Kumbsa tests– tests, lai noteiktu virsmai pievienotās vai plazmā izšķīdušās antivielas. To lieto, lai noteiktu imunizāciju un antivielas pret sarkanajām asins šūnām. Otrais tituls antiglobulīna tests. Tas var būt tiešs vai netiešs.
Plkst tiešais antiglobulīna tests nosaka antivielas, kas fiksētas uz sarkano asins šūnu virsmas. To veic, ja ir aizdomas par citām autoimūnām slimībām, pēc medikamentu (metildopa, penicilīns, hinīns) lietošanas u.c.
Sarkanās asins šūnas ir sensibilizētas in vivo – tām jau ir stingri piestiprinātas antivielas, un antiglobulīna seruma (anti-IgG) pievienošana izraisa sensibilizēto šūnu salipšanu, kas ir redzama ar neapbruņotu aci.
Netiešais Kumbsa tests nosaka antieritrocītu antivielas asins plazmā, to veic pirms asins pārliešanas un laikā.
Antieritrocītu antivielas ir autoantivielu veids, t.i. antivielas pret saviem audiem. Autoantiviela rodas, ja imūnsistēma neparasti reaģē uz noteiktām zālēm, piemēram, lielām penicilīna devām.
Sarkanās asins šūnas uz to virsmas satur dažādas ķīmiskās struktūras(glikolipīdi, saharīdi, glikoproteīni un proteīni), medicīnā sauc par antigēniem. Cilvēks manto no saviem vecākiem īpašu antigēnu karti uz katras sarkanās asins šūnas.
Antigēnus apvieno grupās un pēc tam asinis sadala vairākās grupās – pēc AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy sistēmas. Slavenākie un nozīmīgākie ārsta darbā ir AB0 un Rh faktors (Rh).
AB0 sistēma
Cilvēka Rh statusu nosaka šo antigēnu klātbūtne. Īpaši svarīgs eritrocītu antigēns ir antigēns D. Ja tas ir klāt, tad viņi runā par Rh pozitīvas asinis RhD, un ja tā tur nav - ak Rh negatīvs Rhd.
Ja atbilstošā antiviela piesaistās eritrocītu antigēniem, eritrocīts tiek iznīcināts - hemolīze.
Indikācijas
Galvenā indikācija par tiešā veidāantiglobulīna tests- aizdomas par hemolītisko anēmiju. Visbiežāk to veic primāro autoimūno slimību gadījumā. hemolītiskā anēmija, hemolīze reimatisko, audzēju, infekcijas slimību gadījumā, zāļu izraisīta hemolīze.
Ja anēmija parādās vairākas dienas vai mēnešus pēc asins pārliešanas vai ar ilgstošu dzelti jaundzimušajam, tiek veikts arī tiešs Kumbsa tests.
Netiešstiek veikts antiglobulīna tests pirms asins pārliešanas un Rh negatīvas sievietes grūtniecības laikā.
Autoimūna hemolītiskā anēmija
Autoimūna hemolītiskā anēmija (primārā)– klasiska autoimūna slimība ar nezināmiem cēloņiem. Mijiedarbība imūnsistēmā tiek traucēta, kas noved pie tā, ka sarkanās asins šūnas tiek uztvertas kā svešas. Limfmezglos tiek sintezētas IgG klases (reaģē pie t 37°C) un/vai IgM (pie t 40°C) antivielas, kuras, piestiprinoties pie eritrocīta virsmas, iedarbina vairākus enzīmus ( komplementa sistēma) un “perforē” eritrocīta sieniņu, kas noved pie tā iznīcināšanas – hemolīzes.
Pirmos simptomus izraisa gan sarkano asins šūnu iznīcināšana, gan hemoglobīna līmeņa pazemināšanās. Starp viņiem:
- nogurums, vispārējs vājums, aizkaitināmība
- aizdusa
- sāpes vēderā un krūtīs, slikta dūša
- tumša urīna krāsa
- muguras sāpes
- ikteriska ādas un gļotādu krāsas maiņa
- sarkano asins šūnu skaita samazināšanās un
Tiešs pozitīvs rezultāts Kumbsa testi 100% apstiprina autoimūnas hemolītiskās anēmijas diagnozi, pierādot tās autoimūno izcelsmi. Tajā pašā laikā negatīvs rezultāts neļauj noņemt diagnozi.
Sekundārā hemolītiskā anēmija
Sekundārā autoimūna hemolītiskā anēmija un pozitīvs tests Kumbs var rasties ar šādām slimībām:
- Evansa sindroms
- pneimonijas infekcija
Pozitīvs šo slimību antiglobulīna tests ir viens no simptomiem, nevis diagnozes kritērijs.
Jaundzimušā hemolītiskā slimība
Cēlonis hemolītiskā slimība jaundzimušie - mātes un augļa asinsgrupas nesaderība, vairumā gadījumu pēc Rh sistēmas, atsevišķos gadījumos - pēc AB0 sistēmas, kazuistiski - pēc citiem antigēniem.
Rh konflikts attīstās, ja Rh negatīvas sievietes auglis manto Rh pozitīvas asinis no tēva.
Jaundzimušajam slimība attīstās tikai tad, ja mātei jau ir izveidojušās antivielas pret attiecīgajiem antigēniem, kas notiek pēc iepriekšējām grūtniecībām, abortiem un nesaderīgām asins pārliešanas. Lielākā daļa kopīgs iemesls izraisot antivielu sintēzi pret eritrocītu membrānas antigēniem - dzemdībām (augļa-mātes asiņošana). Pirmās dzemdības parasti norit bez komplikācijām, bet nākamās ir pilnas ar jaundzimušā hemolītisko slimību pirmajās dienās pēc piedzimšanas.
Jaundzimušā hemolītiskās slimības simptomi:
- ādas dzeltenums
- , un gļotādas
- palielinātas aknas un liesa
- elpošanas problēmas
- visa ķermeņa pietūkums
- centrālās nervu sistēmas uzbudinājums un pakāpeniska nomākšana
Anēmija pēc asins pārliešanas
Netiešais Kumbsa tests veic pirms asins pārliešanas, lai novērtētu saderību, un tiešo Kumbsa testu – pēc tā, ja ir aizdomas par pēctransfūzijas hemolīzi, t.i. tādu simptomu klātbūtnē kā drudzis, laistīšana (lasiet tālāk). Analīzes mērķis ir identificēt antivielas pret pārlietām sarkanajām asins šūnām, kas ir saistījušās ar recipienta sarkanajām asins šūnām un ir cēlonis pēctransfūzijas hemolīzei, kā arī priekšlaicīgai donoru sarkano asins šūnu izņemšanai no asinsrites. saņēmējs (tas, kurš saņēma asinis).
Simptomi:
- ķermeņa temperatūras paaugstināšanās
- ādas izsitumi
- muguras sāpes
- sarkans
- slikta dūša
- reibonis
Dekodēšana
Ir vērts atgādināt, ka tiešo un netiešo antiglobulīna testu atšifrēšanas pamatnoteikumi ir vienādi. Vienīgā atšķirība ir antivielu atrašanās vieta – asinīs vai uz sarkano asins šūnu.
- Ja tiešais Kumbsa tests ir negatīvs– tas nozīmē, ka antiviela “nesēžas” uz sarkanajām asins šūnām un ir jāturpina meklēt simptomu cēloni un jāveic netiešais Kumbsa tests
- ja Kumbsa testa rezultāts ir pozitīvs pēc asins pārliešanas, infekcijām, medikamentiem - pozitivitāte saglabājas līdz 3 mēnešiem (sarkano asinsķermenīšu dzīves ilgums ir 120 dienas - 3 mēneši)
- pozitīvs antiglobulīna testa rezultāts autoimūnai slimībai ilgst mēnešus vai pat gadus
Norm
- tiešais Kumbsa tests - negatīvs
- netiešais Kumbsa tests - negatīvs
Kvalitatīvi pozitīvs rezultāts mērāms plusu skaitā no viena līdz četriem (+, ++, +++, ++++), un kvantitatīvi digitālā formā - 1:16, 1:256 utt.
