Schickova reakcija kaže na prisotnost ali odsotnost potrebne ravni antitoksina v krvi za zaščito telesa pred davico. Trenutno se ta reakcija redkeje uporablja zaradi uvedbe bolj občutljivih metod (RPHA).

Schickovo reakcijo izvajamo pri otrocih, cepljenih proti davici z opravljenim cepljenjem in vsaj enim revakcinacijo. Pri starosti 13 let in več se lahko reakcija postavi tudi z neznano anamnezo cepljenja. Stanje protidifterične imunosti se preveri ne prej kot 6 mesecev po zadnjem revakcinaciji in ne prej kot dva meseca po akutni bolezni.

Schickova reakcija je postavljena tudi v skupine, ki so neugodne za davico, na novo prispele otroke, kadar ni podatkov o cepljenju. Otroci z negativno Schickovo reakcijo ne prejmejo dodatnih cepljenj. Dodatna cepljenja, ne glede na imunski sloj v timu, se izvajajo za otroke s pozitivnimi in dvomljivimi reakcijami.

Rezultati Shikove reakcije se vnesejo v evidenčni karton preventivna cepljenja(f. 63) z navedbo datuma postavitve in testiranja reakcije, serije toksina in inštituta, ki je toksin proizvedel.

Za postavitev Shikove reakcije se uporablja razredčen aktivni (neogrevan) davični toksin. 0,2 ml vsebuje en odmerek Shik.

Za vzpostavitev Schickove reakcije je treba uporabiti enogramske (tuberkulinske), skrbno preverjene brizge z natančno gradacijo, ki ne dopuščajo prehajanja tekočine med stenami brizge in njenim batom.

Strogo je prepovedano izvajati Schickovo reakcijo v prostorih, kjer je na ta dan potekalo revakcinacijo proti tuberkulozi, kot tudi uporabljati brizge, igle in druge pripomočke, ki se uporabljajo pri imunizaciji proti tuberkulozi.

Kožo na mestu injiciranja obrišemo z vato, navlaženo s 70% etilnim alkoholom. Toksin (0,2 ml) se injicira intradermalno v srednji del dlanska površina običajno na levi podlakti. Uvajanje se izvaja počasi z znano napetostjo, značilno za intradermalno injiciranje tekočine. Injiciranje poteka pod zelo rahlim nagibom brizge proti podlakti, skoraj vzporedno s površino kože. Rez igle mora popolnoma vstopiti v kožo in sijati skozi povrhnjico. Na mestu injiciranja se mora oblikovati belkast, dobro omejen mehurček (papula) s premerom približno 1 cm, ki ima vtis na mestu lasnih mešičkov ("limonina lupina"). Ta mehurček (papula) izgine v 10-15 minutah. Če se mehurček (papula) ne oblikuje ali prehitro izgine ob injiciranju toksina, to pomeni, da je bila injekcija opravljena nepravilno, globoko in toksin, ki je prišel pod kožo, morda ne bo povzročil reakcije. Posledično lahko dobite napačen rezultat.

Reakcija se zabeleži po 72 ali 96 urah.Rezultati se ocenijo na naslednji način:

a) Shikova reakcija je pozitivna, če se na mestu injiciranja toksina pojavi rdečina in infiltracija. Označena je stopnja reakcije: "+" - če ima rdečica premer 1 -1,5 cm, (+ +" - če je 1,5 - 3 cm, "+ + +" - če je več kot 3 cm;

b) Shikova reakcija je negativna, če na mestu injiciranja toksina ni rdečice in infiltracije;

c) Schickova reakcija je dvomljiva, če rdečina in infiltrat med vnosom toksina nista jasno izražena ali če je pri izraziti reakciji premer rdečine približno 0,5 cm (označeno z "±").

Kontraindikacije za pripravo Schickove reakcije: spazmofilija, epilepsija, pustularne bolezni, stik z bolniki virusni hepatitis, bronhialna astma.

Alergeni in toksini

Diagnostična zdravila

Imunoglobulin proti oslovskemu kašlju, antitoksični človeški (Rusija)

Konjski serum proti davici, prečiščena koncentrirana tekočina (Rusija)

Serumi in imunoglobulini

Cepivo proti tuberkulozi BCG-M suho (za varčno primarno imunizacijo, Rusija)

Cepivo proti tuberkulozi (BCG) suho za intradermalno aplikacijo (Rusija)

Akt-Khib (Hib-wak, Južna Koreja)

Monovakcina proti oslovskemu kašlju (Rusija)

Vsebuje bakterije oslovskega kašlja, konzervans - mertiolat. Uporabljajte le po epidemioloških indikacijah v žariščih okužbe s pertusisom.

