Reakcija posredne ali pasivne hemaglutinacije (RNHA ali RPHA) je bolj občutljiva in specifična od reakcije aglutinacije. Tudi ta reakcija se uporablja na dva načina.

1) Za odkrivanje protiteles v bolnikovem krvnem serumu se uporabljajo eritrocitni diagnostiki, pri katerih se antigen adsorbira na površini eritrocitov, obdelanih s taninom. V zvezi s to reakcijo se pogosteje uporablja izraz RPGA.

Testni serum razredčimo v vdolbinicah plastičnih ploščic in dodamo eritrocitni diagnostik. S pozitivno reakcijo se vzdolž sten luknje pojavi tanek film v obliki "čipkastega dežnika", s povratni udarec- gosta usedlina eritrocitov v obliki "gumba".

2) Za odkrivanje toksinov in bakterijskih antigenov v testnem materialu se uporabljajo protitelesni eritrocitni diagnostiki, pridobljeni z adsorpcijo protiteles na eritrocitih. V zvezi s to reakcijo se pogosteje uporablja izraz RNGA. Na primer, s pomočjo diagnostičnih protiteles se odkrijejo antigen bacila kuge, eksotoksin davice, eksotoksin botulina.

Coombsova reakcija (test aptiglobulina)

Reakcija se uporablja za odkrivanje nepopolnih protiteles, na primer protiteles proti faktorju Rh. Testni serum dodamo Rh + eritrocitom, v katerih pričakujemo prisotnost nepopolnih protiteles proti Rh faktorju. Nepopolna protitelesa, vezana na eritrocite, ne povzročijo aglutinacije, saj imajo le en aktiven center. Nato dodajte antiglobulinski serum, ki vsebuje protitelesa proti človeškim globulinom. V kombinaciji z nepopolnimi protitelesi povzroči antiglobulinski serum aglutinacijo eritrocitov.

reakcija padavin

Bistvo reakcije je precipitacija (obarjanje) antigena pod delovanjem specifičnih protiteles. Za vidno reakcijo je potrebna prisotnost elektrolita. Antigen v reakciji obarjanja so molekularno razpršene snovi.

Obročna precipitacijska reakcija dajo v ozke obarjalne cevi. V epruveto vlijemo imunski serum in nanj previdno nanesemo testni material. V prisotnosti antigena v njem se na meji dveh tekočin tvori neprozoren obroč oborine.

Reakcija se uporablja v sodna medicina za določanje vrste beljakovin v krvnih madežih, v semenu itd.; za določanje antigena pri diagnozi antraksa (Ascolijeva reakcija), meningitisa in drugih okužb; v sanitarnih in higienskih raziskavah - za ugotavljanje ponarejanja prehrambeni izdelki. Imunski precipitacijski serumi se pridobijo z imunizacijo živali z ustreznim antigenom. Na primer, človeški protein, ki obarja serum, dobimo z imunizacijo zajca s človeškim proteinom. Titer obarjanja seruma je največja razredčitev antigena, s katerim reagira. Serum se običajno uporablja nerazredčen ali razredčen v razmerju 1:5.

Reakcija obarjanja agarskega gela izvajajo na več načinov. To je reakcija dvojne imunodifuzije, reakcija radialne imunodifuzije, reakcija imunoelektroforeze.

Dvojna imunodifuzijska reakcija(po Ouchterlonyju). Stopljeno agar gel vlijemo v petrijevko in po strditvi vanjo izrežemo luknje. V nekatere vdolbinice namestimo antigen, v druge pa imunske serume, ki difundirajo v agar in na mestu srečanja tvorijo oborino v obliki belih trakov.

Radialna imunodifuzijska reakcija(po Manciniju). Stopljenemu agar gelu dodamo imunski serum, ki ga vlijemo v posodo. Ko se agar strdi, se v njem izrežejo vdolbinice in vanje postavijo antigeni, ki z difuzijo v agar tvorijo obročaste precipitacijske cone okoli vdolbinic. Večja kot je koncentracija antigena, večji je premer obroča. Reakcija se uporablja na primer za določanje različnih razredov imunoglobulinov v krvi. Imunoglobulini razredov IgG, IgM, IgA v tej reakciji delujejo kot antigeni, protitelesa proti njim pa so v specifičnih monoreceptorskih serumih.

