יַעַד: לשלוט בטכניקת הבימוי של תגובת האגלוטינציה ותגובת המשקעים לאבחון מחלות זיהומיות.

מודול מספר 1מורפולוגיה ופיזיולוגיה של מיקרואורגניזמים. הַדבָּקָה. חֲסִינוּת.

נושא 16:תגובת צבירה. תגובת משקעים.

הרלוונטיות של הנושא.תַחַת חֲסִינוּתמרמזים על חסינות של הגוף לגורמים זיהומיים ולא מדבקים ( מיקרואורגניזמים פתוגניים, חלבונים זרים וכו' חומרים). חומרים אלה נקראים אנטיגנים. חסינות היא מולדת או נרכשת. מִלֵדָה- כאשר נוצרים התקני הגנה של רקמות והומור, הגורמים לחסינות בפני מחלות זיהומיות העוברות בתורשה.

נרכש- מתבצע על ידי המערכת החיסונית של הגוף בצורה של ייצור של נוגדנים או הצטברות של לימפוציטים רגישים. זה מחולק ל טבעי ומלאכותי. לפי מנגנון הפעולה, הוא מחולק ל אקטיבי ופסיבי. בכל התגובות האימונולוגיות, המרכיב העיקרי הוא האנטיגן.

פונקציה עיקרית מערכת החיסון, המורכב מרקמת לימפה, הוא זיהוי של גורמים זרים (אנטיגנים) וניטרול שלהם.

אנטיגנים יכולים להיכנס לגוף דרך כיווני אוויר, מערכת עיכולדרך העור והריריות. כל אנטיגן ממריץ יצירת חומרי חלבון ספציפיים - נוגדנים.

אנטיגניםמחולק לשלם ולנחות (הפטנס). אנטיגנים שלמיםלגרום לתגובה חיסונית מלאה. אנטיגנים פגומיםאינם גורמים באופן עצמאי לתגובה חיסונית, אך לעיתים רוכשים יכולת זו כאשר מצומדים אותם עם נשאי חלבון במשקל מולקולרי גבוה. בנוסף, ישנם אנטיגנים: סמי-הפטנים, פרואנטיגנים, הטרואנטגנים ואיזואנטגנים.

נוגדניםהם אימונוגלובולינים בסרום של בני אדם או בעלי חיים. נוגדנים נוצרים לאחר זיהום, וכתוצאה מחיסון עם חיידקים מוחלשים או מומתים, ריקטסיה, וירוסים, רעלים וחומרים אחרים. נוגדנים- חלבוני אימונוגלובולינים תרכובת כימיתשייכים לגליקופרוטאין. על פי המבנה והתכונות האימונוביולוגיות, אימונוגלובולינים מחולקים ל 5 כיתות: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.

נוגדנים תקיניםנמצא בבני אדם ובעלי חיים שאינם מחוסנים. נוגדנים ספציפייםנוצרים כתוצאה מזיהום או חיסון.

התגובה בין נוגדן לאנטיגן נקראת סרולוגי. תגובות סרולוגיות הן מאוד ספציפיות ומשמשות באבחון של מחלות זיהומיות רבות. ישנן תגובות של אגלוטינציה ומשקעים.

1. תגובת צבירה (RA) מבוסס על אינטראקציה של אנטיגן (אגלוטינוגן) ונוגדן (אגלוטינין), שבו מתרחשת אגלוטינציה ומשקעים של גופים מיקרוביאליים בנוכחות אלקטרוליט. ישנם שינויים שונים בניסוח של תגובת האגלוטינציה.

הערך הגבוה ביותריש:

- צבירה מאקרוסקופית (פרוסה) במבחנות.תרחיף של חיידקים (דיאגנוסטיקום) מתווסף לסרום המטופל, ולאחר שעה בתרמוסטט בטמפרטורה של 37 מעלות, מציינים את הדילול (טיטר) של הסרום בו התרחשה התגובה. תגובת צבירה נחשבת חיובית כאשר נוצר משקעים בתחתית הצינור עם בירור בולט של הסופרנטנט. משקע זה נקרא אגלוטינאט.

על פי אופי האגלוטינאט, מבדילים בין צבירה עדינה (O) וגסת גרגירית (H). כדי לזהות agglutinate עדין, אגלוטינוסקופ משמש. התחשבנות בתוצאות מתחילה בצינורות בקרה. הדילול האחרון של הסרום בו נצפתה אגלוטינציה נחשב לטיטר שלו.

מטרת התגובה: איתור נוגדנים בסרום המטופל.

- מיקרוסקופי (מואץ) ) צבירה משוערת על זכוכית.טיפה של תרבית חיידקים מתווספת לטיפה של סרום חיסון אבחנתי ומערבבת באופן שווה. התגובה ממשיכה בטמפרטורת החדר לאחר 5-10 דקות. לאחר מכן נעשה חשבון. עם תגובה חיובית בטיפת סרום, מציינים הצטברות של חיידקים בצורה של גרגרים או פתיתים. מטרת התגובה: לקבוע את סוג הפתוגן לפי סרום אבחוני ידוע.

- התגובה של hemagglutination עקיפה (פאסיבית) (RNGA).המהות של תגובה זו טמונה בעובדה שאריתרוציטים של ראם מסוגלים לספוג אנטיגנים על פני השטח שלהם. בהשפעת נוגדנים ספציפיים, אריתרוציטים נצמדים זה לזה ומשקעים, ויוצרים hemagglutinate בתחתית. התגובה היא מאוד רגישה וספציפית. RNGA מאפשר לך לזהות את הכמות המינימלית של נוגדנים ואנטיגנים פגומים בעלי אופי פוליסכריד. תגובה זו משמשת לאבחון של מחלות זיהומיות רבות (טיפוס וטיפוס, פארטיפוס, שחפת וכו').

2. תגובת משקעים (RP ) – משקעים של קומפלקס אנטיגן-נוגדנים. ההבדל העיקרי בין RP ל-RA הוא שב-RA משתמשים באנטיגן גופי, בעוד שב-RP אנטיגן הוא חומר קולואידי בעל אופי חלבוני או פוליסכריד. בתגובה זו, האנטיגן נקרא פרסיפיטינוגן, והנוגדנים נקראים פרציפיטינים. התגובה מוכנסת למבחנות על ידי שכבת תמיסת האנטיגן על הסרום החיסוני. עם היחס האופטימלי של אנטיגן ונוגדנים בגבול

פתרונות אלה יוצרים טבעת משקעים. אם משתמשים בתמציות מבושלות ומסוננות של איברים ורקמות כאנטיגן, התגובה נקראת תגובת תרמו משקעים (תגובת אסקולי, המובאת באבחנה גַחֶלֶת, מגפה, טולרמיה וכו').

תגובות משקעים באגר נמצאות בשימוש נרחב: שיטת דיפוזיה פשוטה, שיטת דיפוזיה כפולה.

סוג של משקעים הוא תגובת צפצופים- כדי לקבוע את הפעילות של סרום טוקסואיד או אנטי רעיל. בנוסף, ניתן להשתמש בתגובה זו כדי לקבוע את רעילותם של זנים של Corynebacterium diphtheriae.

יעדים ספציפיים:

· להסביר את תפקידם של אנטיגנים כמעוררי התגובה החיסונית;

· לתאר את המבנה של אנטיגנים, לרבות אנטיגנים של מיקרואורגניזמים;

· לתאר את מנגנון תגובת האגלוטינציה;

· תאר את מנגנון תגובת המשקעים.

להיות מסוגל ל:

· להסביר את תפקידם של אנטיגנים כמעוררי התגובה החיסונית;

תאר את מבנה הנוגדנים (מחלקות שונות של אימונוגלובולינים);

· לנתח את מנגנון האינטראקציה של נוגדנים עם אנטיגנים;

· לפרש את תוצאות תגובת האגלוטינציה;

· לפרש את תוצאות תגובת המשקעים;

· נתח את התוצאות.

