Puncture ng mga rehiyonal na lymph node
Ang balat sa ibabaw ng mga lymph node ay ginagamot ng 96% na alkohol at 3-5% na solusyon sa alkohol ng yodo. Pagkatapos ay ayusin ng 1 at 2 daliri ng kaliwang kamay ang lymph node. Kanang kamay kumuha ng sterile syringe na may ilang patak ng isotonic sodium chloride solution, na ini-inject nang magkatulad longhitud lymph node. Ang karayom ay itinutulak sa iba't ibang direksyon sa kabaligtaran na dingding ng kapsula ng node at ang mga nilalaman ng hiringgilya ay dahan-dahang iniksyon. Gamit ang mga daliri ng kaliwang kamay, ang lymph node ay bahagyang minamasahe. Sa mabagal na pag-alis ng karayom, ang plunger ng hiringgilya ay sabay-sabay na sumusulong, na nag-aspirasyon sa mga nilalaman ng lymph node. Ang materyal ay inilapat sa isang glass slide (na may isang maliit na halaga ng materyal, isang patak ng isotonic sodium chloride solution ay idinagdag), na natatakpan ng isang takip na salamin. Ang pag-aaral ng katutubong gamot ay isinasagawa sa madilim na larangan ng pagtingin gamit ang isang light-optical microscope na may dark-field condenser (layunin 40, 7x, 10x o 15x). Ang mga maputlang treponema ay matatagpuan din sa mga stained na paghahanda. Kapag nabahiran ayon sa Romanovsky-Giemsa, ang mga maputlang treponema ay nabahiran ng rosas, ayon kay Fontan at Morozov sa kayumanggi (itim), ayon sa pamamaraang Burri, ang mga hindi nabahiran na treponema ay nakikita sa isang madilim na background.Serological diagnosis
Kahalagahan sa pag-diagnose ng syphilis, pagsusuri sa pagiging epektibo ng paggamot, pagtatatag ng criterion para sa lunas, pagtukoy ng nakatago, lumalaban na mga anyo naka-attach sa standard (classical) at partikular na serological test. Kasama sa mga standard o classic serological test (SSRs) ang:- Reaksyon ng Wasserman (RV),
- sedimentary reactions ng Kahn at Sachs-Vitebsky (cytocholic),
- reaksyon sa salamin (express method),
- treponema pallidum immobilization reaction (RIBT),
- immunofluorescence reaksyon (RIF).
Reaksyon ng Wasserman (RV)
- binuo ni A. Wasserman kasama sina A. Neisser at C. Bruck noong 1906. Ang reaksyon ng Wasserman ay batay sa phenomenon ng complement fixation (Borde-Gangu reaction) at pinapayagan ang pagtukoy ng anti-lipid antibodies (reagins). Ayon kay modernong ideya, sa reaksyon ng Wasserman, ang mga antibodies sa mga macroorganism lipid, at hindi maputlang treponema, ay tinutukoy, at ang reaksyon ay nagpapakita ng isang proseso ng autoimmune na sanhi ng denaturation ng mga tisyu ng macroorganism ng maputlang treponema na may pagbuo ng isang lipoprotein complex (conjugate), kung saan lipids (haptens) ang determinant.Karaniwan ang RV ay inilalagay na may dalawa o tatlong antigens. Ang pinaka-karaniwang ginagamit ay ang mataas na sensitibong cardiolipin antigen (bovine heart extract na pinayaman ng kolesterol at lecithin) at treponemal antigen (sonicated suspension ng anatogenic cultured treponema pallidum). Kasama ang reains ng blood serum ng pasyente, ang mga antigen na ito ay bumubuo ng immune complex na may kakayahang mag-adsorbing at mag-binding complement. Para sa visual na pagpapasiya ng nabuong complex (reagins + antigen + complement), ang isang hemolytic system ay ginagamit bilang isang indicator (isang pinaghalong ram erythrocytes na may hemolytic serum). Kung ang complement ay nakatali sa 1st phase ng reaksyon (reagins + antigen + complement), hindi mangyayari ang hemolysis - ang mga erythrocytes ay namuo sa isang madaling kapansin-pansing precipitate (PB positive). Kung hindi nakatali ang complement sa phase 1 dahil sa kawalan ng reagin sa test serum, gagamitin ito ng hemolytic system at magaganap ang hemolysis (negatibo sa PB). Ang antas ng kalubhaan ng hemolysis sa setting ng RV ay tinatantya ng mga plus: ang kumpletong kawalan ng hemolysis ++++ o 4+ (RV nang husto positibo); halos hindi nagsimulang hemolysis +++ o 3+ (positibo sa PB); makabuluhang hemolysis ++ o 2+ (mahinang positibo ang PB); hindi maintindihan na larawan ng hemolysis ± (nagdududa ang RV); kumpletong hemolysis - (negatibo ang reaksyon ni Wassermann).