Imunoelektroforeza. Elektroforezo proteinskih antigenov izvajamo v agar gelu. Obarjajoči serum se vnese v utor, ki poteka vzporedno s smerjo gibanja proteinov. Antigeni in protitelesa difundirajo v agar in na njihovem stičnem mestu nastanejo precipitacijske črte.

Reakcije imunske lize

Antigen (eritrociti ali bakterije) v kombinaciji s specifičnimi protitelesi tvori imunski kompleks, na katerega je vezan komplement (C1), aktivacija komplementa pa poteka po klasični poti. Aktivirani komplement razgradi rdeče krvne celice (hemoliza) ali bakterije (bakterioliza). Reakcija bakteriolize se uporablja za identifikacijo Vibrio cholerae.

reakcija hemolize. Antigen v reakciji so eritrociti, protitelesa (hemolizini) so v hemolitičnem serumu. Hemolizini se vežejo na eritrocite, pride do aktivacije komplementa, ki lizira eritrocite. Motna suspenzija eritrocitov se spremeni v prozorno svetlo rdečo tekočino - "lak kri". Ker se reakcija hemolize pojavi samo v prisotnosti komplementa, se uporablja kot indikator za dokazovanje komplementa.

Lokalna reakcija hemolize v gelu(Jernejeva reakcija) - različica reakcije hemolize. Služi za določanje števila celic, ki tvorijo protitelesa (AFC) v vranici in bezgavkah.

Stopljeni agar gel zmešamo s suspenzijo vraničnih celic in eritrocitov in po strditvi agarja dodamo komplement. Okrog vsake celice, ki proizvaja hemolizin, se oblikuje območje hemolize. Število takih con določa število celic, ki proizvajajo hemolizin.

Reakcija indirektne (pasivne) hemaglutinacije (RIHA) temelji na dejstvu, da eritrociti, če se na njihovi površini adsorbira topni antigen, pridobijo sposobnost aglutinacije pri interakciji s protitelesi proti adsorbiranemu antigenu. Shema RNGA je prikazana na sl. 34. RNHA se pogosto uporablja pri diagnosticiranju številnih okužb.

riž. 34. Shema reakcije pasivne hemaglutinacije (RPHA). A - pridobitev eritrocitnega diagnostika: B - RPHA: 1 - eritrocit: 2 - preučevani antigen; 3 - diagnostika eritrocitov; 4 - protitelo proti preučevanemu antigenu: 5 - aglutinat

Nastavitev reakcije. Testni serum segrevamo 30 minut pri 56 °C, zaporedno razredčimo v razmerju 1:10 - 1:1280 in vlijemo po 0,25 ml v epruvete ali vdolbinice, kamor nato dodamo 2 kapljici eritrocitnega diagnostika (eritrociti z antigenom). adsorbirana na njih).

Kontrole: suspenzija eritrocitnega diagnostika z očitno imunskim serumom; suspenzija diagnostikuma z normalnim serumom; suspenzija normalnih eritrocitov s testiranim serumom. Pri prvi kontroli naj pride do aglutinacije, pri drugi in tretji pa je ne sme biti.

S pomočjo RIGA je mogoče določiti neznani antigen, če so znana protitelesa adsorbirana na eritrocitih.

Reakcijo hemaglutinacije lahko nastavimo v prostornini 0,025 ml (mikrometoda) z mikrotitrom Takachi.

Kontrolna vprašanja

1. Kaj pomeni pozitiven rezultat RGA med eritrociti in testiranim materialom na prisotnost virusa?

2. Ali pride do aglutinacije eritrocitov, če jim dodamo virus in ustrezen serum? Kako se imenuje reakcija, ki razkrije ta pojav?

telovadba

Upoštevajte in registrirajte rezultat RIGA.

reakcija padavin

Pri precipitacijski reakciji se izloči specifičen imunski kompleks, ki ga sestavljata topni antigen (lizat, ekstrakt, hapten) in specifično protitelo v prisotnosti elektrolitov.

Moten obroč ali oborina, ki nastane kot posledica te reakcije, se imenuje oborina. Ta reakcija se od reakcije aglutinacije razlikuje predvsem po velikosti delcev antigena.

