Netiešā vai pasīvā hemaglutinācijas tests (IRHA vai RPHA) ir jutīgāks un specifiskāks nekā aglutinācijas tests. Šo reakciju izmanto arī divos virzienos.

1) Antivielu noteikšanai pacienta asins serumā tiek izmantota eritrocītu diagnostika, kurā antigēns tiek adsorbēts uz ar tanīnu apstrādātu eritrocītu virsmas. Saistībā ar šo reakciju biežāk tiek lietots termins RPHA.

Testa serumu atšķaida plastmasas plākšņu iedobēs un pievieno eritrocītu diagnostiku. Ja reakcija ir pozitīva, gar cauruma sienām parādās plāna plēve “mežģīņu lietussarga” formā; negatīva reakcija- blīvas sarkano asins šūnu nogulsnes “pogas” formā.

2) Toksīnu un baktēriju antigēnu noteikšanai testa materiālā izmanto antivielu eritrocītu diagnostiku, kas iegūta, adsorbējot antivielas uz eritrocītiem. Saistībā ar šo reakciju biežāk tiek lietots termins RNGA. Piemēram, ar antivielu diagnostikas palīdzību tiek konstatēts mēra nūjiņas antigēns, difterijas eksotoksīns, botulīna eksotoksīns.

Kumbsa tests (aptiglobulīna tests)

Reakciju izmanto, lai noteiktu nepilnīgas antivielas, piemēram, antivielas pret Rh faktoru. Rh + eritrocītiem pievieno testa serumu, kurā tiek pieņemts, ka ir nepilnīgas antivielas pret Rh faktoru. Nepilnīgas antivielas, kas pievienotas sarkanajām asins šūnām, neizraisa aglutināciju, jo tām ir tikai viens aktīvs centrs. Pēc tam pievieno antiglobulīna serumu, kas satur antivielas pret cilvēka globulīniem. Kombinācijā ar nepilnīgām antivielām antiglobulīna serums izraisa sarkano asins šūnu aglutināciju.

Nokrišņu reakcija

Reakcijas būtība ir antigēna sedimentācija (izgulsnēšanās) specifisku antivielu ietekmē. Lai iegūtu redzamu reakciju, ir nepieciešama elektrolīta klātbūtne. Antigēns nokrišņu reakcijā ir molekulāri izkliedētas vielas.

Gredzena nokrišņu reakcija ievieto šaurās nokrišņu caurulēs. Imūnserumu ielej mēģenē, un testa materiālu rūpīgi uzklāj uz tās. Ja tajā ir antigēns, uz abu šķidrumu robežas veidojas necaurspīdīgs nogulšņu gredzens.

Reakcija tiek izmantota tiesu medicīna noteikt proteīnu sugas asins traipos, spermā u.c.; noteikt antigēnu Sibīrijas mēra (Ascoli reakcijas), meningīta un citu infekciju diagnostikā; sanitārajos un higiēniskajos pētījumos - lai konstatētu viltojumu pārtikas produkti. Imūnās izgulsnēšanas serumus iegūst, imunizējot dzīvniekus ar atbilstošo antigēnu. Piemēram, cilvēka proteīnu izgulsnējošu serumu iegūst, imunizējot trušu ar cilvēka proteīnu. Izgulsnējošā seruma titrs ir augstākais antigēna atšķaidījums, ar kuru tas reaģē. Serumu parasti lieto neatšķaidītu vai atšķaidījumā 1:5.

Agara gēla izgulsnēšanas reakcija veikta, izmantojot vairākas metodes. Tās ir dubultās imūndifūzijas reakcijas, radiālās imūndifūzijas reakcijas un imūnelektroforēzes reakcijas.

Dubultā imūndifūzijas reakcija(pēc Ouchterlony domām). Izkusis agara želeja ielej Petri trauciņā un pēc sacietēšanas tajā izgrieza caurumus. Dažās iedobēs ievieto antigēnu, citās - imūnserumus, kas izkliedējas agarā un veido nogulsnes baltu svītru veidā tikšanās vietā.

Radiāla imūndifūzijas reakcija(pēc Mančīni domām). Imūnserumu pievieno izkausētajam agara gēlam un lej krūzē. Pēc agara sacietēšanas tiek izgrieztas iedobes un tajās ievietoti antigēni, kas, difundējot agarā, ap iedobēm veido gredzenveida nokrišņu zonas. Jo augstāka ir antigēna koncentrācija, jo lielāks ir gredzena diametrs. Reakciju izmanto, piemēram, dažādu klašu imūnglobulīnu noteikšanai asinīs. IgG, IgM, IgA klašu imūnglobulīni šajā reakcijā darbojas kā antigēni, un antivielas pret tiem atrodas specifiskos monoreceptoru serumos.

Imūnelektroforēze. Olbaltumvielu antigēnu elektroforēzi veic agara gēlā. Nogulsnējošs serums tiek ievadīts rievā, kas iet paralēli proteīnu kustības virzienam. Antigēni un antivielas izkliedējas agarā, un vietās, kur tie satiekas, veidojas nokrišņu līnijas.

