זה מבוסס על העובדה כי אריתרוציטים, שעליהם אנטיגנים נספגים מראש, רוכשים את היכולת להצטבר בנוכחות סרה הומולוגית (נוגדנים).

במקרה זה, אריתרוציטים ממלאים את התפקיד של נשאים עם דטרמיננטים ספציפיים, שהאגלוטינציה שלהם מתרחשת כתוצאה מתגובת האנטיגן + נוגדן.

אריתרוציטים, שעל פני השטח שלהם אנטיגנים מחוברים בחוזקה, נקראים אנטיגנים אריתרוציטים, או אריתרוציטים שעברו רגישות על ידי אנטיגן.

סוג אחר של RNHA - נוגדנים נספגים על פני האריתרוציטים והצבירה שלהם לאחר מכן מתרחשת בנוכחות אנטיגן הומולוגי. במקרה זה, אריתרוציטים כאלה נקראים אבחון נוגדן אריתרוציטים, או אריתרוציטים שעברו רגישות על ידי נוגדנים.

על בסיס שתי גישות מתודולוגיות בסיסיות אלו, פותחו שינויים רבים של RNGA ונמצאים בשימוש. אז, חלקיקים סטנדרטיים קטנים של לטקס משמשים כנשאים. במקרה זה, התגובה נקראת תגובת לטקס אגלוטינציה (RLA) או משמשת Staphylococcus aureus- תגובת קרישה וכו'. בדרך כלל, אבחון אריתרוציטים מוכנים במפעלים של התעשייה הביולוגית, והניסיון העיקרי של RNGA כבר מותקן במעבדות אבחון.

הכנת אבחון אריתרוציטים כוללת את השלבים הבאים:

• קיבוע של אריתרוציטים עם פורמלדהיד או אלדהידים גלוטריים או אקריליים. אריתרוציטים מעובדים כאלה מאוחסנים במשך זמן רב. לעתים קרובות יותר, אריתרוציטים של כבשים, בני אדם, תרנגולות וכו 'משמשים למטרה זו;
• טיפול באריתרוציטים קבועים עם תמיסת טאנין. כתוצאה מכך, אריתרוציטים רוכשים את המאפיין של ספיגה בלתי הפיכה של חלבונים (וירוסים ונוגדנים) על פני השטח שלהם;
• רגישות של אריתרוציטים מזויפים על ידי וירוסים או נוגדנים.

יצוין כי שיטות ההכנה של אבחון אריתרוציטים עבור זיהום ויראלישונה.

הטכניקה להגדרת RNHA לאיתור וקביעת טיטר נוגדנים היא כדלקמן:

• לדילול רציף של פי 2 של סרום הוסף מינונים שווים של אריתרוציטים שעברו רגישות על ידי אנטיגן;
• משאירים את התערובת למשך 2-3 שעות בטמפרטורת החדר או למשך 16-18 שעות ב-4 מעלות צלזיוס;
• לקחת בחשבון את התוצאות. אם הסרום מכיל נוגדנים לנגיף שאיתו נרשמו אריתרוציטים, נצפה בהמגלוטינציה, המוערכת בהצלבות.

טיטר נוגדני סרום נלקח כדילול הגבוה ביותר של סרום שעדיין מספק המגלוטינציה בשני הצלבות לפחות.

RNGA מלווה בכל הבקרות הרלוונטיות. בדרך כלל הם מכניסים את התגובה לפי שיטת המיקרו.

RNHA מאפשר לפתור את משימות האבחון הבאות:

• לזהות נוגדנים ולקבוע את הטיטר שלהם בסרום הדם באמצעות אבחון אנטיגני אריתרוציטים ידוע;
• לזהות ולזהות וירוס לא ידוע באמצעות אבחון נוגדן אריתרוציטים ידוע.

יתרונות RNGA: רגישות גבוהה, טכניקת הגדרה קלה ותגובה מהירה. עם זאת, חשוב לציין שקיימים קשיים גדולים בהכנת אבחוני אריתרוציטים יציבים (תלות רבה בטוהר הרכיבים המשמשים, הצורך בבחירת אופן הקיבוע, השיזוף וסנסיטיזציה של אריתרוציטים לכל סוג וירוס) .

עקרון RTGAמורכב מכך שבמבחנה מערבבים נפחים שווים של סרום דם ותרחיף וירוסים, ולאחר החשיפה נקבע אם הנגיף נשמר בתערובת על ידי הוספת תרחיף של אריתרוציטים. צבירה של אריתרוציטים מעידה על נוכחות, והיעדר המגלוטינציה מעיד על היעדר הנגיף בתערובת. היעלמות הנגיף מתערובת הנגיף + הסרום נחשבת כסימן לאינטראקציה של סרום ונוגדני וירוס.

אבל נוגדנים מקיימים אינטראקציה עם אנטיגנים ביחסים כמותיים מוגדרים בהחלט. לכן, כדי שכמות מסוימת של נגיף תישלל את יכולת ההמגלוטינציה, נדרש מינימום מסוים של נוגדנים, ומכיוון שאחד המרכיבים של RTHA תמיד לא ידוע, יש צורך לשים את התגובה בסדרת מבחנות. עם מינונים שונים של נוגדנים ואותם מינונים של הנגיף, או להיפך. זה מושג על ידי נטילת דילולים שונים של סרום ואותו דילול של הנגיף, או דילול שונה של הנגיף ואותו דילול של סרום.

RTGA מאפשר לך לפתור את המשימות הבאות: לקבוע את טיטר הנוגדנים לנגיף ההמגלוטינציה בסרום; לזהות נגיף המגלוטינציה לא ידוע מסרים ידועים; לקבוע את מידת הקשר האנטיגני של שני הנגיפים.

היתרונות של RTGA:פשטות של טכניקה, מהירות, עבודה סטרילית אינה נדרשת, ספציפיות, עלות נמוכה. חסרון: RTGA אפשרי רק עם וירוסים המגלוטינים.

העיקרון של טיטרציה של נוגדנים ב-RTGAמורכב מהדברים הבאים:

- הכינו סדרה של דילולים עוקבים (בדרך כלל פי 2) של סרום הבדיקה בנפחים שווים (בדרך כלל 0.25 או 0.2 מ"ל);

- לכל דילול הוסף את אותם נפחים של וירוס הומולוגי בטיטר של 4 HAU;

- תערובות עומדות זמן מסוייםבטמפרטורה מסוימת (עבור וירוס מחלת ניוקאסל 40-60 דקות בטמפרטורת החדר);

- נפחים שווים של השעיה 1% של אריתרוציטים שטופים מתווספים לכל התערובות;

- לאחר החשיפה, ההמגלוטינציה בכל תערובת מוערכת בהצלבים.

התגובה כוללת בקרות סרום, וירוסים ואריתרוציטים.

דילול הסרום הגבוה ביותר, שעדיין מעכב לחלוטין את ההמגלוטינציה, נלקח כאינדיקטור לטיטר הנוגדנים בסרום זה.

שימוש בווירולוגיה של תגובת ספיחה של המד.

RGAd.ספיחה של המד - חיבור של אריתרוציטים עם פני התאים המושפעים מהנגיף - התגלה לראשונה על ידי פוגל ושצ'לוקוב (1957) על תרבית רקמה נגועה בנגיף השפעת. תופעה זו מבוססת על הזיקה של קולטני הנגיף הממוקמים על פני התא הפגוע לקולטני האריתרוציטים, מה שמוביל לקישור הדדי ביניהם בדומה לתגובת ההמגלוטינציה. היתרון של תגובה זו הוא שהיא הופכת לחיובית עוד לפני הופעת שינויים ציטופתיים מובהקים בתאים נגועים.

מתודולוגיית RGAdמורכב מהדברים הבאים. ביום ה-3-4 לאחר ההדבקה בתאים, נלקחות שתי צינורות עם אותה תרבית תאים, אחת מהן נגועה בחומר המכיל וירוסים, והשנייה היא צינור בקרה. נוזל התרבית מנוקז משתי המבחנות ומוסיפים 2-3 טיפות של תרחיף 0.5% של אריתרוציטים שטופים לשתי המבחנות. את שני הצינורות משאירים למשך 5-10 דקות כך שהאריתרוציטים נמצאים על פני התאים (מונחים אופקית על השולחן), ולאחר מכן שוטפים מעט עם מי מלח ונבדקים במיקרוסקופ (הגדלה קטנה). בצינור הבקרה, אריתרוציטים מוסרים לחלוטין עם מי מלח, וחלק מהנותרים צפים עם הנוזל. אם האריתרוציטים במבחנה הנגועה אינם מוסרים עם מי מלח ואינם צפים, אלא מחוברים לפני השטח של התאים, יש לראות ב-RHAd חיובי.

בהתאם לנגיף ולסוג התאים, סידור תאי הדם האדומים יכול להיות משולש:

- אריתרוציטים נספגים רק בפריפריה של שכבת התאים בצורה של "שרשרת" (נגיף קדחת החזירים האפריקאית);

- אריתרוציטים ממוקמים על שכבת התאים במוקדים או באשכולות (נגיף שפעת);

- אריתרוציטים ממוקמים בצורה דיפוזית על שכבת התאים (נגיף פאראאינפלואנזה).

כל וירוס מסוגל לספוג את תאי הדם האדומים של מיני בעלי חיים מסוימים.

אבחון סרולוגי של מחלות ויראליות על ידי העלייה בטיטר הנוגדנים בסרה מזווגת בדם.

תגובת ההמגלוטינציה (RGA) ותגובת עיכוב ההמגלוטינציה (HITA), מנגנון, מרכיבים ויישום התגובות.

הבסיס לתגובת ההמגלוטינציה היא תופעת צמיחת אריתרוציטים, המתרחשת בהשפעת גורמים שונים. הבחנה בין המגלוטינציה ישירה לעקיפה.