Precipitacijska reakcija se običajno uporablja za določanje antigena pri diagnozi številnih okužb ( antraks, meningitis itd.); v sodni medicini - za določitev vrste krvi, sperme itd.; v sanitarnih in higienskih študijah - pri ugotavljanju ponarejanja izdelkov; z njeno pomočjo ugotavljajo filogenetsko razmerje živali in rastlin. Za reakcijo potrebujete:

1. Protitelesa (precipitini) - imunski serum z visokim titrom protiteles (ne nižji od 1:100.000). Titer precipitirajočega seruma je določen z najvišjo razredčino antigena, s katerim reagira. Serum se običajno uporablja nerazredčen ali razredčen 1:5 - 1:10.

2. Antigen - raztopljene snovi beljakovinske ali lipoidne polisaharidne narave (popolni antigeni in hapteni).

3. Izotonična raztopina.

Glavni metodi za izvedbo reakcije obarjanja sta: reakcija obarjanja obroča in reakcija obarjanja v agarju (gelu).

Pozor! Vse komponente, ki sodelujejo pri reakciji obarjanja, morajo biti popolnoma prozorne.

Obročna precipitacijska reakcija. V precipitacijsko epruveto dodamo s Pasteurjevo pipeto 0,2-0,3 ml (5-6 kapljic) seruma (serum ne sme pasti na stene epruvete). Antigen previdno nanesemo na serum v enakem volumnu in ga polivamo s tanko Pasteurjevo pipeto po steni epruvete. Epruveto držimo v nagnjenem položaju. S pravilnim nanosom plasti je treba doseči jasno mejo med serumom in antigenom. Previdno, da ne premešate tekočine, postavite epruveto v stojalo. pri pozitiven rezultat reakcije na meji antigena in protitelesa nastane moten "obroč" - oborina (glej sliko 48).

Reakciji sledijo številne kontrole (Tabela 18). Zaporedje vnosa reakcijskih sestavin v epruveto je zelo pomembno. Seruma ne morete nanesti na antigen (v kontroli - na izotonično raztopino), ker je relativna gostota seruma večja, se bo potopil na dno epruvete in meja med tekočinama ne bo zaznana. .

Tabela 18

Opomba. + prisotnost "obročka"; - pomanjkanje "prstana".

Rezultati se zabeležijo po 5-30 minutah, v nekaterih primerih po eni uri, kot vedno, začenši s kontrolami. "Obroč" v 2. epruveti označuje sposobnost imunskega seruma, da vstopi v specifično reakcijo z ustreznim antigenom. V 3.-5. epruvetah ne sme biti "obročev" - ni protiteles in antigenov, ki bi ustrezali drug drugemu. "Obroč" v 1. epruveti - pozitiven rezultat reakcije - pomeni, da testni antigen ustreza odvzetemu imunskemu serumu, odsotnost "obročka" ("obroč" samo v 2. epruveti) kaže na njihovo nedoslednost - negativna reakcija rezultat.

Reakcija obarjanja v agarju (gelu). Posebnost reakcije je, da se interakcija antigena in protitelesa pojavi v gostem mediju, to je v gelu. Nastala oborina daje moten trak v debelini medija. Odsotnost pasu kaže na neujemanje med reakcijskimi komponentami. Ta reakcija se pogosto uporablja v biomedicinskih raziskavah, zlasti pri preučevanju tvorbe toksinov pri povzročitelju davice.

Kontrolna vprašanja

1. Kakšna je glavna razlika med reakcijo aglutinacije in obarjanja?

2. Zakaj motnih sestavin ne moremo uporabiti pri reakciji obarjanja?

telovadba

1. Nastavite obročno reakcijo obarjanja in narišite rezultat.

2. Preučite naravo interakcije antigena s protitelesom pri reakciji obarjanja na agarju, rezultat narišite (skodelico dobite pri učitelju).

Reakcija lize (imunska citoliza)

Imunska liza je raztapljanje celic pod vplivom protiteles z obvezno udeležbo komplementa. Za reakcijo potrebujete:

1. Antigen – mikrobi, eritrociti ali druge celice.

2. Protitelo (lizin) – imunski serum, redkeje pacientov serum. Bakteriolitični serum vsebuje protitelesa, ki sodelujejo pri razgradnji bakterij; hemolitični - hemolizini, ki prispevajo k razpadu rdečih krvnih celic; za lizo spirohet so potrebni spirohetolizini, celice - itolizini itd.

