Тестът за индиректна или пасивна хемаглутинация (IRHA или RPHA) е по-чувствителен и специфичен от теста за аглутинация. Тази реакция също се използва в две посоки.

1) За откриване на антитела в кръвния серум на пациента се използва еритроцитна диагностика, при която антигенът се адсорбира върху повърхността на третирани с танин еритроцити. Във връзка с тази реакция по-често се използва терминът RPHA.

Тестовият серум се разрежда в ямките на пластмасови плаки и се добавя еритроцитен диагностикум. Ако реакцията е положителна, по стените на дупката се появява тънък филм под формата на „дантелен чадър“; отрицателна реакция- гъста утайка от червени кръвни клетки под формата на "копче".

2) За откриване на токсини и бактериални антигени в изследвания материал се използва антитяло еритроцитна диагностика, получена чрез адсорбция на антитела върху еритроцити. Във връзка с тази реакция по-често се използва терминът RNGA. Например, с помощта на диагностика на антитела се откриват антиген на чумен бацил, дифтериен екзотоксин и ботулинов екзотоксин.

Тест на Кумбс (тест за аптиглобулин)

Реакцията се използва за откриване на непълни антитела, например антитела срещу Rh фактора. Тестовият серум се добавя към Rh + еритроцитите, в които се предполага наличието на непълни антитела срещу Rh фактора. Прикрепени към червените кръвни клетки, непълните антитела не предизвикват аглутинация, тъй като имат само един активен център. След това се добавя антиглобулинов серум, съдържащ антитела срещу човешки глобулини. Комбинирайки се с непълни антитела, антиглобулиновият серум предизвиква аглутинация на червените кръвни клетки.

Реакция на утаяване

Същността на реакцията е седиментацията (утаяването) на антигена под въздействието на специфични антитела. За да се получи видима реакция, е необходимо наличието на електролит. Антигенът в реакцията на утаяване е молекулярно диспергирани вещества.

Реакция на пръстеновидно утаяванепоставени в тесни утаителни тръби. Имунният серум се излива в епруветка и тестовият материал внимателно се наслоява върху него. Ако в него има антиген, на границата на двете течности се образува непрозрачен пръстен от утайка.

Реакцията се използва в съдебна медициназа определяне на видовете протеини в кръвни петна, сперма и др.; за определяне на антигена при диагностика на антракс (реакция на Асколи), менингит и други инфекции; в санитарно-хигиенните изследвания - за установяване на фалшификация хранителни продукти. Имунопреципитиращите серуми се получават чрез имунизиране на животни със съответния антиген. Например, човешки протеин преципитиращ серум се получава чрез имунизиране на заек с човешки протеин. Титърът на преципитиращия серум е най-високото разреждане на антигена, с който той реагира. Серумът обикновено се използва неразреден или в разреждане 1:5.

Реакция на утаяване на агар гелизвършва се с помощта на няколко метода. Това са реакцията на двойна имунодифузия, реакцията на радиална имунодифузия и реакцията на имуноелектрофореза.

Реакция на двойна имунодифузия(според Ouchterlony). Разтопен агар гелизсипва се в петриево блюдо и след втвърдяване в него се изрязват дупки. В някои ямки се поставя антиген, а в други се поставят имунни серуми, които дифундират в агара и образуват утайка под формата на бели ивици в точката на събиране.

Реакция на радиална имунодифузия(според Манчини). Имунният серум се добавя към разтопения агар гел и се изсипва в чаша. След втвърдяване на агара се изрязват ямки и в тях се поставят антигени, които, дифундирайки в агара, образуват пръстеновидни преципитационни зони около ямките. Колкото по-висока е концентрацията на антигена, толкова по-голям е диаметърът на пръстена. Реакцията се използва например за определяне на имуноглобулини от различни класове в кръвта. Имуноглобулините от класовете IgG, IgM, IgA действат като антигени в тази реакция, а антителата срещу тях се съдържат в специфични монорецепторни серуми.

