Reakcia nepriamej alebo pasívnej hemaglutinácie (RNHA alebo RPHA) je citlivejšia a špecifickejšia ako aglutinačná reakcia. Táto reakcia sa tiež používa dvoma spôsobmi.

1) Na detekciu protilátok v krvnom sére pacienta sa používajú erytrocytárne diagnostika, pri ktorých sa antigén adsorbuje na povrchu erytrocytov ošetrených tanínom. V súvislosti s touto reakciou sa častejšie používa pojem RPGA.

Testované sérum sa zriedi v jamkách plastových platničiek a pridá sa erytrocytárne diagnosticum. Pri pozitívnej reakcii sa pozdĺž stien otvoru objaví tenký film vo forme "čipkového dáždnika" s spätnú reakciu- hustý sediment erytrocytov vo forme "gombíka".

2) Na detekciu toxínov a bakteriálnych antigénov v testovanom materiáli sa používajú protilátkové erytrocytové diagnostika získané adsorpciou protilátok na erytrocyty. V súvislosti s touto reakciou sa častejšie používa termín RNGA. Napríklad pomocou protilátkových diagnostik sa zisťuje antigén morového bacila, difterický exotoxín, botulínový exotoxín.

Coombsova reakcia (aptiglobulínový test)

Reakcia sa používa na detekciu neúplných protilátok, napríklad protilátok proti Rh faktoru. Testované sérum sa pridáva k Rh + erytrocytom, u ktorých sa predpokladá prítomnosť neúplných protilátok proti Rh faktoru. Nekompletné protilátky naviazané na erytrocyty nespôsobujú aglutináciu, pretože majú iba jedno aktívne centrum. Potom pridajte antiglobulínové sérum obsahujúce protilátky proti ľudským globulínom. V kombinácii s nekompletnými protilátkami spôsobuje antiglobulínové sérum aglutináciu erytrocytov.

zrážacia reakcia

Podstatou reakcie je vyzrážanie (precipitácia) antigénu pôsobením špecifických protilátok. Na dosiahnutie viditeľnej reakcie je potrebná prítomnosť elektrolytu. Antigén v precipitačnej reakcii sú molekulárne dispergované látky.

Reakcia zrážania kruhu umiestnené v úzkych zrážacích trubiciach. Imunitné sérum sa naleje do skúmavky a na ňu sa opatrne navrství testovaný materiál. V prítomnosti antigénu v ňom sa na hranici dvoch kvapalín vytvorí nepriehľadný kruh zrazeniny.

Reakcia sa používa v forenzná medicína určiť druhy bielkovín v krvných škvrnách, v sperme atď.; na stanovenie antigénu pri diagnostike antraxu (Ascoliho reakcia), meningitídy a iných infekcií; v sanitárnom a hygienickom výskume - zistiť falšovanie produkty na jedenie. Imunitné precipitačné séra sa získajú imunizáciou zvierat vhodným antigénom. Napríklad ľudský proteín precipitujúci sérum sa získa imunizáciou králika ľudským proteínom. Titer precipitujúceho séra je najvyšším zriedením antigénu, s ktorým reaguje. Sérum sa zvyčajne používa neriedené alebo riedené v pomere 1:5.

Precipitačná reakcia na agarovom géli vykonávané niekoľkými spôsobmi. Ide o dvojitú imunodifúznu reakciu, radiálnu imunodifúznu reakciu, imunoelektroforéznu reakciu.

Dvojitá imunodifúzna reakcia(podľa Ouchterlonyho). Roztopený agarový gél naleje do Petriho misky a po stuhnutí sa do nej vyrežú otvory. Do niektorých jamiek sa umiestni antigén, do iných sa umiestnia imúnne séra, ktoré difundujú do agaru a v mieste stretnutia tvoria zrazeninu vo forme bielych prúžkov.

Radiálna imunodifúzna reakcia(podľa Manciniho). Imunitné sérum sa pridá do rozpusteného agarového gélu a naleje sa do misky. Po stuhnutí agaru sa v ňom vyrežú jamky a umiestnia sa do nich antigény, ktoré difúziou do agaru vytvoria okolo jamiek prstencové precipitačné zóny. Čím vyššia je koncentrácia antigénu, tým väčší je priemer kruhu. Reakcia sa používa napríklad na stanovenie rôznych tried imunoglobulínov v krvi. Ako antigény v tejto reakcii pôsobia imunoglobulíny tried IgG, IgM, IgA a protilátky proti nim sú obsiahnuté v špecifických monoreceptorových sérach.