ראשית, האריתרוציטים נשטפים בתמיסת נתרן כלוריד איזוטונית, ולאחר מכן, במידת הצורך (בעת שימוש באנטיגנים בעלי אופי חלבוני), הם מטופלים בתמיסת טאנין של 1:20,000 ומרגישים באנטיגנים מסיסים. לאחר כביסה עם תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית מבוקרת, אנטיגן האריתרוציטים מוכן לשימוש.

סרום הבדיקה מדוללים בתמיסת נתרן כלוריד איזוטונית במבחנות או בצלחות פלסטיק מיוחדות עם חורים, לאחר מכן מוסיפים לכל דילול סרום אבחון אריתרוציטים. תוצאות התגובה המאגלוטינציה עקיפהנלקחים בחשבון על ידי אופי משקע האריתרוציטים הנוצרים בתחתית הצינור. תוצאת התגובה נחשבת חיובית, שבה האריתרוציטים מכסים באופן שווה את כל תחתית המבחנה. עם תגובה שלילית, תאי דם אדומים בצורת דיסק קטן או "כפתור" ממוקמים במרכז החלק התחתון של המבחנה.

המרכיבים העיקריים של ה-RP:

א) אנטיגן מסיס

ב) נוגדנים ספציפיים (סרום)

(RTGA) היא שיטה לזיהוי וירוס או גילוי נוגדנים אנטי-ויראליים בסרום הדם של החולה, המבוססת על תופעת היעדר אגלוטינציה של אריתרוציטים על ידי תרופה המכילה וירוס בנוכחות סרום דם חסין מפניו.
מבוסס על החסימה, דיכוי אנטיגנים של וירוסים על ידי נוגדנים של הסרום החיסוני, וכתוצאה מכך הנגיפים מאבדים את יכולתם לצבור תאי דם אדומים.

RTHA משמש לאבחון מחלות ויראליות רבות, שגורמיהן (שפעת, חצבת, אדמת, דלקת מוח בקרציות וכו') עלולים לצבור את אריתרוציטים של בעלי חיים שונים.
מַנגָנוֹן.הקלדת הנגיפים מתבצעת במבחן עיכוב ההמגלוטינציה (HITA) עם קבוצה של סמים ספציפיים לסוג. תוצאות התגובה נלקחות בחשבון על ידי היעדר hemagglutination. תת-סוגים של וירוס A עם אנטיגנים H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 וכו'.

ניתן להבדיל ב-RTGA עם קבוצה של סרה הומולוגית ספציפית לסוג.

בבסיס תגובות המגלוטינציה טמונה התופעה של צמיחת אריתרוציטים, המתרחשת בהשפעת גורמים שונים.

הבחנה בין המגלוטינציה ישירה לעקיפה.
בתגובת ההמגלוטינציה הישירה, אריתרוציטים נצמדים זה לזה כאשר אנטיגנים מסוימים, כמו וירוסים, נספגים עליהם.
במחקרים סרולוגיים משתמשים בתגובת עיכוב ההמגלוטינציה הישירה, כאשר הנגיף המבודד מהמטופל מנוטרל עם סרום חיסוני ספציפי, ולאחר מכן משולב עם כדוריות דם אדומות.

היעדר המגלוטינציה מעיד על התאמת הנגיף והנסיוב החיסוני המשמש.

תגובת המגלוטינציה עקיפה (המגלוטינציה פסיבית) נצפית כאשר אריתרוציטים שטופלו מראש (הרגישו) באנטיגנים שונים מתווספים בסרום חיסוני או בסרום חולה שיש לו את הנוגדנים המתאימים.

יש קשר ספציפי של אריתרוציטים, ההמגלוטינציה הפסיבית שלהם.

התגובה של המגלוטינציה עקיפה, או פסיבית, עדיפה ברגישות ובספציפיות לשיטות סרולוגיות אחרות, והיא משמשת לאבחון זיהומים הנגרמים על ידי חיידקים, ריקטזיה ופרוטוזואה.

שיטת הגדרת התגובה של hemagglutination עקיפה מורכבת ממספר שלבים.

ראשית, האריתרוציטים נשטפים בתמיסת נתרן כלוריד איזוטונית, ולאחר מכן, במידת הצורך (בעת שימוש באנטיגנים בעלי אופי חלבוני), הם מטופלים בתמיסת טאנין של 1:20,000 ומרגישים באנטיגנים מסיסים.

לאחר כביסה עם תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית מבוקרת, אנטיגן האריתרוציטים מוכן לשימוש. סרום הבדיקה מדוללים בתמיסת נתרן כלוריד איזוטונית במבחנות או בצלחות פלסטיק מיוחדות עם חורים, לאחר מכן מוסיפים לכל דילול סרום אבחון אריתרוציטים.

התוצאות של תגובת ההמגלוטינציה העקיפה נלקחות בחשבון על ידי אופי משקע האריתרוציטים הנוצרים בתחתית הצינור. תוצאת התגובה נחשבת חיובית, שבה האריתרוציטים מכסים באופן שווה את כל תחתית המבחנה. עם תגובה שלילית, אריתרוציטים בצורה של דיסק קטן או "כפתור" ממוקמים במרכז החלק התחתון של המבחנה.

תגובה לעיכוב ההמגלוטינציה- תגובה סרולוגית המבוססת על יכולתם של נוגדנים למנוע אגלוטינציה של אריתרוציטים על ידי נגיפים מסוג המגלוטינציה (אדנו-וירוסים, ארבו-וירוסים, חלק מהאנטרו-וירוסים, נגיפי שפעת ופרא-אינפלואנזה, חצבת, ריאו-וירוס).

נוגדנים אנטי-ויראליים ספציפיים מקיימים אינטראקציה עם מולקולות פני השטח של ההמגלוטינינים של נגיפים של וירוסים אלה וחוסמים את הקישור שלהם למולקולות משלימות של קרום האריתרוציטים.

IN לָאַחֲרוֹנָההתגובה נמצאת בשימוש נרחב במעבדות של וירולוגיה קלינית כדי לקבוע את הטיטרים של נוגדנים ספציפיים לנגיפים מסוימים, כמו גם לזיהוי והקלדה סרולוגית של בידודי וירוסים מחומר קליני של חולים.

השימוש מוגבל במידה מסוימת בשל נוכחותם בסרום הדם של אנשים של מעכבים לא ספציפיים של וירוסים, כמו גם נוגדנים טבעיים - agglutinins.

תגובת נטרול - תגובת עיכוב ההמגלוטינציה (RTGA).

RTGA מוחל:
-עבור סרוטיפינג של וירוסים;
- עבור serodiagnosis של זיהומים.
ישנן שתי דרכים להגדרה:
- שיטת טפטוף על זכוכית ( תגובה מכוונת), משמש להעתקת וירוסים;
- פרוס במבחנות.

מַנגָנוֹן.

בנגיפים מסוימים (למשל, שפעת) יש המגלוטינין, הגורם לאגלוטינציה של אריתרוציטים של בעלי חיים שונים, בהתאם לסוג הנגיף.

בנוכחות נוגדנים בסרום - אנטי-המגלוטינינים, נצפה עיכוב פעילות הנגיפים.
RTGA.
מטרה: בדיקת סרוטיפ של וירוס שפעת A

רכיבים:
1. החומר הנבדק הוא הנוזל האלנטואי של עובר האפרוח,
2. סרה ספציפית לסוג אבחון נגד שפעת,
3. השעיה 5% של אריתרוציטים של עוף.
4.

מִלְחִית.

התגובה מונחת על הזכוכית בשיטת הטיפה. טיפה אחת של סרה אבחנתית וחומר בדיקה מורחים על הזכוכית, מערבבים, ואז מוסיפים טיפה אחת של תרחיף אריתרוציטים. עם תגובה חיובית, נצפית אדמומיות הומוגנית, ועם תגובה שלילית מופיעים פתיתים אדומים (המגלוטינציה).

הקודם31323334353637383940414243444546הבא

מאפיינים של נגיפי שפעת. אפידמיולוגיה ואבחון שפעת. שימוש ב-RTGA עבור סרוטיפינג של וירוס שפעת. הכנות למניעה וטיפול ספציפיים.

שפעת או שפעת - חריפה הַדבָּקָהמאופיין בנגעים של הממברנות הריריות של החלק העליון דרכי הנשימה, חום, שיכרון כללי, הפרעה למערכת הלב וכלי הדם והעצבים.

שפעת מאופיינת בנטייה להתפשטות מגיפה ומגיפה עקב ההדבקות והשונות הגבוהות של הפתוגן.

מאפיינים של פתוגנים. פתוגנים - נגיפי שפעת שייכים למשפחה. Orthomyxoviridae, סוג Influenzavirus A, B ו-Influenzavirus C. נגיפי שפעת הם נגיפי RNA. וירוס שפעת מסוג A בודד ב-1933 על ידי W. Smith, K. Andrews, P. Laidlaw. בשנת 1940 T.

יישום שיטת ההמגלוטינציה בווירולוגיה.

פרנסיס ור' מדז'יל בודדו נגיפי שפעת מסוג B, בשנת 1949 R. טיילור - סוג C. ברוסיה בודדו נגיפי השפעת הראשונים בשנת 1936 על ידי A. A. Smorodintsev והוקצו לסוג A. Morphology. לנגיפי שפעת יש צורה כדורית (צורת כדור) - 80 - 120 ננומטר, לעתים רחוקות יותר יש להם צורה חוטית. הם מורכבים מ: 1) ליבה - נוקלאוקפסיד מסוג סלילי של סימטריה (ליניארי חד-גדילי "-" -גדיל של RNA + קפסיד חלבון); 2) קרום בסיס- מעטפת ליפופרוטאין חיצונית - סופרקפסיד.

