תגובות חיסוניות. יישום של תגובות חיסוניות באבחון מחלות מדבקות.

לְתַכְנֵן:

סוגי תגובות חיסוניות.

תנאים לביצוע תגובות סרולוגיות.

דרישות סרום.

הרעיון של תוצאות חיוביות ושליליות.

תוכן עיקרי:

סוגי תגובות חיסוניות.

תגובה אימונולוגית – זוהי האינטראקציה של אנטיגן עם נוגדן, אשר נקבעת על ידי האינטראקציה הספציפית של המרכזים הפעילים של הנוגדן (פאראטופ) עם אפיטופים של אנטיגן.

סיווג כללי של תגובות אימונולוגיות:

תגובות סרולוגיות - תגובות בין אנטיגנים (Ag) לנוגדנים (Ig)

בַּמַבחֵנָה ;

תגובות תאיות בהשתתפות תאים בעלי יכולת חיסונית;

בדיקות אלרגיות - זיהוי של רגישות יתר.

תגובות סרולוגיות: 1) הגדרה, 2) שלבים, 3) הגדרת מטרות, 4) סיווג כללי.

1) הגדרה

שיטות סרולוגיותמחקר (מ-Lat. Serum - סרום ולוגו - הוראה) תוך שימוש בתגובת אנטיגן-נוגדנים.

2) שלבים

2 שלבים של אינטראקציה:

אני. ספֵּצִיפִי (גלוי) - מגיע במהירות, נוגדנים מתחברים עם האנטיגנים המתאימים להם. קבוצות דטרמיננטיות של אנטיגנים (AG) ומרכזים פעילים של נוגדנים (AT) מתקשרות בשלב זה.

הכוחות המעורבים ביצירת מתחם AG + AT הם:

קולומב;

ואן דר ואלס

קשרי מימן.

בשלב זה אין שינויים גלויים. במיקרוסקופ אלקטרוני, המורכב AG + AT בצורה של סריג.

II. לא ספציפי - מגיע לאט, קומפלקס האנטיגן-נוגדנים שנוצר מגיב עם גורם לא ספציפי נוסף של הסביבה בה מתרחשת התגובה, וזה גלוי לעין - הדבקה, פירוק, משקעים של פתיתים וכו'. אלקטרוליט, המטען יורד, המסיסות יורדת, קונגלומרטים גלויים נוצרים משקעים (אגלוטינאט).

3) הגדרת מטרות :

א) כדי לזהות את האנטיגן (נוגדן ידוע-סרום אבחון):

• בחומר פתולוגי (אבחון מפורש);

  בתרבות טהורה:

  1. זיהוי סרולוגי (זיהוי מינים);

     סרוטיפינג (קביעת סרובר) - קביעת זן;

ב) כדי לזהות נוגדנים (Ig) (אנטיגן ידוע-דיאגנוסטיקום):

• נוכחות (תגובות איכותיות);

  כמות (עלייה בטיטר - השיטה של ​​"סרה מזווגת").

4) סיווג כללי תגובות סרולוגיות :

א) פשוט (2-רכיבים: Ag + Ig):

תגובות אגלוטינציה של RA (עם אנטיגן גופי);

תגובות משקעים RP (עם אנטיגן מסיס);

ב) קומפלקס (3-רכיבים: Ag + Ig + C);

ג) באמצעות תווית.

גרסאות של התגובה של צבירה ומשקעים

תגובת צבירה :

תגובת צבירה (RA) - תגובה חיסוניתאינטראקציה של השעיה של AG (אריתרוציטים, חיידקים) עם AT ב מי מלח פיזיולוגי.

במהלך הצבירה, חלקיקי AT נצמדים זה לזה עם היווצרות של משקעים פלקולנטים.

תְגוּבָה המאגלוטינציה פסיבית(RPHA) הוא סוג של תגובת אגלוטינציה שבה נעשה שימוש בנוגדן או באבחנה אנטיגני של אריתרוציטים (אריתרוציטים עם AT או AG ספוג על פני השטח שלהם).

אריתרוציטים בתגובה זו פועלים כנשאים פסיביים.

הערכת תוצאות ה-RPGA מתבצעת באופן הבא:

- בְּ- תגובה חיובית אריתרוציטים מודבקים באופן פסיבי מכסים את החלק התחתון של החור בצורת U או V בשכבה אחידה עם קצוות מסולסלים ("מטריה");

- בְּ- תְגוּבָה חֲרִיפָה (חוסר אגלוטינציה), אריתרוציטים מצטברים בשקע המרכזי של החור, ויוצרים "כפתור" קומפקטי עם קצוות מוגדרים בחדות.

בדיקת עיכוב ההמגלוטינציה (RTGA) משמשת באבחון זיהום ויראלי. חלק מהנגיפים מכילים את חלבון ההמגלוטינין על פני השטח שלהם, שמדביק את תאי הדם האדומים זה לזה. תוספת של נוגדנים אנטי-ויראליים ספציפיים חוסמת את ההמגלוטינין הנגיפי - אין המגלוטינציה.

התגובה של המגלוטינציה עקיפה (RIHA), או תגובת Coombs, משמשת לקביעת נוגדנים לא שלמים. תוספת של סרום אנטיגלובולין (AT נגד Ig אנושי) משפרת את תוצאות התגובה. RNGA משמש בקביעת גורם Rh.

כדי להגדיר תגובת צבירה (RA), נדרשים שלושה מרכיבים:

1) אַנְטִיגֵן (אגלוטינוגן) AG;

2) נוֹגְדָן(אגלוטינין) AT;

3) אלקטרוליט (תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית).
Ag + AT + אלקטרוליט = agglutinate

Agglutination (מלטינית agglutinatio - הדבקה) - הדבקה של גופיות (חיידקים, אריתרוציטים וכו') בנוגדנים בנוכחות אלקטרוליטים - נתרן כלורי.

RA מתבטא בצורה של פתיתים או משקעים, המורכבים מגופים (למשל, חיידקים, אריתרוציטים), "מודבקים יחד" על ידי נוגדנים.

RA משמש עבור:

תגובה של אגלוטינציה ישירה של חיידקים (RA).

בתגובה זו, נוגדנים (אגלוטינינים) מצמידים ישירות אנטיגנים גופניים (אגלוטינוגנים).

בדרך כלל הם מיוצגים על ידי השעיה של מיקרואורגניזמים מומתים (תגובת אגלוטינציה מיקרוביאלית).

משמש לקביעת סוג המיקרואורגניזםאבחנתיות סטנדרטית סרום (ידוע AT ).

הנפוצים ביותר הם RA lamellar (אינדיקטיבי) ופרוס RA.

Lamellar RA ממוקם על זכוכית. הוא משמש כשיטה מואצת לזיהוי נוגדנים או זיהוי מיקרואורגניזמים.

רכיבים:

1. סרה אבחנתית תקנית (AT);

2. לבדוק תרבית טהורה מהמטופל;

3. תמיסת מלח.

בתרבית הטהורה הנחקרת, אנטיגנים (AG) הם בצורת חלקיקים (תאים מיקרוביאליים, אריתרוציטים ואנטיגנים גופניים אחרים), הנדבקים יחדיו על ידי נוגדנים ומשקעים.

דוגמא:

הַצָגָה מְעִיד עַל תגובות צבירה (RA ) על זכוכית על מנת לזהות חיידקים מקבוצת המעיים.

טיפות מוחלות על שקופית זכוכית:

1 דִיזֶנטֶריָה ;
2 -הטיפה: - נסיוב מאגריל לפתוגניםקדחת טיפוס ;

(1-2 סרה אבחנתית)
3 -הטיפה: - תמיסת מלח (בקרה).
התרבית הטהורה שנבדקה של חיידקים מתווספת לכל טיפה. לְרַגֵשׁ.

תוֹצָאָה : חִיוּבִי - נוכחות של פתיתים מצטברים,
שלילי - ללא פתיתים צמודים
סיכום:החיידקים שנחקרו הם הגורמים לקדחת הטיפוס (נקבעו אנטיגנים).

לקביעת נוגדנים בסרום החולה (אבחנה סרולוגית), חיידק סטנדרטיאבחון המכיל תרחיףמפורסם חיידקים או אנטיגנים שלהםא.ג .

קביעת קבוצות הדם של מערכת ABO (תגובת hemagglutination (RHA)) - אריתרוציטים מצטברים.

מרכיבי תגובה:

1. בדיקת דם מסוג AG (תאי דם אדומים).

2. AT (אריתרוסטסטים - tsolclones)

סט זוליקלון:

מגיב Tsoliklon anti-A (ורוד)

מגיב Tsoliklon anti-B (כחול)

Zoliclone anti-AB reagent (חסר צבע)

3. אלקטרוליט (מלח)

טכניקת הגדרה:

1 .

טיפה אחת (0.1 מ"ל) של anti-A, anti-B ו-anti-AB tsoliklon (לשליטה) מונחת על בארות הטבליה.

2.

טיפה קטנה (0.05-0.01 מ"ל) מדם הבדיקה מונחת ליד כל טיפה של המגיב.

ואז טיפת tsoliklon מעורבבת עם טיפת דם עם מוט זכוכית נקי בודד.

3.

