antiglobulinski serum koji sadrži antitijela na ljudske globuline. U kombinaciji s nepotpunim protutijelima, antiglobulinski serum uzrokuje aglutinaciju eritrocita.

reakcija taloženja

Bit reakcije je precipitacija (taloženje) antigena pod djelovanjem specifičnih antitijela. Za postizanje vidljive reakcije neophodna je prisutnost elektrolita. Antigen u reakciji taloženja su molekularno dispergirane tvari.

Prstenasta reakcija taloženja smješteni u uske taložne cijevi. U epruvetu se ulije imunološki serum, na koji se pažljivo nanosi ispitni materijal. U prisutnosti antigena u njemu, na granici dviju tekućina nastaje neprozirni prsten taloga.

Reakcija se koristi u sudska medicina odrediti vrste bjelančevina u mrljama krvi, u sjemenu itd.; za određivanje antigena u dijagnostici antraksa (Ascolijeva reakcija), meningitisa i drugih infekcija; u sanitarnim i higijenskim istraživanjima - utvrditi krivotvorinu prehrambeni proizvodi. Imunoprecipitirajući serumi dobivaju se imunizacijom životinja odgovarajućim antigenom. Na primjer, ljudski protein koji taloži serum dobiva se imunizacijom zeca ljudskim proteinom. Titar taloženog seruma je najveće razrjeđenje antigena s kojim reagira. Serum se obično koristi nerazrijeđen ili razrijeđen u omjeru 1:5.

Reakcija taloženja agar gela provodi na više načina. Ovo je reakcija dvostruke imunodifuzije, reakcija radijalne imunodifuzije, reakcija imunoelektroforeze.

Reakcija dvostruke imunodifuzije(prema Ouchterlonyju). Otopljeno agar gel ulije se u Petrijevu zdjelicu i nakon stvrdnjavanja se izrezuju rupice. Antigen se stavlja u neke jažice, imuni serumi se stavljaju u druge, koji difundiraju u agar, stvarajući talog u obliku bijelih pruga na mjestu susreta.

Reakcija radijalne imunodifuzije(prema Manciniju). Imuni serum dodaje se otopljenom agar gelu, izlije u posudu. Nakon što se agar skrutne, u njemu se izrezuju jažice i u njih se stavljaju antigeni koji, difundirajući u agar, formiraju prstenaste taložne zone oko jažica. Što je veća koncentracija antigena, to je veći promjer prstena. Reakcija se koristi, na primjer, za određivanje različitih klasa imunoglobulina u krvi. Kao antigeni u ovoj reakciji djeluju imunoglobulini klasa IgG, IgM, IgA, a antitijela protiv njih sadržana su u specifičnim monoreceptorskim serumima.

Imunoelektroforeza. Elektroforeza proteinskih antigena provodi se u agar gelu. Taloženi serum se uvodi u žlijeb, koji ide paralelno sa smjerom kretanja proteina. Antigeni i antitijela difundiraju u agar, a na mjestu susreta formiraju se precipitacijske linije.

Imunološke reakcije lize

Antigen (eritrociti ili bakterije) u kombinaciji sa specifičnim antitijelima stvara imunološki kompleks na koji je vezan komplement (C1), a aktivacija komplementa se odvija klasičnim putem. Aktivirani komplement razlaže crvene krvne stanice (hemoliza) ili bakterije (bakterioliza). Reakcija bakteriolize koristi se za identifikaciju Vibrio cholerae.

reakcija hemolize. Antigen u reakciji su eritrociti, antitijela (hemolizini) sadržani su u hemolitičkom serumu. Hemolizini se vežu za eritrocite, dolazi do aktivacije komplementa koji lizira eritrocite. Mutna suspenzija eritrocita pretvara se u prozirnu svijetlo crvenu tekućinu - "lakiranu krv". Budući da se reakcija hemolize javlja samo u prisutnosti komplementa, ona se koristi kao indikator za dokazivanje komplementa.

Lokalna reakcija hemolize u gelu(Jerneova reakcija) - varijanta reakcije hemolize. Služi za određivanje broja stanica koje stvaraju antitijela (AFC) u slezeni i limfnim čvorovima.