Vsebuje 10 mcg polisaharida na odmerek Haemophilus influenzae tip b, konjugiran s tetanusnim toksoidom, konzervans - trometamol. Uporablja se za cepljenje otrok od 2 mesecev starosti glede na epidemiološke indikacije.

Mycobacterium bovis BCG-1. Cepilni sev je bil pridobljen z dolgotrajnim (13 let) gojenjem tuberkuloznih govejih mikobakterij v neugodnih pogojih na krompirjevo-glicerinskem gojišču z dodatkom žolča. Prijavite se za specifično preventivo tuberkuloza. Cepljenje se izvaja na 5-7 dan življenja, ko je telo brez mikobakterijske okužbe. Vsi zdravi otroci, mladostniki in odrasli, mlajši od 30 let, ki negativno reagirajo na tuberkulin, so predmet ponovnega cepljenja. Mehanizem imunosti pri tuberkulozi ni popolnoma razumljen. IN klinična praksa Glavno merilo za intenzivnost imunosti na cepivo je prehod negativne kožne reakcije na tuberkulin v pozitivno.

Vsebuje liofilizirane v 1,2 % raztopini natrijevega glutamata žive bakterije cepilnega seva Mycobacterium bovis BCG-1. Uporablja se za varčno specifično preprečevanje tuberkuloze (primarno cepljenje) pri novorojenčkih na območjih z neugodnimi razmerami za tuberkulozo.

Vsebuje protitelesa proti eksotoksinu bacila davice. Antitoksično delovanje je izraženo v mednarodnih enotah (10.000 in 20.000 ie/ml). Uporablja se za zdravljenje bolnikov z davico. Poleg terapevtskih namenov se antidifterijski serum uporablja za določanje toksigenosti kultur bacila davice v reakciji obarjanja gela.

Vsebuje imunološko aktivno frakcijo krvne plazme darovalcev s protitelesi proti eksotoksinu mikroba oslovskega kašlja (vsaj 750 ie antitoksičnih protiteles proti oslovskemu kašlju). Uporablja se za zdravljenje oslovskega kašlja.

Vsebuje prečiščen toksin davice v 0,2 ml 1/40 DLM toksina morskega prašička. Uporablja se za intradermalne teste z namenom imunodiagnostike. Pri posameznikih se na mestu injiciranja razvije vnetna reakcija. Če kri vsebuje več kot 0,03 IE antitoksina, je test negativen. Prej se je Schickov test pogosto uporabljal za identifikacijo posameznikov, dovzetnih za davico. Trenutno je zaradi možnosti zapletov njegova uporaba omejena na stroge epidemične indikacije.