Jā. Jūsu ārstam noteikti jāzina, ka esat saņēmis asins pārliešanu, jo tas ietekmē pareizu testa rezultātu interpretāciju tagad. Saņemot kāda cita (kaut arī daudzas reizes pārbaudītas) asinis, vienmēr pastāv iespēja, ka jūsu organismā tiks izstrādātas antivielas pret pārlietajām asinīm. Tieši šīs antivielas nodrošinās slikta ietekme par veselības stāvokli. Lai veiktu turpmāko asins pārliešanu, ārstam jāzina, ka esat jau saņēmis asins pārliešanu, kas nozīmē, ka ir bijis laiks antivielu sintēzei. Grūtniecēm šī informācija ir vēl svarīgāka.
3. Ja ir Rh faktora neatbilstība starp māti un bērnu, vai visi bērni būs slimi?
Atkarīgs no tā, vai bērnam ir Rh pozitīvs vai negatīvs (RhD). I, II, III un IV asinsgrupu nesēji var būt gan Rh pozitīvi, gan negatīvi. Situācijā, kad māte ir Rh negatīva un bērns ir Rh pozitīvs, antivielas tiks ražotas jau ar pirmo grūtniecību, bet tikai pēc pirmajām dzemdībām (vai grūtniecības pārtraukšanas) notiks tiešs kontakts starp mātes asinīm un bērns. Antivielu hemolītiskā iedarbība tiks realizēta tikai otro un turpmāko dzemdību laikā, kas novedīs pie jaundzimušā hemolītiskās slimības.
Katra sieviete ar negatīvu Rh faktoru rūpīgi jāpārbauda grūtniecības laikā un pēc dzemdībām profilaktiska ārstēšana lai novērstu antivielu parādīšanos un turpmākas komplikācijas.
4. Vai grūtniecības laikā pirms Kumbsa testa veikšanas ir jāzina mana vīra asinsgrupa?
Grūtniecības laikā ir ne tikai jāzina, bet arī jāpārbauda bērna bioloģiskā tēva asinsgrupa.
Dati
- pirmo reizi ierosināts Kembridžā 1945. gadā
- jutības slieksnis - vismaz 300 fiksētas antivielu molekulas uz vienas sarkanās asins šūnas
- antivielu skaits, kas izraisa hemolīzi - katram cilvēkam individuāli (no 16-30 līdz 300)
- citu hemolītiskās anēmijas laboratorisko rādītāju (hemoglobīna, bilirubīna, retikulocītu) dinamika var normalizēties, un Kumbsa tests paliks tajā pašā līmenī
Kumbsa testu pēdējo reizi modificēja: 2018. gada 16. martā Marija Bodjana
Antiglobulīna testu, kas paredzēts nepilnīgu anti-eritrocītu antivielu noteikšanai, ierosināja Kumbss, Morants, Reiss 1945. gadā, un vēlāk to sauca par Kumbsa testu. Būtība šī metode ir tas, ka antiglobulīna serums, kas satur antivielas pret cilvēka imūnglobulīniem, reaģējot ar sarkanajām asins šūnām, kas sensibilizētas ar nepilnīgām antivielām, izraisa to aglutināciju.
Atkarībā no tā, vai antivielas ir fiksētas uz sarkano asins šūnu virsmas vai atrodas brīvā stāvoklī asins plazmā, tiek izmantots tiešs vai netiešs Kumbsa tests.
Tiešo Kumbsa testu veic gadījumos, kad ir pamats uzskatīt, ka pētāmās sarkanās asins šūnas jau ir in vivo ir sensibilizēti ar atbilstošām antivielām, t.i. Pirmā reakcijas fāze - antivielu fiksācija uz sarkano asins šūnu virsmas - notika organismā, un sekojošā antiglobulīna seruma pievienošana izraisa sensibilizēto šūnu aglutināciju.
Izmantojot netiešo Kumbsa testu, tiek noteiktas nepilnīgas antivielas, kas atrodas testa serumā. Šajā gadījumā reakcija notiek divos posmos. Pirmais posms ir testa eritrocītu inkubācija ar testa serumu, kuras laikā uz eritrocītu virsmas tiek fiksētas testa seruma paraugā esošās antivielas. Otrais solis ir antiglobulīna seruma pievienošana.
Līdz šim Kumbsa tests ir plaši izmantots laboratorijas praksē imūnpatoloģisku stāvokļu diagnosticēšanai, jo īpaši autoimūnās hemolītiskās anēmijas gadījumā, ko raksturo sarkano asins šūnu iznīcināšana, jo šūnu membrāna saistās ar antivielām un (vai) komponentiem. komplementa sistēma. To lieto, lai noteiktu Ig G klātbūtni eritrocītu membrānā (parasti Ig G1 un Ig G3), kas var aktivizēt komplementu un dažreiz arī komplementu (C3d). Tomēr akūtā slimības periodā sarkano asins šūnu iznīcināšanas dēļ, uz kuriem liels skaits antivielas, ar hemolītisko krīzi, kā arī ar nepietiekamu antivielu daudzumu hroniskas slimības gaitā, var novērot negatīvu tiešo Kumbsa testu.
Jāuzsver, ka paliek netiešais Kumbsa tests labākā metode individuāla transfūzijas līdzekļa atlase, jo tā ļauj visprecīzāk noteikt donora un saņēmēja individuālo saderību pēc eritrocītu antigēniem.
Pārbaudot visus orgānu un audu recipientus pirmstransplantācijas periodā un hematopoētisko cilmes šūnu recipientus arī pēc transplantācijas, ieteicams veikt papildu tiešo antiglobulīna testu autoantivielu klātbūtnei.
Papildus imūnhematoloģijai un transfuzioloģijai antiglobulīna testus plaši izmanto vairāku patoloģisku stāvokļu diagnostikā: hematoloģiskas slimības, tostarp limfoproliferatīvās slimības, sistēmiskas slimības saistaudi, Sjogrena slimība, hronisks aktīvs hepatīts u.c.
Kumbsa testi tiek aktīvi izmantoti medicīnas ģenētikā un tiesu medicīnā, lai noteiktu virsmas eritrocītu antigēnus.
Kumbsa tests ir diezgan darbietilpīga izpētes metode, kuras ieviešanā nepieciešama īpaša piesardzība. Lietojot to, rodas dažas grūtības, jo īpaši ar vāji pozitīvu reakciju interpretāciju. Ir zināms, ka viltus vāji pozitīvas vai negatīvas reakcijas, veicot Kumbsa testus, var būt sekas nepietiekami efektīvai sarkano asins šūnu mazgāšanai, antiglobulīna reaģenta neitralizēšanai ar seruma pēdām, kā arī saskarei ar netaukainu virsmu, uz kuras ir antiglobulīns. var tikt salabots, tādējādi zaudējot savu aktivitāti. Vēl viens Kumbsa testa trūkums ir antiglobulīna reaģenta nestabilitāte, kura sagatavošanai un uzglabāšanai ir noteiktas iezīmes, kas arī apgrūtina hemaglutinācijas reakcijas kvantitatīvo noteikšanu ar antiglobulīna serumu.
Turklāt pētījumi, ko veica A. Holburn, D. Voak et al. , parādīja, ka kļūdaini negatīvu rezultātu cēlonis var būt pārmērīga kratīšana, atkārtoti suspendējot sarkano asins šūnu suspensiju. Kļūdainus rezultātus, veicot antiglobulīna testus, var izraisīt arī tas, ka antiglobulīna reaģentā ir anti-komplementāru antivielu maisījums, jo īpaši pret C3d-, C3c-, C4c- un C4d- komplementa komponentiem, kas adsorbējas uz ķermeņa virsmas. pārbaudiet sarkanās asins šūnas inkubācijas laikā un izveidojiet pozitīva rezultāta izskatu.
Šos trūkumus var viegli novērst, rūpīgi mazgājot pētāmos paraugus un uzraugot reakcijas apstākļus.
Pēdējā desmitgadē ir izmantots zemas jonu stipruma izotoniskais sāls šķīdums (LISS), lai samazinātu laiku, kas nepieciešams netiešā Kumbsa testa veikšanai un palielinātu tā jutību.