תגובת האגלוטינציה מתפתחת במהלך 3-5 השניות הראשונות כאשר הצלחת מתנדנדת בעדינות.

תוצאות התגובה נלקחות בחשבון 2.5 - 3 דקות לאחר ערבוב הטיפות. משמאל לימין בארות האנטי-A, האנטי-B, האנטי-AB.

תוצאה חיובית היא הופעת משקע גרגירי (אגלוטינאט).

RA חיובי (+)

שלילי - ללא משקעים.

שלילי RA(-)

4.

ניתוח תוצאות.

O(אני) α β – אין אגלוטינציה

א(II) β – צבירה עם אנטי-A

ב(III) α – צבירה עם אנטי-B

א.ב(IV)O - צבירה עם אנטי-A, עם אנטי-B

ייצוג סכמטי של צבירה.

אנטיגנים AH על אריתרוציטים (זוהה) + נוגדןבְּ(צוליקלון) סרום אבחנתי

חשבונאות לאגלוטינציה בצלחות

תגובת משקעים:

תגובת המשקעים היא תגובה חיסונית של האינטראקציה של AG במצב מסיס עם AT במלח.

במהלך המשקעים מתרחשת היווצרות קומפלקס חיסוני מקרומולקולרי, המתבטא במעבר של תמיסה קולואידית שקופה לתרחיף אטום, או משקעים.

הכמות של שני הריאגנטים חייבת להיות ביחסים מוגדרים בהחלט, שכן עודף של אחד מהם מפחית את התוצאה.

קיימים דרכים שונותהגדרת תגובת המשקעים.

1. את התגובה של משקעים טבעת שמים צינורות משקעים בקוטר קטן. סרום חיסון מתווסף למבחנה ואנטיגן מסיס מרובד בקפידה. AG ו-AT מעורבים בגלל התנועה התרמית של מולקולות, והם מקיימים אינטראקציה. בְּ תוצאה חיוביתטבעת של משקעים אטומים נוצרת בגבול שתי התמיסות.

2. תגובת החיסון הכפולה של Ouchterlony מתבצעת בג'ל אגר, שבבארותיו מוסיפים תמיסת AG או תמיסת AT לפי הסכימה. AG ו-AT מתפזרים לתוך הג'ל אחד כלפי השני, ואם התגובה חיובית, יוצרים קומפלקסים חיסוניים, הנראים כקווי משקעים.

תגובת משקעים -היווצרות זוומשקעים של הקומפלקס של אנטיגן מולקולרי מסיס עם נוגדנים בצורה של עכירות, הנקראת משקעים. הוא נוצר על ידי ערבוב אנטיגנים ונוגדנים בכמויות שוות.

רכיבי RA:

סרום משקעים (המכונה AT-precipitin);

סרום בדיקה (לא ידוע AG-precipitinogen);

גוּפָנִי פִּתָרוֹן.

את תגובת המשקעים שמים או במבחנות צרות מיוחדות (תגובת משקעים טבעת), או בצלחות פטרי בג'לים, חומרי הזנה וכו'.

תגובת משקעים טבעת

הצהרה וחשבונאות של תוצאות התגובהטבעת משקעיםכדי לזהות פתוגן גַחֶלֶת(תגובת אסקולי).

הַצָגָה .

1. חומר הבדיקה (עור, צמר, לבד, זיפים, בד, בשר, אדמה, צואת בעלי חיים וכו') מבושל בתמיסה של 5-45 דקות. לקבלת תמצית איזוטונית (תמצית). לְסַנֵן.

2. יוצקים את הסרום נגד אנתרקס המשקע לתוך המבחנה.

3. שכבו עליו בזהירות את חומר הבדיקה (תמצית).

חשבונאות .

תוך 10 דקות הבאות. על הגבול שבין הסרום לתמצית, במקרים חיוביים, מופיעה טבעת עכירות (משקעי טבעת). תגובת Ascoli מאוד רגישה וספציפית

בעזרתו ניתן לזהות במהירות חומרים נגועים באנתרקס.

תגובת משקעים באגר

הצהרה וחשבונאות של תוצאותתגובות משקעי אגרכדי לקבוע את הרעילות של קורינבקטריה (גורמים סיבתיים של דיפטריה)

הַצָגָה

מונח על אגר פוספט-פפטון בצלחת פטרי.

1. רצועה של נייר סינון סטרילי שהורטב בהסרום אנטי רעיל.

2. לאחר הייבוש, במרחק של 1 ס"מ מקצה הרצועה, זורעים לוחות בקוטר 10 מ"מ.יבולים מבודדים.

בכוס אחת, אתה יכול לזרוע בין 3 ל-10 יבולים, אחד מהם,לִשְׁלוֹט, חייב להיות ידוערעיל.

גידולים מונחים בתרמוסטט.

חשבונאות

הניתוח מתבצע לאחר 24-48-72 שעות.

תוצאה חיובית - (תרבותרעיל) - במרחק מסוים מרצועת הנייר להתעוררקווי משקעים, « חיצי קנוקנות", הנראים בבירור באור משודר.

האיור מציג את התגובה של משקעים באגר כדי לקבוע את רעילותם של חיידקי דיפתריה. תרביות בינוניות לא יצרו "אנטנות חץ", אלו אינם פתוגנים רעילים.

זנים של הגורם הסיבתי של דיפתריה יכולים להיות רעילים (מייצרים אקזוטוקסין) ולא רעילים. היווצרות אקזוטוקסין תלויה בנוכחות בחיידקים של נביא הנושא את גן הרעלן המקודד ליצירת אקזוטוקסין.

במקרה של מחלה, כל פתוגני הדיפתריה נבדקים עבור רעילות - ייצור אקזוטוקסין דיפתריה באמצעות תגובת משקעים באגר

תגובות סרולוגיות מורכבות ( 3-רכיבים: Ag + Ig + C):

תגובת קיבוע משלים (RSC).

התגובה מתבצעת בשני שלבים.

בשלב הראשון נוגדנים מקיימים אינטראקציה עם AG ומשלימים, בשלב השני מתווסף אינדיקטור - המערכת ההמוליטית (תערובת של אריתרוציטים וסרום אנטי אריתרוציטים).

עם תוצאה חיובית, בשלב הראשון, AT יוצרים קומפלקס חיסוני עם AG, הקושר את המשלים של תערובת התגובה.

במקרה זה, אריתרוציטים של המערכת ההמוליטית שנוספו בשלב השני אינם נהרסים.

אחרת, משלים לא קשור גורם לתמוגה של תאי דם אדומים.

זה דורש חמישה מרכיבים: AG, AT ומשלים (מערכת ראשונה), אריתרוציטים של ראם וסרום המוליטי (מערכת שנייה) (איור 1).

התגובה מתרחשת בשני שלבים (איור 3).

שלב ראשון - האינטראקציה של אנטיגן ונוגדנים עם השתתפות חובה של משלים.

שְׁנִיָה - זיהוי תוצאות התגובה באמצעות מערכת המוליטית אינדיקטור (אריתרוציטים של כבשים וסרום המוליטי). הרס של אריתרוציטים על ידי סרום המוליטי מתרחש רק במקרה של התקשרות משלים למערכת ההמוליטית. אם המשלים נספג מוקדם יותר על קומפלקס האנטיגן-נוגדנים, אז המוליזה של אריתרוציטים לא מתרחשת (איור).

התוצאה של החוויה להעריך (איור 2), תוך ציון נוכחות או היעדר המוליזה בכל הצינורות. התגובה נחשבת חיובית עם עיכוב מוחלט בהמוליזה, כאשר הנוזל במבחנה חסר צבע והאריתרוציטים שוקעים לתחתית, שלילית - עם תמוגה מלאה של האריתרוציטים, כאשר הנוזל צבוע עז ("דם לכה"). .

מידת העיכוב המוליזה מוערכת בהתאם לעוצמת הצבע של הנוזל וכמות המשקעים של אריתרוציטים בתחתית (++++, +++, ++, +).

אורז. 4. הצהרה ותוצאה של RSC.

סיכום:נוגדנים זוהו בסרום הנחקר.

RSK מאפשר לך לזהות נוגדנים לכל זן של אותו סרוטיפ וירוס.

ערך אבחון הוא:

עלייה של פי ארבע בטיטר נוגדנים בסמים זווגים (במהלך מגיפת שפעת);

עליה של פי שניים בסרום הדם של חולים עם תמונה קלינית אופיינית.

תגובות תווית :

שיטות אלו רגישות ביותר. צבעים, איזוטופים רדיואקטיביים, אנזימים וכו' משמשים כתיוג לאנטיגנים או נוגדנים.

RIF - תגובה אימונופלואורסצנטית

התגובה האימונופלואורסצנטית מבוססת על חיווי האור של קומפלקס האנטיגן-נוגדנים

בדיקת אימונוסורבנט מקושר.

עַכשָׁוִי מחקר מעבדה, שבמהלכו מתבצע חיפוש אחר נוגדנים ספציפיים בדם או אנטיגנים למחלות ספציפיות על מנת לזהות לא רק את האטיולוגיה, אלא גם את שלב המחלה.

תוצאות ELISA ניתנות להנפקה איכותית וכמותית.