Имуноелектрофореза.Електрофорезата на протеинови антигени се извършва в агар гел. Утаеният серум се въвежда в жлеба, който върви успоредно на посоката на движение на протеините. Антигените и антителата дифундират в агара и там, където се срещат, се образуват преципитационни линии.

Реакции на имунен лизис

Антиген (еритроцити или бактерии), комбинирайки се със специфични антитела, образува имунен комплекс, към който се прикрепя комплемент (С1) и комплементът се активира по класическия път. Активираният комплемент лизира червените кръвни клетки (хемолиза) или бактериите (бактериолиза). Реакцията на бактериолиза се използва за идентифициране на Vibrio cholerae.

Реакция на хемолиза.Антигенът в реакцията е еритроцити, антитела (хемолизини) се съдържат в хемолитичен серум. Хемолизините се прикрепят към червените кръвни клетки и се активира комплементът, който лизира червените кръвни клетки. Мътната суспензия от червени кръвни клетки се превръща в прозрачна яркочервена течност - „лакова кръв“. Тъй като реакцията на хемолиза възниква само в присъствието на комплемент, тя се използва като индикатор за откриване на комплемент.

Локална реакция на хемолиза в гела(реакция на Erne) - вариант на реакцията на хемолиза. Служи за определяне на броя на антителообразуващите клетки (AFC) в далака и лимфните възли.

Разтопеният агар гел се смесва със суспензия от клетки на далака и червени кръвни клетки и след като агарът се втвърди, се добавя комплемент. Около всяка клетка, произвеждаща хемолизин, се образува зона на хемолиза. Броят на клетките, произвеждащи хемолизин, се определя от броя на тези зони.

Реакцията на непряка (пасивна) хемаглутинация (IRHA) се основава на факта, че червените кръвни клетки, ако разтворим антиген е адсорбиран на тяхната повърхност, придобиват способността да аглутинират при взаимодействие с антитела към адсорбирания антиген. Диаграмата на RNGA е показана на фиг. 34. RNGA се използва широко в диагностиката на редица инфекции.

Ориз. 34. Схема на реакцията на пасивна хемаглутинация (RPHA). A - получаване на еритроцитна диагностика: B - RPGA: 1 - еритроцит: 2 - изследван антиген; 3 - еритроцитен диагностикум; 4 - антитяло към изследвания антиген: 5 - аглутинат

Настройка на реакция. Тестовият серум се нагрява 30 минути при 56°С, разрежда се последователно в съотношение 1:10 - 1:1280 и се налива в 0,25 ml в епруветки или ямки, където се капват 2 капки еритроцитен диагностикум (еритроцити с адсорбиран върху тях антиген). ) след това се добавят.

Контроли: суспензия от еритроцитен диагностикум с известен имунен серум; суспензия на диагностикум с нормален серум; суспензия от нормални червени кръвни клетки с тест серум. При първата контрола трябва да настъпи аглутинация, а при втората и третата да не настъпи.

Използвайки RIGA, можете да откриете неизвестен антиген, ако познатите антитела са адсорбирани върху червените кръвни клетки.

Реакцията на хемаглутинация може да се извърши в обем от 0,025 ml (микрометод), като се използва микротитратор Takachi.

Контролни въпроси

1. Какво показва положителен резултат от рентгеново изследване между червените кръвни клетки и материала, който се изследва за наличие на вирус?

2. Ще настъпи ли аглутинация на червени кръвни клетки, ако към тях се добави вирус и съответният му серум? Как се нарича реакцията, която разкрива това явление?

Упражнение

Вземете предвид и регистрирайте резултата РИГА.

Реакция на утаяване

При реакцията на утаяване се утаява специфичен имунен комплекс, състоящ се от разтворим антиген (лизат, екстракт, хаптен) и специфично антитяло в присъствието на електролити.

Мътният пръстен или утайката, образувана в резултат на тази реакция, се нарича утайка. Тази реакция се различава главно от реакцията на аглутинация по размера на антигенните частици.