Bilang karagdagan sa qualitative assessment ng RV, mayroong quantitative formulation na may iba't ibang serum dilution (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Ang titer ng mga reagin ay tinutukoy ng maximum na pagbabanto, na nagbibigay pa rin ng isang positibong resulta (4+). Ang quantitative formulation ng RV ay mahalaga sa pagsusuri ng ilang klinikal na anyo ng syphilitic infection, gayundin sa pagsubaybay sa pagiging epektibo ng paggamot. Sa kasalukuyan, ang reaksyon ng Wasserman ay itinanghal na may dalawang antigens (cardiolipin at treponemal sounded Reiter strain). Bilang isang patakaran, ang RV ay nagiging positibo sa 5-6 na linggo pagkatapos ng impeksyon sa 25-60% ng mga pasyente, sa 7-8 na linggo - sa 75-96%, sa 9-19 na linggo - sa 100%, bagaman sa mga nakaraang taon minsan maaga o huli. Kasabay nito, ang titer ng reagin ay unti-unting tumataas at umabot sa pinakamataas na halaga (1:160-1:320 at pataas) sa kaganapan ng paglitaw ng mga pangkalahatang pantal (pangalawang sariwang syphilis). Kapag positibo ang RV, ginagawa ang diagnosis ng pangunahing seropositive syphilis.
Sa pangalawang sariwang at pangalawang paulit-ulit na syphilis, ang RV ay positibo sa 100% ng mga pasyente, ngunit ang isang negatibong resulta ay maaaring maobserbahan sa mga immunocompromised na malnourished na pasyente. Kasunod nito, ang titer ng reagin ay unti-unting bumababa at sa pangalawang paulit-ulit na syphilis ay karaniwang hindi lalampas sa 1:80-1:120.
May tertiary syphilis Ang RV ay positibo sa 65-70% ng mga pasyente at isang mababang titer ng mga reagin ay karaniwang sinusunod (1:20-1:40). Sa mga huling anyo ng syphilis (syphilis lamang loob, sistema ng nerbiyos) ang positibong RV ay sinusunod sa 50-80% ng mga kaso. Ang reagin titer ay mula 1:5 hanggang 1:320.
May nakatagong syphilis Ang positibong RV ay sinusunod sa 100% ng mga pasyente. Ang reagin titer ay mula 1:80 hanggang 1:640, at may late latent syphilis mula 1:10 hanggang 1:20. Ang mabilis na pagbaba sa titer ng mga reagin (hanggang sa kumpletong negatibiti) sa panahon ng paggamot ay nagpapahiwatig ng pagiging epektibo ng paggamot.
Mga disadvantages ng reaksyon ng Wassermann- kakulangan ng sensitivity paunang yugto Ang pangunahing syphilis ay negatibo). Negatibo din ito sa 1/3 ng mga pasyente, kung sila ay ginagamot sa mga antibiotic sa nakaraan, sa mga pasyente na may tertiary active syphilis na may mga sugat sa balat at mauhog na lamad, osteoarticular apparatus, internal organs, central nervous system, na may late congenital syphilis. .
Kakulangan ng pagtitiyak- Maaaring positibo ang reaksyon ni Wasserman sa mga taong hindi pa nagkasakit noon at hindi nagdurusa ng syphilis. Sa partikular, ang mga false-positive (non-specific) na mga resulta ng RV ay sinusunod sa mga pasyente na dumaranas ng systemic lupus erythematosus, leprosy, malaria, malignant neoplasms, pinsala sa atay, malawak na myocardial infarction at iba pang mga sakit, at kung minsan sa ganap na malusog na mga tao.
Ang panandaliang maling positibong reaksyon ng Wasserman ay nakita sa ilang kababaihan bago o pagkatapos ng panganganak, sa mga taong umaabuso sa droga, pagkatapos ng anesthesia, pag-inom ng alak. Bilang isang panuntunan, mahina ang pagpapahayag ng false-positive RV, kadalasan ay may mababang titer ng reains (1:5-1:20), positibo (3+) o mahinang positibo (2+). Sa mass serological na pagsusuri, ang dalas ng mga maling positibong resulta ay 0.1-0.15%. Upang malampasan ang kakulangan ng sensitivity, ginagamit nila ang setting sa malamig (Collard reaction) at sa parehong oras na ito ay nakatakda sa iba pang mga serological reaksyon.