נכון לעכשיו, ELISA משמש במצבים הבאים:

1) חיפוש אחר נוגדנים ספציפיים לכל מחלה זיהומית;

2) חיפוש אנטיגנים של מחלות כלשהן (זיהומיות, מחלות מין);

3) חקר המצב ההורמונלי של המטופל;

4) בדיקת סמני גידול;

5) בדיקה לנוכחות מחלות אוטואימוניות.

באיור, ELISA שלב מוצק - אנטיגנים ידועים (בצד שמאל) נספגים על באר הצלחת, (בצד ימין) על בארות הצלחת נוגדנים ידועים

יתרונות שיטת ELISA:

1) סגוליות ורגישות גבוהה של שיטת ELISA (יותר מ-90%).

2) היכולת לקבוע את המחלה ולעקוב אחר הדינמיקה של התהליך, כלומר השוואת כמות הנוגדנים במרווחי זמן שונים.

3) זמינות אבחון ELISA בכל מוסד רפואי.

חסר יחסי: זיהוי תגובה חיסונית (נוגדנים), אך לא הפתוגן עצמו, מצומד עם תווית אנזים.

הגדרת ELISA (מנגנון כללי):

הבסיס של בדיקת אימונוסורבנט המקושרת לאנזים הוא התגובה החיסונית של אנטיגן ונוגדן עם היווצרות קומפלקס חיסוני: נוגדן אנטיגן, כתוצאה ממנו מתרחש שינוי פעילות אנזימטיתתוויות ספציפיות על פני השטח של נוגדנים.

מרכיבי תגובה:

1. AG(AT) ידוע - על באר הטאבלט.

2. AT (AG) נחקר.

3. AT עם אנזים ספציפי לקומפלקס AT(AG)-AG(AT).

4. מצע כרומוגני באינטראקציה עם האנזים

5. להפסיק פתרון

השלבים העיקריים של ELISA

1. על פני בארות הטבליה נמצא אנטיגן מטוהר של פתוגן ספציפי. הם מתווספים חומר ביולוגימטופל, מתרחשת תגובה ספציפית בין אנטיגן זה לנוגדן הרצוי (אימונוגלובולין). נוצר קומפלקס.

2. מוסיפים צמוד - AT עם אנזים. המצמיד הוא ספציפי לקומפלקס AT-AG של השלב הראשון. האנזים מופעל.

3. מוסיפים מצע והאנזים הפעיל יוצר איתו אינטראקציה, משנה את הצבע חסר הצבע של התמיסה.

4. מוסיפים תמיסת עצור כדי לעצור את האינטראקציה בין האנזים למצע.

חשבונאות.

תוצאה חיובית היא שינוי בצבע, באיור - צהוב.

ניתוח אימונוכרומטוגרפי

שיטת הניתוח האימונוכרומטוגרפי (ICA, בדיקות מהירות) היא שיטת סקר מקדימה איכותית המאפשרת לנתח במהירות, תוך דקות ספורות, בכל מצב, כולל. "שדה".

היתרונות של ICA כוללים:

מהירות וקלות שימוש;

נפחי דגימה קטנים, ללא הכנת דגימה;

זולות עבור היצרן והצרכן;

יכולת הפקת בדיקות בהיקפים גדולים;

קלות קריאה ופרשנות של התוצאה;

רגישות גבוהה ושחזור;

אפשרות לקביעה כמותית;

היכולת להשתמש בקוראות ניידים התואמים למחשב;

אפשרות לריבוי אנליזה.

רכיבים (מיושמים על רצועת הבדיקה):

1. מצומד המסומן בזהב קולואידי - ספציפי ל-AG שנקבע.

2. AT של קו הבדיקה - ספציפי למתחם AT-AG

3. שרירי הבטן של קו הבקרה הם ספציפיים לצמוד.

הגדרת IHA:

1. יישום הדגימה על אזור ההתחלה המיועד של הרצועה.

2. קבלת תוצאה בדמות הופעת פסים צבעוניים במקום קווי הבדיקה והבקרה.

חשבונאות

חיובי - כאשר צובעים את קו הבדיקה.

שלילי - בהיעדר הכתמה של קו הבדיקה.

פסול - בהעדר צביעה של קו הבקרה.

מנגנון כללי IHA:

1. הדגימה מונחת על שדה ההתחלה (רפידת הדגימה) ונקשרה אל המצומד (גוף ספציפי עם סימן צבע) הממוקם על הכרית המצומדת. כתוצאה מכך נוצר קומפלקס צבעוני.

2. הקומפלקס החיסוני הצבעוני שנוצר נע תחת פעולת כוחות נימיים לאורך קרום הניטרוצלולוזהו מקיים אינטראקציהעם קו מבחן AT.התוצאה היא פס אחד בצבע ורוד-אדום.

3. שרירי הבטן לא קשורים לרצועת הבדיקה (מצומד)ממשיך ומגיע לקו הבקרה, נקשר ל-AT של קו הבקרה.כתוצאה מכך, מופיעה פס צבעוני שני.אם הניתוח מבוצע כהלכה, שורת הבקרה צריכה להופיע תמיד, ללא קשר להימצאות האנטיגן (נוגדן) שנחקר בדגימת הנוזל הביולוגי.

2. תנאים לביצוע תגובות סרולוגיות.

1. נוכחות של הומולוגי - תואם זה לזה אנטיגן ונוגדן.

2. כלים נקיים ויבשים.

3. יחס מסוים של תרופות (לרוב שווה).

4. נוכחות חובה של אלקטרוליט (תמיסת NaCl איזוטונית).

5. pH ניטרלי או קרוב למעט בסיסי.

6. טמפרטורה + 37 מעלות צלזיוס או טמפרטורת החדר (חיובי בהכרח).

7. מתבצעת בקרת אנטיגן ובקרה בסרום (נוגדנים).

3 דרישות סרום

הסרום חייב להיות צלול לחלוטין ללא כל תערובת של תאים.

מתקבל בדרך כלל בשבוע 2 למחלה, כאשר כבר קיימים נוגדנים.

דם נלקח בכמות של 3-5 מ"ל על בטן ריקה או 6 שעות לאחר הארוחה.

כדי להשיג סרום, הדם נשאר למשך שעה בטמפרטורת החדר או בצנטריפוגה. הסרום נשאב החוצה בזהירות רבה כדי לא ללכוד את האלמנטים שנוצרו.

סרה חיסונית מתקבלת מדם של אנשים או בעלי חיים (בדרך כלל ארנבות וסוסים) המחוסנים על פי תכנית מסוימת עם האנטיגן המתאים (חיסון). מי גבינה מוכנה בדרך כלל בייצור.

4. הרעיון של תוצאות חיוביות ושליליות.

RA.

עם תגובה חיובית, אריתרוציטים מודבקים באופן פסיבי מכסים את תחתית הבאר בשכבה אחידה עם קצוות מסולסלים ("מטריה"); בהיעדר אגלוטינציה, אריתרוציטים מצטברים בשקע המרכזי של הבאר, ויוצרים "כפתור" קומפקטי עם קצוות מוגדרים בחדות (ראה איורים לעיל).

RP.

עם תוצאה חיובית, טבעת חלבית נוצרת בגבול שתי הפתרונות (ראה את האיורים לעיל).

אליסה.

שינוי בצבע התמיסה מתרחש עם תגובה חיובית.

RSK.

עיכוב המוליזה - התגובה חיובית; אם המשלים חופשי, נצפית המוליזה - התגובה שלילית(ראה תמונות למעלה).

תוצאות תגובת וסרמן:

a - עיכוב מוחלט של המוליזה (+ + ++);

b - עיכוב בולט בהמוליזה (+ ++);

c - עיכוב חלקי של המוליזה (++);

ד - עיכוב חלש של המוליזה (+);

ה - המוליזה מלאה (-).

התגובה חיובית עם עיכוב חלקי, בולט ומוחלט בהמוליזה, הנקבע על פי מידת הצביעה של תכולת המבחנות מוורדרד בהיר לאדום עז, אריתרוציטים ללא המוליזה יוצרים לאחר מכן משקע אדום.

