Epäsuoran tai passiivisen hemagglutinaation (RNHA tai RPHA) reaktio on herkempi ja spesifisempi kuin agglutinaatioreaktio. Tätä reaktiota käytetään myös kahdella tavalla.

1) Vasta-aineiden havaitsemiseen potilaan veriseerumista käytetään punasoludiagnostiikkaa, jossa antigeeni adsorboituu tanniinilla käsiteltyjen punasolujen pinnalle. Tämän reaktion yhteydessä käytetään useammin termiä RPGA.

Testiseerumi laimennetaan muovilevyjen kuoppiin ja lisätään punasoludiagnostiikkaa. Positiivisella reaktiolla reiän seiniä pitkin ilmestyy ohut kalvo "pitsisateenvarjon" muodossa. takaisku- tiheä erytrosyyttien sedimentti "painikkeen" muodossa.

2) Toksiinien ja bakteeriantigeenien havaitsemiseksi testimateriaalista käytetään vasta-aineerytrosyyttidiagnostiikkaa, joka saadaan adsorptioimalla vasta-aineita punasoluihin. Tämän reaktion yhteydessä käytetään useammin termiä RNGA. Esimerkiksi vasta-ainediagnostiikan avulla havaitaan ruttobasillin antigeeni, kurkkumätäeksotoksiini, botuliinieksotoksiini.

Coombsin reaktio (aptiglobuliinitesti)

Reaktiota käytetään epätäydellisten vasta-aineiden, esimerkiksi Rh-tekijän vasta-aineiden, havaitsemiseen. Testiseerumi lisätään Rh + erytrosyyteihin, joissa Rh-tekijän epätäydellisten vasta-aineiden esiintyminen odotetaan. Punasoluihin kiinnittyneet epätäydelliset vasta-aineet eivät aiheuta agglutinaatiota, koska niillä on vain yksi aktiivinen keskus. Lisää sitten ihmisglobuliinien vasta-aineita sisältävä antiglobuliiniseerumi. Yhdistettynä epätäydellisiin vasta-aineisiin antiglobuliiniseerumi aiheuttaa punasolujen agglutinaation.

saostumisreaktio

Reaktion ydin on antigeenin saostuminen (saostuminen) spesifisten vasta-aineiden vaikutuksesta. Elektrolyytin läsnäolo on välttämätöntä näkyvän reaktion aikaansaamiseksi. Saostusreaktion antigeenit ovat molekyylisesti dispergoituneita aineita.

Rengassaostumisreaktio sijoitetaan kapeisiin saostusputkiin. Immuuniseerumi kaadetaan koeputkeen ja testimateriaali kerrostetaan varovasti sen päälle. Kun siinä on antigeeniä, kahden nesteen rajalle muodostuu läpinäkymätön sakkarengas.

Reaktiota käytetään mm Oikeuslääketiede määrittää proteiinilajit veripisteistä, siemennesteestä jne.; määrittää antigeeni pernaruton (Ascoli-reaktio), aivokalvontulehduksen ja muiden infektioiden diagnoosissa; terveys- ja hygieniatutkimuksessa - väärentämisen toteamiseksi elintarvikkeita. Immuunisaostavat seerumit saadaan immunisoimalla eläimiä sopivalla antigeenillä. Esimerkiksi seerumia saostava ihmisproteiinia saadaan immunisoimalla kani ihmisproteiinilla. Saostuvan seerumin tiitteri on antigeenin suurin laimennus, jonka kanssa se reagoi. Seerumia käytetään yleensä laimentamattomana tai laimennettuna suhteessa 1:5.

Agargeelin saostusreaktio toteutetaan useilla tavoilla. Tämä on kaksois-immunodiffuusioreaktio, radiaalinen immunodiffuusioreaktio, immunoelektroforeesireaktio.

Kaksois-immunodiffuusioreaktio(Ouchterlonyn mukaan). Sulatettu agar-geeliä kaadetaan petrimaljaan ja kovettumisen jälkeen siihen leikataan reikiä. Joihinkin kuoppiin laitetaan antigeeni, toisiin immuuniseerumit, jotka diffundoituvat agariin muodostaen saostuman valkoisten raitojen muodossa kohtauskohdassa.

Radiaalinen immunodiffuusioreaktio(Mancinin mukaan). Immuuniseerumi lisätään sulaan agargeeliin, kaadetaan astiaan. Agar jähmettymisen jälkeen siihen leikataan kuoppia ja niihin laitetaan antigeenejä, jotka diffundoituessaan agariin muodostavat rengasmaisia ​​saostumisvyöhykkeitä kuoppien ympärille. Mitä korkeampi antigeenipitoisuus, sitä suurempi renkaan halkaisija. Reaktiota käytetään esimerkiksi erilaisten immunoglobuliiniluokkien määrittämiseen verestä. Luokkien IgG, IgM, IgA immunoglobuliinit toimivat antigeeneinä tässä reaktiossa, ja niitä vastaan ​​olevat vasta-aineet sisältyvät spesifisiin monoreseptoriseerumiin.