Реакцията на утаяване обикновено се използва за определяне на антиген при диагностицирането на редица инфекции ( антракс, менингит и др.); в съдебната медицина - за определяне вида на кръвта, спермата и др.; при санитарно-хигиенни изследвания - при установяване на фалшифициране на продукти; с негова помощ се определя филогенетичната връзка на животните и растенията. За реакцията ви трябва:

1. Антитела (преципитини) - имунен серум с висок титър на антитела (не по-нисък от 1:100 000). Титърът на преципитиращия серум се определя от най-високото разреждане на антигена, с който той реагира. Серумът обикновено се използва неразреден или в разреждане 1:5 - 1:10.

2. Антиген - разтворени вещества от протеинова или липоидна полизахаридна природа (пълни антигени и хаптени).

3. Изотоничен разтвор.

Основните методи за провеждане на реакцията на утаяване са: реакция на пръстеновидно утаяване и реакция на утаяване в агар (гел).

внимание! Всички компоненти, участващи в реакцията на утаяване, трябва да бъдат напълно прозрачни.

Реакция на пръстеновидно утаяване. С помощта на пипета на Пастьор добавете 0,2-0,3 ml (5-6 капки) серум в епруветката за утаяване (серумът не трябва да попада върху стените на епруветката). Антигенът в същия обем се наслоява внимателно върху серума, като се излива с тънка пастьорска пипета по стената на епруветката. Епруветката се държи в наклонено положение. При правилно наслояване трябва да има ясна граница между серума и антигена. Внимателно, за да не смесите течността, поставете епруветката в стойка. При положителен резултатреакция, на границата на антигена и антитялото се образува мътен "пръстен" - утайка (виж фиг. 48).

Реакцията е придружена от редица контроли (Таблица 18). Последователността на добавяне на реакционните съставки в епруветката е много важна. Не можете да наслоите серум върху антигена (в контролата - върху изотоничен разтвор), тъй като относителната плътност на серума е по-голяма, той ще потъне на дъното на епруветката и границата между течностите няма да се разкрие.

Таблица 18. Схема за настройка на реакцията на пръстеновидно утаяване

Забележка. + наличие на "пръстен"; - липса на "пръстен".

Резултатите се записват след 5-30 минути, в някои случаи след час, като винаги се започва с контролите. „Пръстенът“ във втората епруветка показва способността на имунния серум да влезе в специфична реакция със съответния антиген. В 3-5 епруветки не трябва да има „пръстени“ - няма антитела и антигени, съответстващи един на друг. „Пръстен“ в 1-ва епруветка - положителен резултат от реакцията - показва, че тестваният антиген съответства на взетия имунен серум, липсата на „пръстен“ („пръстен“ само във 2-ра епруветка) показва тяхното несъответствие - отрицателен резултат от реакцията.

Реакция на утаяване в агар (гел). Особеността на реакцията е, че взаимодействието на антиген и антитяло се извършва в плътна среда, т.е. в гел. Получената утайка дава мътна ивица в дебелината на средата. Липсата на лента показва несъответствие между компонентите на реакцията. Тази реакция се използва широко в биомедицинските изследвания, по-специално при изследването на образуването на токсини в причинителя на дифтерия.

Контролни въпроси

1. Каква е основната разлика между реакциите на аглутинация и реакциите на утаяване?

2. Защо мътните съставки не могат да се използват в реакцията на утаяване?

Упражнение

1. Настройте реакцията на пръстеновидно утаяване и скицирайте резултата.

2. Проучете естеството на взаимодействието на антигена с антитялото в реакцията на утаяване в агар, скицирайте резултата (вземете чаша от вашия учител).

Реакция на лизис (имунна цитолиза)

Имунен лизис е разтваряне на клетки под въздействието на антитела със задължителното участие на комплемента. За реакцията ви трябва:

1. Антиген - микроби, червени кръвни клетки или други клетки.

2. Антитяло (лизин) - имунен серум, по-рядко пациентски серум. Бактериолитичният серум съдържа антитела, участващи в лизиране на бактерии; хемолитични - хемолизини, които насърчават разграждането на червените кръвни клетки; за лизис на спирохети са необходими спирохетолизини, клетки - итолизини и др.