שיעורי בית:

1. למד את החומר

רשום 3 הערות על הסרטון

מס' 29 תגובת צבירה. רכיבים, מנגנון, שיטות הגדרה. יישום.
תגובת צבירה- תגובה פשוטה שבה נוגדנים קושרים אנטיגנים גופניים (חיידקים, אריתרוציטים או תאים אחרים, חלקיקים בלתי מסיסים עם אנטיגנים נספגים עליהם, כמו גם אגרגטים מקרומולקולריים). זה מתרחש בנוכחות אלקטרוליטים, למשל, כאשר מוסיפים תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית.
נעשה שימוש בווריאציות שונות של תגובת הצבירה: מורחבת, משוערת, עקיפה וכו'. תגובת הצבירה מתבטאת ביצירת פתיתים או משקעים (תאים "מודבקים" על ידי נוגדנים שיש להם שני או יותר מרכזי קשירת אנטיגן - איור 13.1). . RA משמש עבור:
1) זיהוי נוגדניםבסרום הדם של חולים, למשל, עם ברוצלוזיס (תגובות רייט, הדלסון), קדחת טיפוסופארטיפוס (תגובת וידאל) ומחלות זיהומיות אחרות;
2) הגדרות פתוגניםמבודד מהמטופל;
3) קביעת קבוצות דםשימוש בנוגדנים חד שבטיים נגד אלואנטגנים של אריתרוציטים.
כדי לקבוע את הנוגדנים של המטופל שים תגובת צבירה מפורטת:לדילול נסיוב הדם של החולה מוסיפים אבחון (השעיה של חיידקים מומתים, ולאחר מספר שעות של דגירה ב-37 מעלות צלזיוס, מצוין הדילול הגבוה ביותר של הסרום (טיטר הסרום), שבו התרחשה צבירה, כלומר א. נוצר משקעים.
אופי וקצב האגלוטינציה תלויים בסוג האנטיגן והנוגדנים. דוגמה לכך היא תכונות האינטראקציה של אבחונים (אנטיגנים O ו-H) עם נוגדנים ספציפיים. תגובת האגלוטינציה עם O-diagnosticum (חיידקים שנהרגים על ידי חימום, תוך שמירה על אנטיגן O-יציב תרמי) מתרחשת בצורה של אגלוטינציה עדינה. תגובת האגלוטינציה עם H-diagnosticum (חיידקים שנהרגים על ידי פורמלין, שומרים על האנטיגן H-flagellar הבלתי רגיש לחום) היא בעלת גרגיר גס ומתמשכת מהר יותר. אם יש צורך לקבוע את הפתוגן מבודד מהמטופל, לשים תגובת צבירה מכוונת,באמצעות נוגדנים אבחנתיים (סרום מאגד), כלומר, מתבצעת סרוטיפינג של הפתוגן. תגובה משוערת מתבצעת על שקופית זכוכית. לטיפה של סרום אגלוטינציה אבחנתי בדילול של 1:10 או 1:20 הוסף תרבית טהורה של הפתוגן שבודד מהמטופל. פקד ממוקם בקרבת מקום: במקום סרום, מורחים טיפה של תמיסת נתרן כלורי. כאשר מופיע משקעים פלוקולנטיים בטיפה עם סרום וחיידקים, מתבצעת תגובת אגלוטינציה מפורטת במבחנות עם דילולים הולכים וגדלים של סרום מתאגרף, אליהן מוסיפים 2-3 טיפות מתרחיף הפתוגן. הצבירה נלקחת בחשבון לפי כמות המשקעים ומידת ההבהרה של הנוזל. התגובה נחשבת חיובית אם נצפתה צבירה בדילול קרוב לטיטר של הסרום האבחנתי. במקביל, נלקחות בחשבון בקרות: סרום מדולל בתמיסת נתרן כלוריד איזוטונית צריך להיות שקוף, תרחיף של חיידקים באותה תמיסה צריך להיות עכור באופן אחיד, ללא משקעים.
חיידקים קשורים שונים יכולים להיות צבועים על ידי אותו נסיוב אגלוטיני אבחנתי, אשר
מקשה על זיהוים. לכן, נעשה שימוש בסרה צבירה ספוחה, שממנה
נוגדנים בעלי תגובה צולבת על ידי ספיחה לחיידקים הקשורים אליהם. סמים אלו מכילים נוגדנים
ספציפית לחיידק זה.

אגלוטינציה נקראת אגלוטינציה של חיידקים כתוצאה מאינטראקציה איתם של AT ספציפי. RA דורש שלושה מרכיבים: 1) AG (אגלוטינוגן); 2) AT (אגלוטינין); 3) תמיסת אלקטרוליט (תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית). רק אנטיגנים גופניים (חיידקים, אריתרוציטים, חלקיקי לטקס עמוסים באנטיגן) לוקחים חלק בתגובת האגלוטינציה.

תגובת צבירה על זכוכית. טיפה של סרום אבחנתי (דילול סרום 1:10 - 1:20) מונחת על שקף זכוכית ללא שומן עם פיפטה. תרבית טהורה של המיקרואורגניזם הנחקר נלקחת מפני השטח של האגר האלכסוני עם לולאה בקטריולוגית, מועברת לטיפה של סרום ומערבבת. תוצאת התגובה נלקחת בחשבון בעין בלתי מזוינת לאחר 3-5 דקות. עם תגובה חיובית בטיפת סרום, ניתן להבחין בהופעת פתיתים (גדולים או קטנים), הנראים בבירור על רקע כהה כאשר מנערים את שקף הזכוכית. במקרה של תגובה שלילית, הנוזל נשאר עכור באופן אחיד.

תגובת צבירה במבחנות. הוסף 1 מ"ל של מי מלח פיזיולוגי למספר מבחנות. הוסף נפח שווה של סרום הדם לבדיקה למבחנה הראשונה. מכינים דילולים רציפים של סרום (טיטרציה בסרום), ולאחר מכן מוסיפים 2 טיפות תרחיף של חיידקים מומתים (דיאגנוסטיקום) לכל מבחנה. הצינורות ממוקמים במשך שעתיים בתרמוסטט ב-37 מעלות צלזיוס. התגובה ממשיכה עם היווצרות של פתיתים קטנים, בלתי נראים לעין בלתי מזוינת, ולכן התוצאות נרשמות תחת עלייה קלה במכשיר מיוחד - אגלוטינוסקופ. עוצמת הצבירה נלקחת בחשבון לפי מערכת "ארבעת הפלוסים": צבירה מלאה - 4+, צבירה חלקית - 3+ או 2+, תוצאה בספק - +. הדילול האחרון שבו נצפית אגלוטינציה ב-2+ נלקח כטיטר הנוגדנים בסרום הבדיקה.

תגובת אגלוטינציה במבחנות (תגובת אגלוטינציה מורחבת) מתבצעת כדי לקבוע את רמת הנוגדנים לפתוגנים של קדחת טיפוס ופארטיפוס (תגובת וידאל), ברוצלוזיס (תגובת רייט), טיפוס (תגובת וויגל).

Agglutination (מלטינית agglutinatio - bonding) - התקשרות (חיבור) של חלקיקים גופניים נושאי אנטיגן (תאים שלמים, חלקיקי לטקס וכו') עם מולקולות נוגדנים ספציפיות בנוכחות אלקטרוליטים, המסתיימת ביצירת פתיתים או משקעים (אגלוטינאט). ) גלוי לעין בלתי מזוינת. אופי המשקע תלוי באופי האנטיגן: חיידקי הדגל נותנים משקע גדול של פתיתים, דגלים וחסרי קפסולה - עדינים, קפסוליים - חוטיים. להבחין באגלוטינציה ישירה, שבה האינטראקציה עם נוגדנים ספציפיים מעורבת ישירות אנטיגנים משלו של חיידק או כל תא אחר, כגון אריתרוציטים; ועקיפים, או פסיביים, שבהם תאי חיידקים או אריתרוציטים, או חלקיקי לטקס הם נשאים לא משלהם, אלא של אנטיגנים (או נוגדנים) זרים הנספגים עליהם כדי לזהות נוגדנים (או אנטיגנים) ספציפיים להם. תגובת האגלוטינציה כוללת בעיקר נוגדנים השייכים למחלקות IgG ו-IgM. זה מתקדם בשני שלבים: ראשית, יש אינטראקציה ספציפית של המרכז הפעיל של הנוגדנים עם הקובע האנטיגן, שלב זה יכול להתרחש בהיעדר אלקטרוליטים ואינו מלווה בשינויים גלויים במערכת המגיבה. לשלב השני - היווצרות של agglutinate - יש צורך בנוכחות אלקטרוליטים, אשר מפחיתים מטען חשמלימתחם אנטיגן + נוגדן ומאיץ את תהליך ההתקשרות שלהם. שלב זה מסתיים עם היווצרות של agglutinate.

תגובות צבירה ממוקמות על זכוכית או על לוחות קרטון חלקים, או בצינורות צבירה סטריליים. תגובות צבירה (ישירות ופסיביות) על זכוכית משמשות בדרך כלל כ שיטה מואצתזיהוי של נוגדנים ספציפיים בסרום של החולה (לדוגמה, עם ברוצלוזיס) או לזיהוי סרולוגי של הפתוגן. במקרה האחרון, משתמשים בדרך כלל בסרה אבחנתית מטוהרת היטב (נספחת), המכילה רק נוגדנים מונורצפטורים או קבוצתם לאנטיגנים שונים. היתרון הבלתי מעורער של תגובת האגלוטינציה על זכוכית הוא פשטות הניסוח שלה והעובדה שהיא אורכת מספר דקות ואפילו שניות, שכן שני הרכיבים משמשים בה בצורה מרוכזת. עם זאת, יש לו רק ערך איכותי והוא פחות רגיש מהמבחנה. בדיקת צבירה מורחבת במבחנות נותנת תוצאות מדויקות יותר, מכיוון שהיא מאפשרת לקבוע את התוכן הכמותי של נוגדנים בסרום (להגדיר את הטיטר שלו) ובמידת הצורך לרשום את העובדה של עלייה בטיטר הנוגדנים, שהיא אבחנתית ערך. כדי להגדיר את התגובה בצינורות צבירה, הוסף בצורה מסוימת מדולל ב-0.85% תמיסת NaClסרום ונפח שווה (בדרך כלל 0.5 מ"ל) של תרחיף של אבחנה רגילה (או תרבית בדיקה) המכילה מיליארד חיידקים ב-1 מ"ל. התחשבנות בתוצאות תגובת האגלוטינציה מתבצעת מקדים לאחר שעתיים של דגירה של הצינורות ב-37 מעלות צלזיוס ולבסוף לאחר 20-24 שעות לפי שני קריטריונים: נוכחות וגודל המשקע ומידת השקיפות של המשקע. סופרנטנט. ההערכה מתבצעת על פי שיטת הארבעה-צלבים. התגובה מלווה בהכרח בשליטה בסרום ובאנטיגן. באותם מקרים בהם נעשה שימוש בבדיקת אגלוטינציה מפורטת במבחנה לזיהוי סרולוגי של הפתוגן, יש לה ערך אבחנתי אם התגובה מוערכת כחיובית כאשר הסרום האבחנתי מדולל בחצי מהטיטר שלו לפחות.