Nenoliedzama antiglobulīna testu priekšrocība, pēc vairāku autoru domām, ir to augstā jutība, kas ievērojami pārsniedz to izšķirtspēju. alternatīvas metodes testi, ko izmanto, lai noteiktu neaglutinējošas antivielas.
Mēs salīdzinājām asins serumu izpētes metožu izšķirtspēju nepilnīgu antivielu klātbūtnei, izmantojot poliglucīnu, želatīnu un antiglobulīna serumu. Pētījuma laikā 140 izoimūno donoru asins seruma paraugos tika kontrolēti nepilnīgo anti-D antivielu titri, izmantojot želatīna, poliglucīna un netiešos antiglobulīna testus. Šo metožu formulēšana tika veikta saskaņā ar vispārpieņemtām metodēm.
Tika konstatēts, ka pēc to izšķirtspējas metodes eritrocītu sensibilizācijas noteikšanai ar anti-D antivielām ir sakārtotas šādi: visjutīgākais ir netiešais Kumbsa tests, pēc tam želatīna tests un vismazāk informatīvais ir poliglucīna tests. Šajā eksperimentu sērijā iegūtie rezultāti pilnībā atbilst literatūras datiem, kas ļauj secināt, ka augsts līmenis Kumbsa testu jutība, kas ļauj ar augstu noteiktības pakāpi noteikt antieritrocītu antivielu klātbūtni organismā, kas neizraisa sarkano asins šūnu aglutināciju.
Taču, praksē veicot Kumbsa testus, ir gadījumi, kad nepilnīgas antivielas netiek atklātas, lai gan slimības klīniskā aina vai iepriekšējā imunizācija liecina par to iespējamu klātbūtni. Šādos gadījumos var pieņemt, ka antivielu daudzums ir nepietiekams, lai tās izgulsnētu antiglobulīna seruma antivielas.
Šo secinājumu apstiprināja mūsu pašu eksperiments, kurā, izmantojot šūnu analītiskās mikroelektroforēzes metodi, tika konstatēta anti-D antivielu klātbūtne uz testa eritrocītiem, kuras netika atklātas netiešajā Kumbsa testā. Šajā eksperimentu sērijā antiglobulīna serums tika pievienots eritrocītiem, kas iepriekš inkubēti ar serumiem, kas iegūti no imunizētu donoru asinīm notiekošās antiķermenīšu veidošanās periodā, t.i. periodā, kad antivielas tajās netika atklātas, izmantojot zināmas metodes, tostarp Kumbsa testu.
Veiktajos pētījumos tika sniegti statistiski pierādījumi par nepilnīgu antivielu klātbūtni uz sarkano asins šūnu virsmas. būtiskas izmaiņas sensibilizēto sarkano asins šūnu elektroforētiskās mobilitātes lielums pēc antiglobulīna seruma pievienošanas. Jāatzīmē, ka anti-D antivielas pēc tam tika noteiktas visiem imunizētajiem donoriem netiešajā Kumbsa testā asins serumā.
Gillerand et al. arī parādīja, ka antiglobulīna testus raksturo noteikts jutīguma slieksnis: pozitīvs rezultāts tiek atzīmēts tikai tad, ja uz vienas sarkanās asins šūnas virsmas ir reģistrētas vismaz 500 Ig G molekulas.
Turklāt literatūrā ir sniegti pierādījumi, ka iespējamais Kumbsa testa negatīvais rezultāts var būt saistīts ar antivielu, kas sensibilizē sarkanās asins šūnas, zemo afinitāti, kā rezultātā tās mazgāšanas procesa laikā viegli eluē no sarkano asinsķermenīšu virsmas. .
Ņemot vērā iepriekš minēto, mēs varam secināt, ka dažos gadījumos negatīvs Kumbsa testa rezultāts vēl nav pierādījums tam, ka uz sarkano asins šūnu virsmas nav fiksētas antivielas.
Ir zināms, ka Kumbsa reakcijas ir ļoti specifiskas un var noteikt lielāko daļu nepilnīgo antivielu. Tomēr, kā liecina daži eksperimentālie dati, antiglobulīna testi var būt pozitīvi arī neimunoloģiskos apstākļos. E. Muirhead et al. otrajā dienā pēc fenilhidrazīna ievadīšanas suņiem tika novērots pozitīvs Kumbsa tests. Tik strauja pozitīvas reakcijas parādīšanās iebilst pret tās imunoloģisko raksturu un drīzāk ir saistīta ar nespecifisku olbaltumvielu adsorbciju uz eritrocītu virsmas.
M. Viljamss u.c. atklāja, ka klavulānskābe var izraisīt arī pozitīvu reakciju, kas, pēc autoru domām, ir saistīta ar nespecifisku plazmas olbaltumvielu adsorbciju uz eritrocītu virsmas. Līdzīga iedarbība tika novērota arī ārstēšanas laikā ar cefalosporīna antibiotikām.
Iepriekš minēto pētījumu autori uzsver Kumbsa testu pozitīvo rezultātu neimunoloģisko raksturu un uzstāj, ka šīs vielas spēj izraisīt sarkano asins šūnu membrānu modifikācijas, kā rezultātā sarkanās asins šūnas var adsorbēt olbaltumvielas (jo īpaši, albumīns), kas parasti atrodas asins plazmā un kuriem nav antivielu īpašību. Turklāt ir iespējams, ka ksenobiotiķis, adsorbēts uz šūnas virsmas, kalpo kā saikne starp šūnas membrānu un plazmas olbaltumvielām.
Lai pareizi interpretētu antiglobulīna testu rezultātus, jāņem vērā arī jauno un nobriedušo sarkano asins šūnu kvantitatīva attiecība perifērajās asinīs. Tika konstatēts, ka retikulocīti, kas izolēti no organisma pastiprinātas eritrona reģenerācijas periodā, var tikt aglutinēti ar antiglobulīna serumu.
Tiešā antiglobulīna testa pozitīvs rezultāts notiek ar dažādiem patoloģiski apstākļi, ko pavada imūnsistēmas traucējumi, iekaisuma procesi, kas izraisa dažādas specifikas antivielu nespecifisku adsorbciju uz eritrocītu membrānām. Tas liecina, ka Ig G molekulas nesadarbojas ar specifiskiem eritrocītu antigēniem, bet tiek fiksētas tikai uz pētāmo šūnu virsmas.
Jāņem vērā, ka, veicot Kumbsa testu tādu slimību gadījumos, kurām raksturīga disproteinēmijas attīstība vai paraproteīnu parādīšanās, pozitīvs rezultāts ir saistīts ar to, ka uz eritrocītu virsmas ir olbaltumvielas, kurām nav antivielas, kas norāda arī uz antiglobulīna testu specifiskuma trūkumu attiecībā uz ar to palīdzību konstatētā proteīna raksturu.
Tādējādi, kā liecina daudzi pētījumi, tiešo un netiešo antiglobulīna testu pozitīvie rezultāti nav absolūts pierādījums antivielu klātbūtnei, jo pozitīvas reakcijas var novērot arī dažādos patoloģiskos stāvokļos, kas nav saistīti ar ķermeņa izosensibilizāciju vai autosensibilizāciju. Tāpēc tikai vairāku imūnseroloģisko metožu rezultātu salīdzinājums ar klīniskā aina slimības ļauj pilnībā novērtēt patoloģiskā procesa attīstību.
Pozitīvs netiešais antiglobulīna tests ar negatīvu tiešo testu parasti norāda uz brīvu alloantivielu klātbūtni testa serumā, kas saistīts ar iepriekšējām asins pārliešanām vai grūtniecību.
Kumbsa tests bieži ir pozitīvs paroksizmālas nakts hemoglobinūrijas saasināšanās laikā; pozitīvs Kumbsa tests ar anti-C3 un anti-C3dg ir saaukstēšanās aglutinīna slimības marķieris.