Immunoelektroforeesi. Proteiiniantigeenien elektroforeesi suoritetaan agargeelissä. Saostuva seerumi viedään uraan, joka kulkee yhdensuuntaisesti proteiinien liikesuunnan kanssa. Antigeenit ja vasta-aineet diffundoituvat agariin, ja niiden kohtaamispisteeseen muodostuu saostumisviivoja.

Immuunihajotusreaktiot

Antigeeni (erytrosyytit tai bakteerit) yhdistettynä spesifisiin vasta-aineisiin muodostaa immuunikompleksin, johon on kiinnittynyt komplementti (C1), ja komplementin aktivaatio tapahtuu klassista reittiä pitkin. Aktivoitu komplementti hajottaa punasoluja (hemolyysi) tai bakteereja (bakteriolyysi). Bakteriolyysireaktiota käytetään Vibrio choleraen tunnistamiseen.

hemolyysireaktio. Reaktion antigeeni on erytrosyytit, vasta-aineita (hemolysiineja) on hemolyyttisessä seerumissa. Hemolysiinit kiinnittyvät punasoluihin, tapahtuu komplementin aktivaatio, joka hajottaa punasoluja. Samea erytrosyyttien suspensio muuttuu läpinäkyväksi kirkkaan punaiseksi nesteeksi - "lakkavereksi". Koska hemolyysireaktio tapahtuu vain komplementin läsnä ollessa, sitä käytetään indikaattorina komplementin havaitsemiseen.

Paikallinen hemolyysireaktio geelissä(Jernen reaktio) - muunnelma hemolyysireaktiosta. Määrittää vasta-aineita muodostavien solujen (AFC) määrän pernassa ja imusolmukkeissa.

Sulatettu agargeeli sekoitetaan pernasolujen ja erytrosyyttien suspensioon, ja agar jähmettymisen jälkeen lisätään komplementtia. Jokaisen hemolysiinejä tuottavan solun ympärille muodostuu hemolyysialue. Tällaisten vyöhykkeiden lukumäärä määrittää hemolysiinejä tuottavien solujen lukumäärän.

Epäsuoran (passiivisen) hemagglutinaation (RIHA) reaktio perustuu siihen, että erytrosyytit, jos niiden pinnalle adsorboituu liukoinen antigeeni, saavat kyvyn agglutinoitua vuorovaikutuksessa adsorboituneen antigeenin vasta-aineiden kanssa. RNGA-kaavio on esitetty kuvassa. 34. RNHA:ta käytetään laajalti useiden infektioiden diagnosoinnissa.

Riisi. 34. Passiivisen hemagglutinaation (RPHA) reaktiokaavio. A - punasoludiagnostiikan saaminen: B - RPHA: 1 - erytrosyytti: 2 - tutkittava antigeeni; 3 - erytrosyyttidiagnostiikka; 4 - vasta-aine tutkitulle antigeenille: 5 - agglutinaatti

Reaktioasetus. Testiseerumia kuumennetaan 30 minuuttia 56 °C:ssa, laimennetaan peräkkäin suhteessa 1:10 - 1:1280 ja kaadetaan 0,25 ml:aan koeputkiin tai kuoppiin, joihin lisätään sitten 2 tippaa erytrosyyttidiagnostiikkaa (erytrosyytit antigeenillä) adsorboitunut niihin).

Kontrollit:io, jossa on ilmeisen immuuniseerumia; diagnostiikan suspensio normaalilla seerumilla; normaalien punasolujen suspensio testatun seerumin kanssa. Ensimmäisessä kontrollissa agglutinaation pitäisi tapahtua, toisessa ja kolmannessa sen ei pitäisi tapahtua.

RIGA:n avulla on mahdollista määrittää tuntematon antigeeni, jos punasoluihin adsorboituu tunnettuja vasta-aineita.

Hemagglutinaatioreaktio voidaan asettaa 0,025 ml:n tilavuuteen (mikromenetelmä) käyttämällä Takachi-mikrotiitteriä.

Kontrollikysymykset

1. Mitä positiivinen RGA-tulos erytrosyyttien ja viruksen esiintymisen varalta tutkitun materiaalin välillä osoittaa?

2. Tapahtuuko erytrosyyttien agglutinaatiota, jos niihin lisätään virus ja vastaava seerumi? Mikä on tämän ilmiön paljastavan reaktion nimi?

Harjoittele

Harkitse ja rekisteröi RIGAn tulos.

saostumisreaktio

Saostusreaktiossa saostetaan spesifinen immuunikompleksi, joka koostuu liukoisesta antigeenistä (lysaatti, uutte, hapteeni) ja spesifisestä vasta-aineesta elektrolyyttien läsnä ollessa.

Tämän reaktion seurauksena muodostunutta sameaa rengasta tai sakkaa kutsutaan sakaksi. Tämä reaktio eroaa agglutinaatioreaktiosta pääasiassa antigeenipartikkelien koon suhteen.