Toksini (iz grščine toxikon - strup), snovi bakterijskega izvora, ki lahko zavirajo fiziološke funkcije, kar vodi do bolezni ali smrti živali in ljudi. Po kemični naravi so vsi toksini proteini ali polipeptidi. Za razliko od drugih organskih in anorganskih strupene snovi Ko toksini vstopijo v telo, povzročijo nastanek protiteles.
Pri nekaterih nalezljivih boleznih (davica, škrlatinka) se otroci uporabljajo za določanje intenzivnosti imunosti in dovzetnosti otrok. intradermalni testi z uporabo ustreznih razredčenih toksinov. Pozitivna reakcija (lokalno vnetje kože v predelu injiciranja toksina) je posledica toksičnega učinka toksina na kožna tkiva. Negativni rezultat reakcije je razložen z nevtralizacijo toksina, vbrizganega v kožo, z ustreznim vsebovanim antitoksinom. imunski organizem dovolj za to.
Toksine pridobivamo iz toksigenih sevov mikrobov (bacil difterije ali skarlatinalni streptokok) z inokulacijo na tekočem hranilnem mediju (bujon na odprtem ognjišču), ki mu sledi filtracija skozi bakterijske filtre. Iz pridobljenih toksinov pripravimo diagnostična toksina Shika (davica) in Dick (škrlatinka). Toksine injiciramo intradermalno v količini 0,2 ml (Shika) in 0,1 ml (Dick) v srednji del notranje površine podlakti.
Anatoksini so filtrati bujonskih kultur toksigenih mikroorganizmov, ki so zaradi posebne obdelave izgubili toksičnost, vendar so v veliki meri ohranili antigene in imunogene lastnosti prvotnih toksinov.
Ko toksoidi vnesejo v človeško ali živalsko telo, povzročijo nastanek antitoksične imunosti, ta lastnost jim omogoča uporabo za preprečevanje teh nalezljive bolezni, ki temeljijo na delovanju eksotoksinov, ki jih izločajo patogeni, kot tudi za hiperimunizacijo živali - proizvajalcev antitoksičnih serumov.
Ne glede na vrsto toksoida je njegova imunogenost in antigenost določena z ustreznimi lastnostmi prvotnega toksina. Zato se v laboratorijih, ki proizvajajo ta zdravila, veliko pozornosti posveča ustvarjanju optimalnih pogojev za nastanek toksinov.
Za pridobivanje toksinov visoke trdnosti so potrebni sevi, ki se odlikujejo po posebej izraziti sposobnosti tvorbe toksinov v umetnih pogojih. Vsi sevi toksigenih bakterij nimajo teh lastnosti. Za proizvodne namene se uporabljajo sevi, ki so prilagojeni umetnim okoljem in obstojno ohranjajo sposobnost tvorbe toksinov.
Kulture toksinotvorcev hranimo bodisi v posušenem stanju bodisi na gojiščih, ki so optimalna za to vrsto bakterij. Pred uporabo za inokulacijo množičnih serij se sevi pasivizirajo na gojišču, ki se uporablja za pridobivanje toksina.
Pri drugih enakih pogojih je jakost toksinov odvisna od kakovosti gojišča, zato so laboratoriji pozorni na pripravo gojišč. Surovine, kemikalije in druge sestavine, ki sestavljajo medij, so podvržene najstrožji kontroli v biokemijskih laboratorijih proizvodnih inštitutov.
Za tvorbo toksinov se uporabljajo tekoča hranilna gojišča, ki vključujejo mesno vodo in produkte peptične (Martinova juha, Ramonov medij) ali triptične (Papežev medij) razgradnje mesa.
Proces hidrolize mesa kontroliramo z določanjem skupnega aminskega dušika in koeficienta cepitve beljakovin, ki ga izračunamo iz razmerja med aminskim dušikom in skupnim. Uporabljajo se tudi brezmesni kazein, polsintetični mediji.
Ogljikove hidrate (glukozo, maltozo ali njihovo mešanico) dodamo hranilnemu mediju, namenjenemu tvorbi toksinov. Pri fermentaciji ogljikovih hidratov se sprosti velika količina energije, ki je potrebna za sintezne procese, ki se pojavljajo v razvijajoči se kulturi. Dodatek ogljikovih hidratov dramatično poveča moč toksinov, ki nastajajo v okolju.
Poleg ogljikovih hidratov so za tvorbo toksinov v minimalnih odmerkih potrebne nekatere kovine. Nastajanje toksinov bacila davice zavira presežek železa v okolju v enaki meri kot njegova odsotnost. V prisotnosti optimalnih količin železa v okolju se tvorba toksinov močno poveča.