על פני הממברנה ישנם גליקופרוטאינים (בצורת קוצים ו-villi) מ-2 סוגים: 1) המגלוטינין - מעודד התקשרות לקולטני תאים; 2) neuraminidase - מקדם את שחרור הנגיף מהתא. טיפוח. לגידול משתמשים בעוברי תרנגולות, תרביות תאים טריפסיניות ראשוניות ולעיתים גם חיות מעבדה.

הדגם הנוח ביותר הוא עוברי אפרוחים 10-12 - בן יום. זה מאפשר לך לקבל כמויות גדולות של הנגיף, אשר הכרחי בייצור של חיסונים ותכשירים חיידקיים.

ההדבקה מתבצעת בחלל האלונטואי, על הקרום הכוריון-אלונטואיק, בחלל השפיר, באמניון. נוכחות הנגיף בעובר העוף מתגלה בבדיקת ההמגלוטינציה. מבנה אנטיגני. לנגיפים יש אנטיגן פנימי - S ואנטיגנים משטחים: HA-hemagglutinin ו-NA-neuraminidase. S-antigen - ספציפי לקבוצה, משותף לכל הסוג, לפי אנטיגן זה נגיפי שפעת מחולקים לסוגים A, B ו-C. זהו אנטיגן מקבע משלים, יציב (לא משתנה).

אנטיגנים HA ו-NA הם אנטיגנים ספציפיים. אנטיגן HA גורם להיווצרות נוגדנים מנטרלים וירוסים ואגלוטינציה של אריתרוציטים.

אנטיגן NA גורם ליצירת נוגדנים המנטרלים חלקית וירוסים.

וירוס מסוג B הוא פחות משתנה, בעוד שסוג C יציב מאוד.

תכונות רעילות. ההשפעה הרעילה של הנגיף על הגוף ( כְּאֵב רֹאשׁ, כאבי שרירים, טמפרטורה, תופעות קטרליה) נובעים מחלבוני הנגיף (החלקיק הנגיפי עצמו). פעולה זו היא ספציפית למהדרין ומנוטרלת רק על ידי הסרום החיסוני מהסוג או תת-הסוג המתאים או על ידי הסרום של אלה שהיו חולים. הִתנַגְדוּת. נגיפי השפעת רגישים לקרני UV, לחומרי חיטוי (פורמלין, אלכוהול, פנול, כלורמין) וממיסי שומן.

במדיום נוזלי, הם מתים בטמפרטורה של 50 - 60 מעלות צלזיוס למשך מספר דקות. בטמפרטורת החדר באוויר, וירוסים נשארים זיהומיים למשך מספר שעות. הם מאוחסנים במשך זמן רב בצורה מיובשת, ובמצב קפוא (-70 מעלות צלזיוס) הם לא רק נשארים במשך זמן רב, אלא גם לא מאבדים את הארסיות שלהם.

רגישות לבעלי חיים. בתנאים טבעיים, וירוסים מסוג A מדביקים בני אדם ובעלי חיים (סוסים וחזירים חולים), בעוד וירוסים מסוג B ו-C מדביקים רק בני אדם. בקרב חיות מעבדה, עכברים לבנים, חמוסים אפריקאים, אוגרים סוריים וקופים רגישים לנגיפים.

המחלה בבעלי חיים מאופיינת בפגיעה בריאותית, חום ועלולה לגרום למוות של בעלי חיים. אפידמיולוגיה של המחלה. מקור הזיהום הוא אדם חולה עם צורה קלינית בולטת או אסימפטומטית. אדם חולה משיל את הנגיף סביבהכאשר משתעלים, מדברים, מתעטשים עם טיפות רוק, ריר, כיח כבר בתקופת הדגירה.

החולה הופך מדבק 24 שעות לפני הופעת התסמינים העיקריים ומהווה סכנת מגיפה תוך 48 שעות לאחר היעלמותם.

מנגנון ההעברה הוא אווירוגני. נתיב השידור הוא מוטס. רגישות האדם לשפעת גבוהה מאוד. כולם נהיים חולים קבוצת גיל, בעיקר ב שעון חורף. ילדים וקשישים הם הרגישים ביותר. שם המחלה משקף את תכונות האפידמיולוגיה: שפעת מהצרפתים. gripper - גראב, שפעת - מאיטלקית. שפעת די פרדו - השפעת הקור.

מכל החדים מחלות בדרכי הנשימהשפעת היא הנפוצה ביותר ו מחלה רצינית. מגפות ומגיפות שפעת מכסות עד 30-50% או יותר מהאוכלוסייה הגלובוסגרימת נזק עצום לבריאות ולכלכלה של מדינות. התיאורים הראשונים של מגיפות שפעת מתוארכים למאות ה-12-14. התרחשותן של מגפות ומגיפות גדולות נגרמת על ידי נגיף השפעת מסוג A, הנובע מהשונות הגבוהה של הנגיף וקשור להופעת תת-סוג חדש כתוצאה משינוי אנטיגן.

בין מגפות, התפרצויות מגיפה מתרחשות כל 1.5-2 שנים, אשר קשורה לסחף אנטיגני של וירוסים. בשנת 1918, מגיפת השפעת הספרדית (1.5 מיליארד בני אדם חלו, 20 מיליון איש מתו) נגרמה על ידי נגיף שפעת A1. מגיפה זו, שנרשמה בעיקר בספרד, כיסתה כמעט את כל אוכלוסיית כדור הארץ; המחלה התאפיינה בהתפתחות של דלקת ריאות דימומית חמורה במיוחד עם שיעור תמותה שיא (עד 1% מכלל המקרים).

בשנת 1957, מגפת "אסיה" (2 מיליארד בני אדם חלו) נגרמה מתת-סוג חדש - תת-סוג A2. בשנת 1968, מגיפת "הונג קונג" (מיליארד בני אדם חלו) נגרמה על ידי תת-סוג חדש שהופיע - תת-סוג A3. בְּדֶרֶך כְּלַל, גרסה חדשהשל הנגיף עוקר את הזן שהיה בעבר במחזור מהאוכלוסייה האנושית.

אבל בשנת 1977, לאחר הפסקה של 20 שנה, סוג A1 "חזר" באופן בלתי צפוי, מה שהוביל למגיפה גדולה. כתוצאה מכך, הווריאציות המודחקות של נגיף השפעת נמשכות, ובמרווחים מסוימים, עלולות לגרום שוב למגיפה. וירוס מסוג B גורם למגיפות מקומיות, בעוד שסוג C אינו גורם למגפות. פתוגנזה ומרפאה של המחלה. שער הכניסה הוא דרכי הנשימה העליונות. הנגיף פולש לתאי האפיתל של הקרום הרירי ומתרבה בהם.

השפעת הנגיף על תאי האפיתל גורמת לנמק שלהם ולפירוק (דחייה) של האפיתל, וכתוצאה מכך הקרום הרירי הופך לחדיר לנגיפים וחיידקים. הם חודרים לדם ומתפשטים בכל הגוף." וירמיה מלווה בנגעים מרובים של האנדותל הנימים עם עלייה בחדירות שלהם.

IN מקרים חמוריםישנם שטפי דם נרחבים בריאות, שריר הלב, איברים פרנכימליים. יש תוצרי ריקבון של תאים פגומים וחלבונים ויראליים השפעה רעילהעל איברים ומערכות איברים שונות. הרעלים של הנגיף מדכאים מאוד את מערכת העצבים המרכזית, ולמרות שהתהליך אינו נמשך זמן רב (3-5 ימים), החולה נשאר מוחלש לאורך זמן וכל זיהום משני מצטרף לגוף המוחלש ומתעוררים סיבוכים: דלקת ריאות שפעת , בצקת ריאות חריפה, נזק לכליות, לב, סימפונות.

סיבוך שכיח של שפעת דלקת ריאות חיידקית(סטרפטוקוקים מקבוצה B). במהלך מגיפת השפעת הספרדית, אנשים מתו בעיקר מדלקת ריאות חיידקית משנית.

בפתוגנזה של שפעת, לא רק שיכרון חשוב, אלא גם אלרגיה, כמו גם הפרה של המאפיינים הפונקציונליים של תאים חיסוניים עם התפתחות של כשל חיסוני. תקופת דגירה- מספר שעות - 1-3 ימים. מאופיין על ידי התחלה חריפה, עלייה בטמפרטורה ל 37.5 - 38 מעלות צלזיוס, שיכרון כללימתבטא בחולשה, כאב ראש, כאב ב גלגלי עיניים, תהליכים דלקתיים של דרכי הנשימה בחומרה משתנה (נזלת, גרון, דלקת קנה הנשימה, דלקת הלוע).

מצב חום עם שפעת ללא סיבוכים נמשך 5-6 ימים. חֲסִינוּת. לאחר המחלה נוצרת חסינות ספציפית לסוג ולזן, הניתנת על ידי גורמים תאיים והומורליים ספציפיים ולא ספציפיים. חשיבות רבהיש נוגדנים מסוג Ig A. לא מתפתחת חסינות צולבת, לאחר סבל משפעת מסוג A1 ניתן לקבל שפעת מסוג A2 וכו'. לאחר וירוס מסוג חסינות - 1-2 שנים, לאחר וירוס מסוג B - 3-5 שנים.

חסינות טבעית פסיבית - בילדים עד 8 - 11 חודשים. בשל השונות האנטיגני הגבוהה של הנגיף, ההחלמה אינה מובילה להתפתחות של חסינות מתמשכת להדבקה מחדש.

אבחון מעבדה. חומר במחקר: מריחות-טביעות מרירית האף, הפרשות מהאף, פיסות ריאות, מוח במקרה של תוצאות קטלניות.