Imūnās līzes reakcijas

Antigēns (eritrocīti vai baktērijas), apvienojoties ar specifiskām antivielām, veido imūnkompleksu, kuram pievienojas komplements (C1), un komplements tiek aktivizēts pa klasisko ceļu. Aktivētais komplements lizē sarkanās asins šūnas (hemolīze) vai baktērijas (bakteriolīze). Bakteriolīzes reakciju izmanto, lai identificētu Vibrio cholerae.

Hemolīzes reakcija. Antigēns reakcijā ir eritrocīti, antivielas (hemolizīni) atrodas hemolītiskajā serumā. Hemolizīni pievienojas sarkanajām asins šūnām, un tiek aktivizēts komplements, kas lizē sarkanās asins šūnas. Duļķainā sarkano asins šūnu suspensija pārvēršas caurspīdīgā spilgti sarkanā šķidrumā - "lakas asinis". Tā kā hemolīzes reakcija notiek tikai komplementa klātbūtnē, to izmanto kā indikatoru komplementa noteikšanai.

Vietējā hemolīzes reakcija gēlā(Ernes reakcija) - hemolīzes reakcijas variants. Kalpo, lai noteiktu antivielas veidojošo šūnu (AFC) skaitu liesā un limfmezglos.

Izkausēto agara želeju sajauc ar liesas šūnu un sarkano asins šūnu suspensiju, un pēc agara sacietēšanas pievieno komplementu. Ap katru hemolizīnu ražojošo šūnu veidojas hemolīzes zona. Hemolizīnu ražojošo šūnu skaitu nosaka šādu zonu skaits.

Netiešās (pasīvās) hemaglutinācijas reakcijas (IRHA) pamatā ir fakts, ka sarkanās asins šūnas, ja uz to virsmas tiek adsorbēts šķīstošs antigēns, mijiedarbojoties ar antivielām pret adsorbēto antigēnu, iegūst aglutinācijas spēju. RNGA diagramma ir parādīta attēlā. 34. RNGA plaši izmanto vairāku infekciju diagnostikā.

Rīsi. 34. Pasīvās hemaglutinācijas reakcijas (RPHA) shēma. A - eritrocītu diagnostikas iegūšana: B - RPGA: 1 - eritrocīts: 2 - tiek pētīts antigēns; 3 - eritrocītu diagnostika; 4 - antiviela pret pētāmo antigēnu: 5 - aglutināts

Reakcijas iestatīšana. Testējamo serumu karsē 30 minūtes 56°C temperatūrā, secīgi atšķaida proporcijā 1:10 - 1:1280 un lej 0,25 ml mēģenēs vai iedobēs, kur iepilina 2 pilienus eritrocītu diagnostikas (eritrocīti ar uz tiem adsorbētu antigēnu). ) pēc tam tiek pievienoti.

Kontroles: eritrocītu diagnostikas suspensija ar zināmu imūnserumu; diagnostikas apturēšana ar normālu serumu; normālu sarkano asins šūnu suspensija ar testa serumu. Pirmajā kontrolē jānotiek aglutinācijai, otrajā un trešajā tā nedrīkst notikt.

Izmantojot RIGA, jūs varat noteikt nezināmu antigēnu, ja zināmas antivielas ir adsorbētas uz sarkanajām asins šūnām.

Hemaglutinācijas reakciju var veikt 0,025 ml tilpumā (mikrometode), izmantojot Takachi mikrotitratoru.

Kontroles jautājumi

1. Ko liecina pozitīvs rentgena analīzes rezultāts starp sarkanajām asins šūnām un materiālu, kas tiek pārbaudīts attiecībā uz vīrusa klātbūtni?

2. Vai notiks sarkano asinsķermenīšu aglutinācija, ja tām pievieno vīrusu un tam atbilstošu serumu? Kā sauc reakciju, kas atklāj šo parādību?

Vingrinājums

Ņem vērā un reģistrē rezultātu RĪGA.

Nokrišņu reakcija

Izgulsnēšanas reakcijā tiek izgulsnēts specifisks imūnkomplekss, kas sastāv no šķīstoša antigēna (lizāta, ekstrakta, haptēna) un specifiskas antivielas elektrolītu klātbūtnē.

Duļķaino gredzenu vai nogulsnes, kas veidojas šīs reakcijas rezultātā, sauc par nogulsnēm. Šī reakcija no aglutinācijas reakcijas galvenokārt atšķiras ar antigēna daļiņu lielumu.