Mga sedimentary na reaksyon ng Kahn at Sachs-Vitebsky
Ang reaksyon ng Wasserman ay ginagamit sa kumbinasyon ng dalawa sedimentary reactions (Kahn at Zaks-Vitebsky), sa panahon ng paggawa kung saan inihanda ang mas maraming puro antigens. Express method (microreaction on glass) - tumutukoy sa mga reaksyon ng lipid at batay sa reaksyon ng pag-ulan. Ito ay inilalagay sa isang tiyak na cardiolipin antigen, 1 patak nito ay halo-halong may 2-3 patak ng pinag-aralan na suwero ng dugo sa mga balon ng isang espesyal na glass plate.Advantage- ang bilis ng pagkuha ng tugon (sa 30-40 minuto). Ang mga resulta ay sinusuri ng dami ng namuo at ang laki ng mga natuklap. Ang kalubhaan ay tinukoy bilang CSR - 4+, 3+, 2+ at negatibo. Dapat tandaan na ang mga maling positibong resulta ay mas madalas na sinusunod kaysa sa RV. Bilang isang patakaran, ang express na paraan ay ginagamit para sa mass examinations para sa syphilis, sa panahon ng eksaminasyon sa clinical diagnostic laboratories, somatic department at ospital. Batay sa mga resulta ng express na paraan, ang diagnosis ng syphilis ay ipinagbabawal, ang paggamit nito sa mga buntis na kababaihan, mga donor, at din para sa kontrol pagkatapos ng paggamot ay hindi kasama.
Treponema pallidum immobilization reaction (RIBT)
Treponema pallidum immobilization reaction (RIBT)- iminungkahi noong 1949 nina R.W.Nelson at M.Mayer. Ito ang pinaka tiyak na pagsusuri sa diagnostic para sa syphilis. Gayunpaman, nililimitahan ng pagiging kumplikado at mataas na halaga ng pagtatakda ang aplikasyon nito. Sa serum ng dugo ng mga pasyente, ang mga antibodies na partikular sa video (immobilsins) ay tinutukoy, na humahantong sa kawalang-kilos ng maputlang treponemas sa pagkakaroon ng pandagdag. Ang antigen ay live na pathogenic treponema pallidum na nakahiwalay sa mga kuneho na nahawaan ng syphilis. Sa tulong ng isang mikroskopyo, ang bilang ng mga immobilized (immobilized) na maputlang treponema ay binibilang at ang mga resulta ng RIBT ay sinusuri: ang immobilization ng mga maputlang treponema mula 51 hanggang 100% ay positibo; mula 31 hanggang 50% - mahinang positibo; mula 21 hanggang 30% - nagdududa; mula 0 hanggang 20% - negatibo.Mahalaga ang RIBT kung kailan differential diagnosis upang makilala ang mga maling positibong serological na reaksyon mula sa mga reaksyon dahil sa syphilis. Nagiging positibo mamaya kaysa sa RV, RIF at samakatuwid para sa mga diagnostic iba't ibang anyo hindi ginagamit ang syphilis, bagaman sa pangalawang panahon ng syphilis ito ay positibo sa 85-100% ng mga pasyente.
Sa tertiary period ng syphilis na may pinsala sa mga panloob na organo, musculoskeletal system, at nervous system, ang RIBT ay positibo sa 98-100% ng mga kaso ( Madalas negatibo ang RV).
Dapat alalahanin na ang RIBT ay maaaring maging false-positive kung ang mga treponemocidal na gamot (penicillin, tetracycline, macroliths, atbp.) ay naroroon sa test serum, na nagiging sanhi ng nonspecific immobilization ng maputlang treponema. Para sa layuning ito, ang dugo para sa RIBT ay sinusuri nang hindi mas maaga kaysa sa 2 linggo pagkatapos ng pagtatapos ng mga antibiotic at iba pang mga gamot.
Ang RIBT, tulad ng RIF, ay dahan-dahang negatibo sa panahon ng paggamot, kaya hindi ito ginagamit bilang kontrol sa panahon ng paggamot.
Immunofluorescence reaction (RIF)
Immunofluorescence reaction (RIF)- binuo noong 1954 ng A.Coons at unang ginamit sa pag-diagnose ng syphilitic infection ni Deacon, Falcone, Harris noong 1957. Ang RIF ay batay sa isang hindi direktang pamamaraan para sa pagtukoy ng mga fluorescent antibodies. Ang antigen para sa pagtatanghal ng dula ay tissue pathogenic maputlang treponemas na naayos sa mga glass slide, kung saan inilapat ang test serum. Kung ang test serum ay naglalaman ng mga anti-treponemal antibodies na may kaugnayan sa IgM at IgG, malakas silang nagbubuklod sa antigen - treponema, na nakita sa isang fluorescent microscope gamit ang mga anti-species ("anti-human") fluorescent serum.Mga resulta ng RIF ay isinasaalang-alang sa pamamagitan ng intensity ng glow ng maputlang treponema sa paghahanda (dilaw-berdeng glow). Sa kawalan ng anti-treponemal antibodies sa suwero, ang maputlang treponema ay hindi napansin. Sa pagkakaroon ng mga antibodies, ang glow ng maputlang treponema ay napansin, ang antas ng kung saan ay ipinahayag sa mga plus: 0 at 1+ - backlash; mula 2+ hanggang 4+ - positibo.