Gadījumos, kad ir augsts jaundzimušā hemolītiskās slimības attīstības risks, liela nozīme Lai veiktu diagnozi (visbiežāk grūtniecības laikā) un, ja nepieciešams, dinamiski uzraudzītu izskatu un antivielu titra izmaiņas, ir tiešo un netiešo antiglobulīna testu rezultāti. Visbiežāk jaundzimušo hemolītiskā slimība ir saistīta ar mātes un augļa nesaderību ar antigēnu D, retāk ar AB0 sistēmas antigēniem un vēl retāk ar citiem antigēniem (C, c, K utt.). Šī procesa laikā veidojas antivielas La, kas, kā likums, ir nepilnīgas Ig G klases antivielas, ir skaidri noteiktas netiešajā antiglobulīna testā. Ar šo slimību liela nozīme ir pareizi noteiktam identificēto antivielu titram un specifiskumam, jo pastāv zināma korelācija starp antieritrocītu antivielu līmeni grūtnieces asinīs un iespējamā prognoze hemolītiskās slimības smagums.
Ir nepieciešams arī netiešais Kumbsa tests klīniskā prakse lai nodrošinātu drošu transfūzijas terapiju. Tās īstenošana ir obligāta donoru un dažādu kategoriju recipientu imūnhematoloģisko pētījumu, kā arī visu ārstniecības iestāžu pacientu kārtējās apskates, kurām var būt nepieciešama asins un to sastāvdaļu pārliešana, sastāvdaļa.
Netiešo antiglobulīna testu izmanto šādos gadījumos:
Precīzākai Rh piederības (antigēna D) noteikšanai neskaidru Rh faktora noteikšanas rezultātu gadījumā ar citām metodēm (poliglucīns, želatīns utt.);
Identificēt vājus eritrocītu antigēnus (Kell, Duffy, Kidd, Lewis u.c. sistēmas) un antivielas pret šiem antigēniem;
Alloimūno antieritrocītu antivielu, tostarp antivielu, kas izraisa hemolītiskas pēctransfūzijas reakcijas, noteikšanai un identificēšanai;
Noteikt AB0 sistēmas imūno antivielu klātbūtni transfūzijas hemolītisko komplikāciju laikā;
Kā saderības tests pārlieto asiņu un to sastāvdaļu individuālai atlasei.
Tādējādi Kumbsa tests ir svarīgs diagnostikas tests, ko izmanto dažādās medicīnas jomās (hematoloģijā, dzemdniecībā, reimatoloģijā, transfuzioloģijā, klīniskajā un laboratoriskajā diagnostikā utt.). Zināšanas par Kumbsa testa veikšanas īpatnībām palīdzēs palielināt iegūto rezultātu ticamību un veicinās pareizu laboratorijas datu interpretāciju.
Literatūra
1. Antivielas. Metodes / red. D. Ketija. - M.: Mir, 1991.
2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadžijevs A.B.. // Anēmijas transfūzijas terapija: mācību grāmata. rokasgrāmata ārstiem. - M.: Prakt. Medicīna, 2005. - 105.-106. lpp.
3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Ļevčenko L.B.// Transfuzioloģija. - 2006. - Nr.2. - 39.-62.lpp.
4. Donskovs S.I.// Rēzus sistēmas asinsgrupas: teorija un prakse. - M.: VINITI RAS, 2005. - P. 180-186, 195.
5.Imunoseroloģija (normatīvie dokumenti) / sast. A.G. Bašlejs, S.I. Donskovs. - M.: VINITI RAS, 1998. gads.
6.Asins sistēmas izpēte klīniskajā praksē / red. G.I. Kozinets, V.A. Makarova. - M.: Triada-X, 1997. gads.
7. Levins V.I.. Eritrodiēzes un eritropoēzes mehānismam akūtā laikā posthemorāģiskā anēmija: autora kopsavilkums. dis. ...cand. medus. Sci. - Minska, 1968. gads.
8. Ragimovs A.A., Bayramalibeyli I.E.. // Anēmijas diagnostikas, profilakses un ārstēšanas pamati. - M.: GOU VUNMC MH RF, 2002. - P. 204-209.
9. Čumakova E.D.. // Reālas problēmas hematoloģija un transfuzioloģija: Baltkrievijas Republikas VI hematologu un transfuziologu kongresa materiāli, Minska, 2007. gada 24.-25. maijs / red. A.I. Svirnovskis, M.P. Potapņeva. - Minska: Republikāņu hematoloģijas un transfuzioloģijas zinātniskais un praktiskais centrs, 2007. - 50. lpp.
10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lancete. - 1945. - Sēj. 2. - 15. lpp.
11. Frīdmens Dž. // Dž.Klins. Pathol. - 1979. - Sēj. 32. - P. 1014-1018.
12. Holburns A.M.. Kvalitātes kontrole. Metodes hematoloģijā/red. I. Kavils. - Edinburga: Čērčils Livingstons, 1982. - Sēj. 4. - P. 34-50.
13. Khans S.// CMAJ. - 2006. - Sēj. 175, N 8. - P. 919.
14. Komatsu F.// Nipons Rinšo. - 2005. - Sēj. 63 (7. papildinājums). - 719.-721. lpp.
15. Komatsu F.// Nipons Rinšo. - 2005. - Sēj. 63 (7. papildinājums). — P. 716—718.
16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// Jaunā angļu valoda. J. Med. — 1976. gads. - Vol. 277. - 123.-125.lpp.
17. Muirhead E.E., GrovesM., Braiens S. // J. Lab. Clin. Med. — 1954. gads. - Vol. 44. - P. 902-903.
18. Rosse W.F.//Hosp. Prac. - 1995. - N 105.
19. Voaks D., Daunijs D., MūrsB. un citi. //Biotests Bull. - 1986. - Sēj. 1. - P. 41-52.
20. Voaks D., Haigs T., Daunijs D. un citi. Šūnu mazgāšanas mašīnas antiglobulīna testiem. Atkārtota pārbaude — jauna metode, kas parāda vienas plaši izmantotas iekārtas — Sorvall CW1-AF2 — neefektivitāti: ziņojums DHSS tehniskajai nodaļai, 1991. gada februāris.
21. Viljamss M.E., Tomass D., Hārmens C.P.. un citi. //Pretmikrobu līdzekļi un ķīmijterapija. — 1985. gads. - 125.-127.lpp.
22. Zarandona J.M., Yazer M.H.. // CMAJ. - 2006. - Sēj. 174, N 3. - P. 305-307.
Medicīnas ziņas. - 2008. - Nr.3. - 33.-36.lpp.
Uzmanību!
Raksts ir adresēts medicīnas speciālistiem. Šī raksta vai tā fragmentu pārpublicēšana internetā bez hipersaites uz avotu tiek uzskatīta par autortiesību pārkāpumu.
– pētījums, kas palīdz noteikt nepilnīgo antieritrocītu antivielu saturu asinīs. Šis antiglobulīna tests ļauj noteikt antivielas pret grūtniecēm. Turklāt tas ļauj jums sākuma posmi
diagnosticēt hemolītisko anēmiju jaundzimušajiem ar Rh konfliktu. Tas palīdz novērst sarkano asins šūnu iznīcināšanu, kas nepieciešamas normālai asins veidošanai. Šo testu 1945. gadā izveidoja Roberts Kūmbss, tāpēc tas ieguva savu nosaukumu.
Kumbsa tests ir daudzpusīgs tests, kas ļauj savlaicīgi diagnosticēt asinsrades traucējumus gan pieaugušajiem, gan bērniem.
- Ir šādi šādu testu veidi:– ļauj noteikt antivielas, kas atrodas uz sarkano asins šūnu virsmas. Parasti šāds pētījums tiek noteikts, ja ir aizdomas par hemolīzi, autoimūnu hemolītisko anēmiju vai citām autoimūnām slimībām. Turklāt tas tiek veikts pēc zāļu terapija zāles, kuru pamatā ir hinīns, penicilīns vai metildopa, vai pēc asins pārliešanas. Lai iegūtu precīzākus rezultātus, jums pilnībā jāpārtrauc zāļu lietošana vismaz 1 nedēļu pirms pētījuma.
- Netiešais Kumbsa tests– tests, ko var izmantot, lai noteiktu antieritrocītu antivielas plazmā. To parasti veic grūtniecības laikā un pirms asins pārliešanas. Antieritrocītu antivielas parādās cilvēka asinīs reaktīvās imūnsistēmas laikā vai kā reakcija uz noteiktiem medikamentiem. Lai iegūtu precīzāku pētījumu, vienlaikus tiek ņemti vairāki paraugi ar 2 stundu intervālu.
