בדיקת ההמגלוטינציה העקיפה או הפסיבית (IRHA או RPHA) רגישה וספציפית יותר מבדיקת האגלוטינציה. תגובה זו משמשת גם בשני כיוונים.
1) כדי לזהות נוגדנים בסרום הדם של המטופל, נעשה שימוש באבחון אריתרוציטים, שבו האנטיגן נספג על פני השטח של אריתרוציטים שטופלו בטאנין. ביחס לתגובה זו, המונח RPHA משמש לעתים קרובות יותר.
סרום הבדיקה מדולל בבארות של צלחות פלסטיק ומוסיפים אבחון אריתרוציטים. אם התגובה חיובית, סרט דק מופיע לאורך קירות החור בצורה של "מטריית תחרה"; תגובה שלילית- משקע צפוף של תאי דם אדומים בצורה של "כפתור".
2) לאיתור רעלים ואנטיגנים חיידקיים בחומר הבדיקה, נעשה שימוש באבחון אריתרוציטים של נוגדנים, המתקבל על ידי ספיחה של נוגדנים על אריתרוציטים. ביחס לתגובה זו, המונח RNGA משמש לעתים קרובות יותר. לדוגמה, בעזרת אבחון נוגדנים, מאתרים אנטיגן מגיפה, אקזוטוקסין דיפתריה ואקזוטוקסין בוטולינום.
בדיקת Coombs (בדיקת אפטיגלובולין)
התגובה משמשת לאיתור נוגדנים לא שלמים, למשל נוגדנים לגורם Rh. סרום בדיקה מתווסף ל-Rh + אריתרוציטים, שבו מניחים נוכחות של נוגדנים לא שלמים לגורם Rh. לאחר היצמדות לתאי דם אדומים, נוגדנים לא שלמים אינם גורמים לאגלוטינציה, מכיוון שיש להם רק מרכז פעיל אחד. לאחר מכן מוסיפים סרום אנטיגלובולינים המכיל נוגדנים לגלובולינים אנושיים. בשילוב עם נוגדנים לא שלמים, סרום אנטיגלובולין גורם לאגלוטינציה של תאי דם אדומים.
תגובת משקעים
מהות התגובה היא שקיעה (משקעים) של האנטיגן בהשפעת נוגדנים ספציפיים. כדי להשיג תגובה נראית לעין, יש צורך בנוכחות של אלקטרוליט. האנטיגן בתגובת המשקעים הוא חומרים מפוזרים מולקולרית.
תגובת משקעים טבעתמונחים בצינורות משקעים צרים. סרום חיסון נשפך למבחנה, ועליה מרוכבים בזהירות את חומר הבדיקה. אם יש בו אנטיגן נוצרת טבעת אטומה של משקעים בגבול שני הנוזלים.
התגובה משמשת ב רפואה משפטיתלקבוע את מיני החלבונים בכתמי דם, זרע וכו'; לקבוע את האנטיגן באבחון של אנתרקס (תגובת אסקולי), דלקת קרום המוח וזיהומים אחרים; בלימודי סניטריה והיגיינה - לבסס זיוף מוצרי מזון. סרום משקעים חיסוני מתקבל על ידי חיסון בעלי חיים עם האנטיגן המתאים. לדוגמה, סרום מזרז חלבון אנושי מתקבל על ידי חיסון ארנב בחלבון אנושי. הטיטר של הסרום המשקע הוא הדילול הגבוה ביותר של האנטיגן איתו הוא מגיב. בדרך כלל משתמשים בסרום ללא דילול או בדילול של 1:5.
תגובת משקעים של ג'ל אגרמבוצע במספר שיטות. אלו הן תגובת אימונודיפוזיה כפולה, תגובת אימונודיפוזיה רדיאלית ותגובת אימונואלקטרופורזה.
תגובה חיסונית כפולה(לפי אוכטרלוני). מוּמַס אגר ג'לשפכו לצלחת פטרי ולאחר התקשות נכרתו בה חורים. אנטיגן מונח בבארות מסוימות, ובאחרות מניחים סרה חיסונית, המתפזרת לתוך האגר ויוצרות משקעים בצורת פסים לבנים בנקודת המפגש.
תגובה חיסונית רדיאלית(לפי מנצ'יני). את הסרום החיסוני מוסיפים לג'ל האגר המומס ויוצקים לכוס. לאחר שהאגר מתקשה, חותכים בארות ומכניסים בהן אנטיגנים, אשר מתפזרים לתוך האגר יוצרים אזורי משקעים בצורת טבעת סביב הבארות. ככל שריכוז האנטיגן גבוה יותר, כך קוטר הטבעת גדול יותר. התגובה משמשת, למשל, לקביעת אימונוגלובולינים מקבוצות שונות בדם. אימונוגלובולינים מהמחלקות IgG, IgM, IgA פועלים כאנטיגנים בתגובה זו, ונוגדנים נגדם כלולים בסרה מונורצפטורים ספציפית.