Imunoelektroforéza. Elektroforéza proteínových antigénov sa uskutočňuje na agarovom géli. Precipitujúce sérum sa zavedie do drážky, ktorá prebieha paralelne so smerom pohybu proteínov. Antigény a protilátky difundujú do agaru a v mieste ich stretnutia sa tvoria precipitačné línie.

Reakcie imunitnej lýzy

Antigén (erytrocyty alebo baktérie) v kombinácii so špecifickými protilátkami vytvára imunitný komplex, ku ktorému je pripojený komplement (C1) a aktivácia komplementu prebieha klasickou cestou. Aktivovaný komplement rozkladá červené krvinky (hemolýza) alebo baktérie (bakteriolýza). Reakcia bakteriolýzy sa používa na identifikáciu Vibrio cholerae.

hemolytická reakcia. Antigénom v reakcii sú erytrocyty, protilátky (hemolyzíny) sú obsiahnuté v hemolytickom sére. Hemolyzíny sa viažu na erytrocyty, dochádza k aktivácii komplementu, ktorý lyzuje erytrocyty. Zakalená suspenzia erytrocytov sa zmení na priehľadnú jasne červenú kvapalinu - „lakovú krv“. Keďže hemolytická reakcia prebieha iba v prítomnosti komplementu, používa sa ako indikátor na detekciu komplementu.

Lokálna hemolytická reakcia v géli(Jerneova reakcia) - variant hemolytickej reakcie. Slúži na stanovenie počtu buniek tvoriacich protilátky (AFC) v slezine a lymfatických uzlinách.

Roztopený agarový gél sa zmieša so suspenziou slezinných buniek a erytrocytov a po stuhnutí agaru sa pridá komplement. Okolo každej bunky, ktorá produkuje hemolyzíny, sa vytvorí zóna hemolýzy. Počet takýchto zón určuje počet buniek produkujúcich hemolyzíny.

Reakcia nepriamej (pasívnej) hemaglutinácie (RIHA) je založená na skutočnosti, že erytrocyty, ak je na ich povrchu adsorbovaný rozpustný antigén, získavajú schopnosť aglutinácie pri interakcii s protilátkami proti adsorbovanému antigénu. Schéma RNGA je znázornená na obr. 34. RNHA sa široko používa pri diagnostike mnohých infekcií.

Ryža. 34. Schéma reakcie pasívnej hemaglutinácie (RPHA). A - získanie diagnostiky erytrocytov: B - RPHA: 1 - erytrocyt: 2 - skúmaný antigén; 3 - diagnostika erytrocytov; 4 - protilátka na študovaný antigén: 5 - aglutinát

Nastavenie reakcie. Testované sérum sa zahrieva 30 minút na 56 °C, zriedi sa postupne v pomere 1:10 - 1:1280 a naleje sa do 0,25 ml do skúmaviek alebo jamiek, kde sa potom pridajú 2 kvapky erytrocytového diagnosticum (erytrocyty s antigénom adsorbované na nich).

Kontroly: suspenzia erytrocytárneho diagnostica so zjavne imunitným sérom; suspenzia diagnostika normálnym sérom; suspenzia normálnych erytrocytov s testovaným sérom. Pri prvej kontrole by malo dôjsť k aglutinácii, pri druhej a tretej nie.

Pomocou RIGA je možné určiť neznámy antigén, ak sú známe protilátky adsorbované na erytrocytoch.

Hemaglutinačná reakcia môže byť nastavená na objem 0,025 ml (mikrometóda) pomocou Takachiho mikrotitra.

Kontrolné otázky

1. Čo naznačuje pozitívny výsledok RGA medzi erytrocytmi a materiálom testovaným na prítomnosť vírusu?

2. Dojde k aglutinácii erytrocytov, ak sa k nim pridá vírus a príslušné sérum? Ako sa volá reakcia, ktorá odhaľuje tento jav?

Cvičenie

Zvážte a zaregistrujte výsledok RIGA.

zrážacia reakcia

Pri precipitačnej reakcii sa vyzráža špecifický imunitný komplex pozostávajúci z rozpustného antigénu (lyzát, extrakt, haptén) a špecifickej protilátky v prítomnosti elektrolytov.

Zakalený kruh alebo zrazenina vytvorená ako výsledok tejto reakcie sa nazýva zrazenina. Táto reakcia sa od aglutinačnej reakcie líši najmä veľkosťou častíc antigénu.