Nokrišņu reakciju parasti izmanto, lai noteiktu antigēnu vairāku infekciju diagnostikā ( Sibīrijas mēris, meningīts utt.); tiesu medicīnā - noteikt asiņu, spermas uc sugas; sanitārajos un higiēniskajos pētījumos - konstatējot produktu viltojumu; ar tās palīdzību tiek noteiktas dzīvnieku un augu filoģenētiskās attiecības. Reakcijai jums ir nepieciešams:

1. Antivielas (precipitīni) - imūnserums ar augstu antivielu titru (ne zemāku par 1:100 000). Izgulsnējošā seruma titru nosaka pēc antigēna augstākā atšķaidījuma, ar kuru tas reaģē. Serumu parasti lieto neatšķaidītu vai atšķaidījumā 1:5 – 1:10.

2. Antigēns - izšķīdušas proteīna vai lipoīdu polisaharīdu dabas vielas (pilni antigēni un haptēni).

3. Izotoniskais šķīdums.

Galvenās izgulsnēšanas reakcijas veikšanas metodes ir: gredzenveida izgulsnēšanas reakcija un izgulsnēšanas reakcija agarā (gelā).

Uzmanību! Visām nokrišņu reakcijā iesaistītajām sastāvdaļām jābūt pilnīgi caurspīdīgām.

Gredzena nokrišņu reakcija. Izmantojot Pasteur pipeti, nogulsnēšanas mēģenē pievienojiet 0,2-0,3 ml (5-6 pilienus) seruma (serums nedrīkst nokļūt uz mēģenes sieniņām). Antigēns tādā pašā tilpumā tiek rūpīgi uzklāts uz seruma, izlejot to ar plānu Pastēra pipeti gar mēģenes sieniņu. Mēģene tiek turēta slīpā stāvoklī. Ja tas ir pareizi uzklāts, starp serumu un antigēnu jābūt skaidrai robežai. Uzmanīgi, lai šķidrums nesajauktos, mēģeni ievieto statīvā. Plkst pozitīvs rezultāts reakcija, uz antigēna un antivielas robežas veidojas duļķains “gredzens” - nogulsnes (sk. 48. att.).

Reakcijai ir pievienotas vairākas kontroles (18. tabula). Ļoti svarīga ir reakcijas sastāvdaļu pievienošanas secība mēģenē. Jūs nevarat uzklāt serumu uz antigēna (kontrolē - uz izotoniskā šķīduma), jo seruma relatīvais blīvums ir lielāks, tas nogrims mēģenes apakšā, un robeža starp šķidrumiem netiks atklāta.

18. tabula. Gredzena izgulsnēšanas reakcijas iestatīšanas shēma

Piezīme. + “gredzena” klātbūtne; - “gredzena” trūkums.

Rezultāti tiek reģistrēti pēc 5-30 minūtēm, dažos gadījumos pēc stundas, kā vienmēr, sākot ar vadīklām. “Gredzens” 2. mēģenē norāda uz imūnseruma spēju uzsākt specifisku reakciju ar atbilstošo antigēnu. 3-5 mēģenēs nedrīkst būt “gredzenu” - nav viens otram atbilstošu antivielu un antigēnu. "Gredzens" 1. mēģenē - pozitīvs reakcijas rezultāts - norāda, ka testa antigēns atbilst ņemtajam imūnserumam, "gredzena" neesamība ("gredzens" tikai 2. mēģenē) norāda uz to neatbilstību - negatīvu. reakcijas rezultāts.

Izgulsnēšanās reakcija agarā (gelā). Reakcijas īpatnība ir tāda, ka antigēna un antivielu mijiedarbība notiek blīvā vidē, t.i., gēlā. Iegūtās nogulsnes barotnes biezumā rada duļķainu svītru. Joslas trūkums norāda uz neatbilstību starp reakcijas komponentiem. Šo reakciju plaši izmanto biomedicīnas pētījumos, jo īpaši pētot toksīnu veidošanos difterijas izraisītājā.

Kontroles jautājumi

1. Kāda ir galvenā atšķirība starp aglutinācijas un nokrišņu reakcijām?

2. Kāpēc nokrišņu reakcijā nevar izmantot duļķainas sastāvdaļas?

Vingrinājums

1. Uzstādiet gredzena izgulsnēšanas reakciju un uzzīmējiet rezultātu.

2. Izpētiet antigēna un antivielu mijiedarbības raksturu izgulsnēšanās reakcijā agarā, ieskicējiet rezultātu (paņemiet krūzīti no skolotāja).

Līzes reakcija (imūnā citolīze)

Imūnlīze ir šūnu izšķīšana antivielu ietekmē ar obligātu komplementa līdzdalību. Reakcijai jums ir nepieciešams:

1. Antigēns – mikrobi, sarkanās asins šūnas vai citas šūnas.

2. Antiviela (lizīns) - imūnserums, retāk pacienta serums. Bakteriolītiskais serums satur antivielas, kas iesaistītas baktēriju lizē; hemolītiski - hemolizīni, kas veicina sarkano asinsķermenīšu līzi; spirohetu līzei nepieciešami spirohetolizīni, šūnas - itolizīni utt.