Otopljeni agar gel pomiješa se sa suspenzijom stanica slezene i eritrocita, a nakon što se agar skruti dodaje se komplement. Oko svake stanice koja proizvodi hemolizin formira se zona hemolize. Broj takvih zona određuje broj stanica koje proizvode hemolizin.

Reakcija neizravne (pasivne) hemaglutinacije (RIHA) temelji se na činjenici da eritrociti, ako se na njihovu površinu adsorbira topljivi antigen, stječu sposobnost aglutinacije u interakciji s protutijelima na adsorbirani antigen. RNGA shema je prikazana na sl. 34. RNHA se široko koristi u dijagnostici brojnih infekcija.

Riža. 34. Shema reakcije pasivne hemaglutinacije (RPHA). A - dobivanje dijagnostikuma eritrocita: B - RPHA: 1 - eritrocit: 2 - antigen koji se proučava; 3 - dijagnostikum eritrocita; 4 - antitijelo na proučavani antigen: 5 - aglutinirati

Postavka reakcije. Ispitni serum se zagrijava 30 minuta na 56 ° C, razrijedi uzastopno u omjeru 1:10 - 1:1280 i ulije u 0,25 ml u epruvete ili jažice, gdje se zatim dodaju 2 kapi eritrocitnog dijagnostikuma (eritrociti s adsorbiranim antigenom na njima).

Kontrole: suspenzija eritrocitnog dijagnostikuma s očito imunološkim serumom; suspenzija dijagnostikuma s normalnim serumom; suspenzija normalnih eritrocita s ispitivanim serumom. U prvoj kontroli treba doći do aglutinacije, u drugoj i trećoj ne.

Uz pomoć RIGA-e moguće je odrediti nepoznati antigen ako su poznata antitijela adsorbirana na eritrocitima.

Reakcija hemaglutinacije može se namjestiti u volumenu od 0,025 ml (mikrometoda) pomoću Takachi mikrotitra.

Kontrolna pitanja

1. Što znači pozitivan RGA nalaz između eritrocita i ispitanog materijala na prisutnost virusa?

2. Hoće li doći do aglutinacije eritrocita ako im se doda virus i odgovarajući serum? Kako se zove reakcija koja otkriva ovu pojavu?

Vježbajte

Razmotrite i registrirajte rezultat RIGA.

reakcija taloženja

U reakciji taloženja taloži se specifični imunološki kompleks koji se sastoji od topljivog antigena (lizat, ekstrakt, hapten) i specifičnog protutijela u prisutnosti elektrolita.

Mutni prsten ili talog nastao kao rezultat ove reakcije naziva se talog. Ova se reakcija razlikuje od reakcije aglutinacije uglavnom u veličini čestica antigena.

Precipitacijski test obično se koristi za određivanje antigena u dijagnostici niza infekcija ( antraks, meningitis, itd.); u sudskoj medicini - za određivanje vrste krvi, sperme itd.; u sanitarnim i higijenskim studijama - pri utvrđivanju krivotvorenja proizvoda; uz njegovu pomoć odrediti filogenetski odnos životinja i biljaka. Za reakciju vam je potrebno:

1. Antitijela (precipitini) - imunološki serum s visokim titrom antitijela (ne nižim od 1:100 000). Titar taloženog seruma određen je najvećim razrjeđenjem antigena s kojim reagira. Serum se obično koristi nerazrijeđen ili razrijeđen u omjeru 1:5 - 1:10.

2. Antigen - otopljene tvari proteinske ili lipoidne polisaharidne prirode (potpuni antigeni i hapteni).

3. Izotonična otopina.

Glavne metode za provođenje reakcije taloženja su: prstenasta reakcija taloženja i reakcija taloženja u agaru (gelu).

Pažnja! Sve komponente uključene u reakciju taloženja moraju biti potpuno prozirne.

Prstenasta reakcija taloženja. U epruvetu za taloženje doda se 0,2-0,3 ml (5-6 kapi) seruma pomoću Pasteurove pipete (serum ne smije padati na stijenke epruvete). Antigen se pažljivo nanosi na serum u istom volumenu, izlijevajući ga tankom Pasteur-ovom pipetom uz stijenku epruvete. Epruveta se drži u nagnutom položaju. Pravilnim raslojavanjem treba dobiti jasnu granicu između seruma i antigena. Pažljivo, da ne dođe do miješanja tekućine, epruvetu postavite u stativ. Na pozitivan rezultat reakcija na granici antigena i antitijela stvara mutni "prsten" - talog (vidi sliku 48).