Precipitačný test sa zvyčajne používa na stanovenie antigénu pri diagnostike mnohých infekcií ( antrax meningitída atď.); v súdnom lekárstve - určiť druh krvi, spermií atď.; v sanitárnych a hygienických štúdiách - pri zisťovaní falšovania výrobkov; s jeho pomocou určiť fylogenetický vzťah zvierat a rastlín. Pre reakciu potrebujete:

1. Protilátky (precipitíny) - imunitné sérum s vysokým titrom protilátok (nie nižším ako 1:100 000). Titer precipitujúceho séra je určený najvyšším zriedením antigénu, s ktorým reaguje. Sérum sa zvyčajne používa neriedené alebo riedené 1:5 - 1:10.

2. Antigén - rozpustené látky proteínovej alebo lipoidnej polysacharidovej povahy (kompletné antigény a haptény).

3. Izotonický roztok.

Hlavné metódy na uskutočnenie precipitačnej reakcie sú: kruhová precipitačná reakcia a precipitačná reakcia na agare (géli).

Pozor! Všetky zložky zapojené do zrážacej reakcie musia byť úplne transparentné.

Reakcia zrážania kruhu. 0,2-0,3 ml (5-6 kvapiek) séra sa pridá do skúmavky na zrážanie pomocou Pasteurovej pipety (sérum by nemalo padať na steny skúmavky). Antigén sa opatrne navrství na sérum v rovnakom objeme a naleje ho tenkou Pasteurovou pipetou pozdĺž steny skúmavky. Skúmavka sa udržiava v naklonenej polohe. Pri správnom vrstvení by sa mala dosiahnuť jasná hranica medzi sérom a antigénom. Opatrne, aby sa kvapalina nezmiešala, umiestnite skúmavku na statív. O pozitívny výsledok reakcií na hranici antigénu a protilátky vzniká zakalený „prstenec“ – precipitát (pozri obr. 48).

Po reakcii nasleduje niekoľko kontrol (tabuľka 18). Poradie zavádzania reakčných zložiek do skúmavky je veľmi dôležité. Sérum nemôžete navrstviť na antigén (v kontrole - na izotonický roztok), pretože relatívna hustota séra je väčšia, klesne na dno skúmavky a hranica medzi kvapalinami nebude detekovaná .

Tabuľka 18

Poznámka. + prítomnosť "krúžku"; - nedostatok "krúžku".

Výsledky sa zaznamenávajú po 5-30 minútach, v niektorých prípadoch po hodine, ako vždy, počnúc kontrolami. "Kruh" v 2. skúmavke označuje schopnosť imunitného séra vstúpiť do špecifickej reakcie s príslušným antigénom. V 3.-5. skúmavkách by nemali byť žiadne "krúžky" - neexistujú žiadne navzájom zodpovedajúce protilátky a antigény. "Kruh" v 1. skúmavke - výsledok pozitívnej reakcie - znamená, že testovaný antigén zodpovedá odobratému imunitnému séru, absencia "krúžku" ("krúžok" len v 2. skúmavke) naznačuje ich nekonzistentnosť - negatívna reakcia výsledok.

Precipitačná reakcia v agare (gél). Zvláštnosťou reakcie je, že k interakcii antigénu a protilátky dochádza v hustom médiu, t.j. v géli. Výsledná zrazenina poskytuje zakalený pás v hrúbke média. Neprítomnosť pásu indikuje nesúlad medzi reakčnými zložkami. Táto reakcia sa široko používa v biomedicínskom výskume, najmä pri štúdiu tvorby toxínov v pôvodcovi záškrtu.

Kontrolné otázky

1. Aký je hlavný rozdiel medzi reakciou aglutinácie a precipitácie?

2. Prečo sa pri zrážacej reakcii nemôžu použiť zakalené zložky?

Cvičenie

1. Nastavte reakciu zrážania prstenca a nakreslite výsledok.

2. Preštudujte si charakter interakcie antigénu s protilátkou pri reakcii zrážania agaru, nakreslite výsledok (pohár získajte od učiteľa).

Lytická reakcia (imunitná cytolýza)

Imunitná lýza je rozpustenie buniek pod vplyvom protilátok s povinnou účasťou komplementu. Pre reakciu potrebujete:

1. Antigén - mikróby, erytrocyty alebo iné bunky.

2. Protilátka (lyzín) - imunitné sérum, zriedkavo sérum pacienta. Bakteriolytické sérum obsahuje protilátky, ktoré sa podieľajú na lýze baktérií; hemolytické - hemolyzíny, ktoré prispievajú k lýze červených krviniek; na lýzu spirochét sú potrebné spirochetolizíny, bunky - itolizíny atď.