שאלות תיאורטיות:

1. הגדרת המושג "אנטיגנים", "נוגדנים".

2. תפקידם של אנטיגנים כמעוררי התגובה החיסונית.

3. מבנה של נוגדנים (מחלקות שונות של אימונוגלובולינים).

4. מנגנון האינטראקציה של נוגדנים עם אנטיגנים.

5. תגובות מערכת החיסון, תפקידן בתגובה החיסונית ואבחון מחלות זיהומיות.

6. מנגנון תגובת האגלוטינציה.

7. מנגנון תגובת המשקעים.

משימות מעשיות המבוצעות בכיתה:

1. הגדרת תגובת אגלוטינציה לאיתור נוגדנים בסרום המטופל.

2. הגדרת תגובת microagglutination על זכוכית עם סרה אבחנתית לזיהוי תרבית חיידקים טהורה.

3. הערכת תוצאות תגובת האגלוטינציה.

4. הגדרת תגובת משקעים לאיתור האנטיגן החיידקי.

5. הערכת תוצאות תגובת המשקעים.

6. הערכת תוצאות התגובה של המגלוטינציה עקיפה.

7. רישום הפרוטוקול.

סִפְרוּת:

1. Pyatkin K.D., Krivoshein Yu.S. מיקרוביולוגיה עם וירולוגיה ואימונולוגיה - קייב: בית ספר גבוה, 1992.- 431p.

2. Vorobyov A.V., Bykov A.S., Pashkov E.P., Rybakova A.M. מיקרוביולוגיה.- מ.: רפואה, 1998.- 336s.

3. מיקרוביולוגיה רפואית /עריכת V.P. פוקרובסקי. - מ.: GEOTAR-MED, 2001. - 768s.

4. Korotyaev A.I., Babichev S.A. מיקרוביולוגיה רפואית, אימונולוגיה ווירולוגיה / ספר לימוד עבור אוניברסיטאות רפואיות, סנט פטרסבורג: "ספרות מיוחדת", 1998.- 592p.

5. Timakov V.D., Levashev V.S., Borisov L.B. מיקרוביולוגיה / ספר לימוד. - מהדורה שנייה, מתוקנת. ולהוסיף. - מ.: רפואה, 1983.- 512s.

6. הערות להרצאה.

ספרות נוספת:

1. טיטוב M.V. מחלות מדבקות.- K., 1995.- 321p.

2. שובלובה א.פ. מחלות זיהומיות. - מ.: רפואה, 1990. - 559s.

תגובת האגלוטינציה מבוססת על אינטראקציה ספציפית של נוגדנים (אגלוטינינים) עם תאים מיקרוביאליים שלמים או אחרים. כתוצאה מאינטראקציה זו, נוצרים חלקיקים-אגלומרטים המשקעים (אגגלוטינים). חיידקים, פרוטוזואה, פטריות, שמרים, ריקטסיה, אריתרוציטים ותאים אחרים, חיים וגם מומתים, יכולים להשתתף בתגובת הצבירה. התגובה מתרחשת בשני שלבים: הראשון הוא השילוב הספציפי של האנטיגן והנוגדן, השני הוא לא ספציפי, כלומר, היווצרות של אגלוטינאט גלוי. משקעים מצטברים מתרחשים בנוכחות אלקטרוליטים, כגון נתרן כלורי. המיקרואורגניזמים באגלוטינאט נשארים בחיים, אך מאבדים את הניידות שלהם.

תגובת האגלוטינציה נמצאת בשימוש נרחב לאבחון סרולוגי של מחלות זיהומיות וקביעת המבנה האנטיגני של חיידקים מבודדים. כדי לבסס את המבנה האנטיגני של פתוגן מבודד מגופו של חולה או נשא, נעשה שימוש בסרום חיסוני ספציפי המתקבל על ידי חיסון בעלי חיים (ארנב, חמור, איל) עם מיקרואורגניזמים מסוימים. זיהוי החיידק מתבצע בתגובת האגלוטינציה על זכוכית עם סרה ספוג או מונורצפטור או במבחנות עם סרה אגלוטינציה ספציפית. סרה נספחת מכילה נוגדנים רק לאנטיגנים ספציפיים לחיידק נתון, וסרה מונורצפטורים מכילה נוגדנים רק לאנטיגן ספציפי אחד של הפתוגן.

סרת מינים מכילים נוגדנים לכל האנטיגנים של חיידק מסוים.

השתייכות התרבות המבודדת של המיקרואורגניזם ל המין הזהנקבע על ידי אגלוטינציה עם סרום ידוע לטיטר הנוגדנים המצוין על התווית של אמפולת הסרום. הטיטר של הנוגדנים בסרום נחשב לדילול האחרון שלו, שבו עדיין נצפית צבירה של תרבית החיידקים המשמשים לחיסון החיה. סרה ספיגה ומונורצפטור משמשת בדרך כלל לא מדוללת בתגובת האגלוטינציה על זכוכית.

בעת קביעת נוכחות של נוגדנים בסרום הדם של המטופל, הוא מדולל בתמיסה איזוטונית של נתרן כלורי, החל מדילול של 1: 50 עד 1: 800 או יותר. השעיה של חיידקים חיים או מומתים מתווספת לכל דילול. תכשירים המכילים חיידקים שנהרגים על ידי חום או פורמלין נקראים דיאגנוסטיקים. אבחונים המתקבלים על ידי חימום תרביות של מיקרואורגניזמים מכילים רק אנטיגנים סומטיים. כאשר משתמשים רק בפורמלין, אנטיגנים דגלים נשמרים גם בחיידקים.

בנוכחות נוגדנים בדם החולה, האבחון שנלקח בתגובה נצמד זה לזה ונוצר משקע (אגלוטינאט) לשתי מבחנות. במקרה זה, התוצאות של תגובת האגלוטינציה נחשבות כחיוביות. בצינור הבקרה, שבו מוסיפים תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית ודיאגנוסטיקום, ההשעיה של החיידקים צריכה להיות הומוגנית ( תְגוּבָה חֲרִיפָהצבירה).

התחשבות בתוצאות של תגובת הצבירה במחלות מסוימות, כגון לפטוספירוזיס, מתבצעת רק במיקרוסקופ בשדה הראייה האפל של המיקרוסקופ (מיקרואגלוטינציה). כדי לבצע אבחנה סרולוגית של מחלה, המחלה האבחנתית נלקחת בחשבון. זה בדרך כלל מתאים לדילול סרום של 1:100 או 1:200.

ניתן לאתר נוגדנים בסרום הדם של החולה באמצעות תגובת האגלוטינציה במקרים של קדחת טיפוס ופארטיפוס (תגובת וידאל), ברוצלוזיס (תגובת רייט), טולרמיה וכו'.
תגובת קסטלאני. עבור חלק מחלות מדבקותאו חיסון עם מיקרואורגניזמים המכילים אנטיגנים קבוצתיים, בסרום הדם, בנוסף לנוגדנים ספציפיים לסוג זה, מופיעים גם נוגדנים קבוצתיים. במקרה זה, מיני חיידקים קשורים יצטברו על ידי הסרה המתקבלת.

קסטלני הציע שיטה לספיחת נוגדנים קבוצתיים מסרה חיסונית, המבוססת על הסרתם בעזרת מיקרואורגניזמים ממינים קרובים שיש להם אנטיגנים קבוצתיים, אך חסרים כאלה ספציפיים. התרבות של מיקרואורגניזמים כאלה, הנוספת לסרום, סופחת נוגדנים מקבוצה לא ספציפית, ולאחר הסרת קומפלקס האנטיגן-נוגדנים על ידי צנטריפוגה, נותרו בסרום רק אימונוגלובולינים ספציפיים. סרה שטופלה בשיטת קסטלני יכולה לשמש בתגובת האגלוטינציה כספציפית ביותר.

תגובות אימונודיאגנוסטיות. תגובות אנטיגן-נוגדנים ותגובות עם רכיבים מסומנים. שימוש לזיהוי מיקרואורגניזמים ואבחון מחלות זיהומיות.