Nakon reakcije slijedi nekoliko kontrola (Tablica 18). Redoslijed unošenja reakcijskih sastojaka u epruvetu vrlo je važan. Ne možete sloj seruma na antigen (u kontroli - na izotoničnoj otopini), budući da je relativna gustoća seruma veća, potonut će na dno epruvete, a granica između tekućina neće biti otkrivena.

Tablica 18

Bilješka. + prisutnost "prstena"; - nedostatak "prstena".

Rezultati se bilježe nakon 5-30 minuta, u nekim slučajevima nakon sat vremena, kao i uvijek, počevši od kontrola. "Prsten" u 2. epruveti označava sposobnost imunološkog seruma da stupi u specifičnu reakciju s odgovarajućim antigenom. U 3.-5. epruvetama ne bi trebalo biti "prstenova" - nema protutijela i antigena koji odgovaraju jedni drugima. "Prsten" u 1. epruveti - pozitivan rezultat reakcije - označava da ispitivani antigen odgovara uzetom imunološkom serumu, nepostojanje "prstena" ("prsten" samo u 2. epruveti) ukazuje na njihovu nedosljednost - negativan rezultat reakcije.

Reakcija taloženja u agaru (gelu). Osobitost reakcije je da se interakcija antigena i antitijela odvija u gustom mediju, tj. U gelu. Nastali talog daje mutnu traku u debljini medija. Odsutnost trake ukazuje na neusklađenost između komponenti reakcije. Ova reakcija ima široku primjenu u biomedicinskim istraživanjima, posebice u proučavanju stvaranja toksina u uzročniku difterije.

Kontrolna pitanja

1. Koja je glavna razlika između reakcije aglutinacije i taloženja?

2. Zašto se mutni sastojci ne mogu koristiti u reakciji taloženja?

Vježbajte

1. Postavite prstenastu reakciju taloženja i nacrtajte rezultat.

2. Proučite prirodu interakcije antigena s protutijelom u reakciji taloženja na agaru, nacrtajte rezultat (uzmite čašu od učitelja).

Reakcija lize (imunološka citoliza)

Imunološka liza je otapanje stanica pod utjecajem protutijela uz obvezno sudjelovanje komplementa. Za reakciju vam je potrebno:

1. Antigen – mikrobi, eritrociti ili druge stanice.

2. Antitijelo (lizin) – imunološki serum, rjeđe serum bolesnika. Bakteriolitički serum sadrži protutijela koja sudjeluju u razgradnji bakterija; hemolitički - hemolizini koji doprinose razgradnji crvenih krvnih stanica; za lizu spiroheta potrebni su spirohetolizini, stanica - itolizini itd.

3. Nadopuniti. Većina komplementa u serumu zamorci. Ovaj serum (mješavina nekoliko životinja) obično se koristi kao nadopuna. Svježi (nativni) komplement je nestabilan i lako se uništava zagrijavanjem, mućkanjem, skladištenjem, pa se može upotrijebiti najviše dva dana nakon primitka. Za očuvanje komplementa dodaje mu se 2%. Borna kiselina i 3% natrijevog sulfata. Ovaj dodatak može se čuvati na 4°C do dva tjedna. Češće se koristi suhi komplement. Prije upotrebe otopi se u izotoničnoj otopini do izvornog volumena (naznačenog na etiketi).

4. Izotonična otopina.

Reakcija hemolize(Tablica 19). Za reakciju vam je potrebno:

1. Antigen - 3% suspenzija ispranih ovčjih eritrocita u količini od 0,3 ml sedimenta eritrocita i 9,7 ml izotonične otopine.

2. Antitijela - hemolitički serum (hemolizin) protiv eritrocita ovaca; obično se priprema u proizvodnji, liofilizira i titar je naznačen na etiketi.