3. Papildināt. Visvairāk papildina serumu jūrascūciņas. Šo serumu (vairāku dzīvnieku maisījumu) parasti izmanto kā papildinājumu. Svaigs (vietējais) papildinājums ir nestabils un viegli iznīcina, karsējot, kratot vai uzglabājot, tāpēc to var lietot ne ilgāk kā divas dienas pēc saņemšanas. Lai saglabātu komplementu, tam pievieno 2%. borskābe un 3% nātrija sulfāts. Šo papildinājumu var uzglabāt 4°C temperatūrā līdz divām nedēļām. Visbiežāk izmanto sauso komplementu. Pirms lietošanas to izšķīdina izotoniskā šķīdumā līdz sākotnējam tilpumam (norādīts uz etiķetes).

4. Izotoniskais šķīdums.

Hemolīzes reakcija(19. tabula). Reakcijai jums ir nepieciešams:

1. Antigēns - 3% mazgātu aitu eritrocītu suspensija ar ātrumu 0,3 ml eritrocītu nogulsnes un 9,7 ml izotoniskā šķīduma.

2. Antiviela - hemolītiskais serums (hemolizīns) pret aitu eritrocītiem; parasti sagatavo ražošanā, liofilizē un titru norāda uz etiķetes.

Hemolizīna titrs ir augstākais seruma atšķaidījums, kurā komplementa klātbūtnē notiek pilnīga 3% sarkano asins šūnu suspensijas hemolīze. Hemolīzes reakcijai hemolizīnu ņem trīskāršā titrā, t.i., atšķaida 3 reizes mazāk nekā pirms titra. Piemēram, ar seruma titru 1:1200, serumu atšķaida 1:400 (0,1 ml seruma * un 39,9 ml izotoniskā šķīduma). Ir nepieciešams pārmērīgs hemolizīns, jo daļu no tā var adsorbēt citi reakcijas komponenti.

* (Jums nevajadzētu uzņemt mazāk par 0,1 ml seruma - mērījumu precizitāte cietīs.)

3. Komplementu atšķaida attiecībā 1:10 (0,2 ml komplementa un 1,8 ml izotoniskā šķīduma).

4. Izotoniskais šķīdums.

19. tabula. Hemolīzes reakcijas shēma

Rezultātu uzskaite. Ja reakcija tiek veikta pareizi, 1. mēģenē notiks hemolīze - tās saturs kļūs caurspīdīgs. Kontrolē šķidrums paliek duļķains: 2. mēģenē nav pietiekami daudz komplementa, lai notiktu hemolīze, 3. mēģenē nav hemolizīna, 4. mēģenē nav ne hemolizīna, ne komplementa, 5. mēģenē antigēns to dara. neatbilst antivielām,

Ja nepieciešams, hemolītisko serumu titrē saskaņā ar šādu shēmu (20. tabula).

Pirms titrēšanas sagatavo sākotnējo seruma atšķaidījumu 1:100 (0,1 ml seruma un 9,9 ml izotoniskā šķīduma), no kura pagatavo nepieciešamos atšķaidījumus, piemēram:

No šiem atšķaidījumiem titrēšanas mēģenēs pievienojiet 0,5 ml seruma, kā parādīts tabulā. 20.

20. tabula. Titrēšanas shēma hemolītiskajam serumam (hemolizīns)

Tabulā sniegtajā piemērā. 20, hemolītiskā seruma titrs ir 1:1200.

Lietojot svaigu hemolītisko serumu, tas ir jāinaktivē, lai iznīcinātu tajā esošo komplementu. Lai to izdarītu, to 30 minūtes karsē 56 ° C temperatūrā ūdens vannā vai inaktivatorā ar termostatu. Pēdējā metode ir labāka: tā novērš sūkalu pārkaršanas iespēju, t.i., to denaturāciju. Denaturēti serumi nav piemēroti testēšanai.

Bakteriolīzes reakcija. Šajā reakcijā komplements lizē baktērijas atbilstoša (homologa) seruma klātbūtnē. Reakcijas shēma būtībā ir līdzīga hemolīzes reakcijas shēmai. Atšķirība ir tāda, ka pēc divu stundu inkubācijas visas mēģenes tiek iesētas Petri trauciņos ar eksperimentā ņemtajam mikroorganismam labvēlīgu barotni, lai noskaidrotu, vai tas ir lizēts. Ja eksperiments tiek veikts pareizi, kultūrām no 2-5 mēģenēm (kontroles) vajadzētu uzrādīt bagātīgu augšanu. Augšanas trūkums vai vāja augšana inokulācijā no 1. mēģenes (eksperiments) norāda uz mikrobu nāvi, t.i., ka tie ir homologi pret antivielu.

Uzmanību! Bakteriolīzes reakcija jāveic aseptiskos apstākļos.

Kontroles jautājumi

1. Kas notiks ar sarkanajām asins šūnām, ja izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma vietā izmantos destilētu ūdeni? Kas ir šīs parādības pamatā?