יש לקחת בחשבון שכאשר מערבבים תמיסות של אנטיגנים ונוגדנים הומולוגיים, לא תמיד נצפים ביטויים גלויים של תגובת האגלוטינציה. משקע נוצר רק ביחסים אופטימליים מסוימים של שני מרכיבי התגובה. מחוץ לגבולות אלה, עם עודף משמעותי של אנטיגן או נוגדנים, לא נצפית תגובה. תופעה זו נקראת "תופעת הפרוזון". הוא נצפה הן בתגובת הצבירה והן בתגובת המשקעים. הופעת פרוזון בתגובות חיסוניות מוסברת על ידי העובדה שהאנטיגנים המעורבים בהם הם, ככלל, polydeterminant, והמולקולות נוגדני IgGיש שני מרכזים פעילים. עם עודף של נוגדנים, פני השטח של כל חלקיק אנטיגן מכוסים במולקולות נוגדנים כך שלא נשארות קבוצות דטרמיננטיות חופשיות, כך שהמרכז הפעיל השני והלא קשור של נוגדנים לא יכול לקיים אינטראקציה עם חלקיק אנטיגני אחר ולקשר אותם זה לזה. היווצרות של אגלוטינאט או משקעים גלויים מדוכאת גם עם עודף של אנטיגן, כאשר אין אתר פעיל פנוי אחד של נוגדנים, ולכן לא ניתן עוד להגדיל את קומפלקס האנטיגן + נוגדן + אנטיגן.

אפשרויות לתגובות אגלוטינציה מואצות. תגובת המוגלוטינציה פסיבית וגרסאותיה

תגובת האגלוטינציה הקלאסית כוללת שימוש באנטיגנים גופניים. עם זאת, עשויים להיות מעורבים גם אנטיגנים מסיסים. כדי לאפשר זאת, אנטיגנים כאלה נספגים על גבי חלקיקים אינרטיים מבחינה אימונולוגית. כנשא, ניתן להשתמש בחלקיקים של לטקס או בנטוניט, אולם כיום משתמשים לרוב באדמית של בעלי חיים או בני אדם, ומשפרים את תכונות הספיגה שלהם על ידי טיפול בתמיסות של טאנין, פורמלין או בנזידין. אריתרוציטים הסופחים אנטיגן על עצמם נקראים רגישים על ידי אנטיגן זה, והתגובה החיסונית שבה הם משתתפים היא תגובה עקיפה או פסיבית להמגלוטינציה (RNHA, או RPHA), שכן אריתרוציטים משתתפים בה באופן פסיבי.

RPGA ממוקם בפלטות פוליסטירן מיוחדות עם חורים בעלי תחתית חצי כדורית. כאשר משתמשים בו לאבחון סרולוגי, מכינים דילולים פי שניים בתמיסה פיזיולוגית של סרום הבדיקה בבארות אלה, ולאחר מכן מוסיפים לו תרחיף של אריתרוציטים רגישים כחומר אבחון. התוצאות מתועדות לאחר שעתיים של דגירה ב-37 מעלות צלזיוס לפי מערכת הארבעה. עם תגובה חיובית, אריתרוציטים צמודים מתיישבים בתחתית החור ומכסים אותו באופן שווה בצורה של מטריה הפוכה. עם תגובה שלילית, האריתרוציטים גם מתיישבים, הנוזל הופך שקוף, המשקע נראה כמו "דיסק" קטן במרכז החור. טיטר סרום ב-RPHA נחשב לדילול האחרון שלו, שעדיין נותן המגלוטינציה בולטת ללא סימנים משמעותייםבעל דיסק.

RPHA יכול לשמש גם כשיטה מואצת לאבחון בקטריולוגי לאיתור חיידקים לא ידועים, וירוסים, רעלנים, כגון פתוגני מגיפה, סטפילוקוקלי אנרוטוקסינים ועוד, ישירות בחומר הבדיקה נוגדנים - נוגדן erythrocyte diagnosticum. אם חומר הבדיקה מכיל כמות מספקת של אנטיגן ידוע, TPHA יהיה חיובי.

האפשרויות לשימוש ב-RPGA הן: תגובת נטרול אנטיגן (RNAg), תגובת נטרול נוגדנים (RNAt), תגובת עיכוב hemagglutination פסיבית (RPHA). אנטיגנים ונוגדנים אריתרוציטים אבחונים משמשים לתגובות אלה. ניתן להשתמש בשתי תגובות חד-כיווניות השולטות הדדית בו-זמנית, לדוגמה, RPHA עם אבחון אנטיגני ו-RNAg עם אבחון אריתרוציטים נוגדנים.

תגובת נטרול הנוגדנים (RNAt) מורכבת מכך שתרחיף המכיל את האנטיגן הרצוי מעורבב עם סרום חיסוני ספציפי המכיל נוגדנים ידועים בנפחים מתאימים ומודגרים ב-37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים. לאחר מכן, נוסף אבחון אריתרוציטים אנטיגני. את התערובת מנערים ומשאירים בטמפרטורת החדר. התוצאות נלקחות בחשבון לאחר 3-4 שעות ולבסוף - לאחר 18-24 שעות, אם יש אנטיגן בחומר הנבדק הוא יקשור נוגדנים (ינטרל אותם), ולכן לא תתרחש המגלוטינציה.

על פי אותו עיקרון מתבצעת תגובת נטרול אנטיגן (RNAg). רק במקרה זה, מתגלים נוגדנים בחומר הבדיקה. אנטיגן ספציפי המתווסף לחומר בדיקה שכזה ייקשר לנוגדנים הכלולים בו, כלומר האנטיגן ינוטרל על ידי נוגדנים, ולכן לא תתרחש המגלוטינציה בעת הוספת הנוגדן אריתרוציט diagnosticum.

תגובת קרישה. זוהי אחת האפשרויות לתגובת צבירה מואצת של נוגדנים-נשאים בתיווך תאים פסיבית על זכוכית. תגובה זו מבוססת על נכס ייחודי Staphylococcus aureus, שיש לו חלבון A בדופן התא שלו, נקשרים לשברי Fc של IgG ו-IgM. יחד עם זאת, המרכזים הפעילים של נוגדנים נשארים חופשיים ויכולים לקיים אינטראקציה עם דטרמיננטים ספציפיים של אנטיגנים. טיפה של תרחיף 2% של סטפילוקוקוס רגיש עם הנוגדנים המתאימים מונחת על שקופית זכוכית, וטיפה מתרחיף של החיידקים הנחקרים מתווספת. כאשר האנטיגן תואם לנוגדנים, לאחר 30-60 שניות, מתרחשת אגלוטינציה ברורה של סטפילוקוקים עמוסים בנוגדנים.

ריאקציית לטקס (LAH). נושאי הנוגדנים במערכת אבחון זו הם חלקיקים סטנדרטיים קטנים של לטקס. התגובה מתבצעת בשיטת המיקרו בבארות על זכוכית. התנאי העיקרי להגדרה מוצלחת של PAH הוא הקפדה על היחסים הכמותיים של מרכיבי המערכת: 10 μl של תכשיר לטקס רגיש לנוגדנים מתווספים ל-50 μl של חומר הבדיקה. הספציפיות של PAH נשלטת באמצעות שלוש מבחני בקרה הכלולים במערכות בדיקה מסחריות: ידוע תגובה חיובית, מובן מאליו תְגוּבָה חֲרִיפָהובקרת איכות של תרחיף הלטקס עבור לטקסים שאינם רגישים ל-PAH (לא נושאי נוגדנים) עם חומר הבדיקה. בארצנו משתמשים בלטקסים מפוליסטירן מונודיפרסים בקטרים ​​שונים של חלקיקים (0.3; 0.66; 0.75; 0.8 מיקרומטר) כנשאים של נוגדנים ספציפיים. LAH משמש לזיהוי מהיר של מיקרואורגניזמים או אנטיגנים שלהם בחומר הבדיקה.

זיהוי אימונומגנטי של אנטיגנים. אחת האפשרויות לתגובת אגלוטינציה מואצת על זכוכית קשורה לשימוש בחלקיקי פולימר על-מגנטיים המצופים בנוגדנים ספציפיים. חלקיק אחד כזה קושר עד 107-108 תאים של מיקרואורגניזמים, עקב כך הרגישות השיטה הזאתמגיע ל-5 CFU/ml. ניתן להשתמש בזיהוי אימונומגנטי של מיקרואורגניזמים בשילוב עם החייאה.