שיטות אבחון: 1) שיטת ציטורינוסקופיה - זיהוי תכלילים תוך תאיים ספציפיים לנגיף - כאשר צובעים בפיוקטנין במיקרוסקופ, נראים תכלילים אדומים בוהקים של נגיף השפעת בתאי האפיתל הריסי; 2) שיטה וירולוגית- בידוד של נגיף השפעת מגוף האדם על ידי הדבקת עוברי עוף בשטיפה מהאף של המטופל; האינדיקציה (נוכחות) הנגיף מתבצעת באמצעות RGA (נגיפי שפעת מצמידים אריתרוציטים של בני אדם ובעלי חיים שונים), זיהוי הנגיף מתבצע בשלבים: הסוג נקבע ב-RSC, תת-סוג ההמגלוטינין נקבע ב- ה-RTGA, ותת-הסוג neuraminidase נקבע בתגובת עיכוב פעילות האנזים; 3) שיטה סרולוגית - זיהוי עלייה בטיטר (פי 4) של נוגדנים ספציפיים בסרום הדם של המטופל באמצעות RSK, RTGA, PH בתרבית תאים, תגובת משקעים בג'ל, ELISA; 4) שיטה ביולוגית- זיהום תוך-אף של עכברים - החדרת חומר לריאות מתחת הרדמת אתר; עכברים מתים לאחר 2 - 3 ימים כתוצאה מדלקת ריאות; 5) אבחון אקספרס - איתור אנטיגן ויראלי באמצעות RIF.

טיפול ומניעה.

למניעה וטיפול בימים הראשונים של המחלה, נעשה שימוש באינטרפרון לויקוציטים אנושיים (אינטרנאסאלי). IN מטרות רפואיותלהשתמש תרופות אנטי-ויראליות- רימנטדין (שפעת מסוג A), אדפרומין, ויראזול ותרופות אימונומודולטוריות - דיבזול, פרודיגיוסן, לבומיסול.

בשפעת קשה, במיוחד בילדים, משתמשים באימונוגלובולין נוגד שפעת תורם, כמו גם תרופות - מעכבי פרוטאזות תאיות (גורדוקס, קונטרקלי, חומצה אמינוקפרואית).

מניעה מיוחדת. נעשה שימוש בתרופות האנטי-ויראליות והאימונומודולטורים הבאים, כמו גם חיסונים חיים ומומתים: 1) חיסונים מונו-חיסונים חיים למתן דרך הפה - זנים מוחלשים של וירוסים הנמצאים כעת במחזור (A1, A3 ו-B); להראות את האימונוגניות הגדולה ביותר; 2) חיסונים של כל ויריון מזנים ארסיים שהושבתו על ידי פורמלדהיד או קרני UV; 3) חיסוני תת-יחידה לשפעת רק מאנטיגנים על פני השטח - אנטיגנים HA ו-NA (בעלי ריאקטוגניות מינימלית).

כדי להשיג חיסונים, מגדלים וירוסים בעוברי אפרוחים ובתרבית תאי עוברי אפרוח.

עם כניסת החיסונים נוצרת חסינות מקומית והומורלית. החיסון מתבצע בתקופות של סיכון גבוה ביותר לפתח מגיפות. זה מתאים יותר לצעירים ולמבוגרים. השימוש בחיסונים מומתים מחייב חיסון חוזר שנתי; היעילות שלהם אינה עולה על 60-70%.

כי מאז וריאציות אנטיגניות של הפתוגן נצפות לעתים קרובות, את סט האנטיגנים של הנגיף המתאים לחיסון ניתן לקבוע רק לאחר תחילת ההתפרצות.

כרטיס 15.

תגובת ההמגלוטינציה (RGA).

במעבדה משתמשים בשתי תגובות המגלוטינציה שונות.

ה-RGA הראשון מתייחס לסרולוגי. בתגובה זו, אריתרוציטים נאגרים בעת אינטראקציה עם הנוגדנים המתאימים (המגלוטינינים).

התגובה נמצאת בשימוש נרחב לקביעת קבוצות דם.

ה-RHA השני אינו סרולוגי. בו, אגלוטינציה של אריתרוציטים נגרמת לא

נוגדנים, אבל חומרים מיוחדים שנוצרו על ידי וירוסים. לדוגמה, נגיף השפעת מצמיד אריתרוציטים של עוף ו שרקנים, וירוס פוליומיאליטיס - אריתרוציטים של כבשים. תגובה זו מאפשרת לשפוט את נוכחותו של וירוס מסוים בחומר הבדיקה.

התגובה מתבצעת במבחנות או על צלחות מיוחדות עם בארות.

החומר שייבדק לנוכחות הנגיף מדולל בתמיסה איזוטונית מ-1:10 עד 1:1280; 0.5 מ"ל מכל דילול מעורבב בנפח שווה של תרחיף אריתרוציטים של 1-2%. בביקורת, 0.5 מ"ל של אריתרוציטים מעורבבים עם 0.5 מ"ל של תמיסה איזוטונית. את המבחנות מכניסים לתרמוסטט למשך 30 דקות, והצלחות נשארות בטמפרטורת החדר למשך 45 דקות.

התחשבנות בתוצאות.עם תוצאה חיובית של התגובה בתחתית המבחנה או הבאר, נופל משקע של אריתרוציטים עם קצוות מסולסלים ("מטריה") המכסה את כל תחתית הבאר.

תגובה לעיכוב ההמגלוטינציה

אם התוצאה שלילית, האריתרוציטים יוצרים משקעים צפופים עם קצוות חלקים ("כפתור"). אותו המשקע צריך להיות בשליטה.

עוצמת התגובה מתבטאת בסימני "+". הטיטר של הנגיף הוא הדילול המקסימלי של החומר שבו מתרחשת אגלוטינציה.

תגובה לעיכוב ההמגלוטינציה

זוהי תגובה סרולוגית שבה נוגדנים אנטי-ויראליים ספציפיים, באינטראקציה עם הנגיף (אנטיגן), מנטרלים אותו ושוללים ממנו את היכולת לצבור תאי דם אדומים, כלומר.

ה. לעכב את תגובת ההמגלוטינציה. תגובה זו מאפשרת לך לקבוע את סוג וסוג הווירוסים.

הגדרת תגובה. 0.25 מ"ל סרום אנטי ויראלימעורבב עם נפח שווה של חומר המכיל את הנגיף. את התערובת מנערים ומניחים בתרמוסטט למשך 30 דקות, ולאחר מכן מוסיפים 0.5 מ"ל של תרחיף אריתרוציטים 1-2%.

התחשבנות בתוצאות.עם ההגדרה הנכונה של הניסוי בבקרת נסיוב ואריתרוציטים, צריך להיווצר "כפתור" - אין גורם שמצמיד אריתרוציטים; בבקרת האנטיגנים נוצרת "מטריה" - הנגיף גרם לאגלוטינציה של אריתרוציטים.

אם הסרום הומולוגי לנגיף הנחקר, נוצר "כפתור" - הסרום ניטרל את הנגיף.

תגובה עקיפה להמגלוטינציה

התגובה של hemagglutination עקיפה (פאסיבית) (RIHA) מבוססת על העובדה שאריתרוציטים, אם אנטיגן מסיס נספג על פני השטח שלהם, רוכשים את היכולת להצטבר בעת אינטראקציה עם נוגדנים לאנטיגן הנספג.

הגדרת תגובה.

הסרום מחומם במשך 30 דקות ב-56 מעלות צלזיוס, מדולל ברצף ביחס של 1:10 - 1:1280 ומוזג למבחנות או בארות ב-0.25 מ"ל, ואז מוסיפים 2 טיפות של אריתרוציטים עם אנטיגנים ספוגים עליהם.

בקרות:תרחיף של אריתרוציטים עם אנטיגנים נספחים עליהם עם סרום חיסוני ברור, תרחיף של אריתרוציטים עם אנטיגנים שנספג עליהם בסרום תקין; השעיה של אריתרוציטים תקינים עם הסרום הנבדק.

בביקורת הראשונה אמורה להתרחש אגלוטינציה, בשנייה ובשלישית היא לא אמורה להיות.

שאלות בקרה.

1. מה מעידה תוצאת RGA חיובית בין אריתרוציטים לחומר שנבדק לנוכחות הנגיף?

2. האם תתרחש תגובת אגלוטינציה של אריתרוציטים אם יתווספו להם וירוס והסרום המתאים לו?

מה שם התגובה שחושפת את התופעה הזו?

עבודה מעשית מס' 12.

תגובה מחייבת משלים.

התגובה הקושרת המשלים (RCT) מבוססת על העובדה שקומפלקס אנטיגן-נוגדנים ספציפי סופח (קושר) משלים על עצמו תמיד.

תגובה זו נמצאת בשימוש נרחב בזיהוי אנטיגנים וסודיאגנוזה של זיהומים, במיוחד מחלות הנגרמות על ידי ספירוצ'טים (תגובת וסרמן), ריקטסי ווירוסים.

PCS היא תגובה סרולוגית מורכבת.

זה כולל משלים ושתי מערכות אנטיגן-נוגדנים. בעיקרו של דבר, אלה שתי תגובות סרולוגיות.

המערכת הבסיסית הימנית מורכבת מאנטיגן ונוגדן (אחד ידוע, השני לא). מתווספת לו כמות מסוימת של השלמה. אם האנטיגן והנוגדן של מערכת זו מתאימים, הם יתחברו ויקשרו מחמאה. הקומפלקס המתקבל מפוזר דק ואינו נראה לעין.

היווצרותו של קומפלקס זה ידועה בעזרת מערכת המוליטית או אינדיקטור שנייה.