2. Kāda reakcija notiks, kad eritrocīti mijiedarbosies ar homologu imūnserumu, ja nav komplementa?

Vingrinājums

Iestatiet hemolīzes reakciju. Ierakstiet un ieskicējiet rezultātu.

Saistītā informācija.

Netiešā hemaglutinācijas reakcija (RIHA).

RIGA tiek izmantots divās versijās: ar zināmām antivielām, lai noteiktu antivielas ar zināmām antivielām, lai noteiktu antivielas. Šī reakcija ir specifiska, un to izmanto baktēriju un riketsijas izraisītu slimību diagnosticēšanai. RĪGA veikšanai tiek izmantota eritrocītu diagnostika, kas sagatavota, adsorbējot AG vai AT uz eritrocītiem, atkarībā no pētījuma mērķa (10.3. att.). Pozitīvos gadījumos eritrocītu aglutinācijas pakāpe tiek atzīmēta ar plusiem. Četri plusi novērtē reakciju, kas ir plānas adhezīvu sarkano asins šūnu plēves (lietussarga) formā, kas pārklāj mēģenes dibenu; par plēves esamību ar izlobītām mežģīņu malām norāda divi plusi. Titrs tiek uzskatīts par testa materiāla maksimālo atšķaidījumu, kas izraisīja eritrocītu aglutināciju par diviem plusiem.

Rīsi. 10.3.

1 - sarkanās asins šūnas, 2 - eritrocītu AG, 3 - konjugēts AG, 4-AT

RHA un hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija (HAI).

Kā jau minēts, RHA pamatā ir eritrocītu spēja salipt kopā, kad uz tiem tiek adsorbēti noteikti antigēni. Par hemaglutinācijas testa materiālu izmanto alantoīdu un amnija šķidrumu, vistu embriju horiona-alanto membrānu suspensiju, suspensijas un ekstraktus no ar vīrusiem inficētu dzīvnieku kultūrām vai orgāniem, kā arī vietējo infekcijas materiālu. RGA nav seroloģiska reakcija, jo tā notiek bez imūnseruma līdzdalības un tiek izmantota, lai izvēlētos antigēna darba atšķaidījumu RGA stadijas noteikšanai vai antigēna (vīrusa) klātbūtni testa materiālā (piemēram, gripai). ). Reakcijā tiek izmantotas sarkanās asins šūnas no dzīvniekiem, putniem un cilvēkiem ar I asins grupu (0). Lai izveidotu aptuvenu RGA, uz stikla priekšmetstikliņa uzklāj pilienu 5% eritrocītu suspensijas un pilienu testa materiāla un rūpīgi samaisa. Ja rezultāts ir pozitīvs, pēc 1-2 minūtēm makroskopiski tiek novērota eritrocītu flokulējoša aglutinācija. Lai uzstādītu RGA nesalocītā rindā polistirola plākšņu iedobēs, sagatavo divreiz pieaugošus testa materiāla atšķaidījumus sāls šķīdums 0,5 ml tilpumā. Visām mēģenēm pievieno 0,5 ml 0,25-1% sarkano asins šūnu suspensijas. Rezultāti tiek ņemti vērā pēc pilnīgas eritrocītu sedimentācijas kontroles (sarkanās asins šūnas + sāls šķīdums). Reakciju ņem vērā eritrocītu nogulumu raksturs. Pozitīvos gadījumos aglutinācijas pakāpe tiek atzīmēta ar plusiem. Reakcija, kas izskatās pēc plānas lipīgu sarkano asins šūnu plēves, kas nosedz mēģenes (lietussarga) dibenu, tiek novērtēta ar četriem plusiem; reakcija ar spraugām plēvē tiek atzīmēta ar trim plusiem; plēves klātbūtne ar mežģīnēm. lipīgo sarkano asinsķermenīšu malas atzīmētas ar diviem plusiem, vienam plusam atbilst flokulentas sarkano asinsķermenīšu nogulsnes, ko ieskauj aglutinētu eritrocītu kunkuļu zona. Strauji izteikti eritrocītu nogulumi, kas neatšķiras no kontroles, norāda uz aglutinācijas neesamību. Titrs tiek uzskatīts par testa materiāla maksimālo atšķaidījumu, kas izraisīja eritrocītu aglutināciju par diviem plusiem. Ja RGA rezultāts ir pozitīvs, pētījums tiek turpināts, nosakot izolētā vīrusa veidu, izmantojot RT GA ar tipam specifiskiem serumiem. RTGA pamatā ir antiseruma īpašība nomākt vīrusu hemaglutināciju, jo vīruss, ko neitralizē specifiskas antivielas, zaudē spēju aglutinēt sarkanās asins šūnas. Provizoriskai vīrusu tipizēšanai tiek izmantota pilienu metode uz stikla. Lai galīgi noteiktu izolētā vīrusa veidu un titrētu antivielas serumā, mēģenēs vai iedobēs ievieto paplašinātu rentgena testu. Šim nolūkam fizioloģiskā šķīdumā sagatavo divkāršus seruma atšķaidījumus un izdala 0,25 ml. Seruma atšķaidījumiem pievieno vienu pilienu vīrusa saturoša materiāla un vienu pilienu 1% sarkano asins šūnu suspensijas. Izmantojot RTGA vīrusa veida noteikšanai, tiek izmantoti tipam specifiski serumi, kurus pievieno vienādam tilpumam AG darba atšķaidījumam. Izolētā vīrusa veidu nosaka specifiskais imūnserums, kas uzrādīja augstāko antivielu titru pret šo vīrusu. RGA un RTGA plaši izmanto diagnostikai vīrusu infekcijas (ērču encefalīts, gripa utt.), lai noteiktu specifiskas antivielas un pēc to antivielām identificētu daudzus vīrusus.