3. Dopĺňať. Najviac sa dopĺňa v sére morčatá. Toto sérum (zmes viacerých zvierat) sa zvyčajne používa ako doplnok. Čerstvý (natívny) doplnok je nestabilný a ľahko sa zničí zahrievaním, pretrepávaním, skladovaním, takže ho možno použiť nie dlhšie ako dva dni po prijatí. Na zachovanie doplnku sa k nemu pridávajú 2 %. kyselina boritá a 3 % síranu sodného. Tento doplnok možno uchovávať pri teplote 4 °C až dva týždne. Častejšie sa používa suchý doplnok. Pred použitím sa rozpustí v izotonickom roztoku na pôvodný objem (uvedený na etikete).

4. Izotonický roztok.

Reakcia hemolýzy(Tabuľka 19). Pre reakciu potrebujete:

1. Antigén - 3% suspenzia premytých ovčích erytrocytov v množstve 0,3 ml sedimentu erytrocytov a 9,7 ml izotonického roztoku.

2. Protilátka - hemolytické sérum (hemolyzín) proti ovčím erytrocytom; zvyčajne pripravený vo výrobe, lyofilizovaný a titer je uvedený na etikete.

Titer hemolyzínu je najvyššie riedenie séra, pri ktorom dochádza k úplnej hemolýze 3 % suspenzie erytrocytov v prítomnosti komplementu. Na hemolytickú reakciu sa hemolyzín odoberá v trojitom titri, t. j. riedi sa 3-krát menej ako pred titrom. Napríklad s titrom séra 1:1200 sa sérum zriedi v pomere 1:400 (0,1 ml séra* a 39,9 ml izotonického fyziologického roztoku). Je potrebný nadbytok hemolyzínu, pretože časť z neho môže byť adsorbovaná inými zložkami reakcie.

* (Nemalo by sa odoberať menej ako 0,1 ml séra - presnosť merania trpí.)

3. Komplement sa zriedi v pomere 1:10 (0,2 ml komplementu a 1,8 ml izotonického fyziologického roztoku).

4. Izotonický roztok.

Tabuľka 19. Schéma hemolytickej reakcie

Účtovanie výsledkov. Pri správne nastavenej reakcii v 1. skúmavke dôjde k hemolýze - jej obsah sa spriehľadní. V kontrolách zostáva kvapalina zakalená: v 2. skúmavke chýba komplement pre začiatok hemolýzy, v 3. skúmavke nie je hemolyzín, v 4. skúmavke nie je hemolyzín ani komplement, v 5. antigén sa nezhoduje s protilátkou,

V prípade potreby sa hemolytické sérum titruje podľa nasledujúcej schémy (tabuľka 20).

Pred titráciou sa pripraví počiatočné riedenie séra 1:100 (0,1 ml séra a 9,9 ml izotonického fyziologického roztoku), z ktorého sa pripravia potrebné riedenia, napr.

Z týchto riedení sa 0,5 ml séra pridá do skúmaviek s titračnou skúsenosťou, ako je uvedené v tabuľke. 20.

Tabuľka 20. Titračná schéma pre hemolytické sérum (hemolyzín)

V príklade uvedenom v tabuľke. 20, titer hemolytického séra je 1:1200.

Pri použití čerstvého hemolytického séra sa musí inaktivovať, aby sa zničil jeho komplement. Za týmto účelom sa zahrieva 30 minút pri 56 ° C vo vodnom kúpeli alebo v inaktivátore s termostatom. Posledná metóda je lepšia: eliminuje možnosť prehriatia séra, t.j. jeho denaturácie. Denaturované séra nie sú vhodné na testovanie.

bakteriolytická reakcia. V tejto reakcii sa baktérie dopĺňajú v prítomnosti vhodného (homologického) séra. Reakčná schéma je v podstate podobná schéme hemolýznej reakcie. Rozdiel je v tom, že po dvojhodinovej inkubácii sa všetky skúmavky naočkujú na Petriho misky s médiom priaznivým pre mikroorganizmus odobratý v experimente, aby sa zistilo, či je lyzovaný. Pri správne nastavenej skúsenosti s plodinami z 2.-5. skúmavky (kontroly) by mal byť rast bohatý. Nedostatočný rast alebo slabý rast v kultúre z 1. skúmavky (experimentu) indikuje smrť mikróbov, t.j., že sú homológne s protilátkou.

Pozor! Bakteriolýza musí prebiehať za aseptických podmienok.

Kontrolné otázky

1. Čo sa stane s erytrocytmi, ak sa namiesto izotonického roztoku chloridu sodného použije destilovaná voda? Čo je základom tohto javu?