3. Dopolnilo. Največ dopolnila v serumu morski prašički. Ta serum (mešanica več živali) se običajno uporablja kot dopolnilo. Sveže (nativno) dopolnilo je nestabilno in se zlahka uniči s segrevanjem, stresanjem, skladiščenjem, zato ga je mogoče uporabiti največ dva dni po prejemu. Da bi ohranili komplement, mu dodamo 2%. Borova kislina in 3% natrijevega sulfata. To dopolnilo lahko shranjujete pri 4 °C do dva tedna. Pogosteje se uporablja suho dopolnilo. Pred uporabo se raztopi v izotonični raztopini do prvotne prostornine (navedeno na etiketi).

4. Izotonična raztopina.

Reakcija hemolize(Tabela 19). Za reakcijo potrebujete:

1. Antigen - 3% suspenzija opranih ovčjih eritrocitov s hitrostjo 0,3 ml eritrocitnega sedimenta in 9,7 ml izotonične raztopine.

2. Protitelesa - hemolitični serum (hemolizin) proti ovčjim eritrocitom; običajno pripravljeno v proizvodnji, liofilizirano in titer je naveden na etiketi.

Titer hemolizina je največja razredčitev seruma, pri kateri pride do popolne hemolize 3% suspenzije eritrocitov v prisotnosti komplementa. Za reakcijo hemolize vzamemo hemolizin v trojnem titru, to je, da ga razredčimo 3-krat manj kot pred titrom. Na primer, če je serumski titer 1:1200, se serum razredči v razmerju 1:400 (0,1 ml seruma* in 39,9 ml izotonične fiziološke raztopine). Potreben je presežek hemolizina, saj ga lahko delno adsorbirajo druge komponente reakcije.

* (Ne smete vzeti manj kot 0,1 ml seruma - trpi točnost meritev.)

3. Komplement razredčimo 1:10 (0,2 ml komplementa in 1,8 ml izotonične fiziološke raztopine).

4. Izotonična raztopina.

Tabela 19. Shema reakcije hemolize

Računovodstvo rezultatov. S pravilno nastavljeno reakcijo v 1. epruveti bo prišlo do hemolize - njena vsebina bo postala prozorna. V kontrolah ostaja tekočina motna: v 2. epruveti manjka komplement za nastanek hemolize, v 3. epruveti ni hemolizina, v 4. epruveti ni niti hemolizina niti komplementa, v 5. antigen se ne ujema s protitelesom,

Po potrebi titriramo hemolitični serum po naslednji shemi (tabela 20).

Pred titracijo pripravimo začetno razredčino seruma 1:100 (0,1 ml seruma in 9,9 ml izotonične fiziološke raztopine), iz katere naredimo potrebne razredčine, npr.

Od teh razredčin dodamo 0,5 ml seruma v epruvete za titracijsko izkušnjo, kot je prikazano v tabeli. 20.

Tabela 20. Titracijska shema za hemolitični serum (hemolizin)

V primeru, podanem v tabeli. 20 je titer hemolitičnega seruma 1:1200.

Pri uporabi svežega hemolitičnega seruma ga moramo inaktivirati, da uničimo njegov komplement. Da bi to naredili, ga segrevamo 30 minut pri 56 ° C v vodni kopeli ali v inaktivatorju s termostatom. Slednja metoda je boljša: odpravlja možnost pregrevanja seruma, to je njegove denaturacije. Denaturirani serumi niso primerni za testiranje.

reakcija bakteriolize. Pri tej reakciji se bakterije dopolnijo v prisotnosti ustreznega (homolognega) seruma. Reakcijska shema je v osnovi podobna reakcijski shemi hemolize. Razlika je v tem, da po dvourni inkubaciji vse epruvete zasejemo na petrijevke z gojiščem, ki je ugodno za mikroorganizem, vzet v poskus, da ugotovimo, ali je liziran. Ob pravilno nastavljenih izkušnjah v posevkih iz 2.-5.epruvet (kontrole) bi morala biti obilna rast. Pomanjkanje rasti ali šibka rast v kulturi iz 1. epruvete (poskus) kaže na smrt mikrobov, to je, da so homologni protitelesu.

Pozor! Reakcijo bakteriolize je treba izvesti v aseptičnih pogojih.

Kontrolna vprašanja

1. Kaj se bo zgodilo z eritrociti, če namesto izotonične raztopine natrijevega klorida uporabimo destilirano vodo? Kaj je v ozadju tega pojava?

2. Do kakšne reakcije pride, ko eritrociti medsebojno delujejo s homolognim imunskim serumom v odsotnosti komplementa?

telovadba

Nastavite reakcijo hemolize. Zapišite in narišite rezultat.