Netiešā vai pasīvā hemaglutinācijas reakcija (IPHA)

Šī reakcija ir jutīgāka nekā aglutinācijas reakcija un to izmanto baktēriju, riketsiju, vienšūņu un citu mikroorganismu izraisītu infekciju diagnostikā.

RPGA ļauj noteikt nelielu antivielu koncentrāciju.

Šajā reakcijā ir iesaistīti miecēti aitas eritrocīti vai cilvēka eritrocīti ar I grupas asinīm, kas sensibilizēti ar antigēniem vai antivielām.

Ja testa serumā tiek konstatētas antivielas, tad tiek izmantotas ar antigēniem sensibilizētas sarkanās asins šūnas (eritrocītu diagnostika).

Atsevišķos gadījumos, ja nepieciešams noteikt dažādus antigēnus testa materiālā, tiek izmantoti eritrocīti, kas sensibilizēti ar imūnglobulīniem.

RPGA rezultāti tiek ņemti vērā pēc eritrocītu nogulumu rakstura.

Reakcijas rezultāts tiek uzskatīts par pozitīvu, ja sarkanās asins šūnas vienmērīgi pārklāj visu mēģenes dibenu (apgriezts lietussargs).

Negatīvas reakcijas gadījumā sarkanās asins šūnas neliela diska (pogas) formā atrodas mēģenes dibena centrā.

Aglutinācijas reakcija (RA)

Pateicoties tās specifikai, izpildes vieglumam un demonstrativitātei, aglutinācijas reakcija ir kļuvusi plaši izplatīta mikrobioloģiskajā praksē daudzu slimību diagnosticēšanai. infekcijas slimības: vēdertīfs un paratīfs (Vidal reakcija), tīfs (Veigla reakcija) utt.

Aglutinācijas reakcijas pamatā ir antivielu (aglutinīnu) mijiedarbības specifika ar veselām mikrobu vai citām šūnām (aglutinogēniem). Šīs mijiedarbības rezultātā veidojas daļiņas - aglomerāti, kas izgulsnējas (aglutinējas).

Aglutinācijas reakcijā var būt gan dzīvas, gan nogalinātas baktērijas, spirohetas, sēnītes, vienšūņi, riketsijas, kā arī sarkanās asins šūnas un citas šūnas.

Reakcija notiek divās fāzēs: pirmā (neredzamā) - specifiskā, antigēna un antivielu kombinācija, otrā (redzamā) - nespecifiskā, antigēnu līmēšana, t.i. aglutināta veidošanās.

Aglutināts veidojas, kad viens divvērtīgas antivielas aktīvais centrs apvienojas ar antigēna noteicošo grupu.

Aglutinācijas reakcija, tāpat kā jebkura seroloģiskā reakcija, notiek elektrolītu klātbūtnē.

Ārēji pozitīvas aglutinācijas reakcijas izpausmei ir divkāršs raksturs. Ziedu mikrobiem, kuriem ir tikai somatiskais O-antigēns, pašas mikrobu šūnas pielīp tieši. Šo aglutināciju sauc par smalkgraudainu. Tas notiek 18-22 stundu laikā.

Flagellate mikrobiem ir divi antigēni - somatiskais O-antigēns un flagellārais H-antigēns. Ja šūnas ir salīmētas kopā ar flagellas, veidojas lielas, irdenas pārslas, un šo aglutinācijas reakciju sauc par rupji graudainu. Tas notiek 2-4 stundu laikā.

Aglutinācijas reakciju var veikt gan specifisku antivielu kvalitatīvai un kvantitatīvai noteikšanai pacienta asins serumā, gan izolētā patogēna sugas noteikšanai. hemaglutinācija mikrobioloģiski infekciozi

Aglutinācijas reakciju var veikt gan paplašinātā versijā, kas ļauj strādāt ar serumu, kas atšķaidīts līdz diagnostikas titram, gan indikatīvā reakcijas variantā, kas principā ļauj noteikt specifiskas antivielas vai noteikt patogēna sugu. .