Titar hemolizina je najveće razrjeđenje seruma pri kojem dolazi do potpune hemolize 3%-tne suspenzije eritrocita u prisutnosti komplementa. Za reakciju hemolize hemolizin se uzima u trostrukom titru, tj. razrijedi se 3 puta manje nego prije titra. Na primjer, ako je titar seruma 1:1200, serum se razrjeđuje 1:400 (0,1 ml seruma* i 39,9 ml izotonične fiziološke otopine). Višak hemolizina je neophodan, budući da se dio može adsorbirati drugim komponentama reakcije.

* (Ne smije se uzimati manje od 0,1 ml seruma - trpi točnost mjerenja.)

3. Komplement se razrijedi 1:10 (0,2 ml komplementa i 1,8 ml izotonične fiziološke otopine).

4. Izotonična otopina.

Tablica 19. Shema reakcije hemolize

Računovodstvo za rezultate. S pravilno postavljenom reakcijom u 1. epruveti doći će do hemolize - njen sadržaj će postati proziran. U kontrolama tekućina ostaje mutna: u 2. epruveti nedostaje komplement za početak hemolize, u 3. epruveti nema hemolizina, u 4. epruveti nema ni hemolizina ni komplementa, u 5. epruveti antigen ne odgovara antitijelu,

Po potrebi se hemolitički serum titrira prema sljedećoj shemi (Tablica 20).

Prije titracije priprema se početno razrjeđenje seruma 1:100 (0,1 ml seruma i 9,9 ml izotonične fiziološke otopine) iz kojeg se prave potrebna razrjeđenja, npr.

Od ovih razrjeđenja, 0,5 ml seruma dodaje se u epruvete za titracijsko iskustvo, kao što je prikazano u tablici. 20.

Tablica 20. Shema titracije hemolitičkog seruma (hemolizin)

U primjeru danom u tablici. 20, titar hemolitičkog seruma je 1:1200.

Kada se koristi svježi hemolitički serum, mora se inaktivirati kako bi se uništio njegov komplement. Da bi se to postiglo, zagrijava se 30 minuta na 56 ° C u vodenoj kupelji ili u inaktivatoru s termostatom. Posljednja metoda je bolja: eliminira mogućnost pregrijavanja seruma, tj. njegove denaturacije. Denaturirani serumi nisu prikladni za testiranje.

reakcija bakteriolize. U ovoj se reakciji bakterije komplementiraju u prisutnosti odgovarajućeg (homolognog) seruma. Shema reakcije u osnovi je slična shemi reakcije hemolize. Razlika je u tome što se nakon dvosatne inkubacije sve epruvete nasaju na Petrijeve zdjelice s medijem pogodnim za mikroorganizam uzet u pokusu kako bi se utvrdilo je li liziran. S pravilno postavljenim iskustvom u usjevima iz 2.-5. epruvete (kontrole), trebao bi postojati obilan rast. Izostanak rasta ili slab rast kulture iz 1. epruvete (pokus) ukazuje na smrt mikroba, odnosno da su homologni antitijelu.

Pažnja! Reakcija bakteriolize mora se provesti u aseptičnim uvjetima.

Kontrolna pitanja

1. Što će se dogoditi s eritrocitima ako se umjesto izotonične otopine natrijeva klorida koristi destilirana voda? Što je u pozadini ovog fenomena?

2. Kakva će se reakcija dogoditi kada eritrociti stupe u interakciju s homolognim imunološkim serumom u nedostatku komplementa?

Vježbajte

Postavite reakciju hemolize. Zabilježite i nacrtajte rezultat.

Slične informacije.

Reakcija neizravne hemaglutinacije (RIGA).

RIGA se koristi u dvije verzije: s poznatim antigenima za otkrivanje antitijela s poznatim antitijelima za otkrivanje hipertenzije. Ova reakcija je specifična i koristi se za dijagnosticiranje bolesti uzrokovanih bakterijama i rikecijama. Za provođenje RIGA koriste se dijagnostikumi eritrocita, pripremljeni adsorpcijom AG ili AT na eritrocitima, ovisno o svrsi studije (slika 10.3). U pozitivnim slučajevima stupanj aglutinacije eritrocita označen je plusevima. Četiri plusa ocjenjuju reakciju koja ima oblik tankog filma slijepljenih eritrocita (kišobran) koji prekriva dno epruvete; prisutnost filma s nazubljenim čipkastim rubovima označena je s dva plusa. Titar se uzima kao granično razrjeđenje ispitivanog materijala, koje je izazvalo aglutinaciju eritrocita za dva plusa.