תגובות חיסוניות משמשות במחקרים אבחוניים ואימונולוגיים בחולים ו אנשים בריאים. למטרה זו, הגש בקשה שיטות סרולוגיות (מ-lat. נַסיוֹב - סרום ו לוגואים - דוקטרינה), כלומר, שיטות לחקר נוגדנים ואנטיגנים באמצעות תגובות אנטיגן-נוגדנים שנקבעו בסרום הדם ובנוזלים אחרים, כמו גם ברקמות הגוף.

איתור נוגדנים נגד אנטיגנים של הפתוגן בסרום הדם של החולה מאפשר לאבחן את המחלה. מחקרים סרולוגיים משמשים גם לזיהוי אנטיגנים מיקרוביאליים, חומרים פעילים ביולוגית שונים, קבוצות דם, אנטיגנים של רקמות וגידולים, קומפלקסים של מערכת החיסון, קולטני תאים וכו'.

כאשר מבודד חיידק מחולה, הפתוגן מזוהה על ידי לימודו. תכונות אנטיגניותבאמצעות סרחי אבחון חיסוניים, כלומר סרחי דם של בעלי חיים בעלי חיסון יתר המכילים נוגדנים ספציפיים. זה מה שנקרא זיהוי סרולוגימיקרואורגניזמים.

במיקרוביולוגיה ובאימונולוגיה, נעשה שימוש נרחב באגלוטינציה, משקעים, תגובות נטרול, תגובות המערבות משלים, באמצעות נוגדנים ואנטיגנים מסומנים (רדיואימונולוגי, אנזימים אימונואסאי, שיטות אימונופלואורסצנטיות). התגובות המפורטות שונות בהשפעה הרשומה ובטכניקת ההגדרה, עם זאת, כולן בסיסיות. טנדרים על התגובה של האינטראקציה של אנטיגן עם נוגדן ומשמשים לזיהוי גם נוגדנים וגם אנטיגנים. תגובות חסינות מאופיינות ברגישות ובספציפיות גבוהות.

העקרונות והסכמות של התגובות האימונודיאגנוסטיות העיקריות ניתנים להלן. טכניקה מפורטת להגדרת תגובות מובאת ב. הנחיות מעשיות לאבחון חיסוני.

תגובת אגלוטינציה - RA(מ-lat. אגלוטי- מדינת ישראל- קשר) - תגובה פשוטה שבה נוגדנים קושרים אנטיגנים גופניים (חיידקים, אריתרוציטים או תאים אחרים, חלקיקים בלתי מסיסים עם אנטיגנים נספגים עליהם, כמו גם אגרגטים מקרומולקולריים). זה מתרחש בנוכחות אלקטרוליטים, למשל, כאשר מוסיפים תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית.

משתמשים בגרסאות שונות של תגובת הצבירה: מורחבת, משוערת, עקיפה וכו'. תגובת הצבירה מתבטאת ביצירת פתיתים או משקעים

RA משמש עבור:

קביעת נוגדנים בסרום הדם של חולים, למשל, עם ברוצלוזיס (תגובות רייט, הדלסון), קדחת טיפוס וקדחת פארטיפוס (תגובת Vidal) ומחלות זיהומיות אחרות;

קביעת הפתוגן מבודד מהמטופל;

קביעת קבוצות דם באמצעות נוגדנים חד שבטיים כנגד אלוגני אריתרוציטים.

כדי לקבוע את הנוגדנים של המטופל לָשִׂיםתגובת צבירה מורחבת:להוסיף לדילול של סרום הדם של המטופל אבחון(השעיה של חיידקים מומתים) ואחרי מספר שעות של דגירה ב-37 מעלות צלזיוס, צוין דילול הסרום הגבוה ביותר (טיטר סרום), שבו התרחשה אגלוטינציה, כלומר נוצר משקעים.

אופי וקצב האגלוטינציה תלויים בסוג האנטיגן והנוגדנים. דוגמה לכך היא אינטראקציה של אבחונים (אנטיגנים O ו-R) עם נוגדנים ספציפיים. תגובת צבירה עם O-diagnosticum(חיידקים נהרגים על ידי חום, שומרים על יציב תרמי O אנטיגן)מתרחשת בצורה של צבירה עדינה. תגובת האגלוטינציה עם H-diagnosticum (חיידקים שנהרגים על ידי פורמלין, שומרים על האנטיגן H-flagellar הבלתי רגיש לחום) היא בעלת גרגיר גס ומתמשכת מהר יותר.

אם יש צורך לקבוע את הפתוגן מבודד מהמטופל, לשים תגובת צבירה מכוונת,באמצעות נוגדנים אבחנתיים (סרום מאגד), כלומר, מתבצעת סרוטיפינג של הפתוגן. תגובה משוערת מתבצעת על שקופית זכוכית. לטיפה של סרום אגלוטינציה אבחנתי בדילול של 1:10 או 1:20 הוסף תרבית טהורה של הפתוגן שבודד מהמטופל. פקד ממוקם בקרבת מקום: במקום סרום, מורחים טיפה של תמיסת נתרן כלורי. כאשר מופיע משקעים פלוקולנטיים בטיפה עם סרום וחיידקים, הם שמים תגובת צבירה נרחבתבמבחנות עם דילולים הולכים וגדלים של סרום מצטבר, שאליהם מוסיפים 2-3 טיפות של תרחיף הפתוגן. הצבירה נלקחת בחשבון לפי כמות המשקעים ומידת ההבהרה של הנוזל. התגובה נחשבת חיובית אם נצפתה צבירה בדילול קרוב לטיטר של הסרום האבחנתי. במקביל, נלקחות בחשבון בקרות: סרום מדולל בתמיסת נתרן כלוריד איזוטונית צריך להיות שקוף, תרחיף של חיידקים באותה תמיסה צריך להיות עכור באופן אחיד, ללא משקעים.

חיידקים קשורים שונים יכולים להיות צבועים על ידי אותו נסיוב אגלוטיני אבחנתי, מה שמקשה על זיהוים. לכן, תהנו סרה צבירה נספג,שמהם הוסרו נוגדנים צולבים על ידי ספיחה על ידי החיידקים הקשורים אליהם. בסמים כאלה נשארים נוגדנים ספציפיים רק לחיידק זה. הכנת סראים אבחנתיים אבחנתיים מונורצפטורים בדרך זו הוצעה על ידי A. Castellani (1902).

התגובה של hemagglutination עקיפה (פאסיבית). (RNHA, RPHA) מבוסס על שימוש באריתרוציטים עם אנטיגנים או נוגדנים הנספגים על פני השטח, שהאינטראקציה שלהם עם הנוגדנים או האנטיגנים התואמים של סרום הדם של הכדור גורמת לאריתרוציטים להיצמד זה לזה וליפול לתחתית של המבחנה או התא Vצורת משקע מסולסל (איור 13.2). עם תגובה שלילית, אריתרוציטים מתיישבים בצורה של "כפתור". בדרך כלל, נוגדנים מתגלים ב-RNHA באמצעות אבחון אריתרוציטים אנטיגני, שהוא אריתרוציטים עם ספיגה עַלהם אנטיגנים. לעיתים אנו משתמשים באבחון אריתרוציטים נוגדנים, עליהם נספגים נוגדנים. לדוגמה, ניתן לזהות בוטולינום טוקסין על ידי הוספת נוגדן אריתרוציטים בוטולינום דיאגנוסטיקום (תגובה זו נקראת תגובה הפוכה להמגלוטינציה עקיפה- RONGA). RNHA משמש לאבחון מחלות זיהומיות, לקבוע הורמון גונדוטרופי Vשתן כאשר נוצר הריון, כדי לזהות רגישות יתרל תרופות, הורמונים ובמקרים אחרים.