Podobne informacije.

Reakcija indirektne hemaglutinacije (RIGA).

RIGA se uporablja v dveh različicah: z znanimi antigeni za dokazovanje protiteles z znanimi protitelesi za dokazovanje hipertenzije. Ta reakcija je specifična in se uporablja za diagnosticiranje bolezni, ki jih povzročajo bakterije in rikecije. Za izvedbo RIGA se uporabljajo diagnostiki eritrocitov, pripravljeni z adsorpcijo AG ali AT na eritrocitih, odvisno od namena študije (slika 10.3). V pozitivnih primerih je stopnja aglutinacije eritrocitov označena s plusi. Štirje plusi ocenjujejo reakcijo, ki ima obliko tankega filma zlepljenih eritrocitov (dežnik), ki prekriva dno epruvete; prisotnost filma z nazobčanimi čipkastimi robovi je označena z dvema plusoma. Titer se vzame kot mejna razredčitev testnega materiala, ki je povzročila aglutinacijo eritrocitov z dvema plusoma.

riž. 10.3.

1 - eritrociti, 2 - eritrocitni AG, 3 - konjugiran AG, 4-AT

RGA in reakcija inhibicije hemaglutinacije (RTGA).

Kot smo že omenili, RGA temelji na sposobnosti eritrocitov, da se držijo skupaj, ko se na njih adsorbirajo določeni antigeni. Kot testni material za hemaglutinacijo se uporabljajo alantoična amnijska tekočina, suspenzija horionsko-alantoičnih membran piščančjih zarodkov, suspenzije in izvlečki iz kultur ali organov živali, okuženih z virusi, naravni infektivni material. RGA ni serološka reakcija, saj se pojavi brez sodelovanja imunskega seruma in se uporablja za izbiro delovne razredčitve AG za nastavitev RTGA ali prisotnosti AG (virusa) v testnem materialu (na primer pri gripi). Pri reakciji se uporabljajo eritrociti živali, ptic, ljudi s krvno skupino I (0). Za nastavitev približne RGA se na predmetno stekelce nanese kapljica 5% suspenzije eritrocitov in kapljica testnega materiala, ki se temeljito premeša. S pozitivnim rezultatom po 1-2 minutah makroskopsko opazimo pojav flokulentne aglutinacije eritrocitov. Za nastavitev RHA v podaljšani vrsti v vdolbinicah polistirenskih plošč pripravimo dvakrat večje razredčitve preskusnega materiala na fiziološka raztopina v prostornini 0,5 ml. V vse epruvete dodamo 0,5 ml 0,25-1% suspenzije eritrocitov. Rezultate upoštevamo po popolni sedimentaciji eritrocitov v kontroli (eritrociti + fiziološka raztopina). Reakcija se upošteva glede na naravo sedimenta eritrocitov. V pozitivnih primerih je stopnja aglutinacije označena s plusi. Štirje plusi ocenjujejo reakcijo, ki ima obliko tankega filma zlepljenih eritrocitov, ki prekriva dno epruvete (dežnika), reakcija z vrzelmi v filmu je označena s tremi plusi, prisotnost filma z nazobčanimi čipkastimi robovi zlepljenih eritrocitov označujeta dva plusa, kosmičasta usedlina eritrocitov, obdana s cono aglutiniranih grudic eritrocitov, ustreza enemu plusu. Ostro izražen sediment eritrocitov, ki se ne razlikuje od kontrolnega, kaže na odsotnost aglutinacije. Titer se vzame kot mejna razredčitev testnega materiala, ki je povzročila aglutinacijo eritrocitov z dvema plusoma. Če je rezultat RHA pozitiven, se študija nadaljuje z določanjem vrste izoliranega virusa z uporabo HA RT s tipsko specifičnimi serumi. RTGA temelji na sposobnosti antiseruma, da zavira virusno hemaglutinacijo, saj virus, nevtraliziran s specifičnimi protitelesi, izgubi sposobnost aglutinacije rdečih krvničk. Za približno tipizacijo virusov se uporablja metoda kapljice na steklo. Za dokončno določitev tipske pripadnosti izoliranega virusa in titracijo protiteles v serumih se v epruvete ali v jamice vstavi ekspandirana RTHA. V ta namen pripravimo dvakratne razredčitve serumov v fiziološki raztopini in jih vlijemo v 0,25 ml. Razredčinam seruma dodamo eno kapljico materiala, ki vsebuje virus, in eno kapljico 1 % suspenzije eritrocitov. Pri uporabi RTGA za določanje tipa virusa uporabimo tipospecifične serume, ki jih dodamo enakemu volumnu delovne razredčine AG. Tipsko pripadnost izoliranega virusa ugotavljamo s specifičnim imunskim serumom, ki je pokazal najvišji titer protiteles proti temu virusu. RGA in RTGA se pogosto uporabljata za diagnostiko virusne okužbe (klopni encefalitis, gripa itd.), da bi odkrili specifična protitelesa in identificirali številne viruse po njihovih antigenih.