הוא כולל אריתרוציטים של כבשים (אנטיגן) והסרום ההמוליטי המתאים להם (נוגדן), כלומר. תסביך חיסוני מוכן. במערכת זו, תמוגה אריתרוציטים יכולה להתרחש רק בנוכחות משלים. אם המשלים קשור למערכת הראשונה, אזי לא תהיה המוליזה במערכת השנייה;

אין משלים בחינם. היעדר המוליזה (תוכן הצינור מעונן או שיש משקע אריתרוציטים בתחתית הצינור) נרשם כתוצאה חיובית של RSK.

אם במערכת הראשונה האנטיגן אינו מתאים לנוגדן, אזי הקומפלקס החיסוני לא נוצר והמחמאה תישאר חופשית. נשאר חופשי, המחמאה משתתפת במערכת השניה, גורמת להמוליזה, התוצאה של RSK היא שלילית (תוכן הצינורות שקוף - "דם לכה").

רכיבים, תגובות קיבוע משלים:

אנטיגן - בדרך כלל ליזאט, תמצית, הפטן,

לעתים רחוקות יותר השעיה של מיקרואורגניזמים.

2. נוגדן - סרום של מטופל.

3. משלים - סרום שפן ניסיונות.

אנטיגן - אריתרוציטים של כבשים.

5. נוגדן - המוליזין לאריתרוציטים של כבשים.

6. תמיסה איזוטונית.

לאור העובדה שה-RSC משתתף מספר גדול שלרכיבים מורכבים,

יש לבצע טיטרציה מראש ולקחת אותם לתוך התגובה בכמויות מדויקות ובנפחים שווים: 0.5 או 0.25 מ"ל, לעתים רחוקות יותר 0.2, 1.25 או 1.0 מ"ל (נפחים גדולים יותר נותנים תוצאה מדויקת יותר). הטיטרציה של מרכיבי התגובה מתבצעת באותו נפח כמו הניסוי, תוך החלפת המרכיבים החסרים בתמיסה איזוטונית.

מידע קשור:

חיפוש אתר:

זה מבוסס על העובדה כי אריתרוציטים, שעליהם אנטיגנים נספגים מראש, רוכשים את היכולת להצטבר בנוכחות סרה הומולוגית (נוגדנים).

במקרה זה, אריתרוציטים ממלאים את התפקיד של נשאים עם דטרמיננטים ספציפיים, שהאגלוטינציה שלהם מתרחשת כתוצאה מתגובת האנטיגן + נוגדן.

אריתרוציטים, שעל פני השטח שלהם אנטיגנים מחוברים בחוזקה, נקראים אנטיגנים אריתרוציטים, או אריתרוציטים שעברו רגישות על ידי אנטיגן.

סוג אחר של RNHA - נוגדנים נספגים על פני האריתרוציטים והצבירה שלהם לאחר מכן מתרחשת בנוכחות אנטיגן הומולוגי.

במקרה זה, אריתרוציטים כאלה נקראים אבחון נוגדן אריתרוציטים, או אריתרוציטים שעברו רגישות על ידי נוגדנים.

על בסיס שתי גישות מתודולוגיות בסיסיות אלו, פותחו שינויים רבים של RNGA ונמצאים בשימוש. אז, חלקיקים סטנדרטיים קטנים של לטקס משמשים כנשאים.

תגובת עיכוב הגלוטינציה (HITA)

במקרה זה, התגובה נקראת תגובת לטקס (RLA) או Staphylococcus aureus משמש - תגובת הקרישה וכו '. בדרך כלל, אבחון אריתרוציטים מוכנים במפעלי תעשייה ביולוגית, והניסיון העיקרי של RNGA כבר נקבע במעבדות אבחון.

הכנת אבחון אריתרוציטים כוללת את השלבים הבאים:

• קיבוע של אריתרוציטים עם פורמלדהיד או אלדהידים גלוטריים או אקריליים.

  אריתרוציטים מעובדים כאלה מאוחסנים במשך זמן רב. לעתים קרובות יותר, אריתרוציטים של כבשים, בני אדם, תרנגולות וכו 'משמשים למטרה זו;

• טיפול באריתרוציטים קבועים עם תמיסת טאנין. כתוצאה מכך, אריתרוציטים רוכשים את המאפיין של ספיגה בלתי הפיכה של חלבונים (וירוסים ונוגדנים) על פני השטח שלהם;
• רגישות של אריתרוציטים מזויפים על ידי וירוסים או נוגדנים.

יש לציין כי השיטות להכנת אבחון אריתרוציטים לזיהומים ויראליים שונים.

הטכניקה להגדרת RNHA לאיתור וקביעת טיטר נוגדנים היא כדלקמן:

• לדילול רציף של פי 2 של סרום הוסף מינונים שווים של אריתרוציטים שעברו רגישות על ידי אנטיגן;
• משאירים את התערובת למשך 2-3 שעות בטמפרטורת החדר או למשך 16-18 שעות ב-4 מעלות צלזיוס;
• לקחת בחשבון את התוצאות.

  אם הסרום מכיל נוגדנים לנגיף שאיתו נרשמו אריתרוציטים, נצפה בהמגלוטינציה, המוערכת בהצלבות.

טיטר נוגדני סרום נלקח כדילול הגבוה ביותר של סרום שעדיין מספק המגלוטינציה בשני הצלבות לפחות.

RNGA מלווה בכל הבקרות הרלוונטיות. בדרך כלל הם מכניסים את התגובה לפי שיטת המיקרו.

RNHA מאפשר לפתור את משימות האבחון הבאות:

• לזהות נוגדנים ולקבוע את הטיטר שלהם בסרום הדם באמצעות אבחון אנטיגני אריתרוציטים ידוע;
• לזהות ולזהות וירוס לא ידוע באמצעות אבחון נוגדן אריתרוציטים ידוע.

יתרונות RNGA: רגישות גבוהה, טכניקת הגדרה קלה ותגובה מהירה.

עם זאת, חשוב לציין שקיימים קשיים גדולים בהכנת אבחוני אריתרוציטים יציבים (תלות רבה בטוהר הרכיבים המשמשים, הצורך בבחירת אופן הקיבוע, השיזוף וסנסיטיזציה של אריתרוציטים לכל סוג וירוס) .

אם אתה מוצא שגיאה, אנא בחר קטע טקסט והקש Ctrl+Enter.

בקשר עם

חברים לכיתה

הוא משתמש באריתרוציטים או בחומרים סינתטיים ניטרליים (לדוגמה, חלקיקי לטקס), שעל פני השטח שלהם נספגים אנטיגנים (חיידקים, ויראליים, רקמה) או נוגדנים.

הצבירה שלהם מתרחשת כאשר מוסיפים את הסרום או האנטיגנים המתאימים. RBCs עם רגישות לאנטיגנים נקראים אנטיגנים אריתרוציטים אנטיגנים ומשמשים לאיתור וטיטרציה של נוגדנים. אריתרוציטים רגישים לנוגדנים. נקראים אימונוגלובולינים אריתרוציטים diagnosticums ומשמשים לאיתור אנטיגנים.

תגובת ההמגלוטינציה הפסיבית משמשת לאבחון מחלות הנגרמות על ידי חיידקים (קדחת טיפוס ופארטיפוס, דיזנטריה, ברוצלוזיס, מגיפה, כולרה וכו'), פרוטוזואה (מלריה) ווירוסים (שפעת, זיהומים של אדנוווירוס, צהבת ויראלית B, חצבת, דלקת מוח קרציות, קרים קדחת דימומיתוכו '), כמו גם כדי לקבוע כמה הורמונים, לזהות רגישות יתרחולה ל תרופותוהורמונים כמו פניצילין ואינסולין.

התגובה של המאגלוטינציה פסיבית (RPHA).

בדיקת ההמגלוטינציה הפסיבית היא שיטה רגישה לאבחון סרולוגי ומשמשת הן לאבחון מוקדם והן בדיעבד, וכן לקביעת המצב האימונולוגי של מחוסנים. בחולים עם טולרמיה, נוגדנים מתגלים בדרך כלל בסוף השבוע ה-1 או ה-2 למחלה, לאחר 1-1.5 חודשים מגיעים ה-TPHA לערכים המקסימליים שלהם (1:100,000-1:20,000, לעתים רחוקות יותר), לאחר מכן הם יורדים ברמה 1:100-1:200 נמשכים לאורך זמן.

אצל המחוסנים מתגלים גם נוגדנים כל הזמן, אולם בטיטרים נמוכים יותר, שאינם עולים על 1:2000-1:5000 1-1.5 חודשים לאחר החיסון, הם נשארים מספר שנים ברמה נמוכה של 1:20-1:80.

tularemia erythrocyte diagnosticum (אנטיגן) משמש כאנטיגן לקביעת RPHA.

התרופה היא אריתרוציטים ראם פורמלין עם רגישות לאנטיגן tularemia, זמין בצורה נוזלית ויבשה. תכשיר נוזלי - תרחיף 10% של אריתרוציטים בתמיסת פורמלין בריכוז 10%. תכשיר ליאופיל יבש - תרחיף 10% מיובש בוואקום של אריתרוציטים ללא חומר משמר. לפני השימוש, הוא מדולל לפי ההוראות על התווית. להגדרת התגובה בפלטות פוליסטירן משתמשים בשני התכשירים בריכוז של 2.5%, ובהגדרת התגובה במיקרו-נפחים בריכוז של 0.5%.

טכניקת הגדרת RPGA.

סרום הבדיקה מדוללים מִלְחִית 1:5 (1:10) ומחומם ל-56 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.

תגובה להמגלוטינציה (RHA) ו

לאחר מכן, על מנת להסיר נוגדנים הטרוגניים לאדם אריתרוציטים של ראם, מטופלים בסרום עם תרחיף של 50% של אריתרוציטים ראם פורמליים. לשם כך, מוסיפים אריתרוציטים בקצב של 2 טיפות (0.05 מ"ל) לכל 1 מ"ל של סרום ומערבבים היטב על ידי ניעור.