אימונואלקטרופורזה.אלקטרופורזה של אנטיגנים חלבונים מתבצעת בג'ל אגר. לחריץ מוכנס סרום משקע, העובר במקביל לכיוון התנועה של החלבונים. אנטיגנים ונוגדנים מתפזרים לתוך האגר וקווי משקעים נוצרים במקום שבו הם נפגשים.
תגובות תמוגה חיסונית
אנטיגן (אריתרוציטים או חיידקים), בשילוב עם נוגדנים ספציפיים, יוצר קומפלקס חיסוני שאליו נצמד משלים (C1), ומשלים מופעל לאורך המסלול הקלאסי. משלים מופעל ליזה תאי דם אדומים (המוליזה) או חיידקים (בקטריוליזה). תגובת הבקטריוליזה משמשת לזיהוי Vibrio cholerae.
תגובת המוליזה.האנטיגן בתגובה הוא אריתרוציטים, נוגדנים (המוליזינים) כלולים בסרום המוליטי. המוליזינים נצמדים לתאי דם אדומים, ומופעל משלים, אשר הופך את תאי הדם האדומים לליזה. ההשעיה העכורה של תאי דם אדומים הופכת לנוזל אדום בוהק שקוף - "דם לכה". מכיוון שתגובת המוליזה מתרחשת רק בנוכחות משלים, היא משמשת כאינדיקטור לזיהוי משלים.
תגובת המוליזה מקומית בג'ל(תגובת ארן) - גרסה של תגובת המוליזה. משמש לקביעת מספר התאים היוצרים נוגדנים (AFC) בטחול ובלוטות הלימפה.
את ג'ל האגר המומס מערבבים עם תרחיף של תאי טחול ותאי דם אדומים, ולאחר שהאגר התמצק מוסיפים משלים. אזור המוליזה נוצר סביב כל תא המייצר המוליזין. מספר התאים המייצרים המוליזין נקבע על פי מספר אזורים כאלה.
תגובת ההמגלוטינציה העקיפה (פאסיבית) (IRHA) מבוססת על העובדה שכדוריות דם אדומות, אם נספג אנטיגן מסיס על פני השטח שלהם, רוכשות את היכולת להצטבר בעת אינטראקציה עם נוגדנים לאנטיגן הנספג. דיאגרמת RNGA מוצגת באיור. 34. RNGA נמצא בשימוש נרחב באבחון של מספר זיהומים.
אורז. 34. סכימה של תגובת ההמגלוטינציה הפסיבית (RPHA). A - קבלת אבחון אריתרוציטים: B - RPGA: 1 - אריתרוציטים: 2 - אנטיגן נחקר; 3 - אבחון אריתרוציטים; 4 - נוגדן לאנטיגן הנחקר: 5 - אגלוטינאט
הגדרת תגובה. סרום הבדיקה מחומם במשך 30 דקות ב-56 מעלות צלזיוס, מדולל ברצף ביחס של 1:10 - 1:1280 ומוזג לתוך 0.25 מ"ל לתוך מבחנות או בארות, שבהן 2 טיפות של אריתרוציטים diagnosticum (אריתרוציטים עם אנטיגן נספג עליהם ) לאחר מכן מוסיפים.
בקרות: השעיה של אריתרוציטים דיאגנוסטיקום עם סרום חיסוני ידוע; השעיה של אבחון עם סרום תקין; השעיה של תאי דם אדומים תקינים עם סרום בדיקה. בביקורת הראשונה אמורה להתרחש אגלוטינציה, בשנייה ובשלישית היא לא אמורה להתרחש.
באמצעות RIGA, אתה יכול לזהות אנטיגן לא ידוע אם נוגדנים ידועים נספגים על תאי דם אדומים.
ניתן לבצע את תגובת ההמגלוטינציה בנפח של 0.025 מ"ל (מיקרו-מתוד) באמצעות מיקרוטיטרטור של Takachi.
1. מה מעידה תוצאת ניתוח רנטגן חיובית בין תאי דם אדומים לחומר הנבדק לנוכחות הנגיף?
2. האם תתרחש אגלוטינציה של תאי דם אדומים אם יתווספו להם וירוס והסרום המתאים לו? מה שם התגובה שחושפת את התופעה הזו?
תרגיל
קחו בחשבון ורשמו את התוצאה RIGA.
תגובת משקעים
בתגובת המשקעים משקעים קומפלקס חיסוני ספציפי המורכב מאנטיגן מסיס (ליזאט, תמצית, הפטן) ונוגדן ספציפי בנוכחות אלקטרוליטים.
הטבעת העכורה או המשקע הנוצר כתוצאה מתגובה זו נקראת משקעים. תגובה זו נבדלת בעיקר מתגובת האגלוטינציה בגודל חלקיקי האנטיגן.