תגובת קרישה . תאי פתוגן נקבעים באמצעות סטפילוקוקוס, מטופלים מראש בסרום אבחון חיסוני. חלבון המכיל סטפילוקוקוס א,בעל זיקה ל Fc -פרגמנט של אימונוגלובולינים, סופחים נוגדנים אנטי-מיקרוביאליים לא ספציפיים, אשר מקיימים אינטראקציה עם מרכזים פעילים עם החיידקים המתאימים מבודדים מהמטופלים. כתוצאה מהקרישה נוצרים פתיתים המורכבים מסטפילוקוקים, נוגדנים סרום אבחנתיים והחיידק הנקבע.

תגובה לעיכוב ההמגלוטינציה (RTGA) מבוסס על חסימה, דיכוי אנטיגנים של וירוסים על ידי נוגדנים של סרום חיסוני, כתוצאה מכך וירוסים מאבדים את יכולתם לצבור תאי דם אדומים (איור 13.3). RTHA משמש לאבחון מחלות ויראליות רבות, שגורמיהן (שפעת, חצבת, אדמת, דלקת מוח בקרציות וכו') עלולים לצבור את אריתרוציטים של בעלי חיים שונים.

תגובת צבירה לקביעת קבוצות דם משמש לביסוס מערכת ה-ABO (ראה סעיף 10.1.4.1) באמצעות אגלוטינציה של אריתרוציטים עם נוגדנים של סרום חיסוני נגד אנטיגנים של קבוצות דם A (II), B (III). הפקדים הם: סרום נטול נוגדנים, כלומר סרום AB (GU)קבוצות דם; אנטיגנים הכלולים באריתרוציטים של קבוצות A (II), B (III). הבקרה השלילית אינה מכילה אנטיגנים, כלומר משתמשים באריתרוציטים מקבוצה 0 (I).

IN תגובות צבירה לקביעת גורם Rh(ראה סעיף 10.1.4.1) השתמש בסרה אנטי-Rh (לפחות שתי סדרות שונות). בנוכחות אנטיגן Rh על הממברנה של אריתרוציטים שנחקרו, מתרחשת אגלוטינציה של תאים אלה. אריתרוציטים סטנדרטיים Rh חיוביים ו-Rh שליליים מכל קבוצות הדם משמשים כביקורת.

תגובת אגלוטינציה לקביעת נוגדנים נגד רזוס ( תגובה עקיפהקומבס)משמש בחולים עם המוליזה תוך וסקולרית. בחלק מהחולים הללו נמצאים נוגדנים נגד רזוס שאינם שלמים, חד ערכיים. הם מקיימים אינטראקציה ספציפית עם אריתרוציטים חיוביים ל-Rh, אך אינם גורמים לאגלוטינציה שלהם. נוכחותם של נוגדנים לא שלמים כאלה נקבעת בתגובת Coombs העקיפה. לשם כך מוסיפים למערכת הנוגדנים נגד Rh + אריתרוציטים חיוביים ל-Rh סרום אנטיגלובולינים (נוגדנים נגד אימונוגלובולינים אנושיים, הגורם לאגלוטינציה של אריתרוציטים (איור 13.4). באמצעות תגובת Coombs, מאובחנים מצבים פתולוגיים הקשורים לתמוגה תוך-וסקולרית של אריתרוציטים ממקור חיסוני, למשל, מחלה המוליטית של היילוד: אריתרוציטים של עובר חיובי ל-Rh מתחברים עם נוגדנים לא שלמים לגורם Rh שמסתובב בדם, שחצו השליה מאם Rh שלילית.

תגובות משקעים

תגובת משקעים - RP (מLa T. praeci-pito- משקעים,) הוא היווצרות ומשקעים של קומפלקס של אנטיגן מולקולרי מסיס עם נוגדנים בצורה של עכירות, הנקרא לְזַרֵז.הוא נוצר על ידי ערבוב אנטיגנים ונוגדנים בכמויות שוות; עודף של אחד מהם מפחית את רמת היווצרות התסביך החיסוני.

תגובות משקעים לשים במבחנות (תגובת משקעים טבעת),בג'לים, מדיות תזונתיות וכו'. מגוון תגובת המשקעים בג'ל חצי נוזלי של אגר או אגרוז נמצאים בשימוש נרחב: אימונודיפוזיה כפולה לפי Ouchterlony. אימונודיפוזיה רדיאלית, אימונואלקטרופורזהוכו.

תגובת משקעים טבעת . התגובה מתבצעת בצינורות משקעים צרים עם סרום חיסוני, עליהם מונח שכבות אנטיגן מסיס. עם יחס אופטימלי של אנטיגן ונוגדנים, נוצרת טבעת משקעים אטומה בגבול שתי התמיסות הללו (איור 13.5). עודף של אנטיגן אינו משפיע על התוצאה של תגובת משקעים הטבעת עקב דיפוזיה הדרגתית של ריאגנטים לגבול הנוזל. אם תמציות מימיות מבושלות ומסוננות של איברים או רקמות משמשות כאנטיגנים בתגובת משקעים הטבעת, אזי תגובה כזו נקראת תגובת תרמו משקעים-iii (תגובת אסקולי,עם אנתרקס /

תגובת חיסונית כפולה של Oukhteruni . כדי להגדיר את התגובה, נמס אגר ג'ליוצקים שכבה דקה על צלחת זכוכית ולאחר התקשותה חותכים בה חורים בגודל 2-3 מ"מ. אנטיגנים וסרה חיסונית ממוקמים בנפרד בבארות אלו, המתפזרות זו לזו. בנקודת המפגש בפרופורציות שוות, הם יוצרים משקעים בצורת פס לבן. במערכות מרובות רכיבים מופיעים מספר שורות של משקעים בין בארות עם אנטיגנים שונים ונוגדנים בסרום; עבור אנטיגנים זהים, קווי המשקע מתמזגים; עבור אלה שאינם זהים, הם מצטלבים (איור 13.6).

תגובה חיסונית רדיאלית . הסרום החיסוני עם ג'ל אגר מותך נשפך באופן שווה על הכוס. לאחר התמצקות בג'ל, יוצרים בארות שאליהן מכניסים את האנטיגן דילולים שונים. האנטיגן, המתפזר לתוך הג'ל, יוצר אזורי משקעים טבעתיים סביב הבארות עם הנוגדנים (איור 13.7). קוטר טבעת המשקעים פרופורציונלי לריכוז האנטיגן. התגובה משמשת לקביעת רמות הדם של אימונוגלובולינים מקבוצות שונות, מרכיבי מערכת המשלים וכו'.

אימונואלקטרופורזה- שילוב של שיטת האלקטרופורזה ומשקע אימונו: תערובת אנטיגנים מוכנסת לתוך בארות הג'ל ומופרדת בג'ל באמצעות אלקטרופורזה. לאחר מכן, במקביל לאזורי האלקטרופורזה, מוכנס לחריץ סרום חיסון, שהנוגדנים שלו, מתפזרים לתוך הג'ל, נוצרים בנקודת המפגש עם האנטיגן של קו המשקעים.

תגובת צפצופים(לפי רמון) (מ-lat. פלוקוס-פתיתי צמר) - הופעת אטימות או מסה פלקולנטית (אימונו-משקעים) במבחנה במהלך תגובה של רעלן-אנטי-טוקסין או אנטוקסין-אנטי-טוקסין. הוא משמש לקביעת הפעילות של סרום או טוקסואיד נוגד רעלים.

חֲסִין אלקטרון מיקרוסקופי - מיקרוסקופ אלקטרוני של חיידקים, לעתים קרובות יותר וירוסים, מטופלים בנוגדנים מתאימים. וירוסים המטופלים בסרום חיסוני יוצרים אגרגטים חיסוניים (מיקרו-משקעים). "קורולה" של נוגדנים נוצרת סביב הווירונים, בניגוד לחומצה פוספוטונגסטית או תכשירים אחרים צפופים אלקטרונית אופטית.