Saostusreaktiota käytetään yleensä antigeenin määrittämiseen useiden infektioiden diagnosoinnissa ( pernarutto, aivokalvontulehdus jne.); oikeuslääketieteessä - veren, siittiöiden jne. lajien määrittämiseksi; terveys- ja hygieniatutkimuksissa - tuotteiden väärentämisen toteamisessa; sen avulla voit määrittää eläinten ja kasvien fylogeneettisen suhteen. Reaktioon tarvitset:

1. Vasta-aineet (presipitiinit) - immuuniseerumi, jolla on korkea vasta-ainetiitteri (vähintään 1:100 000). Saostuvan seerumin tiitteri määräytyy sen antigeenin suurimman laimennoksen mukaan, jonka kanssa se reagoi. Seerumia käytetään yleensä laimentamattomana tai laimennettuna suhteessa 1:5 - 1:10.

2. Antigeeni - proteiini- tai lipoidipolysakkaridiluonteiset liuenneet aineet (täydelliset antigeenit ja hapteenit).

3. Isotoninen liuos.

Pääasialliset menetelmät saostusreaktion suorittamiseksi ovat: rengassaostusreaktio ja saostusreaktio agarissa (geelissä).

Huomio! Kaikkien saostusreaktioon osallistuvien komponenttien on oltava täysin läpinäkyviä.

Rengassaostumisreaktio. 0,2-0,3 ml (5-6 tippaa) seerumia lisätään saostusputkeen Pasteur-pipetillä (seerumin ei tulisi pudota putken seinämille). Antigeeni kerrostetaan varovasti seerumin päälle samassa tilavuudessa kaatamalla se ohuella Pasteur-pipetillä koeputken seinämää pitkin. Koeputki pidetään kaltevassa asennossa. Oikealla kerroksella seerumin ja antigeenin välille tulisi saada selkeä raja. Aseta koeputki varovasti jalustaan, jotta neste ei sekoitu. klo positiivinen tulos antigeenin ja vasta-aineen rajalle muodostuu samea "rengas" - sakka (katso kuva 48).

Reaktiota seuraa joukko kontrolleja (taulukko 18). Reaktion ainesosien koeputkeen viemisen järjestys on erittäin tärkeä. On mahdotonta kerrostaa seerumia antigeenin päälle (kontrollissa - isotoniselle liuokselle), koska seerumin suhteellinen tiheys on suurempi, se uppoaa putken pohjalle, eikä nesteiden välinen raja ole paljastettiin.

Taulukko 18

Huomautus. + "renkaan" läsnäolo; - "renkaan" puute.

Tulokset kirjataan 5-30 minuutin kuluttua, joissain tapauksissa tunnin kuluttua, kuten aina, kontrollista alkaen. Toisessa koeputkessa oleva "rengas" osoittaa immuuniseerumin kyvyn päästä spesifiseen reaktioon vastaavan antigeenin kanssa. 3-5. koeputkessa ei saa olla "renkaita" - ei ole toisiaan vastaavia vasta-aineita ja antigeenejä. "Rengas" 1. putkessa - positiivinen reaktiotulos - osoittaa, että testiantigeeni vastaa otettua immuuniseerumia, "renkaan" puuttuminen ("rengas" vain toisessa putkessa) osoittaa niiden epäjohdonmukaisuuden - negatiivinen reaktio tulos.

Saostumisreaktio agarissa (geeli). Reaktion erikoisuus on se, että antigeenin ja vasta-aineen vuorovaikutus tapahtuu tiheässä väliaineessa, eli geelissä. Tuloksena oleva sakka antaa samean vyöhykkeen väliaineen paksuuteen. Juovan puuttuminen osoittaa epäsopivuutta reaktiokomponenttien välillä. Tätä reaktiota käytetään laajalti biolääketieteellisessä tutkimuksessa, erityisesti tutkittaessa toksiinien muodostumista difterian aiheuttajassa.

Kontrollikysymykset

1. Mikä on tärkein ero agglutinaatioreaktion ja saostumisen välillä?

2. Miksi saostusreaktiossa ei voida käyttää sameita ainesosia?

Harjoittele

1. Aseta rengassaostumisreaktio ja piirrä tulos.

2. Tutki antigeenin ja vasta-aineen vuorovaikutuksen luonnetta agar-saostusreaktiossa, piirrä tulos (hae kuppi opettajalta).

Hajotusreaktio (immuunisytolyysi)

Immuunihajotus on solujen liukenemista vasta-aineiden vaikutuksen alaisena komplementin pakollisen osallistumisen kanssa. Reaktioon tarvitset:

1. Antigeeni - mikrobit, punasolut tai muut solut.

2. Vasta-aine (lysiini) - immuuniseerumi, harvoin potilaan seerumi. Bakteriolyyttinen seerumi sisältää vasta-aineita, jotka osallistuvat bakteerien hajoamiseen; hemolyyttinen - hemolysiinit, jotka edistävät punasolujen hajoamista; spirokeettien hajoamiseen tarvitaan spiroketolisiineja, soluja - itolisiineja jne.