Tvorba toksinov poteka v polni meri pri določenem pH medija. Medtem se med rastjo kulture pH vrednost spreminja in lahko doseže takšne kazalnike, ki bodo zavirali nastajanje toksina.
Za odpravo tega okolja se dodajo pufrske snovi za vzdrževanje želene pH vrednosti. Ena od takšnih snovi s puferskimi lastnostmi je natrijev acetat, ki ga dodamo juhi v količini 0,5-0,75%.
Glede na biološke značilnosti mikroba, ki proizvaja toksine, različni pogoji urejeno je gojenje, predvsem pa prezračevanje okolja. Difterijski bacil tvori toksin v pogojih največjega prezračevanja, nasprotno pa tetanusni bacil in drugi toksigeni anaerobi ne potrebujejo kisika. Glede na to je prvič V drugem primeru kulturo gojimo v tankem sloju gojišča z veliko kontaktno površino z zrakom, v drugem primeru pa gojišče vlijemo v visok sloj in dodamo različne adsorbente kisika (vato, suhe eritrocite). dodano.
Temperatura rasti in njeno trajanje sta za različne mikrobe različna. Skupno procesu nastajanja toksinov je potreba po popolnem nadzoru temperature v inkubatorju. Nihanja temperature negativno vplivajo na moč toksina. Zato so termostati, v katerih prihaja do tvorbe toksinov, opremljeni z natančnimi termostati.
V vsakem posameznem primeru je trajanje gojenja kulture določeno z intenzivnostjo tvorbe toksinov na določeni seriji gojišča. Da bi rešili vprašanje časa prenehanja gojenja, se določi jakost toksina v mediju v različnih obdobjih gojenja.
Ko je moč toksina največja, ga ločimo od mikrobnih teles, to storimo s filtriranjem skozi posebne bakterijske filtre (anaerobni mikroorganizmi) ali navadne papirnate (bacil difterije).
Prevajanje toksičnih filtratov vanatoksina se izvaja s podaljšano izpostavljenostjo formalinu pri temperaturi 39-40 ° C. Formalin se veže s prostimi amino skupinami aminokislin, polipeptidi in beljakovinami toksina, zaradi česar izgubi svoje strupene lastnosti. Prehod toksina vanatoksina se pojavi v 3-4 tednih. Za pravilno tvorbo toksoida je pomemben pH toksina. Najbolj ugodna je nevtralna ali rahlo alkalna reakcija medija.
Za anatoksine je značilna popolna neškodljivost za živali. Ob nepopolni nevtralizaciji pa lahko v njih ostanejo ostanki toksinov, ki povzročijo pozne poškodbe v občutljivem organizmu. Zato pri preverjanju varnosti toksoidov živali spremljamo dlje časa. Neškodljivost toksoidov je nepopravljiva. Noben učinek ne povzroči obnovitve izgubljene toksičnosti.
Anatoksini se ohranijo skoraj v celoti antigenske lastnosti toksini. To je mogoče preveriti različne metode in vitro (reakcija flokulacije, reakcija vezave toksoida) in poskusi na živalih, pri katerih vnos toksoida povzroči nastanek ustreznih antitoksinov in ustvarjanje protitoksične imunosti.
Anatoksini so obstojni; prenašajo večkratno zamrzovanje in odmrzovanje, upirajo se delovanju visoka temperatura stabilen pri dolgotrajnem skladiščenju.
Anatoksini vsebujejo poleg specifičnih beljakovin tudi balastne snovi, iz katerih se lahko sprostijo na različne načine. Temeljijo na sposobnosti toksoidov, da se obarjajo, ko so nasičeni z nevtralnimi solmi, solmi težke kovine, kisline (klorovodikova, trikloroocetna, metafosforna), pa tudi v prisotnosti etilnega in metilnega alkohola pri nizkih temperaturah. Te metode se trenutno uporabljajo za pridobivanje prečiščenih koncentriranih toksoidov.
Toksoidi se adsorbirajo na različne netopne snovi (fosforjeve soli, aluminijev hidroksid), iz tega se pripravijo sorbirani toksoidi, za katere je značilna upočasnjena absorpcija v telesu, zaradi česar lahko dosežemo intenzivnejšo imunost.
Zaradi svoje neškodljivosti, visoke antigenosti in imunogenosti so toksoidi najdragocenejše sredstvo za preprečevanje in zdravljenje številnih bolezni.
Trenutno so bili pridobljeni toksoidi: davice, tetanusa, botulina, stafilokoka, dizenterije, iz toksinov, ki jih proizvajajo patogeni plinske gangrene, pa tudi iz kačjega strupa.