Ang RIF ay tumutukoy sa mga reaksyon ng treponemal ng grupo at inilalagay sa isang pagbabanto ng test serum ng 10 at 200 beses (RIF-10 at RIF-200). Ang RIF-10 ay itinuturing na mas sensitibo, ngunit ang mga hindi tiyak na positibong resulta ay madalas na nahuhulog kaysa sa RIF-200 (ito ay may mas mataas na pagtitiyak). Karaniwan, Ang RIF ay nagiging positibo nang mas maaga kaysa sa RW- positibo sa pangunahing seronegative syphilis sa 80% ng mga pasyente, sa 100% sa pangalawang panahon ng syphilis, palaging positibo sa latent syphilis at sa 95-100% ng mga kaso sa late form at congenital syphilis.
Pagtitiyak ng RIF tumataas pagkatapos ng pre-treatment ng test serum na may sorbent-ultrasonic treponemal antigen na nagbubuklod sa group antibodies (RIF - abs).
Mga indikasyon para sa pagtatanghal ng RIBT at RIF- diagnosis ng latent syphilis upang kumpirmahin ang pagiging tiyak ng complex ng mga reaksyon ng lipid sa kaso ng impeksyon sa syphilitic batay sa isang positibong RV. Ang positibong RIBT at RIF ay katibayan ng latent syphilis. May false positive RV iba't ibang sakit(systemic lupus erythematosus, malignant neoplasms atbp.) at kung ang paulit-ulit na resulta ng RIBT at RIF ay negatibo, ito ay nagpapahiwatig ng hindi partikular na katangian ng RV. Hinala ng late syphilitic lesyon ng mga panloob na organo, musculoskeletal system, nervous system sa pagkakaroon ng negatibong RV sa mga pasyente. Ang hinala ng pangunahing seronegative syphilis, kapag sa mga pasyente na may paulit-ulit na pag-aaral ng paglabas mula sa ibabaw ng pagguho (ulser), na may pagbutas mula sa pinalaki na mga rehiyonal na lymph node, ang maputlang treponema ay hindi napansin - sa kasong ito, ang RIF lamang ang nakatakda - 10.
Kapag sinusuri ang mga indibidwal na may negatibong RV na nagkaroon ng pangmatagalang pakikipagtalik at domestic na pakikipag-ugnayan sa mga pasyenteng may syphilis, dahil sa malamang na posibilidad na gamutin sila kamakailan gamit ang mga antisyphilitic na gamot na nagdulot ng negatibong RV. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA, ELISA - enzymelinked immunosorbent assay) - ang pamamaraan ay binuo ni E.Engvall et al., S.Avrames (1971). Ang kakanyahan ay binubuo sa kumbinasyon ng isang syphilitic antigen na na-adsorbed sa ibabaw ng isang solid-phase carrier na may antibody ng pinag-aralan na blood serum at ang pagtuklas ng isang partikular na antigen-antibody complex gamit ang enzyme-labeled anti-species immune blood serum. Pinapayagan ka nitong suriin ang mga resulta ng ELISA nang biswal sa pamamagitan ng antas ng pagbabago sa kulay ng substrate sa ilalim ng pagkilos ng enzyme na bahagi ng conjugate. Ang hindi mapagkakatiwalaang mga resulta ng ELISA ay maaaring mangyari bilang resulta ng hindi sapat na pagbabanto ng mga sangkap, paglabag sa temperatura at mga rehimen ng oras, hindi pagkakapare-pareho sa pH ng mga solusyon, kontaminasyon ng laboratoryo na babasagin, at hindi wastong pamamaraan para sa paghuhugas ng carrier.