3. Täydennä. Suurin osa seerumin komplementeista marsut. Tätä seerumia (seos useista eläimistä) käytetään yleensä komplementtina. Tuore (alkuperäinen) komplementti on epästabiili ja helposti tuhoutuva kuumentamalla, ravistamalla, varastoimalla, joten sitä voidaan käyttää enintään kaksi päivää vastaanottamisen jälkeen. Komplementin säilyttämiseksi siihen lisätään 2 %. boorihappo ja 3 % natriumsulfaattia. Tätä täydennystä voidaan säilyttää 4 °C:ssa enintään kaksi viikkoa. Kuivaa täydennystä käytetään yleisemmin. Ennen käyttöä se liuotetaan isotoniseen liuokseen alkuperäiseen tilavuuteen (merkitty etiketissä).

4. Isotoninen liuos.

Hemolyysireaktio(Taulukko 19). Reaktioon tarvitset:

1. Antigeeni - 3 % suspensio pestyistä lampaan punasoluista nopeudella 0,3 ml erytrosyyttisedimenttiä ja 9,7 ml isotonista liuosta.

2. Vasta-aine - hemolyyttinen seerumi (hemolysiini) lampaan punasoluja vastaan; yleensä valmistetaan tuotannossa, lyofilisoidaan ja tiitteri on merkitty etikettiin.

Hemolysiinitiitteri on korkein seerumilaimennus, jossa 3-prosenttisen punasolususpension täydellinen hemolyysi tapahtuu komplementin läsnä ollessa. Hemolyysireaktiota varten hemolysiini otetaan kolminkertaisena tiitterina, ts. se laimennetaan 3 kertaa vähemmän kuin ennen tiitteriä. Esimerkiksi seerumitiitterin ollessa 1:1200 seerumi laimennetaan 1:400 (0,1 ml seerumia* ja 39,9 ml isotonista suolaliuosta). Ylimäärä hemolysiiniä on välttämätön, koska osa siitä voi adsorboitua reaktion muiden komponenttien toimesta.

* (Alle 0,1 ml seerumia ei pidä ottaa - mittaustarkkuus kärsii.)

3. Komplementti laimennetaan 1:10 (0,2 ml komplementtia ja 1,8 ml isotonista suolaliuosta).

4. Isotoninen liuos.

Taulukko 19. Hemolyysireaktion kaavio

Tulosten kirjanpito. Oikein asetettu reaktio ensimmäisessä koeputkessa tapahtuu hemolyysi - sen sisällöstä tulee läpinäkyvä. Kontrollissa neste pysyy sameana: 2. putkesta puuttuu komplementti hemolyysin alkamiseksi, 3. putkessa ei ole hemolysiiniä, 4. putkessa ei ole hemolysiiniä eikä komplementtia, 5. putkessa, antigeeni ei vastaa vasta-ainetta,

Tarvittaessa hemolyyttinen seerumi titrataan seuraavan kaavion mukaisesti (taulukko 20).

Ennen titrausta valmistetaan seerumin alkulaimennos 1:100 (0,1 ml seerumia ja 9,9 ml isotonista suolaliuosta), josta tehdään tarvittavat laimennukset, esim.

Näistä laimennoksista 0,5 ml seerumia lisätään titrauskoeputkiin taulukon mukaisesti. 20.

Taulukko 20. Titrauskaavio hemolyyttiselle seerumille (hemolysiini)

Taulukossa annetussa esimerkissä. 20, hemolyyttisen seerumin tiitteri on 1:1200.

Kun käytetään tuoretta hemolyyttistä seerumia, se on inaktivoitava sen komplementin tuhoamiseksi. Tätä varten sitä kuumennetaan 30 minuuttia 56 ° C: ssa vesihauteessa tai termostaatilla varustetussa inaktivaattorissa. Jälkimmäinen menetelmä on parempi: se eliminoi seerumin ylikuumenemisen eli sen denaturoitumisen mahdollisuuden. Denaturoidut seerumit eivät sovellu testaukseen.

bakteriolyysireaktio. Tässä reaktiossa bakteerit komplementoidaan sopivan (homologisen) seerumin läsnä ollessa. Reaktiokaavio on pohjimmiltaan samanlainen kuin hemolyysireaktiokaavio. Erona on, että kahden tunnin inkubaation jälkeen kaikki koeputket kylvetään petrimaljoille kokeessa otetun mikro-organismin kannalta suotuisalla alustalla selvittääkseen, onko se hajotettu. Oikein asetetulla kokemuksella 2.–5. koeputkesta (kontrollit) saaduista kasveista kasvun pitäisi olla runsasta. Viljelmän kasvun puute tai heikko kasvu ensimmäisestä koeputkesta (koe) osoittaa mikrobien kuoleman, ts. että ne ovat homologisia vasta-aineen kanssa.

Huomio! Bakteriolyysireaktio on suoritettava aseptisissa olosuhteissa.

Kontrollikysymykset

1. Mitä tapahtuu punasoluille, jos isotonisen natriumkloridiliuoksen sijasta käytetään tislattua vettä? Mikä on tämän ilmiön taustalla?

2. Mikä reaktio tapahtuu, kun erytrosyytit ovat vuorovaikutuksessa homologisen immuuniseerumin kanssa komplementin puuttuessa?

Harjoittele

Aseta hemolyysireaktio. Kirjaa ja piirrä tulos.

Samanlaisia ​​tietoja.