תגובה מצטברת-המגלוטינציה (RAGA). זה מאפשר לך לזהות במהירות בדם של חולים הן אנטיגנים במחזור חופשי (אנטיגנמיה) והן אנטיגנים הקשורים לנוגדנים - קומפלקסים חיסוניים במחזור (CIC). עבור RAGA, אריתרוציטים רגישים עם הנוגדנים המתאימים משמשים. הוספה של סרום הדם של המטופל, המכיל אנטיגנים, לאריתרוציטים רגישים, עליהם מקובעים נוגדנים, מובילה להדבקה (אגלוטינציה) של אריתרוציטים וקומפלקסים חיסוניים.

בדיקת אנטיגלובולין קומבס (תגובת R. Coombs). בעזרת תגובות אגלוטינציה ישירות ופסיביות נקבעים נוגדנים מלאים (דו-ערכיים). נוגדנים לא שלמים (חד-ערכיים, חוסמים) אינם מתגלים בשיטות אלו, שכן, בשילוב עם האנטיגן, הם חוסמים אותו, אך אינם יכולים לגרום להתקבצות האנטיגן לקונגלומרטים גדולים. נוגדנים לא שלמים (חוסמים) הם אלו שבהם פועל רק מרכז פעיל אחד; המרכז הפעיל השני אינו פועל מסיבה לא ידועה. כדי לזהות נוגדנים לא שלמים, נעשה שימוש בתגובת Coombs מיוחדת (איור 72). התגובה כוללת: הסרום של המטופל, בו הם קובעים נוגדנים לא שלמים, corpuscular antigen diagnosticum, סרום אנטיגלובולין המכיל נוגדנים לגלובולין אנושי. התגובה מתרחשת בשני שלבים:

אינטראקציה של אנטיגן עם נוגדנים לא שלמים. אין ביטויים גלויים. השלב הראשון מסתיים על ידי שטיפת האנטיגן משאריות הסרום של המטופל.

אינטראקציה של סרום אנטיגלובולין, המתקבל כתוצאה מחיסון של בעל חיים עם גלובולין אנושי, עם נוגדנים לא שלמים הנספגים על האנטיגן. בשל העובדה שהנוגדנים האנטיגלובולינים הם דו ערכיים, הם קושרים שני נוגדנים חד ערכיים של קומפלקסים אנטיגן נפרדים + נוגדן לא שלם, מה שמוביל להיצמדותם ולהופעת משקעים גלויים.

13.1. תגובות אנטיגן-נוגדנים ושימושיהם

כאשר מזריקים אנטיגן נוצרים נוגדנים בגוף. הנוגדנים משלימים לאנטיגן שגרם לסינתזה שלהם, ומסוגלים להיקשר אליו. הקישור של אנטיגנים לנוגדנים מורכב משני שלבים. השלב הראשון הוא ספציפי, בו יש קישור מהיר של הדטרמיננט האנטיגני למרכז הפעיל של שבר ה-Fab של הנוגדנים. יש לציין כי הקישור נובע מכוחות ואן דר ואלס, מימן ואינטראקציות הידרופוביות. חוזק הקשר נקבע לפי מידת ההתאמה המרחבית בין האתר הפעיל של הנוגדן לאפיטופ של האנטיגן. לאחר השלב הספציפי, מתחיל שלב איטי יותר - לא ספציפי, המתבטא בתופעה פיזיקלית גלויה (לדוגמה, היווצרות פתיתים בזמן אגלוטינציה וכו').

תגובות חיסוניות הן אינטראקציות בין נוגדנים לאנטיגנים, ותגובות אלו הן ספציפיות ורגישות מאוד. הם נמצאים בשימוש נרחב ב פרקטיקה רפואית. בעזרת תגובות חיסוניות ניתן לפתור את המשימות הבאות:

קביעת נוגדנים לא ידועים על ידי אנטיגנים ידועים (antigenic diagnosticum). משימה כזו היא כאשר יש צורך לקבוע נוגדנים לפתוגן בסרום הדם של המטופל (סודיאגנוזה). מציאת נוגדנים מאפשרת לך לאשר את האבחנה;

קביעת אנטיגנים לא ידועים על ידי נוגדנים ידועים (נסיוב אבחנתי). מחקר זה מתבצע בעת זיהוי התרבית של הפתוגן המבודד מחומר המטופל (סרוטיפינג), וכן בעת ​​גילוי

אנטיגנים של חיידקים והרעלים שלהם בדם ובנוזלים ביולוגיים אחרים. ישנם סוגים רבים של תגובות חיסוניות הנבדלות בטכניקת ההגדרה והאפקט המתועד. אלו הן תגובות אגלוטינציה (RA), משקעים (RP), תגובות המערבות משלים (RCC), תגובות באמצעות רכיבים מסומנים (RIF, ELISA, RIA).

13.2. תגובת צבירה

תגובת האגלוטינציה (RA) היא תגובה חיסונית של אינטראקציה של אנטיגן עם נוגדנים בנוכחות אלקטרוליטים, והאנטיגן נמצא במצב גופי (אריתרוציטים, חיידקים, חלקיקי לטקס עם אנטיגנים נספגים). במהלך האגלוטינציה, אנטיגנים גופניים מודבקים זה לזה על ידי נוגדנים, המתבטאים ביצירת משקעים פלוקולנטיים. היווצרות פתיתים מתרחשת בשל העובדה שלנוגדנים יש שני מרכזים פעילים, ואנטיגנים הם רב ערכיים, כלומר. יש גורמים אנטיגנים מרובים. RA משמש לזיהוי הפתוגן המבודד מהחומר של החולה, וכן לזיהוי נוגדנים לפתוגן בסרום הדם של החולה (לדוגמה, תגובות רייט והאדלסון בברוצלוזיס, תגובת וידאל במחלת הטיפוס וקדחת פארטיפוס. ).

הדרך הקלה ביותר להגדיר RA היא תגובה על זכוכית, זהו RA משוער, המשמש לקביעת הפתוגן המבודד מהמטופל. כאשר מגדירים את התגובה על שקף זכוכית, מורחים סרום אגלוטינאטי אבחנתי (בדילול של 1:10 או 1:20), ולאחר מכן מכניסים תרבית מהמטופל. התגובה חיובית אם מופיע משקעים פקקולנטיים בטיפה. פקד ממוקם בקרבת מקום: במקום סרום, מורחים טיפה של תמיסת נתרן כלורי. אם הסרום האגלוטיני האבחנתי אינו נספג 1, אז הוא מדולל (לטיטר - הדילול שאליו אמורה להתרחש אגלוטינציה), כלומר. לשים את RA המורחבת במבחנות עם עלייה

1 סרום צמיג שאינו נספג יכול לצבור חיידקים קשורים שיש להם אנטיגנים נפוצים (מגיבים צולבים). לכן, תהנוסרה צבירה נספג, שמהם הוסרו נוגדנים צולבים על ידי ספיחה על ידי החיידקים הקשורים אליהם. בסמים כאלה נשארים נוגדנים ספציפיים רק לחיידק זה.

דילולים של סרום אגלוטי, שאליו מוסיפים 2-3 טיפות של תרחיף של הפתוגן שבודד מהמטופל. הצבירה נלקחת בחשבון לפי כמות המשקעים ומידת ההבהרה של הנוזל במבחנות. התגובה נחשבת חיובית אם נצפתה צבירה בדילול קרוב לטיטר של הסרום האבחנתי. התגובה מלווה בבקרות: הסרום, מדולל בתמיסת נתרן כלוריד איזוטונית, צריך להיות שקוף, ההשעיה של חיידקים באותה תמיסה צריכה להיות עכורה באופן אחיד, ללא משקעים.

כדי לקבוע את הנוגדנים לפתוגן בסרום הדם של החולה, נעשה שימוש ב-RA מורחב. כאשר הוא מונח במבחנות, מדולל את סרום הדם של המטופל ומוסיפים למבחנות כמות שווה של תרחיף דיאגנוסטיקום (השעיה של חיידקים מומתים). לאחר הדגירה, נקבע דילול הסרום הגבוה ביותר שבו התרחשה אגלוטינציה, כלומר. נוצר משקע (טיטר בסרום). במקרה זה, תגובת האגלוטינציה עם O-diagnosticum (חיידקים שנהרגים על ידי חימום, תוך שמירה על אנטיגן O-יציב תרמי) מתרחשת בצורה של אגלוטינציה עדינה. תגובת האגלוטינציה עם H-diagnosticum (חיידקים שנהרגים על ידי פורמלין, שומרים על האנטיגן H-flagellar הבלתי רגיש לחום) היא בעלת גרגיר גס ומתמשכת מהר יותר.

התגובה של hemagglutination עקיפה (פאסיבית).(RNGA או RPGA) הוא סוג של RA. שיטה זו רגישה ביותר. בעזרת RNGA ניתן לפתור שתי משימות: קביעת הנוגדנים בסרום הדם של המטופל, שאליו מתווסף אריתרוציטים אנטיגני, שהם אריתרוציטים שעליהם נספגים אנטיגנים ידועים; לקבוע את נוכחותם של אנטיגנים בחומר הבדיקה. במקרה זה, התגובה נקראת לעתים תגובת ההמגלוטינציה הפוכה (RONGA). בעת השלב, מוסיפים לחומר הבדיקה נוגדן אריתרוציטים (אריתרוציטים עם נוגדנים נספגים על פני השטח שלהם). אריתרוציטים בתגובה זו פועלים כנשאים ומעורבים באופן פסיבי ביצירת אגרגטים חיסוניים. עם תגובה חיובית, אריתרוציטים מודבקים באופן פסיבי מכסים את תחתית הבאר בשכבה אחידה עם קצוות מסולסלים ("מטריה"); בהיעדר צבירה, אריתרוציטים מצטברים בשקע המרכזי של החור, ויוצרים "כפתור" קומפקטי עם קצוות מוגדרים בחדות.