Lietošanas indikācijas
Kumbsa testu veic tikai tad, ja ir nopietnas indikācijas. Šis ir dārgs un laikietilpīgs pētījums, kas ir īpašs tests.
Parasti šādas situācijas tiek uzskatītas par norādēm tās īstenošanai:
- Asins pārliešanas laikā. Tests ļauj noteikt, vai recipienta asinis iesakņosies cilvēka organismā, kā arī to, vai ir iespējama ziedošana. Šajā gadījumā ir jāizpēta gan donora, gan saņēmēja materiāls. Ir svarīgi noteikt antivielu raksturu, jo, ja tās ir nesaderīgas organismā uz Rh konflikta fona, imūnsistēma. Tas noved pie attīstības nopietnas slimības, un iekšā retos gadījumos pat nāvi.
- Pirms tam ķirurģiskas iejaukšanās kad pastāv asins zuduma risks. Tas tiek darīts, lai ārsts nekavējoties varētu ievadīt piemērotas asinis ķermeņa atjaunošanai.
- Lai noteiktu Rh sensibilizāciju. Rēzus ir specifisks antigēns, kas grūtniecības laikā parādās katras sievietes ķermenī. Ja mātei ir pozitīvs Rh, bet tēvam negatīvs, vai otrādi, bērnam nav atkarības - viņš var mantot jebkuru. Ja bērns no mātes saņem pretējo rēzusu, pastāv liels sensibilizācijas risks. Šo parādību raksturo mātes un bērna asiņu sajaukšanās. Tas var notikt gan grūtniecības, gan dzemdību laikā.
Ja grūtnieces ķermenī notiek rēzus konflikts, tad mātes imūnsistēma sāk uztvert viņas augli kā svešķermenis. Šī iemesla dēļ pastāv liels risks, ka viņš sāks viņam uzbrukt.
Šādu darbību rezultātā mazulim var attīstīties nopietnas patoloģijas. Visbiežāk rodas eritroblastoze - parādība, kurā bērna ķermenis nevar ražot pietiekamu skaitu sarkano asins šūnu.
Turklāt Rh konflikta dēļ augļa nāve var notikt dzemdē vai tūlīt pēc piedzimšanas. Ar pareizu pieeju ārstēšanai no šādām nopietnām sekām var viegli izvairīties.
Atkāpes no normas
Plkst pozitīvs rezultāts Pamatojoties uz Kumbsa reakciju, ārsts secina, ka asins serumā ir antivielas pret sarkanajām asins šūnām. Tas nozīmē, ka donora asinis var nebūt saderīgas ar pacienta asinīm.
Ja grūtnieces organismā ar Rh-negatīvām asinīm tiek diagnosticēts pozitīvs rezultāts, tad viņas organismā ir antivielas pret augļa asinīm.
Tas norāda uz Rh konfliktu, kas prasa ārkārtīgi rūpīgu ārsta pieeju grūtniecības vadīšanai, kā arī visu sievietes norādījumu un ieteikumu ievērošanu.
Ja bērna asinīs ir antivielas, tiek diagnosticēta jaundzimušā hemolītiskā slimība. Šajā gadījumā tiek veikts atkārtots pētījums, lai noteiktu, vai topošās māmiņas asinīs palielinās antivielu līmenis vai nē.
Iespējamās Kumbsa testa komplikācijas
Kumbsa tests ir diezgan drošs tests, kas ļauj diagnosticēt vairākus autoimūnas slimības. Tas reti izraisa komplikācijas, parasti negatīvas sekas kas saistīti ar asins paraugu ņemšanu.
Viņi ir:
- Asiņošana vai asiņošana zem ādas
- Reibonis un ģībonis
- Infekciozā infekcija
7 295
- antiglobulīna tests, kura mērķis ir identificēt Rh negatīvās asinīs nepilnīgas antieritrocītu antivielas pret Rh faktoru - specifisku proteīnu, kas atrodas uz Rh pozitīvo asiņu eritrocītu virsmas. Ir divi šī testa veidi: tiešais - antivielu noteikšana uz sarkano asins šūnu virsmas, netiešā - antivielu noteikšana asins serumā. Tiešās pārbaudes tiek veiktas asins slimību diagnostikā un ārstēšanā: hemolītiskā anēmija, jaundzimušo hemolītiskā slimība un citas. Netiešo testu veic, lai novērtētu donora un recipienta asiņu saderību pārliešanas laikā, kā arī noteiktu Rh konflikta esamību un risku, plānojot un vadot grūtniecību. Kumbsa testa materiāls ir venozās asinis. Pētījums tiek veikts, izmantojot metodes, kuru pamatā ir aglutinācijas reakcija. Parasti abi testi dod negatīvu rezultātu. Analīze tiek pabeigta vienas dienas laikā.
Kumbsa tests - klīniskais pētījums Rh-negatīvas asinis, kuru mērķis ir noteikt antivielas pret Rh faktoru. Testu izmanto, lai noteiktu Rh konflikta un hemolītisko reakciju attīstības risku. Katram cilvēkam sarkano asinsķermenīšu virsma satur noteiktu antigēnu jeb aglutinogēnu kopumu – dažāda rakstura savienojumus, kuru esamību vai neesamību izmanto asinsgrupas un Rh faktora noteikšanai. Ir daudz veidu antigēnu, tostarp medicīnas prakse Vislielākā praktiskā nozīme ir aglutinogēniem A un B, kas nosaka asins grupu, un aglutinogēnam D, Rh faktoram. Ar pozitīvu Rh faktoru D antigēni tiek konstatēti uz eritrocītu ārējās membrānas, bet ar negatīvu faktoru tie nav.
Kumbsa tests, ko sauc arī par antiglobulīna testu, ir paredzēts nepilnīgu anti-eritrocītu antivielu noteikšanai pret Rh faktora sistēmu asinīs. Antivielas pret Rh faktoru ir specifiski imūnglobulīni, kas veidojas Rh negatīvās asinīs, kad tajās nonāk sarkanās asins šūnas ar aglutinogēniem D. Tas var notikt, ja tiek sajauktas augļa un grūtnieces asinis, veicot asins pārliešanu bez iepriekšējas asinīm rakstot. Kumbsa tests pastāv divās versijās – tiešajā un netiešajā. Darot tiešā pārbaude Kumbss atklāj antivielas, kas pievienotas sarkano asins šūnu virsmai. Pētījumu izmanto, lai noteiktu hemolītiskās reakcijas cēloni. Netiešā Kumbsa testa mērķis ir noteikt antieritrocītu antivielas asins plazmā. Ir nepieciešams noteikt asins saderību starp donoru un recipientu vai māti un augli, un tas palīdz novērst Rh konflikta attīstību un tai sekojošo sarkano asins šūnu hemolīzi.
Asinis abām Kumbsa testa versijām tiek ņemtas no vēnas. Analīze tiek veikta ar aglutināciju, izmantojot antiglobulīna serumu. Pētījuma rezultātus izmanto hematoloģijā, lai identificētu hemolītisko reakciju cēloņus, ķirurģijā un reanimācijā, veicot asins pārliešanu, dzemdniecībā un ginekoloģijā, novērojot grūtniecību sievietēm ar Rh-negatīvām asinīm.
Indikācijas
Tiešo Kumbsa testu, kas nosaka sarkano asinsķermenīšu virsmai piesaistītās antivielas, nosaka dažādas izcelsmes hemolītisko reakciju (sarkano asinsķermenīšu iznīcināšanas) gadījumos. Pētījums indicēts primārai autoimūnai hemolītiskajai anēmijai, pēctransfūzijas hemolītiskajai anēmijai, jaundzimušā hemolītiskajai slimībai, eritrocītu hemolīzei, ko izraisa autoimūna, audzēja vai infekcijas slimības, kā arī uzņemšana zāles, piemēram, hinidīns, metildopa, prokainamīds. Netiešo Kumbsa testu, kas nosaka antivielas asins plazmā, izmanto, lai novērstu Rh konflikta attīstību. Tas ir indicēts pacientiem, kuri gatavojas asins pārliešanai, kā arī grūtniecēm ar negatīvu Rh faktoru, ja bērna topošajam tēvam ir pozitīvs Rh faktors.