תגובות הכוללות משלים

תגובות הכוללות משליםמבוסס על הפעלת המשלים על ידי קומפלקס אנטיגן-נוגדנים (תגובת קיבוע משלים, המוליזה רדיאלית וכו').

תגובת קיבוע משלים (RSK) טמון בעובדה שכאשר מתואמים זה לזה, אנטיגנים ונוגדנים יוצרים קומפלקס חיסוני, אשר באמצעותו Fc -פרגמנט של נוגדנים מצטרף למשלים (C), כלומר, קישור משלים מתרחש עם קומפלקס אנטיגן-נוגדנים. אם לא נוצר קומפלקס אנטיגן-נוגדנים, אזי המשלים נשאר חופשי (איור 13.8). RSK מתבצע בשני שלבים: שלב 1 - דגירה של תערובת המכילה שלושה מרכיבים של האנטיגן + נוגדן + משלים; שלב 2 (אינדיקטור) - זיהוי של משלים חופשי בתערובת על ידי הוספת לו מערכת המוליטית המורכבת מאריתרוציטים של כבשים וסרום המוליטי המכיל נוגדנים אליהם. בשלב הראשון של התגובה, במהלך היווצרות קומפלקס אנטיגן-נוגדנים, מתרחשת קישור משלים, ולאחר מכן בשלב השני, המוליזה של אריתרוציטים הרגישים על ידי נוגדנים לא תתרחש; התגובה חיובית. אם האנטיגן והנוגדן אינם מתאימים זה לזה (אין אנטיגן או נוגדן בדגימת הבדיקה), המשלים נשאר חופשי ובשלב ה-2 יצטרף לקומפלקס הנוגדנים אריתרוציטים-אנטי-אריתרוציטים, ויגרום להמוליזה; התגובה שלילית.

RSK משמש לאבחון מחלות זיהומיות רבות, בפרט עגבת (תגובת ווסרמן).

התגובה של המוליזה רדיאלית (RRH ) מונח בבארות של ג'ל אגר המכילים אריתרוציטים של ראם ומשלים. לאחר הוספת סרום המוליטי (נוגדנים נגד אריתרוציטים של ראם) לבורות הג'ל, נוצר סביבם אזור המוליזה (כתוצאה מפיזור רדיאלי של נוגדנים). לפיכך, ניתן לקבוע את הפעילות של סרום משלים והמוליטי, כמו גם נוגדנים בסרום הדם של חולי שפעת, אדמת, דלקת מוח קרציות. לשם כך, האנטיגנים המתאימים של הנגיף נספגים על אריתרוציטים, וסרום הדם של המטופל מתווסף לבורות הג'ל המכיל אריתרוציטים אלה. נוגדנים אנטי-ויראליים מקיימים אינטראקציה עם אנטיגנים ויראליים הנספגים על אריתרוציטים לאחר מכן

רכיבים משלימים מתחברים לקומפלקס הזה, וגורמים להמוליזה.

תגובת הידבקות חיסונית (RIP ) מבוסס על הפעלת מערכת המשלים על ידי אנטיגנים גופניים (חיידקים, וירוסים) המטופלים בסרום חיסוני. כתוצאה מכך, נוצר רכיב משלים שלישי משופעל (C3b) הנצמד לאנטיגן הגופי כחלק מהקומפלקס החיסוני. על אריתרוציטים, טסיות דם, מקרופאגים ישנם קולטנים ל-C3b, שבגללם, כאשר תאים אלו מעורבבים עם קומפלקסים חיסוניים הנושאים C3b, הם מתאחדים ומתאגרפים.

תגובת נטרול

נוגדנים חיסוניים בסרום מסוגלים לנטרל את ההשפעה המזיקה של חיידקים או רעלנים שלהם על תאים ורקמות רגישים, הקשורה לחסימה של אנטיגנים מיקרוביאליים על ידי נוגדנים, כלומר, שלהם. נִטרוּל. תגובת נטרול(RN) מתבצעת על ידי החדרת תערובת אנטיגן-נוגדנים לבעלי חיים או לאובייקטי בדיקה רגישים (תרבית תאים, עוברים). בהיעדר ההשפעה המזיקה של מיקרואורגניזמים או אנטיגנים שלהם, רעלנים בבעלי חיים וחפצי ניסוי, הם מדברים על ההשפעה המנטרלת של סרום חיסון, ולכן, על הספציפיות של האינטראקציה של קומפלקס אנטיגן-נוגדנים (איור 13.9).

תגובה אימונופלואורסצנטית - RIF (שיטת קונס)

ישנם שלושה זנים עיקריים של השיטה: ישיר, עקיף (איור 13.10), עם השלמה. תגובת קונס היא שיטת אבחון מהירה לגילוי אנטיגנים מיקרוביאליים או גילוי נוגדנים.

שיטת RIF ישירה מבוסס על העובדה שאנטיגנים או חיידקים של רקמות המטופלים בסרה חיסונית עם נוגדנים המסומנים בפלואורכרומים מסוגלים לזהור בקרני ה-UV של מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

חיידקים במריחה, המטופלים בסרום זוהר כזה, זוהרים לאורך פריפריית התא בצורה של גבול ירוק.

שיטת RIF עקיפה הוא לזהות את קומפלקס האנטיגן-נוגדנים באמצעות סרום אנטיגלובולין (נוגדן) המסומן ב-fluorochrome. כדי לעשות זאת, מריחות מתרחיף של חיידקים מטופלים בנוגדנים של סרום אבחון אנטי-מיקרוביאלי של ארנב. לאחר מכן נשטפים הנוגדנים שאינם קשורים לאנטיגנים מיקרוביאליים, והנוגדנים שנותרו על החיידקים מתגלים על ידי טיפול במריחה בסרום אנטיגלובולין (אנטי-ארנב) המסומן בפלואורוכרומים. כתוצאה מכך נוצר חיידק מורכב + נוגדנים לארנבים אנטי-מיקרוביאליים + נוגדנים נגד ארנבים המסומנים בפלואורכרום. קומפלקס זה נצפה במיקרוסקופ פלואורסצנטי, כמו בשיטה הישירה.

שיטת ELISA, או ניתוח (ELISA)

אליסה -זיהוי של אנטיגנים באמצעות נוגדנים תואמים שלהם המצומדים עם אנזים תיוג (חזרת פרוקסידאז, בטא-גלקטוזידאז או פוספטאז אלקליין). לאחר שילוב האנטיגן עם הסרה החיסונית המסומנת באנזים, מוסיפים לתערובת את המצע/כרומוגן. המצע מבוקע על ידי האנזים, וצבע תוצר התגובה משתנה - עוצמת הצבע עומדת ביחס ישר למספר מולקולות האנטיגן והנוגדנים הקשורים.

ELISA שלב מוצק - הגרסה הנפוצה ביותר של הבדיקה האימונולוגית, כאשר אחד ממרכיבי התגובה החיסונית (אנטיגן או נוגדנים) נספג על נשא מוצק, למשל, בארות של לוחות פוליסטירן

בעת קביעת נוגדנים, מוסיפים ברצף את סרום הדם של המטופל, סרום האנטיגלובולין המסומן באנזים והמצע (כרומוגן) לאנזים לבורות הצלחות עם האנטיגן הנספג.

בכל פעם לאחר הוספת הרכיב הבא, ריאגנטים לא קשורים מוסרים מהבארות על ידי שטיפה יסודית. בְּ תוצאה חיוביתצבע תמיסת הכרומוגן משתנה. נשא בפאזה מוצקה יכול להיות רגיש לא רק עם אנטיגן, אלא גם עם נוגדנים. לאחר מכן, האנטיגן הרצוי מוחדר לבארות עם נוגדנים נספגים, מוסיפים את הסרום החיסוני נגד האנטיגן המסומן באנזים, ולאחר מכן מוסיפים את הסובסטרט לאנזים.

ELISA תחרותי . אנטיגן המטרה והאנטיגן המסומן באנזים מתחרים זה בזה על הקישור של כמות מוגבלת של נוגדנים בסרום חיסוני. בדיקה נוספת היא הנוגדנים שאתה מחפש

ונוגדנים מסומנים מתחרים זה בזה על אנטיגנים.