SHIKA REAKCIJA(Schick) je leta 1913 predlagal določitev stopnje dovzetnosti za davico. Š. r. izvaja se s strogo intradermalno injekcijo davičnega toksina v volumnu 0,2 cm 3, zaključek 1/40 Dim (glej davica). Toksin se vbrizga v kožo leve roke; v kožo desna roka za kontrolo vnesemo enako količino toksina, ki ga 10 minut segrevamo pri 100°C. Rezultate injiciranja opazimo po 24 in 96 urah in lahko opazimo naslednje pojave: 1. Če na mestu injiciranja "kontrolnega" (segretega) toksina ni reaktivnih pojavov, se na mestu injiciranja pojavita rdečina in infiltracija. mestu aktivnega toksina, ki ga spremlja rahel pekoč občutek in srbenje. Ti pojavi se razvijejo prvi dan, dosežejo maksimum četrti dan, nato izginejo in nekaj časa pustijo pigmentacijo kože. Po obsegu rdečine in infiltracije lahko ocenimo stopnjo reakcije, ki je označena na naslednji način: + ("dvomljiva" reakcija - z nejasno infiltracijo in rahlo rdečico), + (z rdečino v premeru ne več kot 1,5 cm), + +(če ima rdečica premer 1,5 do 3 cm) in + + + (če je rdečica večja od 3 cm); ta vrsta reakcije se imenuje "pozitivna" Sh. 2. Če na mestu injiciranja segretega in aktivnega toksina ni nobenih reaktivnih pojavov, govorimo o "negativnem" Shch. 3. Če so reaktivni pojavi opaženi na obeh rokah v enakem obsegu, potem je tak pojav označen kot "lažni" Sh. Stopnja lažne (s segretim toksinom) reakcije je označena (kot pozitivna) z enim, dvema, tremi znaki. Reakcija na segreti toksin ima nekatere kvalitativne razlike od reakcije na aktivni toksin: hiter pojav in izginotje (običajno v 36-48 urah) in prevlado eksudativnih pojavov nad infiltrativnimi. 4. Če so reaktivni pojavi opaženi na obeh rokah, vendar je njihova stopnja drugačna, potem govorijo o "kombiniranem" toksinu Sh. Skupne ideje o bistvu Sh. se zmanjšajo na naslednje: če v krvi testiranca ni antitoksina ali pa je vsebovan v količini, manjši od / zo -A-E v 1,0 serumu, potem intradermalno vbrizgani toksin povzroči reaktivne pojave, imenovane "pozitivne" III Če pa je v krvi preiskovanca zadostna količina antitoksina (po Shiku 1/30, po Beringu 1/hoo in več kot AE v serumu 1,0), potem slednji nevtralizira vneseni toksin. , in "negativno" Sh. Te izjave potrjuje naslednja ugotovitev: če se nevtralna mešanica toksina in antitoksina injicira subjektu, občutljivemu na toksin davice, potem praviloma ni opaziti nobene reakcije na mestu injiciranja te mešanice Poleg tega je bilo opravljenih več sočasnih neposrednih določitev količine antitoksina v krvi po Remerjevi metodi vzporedno s S. R. (Shik, Ramon, Veksel itd.) Ti poskusi v večini primerov razkrivajo izrazito odvisnost od rezultat S. R. o količini antitoksina v krvi. Včasih opažene nedoslednosti med temi pojavi ne morejo omajati splošnega pravila, saj so precej redke: Jensen, na primer. opazil prisotnost negativnega Sh. z nepomembno vsebnostjo antitoksina "I /i 00 AE v 1,0 serumu) v 9% primerov. Pri ocenjevanju rezultatov Sh. je treba upoštevati, da je v zgodnjem otroštvu negativen Sh. v odsotnosti antitoksina v krvi. To je posledica neločljivo zgodnjega otroštvo kožna anergija. Kar zadeva t.i. lažni Sh. in njegove različice (kombinirano, perverzno Sh. r.), tj. Reakcija kože na segret toksin, potem je to razloženo z občutljivostjo telesa na termostabilne presnovne produkte bacila davice in hranila v juhi. Ta občutljivost je po naravi alergična. Kot je pokazal Siegl, je sestavljen iz dveh komponent - specifične in nespecifične v zvezi z davico. Zellerjeva opažanja (Zoller) so pokazala popolno