Passive hemagglutination reaction (RPHA)
Iminungkahi bilang diagnostic test para sa syphilis T. Rathlev (1965.1967), T. Tomizawa (1966). Ang macromodification ng reaksyon ay tinatawag na TRHA, ang micromodification ay MHA-TR, ang automated na bersyon ay AMNA-TR, ang reaksyon na may polyurea macrocapsule sa halip na erythrocytes ay MSA-TR. Ang sensitivity at specificity ng RPHA ay katulad ng RIBT, RIF, ngunit ang RPHA ay hindi gaanong sensitibo sa mga unang anyo ng syphilis kumpara sa RIF-abs at mas sensitibo sa mga late form, na may congenital syphilis. Ang RPGA ay inilalagay sa qualitative at quantitative na mga bersyon.Teknik sa pagkolekta ng dugo para sa mga serological na reaksyon
Para sa pananaliksik sa RV, RIF, RIBT, ang dugo ay kinukuha mula sa cubital vein sa walang laman na tiyan o hindi mas maaga kaysa sa 4 na oras pagkatapos kumain na may sterile syringe o isang karayom (sa pamamagitan ng gravity). Sa lugar ng sampling, ang balat ay paunang ginagamot ng 70% na alkohol. Ang hiringgilya at karayom ay dapat na mapula ng isotonic sodium chloride solution. Ang 5-7 ML ng test blood ay ibinubuhos sa isang malinis, tuyo, malamig na tubo ng pagsubok. Ang isang blangkong papel na may apelyido ng pasyente, inisyal, numero ng medikal na kasaysayan o outpatient card, petsa ng pag-sample ng dugo ay nakadikit sa test tube. Pagkatapos kumuha ng dugo, ang tubo ay inilalagay sa isang refrigerator na may rehimen ng temperatura+4°+8°C hanggang sa susunod na araw. Kinabukasan, ang serum ay pinatuyo para sa pananaliksik. Kung ang dugo ay hindi ginamit sa susunod na araw, ang serum ay dapat na pinatuyo mula sa namuong dugo at nakaimbak sa refrigerator nang hindi hihigit sa 1 linggo. Para sa pananaliksik sa RIBT, ang test tube ay dapat na espesyal na inihanda at sterile. Sa kaso ng paglabag sa mga patakaran para sa pagkuha ng dugo para sa pananaliksik, ang hindi pagsunod sa mga kondisyon ay maaaring magresulta sa pagbaluktot ng mga resulta.Hindi inirerekomenda na kumuha ng dugo para sa pananaliksik pagkatapos kumain, alkohol, iba't ibang mga gamot, pagkatapos ng pagpapakilala ng iba't ibang mga bakuna, habang cycle ng regla sa mga kababaihan.
Para sa pananaliksik sa express method, ang dugo ay kinuha mula sa dulo ng daliri, tulad ng ginagawa kapag ito ay kinuha para sa ESR, ngunit ang dugo ay kinukuha ng 1 capillary pa. Ang express method ay maaari ding gawin gamit ang blood serum na nakuha sa pamamagitan ng venipuncture. Kung may pangangailangan para sa mga pagsusuri ng dugo sa mga malalayong laboratoryo, ang dry serum ay maaaring ipadala sa halip na dugo (dry drop method). Upang gawin ito, sa susunod na araw pagkatapos ng pagkuha ng dugo, ang suwero ay pinaghihiwalay mula sa namuong dugo at iginuhit sa isang sterile syringe sa halagang 1 ml. Pagkatapos ang serum ay ibubuhos sa anyo ng 2 magkahiwalay na bilog sa isang strip ng makapal na papel na pansulat (wax paper o cellophane) na may sukat na 6x8 cm. Ang apelyido, mga inisyal ng paksa at ang petsa ng pagkuha ng dugo ay nakasulat sa libreng gilid ng ang papel. Ang serum na papel ay protektado mula sa direktang sikat ng araw at iniiwan sa temperatura ng silid hanggang sa susunod na araw. Ang suwero ay natutuyo sa anyo ng maliliit na bilog ng isang makintab na madilaw-dilaw na vitreous film. Pagkatapos nito, ang mga piraso ng papel na may pinatuyong serum ay pinagsama tulad ng pulbos ng parmasyutiko at ipinadala sa laboratoryo, na nagpapahiwatig ng diagnosis at para sa kung anong layunin ito ay pinag-aaralan.
Serological na pagtutol
Sa isang bahagi (2% o higit pa) ng mga pasyente na may syphilis, sa kabila ng ganap na antisyphilitic therapy, mayroong isang pagbagal (kawalan) ng mga negatibong reaksyon ng serological pagkatapos ng pagtatapos ng paggamot hanggang sa 12 buwan o higit pa. Mayroong tinatawag na serological resistance, na sa mga nakaraang taon ay naging madalas na sinusunod. Mayroong mga anyo ng serological resistance:- totoo(absolute, unconditional) - kinakailangan na magsagawa ng karagdagang antisyphilitic na paggamot, na sinamahan ng di-tiyak na therapy upang mapataas ang mga puwersa ng immune ng katawan.
- Kamag-anak- pagkatapos ng buong paggamot, ang maputlang treponema ay bumubuo ng mga cyst o L-form, na nasa katawan sa isang mababang virulence na estado at, bilang isang resulta, karagdagang paggamot hindi binabago ang mga tagapagpahiwatig ng mga reaksyon ng serological, lalo na ang RIF at RIBT.
Pseudo-resistance- pagkatapos ng paggamot, sa kabila ng mga positibong reaksyon ng serological, walang maputlang treponema sa katawan. Walang antigen sa katawan, ngunit ang produksyon ng mga antibodies ay nagpapatuloy, na naayos kapag nagse-set up ng mga serological reaksyon.