Epäsuoran hemagglutinaation reaktio (RIGA).

RIGAa käytetään kahdessa versiossa: tunnetuilla antigeeneillä vasta-aineiden havaitsemiseen tunnetuilla antigeeneillä verenpainetaudin havaitsemiseen. Tämä reaktio on spesifinen ja sitä käytetään bakteerien ja riketsioiden aiheuttamien sairauksien diagnosointiin. RIGA:n suorittamiseen käytetään erytrosyyttidiagnostiikkaa, joka valmistetaan adsorboimalla AG:ta tai AT:tä punasoluihin tutkimuksen tarkoituksesta riippuen (kuva 10.3). Positiivisissa tapauksissa punasolujen agglutinaation aste on merkitty plussilla. Neljä plussaa arvioi reaktiota, joka on ohuen tarttuvien punasolujen (sateenvarjo) kalvon muodossa, joka peittää koeputken pohjan; kalvon olemassaolo, jossa on uurretut pitsireunat, on osoitettu kahdella plussalla. Tiitteri on otettu testimateriaalin rajoittavaksi laimennokseksi, joka aiheutti punasolujen agglutinaation kahdella plussalla.

Riisi. 10.3.

1 - erytrosyytit, 2 - erythrocyte AG, 3 - konjugoitu AG, 4-AT

RGA ja hemagglutinaation estoreaktio (RTGA).

Kuten jo todettiin, RGA perustuu erytrosyyttien kykyyn tarttua yhteen, kun tiettyjä antigeenejä adsorboituu niihin. Hemagglutinaation testimateriaalina käytetään allantoiinia, amnionnestettä, kanan alkioiden korioni-allantoiskalvojen suspensiota, suspensioita ja uutteita viruksilla infektoituneiden eläinten viljelmistä tai elimistä, natiivi tarttuvaa materiaalia. RGA ei ole serologinen reaktio, koska se tapahtuu ilman immuuniseerumin osallistumista ja sitä käytetään valitsemaan AG:n työlaimennos RTGA:n asettamiseen tai AG:n (viruksen) esiintymiseen testimateriaalissa (esimerkiksi influenssassa). Reaktiossa käytetään eläinten, lintujen ja ihmisten punasoluja, joiden veriryhmä on I (0). Suunnilleen RGA:n muodostamiseksi tippa 5-prosenttista erytrosyyttien suspensiota ja pisara testimateriaalia levitetään lasilevylle ja sekoitetaan perusteellisesti. Positiivisella tuloksella tarkkaile makroskooppisesti 1-2 minuutin kuluttua punasolujen flokkuloituneen agglutinaation esiintymistä. RHA:n asettamiseksi pidennettyyn riviin polystyreenilevyjen kuoppiin valmistetaan kaksinkertaisesti kasvavat laimennokset testimateriaalista fysiologinen suolaliuos 0,5 ml:n tilavuudessa. Kaikkiin koeputkiin lisätään 0,5 ml 0,25-1 % erytrosyyttisuspensiota. Tulokset otetaan huomioon kontrollin punasolujen täydellisen sedimentaation jälkeen (erytrosyytit + suolaliuos). Reaktio otetaan huomioon punasolusedimentin luonteen mukaan. Positiivisissa tapauksissa agglutinaatioaste on merkitty plussilla. Neljä plussaa arvioi reaktiota, joka on muodoltaan ohut liimattujen punasolujen kalvo, joka peittää koeputken pohjan (sateenvarjo), reaktio, jossa on rakoja kalvossa, on merkitty kolmella plussalla, kalvon läsnäolo, jossa on hilseilevät pitsiset reunat Liimattujen punasolujen määrä on merkitty kahdella plussalla, erytrosyyttien flokkuloiva sedimentti, jota ympäröi agglutinoituneiden punasolujen kokkareiden vyöhyke, vastaa yhtä plussaa. Terävästi rajattu punasolusedimentti, jota ei voi erottaa kontrollista, osoittaa agglutinaation puuttumisen. Tiitteri on otettu testimateriaalin rajoittavaksi laimennokseksi, joka aiheutti punasolujen agglutinaation kahdella plussalla. Jos RHA-tulos on positiivinen, tutkimusta jatketaan määrittämällä eristetyn viruksen tyyppi käyttämällä HA RT:tä tyyppispesifisten seerumeiden kanssa. RTGA perustuu antiseerumin kykyyn tukahduttaa viruksen hemagglutinaatiota, koska spesifisten vasta-aineiden neutraloima virus menettää kykynsä agglutinoida punasoluja. Virusten likimääräiseen tyypitykseen käytetään pudotusmenetelmää lasille. Eristetyn viruksen tyypin lopullista määrittämistä ja vasta-aineiden titrausta varten seerumeissa laajennettu RTHA asetetaan koeputkiin tai kuoppiin. Tätä tarkoitusta varten valmistetaan kaksinkertaiset seerumilaimennokset fysiologiseen suolaliuokseen ja kaadetaan 0,25 ml:aan. Yksi tippa viruksen sisältävää materiaalia ja yksi tippa punasolujen 1-prosenttista suspensiota lisätään seerumilaimennoksiin. Kun käytetään RTGA:ta virustyypin määrittämiseen, käytetään tyyppispesifisiä seerumeita, jotka lisätään yhtä suureen tilavuuteen AG:n työskentelylaimennosta. Eristetyn viruksen tyyppiliiton määrittää spesifinen immuuniseerumi, joka osoitti korkeimman tämän viruksen vasta-aineiden tiitterin. RGA:ta ja RTGA:ta käytetään laajalti diagnostiikassa virusinfektiot (puutiaisaivotulehdus, influenssa jne.) spesifisten vasta-aineiden havaitsemiseksi ja monien virusten tunnistamiseksi niiden antigeenien perusteella.