3. Допълване. Повечето добавки в серума морски свинчета. Този серум (смес от няколко животни) обикновено се използва като допълнение. Пресният (местен) комплемент е нестабилен и лесно се разрушава при нагряване, разклащане или съхранение, така че може да се използва не повече от два дни след получаване. За запазване на комплемента към него се добавят 2%. борна киселинаи 3% натриев сулфат. Тази добавка може да се съхранява при 4°C до две седмици. Най-често се използва суха добавка. Преди употреба се разтваря в изотоничен разтвор до първоначалния обем (посочен на етикета).

4. Изотоничен разтвор.

Реакция на хемолиза(Таблица 19). За реакцията ви трябва:

1. Антиген - 3% суспензия от промити овчи еритроцити в размер на 0,3 ml еритроцитна утайка и 9,7 ml изотоничен разтвор.

2. Антитяло - хемолитичен серум (хемолизин) срещу овчи еритроцити; обикновено се приготвя в производството, лиофилизиран и титърът е посочен на етикета.

Хемолизиновият титър е най-високото разреждане на серума, при което настъпва пълна хемолиза на 3% суспензия от червени кръвни клетки в присъствието на комплемент. За реакцията на хемолиза хемолизинът се взема в троен титър, т.е. разреден 3 пъти по-малко, отколкото преди титъра. Например, при серумен титър 1:1200, серумът се разрежда 1:400 (0,1 ml серум * и 39,9 ml изотоничен разтвор). Излишъкът от хемолизин е необходим, тъй като част от него може да бъде адсорбирана от други компоненти на реакцията.

* (Не трябва да приемате по-малко от 0,1 ml серум - точността на измерването ще пострада.)

3. Комплементът се разрежда 1:10 (0,2 ml комплемент и 1,8 ml изотоничен разтвор).

4. Изотоничен разтвор.

Таблица 19. Схема на реакция на хемолиза

Отчитане на резултатите. Ако реакцията се проведе правилно, в първата епруветка ще настъпи хемолиза - съдържанието й ще стане прозрачно. В контролите течността остава мътна: във 2-ра епруветка няма достатъчно комплемент за настъпване на хемолиза, в 3-та епруветка няма хемолизин, в 4-та епруветка няма нито хемолизин, нито комплемент, в 5-та епруветка антигенът прави не съответства на антитялото,

Ако е необходимо, хемолитичният серум се титрира съгласно следната схема (Таблица 20).

Преди титруване пригответе първоначално серумно разреждане 1:100 (0,1 ml серум и 9,9 ml изотоничен разтвор), от което се правят необходимите разреждания, например:

От тези разреждания добавете 0,5 ml серум в епруветки за титруване, както е показано в таблица. 20.

Таблица 20. Схема на титруване на хемолитичен серум (хемолизин)

В примера, даден в табл. 20, титърът на хемолитичния серум е 1:1200.

Когато се използва пресен хемолитичен серум, той трябва да бъде инактивиран, за да се унищожи присъстващият в него комплемент. За да направите това, той се нагрява в продължение на 30 минути при 56 ° C на водна баня или в инактиватор с термостат. Последният метод е по-добър: той елиминира възможността за прегряване на суроватката, т.е. нейната денатурация. Денатурираните серуми са неподходящи за тестване.

Реакция на бактериолиза. При тази реакция комплементът лизира бактериите в присъствието на подходящ (хомоложен) серум. Схемата на реакцията е фундаментално подобна на схемата на реакцията на хемолиза. Разликата е, че след двучасова инкубация всички епруветки се посяват върху петриеви панички със среда, благоприятна за микроорганизма, включен в експеримента, за да се установи дали е лизиран. Ако експериментът е проведен правилно, културите от 2-5 епруветки (контроли) трябва да покажат обилен растеж. Липса на растеж или слаб растеж в инокулацията от 1-ва епруветка (експеримент) показва смъртта на микробите, т.е. че те са хомоложни на антитялото.

внимание! Реакцията на бактериолиза трябва да се проведе при асептични условия.