Riža. 10.3.

1 -eritrociti, 2 - eritrocitni AG, 3 - konjugirani AG, 4-AT

RGA i reakcija inhibicije hemaglutinacije (RTGA).

Kao što je već navedeno, RGA se temelji na sposobnosti eritrocita da se lijepe zajedno kada se na njih adsorbiraju određeni antigeni. Kao ispitni materijal za hemaglutinaciju koriste se alantois, amnionska tekućina, suspenzija korionsko-alantoisnih membrana pilećih embrija, suspenzije i ekstrakti kultura ili organa životinja zaraženih virusima, nativni infektivni materijal. RGA nije serološka reakcija, jer se javlja bez sudjelovanja imunološkog seruma i koristi se za odabir radnog razrjeđenja AG za postavljanje RTGA ili prisutnosti AG (virusa) u ispitivanom materijalu (na primjer, kod gripe). U reakciji se koriste eritrociti životinja, ptica, ljudi I (0) krvne grupe. Za postavljanje približnog RGA, kap 5%-tne suspenzije eritrocita i kap ispitivanog materijala nanese se na predmetno stakalce i dobro se promiješa. Uz pozitivan rezultat, nakon 1-2 minute makroskopski promatrati pojavu flokulentne aglutinacije eritrocita. Za postavljanje RHA u proširenom nizu u jažice polistirenskih ploča, pripremaju se dvostruko veća razrjeđenja ispitnog materijala na fiziološka otopina u volumenu od 0,5 ml. U sve epruvete dodaje se 0,5 ml 0,25-1% suspenzije eritrocita. Rezultati se uzimaju u obzir nakon potpune sedimentacije eritrocita u kontroli (eritrociti + fiziološka otopina). Reakcija se uzima u obzir prirodom sedimenta eritrocita. U pozitivnim slučajevima stupanj aglutinacije označen je plusevima. Četiri plusa ocjenjuju reakciju, koja ima oblik tankog filma slijepljenih eritrocita koji prekriva dno epruvete (kišobran), reakcija s prazninama u filmu označena je s tri plusa, prisutnost filma s nazubljenim čipkastim rubovima slijepljenih eritrocita označena je s dva plusa, flokulentan sediment eritrocita okružen zonom grudica aglutiniranih eritrocita. odgovara jednom plusu. Oštro izražen sediment eritrocita, koji se ne razlikuje od kontrole, pokazuje odsustvo aglutinacije. Titar se uzima kao granično razrjeđenje ispitivanog materijala, koje je izazvalo aglutinaciju eritrocita za dva plusa. Ako je rezultat RHA pozitivan, ispitivanje se nastavlja određivanjem tipa izoliranog virusa pomoću HA RT sa serumima specifičnim za tip. RTGA se temelji na sposobnosti antiseruma da suzbija virusnu hemaglutinaciju, budući da virus neutraliziran specifičnim antitijelima gubi sposobnost aglutinacije crvenih krvnih stanica. Za aproksimativno tipiziranje virusa koristi se metoda kapanja na staklo. Za konačno određivanje tipske pripadnosti izoliranog virusa i titraciju protutijela u serumu, ekspandirani RTHA se stavlja u epruvete ili u jažice. U tu svrhu pripremaju se dvostruka razrjeđenja seruma u fiziološkoj otopini i ulijevaju u 0,25 ml. U razrjeđenja seruma dodaje se jedna kap materijala koji sadrži virus i jedna kap 1% suspenzije eritrocita. Kod RTGA za određivanje tipa virusa koriste se tipospecifični serumi koji se dodaju jednakom volumenu radnog razrjeđenja AG. Tipska pripadnost izoliranog virusa utvrđuje se specifičnim imunološkim serumom koji je pokazao najveći titar protutijela na ovaj virus. RGA i RTGA naširoko se koriste za dijagnostiku virusne infekcije (krpeljni encefalitis, gripa, itd.) kako bi se otkrila specifična protutijela i identificirali mnogi virusi prema njihovim antigenima.