תגובת קרישהמשמש לזיהוי תאים פתוגנים (אנטיגנים) באמצעות נוגדנים הנספחים עליהם Staphylococcus aureus,מכיל חלבון A. לחלבון A יש זיקה למקטע Fc של אימונוגלובולינים. בשל כך, נוגדנים נקשרים לסטפילוקוקוס בעקיפין דרך מקטע Fc, ושברי Fab מכוונים כלפי חוץ ומסוגלים ליצור אינטראקציה עם החיידקים המתאימים המבודדים מהחולים. במקרה זה נוצרים פתיתים.

תגובת עיכוב הגלוטינציה (HITA)משמש לאבחון של זיהומים ויראליים, ורק זיהומים הנגרמים על ידי וירוסים המגלוטינים. וירוסים אלו מכילים על פני השטח שלהם חלבון - המגלוטינין, האחראי על תגובת ההמגלוטינציה (RHA) כאשר מוסיפים לו וירוסים אריתרוציטים. RTGA מורכב מחסימת אנטיגנים ויראליים באמצעות נוגדנים, וכתוצאה מכך הנגיפים מאבדים את יכולתם לצבור תאי דם אדומים.

תגובת קומבס - RA לאיתור נוגדנים לא שלמים. בחלק ממחלות זיהומיות, כמו ברוצלוזיס, מסתובבים נוגדנים לא שלמים לפתוגן בסרום הדם של החולה. נוגדנים לא שלמים נקראים חסימה מכיוון שיש להם אתר קושר אנטיגן אחד, ולא שניים, כמו נוגדנים מלאים. לכן, כאשר מוסיפים אבחון אנטיגני, נוגדנים לא שלמים נקשרים לאנטיגנים, אך אינם מדביקים אותם יחד. כדי לבטא את התגובה מוסיפים סרום אנטיגלובולין (נוגדנים לאימונוגלובולינים אנושיים), שיובילו לאגלוטינציה של קומפלקסים חיסוניים (אנטיגניים דיאגנוסטיקום + נוגדנים לא שלמים) הנוצרים בשלב הראשון של התגובה.

תגובת Coombs העקיפה משמשת בחולים עם המוליזה תוך וסקולרית. בחלק מהחולים הללו מתגלים נוגדנים אנטי-רזוס חד ערכיים לא שלמים. הם מקיימים אינטראקציה ספציפית עם אריתרוציטים חיוביים ל-Rh, אך אינם גורמים לאגלוטינציה שלהם. לכן מוסיפים למערכת נוגדני אנטי-Rh סרום אנטיגלובולין + אריתרוציטים חיוביים ל-Rh הגורם לאגלוטינציה של אריתרוציטים. תגובת Coombs משמשת לאבחון מצבים פתולוגייםקשור לתמוגה תוך-וסקולרית של אריתרוציטים ממקור חיסוני, למשל, מחלה המוליטית של היילוד עקב קונפליקט Rhesus.

RA לקביעת קבוצות דםמבוסס על אגלוטינציה של אריתרוציטים על ידי נוגדנים של סרום חיסון לאנטיגנים של קבוצות דם A (II), B (III). הבקרה היא סרום שאינו מכיל נוגדנים, כלומר. קבוצות דם AB (IV) בסרום, ואנטיגנים של אריתרוציטים מקבוצות A (P) ו-B (III). אריתרוציטים מקבוצה 0(I) משמשים כבקרה שלילית מכיוון שאין להם אנטיגנים.

כדי לקבוע את גורם ה-Rh, נעשה שימוש בסרה אנטי-Rh (לפחות שתי סדרות שונות). בנוכחות אנטיגן Rh על הממברנה של אריתרוציטים שנחקרו, מתרחשת אגלוטינציה של תאים אלה.

13.3. תגובת משקעים

RP היא תגובה חיסונית של אינטראקציה של נוגדנים עם אנטיגנים בנוכחות אלקטרוליטים, והאנטיגן נמצא במצב מסיס. במהלך המשקעים, אנטיגנים מסיסים משוקעים על ידי נוגדנים, המתבטאת בעכירות בצורת פסי משקעים. היווצרות של משקעים גלויים נצפית כאשר שני הריאגנטים מעורבבים ביחסים שווים. עודף של אחד מהם מפחית את כמות הקומפלקסים החיסוניים המשוקעים. ישנן דרכים שונות להגדיר תגובת משקעים.

תגובת משקעים טבעתממוקם בצינורות משקעים בקוטר קטן. הסרום החיסוני מתווסף למבחנה והאנטיגן המסיס מרובד בקפידה. עם תוצאה חיובית, טבעת חלבית נוצרת בגבול שתי הפתרונות. תגובת משקעי הטבעת, הקובעת את נוכחותם של אנטיגנים באיברים וברקמות, שתמציותיהם מבושלות ומסוננות, נקראת תגובת תרמו-משקעים (תגובת אסקולי לקביעת אנטיגן אנתרקס תרמו-יציב).

תגובה חיסונית כפולה של Ouchterlony.תגובה זו מתבצעת על ג'ל אגר. בארות נחתכות בשכבת ג'ל בעובי אחיד במרחק מסוים אחד מהשני וממלאים באנטיגן ובסרום חיסוני, בהתאמה. לאחר מכן, אנטיגנים ונוגדנים מתפזרים לתוך הג'ל, נפגשים זה עם זה ויוצרים קומפלקסים חיסוניים, המשקעים בג'ל ונראים כקוים של משקעים.

תְזוּנָה. ניתן להשתמש בתגובה זו כדי לזהות אנטיגנים או נוגדנים לא ידועים, כמו גם לבדיקת הדמיון בין אנטיגנים שונים: אם האנטיגנים זהים, קווי המשקעים מתמזגים; אם האנטיגנים אינם זהים, קווי המשקעים מצטלבים; אם האנטיגנים הם זהים. זהה חלקית, נוצר דורבן.

תגובה חיסונית רדיאלית.לתוך המותך אגר ג'ללהוסיף נוגדנים ולמרוח את הג'ל בשכבה אחידה על הזכוכית. בארות נחתכות בג'ל ומכניסים לתוכם נפח סטנדרטי של תמיסות אנטיגן בריכוזים שונים. במהלך הדגירה, אנטיגנים מתפזרים באופן רדיאלי אל מחוץ לבאר, וכאשר הם נתקלים בנוגדנים, יוצרים טבעת משקעים. כל עוד יש עודף של אנטיגן בבאר, יש עלייה הדרגתית בקוטר טבעת המשקעים. שיטה זו משמשת לקביעת אנטיגנים או נוגדנים בתמיסת הבדיקה (לדוגמה, לקביעת ריכוז האימונוגלובולינים מקבוצות שונות בסרום הדם).

אימונואלקטרופורזה.תערובת האנטיגנים מופרדת מראש על ידי אלקטרופורזה, ואז אנטי-סרום משקע מוכנס לתוך החריץ העובר לאורך כיוון תנועת החלבון. אנטיגנים ונוגדנים מתפזרים לתוך הג'ל אחד כלפי השני; באינטראקציה, הם יוצרים קווי משקעים קשתיים.

תגובת צפצופים(לפי רמון) - מעין תגובת משקעים, המשמשת לקביעת הפעילות של סרום או טוקסואיד אנטי-רעיל. התגובה מתבצעת במבחנות. במבחנה שבה טוקסואיד ואנטי-טוקסין נמצאים ביחס שווה ערך, נצפית עכירות.

13.4. תגובת קיבוע משלים

נוגדנים, המקיימים אינטראקציה עם האנטיגן המתאים, קושרים את המשלים הנוסף (מערכת 1). האינדיקטור לקיבוע המשלים הוא אריתרוציטים שעברו רגישות בסרום המוליטי, כלומר. נוגדנים לאריתרוציטים (מערכת 2). אם ההשלמה לא קבועה במערכת ה-1, כלומר. התגובה של אנטיגן-נוגדן אינה מתרחשת, ואז תאי הדם האדומים הרגישים עוברים ליזוז מלא (תגובה שלילית). כאשר המשלים נקשר על ידי קומפלקסים חיסוניים של המערכת הראשונה, לאחר תוספת של אריתרוציטים רגישים, המוליזה

נעדר (תגובה חיובית). תגובת קיבוע המשלים משמשת לאבחון מחלות זיהומיות (זיבה, עגבת, שפעת וכו').