Aglutinācijas reakcija - RA(no lat. aglutinācija- adhēzija) ir vienkārša reakcija, kurā antivielas saistās ar korpuskulārajiem antigēniem (baktērijas, eritrocītus vai citas šūnas, nešķīstošās daļiņas ar uz tām adsorbētiem antigēniem, kā arī makromolekulāros agregātus). Tas notiek elektrolītu klātbūtnē, piemēram, pievienojot izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu.

Aglutinācijas reakcijai tiek izmantotas dažādas iespējas: ekstensīva, indikatīva, netieša utt. Aglutinācijas reakcija izpaužas kā pārslu vai nogulumu veidošanās.

RA tiek izmantots:

antivielu noteikšana asins serumā pacientiem, piemēram, ar brucelozi (Raita, Hedelsona reakcijas), vēdertīfs un paratīfs (Vidal reakcija) un citi infekcijas slimības;

no pacienta izolēta patogēna noteikšana;

asins grupu noteikšana, izmantojot monoklonālās antivielas pret eritrocītu alloantigēniem.

Lai noteiktu antivielas pacientam ieliecietdetalizēta aglutinācijas reakcija: pievienot pacienta asins seruma atšķaidījumiem diagnostika(nogalinātu mikrobu suspensija) un pēc vairāku stundu inkubācijas 37 °C temperatūrā tiek atzīmēts augstākais seruma atšķaidījums (seruma titrs), pie kura notika aglutinācija, t.i., veidojās nogulsnes.

Aglutinācijas raksturs un ātrums ir atkarīgs no antigēna un antivielu veida. Kā piemēru var minēt diagnostikas līdzekļu (O- un R-antigēnu) mijiedarbības īpatnības ar specifiskām antivielām. Aglutinācijas reakcija ar O-diagnostika(baktērijas iznīcina karstums, saglabājot siltuma stabilitāti O-antigēns) notiek smalkgraudainas aglutinācijas veidā. Aglutinācijas reakcija ar H-diagnosticum (baktērijas, ko iznīcina formaldehīds, saglabājot termolabilu flagellar H-antigēnu) ir rupja un norit ātrāk.

Ja nepieciešams noteikt no pacienta izolētu patogēnu, ielieciet indikatīva aglutinācijas reakcija, izmantojot diagnostiskās antivielas (aglutinējošo serumu), t.i., tiek veikta patogēna serotipēšana. Aptuvenā reakcija veikta uz stikla priekšmetstikliņa. No pacienta izolētu patogēna tīrkultūru pievieno pilienam diagnostiskā aglutinējošā seruma atšķaidījumā 1:10 vai 1:20. Tuvumā tiek novietota kontrole: seruma vietā tiek uzklāts piliens nātrija hlorīda šķīduma. Kad pilē, kas satur serumu un mikrobus, parādās flokulējošas nogulsnes, a plaša aglutinācijas reakcija mēģenēs ar pieaugošiem aglutinējošā seruma atšķaidījumiem, kam pievieno 2-3 pilienus patogēna suspensijas. Aglutināciju ņem vērā, ņemot vērā nogulšņu daudzumu un šķidruma dzidrības pakāpi. Reakciju uzskata par pozitīvu, ja aglutināciju novēro atšķaidījumā, kas ir tuvu diagnostikas seruma titram. Tajā pašā laikā tiek ņemtas vērā kontroles: serumam, kas atšķaidīts ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu, jābūt caurspīdīgam, mikrobu suspensijai tajā pašā šķīdumā jābūt vienmērīgi duļķainai, bez nogulsnēm.

Ar vienu un to pašu diagnostisko aglutinācijas serumu var aglutinēt dažādas radniecīgas baktērijas, kas apgrūtina to identificēšanu. Tāpēc viņi izmanto adsorbēti aglutinējošie serumi, no kuriem, adsorbējot radniecīgās baktērijās, ir izņemtas krusteniski reaģējošas antivielas. Šādi serumi saglabā antivielas, kas ir specifiskas tikai konkrētai baktērijai. Īpašu monoreceptoru diagnostikas aglutinējošu serumu ražošanu ierosināja A. Castellani (1902).

Netiešā (pasīvā) hemaglutinācijas reakcija(RNGA, RPGA) pamatā ir sarkano asins šūnu izmantošana ar uz to virsmas adsorbētiem antigēniem vai antivielām, kuru mijiedarbība ar attiecīgajām antivielām vai asins seruma antigēniem izraisa sarkano asins šūnu pielipšanu un nogulsnēšanos uz to virsmas. mēģene vai šūna Vķemmētu nogulumu veidā (13.2. att.). Negatīvās reakcijas gadījumā sarkanās asins šūnas nosēžas ■ “pogas” veidā. Parasti antivielas tiek noteiktas RNGA, izmantojot antigēnu eritrocītu diagnostikas līdzekli, kas ir eritrocīti ar adsorbētu. ieslēgts tos ar antigēniem. Dažreiz tiek izmantota anti-A eritrocītu diagnostika, uz kuras tiek adsorbētas antivielas. Piemēram, botulīna toksīnu var noteikt, pievienojot tam eritrocītu antivielu botulīna toksīnu (šo reakciju sauc apgrieztā netiešā hemaglutinācijas reakcija- RONG). RNGA izmanto, lai diagnosticētu infekcijas slimības, noteiktu gonadotropīna hormons V urīns, nosakot grūtniecību, lai noteiktu paaugstināta jutība Uz zāles, hormoni un dažos citos gadījumos.