תגובת המשקעים משמשת בדרך כלל לקביעת אנטיגן באבחון של מספר זיהומים ( גַחֶלֶת, דלקת קרום המוח וכו'); ברפואה משפטית - לקביעת מיני דם, זרע וכדומה; במחקרים סניטריים והיגייניים - בעת קביעת זיוף מוצרים; בעזרתו נקבע הקשר הפילוגנטי של בעלי חיים וצמחים. לתגובה אתה צריך:
1. נוגדנים (precipitins) - סרום חיסון בעל טיטר נוגדנים גבוה (לא נמוך מ-1:100,000). הטיטר של הסרום המשקע נקבע לפי הדילול הגבוה ביותר של האנטיגן איתו הוא מגיב. בדרך כלל משתמשים בסרום ללא דילול או בדילול של 1:5 - 1:10.
2. אנטיגן - חומרים מומסים בעלי אופי פוליסכריד חלבוני או ליפואידי (אנטיגנים מלאים והפטנים).
3. תמיסה איזוטונית.
השיטות העיקריות לביצוע תגובת המשקעים הן: תגובת משקעים טבעת ותגובת משקעים באגר (ג'ל).
תשומת הלב! כל המרכיבים המעורבים בתגובת המשקעים חייבים להיות שקופים לחלוטין.
תגובת משקעים טבעת. בעזרת פיפטת פסטר, הוסף 0.2-0.3 מ"ל (5-6 טיפות) של סרום לתוך צינור המשקעים (הסרום לא אמור להגיע על דפנות הצינורית). האנטיגן באותו נפח מונח בקפידה על הסרום, יוצקים אותו עם פיפטת פסטר דקה לאורך דופן המבחנה. המבחנה נשמרת במצב משופע. כאשר שכבה נכונה, צריך להיות גבול ברור בין הסרום לאנטיגן. בזהירות, כדי לא לערבב את הנוזל, הניחו את המבחנה במעמד. בְּ תוצאה חיוביתתגובה, נוצרת "טבעת" עכורה בגבול האנטיגן והנוגדן - משקע (ראה איור 48).
התגובה מלווה במספר בקרות (טבלה 18). רצף הוספת מרכיבי התגובה למבחנה חשוב מאוד. לא ניתן לשכב סרום על האנטיגן (בביקורת - על תמיסה איזוטונית), מאחר והצפיפות היחסית של הסרום גדולה יותר, הוא ישקע לתחתית המבחנה, והגבול בין הנוזלים לא יתגלה.
טבלה 18. תכנית להגדרת תגובת משקעי הטבעת
הערה. + נוכחות של "טבעת"; - היעדר "טבעת".
התוצאות נרשמות לאחר 5-30 דקות, במקרים מסוימים לאחר שעה, כמו תמיד החל מהפקדים. ה"טבעת" במבחנה השנייה מציינת את יכולתו של הסרום החיסוני להיכנס לתגובה ספציפית עם האנטיגן המתאים. לא אמורות להיות "טבעות" ב-3-5 המבחנות - אין נוגדנים ואנטיגנים התואמים זה לזה. "טבעת" בצינור הראשון - תוצאת תגובה חיובית - מצביע על כך שהאנטיגן הבדיקה מתאים לסרום החיסוני שנלקח, היעדר "טבעת" ("טבעת" רק בצינור השני) מעיד על חוסר העקביות שלהם - שלילי תוצאת תגובה.
תגובת משקעים באגר (ג'ל). המוזרות של התגובה היא שהאינטראקציה של אנטיגן ונוגדן מתרחשת במדיום צפוף, כלומר, בג'ל. המשקע המתקבל נותן פס עכור בעובי המדיום. היעדר פס מעיד על אי התאמה בין מרכיבי התגובה. תגובה זו נמצאת בשימוש נרחב במחקר ביו-רפואי, בפרט בחקר היווצרות רעלנים בגורם הסיבתי של דיפתריה.
שאלות בקרה
1. מה ההבדל העיקרי בין תגובות אגלוטינציה למשקעים?
2. מדוע לא ניתן להשתמש במרכיבים עכורים בתגובת המשקעים?
תרגיל
1. הגדר את תגובת משקעי הטבעת ושרטט את התוצאה.
2. למד את אופי האינטראקציה של אנטיגן עם נוגדן בתגובת המשקעים באגר, שרטט את התוצאה (קבל כוס מהמורה שלך).
תגובת ליזה (ציטוליזה חיסונית)
תמוגה חיסונית היא פירוק תאים בהשפעת נוגדנים עם השתתפות חובה של משלים. לתגובה אתה צריך:
1. אנטיגן – חיידקים, תאי דם אדומים או תאים אחרים.
2. נוגדן (ליזין) - סרום חיסוני, סרום חולים פחות. סרום בקטריוליטי מכיל נוגדנים המעורבים בתמוגה של חיידקים; hemolytic - המוליזינים המעודדים תמוגה של תאי דם אדומים; עבור תמוגה של ספירוצ'טים, יש צורך בספירוצ'טוליזינים, תאים - איטוליזינים וכו'.