סרום נשאר עד לשקיעה מלאה של אריתרוציטים, או בצנטריפוגה לאחר שעה בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן הוא מוכן למחקר.

נוזל הדילול מוזג בנפח של 0.5 מ"ל למספר בארות של צלחת פוליסטירן.

במחקר מקדים של סרה, רצוי לבדוק אותם על ידי הגדרת התגובה בשורה קצרה של הצלחת (6 חורים). במקרה של גילוי נוגדנים בסדרה קצרה של סרה, הסרה נבדקת מחדש בסדרה ארוכה של דילולים (12 בארות).

לאחר שפיכת נוזל הדילול, מוסיפים לבאר הראשונה של כל שורה (קצרה או ארוכה) 0.5 מ"ל מהסרה הנבדקת בדילול 1:5. לאחר מכן, באותם נפחים, הסרום עובר טיטרציה בדילול פי שניים. כך מתקבלים דילולים בסרום בסדרה קצרה מ-1:10 עד 1:320, ובסדרה ארוכה - מ-1:10 עד 1:20480. לאחר טיטרציה של הסרה, מוסיפים טיפה אחת (0.05 מ"ל) של תרחיף 2.5% פועל של אריתרוציטים רגישים לכל באר.

תכולת הצלחות מנערת היטב עד לקבלת תרחיף הומוגני. את הצלחות משאירים בטמפרטורת החדר על משטח נייח של השולחן. רישום ראשוני של התגובה מתבצע לאחר 2-3 שעות, הקביעה הסופית של הטיטר מתבצעת לאחר שקיעה מלאה של אריתרוציטים בבארות. הבקרות הבאות מסופקות עבור התגובה: 1) בדיקת סרום בדילול של 1:10 בנפח של 0.5 מ"ל + טיפה אחת של תרחיף 2.5% של אריתרוציטים לא רגישים; 2) נוזל דילול בנפח של 0.5 מ"ל + טיפה אחת של תרחיף 2.5% של אריתרוציטים לא רגישים; 3) דילול נוזל בנפח של 0.5 מ"ל + טיפה אחת של תרחיף 2.5% של אריתרוציטים רגישים.

כל הפקדים צריכים לתת תגובה שלילית ברורה.

חשבונאות והערכה של RPGA. התגובה מוערכת לפי הסכמה הבאה:

1) תגובה חיובית חדה (++++) - אריתרוציטים נופלים לתחתית הבאר בשכבה אחידה בצורת "מטריה", שלעתים קרובות יש לה קצוות מסולסלים;

2) תגובה חיובית (+++) - אריתרוציטים מכסים לפחות 2/3 מחלק התחתון של החור;

3) תגובה חיובית חלשה (++) - האגלוטינאט קטן וממוקם ממש במרכז החור;

4) תגובה מפוקפקת (+) - ישנם גרגירים נפרדים של אגלוטינט מסביב למשקע האריתרוציטים ממש במרכז החור;

5) שלילי (-) - בתחתית החור, אריתרוציטים מתיישבים בצורה של "כפתור" או טבעת קטנה עם קצוות חלקים ומוגדרים בחדות.

טיטר הסרום נלקח בחשבון לפי דילול הסרום האחרון, שנתן תגובה מאוד ברורה (לפחות שלושה פלוסים).

דילול של 1:100 ומעלה נחשב לטיטר אבחנתי, אולם, כמו במקרה של RA, יש צורך לעקוב אחר עלייתו.

TPHA בטולרמיה הוא די ספציפי ומזהה כמה תגובות צולבות רק עם סרה של ברוצלוזיס. אבחון דיפרנציאליאפשרי לפי גובה הטיטרים ב-TPHA, שהם הרבה יותר גבוהים עם אנטיגן הומולוגי.

טכניקת הגדרת RPHA במיקרו-נפחים.

ניתן לבצע RPHA במיקרו-נפחים באמצעות מיקרוטיטר מסוג Takachi (או צלחות מיקרוטיטר תחתונות עגולות עם מיקרופיפטות), המאפשר טיטרציה של חומר בנפחים של 25 μl ו- 50 μl. הטכניקה של הגדרת תגובות, רצף כל הפעולות זהה למחקר בצלחות פוליסטירן. עם זאת, יש לזכור כי הרגישות של שיטת המיקרו היא בדרך כלל לפי דילול (כלומר.

פי 2) נמוך משיטת המאקרו.

כדי להגדיר את התגובה במיקרוטיטר באמצעות טפטפת פיפטה, נוזל דילול מוכנס לכל באר בנפח של 50 μl. לאחר מכן, באמצעות טיטרטורים עם ראש של 50 μl, סרום הבדיקה נלקח על ידי טבילת הראש לתוכו.

ודא שהנוזל מילא את ראש הטיטרטור. הטיטרטור עם הסרום מועבר לבאר הראשונה ומחזיקים אותו במצב זקוף, יוצרים כמה תנועות סיבוביותנסיעה הלוך ושוב. לאחר מכן הטיטרטור מועבר לבאר הבאה והמניפולציה חוזרת על עצמה. ניתן לבצע טיטרציה בו זמנית במספר שורות. לאחר טיטרציה של כל השורה, הטיטרטור נשטף במים מזוקקים (בשינוי של 2 מנות) באמצעות תנועות סיבוביות, מסירים מים מהראש בעזרת ספוגית ונשרפים על להבת מבער.

לאחר טיטרציה, 25 μl של אריתרוציטים diagnosticum מתווספים לבארות.

ריכוז האבחון ל-RPHA במיקרו-נפחים צריך להיות 0.5% (כלומר, השעיה של 2.5% של אריתרוציטים מדולל בנוסף 5 פעמים). לאחר הוספת אריתרוציטים, יש לנער את הצלחות בעדינות עד לקבלת תרחיף הומוגנית. ניתן לרשום תוצאות כבר לאחר 1-1.5 שעות, וזה יתרון משמעותי של RPHA במיקרוטיטר.

בנוסף, שיטה זו דורשת כמות קטנה של כל מרכיבי התגובה והסרה הבדיקה.

התגובה מסומנת באופן הבא:

1) "+" - המאגלוטינציה מלאה, שבה אריתרוציטים נופלים לתחתית הבאר בשכבה אחידה בצורת "מטריה", התופסת לפחות 2/3 מהקרקעית;

2) "+ -" - hemagglutination חלקי, שבו אריתרוציטים נופלים לתחתית בצורה של טבעת רופפת בגודל קטן;

3) "-" - היעדר hemagglutination, כאשר אריתרוציטים נופלים לתחתית בצורה של כפתור קטן או טבעת עם קצה חלק.

ספֵּצִיפִיוּת תוצאה חיוביתהמתקבל ב-TPHA ניתן לבדוק באמצעות ריאקציה תלת-מרכיבית - תגובה של עיכוב ההמגלוטינציה פסיבית (RPHA).

טכניקת הגדרת RTPGA.

תגובה זו מיועדת לאשר את הספציפיות של תוצאה חיובית של RPHA כאשר היא מוטלת בספק או בעלת עניין אפידמיולוגי מיוחד. מנגנון התגובה מורכב מעיכוב ספציפי של ההמגלוטינציה כאשר מוסיפים תרחיף של חיידקי טולרמיה שנרצחו לסרום הבדיקה. שלושה מרכיבים מקיימים אינטראקציה בתגובה: סרום הבדיקה, האנטיגן הספציפי של tularemia וה-RTPGA אריתרוציטים אנטיגני ממוקמים בדרך כלל בשורה של 7-8 בארות.

רצוי להתקין RPHA שני במקביל ל-RTPGA. 0.25 מ"ל של נוזל דילול יוצקים לשתי שורות של בארות, לאחר מכן מוסיפים את סרום הבדיקה בנפח של 0.25 מ"ל לבארות הראשונות של שתי השורות ומטטרלים. מתקבלות שתי שורות זהות של דילול סרום. הוסף 0.25 מ"ל של נוזל דילול לכל בארות השורה השנייה, ו-0.25 מ"ל תרחיף של חיידקי טולרמיה לבארות השורה הראשונה.

נעשה שימוש ב-Tularemia diagnosticum (המכיל 25 מיליארד חיידקי טולרמיה ל-1 מ"ל), שדוללו בעבר 50 פעמים.

תרחיף כזה מכיל 500 מיליון חיידקים ב-1 מ"ל או 125 מיליון בנפח של 0.25 מ"ל. לאחר הוספת האנטיגן, הצלחת נשארת למשך שעה בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן מוסיפה טיפה אחת (0.05 מ"ל) של אריתרוציטים דיאגנוסטיקום לכל בארות שתי השורות, הצלחת מנערת ומשאירה על משטח שטוח של השולחן.

הנהלת חשבונות מתבצעת תוך 2-3 שעות.

חשבונאות והערכה של RTPGA. אם סרום הבדיקה מכיל נוגדנים ספציפיים לטולרמיה, הם מנוטרלים על ידי האנטיגן הנוסף וההמגלוטינציה לא תתרחש בשורה הראשונה של בארות, או, עם טיטר סרום גבוה, ההמגלוטינציה תופיע בפחות (2-4) בארות מאשר ב השורה עם TPHA. במקרה זה, הספציפיות של התוצאות מאושרת.

אם מציינים hemagglutination בשתי השורות, כלומר. התוצאות של RTHA ו- RPHA חופפות, זה מצביע על היעדר נוגדנים לטולרמיה בסרום הבדיקה. במקרה זה, התוצאה העיקרית של RPHA נחשבת לא ספציפית.