Maaaring umunlad ang serological resistance dahil sa:
- hindi sapat na paggamot nang hindi isinasaalang-alang ang tagal at yugto ng sakit;
- hindi sapat na dosis at lalo na dahil sa kabiguang isaalang-alang ang bigat ng katawan ng mga pasyente;
- mga paglabag sa agwat sa pagitan ng pagpapakilala ng mga gamot;
- pagpapanatili ng maputlang treponema sa katawan sa kabila ng ganap na tiyak na paggamot, dahil sa kanilang paglaban sa penicillin at iba pang mga chemotherapy na gamot sa pagkakaroon ng mga nakatagong, encysted lesyon sa mga panloob na organo, ang nervous system, mga lymph node, na hindi naa-access sa mga gamot na antibacterial(madalas ang maputlang treponema ay matatagpuan sa mga tisyu ng peklat maraming taon pagkatapos ng pagtatapos ng therapy, sa mga lymph node kung minsan ay posible na makita ang maputlang treponemas 3-5 taon pagkatapos ng antisyphilitic therapy);
- pagbawas ng mga pwersang proteksiyon sa iba't ibang sakit at pagkalasing (endocrinopathy, alkoholismo, pagkagumon sa droga, atbp.);
- pangkalahatang pagkahapo (pagkain ng mahina sa bitamina, protina, taba).
- sinasamahan hindi tiyak na mga sakit mga panloob na organo, karamdaman ng cardiovascular system, rayuma, dysfunctions ng endocrine at nervous system, malubhang talamak na dermatoses, malignant neoplasms;
- mga sugat ng sistema ng nerbiyos (malubhang pinsala, concussion, mental trauma);
- pagbubuntis talamak na pagkalasing alkohol, nikotina na gamot; mga nakakahawang sakit (malaria, tuberculosis, viral hepatitis, dysentery, tipus, tipus at umuulit na lagnat).
Mga diagnostic sa laboratoryo gumagamit ng ilang pagsusuri para sa syphilis nang sabay-sabay upang makuha ang pinakatumpak na resulta. Mas tumatagal ito, ngunit nagbibigay ng pinakatumpak na sagot.
Kadalasan, ang resulta ng pagsusuri ng RIF ay ipinakita sa mga numero. Ang decryption ay may mga sumusunod na pagtatalaga:
- matalas positibong resulta tinutukoy ng 4 na plus (++++);
- ang isang positibong resulta ay ipinahiwatig ng 3 plus (+++);
- mahina positibong resulta 2 plus (++);
- kahina-hinalang resulta 1 plus (+);
- ang isang negatibong resulta ay ipinahiwatig ng 1 minus (-).
Ang resulta ng RIF para sa syphilis ay ipinakita din bilang isang porsyento, na nakasalalay sa dami ng tagapagpahiwatig ng nauugnay na bakterya:
- na may negatibong resulta, immobilization hanggang 20%;
- na may mahinang positibong resulta, ang immobilization ay nag-iiba mula 20 hanggang 50%;
- na may positibong resulta, ang immobilization ay higit sa 50%.
Kung ang resulta ay positibo sagot, ito ay nagsasaad ng pagkakaroon ng sakit.
Kung ang resulta mahinang positibo, ito ay nagpapahiwatig ng isang solong halaga ng mga natitirang antibodies sa dugo.
Negatibo ang resulta ay nagpapahiwatig ng kawalan ng maputlang treponema, na nangangahulugan na ang pasyente ay malusog.
Ang mga nakaranasang doktor ng aming klinika ay mag-diagnose ng syphilis nang mabilis at may mataas na katumpakan ng mga pagbabasa. Kami ay nakatuon sa lipunan sa lahat ng mga bahagi ng populasyon, samakatuwid ang halaga ng pagsusuri ng RIF ay mura. Ang presyo ay ipinapakita sa talahanayan sa aming website.
Sa serological diagnosis ng syphilis, napakahalaga na makakuha ng maaasahan at tumpak na resulta.
Nagsasagawa ng ilang partikular na pagkilos upang mapabuti ang kalidad ng data:
- Ang test serum ay diluted 200 beses (1:200) upang maiwasan ang maling positibong reaksyon. Pagkatapos ay sinasabi nila na ito ay isinasagawa pagsusuri para sa syphilis RIF 200.
- Sa ibang bersyon, kapag ang serum ay natunaw sa 1: 5, ang isang espesyal na sumisipsip ay ginagamit din, na nangongolekta ng "dagdag" na mga antibodies sa sarili nito upang hindi nila masira ang mga resulta.
Ang mga sukat ng treponema ay naglalaro din sa mga kamay ng mga mananaliksik. Ang malalaking microbial body ng spirochetes ay malinaw na nakikita sa ilalim ng fluorescent microscopy. Kung sila ay "naka-attach" sa mga protina na may label na phosphor mula sa serum. Ang paggamit ng isang standardized antigen at sera ay ginagawang posible upang i-maximize ang sensitivity at specificity ng RIF sa diagnosis ng syphilis.
Mga opsyon sa pribadong pagsusuri RIF: RIF absorption
Isa sa mga alternatibong paraan tinatawag na RIF-Abs. Ito ay naiiba sa karaniwang pamamaraan sa pamamagitan ng mababang pagbabanto ng pinag-aralan na suwero - 1:5 kumpara sa 1:200, gaya ng dati.