Контролни въпроси

1. Какво ще се случи с червените кръвни клетки, ако се използва дестилирана вода вместо изотоничен разтвор на натриев хлорид? Каква е основата на това явление?

2. Каква реакция ще настъпи, когато еритроцитите взаимодействат с хомоложен имунен серум при липса на комплемент?

Упражнение

Настройте реакцията на хемолиза. Запишете и скицирайте резултата.

Свързана информация.

Реакция на индиректна хемаглутинация (RIHA).

RIGA се използва в две версии: с известни антитела за откриване на антитела с известни антитела за откриване на антитела. Тази реакция е специфична и се използва за диагностициране на заболявания, причинени от бактерии и рикетсии. За извършване на RIGA се използва еритроцитна диагностика, приготвена чрез адсорбция на AG или AT върху еритроцити, в зависимост от целта на изследването (фиг. 10.3). При положителни случаи степента на аглутинация на еритроцитите се отбелязва с плюсове. Четири плюса оценяват реакция, която има формата на тънък слой от адхезивни червени кръвни клетки (чадър), покриващ дъното на епруветката; наличието на филм с изпъкнали дантелени ръбове се обозначава с два плюса. Като титър се приема максималното разреждане на тестовия материал, предизвикало аглутинация на еритроцитите с два плюса.

Ориз. 10.3.

1 - червени кръвни телца, 2 - еритроцитна AG, 3 - конюгиран AG, 4-AT

RHA и реакция на инхибиране на хемаглутинацията (HAI).

Както вече беше отбелязано, RHA се основава на способността на еритроцитите да се слепват, когато върху тях се адсорбират определени антигени. Като тестов материал за хемаглутинация се използват алантоична и амниотична течност, суспензия от хорион-алантоични мембрани на пилешки ембриони, суспензии и екстракти от култури или органи на животни, заразени с вируси, и нативен инфекциозен материал. RGA не е серологична реакция, тъй като протича без участието на имунен серум и се използва за избор на работното разреждане на антиген за определяне на RGA или наличието на антиген (вирус) в тестовия материал (например за грип ). Реакцията използва червени кръвни клетки от животни, птици и хора с кръвна група I (0). За да се установи приблизителна RGA, капка от 5% суспензия на еритроцити и капка от тестовия материал се нанасят върху предметно стъкло и се смесват добре. При положителен резултат след 1-2 минути макроскопски се наблюдава появата на флокулентна аглутинация на еритроцитите. За да поставите RGA в разгънат ред в ямките на полистиренови плаки, пригответе двойно увеличаващи се разреждания на тестовия материал на физиологичен разтворв обем от 0,5 мл. Във всички епруветки се добавят 0,5 ml 0,25-1% суспензия от червени кръвни клетки. Резултатите се вземат предвид след пълно утаяване на еритроцитите в контролата (еритроцити + физиологичен разтвор). Реакцията се взема предвид от естеството на еритроцитната утайка. В положителни случаи степента на аглутинация се отбелязва с плюсове. Реакция, която изглежда като тънък филм от лепкави червени кръвни клетки, покриващ дъното на епруветка (чадър), се оценява с четири плюса; реакция с празнини във филма се отбелязва с три плюса; наличието на филм с назъбена дантела краищата на лепкавите червени кръвни клетки се отбелязват с два плюса; флокулентна утайка от червени кръвни клетки, заобиколена от зона от аглутинирани бучки еритроцити, съответства на един плюс. Рязко изразена еритроцитна утайка, неразличима от контролата, показва липсата на аглутинация. Като титър се приема максималното разреждане на тестовия материал, предизвикало аглутинация на еритроцитите с два плюса. Ако резултатът от RGA е положителен, изследването продължава, като се определя вида на изолирания вирус с помощта на RT GA с типово специфични серуми. RTGA се основава на свойството на антисерума да потиска вирусната хемаглутинация, тъй като вирусът, неутрализиран от специфични антитела, губи способността си да аглутинира червените кръвни клетки. За пробно типизиране на вируси се използва капковия метод върху стъкло. За окончателно установяване на вида на изолирания вирус и титриране на антителата в серума, в епруветки или ямки се поставя разширен рентгенов тест. За тази цел се приготвят двойни разреждания на серуми във физиологичен разтвор и се разпределят в 0,25 ml. Към серумните разреждания добавете една капка материал, съдържащ вируса, и една капка 1% суспензия от червени кръвни клетки. При използване на RTGA за определяне на типа на вируса се използват типоспецифични серуми, които се добавят към равен обем от работното разреждане на AG. Типът на изолирания вирус се определя от специфичния имунен серум, който показва най-висок титър на антитела към този вирус. RGA и RTGA се използват широко за диагностика вирусни инфекции (енцефалит, пренасян от кърлежи, грип и др.), за да се открият специфични антитела и да се идентифицират много вируси чрез техните антитела.