3. משלים. הכי משלים בסרום שרקנים. סרום זה (תערובת ממספר בעלי חיים) משמש בדרך כלל כהשלמה. המשלים הטרי (ילידים) אינו יציב ונהרס בקלות על ידי חימום, ניעור או אחסון, כך שניתן להשתמש בו לא יותר מיומיים לאחר קבלתו. כדי לשמור על השלמה, מתווספים לו 2%. חומצה בוריתו-3% נתרן גופרתי. ניתן לאחסן את המשלים הזה ב-4 מעלות צלזיוס עד שבועיים. לרוב משתמשים בהשלמה יבשה. לפני השימוש, הוא מומס בתמיסה איזוטונית לנפח המקורי (מצוין על התווית).
4. תמיסה איזוטונית.
תגובת המוליזה(טבלה 19). לתגובה אתה צריך:
1. אנטיגן - תרחיף 3% של אריתרוציטים כבשים שטופים בשיעור של 0.3 מ"ל משקעי אריתרוציטים ו-9.7 מ"ל תמיסה איזוטונית.
2. נוגדן - סרום המוליטי (המוליזין) נגד אריתרוציטים של כבשים; בדרך כלל מוכנים בייצור, ללופיל והטיטר מצוין על התווית.
טיטר המוליזין הוא הדילול הגבוה ביותר של סרום שבו מתרחשת המוליזה מלאה של תרחיף של 3% של תאי דם אדומים בנוכחות משלים. עבור תגובת המוליזה, המוליזין נלקח בטיטר משולש, כלומר מדולל פי 3 פחות מאשר לפני הטיטר. לדוגמה, עם טיטר סרום של 1:1200, הסרום מדולל 1:400 (0.1 מ"ל סרום * ו-39.9 מ"ל של תמיסה איזוטונית). עודף המוליזין הכרחי, מכיוון שחלק ממנו יכול להיספג על ידי מרכיבי תגובה אחרים.
* (לא כדאי ליטול פחות מ-0.1 מ"ל סרום - דיוק המדידה ייפגע.)
3. משלים מדולל 1:10 (0.2 מ"ל של משלים ו-1.8 מ"ל של תמיסה איזוטונית).
4. תמיסה איזוטונית.
טבלה 19. ערכת תגובת המוליזה
התחשבנות בתוצאות. אם התגובה מתבצעת בצורה נכונה, תתרחש המוליזה במבחנה הראשונה - תוכנה יהפוך לשקוף. בבקרות הנוזל נשאר מעונן: בצינור 2 אין מספיק משלים כדי להתרחש המוליזה, בצינור 3 אין המוליזין, בצינור הרביעי אין לא המוליזין ולא משלים, בצינור החמישי האנטיגן עושה זאת. לא תואם לנוגדן,
במידת הצורך, סרום המוליטי עובר טיטרציה בהתאם לתכנית הבאה (טבלה 20).
לפני הטיטרציה, הכינו דילול סרום ראשוני של 1:100 (0.1 מ"ל סרום ו-9.9 מ"ל תמיסה איזוטונית), שממנו עושים את הדילולים הדרושים, למשל:
מהדילולים הללו, הוסף 0.5 מ"ל של סרום למבחנות טיטרציה, כפי שמוצג בטבלה. 20.
טבלה 20. ערכת טיטרציה לסרום המוליטי (המוליזין)
בדוגמה שניתנה בטבלה. 20, הטיטר של סרום המוליטי הוא 1:1200.
בעת שימוש בסרום המוליטי טרי, יש להשבית אותו כדי להרוס את המשלים הקיים בו. לשם כך, הוא מחומם במשך 30 דקות ב-56 מעלות צלזיוס באמבט מים או באינאקטיבטור עם תרמוסטט. השיטה האחרונה טובה יותר: היא מבטלת את האפשרות של חימום יתר של מי גבינה, כלומר, דנטורציה שלה. סרה דנטורטית אינה מתאימה לבדיקה.
תגובה בקטריוליזה. בתגובה זו, משלים ליזה חיידקים בנוכחות סרום מתאים (הומולוגי). ערכת התגובה דומה ביסודה לתוכנית התגובה המוליזה. ההבדל הוא שאחרי דגירה של שעתיים, כל המבחנות מוזרעות על גבי צלחות פטרי עם מדיום המתאים למיקרואורגניזם שנלקח לניסוי כדי לברר אם הוא מוקפץ. אם הניסוי מתבצע כהלכה, תרביות מ-2-5 מבחנות (בקרות) צריכות להראות צמיחה בשפע. חוסר צמיחה או צמיחה חלשה בחיסון מהמבחנה הראשונה (ניסוי) מצביע על מוות של חיידקים, כלומר, שהם הומולוגים לנוגדן.
תשומת הלב! תגובת הבקטריוליזה חייבת להתבצע בתנאים אספטיים.
שאלות בקרה
1. מה יקרה לתאי דם אדומים אם משתמשים במים מזוקקים במקום תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית? מה הבסיס לתופעה זו?
2. איזו תגובה תתרחש כאשר אריתרוציטים מקיימים אינטראקציה עם סרום חיסוני הומולוגי בהיעדר משלים?