2. Aká reakcia nastane, keď erytrocyty interagujú s homológnym imunitným sérom v neprítomnosti komplementu?

Cvičenie

Nastavte reakciu hemolýzy. Zaznamenajte a nakreslite výsledok.

Podobné informácie.

Reakcia nepriamej hemaglutinácie (RIGA).

RIGA sa používa v dvoch verziách: so známymi antigénmi na detekciu protilátok so známymi antigénmi na detekciu hypertenzie. Táto reakcia je špecifická a používa sa na diagnostiku chorôb spôsobených baktériami a rickettsiae. Na vykonanie RIGA sa používajú erytrocytové diagnostické roztoky pripravené adsorpciou AG alebo AT na erytrocytoch v závislosti od účelu štúdie (obr. 10.3). V pozitívnych prípadoch je stupeň aglutinácie erytrocytov označený plusmi. Štyri plusy hodnotia reakciu, ktorá má formu tenkého filmu lepiacich červených krviniek (dáždnik), ktorý pokrýva dno skúmavky; prítomnosť filmu s vrúbkovanými krajkami je označená dvoma plusmi. Titer sa berie ako limitné riedenie testovaného materiálu, ktoré spôsobilo aglutináciu erytrocytov dvoma plusmi.

Ryža. 10.3.

1 - erytrocyty, 2 - erytrocyt AG, 3 - konjugovaný AG, 4-AT

RGA a hemaglutinačná inhibičná reakcia (RTGA).

Ako už bolo uvedené, RGA je založená na schopnosti erytrocytov držať sa spolu, keď sú na ne adsorbované určité antigény. Ako testovací materiál na hemaglutináciu sa používa alantoický, plodová voda, suspenzia chorion-alantoidných membrán kuracích embryí, suspenzie a extrakty z kultúr alebo orgánov zvierat infikovaných vírusmi, natívny infekčný materiál. RGA nie je sérologická reakcia, pretože sa vyskytuje bez účasti imunitného séra a používa sa na výber pracovného riedenia AG na nastavenie RTGA alebo prítomnosti AG (vírusu) v testovanom materiáli (napríklad pri chrípke). Reakcia využíva erytrocyty zvierat, vtákov, ľudí s krvnou skupinou I (0). Na nastavenie približného RGA sa na podložné sklíčko nanesie kvapka 5 % suspenzie erytrocytov a kvapka testovaného materiálu, pričom sa dôkladne premieša. S pozitívnym výsledkom po 1-2 minútach makroskopicky pozorujte výskyt flokulentnej aglutinácie erytrocytov. Na nastavenie RHA v predĺženom rade v jamkách polystyrénových platní sa pripravia dvojnásobne sa zvyšujúce riedenia testovaného materiálu na fyziologický roztok v objeme 0,5 ml. Do všetkých skúmaviek sa pridá 0,5 ml 0,25-1% suspenzie erytrocytov. Výsledky sa berú do úvahy po úplnej sedimentácii erytrocytov v kontrole (erytrocyty + fyziologický roztok). Reakcia sa berie do úvahy podľa charakteru sedimentu erytrocytov. V pozitívnych prípadoch je stupeň aglutinácie označený plusmi. Štyri plusy hodnotia reakciu, ktorá má formu tenkého filmu zlepených erytrocytov pokrývajúcich dno skúmavky (dáždnik), reakcia s medzerami vo filme je označená tromi plusmi, prítomnosť filmu s vrúbkovanými krajkovými okrajmi zlepených erytrocytov je označený dvoma plusmi, vločkovitý sediment erytrocytov obklopený zónou hrudiek aglutinovaných erytrocytov zodpovedá jednému plusu. Ostro ohraničený sediment erytrocytov, nerozoznateľný od kontroly, naznačuje neprítomnosť aglutinácie. Titer sa berie ako limitné riedenie testovaného materiálu, ktoré spôsobilo aglutináciu erytrocytov dvoma plusmi. Ak je výsledok RHA pozitívny, štúdia pokračuje stanovením typu izolovaného vírusu pomocou HA RT s typovo špecifickými sérami. RTGA je založená na schopnosti antiséra potlačiť hemaglutináciu vírusu, keďže vírus neutralizovaný špecifickými protilátkami stráca schopnosť aglutinovať červené krvinky. Na približnú typizáciu vírusov sa používa metóda kvapky na sklo. Na konečné určenie typovej príslušnosti izolovaného vírusu a titráciu protilátok v sére sa expandovaný RTHA umiestni do skúmaviek alebo do jamiek. Na tento účel sa pripravia dvojnásobné riedenia séra vo fyziologickom roztoku a nalejú sa do 0,25 ml. K riedeniu séra sa pridá jedna kvapka materiálu obsahujúceho vírus a jedna kvapka 1 % suspenzie erytrocytov. Pri použití RTGA na určenie typu vírusu sa používajú typovo špecifické séra, ktoré sa pridávajú do rovnakého objemu pracovného riedenia AG. Typová príslušnosť izolovaného vírusu je stanovená špecifickým imunitným sérom, ktoré vykazovalo najvyšší titer protilátok proti tomuto vírusu. RGA a RTGA sa široko používajú na diagnostiku vírusové infekcie (kliešťová encefalitída, chrípka a pod.) s cieľom zistiť špecifické protilátky a identifikovať mnohé vírusy podľa ich antigénov.