Reakcija neizravne ili pasivne hemaglutinacije (IPHA)

Ovaj odgovor je osjetljiviji od reakcija aglutinacije a koristi se u dijagnostici infekcija uzrokovanih bakterijama, rikecijama, protozoama i drugim mikroorganizmima.

RPGA vam omogućuje otkrivanje male koncentracije protutijela.

Ova reakcija uključuje štavljene ovčje eritrocite ili ljudske eritrocite s krvnom grupom I, senzibilizirane antigenima ili antitijelima.

Ako se u ispitivanom serumu otkriju antitijela, tada se koriste eritrociti senzibilizirani antigenima (eritrocitni dijagnostikum).

U nekim slučajevima, ako je potrebno odrediti različite antigene u ispitivanom materijalu, koriste se eritrociti senzibilizirani imunoglobulinima.

Rezultati RPHA uzimaju se u obzir prema prirodi sedimenta eritrocita.

Pozitivnim se smatra rezultat reakcije u kojem eritrociti ravnomjerno pokrivaju cijelo dno epruvete (obrnuti kišobran).

S negativnom reakcijom, eritrociti u obliku malog diska (gumba) nalaze se u središtu dna epruvete.

Reakcija aglutinacije (RA)

Zbog svoje specifičnosti, jednostavnosti postavljanja i demonstrativnosti, reakcija aglutinacije postala je raširena u mikrobiološkoj praksi za dijagnostiku mnogih zarazne bolesti: tifus i paratifus (Vidalova reakcija), tifus (Weiglova reakcija) itd.

Reakcija aglutinacije temelji se na specifičnosti međudjelovanja protutijela (aglutinina) s cijelim mikrobnim ili drugim stanicama (aglutinogeni). Kao rezultat te interakcije nastaju čestice – nakupine koje se talože (aglutiniraju).

U reakciji aglutinacije mogu sudjelovati i žive i mrtve bakterije, spirohete, gljivice, protozoe, rikecije, kao i eritrociti i druge stanice.

Reakcija se odvija u dvije faze: prva (nevidljiva) je specifična, veza antigena i antitijela, druga (vidljiva) je nespecifična, vezivanje antigena, tj. stvaranje aglutinata.

Aglutinat nastaje kada se jedno aktivno središte dvovalentnog protutijela spoji s determinantnom skupinom antigena.

Reakcija aglutinacije, kao i svaka serološka reakcija, odvija se u prisutnosti elektrolita.

Izvana, manifestacija pozitivne reakcije aglutinacije je dvojaka. Kod mikroba bez biča, koji imaju samo somatski O-antigen, same mikrobne stanice se izravno lijepe zajedno. Takva se aglutinacija naziva sitnozrnatom. Javlja se unutar 18 - 22 sata.

Flagelarni mikrobi imaju dva antigena - somatski O-antigen i flagelarni H-antigen. Ako se stanice slijepe bičevima, nastaju velike rahle ljuskice i takva reakcija aglutinacije naziva se grubo zrnata. Dolazi za 2-4 sata.

Reakcija aglutinacije može se postaviti kako u svrhu kvalitativnog i kvantitativnog određivanja specifičnih protutijela u krvnom serumu bolesnika, tako i u svrhu određivanja vrste izoliranog uzročnika. hemaglutinacija microbiological infectious

Reakcija aglutinacije može se postaviti kako u detaljnoj verziji, koja omogućuje rad sa serumom razrijeđenim na dijagnostički titar, tako iu varijanti postavljanja orijentacijske reakcije, koja u načelu omogućuje otkrivanje specifičnih protutijela ili određivanje vrste uzročnika.

Reakcija aglutinacije – RA(od lat. aglutinacija- bonding) - jednostavna reakcija u kojoj protutijela vežu korpuskularne antigene (bakterije, eritrocite ili druge stanice, netopljive čestice na kojima su adsorbirani antigeni, kao i makromolekularne nakupine). Javlja se u prisutnosti elektrolita, na primjer, kada se doda izotonična otopina natrijeva klorida.

Koriste se razne varijante reakcije aglutinacije: proširena, aproksimativna, neizravna itd. Reakcija aglutinacije se očituje stvaranjem ljuskica ili taloga.