תרגיל
הגדר את תגובת המוליזה. הקלט ושרטט את התוצאה.
מידע קשור.
תגובה עקיפה להמגלוטינציה (RIHA).
RIGA משמש בשתי גרסאות: עם נוגדנים ידועים לזיהוי נוגדנים עם נוגדנים ידועים לזיהוי נוגדנים. תגובה זו היא ספציפית, והיא משמשת לאבחון מחלות הנגרמות על ידי חיידקים וריקטסיה. כדי לבצע RIGA, נעשה שימוש באבחון אריתרוציטים, שהוכן על ידי ספיחה של AG או AT על אריתרוציטים, בהתאם למטרת המחקר (איור 10.3). במקרים חיוביים, מידת צמיחת אריתרוציטים מסומנת בפלוסים. ארבעה פלוסים מעריכים תגובה שיש לה צורה של סרט דק של תאי דם אדומים דביקים (מטריה) המכסה את תחתית המבחנה; נוכחות של סרט עם קצוות תחרה מסולסלים מסומנת על ידי שני פלוסים. הטיטר נחשב לדילול המקסימלי של חומר הבדיקה שגרם לאגלוטינציה של אריתרוציטים בשני פלוסים.
אורז. 10.3.
1 - תאי דם אדומים, 2 - אריתרוציטים AG, 3 - AG מצומד, 4-AT
RHA ותגובת עיכוב hemagglutination (HAI).
כפי שכבר צוין, RHA מבוסס על יכולתם של אריתרוציטים להיצמד זה לזה כאשר אנטיגנים מסוימים נספגים עליהם. מי אלנטואים ומי שפיר, תרחיף של ממברנות כוריון-אלנטואיות של עוברי עוף, תרחיפים ותמציות מתרבויות או איברים של בעלי חיים הנגועים בנגיפים וחומר זיהומי מקומי משמשים כחומר בדיקה להמגלוטינציה. RGA אינו תגובה סרולוגית, שכן היא מתרחשת ללא השתתפות של סרום חיסון ומשמשת לבחירת דילול העבודה של אנטיגן לשלב RGA או נוכחות של אנטיגן (וירוס) בחומר הבדיקה (לדוגמה, עבור שפעת ). התגובה משתמשת בתאי דם אדומים מבעלי חיים, ציפורים ובני אדם עם קבוצת דם I (0). כדי להגדיר RGA משוער, מורחים טיפה של תרחיף 5% של אריתרוציטים וטיפה של חומר הבדיקה על שקף זכוכית ומערבבים היטב. אם התוצאה חיובית, לאחר 1-2 דקות נצפתה באופן מקרוסקופי את המראה של אגלוטינציה פלוקולנטית של אריתרוציטים. כדי להגדיר RGA בשורה לא מקופלת בבארות של לוחות פוליסטירן, הכינו דילולים גדלים כפולים של חומר הבדיקה לכל תמיסת מלחבנפח של 0.5 מ"ל. 0.5 מ"ל של תרחיף 0.25-1% של תאי דם אדומים מתווספים לכל המבחנות. התוצאות נלקחות בחשבון לאחר שקיעה מלאה של אריתרוציטים בבקרה (כדוריות דם אדומות + תמיסת מלח). התגובה נלקחת בחשבון על ידי אופי משקע האריתרוציטים. במקרים חיוביים, מידת הצבירה מסומנת בפלוסים. תגובה שנראית כמו סרט דק של תאי דם אדומים דביקים המכסים את תחתית המבחנה (מטריה) מוערכת עם ארבעה פלוסים; תגובה עם פערים בסרט מסומנת בשלושה פלוסים; נוכחות של סרט עם תחרה מסולסלת קצוות של תאי דם אדומים דביקים מסומנים בשני פלוסים; משקעים גדושים של תאי דם אדומים מוקפים באזור של אריתרוציטים של גושים צמודים, תואם פלוס אחד. משקע אריתרוציטים מוגדר בחדות, שלא ניתן להבחין מהבקרה, מצביע על היעדר אגלוטינציה. הטיטר נחשב לדילול המקסימלי של חומר הבדיקה שגרם לאגלוטינציה של אריתרוציטים בשני פלוסים. אם תוצאת ה-RGA חיובית, המחקר נמשך, תוך קביעת סוג הנגיף המבודד באמצעות RT GA עם סמים ספציפיים לסוג. RTGA מבוסס על התכונה של אנטי-סרום לדכא המגלוטינציה ויראלית, שכן הנגיף המנוטרל על ידי נוגדנים ספציפיים מאבד את היכולת לצבור תאי דם אדומים. עבור הקלדה טנטטיבית של וירוסים, נעשה שימוש בשיטת הטיפות על זכוכית. כדי לקבוע באופן סופי את סוג הנגיף המבודד ולטיטר את הנוגדנים בסרה, מבוצעת בדיקת רנטגן מורחבת במבחנות או בארות. למטרה זו מכינים דילולים כפולים של סרה בתמיסה פיזיולוגית ומחולקים ל-0.25 מ"ל. לדילול הסרום הוסף טיפה אחת של חומר המכיל את הנגיף וטיפה אחת של תרחיף 1% של תאי דם אדומים. בעת שימוש ב-RTGA לקביעת סוג הנגיף, משתמשים בסמים ספציפיים לסוג, שמתווספים לנפח שווה של דילול העבודה של AG. סוג הנגיף המבודד נקבע על ידי הסרום החיסוני הספציפי שהראה את טיטר הנוגדנים הגבוה ביותר לנגיף זה. RGA ו-RTGA נמצאים בשימוש נרחב לאבחון זיהום ויראלי (דלקת מוח קרציות, שפעת וכו') על מנת לזהות נוגדנים ספציפיים ולזהות וירוסים רבים לפי הנוגדנים שלהם.