Reakcija indirektne ali pasivne hemaglutinacije (IPHA)

Ta odziv je bolj občutljiv kot reakcija aglutinacije in se uporablja pri diagnostiki okužb, ki jih povzročajo bakterije, rikecije, praživali in drugi mikroorganizmi.

RPGA vam omogoča zaznavanje majhne koncentracije protiteles.

Ta reakcija vključuje porjavele ovčje eritrocite ali človeške eritrocite s krvno skupino I, senzibilizirane z antigeni ali protitelesi.

Če v testnem serumu odkrijemo protitelesa, uporabimo eritrocite, senzibilizirane z antigeni (eritrocitni diagnostik).

V nekaterih primerih, če je treba v testnem materialu določiti različne antigene, uporabimo eritrocite, senzibilizirane z imunskimi globulini.

Rezultati RPHA se upoštevajo glede na naravo sedimenta eritrocitov.

Rezultat reakcije se šteje za pozitiven, pri katerem eritrociti enakomerno pokrivajo celotno dno epruvete (obrnjen dežnik).

Z negativno reakcijo se eritrociti v obliki majhnega diska (gumba) nahajajo v središču dna epruvete.

Aglutinacijska reakcija (RA)

Zaradi svoje specifičnosti, enostavnosti nastavitve in dokazljivosti je reakcija aglutinacije postala razširjena v mikrobiološki praksi za diagnozo mnogih nalezljive bolezni: tifus in paratifus (Vidalova reakcija), tifus (Weiglova reakcija) itd.

Reakcija aglutinacije temelji na specifičnosti interakcije protiteles (aglutininov) s celimi mikrobnimi ali drugimi celicami (aglutinogeni). Zaradi te interakcije nastanejo delci – aglomerati, ki se oborijo (aglutinirajo).

V reakciji aglutinacije lahko sodelujejo tako žive kot mrtve bakterije, spirohete, glive, praživali, rikecije, pa tudi eritrociti in druge celice.

Reakcija poteka v dveh fazah: prva (nevidna) je specifična, povezava antigena in protiteles, druga (vidna) je nespecifična, vezava antigenov, t.j. nastanek aglutinata.

Aglutinat nastane, ko se en aktivni center dvovalentnega protitelesa združi z determinantno skupino antigena.

Reakcija aglutinacije, tako kot vsaka serološka reakcija, poteka v prisotnosti elektrolitov.

Navzven je manifestacija pozitivne aglutinacijske reakcije dvojna. Pri mikrobih brez bičanja, ki imajo samo somatski O-antigen, se same mikrobne celice neposredno zlepijo skupaj. Takšna aglutinacija se imenuje drobnozrnata. Pojavi se v 18 - 22 urah.

Flagelarni mikrobi imajo dva antigena - somatski O-antigen in flagelarni H-antigen. Če se celice zlepijo z bički, nastanejo veliki ohlapni kosmiči in takšno aglutinacijsko reakcijo imenujemo grobozrnata. Pride v 2-4 urah.

Aglutinacijsko reakcijo lahko nastavimo tako z namenom kvalitativnega in kvantitativnega določanja specifičnih protiteles v bolnikovem krvnem serumu kot z namenom določanja vrste izoliranega povzročitelja. hemaglutinacija mikrobiološka kužna

Aglutinacijsko reakcijo je mogoče nastaviti tako v podrobni različici, ki omogoča delo s serumom, razredčenim na diagnostični titer, kot v različici nastavitve orientacijske reakcije, ki načeloma omogoča odkrivanje specifičnih protiteles ali določanje vrste patogen.