RA se koristi za:

određivanje protutijela u krvnom serumu bolesnika, na primjer, s brucelozom (Wrightova, Heddelsonova reakcija), trbušni tifus i paratifus (Vidalova reakcija) i drugi zarazne bolesti;

određivanje uzročnika izoliranog od pacijenta;

određivanje krvnih grupa monoklonskim antitijelima na alogene eritrocita.

Za određivanje antitijela pacijenta stavitiprodužena reakcija aglutinacije: dodati u razrjeđenja krvnog seruma bolesnika dijagnostikum(suspenzija ubijenih mikroba) i nakon višesatne inkubacije na 37°C bilježi se najveće razrjeđenje seruma (titar seruma) pri kojem je došlo do aglutinacije, tj. do stvaranja taloga.

Priroda i brzina aglutinacije ovise o vrsti antigena i protutijela. Primjer je interakcija dijagnostikuma (O- i R-antigena) sa specifičnim antitijelima. Reakcija aglutinacije sa O-dijagnostikum(bakterije ubijaju toplinom, zadržavajući termostabilan O antigen) javlja se u obliku sitnozrnaste aglutinacije. Reakcija aglutinacije s H-diagnosticumom (bakterije ubijene formalinom, zadržavajući toplinski labilni flagelarni H-antigen) je gruba i odvija se brže.

Ako je potrebno odrediti uzročnika izoliranog od pacijenta, staviti orijentacijska reakcija aglutinacije, pomoću dijagnostičkih antitijela (aglutinirajući serum), tj. provodi se serotipizacija uzročnika. Približna reakcija provedeno na predmetnom staklu. Kapi dijagnostičkog aglutinirajućeg seruma u razrjeđenju 1:10 ili 1:20 dodati čistu kulturu uzročnika izoliranu od bolesnika. U blizini se nalazi kontrola: umjesto seruma nanosi se kap otopine natrijevog klorida. Kad se u kapi pojavi flokulantni talog sa serumom i mikrobima, stavljaju opsežna reakcija aglutinacije u epruvetama s rastućim razrjeđenjima aglutinirajućeg seruma u koji se dodaju 2-3 kapi suspenzije uzročnika. Aglutinacija se uzima u obzir količinom sedimenta i stupnjem bistrenja tekućine. Reakcija se smatra pozitivnom ako se primijeti aglutinacija u razrjeđenju bliskom titru dijagnostičkog seruma. Istodobno se uzimaju u obzir kontrole: serum razrijeđen izotoničnom otopinom natrijevog klorida treba biti proziran, suspenzija mikroba u istoj otopini mora biti jednoliko mutna, bez sedimenta.

Različite srodne bakterije mogu se aglutinirati istim dijagnostičkim aglutinirajućim serumom, što otežava njihovu identifikaciju. Stoga, uživajte adsorbirani aglutinirajući serumi, iz kojih su unakrsno reaktivna protutijela uklonjena adsorpcijom njima srodnih bakterija. U takvim serumima ostaju protutijela specifična samo za ovu bakteriju. Pripravu monoreceptorskih dijagnostičkih aglutinirajućih seruma na ovaj način predložio je A. Castellani (1902.).

Reakcija neizravne (pasivne) hemaglutinacije(RNHA, RPHA) temelji se na korištenju eritrocita s antigenima ili antitijelima adsorbiranim na površini, čija interakcija s odgovarajućim antitijelima ili antigenima krvnog seruma kuglice uzrokuje da se eritrociti slijepe i padnu na dno epruvete ili ćelije. V oblik nazubljenog sedimenta (sl. 13.2). Uz negativnu reakciju, eritrociti se talože u obliku "gumba". Obično se protutijela u RNHA otkrivaju pomoću antigenskog dijagnostikuma eritrocita, koji se sastoji od eritrocita s adsorbiranim na njih antigene. Ponekad koristimo dijagnostiku antitijela eritrocita, na kojima se antitijela adsorbiraju. Na primjer, botulinum toksin se može otkriti dodavanjem eritrocitnog antitijela botulinum diagnosticum (ova reakcija se zove reverzna reakcija neizravne hemaglutinacije- RONGA). RNHA se koristi za dijagnosticiranje zaraznih bolesti, utvrđivanje gonadotropnog hormona V urina kada se utvrdi trudnoća, za otkrivanje preosjetljivost Do lijekovi, hormoni iu nekim drugim slučajevima.