תגובה עקיפה או פסיבית להמגלוטינציה (IPHA)
תגובה זו רגישה יותר מאשר תגובת צבירהוהוא משמש לאבחון זיהומים הנגרמים על ידי חיידקים, ריקטזיה, פרוטוזואה ומיקרואורגניזמים אחרים.
RPGA מאפשר לך לזהות ריכוז קטן של נוגדנים.
תגובה זו כוללת אריתרוציטים של כבשים שזופות או אריתרוציטים אנושיים עם דם מקבוצה I, רגישים עם אנטיגנים או נוגדנים.
אם מתגלים נוגדנים בסרום הבדיקה, משתמשים בתאי דם אדומים שעברו רגישות לאנטיגנים (אריתרוציטים אבחון).
במקרים מסוימים, אם יש צורך לקבוע אנטיגנים שונים בחומר הבדיקה, נעשה שימוש באדתרוציטים בעלי רגישות לגלובולינים חיסוניים.
התוצאות של RPGA נלקחות בחשבון על ידי אופי משקע האריתרוציטים.
התוצאה של תגובה נחשבת חיובית כאשר תאי דם אדומים מכסים באופן שווה את כל תחתית המבחנה (מטריה הפוכה).
בתגובה שלילית, תאי דם אדומים בצורת דיסק קטן (כפתור) ממוקמים במרכז החלק התחתון של המבחנה.
תגובת צבירה (RA)
בשל הספציפיות שלה, קלות הביצועים וההדגמה שלה, תגובת האגלוטינציה הפכה לנפוצה בפרקטיקה המיקרוביולוגית לאבחון של רבים מחלות מדבקות: קדחת טיפוס ופרטיפוס (תגובת וידאל), טיפוס (תגובת וויגל) וכו'.
תגובת האגלוטינציה מבוססת על הספציפיות של האינטראקציה של נוגדנים (אגלוטינינים) עם תאים מיקרוביאליים שלמים או אחרים (אגלוטינוגנים). כתוצאה מאינטראקציה זו נוצרים חלקיקים - אגרטלים המשקעים (אגלוטינים).
תגובת האגלוטינציה יכולה לכלול גם חיידקים חיים וגם חיידקים מומתים, ספירוצ'טים, פטריות, פרוטוזואה, ריקטסיה, כמו גם תאי דם אדומים ותאים אחרים.
התגובה מתרחשת בשני שלבים: הראשון (בלתי נראה) - ספציפי, השילוב של אנטיגן ונוגדנים, השני (גלוי) - לא ספציפי, הדבקה של אנטיגנים, כלומר. היווצרות צפיפות.
אגלוטינאט נוצר כאשר מרכז פעיל אחד של נוגדן דו ערכי מתחבר עם הקבוצה הקובעת של אנטיגן.
תגובת האגלוטינציה, כמו כל תגובה סרולוגית, מתרחשת בנוכחות אלקטרוליטים.
מבחינה חיצונית, לביטוי של תגובת אגלוטינציה חיובית יש אופי כפול. בחיידקים דגולים שיש להם רק O-antigen סומטי, התאים המיקרוביאליים עצמם נדבקים ישירות. צבירה זו נקראת עדין גרגיר. זה מתרחש תוך 18 - 22 שעות.
לחיידקים פלגללטים יש שני אנטיגנים - אנטיגן סומטי O ואנטיגן H flagellar. אם תאים מודבקים זה לזה על ידי דגלים, נוצרים פתיתים גדולים ורופפים ותגובת הצבירה הזו נקראת גרגירים גסים. זה מתרחש תוך 2 - 4 שעות.
תגובת האגלוטינציה יכולה להתבצע הן לצורך קביעה איכותית וכמותית של נוגדנים ספציפיים בסרום הדם של החולה, והן לצורך קביעת המין של הפתוגן המבודד. hemagglutination מיקרוביולוגי זיהומיות
את תגובת האגלוטינציה ניתן לבצע הן בגרסה מורחבת, המאפשרת לעבוד עם סרום מדולל לטיטר אבחנתי, והן בגרסת תגובה אינדיקטיבית, המאפשרת, באופן עקרוני, לזהות נוגדנים ספציפיים או לקבוע את המין של הפתוגן. .