Ang isang puro sample ay naglalaman ng maraming aktibong molekula ng protina.
Upang maiwasan at madagdagan ang sensitivity, ang serum ay ginagamot ng isang espesyal na sumisipsip mula sa mga fragment ng syphilitic spirochetes. Ang sorbent ay nangongolekta ng labis na aktibong mga antibodies sa sarili nito, at pagkatapos ang sample ay ginagamot ng pang-industriya na serum na may label na phosphor. Salamat sa paunang paghahanda na ito, ang lahat ng mga hindi kinakailangang molekula na maaaring makaapekto sa mga resulta ng pagsubok ay tinanggal.
Inilagay nila ito ayon sa mga sumusunod na indikasyon:
- Positibo laban sa background ng klinikal na kagalingan at ang kawalan ng mga panganib ng impeksyon sa kasaysayan.
- Positibong RV sa mga pasyente na may malalang sakit.
- Negatibong RV kapag lumitaw ang mga sintomas na kahina-hinala ng syphilis.
Ang mga unang positibong resulta ay lalabas sa 15-16 araw pagkatapos ng impeksyon. Kung ang reaksyon mula sa positibo ay nagiging negatibo, ito ay nagpapahiwatig ng kumpletong lunas para sa syphilis. Ang posibilidad ng isang maling positibong resulta ay mas mababa sa 0.4%.
Ang sitwasyong ito ay maaaring mangyari kapag sinusuri ang mga pasyente ng kanser, alkoholiko, mga buntis na kababaihan at mga taong dumaranas ng mga sakit sa immune.
Ang isang tiyak na proporsyon ay nahuhulog sa mga teknikal na pagkakamali, dahil ang produksyon ay medyo kumplikado. May mga kaso kung kailan kinakailangan upang makilala ang congenital pathology mula sa nakuha. Magagawa mo ito kung maghahanap ka iba't ibang uri antibodies sa dugo ng pasyente.
Ang mga anti-syphilis class M (IgM) na antibodies ay lilitaw kaagad pagkatapos ng impeksyon at mas mabilis kaysa sa IgG. Binibigyang-daan kang makilala ang mga ito pagsusuri para sa syphilis RIF absorption IgM. Kung positibo ang mga resulta ng reaksyong ito, maaari nating pag-usapan ang tungkol sa kamakailang impeksiyon. Kaya ang mga kaso ng reinfection ay maaaring makilala mula sa relapse o impeksyon ng bata pagkatapos ng panganganak ay maaaring makita.
Batay sa mga resulta ng pamamaraang ito ng pagsusuri ng RIF, napagpasyahan din nila na ang paggamot sa maagang syphilis ay epektibo.
Kung pinaghihinalaan mo ang syphilis, makipag-ugnayan sa isang bihasang venereologist.
Ang Syphilis ay sinamahan ng maraming sintomas at mayroon malaking bilang ng mga klinikal na anyo. Ang pagkilala nito ay batay sa isang komprehensibong pagsusuri sa klinikal at laboratoryo ng pasyente. Pangkalahatang pagsusuri ang dugo para sa syphilis ay nagdadala ng kaunting impormasyon, samakatuwid, hindi ito ginagamit upang masuri ang sakit.
Ang mga sumusunod na materyales ay maaaring kunin para sa pagsusuri:
- dugo mula sa isang daliri at isang ugat;
- alak - cerebrospinal fluid;
- nababakas matigas na chancre (ulser);
- mga lugar ng mga rehiyonal na lymph node.
Ang pagpili ng materyal at paraan ng diagnostic ay depende sa yugto ng sakit. Pag-uusapan natin kung anong mga pagsubok ang ibinibigay para sa syphilis sa susunod na seksyon.
Pag-uuri ng mga pamamaraan para sa pagsusuri sa laboratoryo ng sakit
Sa paunang yugto, maaari mong gamitin ang paraan ng bacterioscopic, batay sa pagpapasiya ng pathogen - maputlang treponema - sa ilalim ng mikroskopyo. Sa hinaharap, ang mga pagsusuri sa serological batay sa pagpapasiya ng mga microbial antigen at antibodies na ginawa ng katawan sa biological na materyal ay malawakang ginagamit.
Ang bacteriaological research ay hindi isinasagawa, dahil ang causative agent ng syphilis ay lumalaki nang napakahina sa nutrient media sa ilalim ng mga artipisyal na kondisyon.
Ang lahat ng mga pamamaraan para sa pag-detect ng treponema, iyon ay, mga uri ng pagsusuri para sa syphilis, ay nahahati sa dalawang malalaking grupo:
1. Direkta, na direktang nakakakita ng mikrobyo mismo:
- dark-field microscopy (pagtuklas ng treponema sa isang madilim na background);
- RIT-test - impeksyon ng mga kuneho na may materyal na pagsubok;
- polymerase chain reaction(PCR) na nakakakita ng mga seksyon ng genetic material ng isang microorganism.