Реакция на индиректна или пасивна хемаглутинация (IPHA)

Тази реакция е по-чувствителна от реакция на аглутинацияи се използва при диагностицирането на инфекции, причинени от бактерии, рикетсии, протозои и други микроорганизми.

RPGA ви позволява да откриете малка концентрация на антитела.

Тази реакция включва дъбени овчи еритроцити или човешки еритроцити с I група кръв, сенсибилизирани с антигени или антитела.

Ако в тестовия серум се открият антитела, се използват червени кръвни клетки, сенсибилизирани с антигени (еритроцитна диагностика).

В някои случаи, ако е необходимо да се определят различни антигени в тестовия материал, се използват еритроцити, сенсибилизирани с имуноглобулини.

Резултатите от RPGA се вземат предвид от естеството на еритроцитната утайка.

Резултатът от реакцията се счита за положителен, когато червените кръвни клетки покриват равномерно цялото дъно на епруветката (обърнат чадър).

При отрицателна реакция червените кръвни клетки под формата на малък диск (копче) се намират в центъра на дъното на епруветката.

Реакция на аглутинация (RA)

Поради своята специфика, лекота на изпълнение и демонстративност, реакцията на аглутинация е широко разпространена в микробиологичната практика за диагностика на много инфекциозни заболявания: коремен тиф и паратиф (реакция на Видал), тиф (реакция на Вайгл) и др.

Реакцията на аглутинация се основава на спецификата на взаимодействието на антитела (аглутинини) с цели микробни или други клетки (аглутиногени). В резултат на това взаимодействие се образуват частици – агломерати, които се утаяват (аглутинират).

Реакцията на аглутинация може да включва както живи, така и убити бактерии, спирохети, гъбички, протозои, рикетсии, както и червени кръвни клетки и други клетки.

Реакцията протича в две фази: първата (невидима) - специфична, комбинацията от антиген и антитела, втората (видима) - неспецифична, залепване на антигени, т.е. образуване на аглутинат.

Аглутинатът се образува, когато един активен център на двувалентно антитяло се комбинира с детерминантната група на антигена.

Реакцията на аглутинация, както всяка серологична реакция, възниква в присъствието на електролити.

Външно проявата на положителна реакция на аглутинация има двояк характер. При камшичестите микроби, които имат само соматичен О-антиген, самите микробни клетки се прилепват директно. Тази аглутинация се нарича дребнозърнеста. Настъпва в рамките на 18 - 22 часа.

Камшичестите микроби имат два антигена - соматичен О-антиген и флагеларен Н-антиген. Ако клетките са залепени заедно с флагели, се образуват големи, свободни люспи и тази реакция на аглутинация се нарича едрозърнеста. Настъпва в рамките на 2-4 часа.

Реакцията на аглутинация може да се извърши както с цел качествено и количествено определяне на специфични антитела в кръвния серум на пациента, така и с цел определяне на вида на изолирания патоген. хемаглутинация микробиологичен инфекциозен

Реакцията на аглутинация може да се извърши както в разширена версия, която ви позволява да работите със серум, разреден до диагностичен титър, така и в индикативна реакционна версия, която ви позволява по принцип да откриете специфични антитела или да определите вида на патогена .