istovetnost lažne reakcije z intradermalno reakcijo na toksoid (0,2 toksoida, razredčenega v razmerju 1: 100) - to je tako imenovana Zellerjeva reakcija. Glede na rezultat reakcije na toksin in na toksoid deli Zeller vse ljudi v 4 skupine (glej tabelo). Zeller si predstavlja postopek imunizacije proti davici takole: osebe dovzetne za davico (I skupina z Značilnostmi skupine Reakcija | Zeller Schlck reakcija f 1 Občutljivost na II f dlfterija III 1 Imunost na DVF- IV / theria + + + 1 Stopnja + ) alergija pozitivna Sh. R.) ob srečanju z bacilom davice (b-n ali prevoz) ali med umetno imunizacijo so senzibilizirani glede na mikrob in njegove produkte. Njihova koža povzroči alergijsko reakcijo; ker pa hkrati še ni razvita zadostna količina antitoksina, koža reagira tudi na aktivni toksin (skupina II z lažnim ali kombiniranim Sh. p.). V prihodnosti se količina antitoksina v krvi toliko poveča, da reakcija na aktivni toksin postane negativna, vendar alergija še vedno ostane (skupina III s perverznim Sh. p.); končno zadnji izgine in pojavi se močna imuniteta, značilna za osebe IV skupine (z negativnim Sh. reke). Vrednost Sh. kako imuno-reakcije določajo prevladujoči pogledi na naravo imunosti pri davici. Avtor: sodobne ideje slednje temelji na prisotnosti zadostne količine antitoksina v krvi. Te ideje, kot je znano, določajo sodobno prakso imunizacije za preprečevanje davice (toksin-antitoksinske mešanice, toksoid). S tega vidika je Sh.R., ki priročno nadomešča okorno neposredna opredelitev antitoksina v krvi po metodi Re-mer, lahko smatramo kot idealen način za ugotavljanje stanja imunosti oz. občutljivost, človek na davico. Vprašanje minimalne količine antitoksina v krvi, potrebnega za uveljavitev trajne imunosti na davico, je sporno; v vsakem primeru je treba opozoriti na relativno redkost davice pri osebah z negativnim Sh. poleg tega lahko navedemo neposredno eksperimentalno potrditev te težave: Getri, Marshal in Moss (Gu-tnrie, Marshall in Moss) so okužili osem prostovoljcev z mazanjem grla z virulentno kulturo difterije, od katerih so imeli štirje pozitiven Sh. p., štiri pa negativne. Posledično so 4 osebe prve skupine prebolele tipično bolezen, od 4 oseb z negativno Sh. 3 so imeli začasno prenašalstvo bacila davice brez znakov bolezni. Za epidemiološko vrednost Sh. posvetil ogromno del. Iz njih je razvidno, da GL. R. predstavlja zanesljivo metodo za določanje stopnje imunskega sloja kolektiva glede na davico. Izkazalo se je, da če porazdelimo pozitivne Sh. po starosti, potem dobimo krivuljo (Zingher) starostne občutljivosti za davico, ki precej natančno sovpada s starostno porazdelitvijo pojavnosti davice. Relativno visoko odpornost majhnih dojenčkov (do šest mesecev) je mogoče razložiti s pasivnim prenosom imunskih teles skozi materino mleko. Kar zadeva zmanjšanje občutljivosti na davico s starostjo (od enega leta dalje), ki ga spremlja kopičenje antitoksina v krvi, nekateri avtorji (Friedberger et al.) menijo, da je ta pojav izraz "fiziološke serogeneze", tj. da se kopičenje antitoksina pojavi v fiziološkem vrstnem redu, ki ga spremlja. zorenje naenkrat Človeško telo, in drugi avtorji (Zinger, Dedley, Ramon in drugi) verjamejo, da ljudje kopičijo antitoksin v krvi kot posledica očitne in pogosteje "tihe okužbe" z davico (glej sliko). Epidemiološka vrednost Sh. sestoji tudi iz dejstva, da ga je priročno uporabiti za izbiro predmetov oseb (v primeru pozitiven rezultat) aktivna imunizacija proti davici. Običajno se uporablja pri otrocih