Lai noteiktu Rh saderību, Kumbsa tests netiek parakstīts pacientiem ar Rh pozitīvām asinīm. Šajos gadījumos uz sarkano asins šūnu virsmas jau atrodas antigēni, ko nevar izraisīt asins pārliešana vai augļa asiņu iekļūšana grūtnieces asinsritē. Tāpat pētījums nav indicēts grūtniecēm, ja abiem vecākiem ir negatīvs Rh faktors – iedzimta recesīvā pazīme. Bērnam šādos pāros vienmēr ir Rh-negatīvas asinis, imunoloģisks konflikts ar māti nav iespējams. Hemolītisko patoloģiju gadījumā antiglobulīna testu neizmanto, lai uzraudzītu terapijas panākumus, jo rezultāti neatspoguļo sarkano asins šūnu iznīcināšanas procesa aktivitāti.
Kumbsa testa ierobežojums ir izpētes procedūras darbietilpība - lai iegūtu ticamus rezultātus, ir jāievēro temperatūras un laika nosacījumi, reaģentu un biomateriāla sagatavošanas noteikumi. Kumbsa testa priekšrocības ietver tā augsto jutību. Hemolītiskās anēmijas gadījumā šī testa rezultāti paliek pozitīvi, pat ja hemoglobīna, bilirubīna un retikulocītu līmenis tiek normalizēts.
Sagatavošanās analīzei un materiāla savākšanai
Materiāls, ko izmanto Kumbsa testa veikšanai, ir venozās asinis. Asins paraugu ņemšanas procedūras laikam un pacienta sagatavošanai nav īpašu prasību. Tāpat kā jebkurā pētījumā, pēc ēšanas ieteicams ieturēt pārtraukumu vismaz 4 stundas, bet pēdējo 30 minūšu laikā atmest smēķēšanu. fiziskā aktivitāte, izvairīties emocionālais stress. Ir arī vērts iepriekš apspriest ar savu ārstu nepieciešamību pārtraukt zāļu lietošanu – dažas zāles var izkropļot Kumbsa testa rezultātus. Asinis tiek ņemtas, izmantojot šļirci no kubitālās vēnas vai retāk no vēnas plaukstas aizmugurē. Dažu stundu laikā materiāls tiek nogādāts laboratorijā.
Veicot tiešo Kumbsa testu, pacienta asins serumam pievieno antiglobulīna serumu. Pēc kāda laika maisījums tiek pārbaudīts, lai noteiktu aglutinātu klātbūtni - tie veidojas, ja uz sarkanajām asins šūnām ir antivielas. Ja rezultāts ir pozitīvs, nosaka aglutinācijas titru. Netiešais Kumbsa tests sastāv no vairākiem soļiem. Pirmkārt, serumā esošās antivielas tiek fiksētas uz injicētajām sarkanajām asins šūnām inkubācijas laikā. Pēc tam paraugam pievieno antiglobulīna serumu, pēc kāda laika nosaka aglutinātu klātbūtni un titru. Analīzes periods ir 1 diena.
Normāli rezultāti
Parasti tiešā Kumbsa testa rezultāts ir negatīvs (-). Tas nozīmē, ka asinīs nav antivielu, kas saistītas ar sarkanajām asins šūnām, un tās nevar izraisīt hemolīzi. Normāls rezultāts Arī netiešais Kumbsa tests ir negatīvs (-), tas ir, asins plazmā nav antivielu pret Rh faktoru. Gatavojoties recipienta asins pārliešanai, tas nozīmē saderību ar donora asinīm, uzraugot grūtniecību, tas nozīmē, ka mātei nav Rh sensibilizācijas, zems imunoloģiska konflikta attīstības risks. Fizioloģiskie faktori, piemēram, uztura paradumi vai fiziskās aktivitātes, nevar ietekmēt testa rezultātu. Tāpēc, ja rezultāts ir pozitīvs, nepieciešama ārsta konsultācija.
Analīzes diagnostiskā vērtība
Pozitīvu Kumbsa testa rezultātu izsaka kvalitatīvi no (+) līdz (++++) vai kvantitatīvi ar titriem no 1:16 līdz 1:256. Antivielu koncentrācijas noteikšana uz sarkanajām asins šūnām un asins serumā tiek veikta abu veidu paraugos. Ja tiešais Kumbsa tests ir pozitīvs, uz sarkano asins šūnu ārējās membrānas tiek konstatētas antivielas, kas izraisa šo asins šūnu iznīcināšanu. Cēlonis var būt asins pārliešana bez iepriekšējas mašīnrakstīšanas – pēcpārliešanas hemolītiskā reakcija, kā arī jaundzimušā eritroblastoze, hemolītiskā reakcija medikamentu lietošanas dēļ, primāra vai sekundāra autoimūna hemolītiskā anēmija. Sekundāro sarkano asins šūnu iznīcināšanu var izraisīt sistēmiskā sarkanā vilkēde, Evansa sindroms, Valdenstrema makroglobulinēmija, paroksizmāla aukstā hemoglobinūrija, hroniska limfoleikoze, limfoma, infekciozā mononukleoze, sifiliss, mikoplazmas pneimonija.
Pozitīvs netiešā Kumbsa testa rezultāts norāda uz antivielu klātbūtni plazmā pret Rh faktoru. Praksē tas nozīmē, ka ir notikusi Rh sensibilizācija, un pēc donoru asiņu infūzijas grūtniecības laikā ir iespējama Rh konflikta attīstība. Lai novērstu grūtniecības komplikācijas, sievietes ar pozitīvu Kumbsa testa rezultātu tiek ievietotas īpašā reģistrā.
Anomāliju ārstēšana
Kumbsa tests attiecas uz izoseroloģiskiem pētījumiem. Tās rezultāti ļauj identificēt hemolītisko reakciju, kā arī noteikt donora un recipienta, mātes un augļa asiņu saderību, lai novērstu Rh konflikta attīstību. Ja testa rezultāts ir pozitīvs, tad jāmeklē padoms pie ārstējošā ārsta – akušiera-ginekologa, hematologa, ķirurga.
Apstiprināts ar Roszdravnadzor rīkojumupar “Reaģentu komplekta rēzus sistēmas antigēnu un antivielu noteikšanai cilvēka asinīs” izmantošanu
(AGS Kumbsa pārbaudei)
TU 9398-102-51203590-2012
RU Nr.RZN 2013/1255 10.11.2013.
I. IEVADS
Standarta serums Kumbsa testa veikšanai satur specifiskas heteroimūnas antivielas pret cilvēka asins proteīniem un ir paredzēts lietošanai divās reakcijas opcijās – tiešajā un netiešajā Kumbsa testā.
Ir šādi šādu testu veidi: izmanto, lai noteiktu eritrocītu sensibilizāciju in vivo jaundzimušo hemolītiskās slimības gadījumā un pacientiem ar hroniskas hemolītiskās anēmijas autoimūnu formu, kā arī dažos citos stāvokļos. Tiešā Kumbsa testa veikšana sastāv no tā, ka Kumbsa testa serums tiek pievienots pētāmajām sarkanajām asins šūnām, kas iepriekš nomazgātas no viņu pašu plazmas olbaltumvielām. Ja sarkanās asins šūnas ir sensibilizētas in vivo, reakcija izraisa to aglutināciju.
Netiešais Kumbsa tests izmanto kā testu organisma sensibilizācijas stāvokļa noteikšanai, ļaujot atklāt antivielas, kas ir brīvā stāvoklī pārbaudāmās personas asins serumā; kā pārlieto asiņu saderības testu, kad pārbauda recipienta seruma ietekmi uz paredzētā donora sarkanajām asins šūnām; un kā tests dažādu grupu antigēnu noteikšanai eritrocītos, izmantojot iepriekšēju iedarbību uz standarta serumiem, kas satur zināmas specifiskuma antivielas. Netiešais Kumbsa tests (visas iespējas) ražots divos posmos, no kuriem pirmais ir testa (vai standarta) seruma inkubācija ar standarta (vai testa) eritrocītiem, t.i., eritrocītu sensibilizācija in vitro. Otrais posms ir faktiskā reakcija ar serumu Kumbsa testam, kas tiek veikts tāpat kā tiešais Kumbsa tests.