Реакция на аглутинация - РА(от лат. аглутинация- адхезия) е проста реакция, при която антителата се свързват с корпускулни антигени (бактерии, еритроцити или други клетки, неразтворими частици с адсорбирани върху тях антигени, както и макромолекулни агрегати). Това се случва в присъствието на електролити, например, когато се добави изотоничен разтвор на натриев хлорид.

Използват се различни варианти на реакцията на аглутинация: екстензивна, индикативна, индиректна и др. Реакцията на аглутинация се проявява чрез образуване на люспи или утайка

RA се използва за:

определяне на антитела в кръвния серум на пациенти, например с бруцелоза (реакции на Райт, Хеделсън), Коремен тифи паратиф (реакция на Видал) и други инфекциозни заболявания;

определяне на патогена, изолиран от пациента;

определяне на кръвни групи с помощта на моноклонални антитела срещу еритроцитни алоантигени.

За определяне на антитела при пациент слагамподробна реакция на аглутинация:добавете към разрежданията на кръвния серум на пациента диагностикум(суспензия от убити микроби) и след няколко часа инкубация при 37 °C се отбелязва най-високото серумно разреждане (серумен титър), при което настъпва аглутинация, т.е. образува се утайка.

Характерът и скоростта на аглутинацията зависят от вида на антигена и антителата. Пример за това са особеностите на взаимодействие на диагностикуми (О- и R-антигени) със специфични антитела. Реакция на аглутинация с О-диагностикум(бактерии, убити от топлина, запазващи устойчивост на топлина О-антиген)протича под формата на финозърнеста аглутинация. Реакцията на аглутинация с H-diagnosticum (бактерии, убити от формалдехид, запазващи термолабилния флагеларен H-антиген) е груба и протича по-бързо.

Ако е необходимо да се определи патогенът, изолиран от пациента, поставете показателна реакция на аглутинация,с помощта на диагностични антитела (аглутиниращ серум), т.е. извършва се серотипиране на патогена. Приблизителна реакцияпроведено върху предметно стъкло. Към капка диагностичен аглутиниращ серум се добавя чиста култура на патогена, изолиран от пациента, в разреждане 1:10 или 1:20. В близост се поставя контрола: вместо серум се прилага капка разтвор на натриев хлорид. Когато се появи флокулентна утайка в капка, съдържаща серум и микроби, a обширна реакция на аглутинацияв епруветки с нарастващи разреждания на аглутиниращ серум, към които се добавят 2-3 капки от суспензията на патогена. Аглутинацията се взема предвид от количеството на утайката и степента на прозрачност на течността. Реакцията се счита за положителна, ако се наблюдава аглутинация в разреждане, близко до титъра на диагностичния серум. В същото време се вземат предвид контролите: серумът, разреден с изотоничен разтвор на натриев хлорид, трябва да бъде прозрачен, суспензията от микроби в същия разтвор трябва да бъде равномерно мътна, без утайка.

Различни родствени бактерии могат да бъдат аглутинирани от един и същ диагностичен аглутиниращ серум, което затруднява идентифицирането им. Затова използват адсорбирани аглутиниращи серуми,от които кръстосано реагиращите антитела са били отстранени чрез адсорбция към сродни бактерии. Такива серуми задържат антитела, които са специфични само за дадена бактерия. Производството на специални монорецепторни диагностични аглутиниращи серуми е предложено от A. Castellani (1902).

Индиректна (пасивна) реакция на хемаглутинация(RNGA, RPGA) се основава на използването на еритроцити с адсорбирани на повърхността им антигени или антитела, взаимодействието на които със съответните антитела или антигени на кръвния серум кара еритроцитите да се слепват и да падат на дъното на теста. тръба или клетка Vпод формата на назъбена утайка (фиг. 13.2). В случай на отрицателна реакция, червените кръвни клетки се установяват ■ под формата на „копче“. Обикновено антителата се откриват в RNGA с помощта на антигенен еритроцитен диагностикум, който представлява еритроцити с адсорбирана Наги с антигени. Понякога се използва анти-А еритроцитна диагностика, върху която се адсорбират антитела. Например, ботулинов токсин може да бъде открит чрез добавяне на еритроцитно антитяло ботулинов токсин към него (тази реакция се нарича реакция на обратна индиректна хемаглутинация- RONG). RNGA се използва за диагностициране на инфекциозни заболявания, определяне гонадотропен хормон Vурина при установяване на бременност, за откриване свръхчувствителностДа се лекарства, хормони и в някои други случаи.