טכניקה להגדרת RTPGA בנפחי מיקרו. RTHA, כמו גם RPHA, ניתן לבצע במיקרו-נפחים באמצעות מיקרוטיטר מסוג Takachi.

לשם כך, 0.25 μl של נוזל דילול מתווסף לבארות של microplates בשתי שורות של 7-8 בארות כל אחת. לאחר מכן, בעזרת טיטרטור, 0.25 μl מהסרום הנבדק נמדד ומטטר בשתי השורות. לאחר מכן, מוסיפים לכל באר בשורה הראשונה 25 μl של אנטיגן טולרמיה (שריכוזו הוא 500 מיליון חיידקי טולרמיה ב-1 מ"ל), ו-25 μl של נוזל דילול בשורה השנייה.

הצלחות נשארות למשך שעה בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן מוסיפים 25 μl של אריתרוציטים אנטיגני (ריכוז 0.5%) לכל בארות שתי השורות.

חשבונאות והערכה של התוצאות מתבצעות בדומה לתגובה בנפחי מאקרו.

תאריך פרסום: 2015-02-03; קראו: 3176 | הפרת זכויות יוצרים בדף

studopedia.org - Studopedia.Org - 2014-2018. (0.003 שניות) ...

תגובה של וידאל. מהשבוע השני של המחלה, נוגדנים נגד הגורם הזיהומי מצטברים בדמם של החולים. כדי לזהות אותם, נבדק סרום הדם של המטופל בתגובת האגלוטינציה. תרביות סלמונלה מומתות - דיאגנוסטיקום - משמשות כאנטיגן.

כדי להגדיר את התגובה של Vidal, נעשה שימוש בסרום של המטופל, סט של ערכות אבחון ותמיסת נתרן כלוריד איזוטונית.

דם (2-3 מ"ל) מעיסת האצבע או הווריד הקוביטלי נאסף בצינור סטרילי ומועבר למעבדה. במעבדה מכניסים את המבחנה לתרמוסטט למשך 20-30 דקות ליצירת קריש, לאחר מכן מקיפים את הקריש בעזרת פיפטת פסטר להפרדה מדופן המבחנה ומניחים אותו בקור למשך 30- 40 דקות. הסרום המופרד נשאב ומשמש ליצירת תגובת אגלוטינציה עם אבחונים מסלמונלה טיפוס ופארטיפוס. כדי להשיג סרום, ניתן לצנטרל דם.

מתי תהליך זיהומי- טיפוס טיפוס או קדחת פארטיפוס - נוגדני O ו-H לאנטיגנים הפתוגנים באותו השם מיוצרים בגוף.

נוגדני O מופיעים ראשונים ונעלמים די מהר. נוגדני H נמשכים לאורך זמן. אותו דבר קורה במהלך החיסון, לכן, תגובה חיובית של וידאל עם אנטיגנים O ו-H מצביעה על נוכחות של מחלה, ותגובה עם אנטיגנים H בלבד יכולה להיות גם אצל אלו שהיו חולים (תגובה אנמנסטית) וגם ב מי שחוסנו (חיסון). בהתבסס על זה, תגובת Vidal ממוקמת בנפרד עם O- ו-H-אנטיגנים (דיאגנוסטיקומים).

מאחר וקדחת הטיפוס הקלינית וקדחת הפארטיפוס A ו-B דומות, כדי לזהות את אופי המחלה, הנסיוב של החולה נבדק במקביל לאבחונים של סלמונלה טיפוס וקדחת פארטיפוס A ו-B.

תגובת Vidal נמצאת בשימוש נרחב מכיוון שהיא פשוטה ואינה דורשת תנאים מיוחדים.

ישנן שתי דרכים להגדיר את התגובה: ירידה ונפח (ראה פרק 12). בפועל, השיטה הנפחית משמשת לעתים קרובות יותר. בעת הגדרת תגובת אגלוטינציה ליניארית, מספר השורות צריך להתאים למספר האנטיגנים (דיאגנוסטיקום). הגורם הסיבתי של המחלה נחשב למיקרואורגניזם, שהאבחון ממנו הצטבר על ידי הסרום של החולה. לפעמים מציינת אגלוטינציה קבוצתית, שכן לגורמים הסיבתיים של קדחת טיפוס ופארטיפוס יש אנטיגנים משותפים בקבוצה. במקרה זה, תוצאת התגובה בסדרה שבה מצוינת אגלוטינציה בדילול גדול יותר של סרום נחשבת לחיובית (טבלה 36).

טבלה 36. תוצאה אפשרית של תגובת האגלוטינציה

הערה. בפועל, התגובה של וידאל מופעלת עם ארבעה אבחונים: טיפוס טיפוס "O" ו-"H", ופארטיפוס A ו-B - עם אבחנה "OH".

אם הצבירה מתרחשת רק בדילולים קטנים של סרום - 1:100, 1:200, אז כדי להבחין בין התגובה במקרה של מחלה לחיסון או אנמנסטי, הם פונים לשלב מחדש את תגובת הצבירה לאחר 5-7 ימים. בחולה, טיטר הנוגדנים עולה, אך אצל חולה מחוסן או החלים הוא אינו משתנה. לפיכך, עלייה בטיטר של נוגדנים בסרום הדם משמשת כאינדיקטור למחלה.

Vi-agglutinins מופיעים בדמו של החולה בתגובה להחדרת פתוגנים של טיפוס הבטן המחזיקים את Vi-antigen לגוף. הם נקבעים מהשבוע השני למחלה, אך הטיטר שלהם בדרך כלל אינו עולה על 1:10. גילוי נוגדני Vi קשור להימצאות פתוגנים של טיפוס הבטן בגוף, ולכן לקביעת נוגדנים אלו חשיבות אפידמיולוגית רבה, שכן היא מאפשרת לזהות נשאי חיידקים.

תגובת Vi-hemagglutination. זוהי התגובה הרגישה ביותר לאיתור נוגדנים.

עיקרון התגובה הוא שאריתרוציטים אנושיים (קבוצה I) או כבשים, לאחר טיפול מיוחד, יכולים לספוח את האנטיגן Vi על פני השטח שלהם ולרכוש את היכולת להצטבר עם נוגדני ה-Vi המקבילים.

אריתרוציטים עם אנטיגנים הנספגים על פני השטח נקראים אבחוני אריתרוציטים.

כדי להגדיר את תגובת Vi-hemagglutination, קח:

1) סרום הדם של המטופל (1-2 מ"ל); 2) אריתרוציט Salmonella Vi diagnosticum; ח) וי-סרום; 4) סרום O; 5) תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית.

התגובה ממוקמת במבחנות אגלוטינציה או בצלחות פלסטיק עם בארות.

דם נלקח מהמטופל באותו אופן כמו לתגובת Vidal. קח את הסרום. דילולים סדרתיים כפולים מוכנים מסרום, החל מ-1:10 עד 1:160.

0.5 מ"ל מכל דילול מתווספים לבאר ומוסיפים 0.25 מ"ל של אבחון אריתרוציטים. התגובה מוכנסת לנפח של 0.75 מ"ל.

הבקרות הן: 1) סרום מונורצפטור סטנדרטי + דיאגנוסטיקום - התגובה חייבת להיות חיובית עד לטיטר הסרום; 2) דיאגנוסטיקום בתמיסת נתרן כלוריד איזוטונית (בקרה) - התגובה צריכה להיות שלילית.

תכולת הבארות מעורבבת היטב, מכניסה לתרמוסטט למשך שעתיים ומשאירה בטמפרטורת החדר עד למחרת (למשך 18-24 שעות).

הנהלת חשבונות מתחילה בשליטה. התגובה מוערכת בהתאם לדרגת צפיפות האבחון.

התוצאות נלקחות בחשבון על פי מערכת ארבעת הצלבים:

אריתרוציטים צמודים לחלוטין - משקעים בתחתית החור בצורה של "מטריה";

+++ "מטריה" קטנה יותר, לא כל האריתרוציטים היו צמודים;

++ "מטריה" קטנה, בתחתית החור יש משקעים של אריתרוציטים לא צמודים;

התגובה שלילית; אריתרוציטים לא הצטברו והתיישבו בתחתית הבאר בצורה של כפתור.

שאלות בקרה

1. באיזו תקופה של המחלה מאובחנת תגובת וידאל?

2. אילו מרכיבים נדרשים לביצוע תגובת וידאל?

3. באילו אבחונים משתמשים לתגובה של וידאל?

4. איזו מהתגובות הסרולוגיות היא הרגישה ביותר באבחון דלקות טיפוס ופארטיפוס?

5. באיזה אבחון משתמשים בניסוח תגובת Vi-hemagglutination?

6. באיזה סרום משתמשים כדי לקבוע את נוכחות ה-Vi-antigen בתרבית הנחקרת?

7. מהי המשמעות של ההגדרה של סוג Vi-phage?

קח מהמורה O- ו-H-diagnosticums מסלמונלה טיפוס, פארטיפוס A ופארטיפוס B וסרום המטופל. שים את התגובה של וידאל.

מדיה תזונתית

סביבות EMS, Ploskirev, אגר ביסמוט-סולפיט מיוצרים על ידי התעשייה הרפואית בצורה של אבקה יבשה. הם מוכנים לפי ההוראות על התווית: כמות מסוימת של אבקה נשקללת, כמות המים המתאימה נמזגת, מבושלת ויוצקת לכלי פטרי סטריליים.

יום רביעי ראסל. ב-950 מ"ל מים מזוקקים הוסיפו 40 גרם מדיום תזונתי יבש והוסיפו 5 גרם אגר מזין. מחממים לרתיחה וממיסים את האבקות. ממיסים 1 גרם x ב-50 מ"ל מים מזוקקים. שעות של גלוקוז והוסיפו לתערובת המוכנה. המדיום מוזג למבחנות סטריליות של 5-7 מ"ל, מעוקרות באדים זורמים (יומיים למשך 2 דקות) ומשופעים כך שנשאר עמודה. מדיום ראסל עם מניטול וסוכרוז מוכן באותו אופן.