Reakcia nepriamej alebo pasívnej hemaglutinácie (IPHA)

Táto odpoveď je citlivejšia ako aglutinačná reakcia a používa sa pri diagnostike infekcií spôsobených baktériami, rickettsiami, prvokmi a inými mikroorganizmami.

RPGA umožňuje detekovať malú koncentráciu protilátok.

Táto reakcia zahŕňa opálené ovčie erytrocyty alebo ľudské erytrocyty s krvou skupiny I, senzibilizované antigénmi alebo protilátkami.

Ak sa v testovacom sére zistia protilátky, potom sa použijú erytrocyty senzibilizované antigénmi (erythrocyte diagnosticum).

V niektorých prípadoch, ak je potrebné stanoviť rôzne antigény v testovanom materiáli, sa používajú erytrocyty senzibilizované imunoglobulínmi.

Výsledky RPHA sú zohľadnené povahou sedimentu erytrocytov.

Za pozitívny sa považuje výsledok reakcie, pri ktorej erytrocyty rovnomerne pokrývajú celé dno skúmavky (obrátený dáždnik).

Pri negatívnej reakcii sa v strede spodnej časti skúmavky nachádzajú erytrocyty vo forme malého disku (gombíka).

Aglutinačná reakcia (RA)

Vďaka svojej špecifickosti, jednoduchosti nastavenia a demonštratívnosti sa aglutinačná reakcia rozšírila v mikrobiologickej praxi na diagnostiku mnohých infekčné choroby: týfus a paratýfus (Vidalova reakcia), týfus (Weiglova reakcia) atď.

Aglutinačná reakcia je založená na špecifickosti interakcie protilátok (aglutinínov) s celými mikrobiálnymi alebo inými bunkami (aglutinogény). V dôsledku tejto interakcie vznikajú častice – aglomeráty, ktoré sa vyzrážajú (aglutinujú).

Na aglutinačnej reakcii sa môžu podieľať živé aj mŕtve baktérie, spirochéty, huby, prvoky, rickettsie, ale aj erytrocyty a iné bunky.

Reakcia prebieha v dvoch fázach: prvá (neviditeľná) je špecifická, spojenie antigénu a protilátok, druhá (viditeľná) je nešpecifická, väzba antigénov, t.j. tvorba aglutinátu.

Aglutinát sa vytvorí, keď sa jedno aktívne centrum bivalentnej protilátky spojí s determinantnou skupinou antigénu.

Aglutinačná reakcia, ako každá sérologická reakcia, prebieha v prítomnosti elektrolytov.

Navonok je prejav pozitívnej aglutinačnej reakcie dvojaký. V nebičíkových mikróboch, ktoré majú iba somatický O-antigén, sa samotné mikrobiálne bunky priamo zlepia. Takáto aglutinácia sa nazýva jemnozrnná. Vyskytuje sa v priebehu 18 - 22 hodín.

Bičíkové mikróby majú dva antigény – somatický O-antigén a bičíkový H-antigén. Ak sa bunky zlepia bičíkmi, vytvoria sa veľké voľné vločky a takáto aglutinačná reakcia sa nazýva hrubozrnná. Príde do 2-4 hodín.

Aglutinačná reakcia môže byť nastavená ako za účelom kvalitatívneho a kvantitatívneho stanovenia špecifických protilátok v krvnom sére pacienta, tak aj za účelom určenia druhu izolovaného patogénu. hemaglutinácia mikrobiologický infekčný

Aglutinačnú reakciu je možné nastaviť ako v detailnej verzii, ktorá umožňuje prácu so sérom nariedeným na diagnostický titer, tak aj vo variante nastavenia orientačnej reakcie, ktorá v zásade umožňuje detegovať špecifické protilátky alebo určiť druh patogén.