"-~-" $ osebe z antitoksinom v krvi (po Greerju)

°--«>% oseb o pozitivni, reakciji. Shika (po Parku in Zkngerju) palice - pojavnost davice Porazdelitev po starosti: osebe z antitoksinom v krvi (v %); osebe s pozitivno Schickovo reakcijo (v %); pojavnost davice (°/ooo vsake starosti). starejših od 5 let, ob upoštevanju relativne redkosti negativnih Sh. mlajši od 5 let. Končno III. R. Uporablja se tudi kot objektivna kontrola učinkovitosti zaščitnih cepljenj proti davici. To učinkovitost dokazuje prehod pozitivnega (pred cepljenjem) Sh. negativen po cepljenju (običajno 6 tednov po zadnjem cepljenju). Tehnika za proizvodnjo Sh. R.: 1. Za pripravo potrebne razredčitve toksina v zahtevanem volumnu izhajamo iz Dim toksina. Recimo toksin Dim = 0,0032. Za pripravo toksina, ki vsebuje I / 4l) Dim v 0,2 prostornine, nadaljujte kot sledi: vzemite 1OODlm, v tem primeru = 0,32, in dodajte fiziološko raztopino do 10,0, tj. 9,68. Vzemite 1,0 te raztopine (tj. 10 Dim) in dodajte 79,0 fiziol. rešitev. Nato je v 80,0 druge razredčitve 10.Dim; v 1 cm 3 torej -V" Dim in v 0,2-Vio Dim. Pri vsakem redčenju je potrebno vzeti novo suho pipeto, ki jo speremo vsaj 10-krat. To zahteva posebno natančnost pri merjenju in točnost pipet (polovico tako pripravljene razredčine toksina prelijemo v posebno bučko in za 10 minut postavimo v vrelo vodno kopel; tako dobimo segret toksin za »kontrolo«) . Glede na to, da je toksin, razredčen fiziol. raztopino, hitro izgubi svojo aktivnost, je bolj priročno jemati t. raztopina boratnega pufra (glejte kurac reakcija) v kateri razredčen toksin ohrani svojo moč več mesecev. 2. Injiciranje se izvaja strogo intradermalno, najbolj priročno z uporabo tuberkulinske brizge z zelo tanko platinasto iglo (št. 18, 19). Igla mora imeti kratko brado. Med injiciranjem mora biti brada obrnjena navzven. Vnos toksina poteka počasi z znano napetostjo, značilno za intradermalno injiciranje tekočine, zaradi česar se na mestu injiciranja oblikuje dobro razmejen vezikel (Quaddel), ki ima na mestu dlake vdolbine. folikli. 3. Aktivni toksin vbrizgamo v kožo podlakti leve roke, segret toksin vbrizgamo v kožo podlakti desne roke. V masovni proizvodnji III. R. priporočljivo je imeti dva zdravnika hkrati - eden vbrizga aktivni, drugi segret toksin. 4. Štetje Sh. poteka dvakrat: v 24 urah zaradi lažnih reakcij in v 96 urah, ko je res Sh. doseže vrhunec. Lit.: Zdrodovsky P., Sodobni problemi specifične profilakse davice, Arkh. biol. Sciences, letnik XXXV, ser. Ah, vol. 2, 1934; Doull J., Dejavniki, ki vplivajo na selektivno porazdelitev davice, Journ. ol preprečiti, med., v. IV, 1930; Frost W., Okužba, imunost in bolezen v epidemiologiji davice, Ibid., v. II, 1928; Meerseman, Fries et Renard, La diphterie chez les suits a reakcija de Schick negative, Compt. rend, de la soc. de biol., v. CXII, 1933; Park W., Imunizacija s toksinom in antitoksinom proti davici, Journ. amer. med. Ass., v. LXXIX, str. 1584, 1922; Rosling E., Die Schickreaktion und Ihre Bedeutung, Seuchen-bekamp-fung, B. VII, 1930; Schick B., Die Diphtherietoxin- Hautreaktion des Menschen als Vorprobe des prophylak-tisohen Diphlherieheilseruminielition, M "inch. med. Wo-chenschr., 1913, št. 47; S iegl J., Zur Frage der Entste-hung der Pseudoreaktion bei der Diphtherietoxinreaktion nach Schick, Arch. f. Kinderheilk., B. XCVІII, 1932; Z i n g he r A., ​​​​The Schickov test, Journ. of Amer. med. Ass., v. LXXVІII, 1922; Zoeller C, L "intradermo-reaction al"anatoxine diphterique ou anatoxf-reaction, Compt. rend. de la Soc. de biol., v. XCI, 1924. Glej tudi lit. k Art. Škrlatinka. G. Orlov.