13.5. תגובת נטרול

לחיידקים ולרעלים שלהם יש השפעה מזיקה על האיברים והרקמות של גוף האדם. נוגדנים מסוגלים להיקשר לחומרים המזיקים הללו ולחסום אותם, כלומר. לְנַטְרֵל. תכונה זו של נוגדנים מבוססת תגובה אבחנתיתנִטרוּל. זה מתבצע על ידי החדרת תערובת אנטיגן-נוגדנים לבעלי חיים או לאובייקטי בדיקה רגישים (תרבית תאים, עוברים). לדוגמא, כדי לזהות רעלים בחומר של החולה, מזריקים לבעלי החיים של הקבוצה הראשונה את החומר של החולה. בעלי חיים מהקבוצה השנייה מוזרקים עם חומר דומה, מטופלים מראש באנטי-סרום המתאים. בעלי חיים מהקבוצה הראשונה מתים בנוכחות רעלן בחומר. הקבוצה השנייה של בעלי חיים שורדת, ההשפעה המזיקה של הרעלן אינה באה לידי ביטוי, מכיוון שהוא מנוטרל.

13.6. תגובות באמצעות נוגדנים או אנטיגנים מסומנים

13.6.1. תגובה אימונופלואורסצנטית (RIF, שיטת קונס)

שיטה זו משמשת לאבחון מהיר. זה יכול לזהות גם אנטיגנים מיקרוביאליים וגם נוגדנים.

שיטת RIF ישירה- תגובה חיסונית של אינטראקציה של נוגדנים עם אנטיגנים, והנוגדנים מסומנים ב-fluorochrome - חומר המסוגל לפלוט כמויות אור באורך גל מסוים כאשר נפגע מאור באורך גל מסוים. המוזרות של הגדרת שיטה זו היא הצורך להסיר רכיבים שלא הגיבו על מנת למנוע זיהוי של זוהר לא ספציפי. לשם כך, בצע את ההלבנה של נוגדנים שלא הגיבו. התוצאות מוערכות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. חיידקים במריחה שטופלו בסרום זוהר כזה זוהרים על רקע כהה בפריפריה של התא.

שיטת RIF עקיפהבשימוש יותר מהקודם. תגובה זו מתבצעת בשני שלבים. בשלב הראשון, אנטיגנים הדדיים

אינטראקציה עם הנוגדנים המתאימים, ויוצרים קומפלקסים חיסוניים. יש להסיר את כל הרכיבים שלא הגיבו (כלומר לא חלק מתסביכי החיסון) בכביסה. בשלב השני, מתגלה קומפלקס אנטיגן-נוגדנים שנוצר באמצעות סרום fluorochrome antiglobulin. כתוצאה מכך, נוצר חיידק מורכב + נוגדנים לארנבים אנטי-מיקרוביאליים + נוגדנים לאימונוגלובולינים של ארנב המסומן בפלואורוכרום. התוצאות מוערכות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

13.6.2. בדיקת אימונו או בדיקה

ELISA היא הנפוצה ביותר שיטה מודרניתמשמש לאבחון של זיהומים ויראליים, חיידקיים, פרוטוזואלים, בפרט לאבחון של זיהום HIV, צהבת ויראליתוכו.

יש הרבה שינויים ב-ELISA. ה-ELISA הלא-תחרותי השלב המוצק נמצא בשימוש נרחב. זה מתבצע בצלחות פוליסטירן 96 באר (שלב מוצק). במהלך התגובה, יש צורך לשטוף את הרכיבים שאינם מגיבים בכל שלב. בעת קביעת נוגדנים, הבארות שעליהן נספגים האנטיגנים ממולאות בסרום הדם הנבדק, ולאחר מכן בסרום האנטיגלובולין המסומן באנזים. הצג את התגובה על ידי הוספת מצע לאנזים. בנוכחות האנזים הסובסטרט משתנה, וקומפלקס האנזים-סובסטרט נבחר בצורה כזו שהמוצר שנוצר בתגובה נצבע. לפיכך, עם תגובה חיובית, נצפה שינוי בצבע התמיסה. כדי לקבוע אנטיגנים, נשא שלב מוצק עובר רגישות עם נוגדנים, ואז חומר הבדיקה (אנטיגנים) וסרום האנטיגן המסומן באנזים מוכנסים ברצף. לביטוי התגובה, מכניסים מצע לאנזים. שינוי בצבע התמיסה מתרחש עם תגובה חיובית.

13.6.3. אימונובלוטינג

שיטה זו מבוססת על שילוב של אלקטרופורזה ו-ELISA. בעת ביצוע אימונובלוטינג (כתימה מהאנגלית. כֶּתֶם- נקודה) תערובת מורכבת של אנטיגנים נתונה לראשונה לאלקטרופורזה בג'ל פוליאקרילאמיד. התוצאה של האנטי-

פפטידים גנים מועברים לממברנת ניטרוצלולוזה. לאחר מכן הכתמים מטופלים בנוגדנים המסומנים באנזים לאנטיגן הספציפי, כלומר. לבצע כתם ELISA. Immunoblotting משמש לאבחון של זיהומים כגון HIV.

13.6.4. מיקרוסקופ אלקטרונים חיסוני

השיטה מורכבת ממיקרוסקופ במיקרוסקופ אלקטרוני של וירוסים (לעתים נדירות חיידקים אחרים), שטופלו בעבר בסרום חיסוני מתאים המסומן בתכשירים צפופים אלקטרונית אופטית, למשל, פריטין, חלבון המכיל ברזל.

13.7. ציטומטריית זרימה

תאי הדם מובחנים על בסיס ציטופלואומטריית לייזר. לשם כך, התאים הרצויים נצבעים בנוגדנים חד שבטיים פלואורסצנטיים לאנטיגנים CD. דגימת דם לאחר טיפול בנוגדנים מסומנים מועברת דרך צינור דק ודרכה מועברת קרן לייזר המעוררת את הזוהר של הפלואורוכרום. עוצמת הקרינה מתאמת עם צפיפות האנטיגנים על פני התא וניתנת לכימות באמצעות מכפיל פוטו. התוצאות המתקבלות מומרות להיסטוגרמה.

ציטומטריית זרימה משמשת לקביעה מצב חיסוני(תכולת האוכלוסיות העיקריות של לימפוציטים, תכולת הציטוקינים התוך-תאיים והחוץ-תאיים, הפעילות התפקודית של תאי NK, פעילות הפגוציטוזיס ועוד).

תוכן העניינים של הנושא "אימונומודולטורים. אימונודיאגנוסטיקה של מחלות זיהומיות.":

תגובת אגלוטינציה מורחבת (RA). כדי לקבוע AT בסרום הדם של המטופל, לשים תגובת צבירה ממושכת (RA). לשם כך מוסיפים דיאגנוסטיקום לסדרה של דילולים בסרום דם - תרחיף של מיקרואורגניזמים מומתים או חלקיקים עם Ag נספג. מתן הדילול המקסימלי צבירה Ag, הנקרא טיטר של סרום הדם.

זנים של תגובת צבירה (RA) לאיתור AT - בדיקת טיפת דם לטולרמיה (עם יישום אבחון על טיפת דם והופעה של אגרטלים לבנבנים גלויים) ותגובת האדלסון לברוצלוזיס (עם אבחנה מוכתמת בסגול ג'נטיאן מוחל על טיפה של סרום דם).

תגובת אגלוטינציה משוערת (RA)

כדי לזהות את המיקרואורגניזמים המבודדים, RA משוער ממוקם על שקופיות זכוכית. לשם כך, מוסיפים תרבית של הפתוגן לטיפה של אנטי-סרום אבחנתי סטנדרטי (בדילול של 1:10, 1:20). אם התוצאה חיובית, הם מכניסים תגובה מפורטת עם דילולים הולכים וגדלים של אנטי-סרום.

תְגוּבָהנחשב לחיובי אם נצפית צפיפות בדילולים הקרובים לטיטר של הסרום האבחנתי.

OAS. Somatic O-Agהם יציבים תרמית ועמידים בפני רתיחה למשך 2 שעות. בעת אינטראקציה עם AT, הם יוצרים אגרגטים עדינים.

לְנַדְנֵד. H-Ag (flagellate)תרמי ונהרס במהירות ב-100 מעלות צלזיוס, כמו גם תחת פעולת אתנול. בתגובות עם H-antiserum, לאחר שעתיים של דגירה, נוצרים פתיתים גדולים רופפים (הנוצרים על ידי חיידקים הנצמדים יחד עם דגלים).

וי ארחיידקי טיפוס הטיפוס הם יציבים יחסית (עמידים בטמפרטורה של 60-62 מעלות צלזיוס למשך שעתיים); כאשר דגירה עם Vi-antiserum, נוצר agglutinate עדין.

תגובות ישירות להמגלוטינציה

הפשוטה שבהן תגובות - צבירהאריתרוציטים, או hemagglutination, המשמשים לקביעת קבוצות דם במערכת AB0. לשם קביעה צבירה(או היעדרו) משתמשים באנטיסרה סטנדרטית עם אגלוטינינים אנטי-A ואנטי-B. התגובה נקראת ישירה, שכן האנטיגנים הנחקרים הם מרכיבים טבעיים של אריתרוציטים.

משותף עם המגלוטינציה ישירהלמנגנונים יש hemagglutination ויראלית. נגיפים רבים מסוגלים לצבור באופן ספונטני אריתרוציטים של עופות ויונקים, והוספתם להשעיה של אריתרוציטים גורמת להיווצרות אגרגטים מהם.