תגובת אגלוטינציה - RA(מ-lat. agglutinatio- הידבקות) היא תגובה פשוטה שבה נוגדנים קושרים אנטיגנים גופניים (חיידקים, אריתרוציטים או תאים אחרים, חלקיקים בלתי מסיסים עם אנטיגנים נספגים עליהם, כמו גם אגרגטים מקרומולקולריים). זה מתרחש בנוכחות אלקטרוליטים, למשל, כאשר מוסיפים תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית.
נעשה שימוש באפשרויות שונות לתגובת הצבירה: נרחבת, אינדיקטיבית, עקיפה וכו'. תגובת הצבירה מתבטאת ביצירת פתיתים או משקעים
RA משמש עבור:
קביעת נוגדנים בסרום הדם של חולים, למשל, עם ברוצלוזיס (תגובות רייט, הדלסון), קדחת טיפוסופארטיפוס (תגובת וידאל) ואחרים מחלות מדבקות;
קביעת הפתוגן מבודד מהמטופל;
קביעת קבוצות דם באמצעות נוגדנים חד שבטיים כנגד אלואנטיגנים אריתרוציטים.
כדי לקבוע נוגדנים בחולה לָשִׂיםתגובת צבירה מפורטת:להוסיף לדילול של סרום הדם של המטופל אבחון(השעיה של חיידקים מומתים) ולאחר מספר שעות של דגירה ב-37 מעלות צלזיוס, צוין דילול הסרום הגבוה ביותר (טיטר סרום), שבו התרחשה אגלוטינציה, כלומר נוצר משקעים.
אופי ומהירות האגלוטינציה תלויים בסוג האנטיגן והנוגדנים. דוגמה לכך היא המוזרויות של אינטראקציה של אבחונים (אנטיגנים O ו-R) עם נוגדנים ספציפיים. תגובת צבירה עם O-diagnosticum(חיידקים נהרגים על ידי חום, שומרים על יציבות חום O-אנטיגן)מתרחשת בצורה של צבירה עדינה. תגובת האגלוטינציה עם H-diagnosticum (חיידקים שנהרגים על ידי פורמלדהיד, שומרים על אנטיגן H-flagellar thermolabile) היא גסה ומתמשכת מהר יותר.
אם יש צורך לקבוע את הפתוגן מבודד מהמטופל, לשים תגובת אגלוטינציה מעידה,באמצעות נוגדנים אבחנתיים (סרום מאגד), כלומר, מתבצעת סרוטיפינג של הפתוגן. תגובה משוערתמתבצע על מגלשת זכוכית. תרבית טהורה של הפתוגן המבודד מהמטופל מתווספת לטיפה של סרום אגלוטיניסטי אבחנתי בדילול של 1:10 או 1:20. פקד ממוקם בקרבת מקום: במקום סרום, מורחים טיפה של תמיסת נתרן כלורי. כאשר מופיע משקעים פלוקולנטיים בטיפה המכילה סרום וחיידקים, א תגובת צבירה נרחבתבמבחנות עם דילולים הולכים וגדלים של סרום מצטבר, שאליהם מוסיפים 2-3 טיפות של תרחיף הפתוגן. הצבירה נלקחת בחשבון לפי כמות המשקעים ומידת צלילות הנוזל. התגובה נחשבת חיובית אם נצפית אגלוטינציה בדילול קרוב לטיטר של הסרום האבחנתי. במקביל, נלקחות בחשבון בקרות: סרום מדולל בתמיסת נתרן כלוריד איזוטונית צריך להיות שקוף, ההשעיה של חיידקים באותה תמיסה צריכה להיות עכורה באופן אחיד, ללא משקעים.
חיידקים קשורים שונים יכולים להיות צבועים על ידי אותו נסיוב אגלוטיני אבחנתי, מה שמקשה על זיהוים. לכן הם משתמשים סרה צבירה נספג,שמהם הוסרו נוגדנים בעלי תגובה צולבת על ידי ספיחה לחיידקים קשורים. סמים כאלה שומרים על נוגדנים ספציפיים רק לחיידק נתון. ייצור של סרה אבחנתית אבחנתית חד קולטנית מיוחדת הוצעה על ידי A. Castellani (1902).
תגובה עקיפה (פאסיבית) להמגלוטינציה(RNGA, RPGA) מבוסס על שימוש באריתרוציטים עם אנטיגנים או נוגדנים הנספגים על פני השטח שלהם, שהאינטראקציה שלהם עם הנוגדנים או האנטיגנים התואמים של סרום הדם גורמת לאריתרוציטים להיצמד זה לזה ולנשור לתחתית הבדיקה. צינור או תא Vבצורת משקעים מסולסלים (איור 13.2). במקרה של תגובה שלילית, תאי דם אדומים מתיישבים ■ בצורת "כפתור". בדרך כלל, נוגדנים מתגלים ב-RNGA באמצעות אבחון אריתרוציטים אנטיגני, שהוא אריתרוציטים עם ספיגה עַלאותם עם אנטיגנים. לעיתים נעשה שימוש באבחון אריתרוציטים אנטי-A, עליהם נספגים נוגדנים. לדוגמה, ניתן לזהות בוטולינום טוקסין על ידי הוספת נוגדן אריתרוציטים בוטולינום טוקסין (תגובה זו נקראת תגובה הפוכה להמגלוטינציה עקיפה- RONG). RNGA משמש לאבחון מחלות זיהומיות, לקבוע הורמון גונדוטרופין Vשתן בעת ביסוס הריון, כדי לזהות רגישות יתרל תרופות, הורמונים ובמקרים אחרים.