РЕАКЦИЯ НА КОМБЕС

(тест на Coombs) - метод за определяне на Rh антитела на повърхността на червените кръвни клетки, които причиняват утаяване на глобулини в кръвния серум. Този тест се използва за диагностика хемолитична анемияпри бебета с Rh несъвместимост, които изпитват разрушаване на червените кръвни клетки.

Реакция на коаглутинация. Патогенните клетки се определят с помощта на стафилококи, предварително третирани с имунен диагностичен серум. Стафилококи, съдържащи протеин а,имащи афинитет към Fc фрагмента на имуноглобулините, неспецифично адсорбират антимикробни антитела, които след това взаимодействат с активни центрове със съответните микроби, изолирани от пациенти. В резултат на коаглутинацията се образуват люспи, състоящи се от стафилококи, диагностични серумни антитела и открития микроб.

Реакция на инхибиране на хемаглутинацията(RTGA) се основава на блокада, потискане на вирусни антигени от имунни серумни антитела, в резултат на което вирусите губят способността си да аглутинират червените кръвни клетки (фиг. 13.3). RTGA се използва за диагностициране на много вирусни заболявания, чиито причинители (вируси на грип, морбили, рубеола, енцефалит, пренасян от кърлежи и др.) Могат да аглутинират червените кръвни клетки на различни животни.

1. Група лекари от СЗО пристигнаха в Индия, за да идентифицират пациенти с полиомиелит и да помогнат за провеждането на универсална ваксинация срещу полиомиелит. В едно от изследваните села при лекарите е заведено 6-годишно момче от многодетно семейство, което се е разболяло преди 5 дни. Внезапно се повиши температурата, имаше силно главоболие, многократно повръщане, болки в ръцете и краката. При проверка: топлина, тежка слабост, менингеални симптоми, върху десен кракнамалена мускулен тонус, сухожилните рефлекси са рязко отслабени, стъпалото виси. При пункция на гръбначномозъчния канал изтече гръбначно-мозъчна течност високо кръвно налягане, броят на лимфоцитите е увеличен, бактерии не се изолират. Поставена е предварителна диагноза „паралитична форма на полиомиелит”. Как може момчето да се зарази? Как се провежда специфичната активна профилактика на полиомиелита? Има ли опасност от заразяване на други деца в това семейство, какво трябва да се направи?

Отговор:Момчето е могло да се зарази по фекално-орален път чрез храна, вода, а също и по въздушно-капков път. Основната мярка за профилактика на полиомиелита е имунизацията с жива културна ваксина от 3 серотипа на щамовете Sabin.В Русия се използва ваксинация срещу детски параличза перорално приложение, произведено от Института по полиомиелит и вирусен енцефалит на името на. М.П. Чумакова. Ваксината е тривалентен препарат от атенюирани щамове Sabin на полиомиелит тип 1, 2, 3, получени от първична култура от бъбречни клетки на африканска зелена маймуна. . Планирани ваксинацииДеца на възраст от 3 месеца до 6 години са податливи на полиомиелит. Ваксинациите с перорална полиомиелитна ваксина се извършват с 2 или 4 капки ваксина перорално три пъти на 3, 4, 5 и 6 месеца с три реваксинации на 18, 20 месеца и 14 години. Болното момче трябва да бъде хоспитализирано, а всички останали деца от това семейство трябва да бъдат ваксинирани с жива полиомиелитна ваксина.

1. Състав и употреба на течна противогрипна ваксина с тривалентна полимерна субединица (грип)

Това е молекулярна ваксина. Състав: повърхностен Ag на грипен вирус от три подтипа (A/H1N1, A/H3N2, B). Приложение: за профилактика на грип

Изпитна карта No23