Aglutinačná reakcia - RA(z lat. aglutinácia- väzba) - jednoduchá reakcia, pri ktorej protilátky viažu korpuskulárne antigény (baktérie, erytrocyty alebo iné bunky, nerozpustné častice s na nich adsorbovanými antigénmi, ako aj makromolekulové agregáty). Vyskytuje sa v prítomnosti elektrolytov, napríklad keď sa pridá izotonický roztok chloridu sodného.

Používajú sa rôzne varianty aglutinačnej reakcie: expandovaná, približná, nepriama atď. Aglutinačná reakcia sa prejavuje tvorbou vločiek alebo sedimentu

RA sa používa na:

stanovenie protilátok v krvnom sére pacientov, napríklad s brucelózou (Wrightova, Heddelsonova reakcia), brušný týfus a paratýfus (Vidalova reakcia) a iné infekčné choroby;

stanovenie patogénu izolovaného od pacienta;

stanovenie krvných skupín pomocou monoklonálnych protilátok proti alogénom erytrocytov.

Na stanovenie protilátok pacienta daťrozšírená aglutinačná reakcia: pridať do riedenia pacientovho krvného séra diagnosticum(suspenzia usmrtených mikróbov) a po niekoľkých hodinách inkubácie pri 37 °C je zaznamenané najvyššie zriedenie séra (sérový titer), pri ktorom došlo k aglutinácii, t.j. vytvoreniu zrazeniny.

Povaha a rýchlosť aglutinácie závisia od typu antigénu a protilátok. Príkladom sú znaky interakcie diagnostika (O- a R-antigénov) so špecifickými protilátkami. Aglutinačná reakcia s O-diagnostika(baktérie zabité teplom, ktoré si zachovávajú termostabilitu O antigén) vyskytuje sa vo forme jemnozrnnej aglutinácie. Aglutinačná reakcia s H-diagnosticum (baktérie usmrtené formalínom, zadržiavajúce tepelne labilný bičíkový H-antigén) je hrubozrnná a prebieha rýchlejšie.

Ak je potrebné určiť patogén izolovaný od pacienta, dajte orientačná aglutinačná reakcia, pomocou diagnostických protilátok (aglutinačné sérum), t.j. vykonáva sa sérotypizácia patogénu. Približná reakcia uskutočnené na podložnom skle. Ku kvapke diagnostického aglutinačného séra v riedení 1:10 alebo 1:20 pridajte čistú kultúru patogénu izolovaného od pacienta. V blízkosti je umiestnená kontrola: namiesto séra sa aplikuje kvapka roztoku chloridu sodného. Keď sa vločkovitý sediment objaví v kvapke so sérom a mikróbmi, dajú rozsiahla aglutinačná reakcia v skúmavkách so zvyšujúcim sa riedením aglutinačného séra, do ktorého sa pridajú 2-3 kvapky suspenzie patogénu. Aglutinácia sa zohľadňuje množstvom sedimentu a stupňom vyčírenia kvapaliny. Reakcia sa považuje za pozitívnu, ak je zaznamenaná aglutinácia v riedení blízkom titru diagnostického séra. Súčasne sa berú do úvahy kontroly: sérum zriedené izotonickým roztokom chloridu sodného by malo byť priehľadné, suspenzia mikróbov v tom istom roztoku by mala byť rovnomerne zakalená, bez sedimentu.

Rôzne príbuzné baktérie môžu byť aglutinované rovnakým diagnostickým aglutinačným sérom, čo sťažuje ich identifikáciu. Preto si užívajte adsorbované aglutinačné séra, z ktorých boli skrížene reagujúce protilátky odstránené adsorpciou ich príbuznými baktériami. V takýchto sérach zostávajú protilátky špecifické len pre túto baktériu. Prípravu monoreceptorových diagnostických aglutinačných sér týmto spôsobom navrhol A. Castellani (1902).

Reakcia nepriamej (pasívnej) hemaglutinácie(RNGA, RPHA) je založená na použití erytrocytov s antigénmi alebo protilátkami adsorbovanými na povrchu, ktorých interakcia s príslušnými protilátkami alebo antigénmi krvného séra guľôčky spôsobí, že sa erytrocyty zlepia a padnú na dno guľôčky. skúmavku alebo bunku V forma vrúbkovaného sedimentu (obr. 13.2). S negatívnou reakciou sa erytrocyty usadia vo forme "gombíka". Zvyčajne sa protilátky v RNHA detegujú pomocou antigénneho diagnostického erytrocytu, ktorým sú erytrocyty s adsorbovanými na sú to antigény. Niekedy využívame protilátkovú diagnostiku erytrocytov, na ktorých sa protilátky adsorbujú. Napríklad botulotoxín sa dá zistiť tak, že sa k nemu pridá protilátka erytrocytov botulinum diagnosticum (táto reakcia je tzv. reverzná nepriama hemaglutinačná reakcia- RONGA). RNHA sa používa na diagnostiku infekčných chorôb, určenie gonadotropný hormón V moču, keď sa zistí tehotenstvo precitlivenosť Komu lieky, hormóny av niektorých ďalších prípadoch.