COOMBSOVA REAKCIJA

(Coombsov test) - metoda za određivanje Rh antitijela na površini crvenih krvnih stanica, koja uzrokuju taloženje globulina u krvnom serumu. Ovaj test se koristi za dijagnosticiranje hemolitička anemija u dojenčadi s Rh nekompatibilnošću, u kojoj se opaža uništavanje crvenih krvnih stanica.

Reakcija koaglutinacije. Stanice patogena određuju se pomoću stafilokoka, prethodno tretiranih imunološkim dijagnostičkim serumom. Protein koji sadrži stafilokoke A, koji imaju afinitet prema Fc fragmentu imunoglobulina, nespecifično adsorbiraju antimikrobna protutijela, koja zatim stupaju u interakciju s aktivnim centrima s odgovarajućim mikrobima izoliranima od pacijenata. Kao rezultat koaglutinacije nastaju pahuljice koje se sastoje od stafilokoka, dijagnostičkih serumskih antitijela i mikroba koji se određuje.

Reakcija inhibicije hemaglutinacije(RTGA) temelji se na blokadi, supresiji antigena virusa antitijelima imunološkog seruma, zbog čega virusi gube sposobnost aglutinacije crvenih krvnih stanica (slika 13.3). RTHA se koristi za dijagnosticiranje mnogih virusnih bolesti, čiji uzročnici (gripa, ospice, rubeola, krpeljni encefalitis itd.) mogu aglutinirati eritrocite različitih životinja.

1. Skupina liječnika stigla je u Indiju preko WHO-a kako bi identificirali pacijente s dječjom paralizom i pomogli u općem cijepljenju protiv dječje paralize. U jednom od ispitanih sela liječnicima je doveden šestogodišnji dječak iz višečlane obitelji koji se razbolio prije 5 dana. Temperatura je naglo porasla, glava je jako boljela, opetovano povraćanje, bolovi u rukama i nogama. Na pregledu: toplina, jaka slabost, meningealni simptomi, na desna noga spuštena tonus mišića, tetivni refleksi oštro su oslabljeni, stopalo visi. Prilikom punkcije spinalnog kanala istjecao je likvor ispod visoki krvni tlak, broj limfocita je povećan, bakterije nisu izolirane. Postavljena je preliminarna dijagnoza "paralitički oblik poliomijelitisa". Kako se dječak mogao zaraziti? Kako se provodi specifična aktivna prevencija poliomijelitisa? Postoji li rizik od zaraze druge djece u ovoj obitelji, što treba učiniti?

Odgovor: Dječak se može zaraziti fekalno-oralnim putem hranom, vodom, ali i kapljičnim putem. Glavna mjera prevencije poliomijelitisa je imunizacija živom kulturom cjepiva od 3 serotipa sojeva Sabin.U Rusiji se koristi cjepivo protiv dječje paralize za oralnu primjenu proizvodi Institut za poliomijelitis i virusne encefalitise. M.P. Čumakov. Cjepivo je trovalentni pripravak atenuiranih Sabinovih sojeva poliovirusa tipova 1, 2, 3, dobivenih u primarnoj kulturi stanica bubrega afričkog zelenog majmuna. . Planirana cijepljenja djeca u dobi od 3 mjeseca do 6 godina podložna su poliomijelitisu. Cijepljenja oralnim cjepivom protiv dječje paralize provode se s 2 ili 4 kapi cjepiva oralno tri puta u 3, 4, 5 i 6 mjeseci s tri puta revakcinacijom u 18, 20 mjeseci i 14 godina. Oboljeli dječak mora biti primljen u bolnicu, a sva ostala djeca u ovoj obitelji moraju biti cijepljena živim polio cjepivom.

1. Sastav i uporaba cjepiva protiv gripe trovalentne polimerne podjedinice tekućine (grippol)

Ovo je molekularno cjepivo. Sastav: površinski AG virusa influence tri podtipa (A / H1N1, A / H3N2, B). Primjena: za prevenciju gripe

Ispitna karta br.23