Aglutinacijska reakcija - RA(iz lat. aglutinacija- bonding) - preprosta reakcija, pri kateri protitelesa vežejo korpuskularne antigene (bakterije, eritrocite ali druge celice, netopne delce z adsorbiranimi antigeni na njih, pa tudi makromolekularne agregate). Pojavi se v prisotnosti elektrolitov, na primer, ko dodamo izotonično raztopino natrijevega klorida.

Uporabljajo se različne različice reakcije aglutinacije: razširjena, približna, posredna itd. Reakcija aglutinacije se kaže v tvorbi kosmičev ali usedlin.

RA se uporablja za:

določanje protiteles v krvnem serumu bolnikov, na primer z brucelozo (reakcije Wright, Heddelson), tifus in paratifus (Vidalova reakcija) in drugi nalezljive bolezni;

določitev patogena, izoliranega od bolnika;

določanje krvnih skupin z uporabo monoklonskih protiteles proti eritrocitnim alogenom.

Za določitev bolnikovih protiteles postavitipodaljšana reakcija aglutinacije: dodajte razredčitvam bolnikovega krvnega seruma diagnosticum(suspenzija ubitih mikrobov) in po nekaj urah inkubacije pri 37 °C opazimo največjo razredčitev seruma (serumski titer), pri kateri je prišlo do aglutinacije, tj. do nastanka oborine.

Narava in hitrost aglutinacije sta odvisni od vrste antigena in protiteles. Primer je interakcija diagnostikov (O- in R-antigenov) s specifičnimi protitelesi. Aglutinacijska reakcija z O-diagnostikum(bakterije ubije toplota, ohranijo termostabilen O antigen) poteka v obliki drobnozrnate aglutinacije. Aglutinacijska reakcija s H-diagnosticumom (bakterije, ki jih ubije formalin, obdrži toplotno labilen flagelarni H-antigen) je grobozrnata in poteka hitreje.

Če je treba določiti patogen, izoliran od pacienta, postavite orientacijska reakcija aglutinacije, z uporabo diagnostičnih protiteles (aglutinacijski serum), tj. Izvede se serotipizacija patogena. Približna reakcija izvedeno na stekelcu. Kapljici diagnostičnega aglutinacijskega seruma v razredčini 1:10 ali 1:20 dodamo čisto kulturo povzročitelja, izoliranega od bolnika. V bližini je postavljena kontrola: namesto seruma se nanese kapljica raztopine natrijevega klorida. Ko se v kapljici pojavi kosmičasta usedlina s serumom in mikrobi, dajo obsežna reakcija aglutinacije v epruvetah z naraščajočimi razredčinami aglutinacijskega seruma, ki mu dodamo 2-3 kapljice suspenzije patogena. Aglutinacija se upošteva glede na količino usedline in stopnjo zbistrenosti tekočine. Reakcija se šteje za pozitivno, če opazimo aglutinacijo v razredčitvi blizu titra diagnostičnega seruma. Hkrati se upoštevajo kontrole: serum, razredčen z izotonično raztopino natrijevega klorida, mora biti prozoren, suspenzija mikrobov v isti raztopini mora biti enakomerno motna, brez usedline.

Različne sorodne bakterije je mogoče aglutinirati z istim diagnostičnim aglutinacijskim serumom, kar oteži njihovo identifikacijo. Zato, uživajte adsorbirani aglutinacijski serumi, iz katerih so bila navzkrižno reaktivna protitelesa odstranjena z adsorpcijo sorodnih bakterij. V takih serumih ostanejo protitelesa, specifična samo za to bakterijo. Pripravo monoreceptorskih diagnostičnih aglutinacijskih serumov na ta način je predlagal A. Castellani (1902).

Reakcija indirektne (pasivne) hemaglutinacije(RNHA, RPHA) temelji na uporabi eritrocitov z antigeni ali protitelesi, adsorbiranimi na površini, katerih interakcija z ustreznimi protitelesi ali antigeni krvnega seruma kroglice povzroči, da se eritrociti zlepijo in padejo na dno. epruveto ali celico V obliki nazobčanega sedimenta (slika 13.2). Z negativno reakcijo se eritrociti usedejo v obliki "gumba". Običajno se protitelesa odkrijejo v RNHA z uporabo antigenskega eritrocitnega diagnostika, ki je eritrocit z adsorbirano na ti antigeni. Včasih uporabljamo protitelesno diagnostiko eritrocitov, na katere se adsorbirajo protitelesa. Na primer, botulinski toksin lahko odkrijemo tako, da mu dodamo eritrocitno protitelo botulinum diagnosticum (to reakcijo imenujemo reakcija povratne indirektne hemaglutinacije- RONGA). RNHA se uporablja za diagnosticiranje nalezljivih bolezni, ugotavljanje gonadotropnega hormona V urina, ko je nosečnost ugotovljena, za odkrivanje preobčutljivost Za zdravila, hormoni in v nekaterih drugih primerih.