שיטה רדיואימונולוגית, או ניתוח (RIA)

שיטה רגישה ביותר המבוססת על תגובת אנטיגן-נוגדן באמצעות אנטיגנים או נוגדנים המסומנים ברדיונוקליד (125 J, 14 C, 3 H, 51 Cr וכו'). לאחר האינטראקציה ביניהם, מופרד הקומפלקס החיסוני הרדיואקטיבי שנוצר ורדיואקטיביות שלו נקבעת במונה המתאים (קרינת בטא או גמא):

עוצמת הקרינה עומדת ביחס ישר למספר מולקולות האנטיגן והנוגדנים הקשורים.

בְּ גרסת שלב מוצק של RIA אחד ממרכיבי התגובה (אנטיגן או נוגדנים) נספג על נשא מוצק, למשל, בארות של מיקרו-מערכי פוליסטירן. גרסה נוספת של השיטה היא RIA תחרותי.אנטיגן המטרה והאנטיגן המסומן לרדיונוקלידים מתחרים זה בזה על קשירת כמות מוגבלת של נוגדנים בסרום חיסוני. אפשרות זו משמשת לקביעת כמות האנטיגן בחומר הבדיקה.

RIA משמש לאיתור אנטיגנים מיקרוביאליים, קביעת הורמונים, אנזימים, חומרים רפואייםואימונוגלובולינים, כמו גם חומרים אחרים הכלולים בחומר הבדיקה בריכוזים קלים - 10 ~ | 0 -I0 ~ 12 גרם / ליטר. השיטה מציגה מפגע סביבתי מסוים.

אימונובלוטינג

אימונובלוטינג (IB)- שיטה רגישה ביותר המבוססת על שילוב של אלקטרופורזה ו-ELISA או RIA.

האנטיגן מבודד באמצעות אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד, ואז הוא מועבר (כתמים - מהאנגלית. כֶּתֶם, נקודה) מהג'ל על גבי נייר מופעל או קרום ניטרוצלולוזה ופותח על ידי ELISA. חברות מייצרות רצועות כאלה עם "כתמים"

אנטיגנים. על רצועות אלו מורחים את הסרום של המטופל. לאחר מכן, לאחר הדגירה, המטופל נשטף מנוגדנים לא קשורים של המטופל ומורח נסיוב נגד אימונוגלובולינים אנושיים, המסומנים באנזים. האנטיגן + נוגדן המורכב של המטופל + נוגדן נגד Ig אנושי שנוצר על הרצועה מתגלה על ידי הוספת מצע / כרומוגן שמשנה את צבעו בפעולת האנזים (איור 13.12).

IB משמש כשיטת אבחון לזיהום HIV וכו'.

אגלוטינציה נקראת אגלוטינציה של חיידקים כתוצאה מאינטראקציה איתם של AT ספציפי. RA דורש שלושה מרכיבים: 1) AG (אגלוטינוגן); 2) AT (אגלוטינין); 3) תמיסת אלקטרוליט (תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית). רק אנטיגנים גופניים (חיידקים, אריתרוציטים, חלקיקי לטקס עמוסים באנטיגן) לוקחים חלק בתגובת האגלוטינציה.

תגובת צבירה על זכוכית. טיפה של סרום אבחנתי (דילול סרום 1:10 - 1:20) מונחת על שקף זכוכית ללא שומן עם פיפטה. תרבית טהורה של המיקרואורגניזם הנחקר נלקחת מפני השטח של האגר האלכסוני עם לולאה בקטריולוגית, מועברת לטיפה של סרום ומערבבת. תוצאת התגובה נלקחת בחשבון בעין בלתי מזוינת לאחר 3-5 דקות. עם תגובה חיובית בטיפת סרום, ניתן להבחין בהופעת פתיתים (גדולים או קטנים), הנראים בבירור על רקע כהה כאשר מנערים את שקף הזכוכית. במקרה של תגובה שלילית, הנוזל נשאר עכור באופן אחיד.

תגובת צבירה במבחנות. הוסף 1 מ"ל של מי מלח פיזיולוגי למספר מבחנות. הוסף נפח שווה של סרום הדם לבדיקה למבחנה הראשונה. מכינים דילולים רציפים של סרום (טיטרציה בסרום), ולאחר מכן מוסיפים 2 טיפות תרחיף של חיידקים מומתים (דיאגנוסטיקום) לכל מבחנה. הצינורות ממוקמים במשך שעתיים בתרמוסטט ב-37 מעלות צלזיוס. התגובה ממשיכה עם היווצרות של פתיתים קטנים, בלתי נראים לעין בלתי מזוינת, ולכן התוצאות נרשמות תחת עלייה קלה במכשיר מיוחד - אגלוטינוסקופ. עוצמת הצבירה נלקחת בחשבון לפי מערכת "ארבעת הפלוסים": צבירה מלאה - 4+, צבירה חלקית - 3+ או 2+, תוצאה בספק - +. הדילול האחרון שבו נצפית אגלוטינציה ב-2+ נלקח כטיטר הנוגדנים בסרום הבדיקה.

תגובת האגלוטינציה במבחנות (תגובת אגלוטינציה מורחבת) מתבצעת כדי לקבוע את הטיטר של נוגדנים לפתוגנים קדחת טיפוסופרטיפוס (תגובת וידאל), ברוצלוזיס (תגובת רייט), טיפוס (תגובת וויגל).

Agglutination (מלטינית agglutinatio - bonding) - התקשרות (חיבור) של חלקיקים גופניים נושאי אנטיגן (תאים שלמים, חלקיקי לטקס וכו') עם מולקולות נוגדנים ספציפיות בנוכחות אלקטרוליטים, המסתיימת ביצירת פתיתים או משקעים (אגלוטינאט). ) גלוי לעין בלתי מזוינת. אופי המשקע תלוי באופי האנטיגן: חיידקי הדגל נותנים משקע גדול של פתיתים, דגלים וחסרי קפסולה - עדינים, קפסוליים - חוטיים. להבחין באגלוטינציה ישירה, שבה האינטראקציה עם נוגדנים ספציפיים מעורבת ישירות אנטיגנים משלו של חיידק או כל תא אחר, כגון אריתרוציטים; ועקיפים, או פסיביים, שבהם תאי חיידקים או אריתרוציטים, או חלקיקי לטקס הם נשאים לא משלהם, אלא של אנטיגנים (או נוגדנים) זרים הנספגים עליהם כדי לזהות נוגדנים (או אנטיגנים) ספציפיים להם. תגובת האגלוטינציה כוללת בעיקר נוגדנים השייכים למחלקות IgG ו-IgM. זה מתקדם בשני שלבים: ראשית, יש אינטראקציה ספציפית של המרכז הפעיל של הנוגדנים עם הקובע האנטיגן, שלב זה יכול להתרחש בהיעדר אלקטרוליטים ואינו מלווה בשינויים גלויים במערכת המגיבה. לשלב השני - היווצרות של agglutinate - יש צורך בנוכחות אלקטרוליטים, אשר מפחיתים מטען חשמלימתחם אנטיגן + נוגדן ומאיץ את תהליך ההתקשרות שלהם. שלב זה מסתיים עם היווצרות של agglutinate.