ĶEMME REAKCIJA

(Kumbsa tests) - metode Rh antivielu noteikšanai uz sarkano asins šūnu virsmas, kas izraisa globulīnu izgulsnēšanos asins serumā. Šo testu izmanto diagnozei hemolītiskā anēmija zīdaiņiem ar Rh nesaderību, kuriem ir sarkano asins šūnu iznīcināšana.

Koaglutinācijas reakcija. Patogēnu šūnas tiek noteiktas, izmantojot stafilokokus, kas iepriekš apstrādāti ar imūndiagnostikas serumu. Stafilokoki, kas satur proteīnu A, kam ir afinitāte pret imūnglobulīnu Fc fragmentu, nespecifiski adsorbē pretmikrobu antivielas, kas pēc tam mijiedarbojas ar aktīvajiem centriem ar attiecīgajiem mikrobiem, kas izolēti no pacientiem. Koaglutinācijas rezultātā veidojas pārslas, kas sastāv no stafilokokiem, diagnostiskajām seruma antivielām un konstatētā mikroba.

Hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija(RTGA) pamatā ir bloķēšana, vīrusu antigēnu nomākšana ar imūnseruma antivielām, kā rezultātā vīrusi zaudē spēju aglutinēt sarkanās asins šūnas (13.3. att.). RTGA izmanto daudzu vīrusu slimību diagnosticēšanai, kuru izraisītāji (gripas vīrusi, masalas, masaliņas, ērču encefalīts u.c.) var aglutinēt dažādu dzīvnieku sarkanās asins šūnas.

1. PVO ārstu grupa ieradās Indijā, lai identificētu pacientus ar poliomielītu un palīdzētu veikt vispārēju vakcināciju pret poliomielītu. Vienā no aptaujātajiem ciemiem pie ārstiem no daudzbērnu ģimenes nogādāts 6 gadus vecs zēns, kurš pirms 5 dienām saslimis. Pēkšņi paaugstinājās temperatūra, bija stipras galvassāpes, atkārtota vemšana, sāpes rokās un kājās. Pēc pārbaudes: karstums, smags vājums, meningeāli simptomi, uz labā kāja samazināts muskuļu tonuss, cīpslu refleksi ir strauji novājināti, pēda karājas uz leju. Mugurkaula kanāla punkcijas laikā zem tā iztecēja cerebrospinālais šķidrums augsts asinsspiediens, palielinās limfocītu skaits, netiek izolētas baktērijas. Tika noteikta provizoriska diagnoze “poliomielīta paralītiskā forma”. Kā zēns varēja inficēties? Kā tiek veikta īpaša aktīva poliomielīta profilakse? Vai šajā ģimenē pastāv risks inficēt citus bērnus, kas jādara?

Atbilde: Zēns varēja inficēties fekāli-orālā ceļā ar pārtiku, ūdeni un arī ar gaisā esošām pilieniņām. Galvenais poliomielīta profilakses pasākums ir imunizācija ar dzīvkultūras vakcīnu no 3 Sabin celmu serotipiem.Krievijā to izmanto vakcinācija pret poliomielītu perorālai lietošanai, ko ražojis Poliomielīta un vīrusu encefalīta institūts. M.P. Čumakova. Vakcīna ir trīsvērtīgs poliomielīta vīrusa 1., 2., 3. tipa Sabin celmu preparāts, kas iegūts no Āfrikas zaļo pērtiķu nieru šūnu primārās kultūras. . Plānotās vakcinācijas Bērni vecumā no 3 mēnešiem līdz 6 gadiem ir uzņēmīgi pret poliomielītu. Vakcinācijas ar perorālo poliomielīta vakcīnu tiek veiktas ar 2 vai 4 pilieniem vakcīnas iekšķīgi trīs reizes 3, 4, 5 un 6 mēnešos ar trīs revakcinācijām 18, 20 mēnešu un 14 gadu vecumā. Slimais zēns jā hospitalizē, un visi pārējie šīs ģimenes bērni jāvakcinē ar dzīvu poliomielīta vakcīnu.

1. Trīsvērtīgās polimēra-subvienības šķidrās gripas vakcīnas (gripas) sastāvs un lietošana

Šī ir molekulārā vakcīna. Sastāvs: trīs apakštipu (A/H1N1, A/H3N2, B) gripas vīrusa virsmas Ag. Pielietojums: gripas profilaksei

Eksāmena karte Nr.23