מדיום של אולקניצקי מאגר יבש. 2.5 גרם של אגר תזונתי יבש מומס ב-100 מ"ל מים מזוקקים. כל המרכיבים המצוינים במתכון (תווית) מוסיפים לאגר מקורר ל-50 מעלות צלזיוס. המדיום שנשפך למבחנות מעוקר עם קיטור זורם (3 ימים למשך 20 דקות) ולאחר מכן משופע. המדיום המוגמר צריך להיות בצבע ורוד חיוור.

תגובה לעיכוב ההמגלוטינציה

תגובת ההמגלוטינציה

תגובת צבירה

תגובת האגלוטינציה (RA) היא צבירה ומשקעים של חיידקים או תאים אחרים תחת פעולת נוגדנים בנוכחות אלקטרוליט (תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית). המשקע שנוצר נקרא להצטבר.

לתגובה אתה צריך:

1. נוגדנים (אגלוטינינים) - נמצאים בסרום המטופל או בסרום החיסוני.

2. אנטיגן - תרחיף של מיקרואורגניזמים חיים או מומתים, אריתרוציטים או תאים אחרים.

3. תמיסה איזוטונית.

בדיקת הצבירה לסרודיאגנוזיס נמצאת בשימוש נרחב ב קדחת טיפוס, פארטיפוס (תגובה וידאלית), ברוצלוזיס (תגובת רייט) וכו'. הנוגדן במקרה זה הוא הסרום של המטופל, והאנטיגן הוא חיידק ידוע.

כאשר מזוהים חיידקים או תאים אחרים, ההשעיה שלהם משמשת כאנטיגן, וסרום חיסון ידוע משמש כנוגדן. תגובה זו נמצאת בשימוש נרחב באבחון דלקות מעיים, שעלת וכו'.

במעבדה משתמשים בשתי תגובות המגלוטינציה (RHA), השונות במנגנון הפעולה שלהן.

RGA ראשוןמתייחס לסרולוגיה. בתגובה זו, אריתרוציטים נאגרים בעת אינטראקציה עם הנוגדנים המתאימים (המגלוטינינים). התגובה נמצאת בשימוש נרחב לקביעת קבוצות דם.

RGA שניאינו סרולוגי. בו, הדבקה של תאי דם אדומים נגרמת לא על ידי נוגדנים, אלא על ידי חומרים מיוחדים שנוצרים על ידי וירוסים. לדוגמה, נגיף השפעת מצמיד את אריתרוציטים של תרנגולות וחזירים, נגיף הפוליו מצמיד את אריתרוציטים של כבשים. תגובה זו מאפשרת לשפוט את נוכחותו של וירוס מסוים בחומר הבדיקה.

זוהי תגובה סרולוגית שבה נוגדנים אנטי-ויראליים ספציפיים, המקיימים אינטראקציה עם הנגיף (אנטיגן), מנטרלים אותו ומונעים ממנו את היכולת לצבור תאי דם אדומים, כלומר לעכב את תגובת ההמגלוטינציה. הספציפיות הגבוהה של תגובת עיכוב ההמגלוטינציה (HITA) מאפשרת באמצעותה לקבוע את סוג ואף את סוג הנגיפים המתגלים במהלך ה-HA.

התגובה של hemagglutination עקיפה (פאסיבית) (RIHA) מבוססת על העובדה שאריתרוציטים, אם אנטיגן מסיס נספג על פני השטח שלהם, רוכשים את היכולת להצטבר בעת אינטראקציה עם נוגדנים לאנטיגן הנספג. סכימת RNGA מוצגת באיור. RNHA נמצא בשימוש נרחב באבחון של מספר זיהומים.

אורז.תכנית התגובה של המאגלוטינציה פסיבית (RPHA). א - קבלת אבחון אריתרוציטים; B - RNGA: 1-אריתרוציט: 2 - האנטיגן הנחקר; 3 - אבחון אריתרוציטים; 4 - נוגדן לאנטיגן הנחקר: 5 - אגלוטינאט.

בעזרת RNHA ניתן לקבוע אנטיגן לא ידוע אם נוגדנים ידועים נספגים על אריתרוציטים.

תגובה להמגלוטינציה (RHA)

RGA מבוסס על העובדה שלכמה סוגים של חיידקים ווירוסים יש את היכולת לספוח על פני השטח של תאי דם אדומים. סוגים שוניםבעלי חיים (וציפורים), מה שגורם להם להיצמד זה לזה וליצור אגרטלים (RGA ישיר).

ספיחה של אנטיגן (חיידקים, וירוסים) על פני השטח של אריתרוציטים לא תמיד מתבטאת ביצירת משקע גלוי; בנוסף, RGA אינו ספציפי, מכיוון שאריתרוציטים מאותו מין בעלי חיים יכולים לספוג אנטיגנים שונים.

התגובה של hemagglutination פסיבית (עקיפה) (RPHA) היא ספציפית. לקביעתו, מכינים מראש אבחון אריתרוציטים (אריתרוציטים שעליהם נספג האנטיגן). לשם כך, דם ראם (או תרנגול) מתקבל באופן סטרילי, דה-פיברין ונשטף מספר פעמים בתמיסת חיץ פוספט (pH 7.2) באמצעות צנטריפוגה פי 3-5. הסופרנטנט מוסר, ריכוז האריתרוציטים מותאם ל-2.5% (1:40). לתרחיף של 2.5% של אריתרוציטים מתווסף בנפח שווה (1 מ"ל או 0.5 מ"ל) תרחיף של חיידקים ממין החיידקים הנחקרים בריכוז של 5-10 מיליארד תאים ל-1 מ"ל. אריתרוציטים סופחים בקלות את האנטיגן בעל אופי פוליסכריד. כדי לספוח את האנטיגן בעל אופי חלבוני, אריתרוציטים מטופלים מראש בטאנין בדילול של 1:20,000. האריתרוציטים בשילוב עם האנטיגן המוסף נשארים לרגישות (ספיחה) למשך שעתיים בתרמוסטט (37 מעלות צלזיוס). , לאחר מכן צנטריפוגה שוב ב-3-4 אלף סל"ד לדקה למשך 5 דקות עם תמיסת חיץ פוספט (איור 9.13).

אבחון אריתרוציטים שנוצר מונח במבחנות (או בארות בלוח פרספקס) ומוסיפים לו סרום חיסוני סטנדרטי.

במקרים חיוביים יתרחש RGA - אובדן אריתרוציטים בצורה של משקע מתקלף או גרגירי אופייני המופץ על פני כל פני השטח של תחתית המבחנה (hemagglutinate). משמעות הדבר היא שסוג החיידק (אנטיגן) הנחקר הוא ספציפי לנוגדני האימונוזרום. במקרים שליליים, תאי דם אדומים לא מודבקים ישקעו לתחתית בצורה של עיגול קטן אחיד.

לאמינות רבה יותר של התוצאות של RPGA, עיכוב תגובה(בְּלִימָה) תופעת המגלוטינציה(RZGA) או השינוי שלו - תגובה לנטרול נוגדנים(RIA).

אורז. 9.13. תגובת המוגלוטינציה פסיבית (סכמה): Er - אריתרוציטים: AG - אנטיגן: AT - נוגדן

המהות של ה-RZGAמורכב מהעובדה שתגובת האגלוטינציה נקבעת עם סרום אבחוני ספציפי והאנטיגן שנבדק (סוג החיידק הנחקר משמש כאנטיגן). תערובת זו נשמרת במשך 1-2 שעות ב-37 מעלות צלזיוס, ואז מוסיפים אריתרוציטים. אם האנטיגן הנבדק הומולוגי לנוגדני הסרום האבחנתי, הם מקיימים אינטראקציה זה עם זה והאריתרוציטים שנוספו אינם מתאגרים - תוצאת התגובה חיובית. אם האנטיגן הנבדק אינו הומולוגי לנוגדנים בסרום או שהוא אינו כלול בחומר, אזי האריתרוציטים שנוספו סופחים את האנטיגן ומתרחשת RHA - התוצאה של RHA שלילית, סוג החיידק (האנטיגן) הנבדק לא נקבע.

שיטת הגדרת PH Aהוא שהם לוקחים בנפחים שווים ומערבבים איתו את הסרום החיסוני האבחוני דילולים שוניםמהחומר הנבדק (אנטיגן רצוי), השאר למגע למשך 1-2 שעות, ואז הוסף אריתרוציטים בעלי רגישות לאנטיגן מסוים (ידוע) ספציפי לנוגדנים בסרום (אריתרוציטים דיאגנוסטיקום). כאשר האנטיגן הרצוי מגיב עם נוגדנים בסרום, הם מנוטרלים והאריתרוציטים שנוספו אינם מתאגרפים, RHA אינו מתרחש - תוצאת PHA חיובית. אם חומר הבדיקה אינו מכיל אנטיגן ספציפי לנוגדנים של הסרום בו נעשה שימוש, לא יהיה נטרול של הנוגדנים. לכן, כאשר מתווסף אבחון אריתרוציטים, מופיעה אגלוטינציה של אריתרוציטים (המגלוטינציה), והתוצאה של RHA שלילית. בדיקת נטרול הנוגדנים היא שיטה רגישה ביותר לגילוי אנטיגן לא רק בתרחיף של חיידקים חיים (או מומתים), אלא גם בתרחיף של רקמת קרקע של איברים שונים, הפרשות מקומיות ומחוממות והפרשות של אורגניזם חולה.