תגובות צבירה ממוקמות על זכוכית או על לוחות קרטון חלקים, או בצינורות צבירה סטריליים. תגובות צבירה (ישירות ופסיביות) על זכוכית משמשות בדרך כלל כ שיטה מואצתזיהוי של נוגדנים ספציפיים בסרום של החולה (לדוגמה, עם ברוצלוזיס) או לזיהוי סרולוגי של הפתוגן. במקרה האחרון, משתמשים בדרך כלל בסרה אבחנתית מטוהרת היטב (נספחת), המכילה רק נוגדנים מונורצפטורים או קבוצתם לאנטיגנים שונים. היתרון הבלתי מעורער של תגובת האגלוטינציה על זכוכית הוא פשטות הניסוח שלה והעובדה שהיא אורכת מספר דקות ואפילו שניות, שכן שני הרכיבים משמשים בה בצורה מרוכזת. עם זאת, יש לו רק ערך איכותי והוא פחות רגיש מהמבחנה. בדיקת צבירה מורחבת במבחנות נותנת תוצאות מדויקות יותר, מכיוון שהיא מאפשרת לקבוע את התוכן הכמותי של נוגדנים בסרום (להגדיר את הטיטר שלו) ובמידת הצורך לרשום את העובדה של עלייה בטיטר הנוגדנים, שהיא אבחנתית ערך. כדי להגדיר את התגובה בצינורות צבירה, הוסף בצורה מסוימת מדולל ב-0.85% תמיסת NaClסרום ונפח שווה (בדרך כלל 0.5 מ"ל) של תרחיף של אבחנה רגילה (או תרבית בדיקה) המכילה מיליארד חיידקים ב-1 מ"ל. התחשבנות בתוצאות תגובת האגלוטינציה מתבצעת מקדים לאחר שעתיים של דגירה של הצינורות ב-37 מעלות צלזיוס ולבסוף לאחר 20-24 שעות לפי שני קריטריונים: נוכחות וגודל המשקע ומידת השקיפות של המשקע. סופרנטנט. ההערכה מתבצעת על פי שיטת הארבעה-צלבים. התגובה מלווה בהכרח בשליטה בסרום ובאנטיגן. באותם מקרים בהם נעשה שימוש בבדיקת אגלוטינציה מפורטת במבחנה לזיהוי סרולוגי של הפתוגן, יש לה ערך אבחנתי אם התגובה מוערכת כחיובית כאשר הסרום האבחנתי מדולל בחצי מהטיטר שלו לפחות.

יש לקחת בחשבון שכאשר מערבבים תמיסות של אנטיגנים ונוגדנים הומולוגיים, לא תמיד נצפים ביטויים גלויים של תגובת האגלוטינציה. משקע נוצר רק ביחסים אופטימליים מסוימים של שני מרכיבי התגובה. מחוץ לגבולות אלה, עם עודף משמעותי של אנטיגן או נוגדנים, לא נצפית תגובה. תופעה זו נקראת "תופעת הפרוזון". הוא נצפה הן בתגובת הצבירה והן בתגובת המשקעים. הופעת פרוזון בתגובות חיסוניות מוסברת על ידי העובדה שהאנטיגנים המעורבים בהם הם, ככלל, polydeterminant, והמולקולות נוגדני IgGיש שני מרכזים פעילים. עם עודף של נוגדנים, פני השטח של כל חלקיק אנטיגן מכוסים במולקולות נוגדנים כך שלא נשארות קבוצות דטרמיננטיות חופשיות, כך שהמרכז הפעיל השני והלא קשור של נוגדנים לא יכול לקיים אינטראקציה עם חלקיק אנטיגני אחר ולקשר אותם זה לזה. היווצרות של אגלוטינאט או משקעים גלויים מדוכאת גם עם עודף של אנטיגן, כאשר אין אתר פעיל פנוי אחד של נוגדנים, ולכן לא ניתן עוד להגדיל את קומפלקס האנטיגן + נוגדן + אנטיגן.

אפשרויות לתגובות אגלוטינציה מואצות. תְגוּבָה המאגלוטינציה פסיביתוהגרסאות שלו

תגובת האגלוטינציה הקלאסית כוללת שימוש באנטיגנים גופניים. עם זאת, עשויים להיות מעורבים גם אנטיגנים מסיסים. כדי לאפשר זאת, אנטיגנים כאלה נספגים על גבי חלקיקים אינרטיים מבחינה אימונולוגית. כנשא, ניתן להשתמש בחלקיקים של לטקס או בנטוניט, אולם כיום משתמשים לרוב באדמית של בעלי חיים או בני אדם, ומשפרים את תכונות הספיגה שלהם על ידי טיפול בתמיסות של טאנין, פורמלין או בנזידין. אריתרוציטים הסופחים אנטיגן על עצמם נקראים רגישים על ידי אנטיגן זה, ו תגובה חיסונית, שבה הם משתתפים, - תגובה של המאגלוטינציה עקיפה או פסיבית (RNHA, או RPHA), שכן אריתרוציטים משתתפים בה באופן פסיבי.

RPGA ממוקם בפלטות פוליסטירן מיוחדות עם חורים בעלי תחתית חצי כדורית. כאשר משתמשים בו לאבחון סרולוגי, מכינים דילולים פי שניים בבארות אלה ב מי מלח פיזיולוגישל הסרום הנחקר, ולאחר מכן מתווספת לו תרחיף של אריתרוציטים רגישים כערכת אבחון. התוצאות מתועדות לאחר שעתיים של דגירה ב-37 מעלות צלזיוס לפי מערכת הארבעה. עם תגובה חיובית, אריתרוציטים צמודים מתיישבים בתחתית החור ומכסים אותו באופן שווה בצורה של מטריה הפוכה. עם תגובה שלילית, האריתרוציטים גם מתיישבים, הנוזל הופך שקוף, המשקע נראה כמו "דיסק" קטן במרכז החור. טיטר סרום ב-RPHA נחשב לדילול האחרון שלו, שעדיין נותן המגלוטינציה בולטת ללא סימנים משמעותייםבעל דיסק.

RPHA יכול לשמש גם כשיטה מואצת לאבחון בקטריולוגי לאיתור חיידקים לא ידועים, וירוסים, רעלנים, כגון פתוגני מגיפה, סטפילוקוקלי אנרוטוקסינים ועוד, ישירות בחומר הבדיקה נוגדנים - נוגדן erythrocyte diagnosticum. אם חומר הבדיקה מכיל כמות מספקת של אנטיגן ידוע, TPHA יהיה חיובי.

האפשרויות לשימוש ב-RPGA הן: תגובת נטרול אנטיגן (RNAg), תגובת נטרול נוגדנים (RNAt), תגובת עיכוב hemagglutination פסיבית (RPHA). אנטיגנים ונוגדנים אריתרוציטים אבחונים משמשים לתגובות אלה. ניתן להשתמש בשתי תגובות חד-כיווניות השולטות הדדית בו-זמנית, לדוגמה, RPHA עם אבחון אנטיגני ו-RNAg עם אבחון אריתרוציטים נוגדנים.

תגובת נטרול הנוגדנים (RNAt) מורכבת מכך שתרחיף המכיל את האנטיגן הרצוי מעורבב עם סרום חיסוני ספציפי המכיל נוגדנים ידועים בנפחים מתאימים ומודגרים ב-37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים. לאחר מכן, נוסף אבחון אריתרוציטים אנטיגני. את התערובת מנערים ומשאירים בטמפרטורת החדר. התוצאות נלקחות בחשבון לאחר 3-4 שעות ולבסוף - לאחר 18-24 שעות, אם יש אנטיגן בחומר הנבדק הוא יקשור נוגדנים (ינטרל אותם), ולכן לא תתרחש המגלוטינציה.

על פי אותו עיקרון מתבצעת תגובת נטרול אנטיגן (RNAg). רק במקרה זה, מתגלים נוגדנים בחומר הבדיקה. אנטיגן ספציפי המתווסף לחומר בדיקה שכזה ייקשר לנוגדנים הכלולים בו, כלומר האנטיגן ינוטרל על ידי נוגדנים, ולכן לא תתרחש המגלוטינציה בעת הוספת הנוגדן אריתרוציט diagnosticum.