Epäsuoran tai passiivisen hemagglutinaation (IPHA) reaktio

Tämä vastaus on herkempi kuin agglutinaatioreaktio ja sitä käytetään bakteerien, riketsioiden, alkueläinten ja muiden mikro-organismien aiheuttamien infektioiden diagnosointiin.

RPGA:n avulla voit havaita pienen pitoisuuden vasta-aineita.

Tähän reaktioon liittyy ruskettuneita lampaan punasoluja tai ihmisen punasoluja, joissa on ryhmän I verta, jotka on herkistetty antigeeneillä tai vasta-aineilla.

Jos testiseerumissa havaitaan vasta-aineita, käytetään antigeeneillä herkistettyjä punasoluja (erythrocyte diagnosticum).

Joissakin tapauksissa, jos testimateriaalista on tarpeen määrittää erilaisia ​​antigeenejä, käytetään immuuniglobuliineilla herkistettyjä punasoluja.

RPHA:n tulokset otetaan huomioon punasolusedimentin luonteen mukaan.

Positiiviseksi katsotaan reaktion tulos, jossa punasolut peittävät tasaisesti koko koeputken pohjan (käänteinen sateenvarjo).

Negatiivisella reaktiolla erytrosyytit pienen levyn (painikkeen) muodossa sijaitsevat koeputken pohjan keskellä.

Agglutinaatioreaktio (RA)

Agglutinaatioreaktiosta on spesifisyytensä, asettamisen helppouden ja demonstratiivisuutensa ansiosta tullut laajalle levinnyt mikrobiologisessa käytännössä monien sairauksien diagnosoimiseksi. tarttuvat taudit: lavantauti ja sivutauti (Vidal-reaktio), lavantauti (Weiglin reaktio) jne.

Agglutinaatioreaktio perustuu vasta-aineiden (agglutiniinien) vuorovaikutuksen spesifisyyteen kokonaisten mikrobi- tai muiden solujen (agglutinogeenien) kanssa. Tämän vuorovaikutuksen seurauksena muodostuu hiukkasia - agglomeraatteja, jotka saostuvat (agglutinoituvat).

Agglutinaatioreaktioon voivat osallistua sekä elävät että kuolleet bakteerit, spirokeetat, sienet, alkueläimet, riketsiat sekä punasolut ja muut solut.

Reaktio etenee kahdessa vaiheessa: ensimmäinen (näkymätön) on spesifinen, antigeenin ja vasta-aineiden yhteys, toinen (näkyvä) on epäspesifinen, antigeenien sitoutuminen, ts. agglutinaatin muodostumista.

Agglutinaatti muodostuu, kun kaksiarvoisen vasta-aineen yksi aktiivinen keskus yhdistetään antigeenin determinanttiryhmään.

Agglutinaatioreaktio, kuten mikä tahansa serologinen reaktio, etenee elektrolyyttien läsnä ollessa.

Ulkoisesti positiivisen agglutinaatioreaktion ilmenemismuoto on kaksinkertainen. Leiutumattomissa mikrobeissa, joissa on vain somaattista O-antigeenia, mikrobisolut itse tarttuvat toisiinsa suoraan. Tällaista agglutinaatiota kutsutaan hienorakeiseksi. Se tapahtuu 18-22 tunnin kuluessa.

Flagellar-mikrobeilla on kaksi antigeeniä - somaattinen O-antigeeni ja flagellaarinen H-antigeeni. Jos solut tarttuvat yhteen flagellan kanssa, muodostuu suuria irtonaisia ​​hiutaleita ja tällaista agglutinaatioreaktiota kutsutaan karkearakeiseksi. Se tulee 2-4 tunnin sisällä.

Agglutinaatioreaktio voidaan asettaa sekä spesifisten vasta-aineiden kvalitatiivista ja kvantitatiivista määritystä varten potilaan veri- seerumissa että eristetyn patogeenin lajin määrittämiseksi. hemagglutinaatio mikrobiologinen tarttuva

Agglutinaatioreaktio voidaan asettaa sekä yksityiskohtaiseen versioon, joka mahdollistaa työskentelyn diagnostiseen tiitteriin laimennetun seerumin kanssa, että suuntautumisreaktion asettamisen variantiksi, joka mahdollistaa periaatteessa spesifisten vasta-aineiden havaitsemisen tai sen lajin määrittämisen. taudinaiheuttaja.