COOMBSOVÁ REAKCIA

(Coombsov test) – metóda stanovenia Rh protilátok na povrchu červených krviniek, ktoré spôsobujú zrážanie globulínov v krvnom sére. Tento test sa používa na diagnostiku hemolytická anémia u dojčiat s Rh inkompatibilitou, u ktorých sa pozoruje deštrukcia červených krviniek.

Koaglutinačná reakcia. Bunky patogénu sa určujú pomocou stafylokokov, vopred ošetrených imunitným diagnostickým sérom. Proteín obsahujúci stafylokoky A, ktoré majú afinitu k Fc fragmentu imunoglobulínov, nešpecificky adsorbujú antimikrobiálne protilátky, ktoré potom interagujú s aktívnymi centrami so zodpovedajúcimi mikróbmi izolovanými od pacientov. V dôsledku koagulácie sa vytvárajú vločky pozostávajúce zo stafylokokov, diagnostických sérových protilátok a mikróbu, ktorý sa určuje.

Reakcia inhibície hemaglutinácie(RTGA) je založená na blokáde, supresii antigénov vírusov protilátkami imunitného séra, v dôsledku čoho vírusy strácajú schopnosť aglutinovať červené krvinky (obr. 13.3). RTHA sa používa na diagnostiku mnohých vírusových ochorení, ktorých pôvodcovia (chrípka, osýpky, rubeola, kliešťová encefalitída atď.) môžu aglutinovať erytrocyty rôznych zvierat.

1. Skupina lekárov pricestovala do Indie prostredníctvom WHO, aby identifikovala pacientov s detskou obrnou a pomohla pri všeobecnom očkovaní proti detskej obrne. V jednej zo skúmaných obcí priviezli k lekárom 6-ročného chlapca z mnohodetnej rodiny, ktorý pred 5 dňami ochorel. Teplota náhle stúpla, hlava veľmi bolela, opakovalo sa vracanie, bolesti rúk a nôh. Pri vyšetrení: teplo, ťažká slabosť, meningeálne príznaky, na pravá noha znížená svalový tonus, šľachové reflexy sú prudko oslabené, noha visí dole. Pri punkcii miechového kanála vytiekol mozgovomiechový mok vysoký krvný tlak, počet lymfocytov je zvýšený, baktérie nie sú izolované. Bola stanovená predbežná diagnóza "paralytickej formy poliomyelitídy". Ako sa mohol chlapec nakaziť? Ako prebieha špecifická aktívna prevencia poliomyelitídy? Existuje riziko nakazenia iných detí v tejto rodine, čo treba robiť?

odpoveď: Chlapec sa mohol nakaziť fekálno-orálnou cestou cez jedlo, vodu a tiež kvapôčky vo vzduchu. Hlavným opatrením prevencie poliomyelitídy je imunizácia živou kultúrou vakcíny 3 sérotypov kmeňov Sabin.V Rusku sa používa vakcína proti detskej obrne na perorálne podanie vyrobený Inštitútom poliomyelitídy a vírusovej encefalitídy. M.P. Čumakov. Vakcína je trivalentný prípravok oslabených Sabinových kmeňov poliovírusu typu 1, 2, 3, získaný v primárnej kultúre obličkových buniek africkej opice zelenej. . Plánované očkovania deti vo veku od 3 mesiacov do 6 rokov trpia poliomyelitídou. Očkovanie perorálnou vakcínou proti detskej obrne sa vykonáva 2 alebo 4 kvapkami očkovacej látky trikrát perorálne v 3, 4, 5 a 6 mesiacoch s trojnásobným preočkovaním v 18, 20 a 14 rokoch. Chorý chlapec musí byť prijatý do nemocnice a všetky ostatné deti v tejto rodine musia byť očkované živou vakcínou proti detskej obrne.

1. Zloženie a použitie chrípkovej vakcíny s trivalentnou kvapalinou polymér-podjednotka (grippol)

Ide o molekulárnu vakcínu. Zloženie: povrchový AG vírusu chrípky troch podtypov (A / H1N1, A / H3N2, B). Použitie: na prevenciu chrípky

Lístok na skúšku č.23