תגובת COMBES
(בדיקת Coombs) - שיטה לקביעת נוגדני Rh על פני כדוריות הדם האדומות, הגורמים לשקיעת גלובולינים בסרום הדם. בדיקה זו משמשת לאבחון אנמיה המוליטיתבתינוקות עם אי התאמה ל-Rh שחווים הרס של תאי דם אדומים.
תגובת קרישה. תאי הפתוגן נקבעים באמצעות סטפילוקוקים שטופלו מראש בסרום אבחון חיסוני. סטפילוקוקים המכילים חלבון א,בעלי זיקה למקטע Fc של אימונוגלובולינים, סופחים באופן לא ספציפי נוגדנים אנטי-מיקרוביאליים, אשר לאחר מכן מקיימים אינטראקציה עם מרכזים פעילים עם החיידקים המתאימים מבודדים מהמטופלים. כתוצאה מהקרישה נוצרים פתיתים המורכבים מסטפילוקוקוס, נוגדנים אבחנתיים בסרום והחיידק שזוהה.
תגובה לעיכוב ההמגלוטינציה(RTGA) מבוסס על חסימה, דיכוי של אנטיגנים ויראליים על ידי נוגדנים חיסוניים בסרום, כתוצאה מכך וירוסים מאבדים את יכולתם לצבור תאי דם אדומים (איור 13.3). RTGA משמש לאבחון מחלות ויראליות רבות, שגורמיהן (נגיפי שפעת, חצבת, אדמת, דלקת קרציות וכו') עלולים לצבור את תאי הדם האדומים של בעלי חיים שונים.
- קבוצת רופאים מ-WHO הגיעה להודו כדי לזהות חולים עם פוליו ולסייע בביצוע חיסון אוניברסלי נגד פוליו. באחד הכפרים שנסקרו הובא לרופאים ילד בן 6 ממשפחה גדולה שחלתה לפני 5 ימים. הטמפרטורה עלתה לפתע, היה כאב ראש חזק, הקאות חוזרות ונשנות, כאבים בזרועות וברגליים. לאחר בדיקה: חוֹם, חולשה חמורה, תסמיני קרום המוח, על רגל ימיןמוּפחָת טונוס שרירים, רפלקסי הגידים נחלשים בחדות, כף הרגל תלויה למטה. במהלך ניקור תעלת עמוד השדרה, נוזל מוחי זרמו החוצה מתחת לחץ דם גבוה, מספר הלימפוציטים גדל, חיידקים אינם מבודדים. בוצעה אבחנה ראשונית של "צורה משתקת של פוליומיאליטיס". איך הילד יכול להידבק? כיצד מתבצעת מניעה אקטיבית ספציפית של פוליו? האם יש סכנה להדביק ילדים אחרים במשפחה זו, מה צריך לעשות?
תשובה:הילד יכול היה להידבק דרך הצואה-פה דרך מזון, מים, וגם דרך טיפות מוטסות. האמצעי העיקרי למניעת פוליו הוא חיסון בחיסון תרבית חי מ-3 סרוטיפים של זני Sabin, ברוסיה משתמשים בו. חיסון נגד פוליולמתן דרך הפה המיוצר על ידי המכון לפוליומיאליטיס ודלקת מוח נגיפית על שם. מ.פ. צ'ומקובה. החיסון הוא תכשיר תלת-ערנטי של זני Sabin מוחלשים של וירוס פוליו מסוגים 1, 2, 3, המתקבלים מתרבית ראשונית של תאי כליה של קוף ירוק אפריקאי. . חיסונים מתוזמניםילדים בגילאי 3 חודשים עד 6 שנים רגישים לפוליו. חיסונים עם חיסון פוליו פומי מבוצעים עם 2 או 4 טיפות חיסון דרך הפה שלוש פעמים בגיל 3, 4, 5 ו-6 חודשים עם שלושה חיסונים מחדש בגיל 18, 20 חודשים ו-14 שנים. יש לאשפז את הילד החולה, וכל שאר הילדים במשפחה זו חייבים להתחסן בחיסון פוליו חי.
- הרכב ושימוש בחיסון נוזלי נגד שפעת פולימר-תת-יחידה (שפעת)
זהו חיסון מולקולרי. הרכב: Ag פני השטח של וירוס שפעת משלושה תת-סוגים (A/H1N1, A/H3N2, B). יישום: למניעת שפעת
כרטיס בחינה מס' 23