Agglutinaatioreaktio - RA(alkaen lat. agglutinaatio- sitoutuminen) - yksinkertainen reaktio, jossa vasta-aineet sitovat korpuskulaarisia antigeenejä (bakteereja, punasoluja tai muita soluja, liukenemattomia hiukkasia, joihin on adsorboitunut antigeeneja, sekä makromolekyyliset aggregaatit). Se tapahtuu elektrolyyttien läsnä ollessa, esimerkiksi kun lisätään isotonista natriumkloridiliuosta.

Agglutinaatioreaktiosta käytetään erilaisia ​​muunnelmia: laajennettu, likimääräinen, epäsuora jne. Agglutinaatioreaktio ilmenee hiutaleiden tai sedimentin muodostumisena

RA:ta käytetään:

vasta-aineiden määrittäminen veren seerumista potilailla, joilla on esimerkiksi luomistauti (Wrightin, Heddelsonin reaktiot), lavantauti ja paratyfaatti (Vidal-reaktio) ja muut tarttuvat taudit;

potilaasta eristetyn patogeenin määrittäminen;

veriryhmien määritys käyttämällä monoklonaalisia vasta-aineita punasolujen allogeeneja vastaan.

Potilaan vasta-aineiden määrittämiseen laittaapidennetty agglutinaatioreaktio: lisätä potilaan veriseerumin laimennoksiin diagnostinen(tapettujen mikrobien suspensio) ja useiden tuntien 37 °C:ssa inkuboinnin jälkeen havaitaan korkein seerumin laimennus (seerumin tiitteri), jossa tapahtui agglutinaatio, eli muodostui sakka.

Agglutinaation luonne ja nopeus riippuvat antigeenin ja vasta-aineiden tyypistä. Esimerkkinä ovat diagnostisten antigeenien (O- ja R-antigeenit) vuorovaikutuksen piirteet spesifisten vasta-aineiden kanssa. Agglutinaatioreaktio kanssa O-diagnostiikka(Lämmön vaikutuksesta kuolleet bakteerit säilyttäen lämpöstabiilin O antigeeni) tapahtuu hienorakeisena agglutinaationa. Agglutinaatioreaktio H-diagnosticumilla (formaliinin tappamat bakteerit, jotka säilyttävät lämpölabiilin flagellaarisen H-antigeenin) on karkearakeinen ja etenee nopeammin.

Jos on tarpeen määrittää potilaasta eristetty taudinaiheuttaja, aseta se orientoiva agglutinaatioreaktio, käyttämällä diagnostisia vasta-aineita (agglutinoivaa seerumia), eli suoritetaan patogeenin serotyypitys. Likimääräinen reaktio suoritetaan lasilevyllä. Lisää pisara diagnostista agglutinoivaa seerumia laimennuksessa 1:10 tai 1:20 potilaasta eristettyä patogeenin puhdasta viljelmää. Kontrolli asetetaan lähelle: seerumin sijaan laitetaan pisara natriumkloridiliuosta. Kun flokkuloiva sedimentti ilmestyy pisara seerumin ja mikrobien kanssa, ne laittavat laaja agglutinaatioreaktio koeputkissa agglutinoivan seerumin kasvavilla laimennoksilla, joihin lisätään 2-3 tippaa patogeenisuspensiota. Agglutinaatio otetaan huomioon sedimentin määrän ja nesteen kirkastumisasteen mukaan. Reaktion katsotaan olevan positiivinen, jos agglutinaatio havaitaan laimennuksessa, joka on lähellä diagnostisen seerumin tiitteriä. Samalla otetaan huomioon kontrollit: isotonisella natriumkloridiliuoksella laimennetun seerumin tulee olla läpinäkyvää, samassa liuoksessa olevan mikrobisuspension tulee olla tasaisen sameaa, ilman sedimenttiä.

Sama diagnostinen agglutinoiva seerumi voi agglutinoida eri sukulaisia ​​bakteereita, mikä tekee niiden tunnistamisesta vaikeaa. Siksi nauti adsorboituja agglutinoivia seerumeja, joista ristiinreaktiiviset vasta-aineet on poistettu niiden sukulaisten bakteerien adsorptiolla. Tällaisissa seerumeissa jää vain tälle bakteerille spesifisiä vasta-aineita. A. Castellani (1902) ehdotti monoreseptoridiagnostisten agglutinoituvien seerumien valmistusta tällä tavalla.

Epäsuoran (passiivisen) hemagglutinaation reaktio(RNGA, RPHA) perustuu erytrosyyttien käyttöön pintaan adsorboituneiden antigeenien tai vasta-aineiden kanssa, joiden vuorovaikutus pallon veriseerumin vastaavien vasta-aineiden tai antigeenien kanssa saa punasolut tarttumaan yhteen ja putoamaan pintaan. koeputkeen tai kennoon V sedimentin muoto (kuva 13.2). Negatiivisella reaktiolla punasolut asettuvat "painikkeen" muodossa. Yleensä vasta-aineet havaitaan RNHA:sta käyttämällä antigeenista punasoludiagnostiikkaa, joka on erytrosyyttejä, joihin on adsorboitunut. päällä ne antigeenejä. Joskus käytämme vasta-aineerytrosyyttidiagnostiikkaa, johon vasta-aineet adsorboidaan. Esimerkiksi botuliinitoksiini voidaan havaita lisäämällä siihen punasoluvasta-ainetta botulinum diagnosticum (tämä reaktio on ns. kääntää epäsuoran hemagglutinaatioreaktion- RONGA). RNHA:ta käytetään tartuntatautien diagnosointiin gonadotrooppinen hormoni V virtsaa, kun raskaus on todettu, havaitsemiseksi yliherkkyys Vastaanottaja lääkkeet, hormonit ja joissakin muissa tapauksissa.