Reakcijas gala rezultāts gan tiešajā, gan netiešajā Kumbsa testā rodas mijiedarbības dēļ standarta serums Kumbsa testam ar antivielām (cilvēka asins proteīnu), kas fiksēts uz sarkanajām asins šūnām. Šis rezultāts izpaužas kā sarkano asins šūnu aglutinācija. Lai novērotu aglutināciju, jāizmanto balts porcelāns vai jebkura balta plāksne ar mitrināmu virsmu, lai uz tās uzklātie pilieni labi sajauktos un neizkliedētos pa šķīvja virsmu. Sajauktos pilienus viegli uzsmērē pa šķīvi, apmēram 2 kapeiku monētas izmērā.
II. REAKCIJAS SASTĀVDAĻU SAGATAVOŠANA
Testa serumu, lai noteiktu tajā esošo antivielu klātbūtni un specifiskumu, iegūst no izmeklējamā cilvēka asinīm, nepievienojot konservantus. Uzglabāt + 4–8 0 C temperatūrā ne ilgāk kā 2 dienas vai sasaldēti 1 mēnesi.
Serums saderības pārbaudei tiek iegūts tādā pašā veidā, bet tiek izmantots ar glabāšanas laiku, kas nepārsniedz 2 dienas.
Sarkanās asins šūnas, kas paredzētas noteiktu izoantigēnu noteikšanai tajās, tiek sagatavotas ar kādu konservantu no personas, kuras asinis tiek izmeklētas. Varat arī izmantot sarkano asins šūnu nogulsnes no asinīm, kas ņemtas bez konservanta.
Pārbaudot saderību, tiek izmantotas donoru asinis, kas tiek izvilktas caur adatu no flakona, kas sagatavots pārliešanai.
Visos gadījumos sarkanās asins šūnas 3–4 reizes mazgā mēģenēs no plazmas, pievienojot 8–10 tilpumus izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma vienam tilpumam sarkano asins šūnu, kam seko samaisīšana un centrifugēšana ar ātrumu 1500–2000 apgr./min 5. 10 minūtes (līdz pilnīgai eritrocītu sedimentācijai). Pēc katras centrifugēšanas supernatants tiek atsūkts.
III. REAKCIJAS TEHNIKA
Pārbaudāmos eritrocītus sagatavo 5% suspensijas veidā, kam vienu pilienu četras reizes nomazgātu eritrocītu mēģenē sajauc ar 19 pilieniem izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma.
Vienu pilienu (0,05 ml) 5% sarkano asins šūnu suspensijas pārnes uz baltas plāksnes un nosmērē. Plāksni šūpo un 3 minūtes novēro, lai redzētu, vai nav notikusi sarkano asins šūnu aglutinācija. Ja aglutinācija nav notikusi, pievienojiet 1-2 pilienus standarta seruma Kumbsa testam, rūpīgi samaisiet pilienus, pēc tam nedaudz sakratiet plāksni, pēc tam atstājiet to vienu vai divas minūtes un vēlreiz sakratiet. Tajā pašā laikā rezultāts tiek uzraudzīts 10 minūtes, kas tiek izteikts aglutinācijas klātbūtnē vai bez tās.
Tiešā Kumbsa testa rezultātu interpretācija.
Nav aglutinācijas - negatīvs tests
Aglutinācijas klātbūtne
– pozitīvs tests, kas norāda uz pārbaudāmo sarkano asins šūnu sensibilizāciju, t.i., uz tām esošo antivielu uzsūkšanos, kas notikusi in vivo cilvēka organismā (jaundzimušajam, pacientam). Ja pārbaudīto sarkano asins šūnu aglutinācija notika pirms pievienošanas serums Kumbsa testa veikšanai netiek ņemts vērā;
2. Netiešais Kumbsa tests
Paredzēts izoantivielu noteikšanai izmeklējamās personas asins serumā
To lieto gadījumos, kad nepieciešams noskaidrot, vai pacienta, grūtnieces, donora u.c. asinīs ir nepilnīgas formas izoimūnās antivielas, un noskaidrot to specifiku. Reakcijai izmanto izmeklējamās personas asins serumu un standarta sarkanās asins šūnas ar zināmu specifiku. Starp šiem 8-10 vai vairāk sarkano asins šūnu paraugiem faktoriem ir jāatšķiras no citām sistēmām, un ir ļoti svarīgi, lai katrs no šiem faktoriem būtu ietverts vismaz vienā sarkano asins šūnu paraugā. Panelī ir arī Rh negatīvo eritrocītu paraugi ar dažādām citu sistēmu antigēnu kombinācijām, lai starp tiem būtu Duffy pozitīvie un Duffy negatīvie, kas, savukārt, tiktu sadalīti Kell-pozitīvajos un Kell-negatīvajos, Kidd pozitīvs un Kidd negatīvs utt. Kā negatīva kontrole, ja iespējams, reakcijā tiek iekļauti tās personas eritrocīti, kuras serums tiek pārbaudīts.
Reakcijas tehnika
Statīvā tiek uzstādītas vairākas centrifūgas vai citas mēģenes ar tilpumu 3-10 ml, atbilstoši reakcijā iekļauto eritrocītu paraugu skaitam. Mēģenes ir marķētas un, saskaņā ar marķējumu, tām pievieno 1 nelielu pilienu (0,01 ml) mazgātu standarta sarkano asins šūnu. Katrā mēģenē iepilina trīs pilienus testa seruma, mēģenes enerģiski sakrata, lai sarkanās asins šūnas sajauktos ar serumu, un ievieto termostatā 37 0 C temperatūrā uz 45 minūtēm. Pēc inkubācijas mēģenes tiek izņemtas no termostata, un sarkanās asins šūnas tiek mazgātas, pievienojot mēģenes augšpusē izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu, sajaucot un pēc tam centrifugējot. Mazgāšanu atkārto 3-4 reizes, katru reizi uzmanīgi izsūcot supernatantu, pēc tam izskalotajām sarkanajām asins šūnām pievieno 2 pilienus izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma, lai iegūtu aptuveni 5% no suspensijas (izmantojot centrifūgas mēģenes, var ierobežot sevi mazgāt divreiz).1 pilienu 5% eritrocītu suspensijas no katras mēģenes pārnes uz baltu plāksni, tur pievieno 1-2 pilienus standarta seruma Kumbsa testa veikšanai un serumu rūpīgi sajauc ar eritrocītiem. Plāksni nedaudz sakrata, pēc tam atstāj uz 1-2 minūtēm un periodiski atkal sakrata, vienlaikus 20 minūtes novērojot reakcijas rezultātu.
Rezultātu interpretācija
Nav aglutinācijas pazīmju (negatīvs rezultāts) visos paraugos nozīmē, ka testa serums nesatur nepilnīgas antivielas pret grupas antigēniem, kas atrodas pētījumā iekļautajās standarta sarkanajās asins šūnās.Ja dažos vai lielākajā daļā pilienu, papildus kontrolei, novērotā aglutinācija , tas nozīmē, ka testa serumā ir nepilnīgas antivielas pret eritrocītu antigēniem. Jautājums par šo antivielu specifiku tiek izlemts, salīdzinot pozitīvo un negatīvas reakcijas ar reakcijā iekļauto sarkano asins šūnu antigēno struktūru. Jautājums par šo antivielu aktivitāti tiek atrisināts ar titrēšanu.
1. piemērs. Aglutinācija notika ar visiem eritrocītu paraugiem, kas satur Rh 0 (D) faktoru, neatkarīgi no citu šīs sistēmas un citu sistēmu faktoru esamības vai neesamības, savukārt ar visiem Rh 0 (D) - negatīvajiem paraugiem aglutinācija netika novērota (tātad neatkarīgi no citu faktoru esamības vai neesamības) - tas nozīmē, ka testa serumā ir nepilnīgas anti-Rēzus antivielas - Rh 0 (D).
2. piemērs. Aglutinācija notika ar visiem eritrocītu paraugiem, kas satur Dafi faktoru, neatkarīgi no rēzus sistēmas un citu sistēmu antigēnu esamības vai neesamības, savukārt aglutinācija netika novērota ar visiem Dafija negatīvajiem paraugiem, kas nozīmē, ka testa serums satur nepilnīgu anti- antivielas - Dafijs.