COOMBSOVA REAKCIJA

(Coombsov test) - metoda za določanje Rh protiteles na površini rdečih krvnih celic, ki povzročajo obarjanje globulinov v krvnem serumu. Ta test se uporablja za diagnosticiranje hemolitična anemija pri dojenčkih z Rh inkompatibilnostjo, pri kateri opazimo uničenje rdečih krvnih celic.

Reakcija koaglutinacije. Patogene celice se določijo s pomočjo stafilokokov, predhodno obdelanih z imunskim diagnostičnim serumom. Protein, ki vsebuje stafilokoke A, ki imajo afiniteto za Fc fragment imunoglobulinov, nespecifično adsorbirajo protimikrobna protitelesa, ki nato sodelujejo z aktivnimi centri z ustreznimi mikrobi, izoliranimi od bolnikov. Kot posledica koaglutinacije nastanejo kosmiči, sestavljeni iz stafilokokov, diagnostičnih serumskih protiteles in določenega mikroba.

Reakcija inhibicije hemaglutinacije(RTGA) temelji na blokadi, zatiranju antigenov virusov s protitelesi imunskega seruma, zaradi česar virusi izgubijo sposobnost aglutinacije rdečih krvnih celic (slika 13.3). RTHA se uporablja za diagnosticiranje številnih virusnih bolezni, katerih povzročitelji (gripa, ošpice, rdečke, klopni encefalitis itd.) Lahko aglutinirajo eritrocite različnih živali.

1. Skupina zdravnikov je prispela v Indijo prek WHO, da bi identificirali bolnike z otroško paralizo in pomagali pri splošnem cepljenju proti otroški paralizi. V eni izmed anketiranih vasi so k zdravnikom pripeljali 6-letnega dečka iz velike družine, ki je zbolel pred 5 dnevi. Temperatura se je nenadoma dvignila, glava je močno bolela, pojavilo se je ponavljajoče se bruhanje, bolečine v rokah in nogah. Na pregledu: toplota, huda šibkost, meningealni simptomi, na desna noga znižan mišični tonus, tetivni refleksi so močno oslabljeni, stopalo visi. Pri punkciji hrbteničnega kanala je iztekel likvor visok krvni pritisk, število limfocitov je povečano, bakterije niso izolirane. Postavljena je bila predhodna diagnoza "paralitična oblika poliomielitisa". Kako se je fant lahko okužil? Kako poteka specifična aktivna preventiva poliomielitisa? Ali obstaja nevarnost okužbe drugih otrok v tej družini, kaj storiti?

odgovor: Deček se lahko okuži fekalno-oralno s hrano, vodo in tudi kapljicami v zraku. Glavni ukrep za preprečevanje poliomielitisa je imunizacija z živo kulturo cepiva 3 serotipov sevov Sabin.V Rusiji se uporablja cepivo proti otroški paralizi za peroralno uporabo, ki ga proizvaja Inštitut za poliomielitis in virusni encefalitis. M.P. Čumakov. Cepivo je trivalentni pripravek oslabljenih Sabinovih sevov poliovirusa tipov 1, 2, 3, pridobljenih v primarni kulturi ledvičnih celic afriške zelene opice. . Načrtovana cepljenja otroci, stari od 3 mesecev do 6 let, so izpostavljeni poliomielitisu. Cepljenja s peroralnim cepivom proti otroški paralizi se izvajajo z 2 ali 4 kapljicami cepiva peroralno trikrat pri 3, 4, 5 in 6 mesecih s trikratnim revakcinacijo pri 18, 20 mesecih in 14 letih. Oboleli deček mora biti sprejet v bolnišnico, vsi ostali otroci v tej družini pa morajo biti cepljeni z živim cepivom proti otroški paralizi.

1. Sestava in uporaba trivalentne polimerne podenotne tekočine cepiva proti gripi (grippol)

To je molekularno cepivo. Sestava: površinski AG virusa gripe treh podtipov (A / H1N1, A / H3N2, B). Uporaba: za preprečevanje gripe

Izpitna karta št. 23