COOMBS-REAKTIO

(Coombs-testi) - menetelmä Rh-vasta-aineiden määrittämiseksi punasolujen pinnalla, jotka aiheuttavat globuliinien saostumisen veriseerumissa. Tätä testiä käytetään diagnoosin tekemiseen hemolyyttinen anemia pikkulapsilla, joilla on Rh-yhteensopimattomuus, jolloin havaitaan punasolujen tuhoutumista.

Koagglutinaatioreaktio. Patogeenisolut määritetään käyttämällä stafylokokkeja, jotka on esikäsitelty immuunidiagnostisella seerumilla. Proteiinia sisältävät stafylokokit A, joilla on affiniteetti immunoglobuliinien Fc-fragmenttia kohtaan, ne adsorboivat epäspesifisesti antimikrobisia vasta-aineita, jotka sitten ovat vuorovaikutuksessa aktiivisten keskusten kanssa potilaista eristettyjen vastaavien mikrobien kanssa. Koagglutinaation seurauksena muodostuu hiutaleita, jotka koostuvat stafylokokeista, diagnostisista seerumin vasta-aineista ja määritettävästä mikrobista.

Hemagglutinaation estoreaktio(RTGA) perustuu estoon, virusten antigeenien suppressioon immuuniseerumin vasta-aineilla, minkä seurauksena virukset menettävät kykynsä agglutinoida punasoluja (kuva 13.3). RTHA:ta käytetään diagnosoimaan monia virussairauksia, joiden aiheuttajat (influenssa, tuhkarokko, vihurirokko, puutiaisaivotulehdus jne.) voivat agglutinoida eri eläinten punasoluja.

1. Ryhmä lääkäreitä saapui Intiaan WHO:n kautta tunnistamaan poliopotilaita ja auttamaan yleisessä poliorokotuksessa. Yhdessä tutkituista kylistä lääkäreille tuotiin 6-vuotias suurperheen poika, joka sairastui 5 päivää sitten. Lämpö nousi äkillisesti, pää särki paljon, toistui oksentelua, kipua käsissä ja jaloissa. Tutkimuksessa: lämpöä, vakava heikkous, aivokalvon oireet, päällä oikea jalka laskettu alas lihasten sävy, jännerefleksit ovat jyrkästi heikentyneet, jalka roikkuu alas. Selkäydinkanavan puhkaisun aikana aivo-selkäydinnestettä valui ulos korkea verenpaine lymfosyyttien määrä lisääntyy, bakteereja ei eristetä. Alustava diagnoosi tehtiin "poliomyeliitin halvaantuneesta muodosta". Miten poika saattoi saada tartunnan? Miten poliomyeliitin spesifinen aktiivinen ehkäisy toteutetaan? Onko olemassa riski saada tartunnan muihin lapsiin tässä perheessä, mitä pitäisi tehdä?

Vastaus: Poika saattoi saada tartunnan ulosteen ja suun kautta ruoan, veden ja myös ilmassa olevien pisaroiden välityksellä. Pääasiallinen poliomyeliitin ehkäisytoimenpide on immunisointi elävällä viljelmärokotteella, joka sisältää 3 serotyyppiä Sabin-kantoja. Venäjällä sitä käytetään polio rokote suun kautta annettavaksi, tuottaa Poliomyelitis and Viral Encephalitis -instituutti. M.P. Tšumakov. Rokote on kolmiarvoinen valmiste poliovirustyyppien 1, 2, 3 heikennetyistä Sabin-kannoista, jotka on saatu afrikkalaisen vihreän apinan munuaissolujen primääriviljelmästä. . Aikataulutetut rokotukset 3 kuukauden–6-vuotiaat lapset ovat alttiita poliomyeliitille. Rokotukset suun kautta annettavalla poliorokotteella suoritetaan 2 tai 4 tippalla rokotetta suun kautta kolme kertaa iässä 3, 4, 5 ja 6 kuukautta ja kolminkertainen uusintarokotus 18, 20 kuukauden ja 14 vuoden iässä. Sairas poika on vietävä sairaalaan, ja kaikki muut tämän perheen lapset on rokotettava elävällä poliorokotteella.

1. Influenssarokotteen kolmiarvoisen polymeeri-alayksikkönesteen (grippol) koostumus ja käyttö

Tämä on molekyylirokote. Koostumus: kolmen alatyypin influenssaviruksen (A / H1N1, A / H3N2, B) pinnallinen AG. Käyttö: influenssan ehkäisyyn

Tenttilippu nro 23