Papildinājums. Ja iestādē nav pilna standarta sarkano asins šūnu paneļa, bet ir nepieciešams pārbaudīt serumu antivielu klātbūtnei, ieteicams veikt pētījumu ar 25-30 nejaušiem sarkano asins šūnu paraugiem no veseliem indivīdiem. grupa 0 (I) vai serums ar tādu pašu nosaukumu kā testa serums. Tas ļaus atrisināt jautājumu par antivielu esamību vai neesamību pret lielāko daļu Rh-Hr, Duffy, Kell, Kidd sistēmas antigēnu.
Ja tiek iegūts pozitīvs rezultāts, turpmāku secinājumu par konstatēto antivielu specifiku var izlemt, veicot īpašu pētījumu ar pilnu standarta sarkano asins šūnu paneli.
3. Paņēmiens netiešā Kumbsa testa veikšanai, lai pārbaudītu pārlieto asiņu saderību.
Lai novērstu nesaderību asins pārliešanas laikā, pirms pārliešanas jāveic šādi saderības testi:
Saderības tests ABO asins grupām, kas tiek veikts plaknē istabas temperatūrā.
Rh faktora un citu izoantigēnu saderības testi.
Vienu nelielu (0,01 ml) nomazgātu donora eritrocītu pilienu, kas ņemts caur adatu no asins pārliešanai paredzētās pudeles, tiek pārnests uz centrifūgas vai citas mēģenes dibenu ar tilpumu 3-4 ml un 3 pilienus pacienta. tam pievieno serumu. Mēģeni sakrata, lai eritrocīti sajauktos ar serumu, pēc tam to ievieto termostatā 37 0 C temperatūrā uz 45 minūtēm. Pēc inkubācijas mēģenes augšpusē pievieno izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu, mēģenes saturu sajauc un centrifugē 5-10 minūtes. Šo sarkano asins šūnu mazgāšanu atkārto 3 reizes, katru reizi uzmanīgi noņemot supernatantu. Izmantojot centrifūgas mēģenes, varat aprobežoties ar mazgāšanu divreiz. Pievienojiet 2 pilienus izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma mazgātajām sarkanajām asins šūnām, lai iegūtu aptuveni 5% suspensijas.
1 pilienu 5% sarkano asins šūnu suspensijas pārnes uz baltas plāksnes, pievieno 1-2 pilienus standarta seruma Kumbsa testa veikšanai un serumu rūpīgi sajauc ar sarkanajām asins šūnām. Pēc tam plāksni nedaudz sakrata, atstāj uz 1-2 minūtēm un periodiski atkal sakrata, 20 minūtes vērojot rezultātu.
Piezīme: Rh nesaderības gadījumā aglutinācija parasti notiek pirmajā minūtē, bet ar zemu Rh antivielu (vai citu antivielu) titru aglutinācija var notikt vēlāk, dažreiz līdz divdesmitajai minūtei.
Rezultāta interpretācija:
Ir redzami aglutināti gabaliņu veidā uz notīrīta vai pilnīgi balināta fona - tas nozīmē, ka donora asinis nesaderīgi ar saņēmēja asinīm un viņam nevar pārliet.
Prombūtne aglutinācijas pazīmes nozīmē, ka pacienta asinīs nav nepilnīgu antivielu pret donora sarkanajām asins šūnām attiecībā pret Rh faktoru un citiem izoantigēniem, pret kuriem varētu veidoties nepilnīgas antivielas.
Netiešais Kumbsa tests ir jutīgs tikai pret nepilnīgām antivielām.
4. Netiešā Kumbsa testa metode noteikšanai antigēna struktūra sarkanās asins šūnas
Šo testu izmanto, lai noteiktu sarkano asins šūnu grupas antigēnu esamību vai neesamību, izmantojot standarta serumu, kas satur atbilstošās antivielas nepilnīgā formā.
Visbiežāk netiešo Kumbsa testu izmanto, lai noteiktu antigēnus Kell (K), Duffy (Fy), Kidd (Jk), kā arī lai noteiktu vājo Rh sistēmas antigēnu (Du).
Pirms turpināt antigēnu noteikšanu, pētāmās sarkanās asins šūnas jāpārbauda tiešā Kumbsa testā. Ja tiešā testa rezultāts ir pozitīvs, antigēnu noteikšanu ar netiešo Kumbsa testu nevar veikt, un šim nolūkam ir jāizmanto citas reakcijas.
Reakcijai izmanto centrifūgu vai citas mēģenes ar tilpumu 3-4 ml trīs daudzumā: vienu eritrocītu testa paraugam un divas uz 1 nelielu (0,01 ml) trīs reizes mazgātu testa eritrocītu pilienu. pirmās mēģenes apakšā otrai mēģenei pievieno kontroles eritrocītus, kas satur vajadzīgo antigēnu (piemēram, Dafi pozitīvs) un trešajā mēģenē - negatīvo kontroli (Duffy-negatīvs). Pievienojiet 2-3 pilienus standarta seruma (šajā piemērā anti-Duffy) visām mēģenēm. Mēģenes sakrata, lai saturs sajauktos, un ievieto termostatā 37 0 C temperatūrā uz 45 minūtēm. Pēc šādas inkubācijas mēģenes izņem no termostata, uz augšu pievieno izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu, saturu kārtīgi samaisa un centrifugē ar 1500-2000 tūkstošiem apgr./min 5-10 minūtes. Pēc centrifugēšanas supernatantu rūpīgi atsūc un šo sarkano asins šūnu mazgāšanu atkārto 4 reizes. (Izmantojot centrifūgas mēģenes, varat aprobežoties ar mazgāšanu divreiz).
Pievienojiet 2 pilienus izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma mazgātajām sarkanajām asins šūnām, lai iegūtu aptuveni 5% suspensijas. 1 pilienu 5% eritrocītu suspensijas no katras mēģenes pārnes uz baltas plāksnes, katram eritrocītu pilienam pievieno 1-2 pilienus standarta seruma Kumbsa testa veikšanai un samaisa. Plāksni nedaudz sakrata, pēc tam atstāj uz 1-2 minūtēm un periodiski atkal sakrata, vienlaikus novērojot reakcijas gaitu 20 minūtes.
Rezultātu interpretācija
Aglutinācijas klātbūtne sarkanās asins šūnas (pozitīvs rezultāts) nozīmē, ka asinis satur vajadzīgo antigēnu (šajā piemērā Duffy pozitīvas asinis).
Nav aglutinācijas (negatīvs rezultāts) nozīmē, ka pārbaudītās asinis nesatur vēlamo antigēnu (Duffy negatīvs).
Rezultāts tiek ņemts vērā kā patiess pēc kontroles paraugu pārbaudes, t.i., piemērā, ja rezultāts ir pozitīvs ar Duffy pozitīvu paraugu un negatīvs ar Duffy negatīvu paraugu.
5. Atbrīvošanas veidlapa
Reaģents ir pieejams šķidrā veidā pudelēs pa 5 vai 10 ml (1 ml satur 10 devas). Nātrija azīds tiek izmantots kā konservants galīgajā koncentrācijā 0,1%.
6.Uzglabāšana
Uzglabāšanas laiks: divi gadi ledusskapī 2-8°C. Atvērta pudele ir piemērota lietošanai, uzglabājot ledusskapī, hermētiski noslēgtu, visu derīguma termiņu.
Sūdzības pamatojums ir: aktivitātes trūkums, nekonkrētība, pudeles integritātes pārkāpums, pārslu klātbūtne, beidzies derīguma termiņš reaģenta derīguma termiņš. Iesniedzot sūdzību, norādiet saņemšanas datumu, piegādātāju (ja preci saņēmāt nevis no ražotāja), partijas numuru un iemeslus, kādēļ reaģents tika atzīts par nepiemērotu. Lūdzu, pievienojiet protokolu ar reaģenta pārbaudes rezultātiem un 2-3 neatvērtas pudeles ar reaģentu
Sūdzība jānosūta ražotājam SIA "MEDICLON": 127276