תגובת קרישה. זוהי אחת האפשרויות לתגובת צבירה מואצת של נוגדנים-נשאים בתיווך תאים פסיבית על זכוכית. תגובה זו מבוססת על נכס ייחודי Staphylococcus aureus, שיש לו חלבון A בדופן התא שלו, נקשרים לשברי Fc של IgG ו-IgM. יחד עם זאת, המרכזים הפעילים של נוגדנים נשארים חופשיים ויכולים לקיים אינטראקציה עם דטרמיננטים ספציפיים של אנטיגנים. טיפה של תרחיף 2% של סטפילוקוקוס רגיש עם הנוגדנים המתאימים מונחת על שקופית זכוכית, וטיפה מתרחיף של החיידקים הנחקרים מתווספת. כאשר האנטיגן תואם לנוגדנים, לאחר 30-60 שניות, מתרחשת אגלוטינציה ברורה של סטפילוקוקים עמוסים בנוגדנים.

ריאקציית לטקס (LAH). נושאי הנוגדנים במערכת אבחון זו הם חלקיקים סטנדרטיים קטנים של לטקס. התגובה מתבצעת בשיטת המיקרו בבארות על זכוכית. התנאי העיקרי להגדרה מוצלחת של PAH הוא הקפדה על היחסים הכמותיים של מרכיבי המערכת: 10 μl של תכשיר לטקס רגיש לנוגדנים מתווספים ל-50 μl של חומר הבדיקה. הספציפיות של PAH נשלטת באמצעות שלוש בדיקות בקרה הכלולות במערכות בדיקה מסחריות: תגובה חיובית ידועה, תגובה שלילית ידועה ובקרת איכות של תרחיף הלטקס עבור לטקסים שאינם רגישים ל-PAH (לא נושאי נוגדנים) עם הבדיקה חוֹמֶר. בארצנו משתמשים בלטקסים מפוליסטירן מונודיפרסים בקטרים ​​שונים של חלקיקים (0.3; 0.66; 0.75; 0.8 מיקרומטר) כנשאים של נוגדנים ספציפיים. LAH משמש לזיהוי מהיר של מיקרואורגניזמים או אנטיגנים שלהם בחומר הבדיקה.

זיהוי אימונומגנטי של אנטיגנים. אחת האפשרויות לתגובת אגלוטינציה מואצת על זכוכית קשורה לשימוש בחלקיקי פולימר על-מגנטיים המצופים בנוגדנים ספציפיים. חלקיק אחד כזה קושר עד 107-108 תאים של מיקרואורגניזמים, עקב כך הרגישות השיטה הזאתמגיע ל-5 CFU/ml. ניתן להשתמש בזיהוי אימונומגנטי של מיקרואורגניזמים בשילוב עם החייאה.

תגובה מצטברת-המגלוטינציה (RAGA). זה מאפשר לך לזהות במהירות בדם של חולים הן אנטיגנים במחזור חופשי (אנטיגנמיה) והן אנטיגנים הקשורים לנוגדנים - קומפלקסים חיסוניים במחזור (CIC). עבור RAGA, אריתרוציטים רגישים עם הנוגדנים המתאימים משמשים. הוספה של סרום הדם של המטופל, המכיל אנטיגנים, לאריתרוציטים רגישים, עליהם מקובעים נוגדנים, מביאה להדבקה (אגלוטינציה) של אריתרוציטים ותסביך חיסון.

בדיקת אנטיגלובולין קומבס (תגובת R. Coombs). בעזרת תגובות אגלוטינציה ישירות ופסיביות נקבעים נוגדנים מלאים (דו-ערכיים). נוגדנים לא שלמים (חד-ערכיים, חוסמים) אינם מתגלים בשיטות אלו, שכן, בשילוב עם האנטיגן, הם חוסמים אותו, אך אינם יכולים לגרום להצטברות האנטיגן לקונגלומרטים גדולים. נוגדנים לא שלמים (חוסמים) הם אלו שבהם פועל רק מרכז פעיל אחד; המרכז הפעיל השני אינו פועל מסיבה לא ידועה. כדי לזהות נוגדנים לא שלמים, נעשה שימוש בתגובת Coombs מיוחדת (איור 72). בתגובה מעורבים: סרום החולה, בו נקבעים נוגדנים לא שלמים, אנטיגן גופני-דיאגנוסטיקום, סרום אנטיגלובולין המכיל נוגדנים לגלובולין אנושי. התגובה מתרחשת בשני שלבים:

אינטראקציה של אנטיגן עם נוגדנים לא שלמים. אין ביטויים גלויים. השלב הראשון מסתיים על ידי שטיפת האנטיגן משאריות הסרום של המטופל.

אינטראקציה של סרום אנטיגלובולין, המתקבל כתוצאה מחיסון של בעל חיים עם גלובולין אנושי, עם נוגדנים לא שלמים הנספגים על האנטיגן. בשל העובדה שהנוגדנים האנטיגלובולינים הם דו ערכיים, הם קושרים שני נוגדנים חד ערכיים של קומפלקסים אנטיגן + נפרדים. נוגדן לא שלם, מה שמוביל להיצמדותם ולהופעת משקעים גלויים.

תוכן העניינים של הנושא "אימונומודולטורים. אימונודיאגנוסטיקה של מחלות זיהומיות.":

תגובת אגלוטינציה מורחבת (RA). כדי לקבוע AT בסרום הדם של המטופל, לשים תגובת צבירה ממושכת (RA). לשם כך מוסיפים דיאגנוסטיקום לסדרה של דילולים בסרום דם - תרחיף של מיקרואורגניזמים מומתים או חלקיקים עם Ag נספג. מתן הדילול המקסימלי צבירה Ag, הנקרא טיטר של סרום הדם.

זנים של תגובת צבירה (RA) לאיתור AT - בדיקת טיפת דם לטולרמיה (עם יישום אבחון על טיפת דם והופעה של אגרטלים לבנבנים גלויים) ותגובת האדלסון לברוצלוזיס (עם אבחנה מוכתמת בסגול ג'נטיאן מוחל על טיפה של סרום דם).

תגובת אגלוטינציה משוערת (RA)

כדי לזהות את המיקרואורגניזמים המבודדים, RA משוער ממוקם על שקופיות זכוכית. לשם כך, מוסיפים תרבית של הפתוגן לטיפה של אנטי-סרום אבחנתי סטנדרטי (בדילול של 1:10, 1:20). אם התוצאה חיובית, הם מכניסים תגובה מפורטת עם דילולים הולכים וגדלים של אנטי-סרום.

תְגוּבָהנחשב לחיובי אם נצפית צפיפות בדילולים הקרובים לטיטר של הסרום האבחנתי.

OAS. Somatic O-Agהם יציבים תרמית ועמידים בפני רתיחה למשך 2 שעות. בעת אינטראקציה עם AT, הם יוצרים אגרגטים עדינים.

לְנַדְנֵד. H-Ag (flagellate)תרמי ונהרס במהירות ב-100 מעלות צלזיוס, כמו גם תחת פעולת אתנול. בתגובות עם H-antiserum, לאחר שעתיים של דגירה, נוצרים פתיתים גדולים רופפים (הנוצרים על ידי חיידקים הנצמדים יחד עם דגלים).

וי ארחיידקי טיפוס הטיפוס הם יציבים יחסית (עמידים בטמפרטורה של 60-62 מעלות צלזיוס למשך שעתיים); כאשר דגירה עם Vi-antiserum, נוצר agglutinate עדין.

תגובות ישירות להמגלוטינציה

הפשוטה שבהן תגובות - צבירהאריתרוציטים, או hemagglutination, המשמשים לקביעת קבוצות דם במערכת AB0. לשם קביעה צבירה(או היעדרו) משתמשים באנטיסרה סטנדרטית עם אגלוטינינים אנטי-A ואנטי-B. התגובה נקראת ישירה, שכן האנטיגנים הנחקרים הם מרכיבים טבעיים של אריתרוציטים.

משותף עם המגלוטינציה ישירהלמנגנונים יש hemagglutination ויראלית. נגיפים רבים מסוגלים לצבור באופן ספונטני אריתרוציטים של עופות ויונקים, והוספתם להשעיה של אריתרוציטים גורמת להיווצרות אגרגטים מהם.