Citokemične metode zasledovati identifikacijo kemičnih in encimskih snovi v celicah z uporabo barvnih reakcij za to. Citokemikalije ohranjajo celično zgradbo, ki omogoča identifikacijo celic in intracelularno lokalizacijo preiskovane spojine. Zato se v hematologiji daje prednost ne biokemičnim, napornim, ki uničujejo celično strukturo zelo heterogene celične populacije, temveč citokemičnim metodam.

Citokemija dokazal, da med morfološko enakimi celicami obstajajo pomembne kemične in encimske razlike.

Glikogen (reakcija CHIC) (PAS) - metoda Hotchkiss - Mac Minus

Schickovo načelo. Polisaharide zaznamo z reakcijo, ki oksidira alkoholne skupine, te se pretvorijo v aldehidne skupine, slednje pa identificiramo z barvno reakcijo s Schiffovim reagentom.

Reagenti za reakcijo PAS: 1. Mešanica za fiksiranje alkohola in formalina: 9 delov absoluta etilni alkohol+1 del 40% formalina; ohranjati pri +4°.

2. Perjodna kislina, 1% vodna raztopina. Raztopina je brezbarvna. Shranjujte v rjavi steklenici na temnem mestu pri laboratorijski temperaturi. Porumenela raztopina ni uporabna.

3. Schiffov reagent. 1 g bazičnega fuksina razredčimo v 200 ml destilirane vode pri vrelišču. Stresamo 5 minut, ohladimo na temperaturo 50 °, filtriramo in dodamo 20 ml navadne klorovodikove kisline. Ohladimo na 25°, dodamo 2 g natrijevega ali kalijevega metabisulfita, ki popolnoma zagotovita raztopino. Raztopina naj stoji en dan v temi in na hladnem (+4 °). Nato dodajte 2 g aktivno oglje, klepet 1 min. in filter.
Nastali filtrat je bister in brezbarven. Dovoljen je rahlo rumenkast odtenek; če se raztopina obarva rožnato, postane neuporabna. Hraniti pri +4°C v hermetično zaprti steklenički iz rjavega stekla.

4. Zelena luč -1% vodna raztopina.

5. Diastaza: neutekočinjena človeška slina ali 0,1 % raztopina amilolitično-diastatskega encima v fiziološki raztopini.

Tehnika Schickove reakcije

1) 10-minutna fiksacija brisov z mešanico alkohola in formalina; pranje z destilirano vodo;
2) oksidacija z 1% raztopino periodne kisline, 10 min.; pranje z destilirano vodo;
3) barvanje s Schiffovim reagentom v pokriti posodi, v temnem in hladnem prostoru, 2 uri; pranje s tekočo vodo;
4) protibarvanje z 1 % zeleno svetlobo 1 minuto; izpiranje s tekočo vodo.

Nadzor je pripet razmazati podvrženi diastazni inkubaciji, 60 min. pri sobni temperaturi za selektivno odstranitev glikogena. Po pranju z destilirano vodo se obdela po običajni metodi.

Vrednotenje rezultatov reakcije PAS

Glikogen obarvan v škrlatno Rdeča barva, je videti kot zrna ali raztresena. Za nadzor reakcije se uporabljajo zreli razmazi granulocitov. Beyond Glycogen CHIC pozitivna reakcija dajo druge snovi ogljikovih hidratov, kot so mucin, mukoproteini, cerebrozidi, fibrin. Glikogen se razlikuje od teh sestavin s predhodno obdelavo z diastazo, po kateri glikogen ni več obarvan.

IN granulociti glikogen je razpršen že na stopnji promielocitov in se začne povečevati, ko zori. V normalnih pogojih so limfociti negativni ali jih lahko 20% vsebuje več majhnih zrnc glikogena. Monociti so negativni ali imajo fino zrnatost.

Intenzivnost barvanje določeno polkvantitativno. V reakciji se CHIC odraža v obliki glikogenskega indeksa ali povprečnega reakcijskega indeksa (Astaldi). normalno glikogen se giblje od 0,10 do 0,30. Običajno imajo samo patološki limfociti stopnjo obremenitve nad 3.

Navedena je bila kot metoda Schickove reakcije:
a) Pri nastavitvi diferencialna diagnoza posamezni citološki tipi akutne levkemije:
- Mieloblasti in promielouitis so PAS-negativni ali pridobijo šibko difuzno barvo. Auerjeva telesa dajejo pozitivno reakcijo, ki oslabi po prebavi s slino.
- Limfoblasti pri akutni levkemiji in limfosarkomu dajejo ostro PAS-pozitivno reakcijo v obliki zrn ali velikih blokov glikogena.
- Eritroblasti pri eritremiji in akutni eritrolevkemiji dajejo izrazito pozitivno razpršeno ali zrnato reakcijo, v nasprotju z normalnimi eritroblasti, ki so PAS negativni;
- Monocitoidni blasti so nedosledno šibko pozitivni, s fino zrnatostjo.

b) Za diagnostiko in spremljanje učinkovitosti zdravljenja kronične limfne levkemije: povišan nivo glikogena kaže na hudo obliko bolezni in slabo prognozo.
Rast glikogena v patoloških limfocitih, pojav, ki ni značilen za levkemijo, je razložen s povečanjem presnovne aktivnosti pri kateri koli vrsti limfoidne proliferacije.

c) Za razlikovanje Gaucherjevih celic od drugih makrofagov s kopičenjem.