2. Hindi direkta (serological), batay sa pagtuklas ng mga antibodies sa mikrobyo, na ginawa ng katawan bilang tugon sa impeksiyon.
Ang mga pagsusuri sa serological ay nahahati sa dalawang grupo
Nonntreponemal:
- umakma sa reaksyon ng fixation na may cardiolipin antigen (RSKk);
- reaksyon ng microprecipitation (RMP);
- mabilis na plasma reagin test (RPR);
- pagsubok na may toluidine pula.
Treponemal:
- umakma sa reaksyon ng fixation na may treponemal antigen (RSKt);
- treponem immobilization reaction (RIT o RIBT);
- immunofluorescence reaksyon (RIF);
- reaksyon passive hematglutination(RPGA);
- enzyme immunoassay (ELISA);
- immunoblotting.
Ang mga pamamaraan ng mga pagsusuring ito ay medyo kumplikado, kaya't higit na tututuon natin kung kailan ito isinasagawa at kung gaano katumpak ang impormasyong ibinibigay ng mga ito.
Sabihin natin kaagad na ang batayan para sa pag-diagnose ng syphilis ay mga serological na pamamaraan. Ano ang pangalan ng pagsusuri para sa syphilis: sa bawat kaso, maaaring kasama sa pagsusuri iba't ibang pamamaraan. Sa ibaba ay ilalarawan namin ang mga ito nang mas detalyado.
Direktang Pagsusulit
Ang kanilang pagtuklas sa ilalim ng isang mikroskopyo ay nakakumbinsi na nagpapatunay sa pagkakaroon ng treponema. Ang posibilidad ng syphilis sa kasong ito ay umabot sa 97%. Gayunpaman, ang mga mikrobyo ay makikita lamang sa 8 mga pasyente sa 10, kaya ang isang negatibong pagsusuri ay hindi nagbubukod sa sakit.
Isinasagawa ang diagnosis sa at mga panahon kung kailan mayroong matigas na chancre o pantal sa balat. Sa paglabas ng mga nakakahawang elementong ito, naghahanap sila ng mga pathogen.
Mas mahusay, ngunit mas mahal din at kumplikadong pagsusuri– pagtuklas ng mga treponema pagkatapos ng kanilang paunang paggamot na may mga fluorescent antibodies. Ito ay mga sangkap na "dumikit" sa mga mikrobyo at bumubuo ng kanilang "glow" sa larangan ng isang mikroskopyo.
Ang sensitivity ng mga pamamaraan ay bumababa sa isang mahabang tagal ng sakit, ang paggamot ng mga ulser at rashes na may antiseptics, pati na rin pagkatapos ng paggamot.
Ang biological na paraan para sa pag-diagnose ng RIT ay lubos na tiyak, ngunit mahal, at ang resulta ay nakukuha lamang sa pamamagitan ng sa mahabang panahon kapag ang isang nahawaang hayop ay nagkaroon ng sakit. Sa kasalukuyan, ang pamamaraan ay halos hindi ginagamit, bagaman ito ay halos ang pinakatumpak sa lahat. Isang mahusay na pagsusuri sa dugo para sa syphilis upang makita ang treponema genetic material - PCR. Ang tanging limitasyon nito ay ang relatibong mataas na halaga ng mga diagnostic.
Mga pamamaraan ng serological
Mga pagsubok na hindi treponemal
RSKk at RMP
Ang pinakatanyag sa mga pagsubok na ito ay ang reaksyon ng Wasserman. Ito ang daan mabilis na pagsusuri(mabilis na pagsusuri para sa syphilis), batay sa isang katulad na reaksyon ng mga antibodies mula sa dugo ng isang taong may sakit sa treponemas mismo at sa cardiolipin na nakuha mula sa puso ng baka. Bilang resulta ng pakikipag-ugnayan na ito ng mga antibodies at cardiolipin, ang mga natuklap ay nabuo.
Sa Russia pagsusuring ito halos hindi ginagamit. Ito ay pinalitan ng reaksyon ng microprecipitation. Ang kawalan ng pamamaraan ay ang mababang pagtitiyak nito. Maling positibong pagsusuri ang dugo para sa syphilis ay matatagpuan sa tuberculosis, mga sakit sa dugo, systemic lupus erythematosus, sa panahon ng pagbubuntis, pagkatapos ng kapanganakan ng isang bata, sa panahon ng pagdurugo ng regla at sa maraming iba pang mga kaso. Samakatuwid, na may positibong RW, higit pa tumpak na pamamaraan mga diagnostic.
Pagkatapos ng impeksyon, ang reaksyon ay nagiging positibo pagkatapos ng dalawang buwan. Sa pangalawang syphilis, ito ay positibo sa halos lahat ng mga pasyente.
Ang reaksyon ng microprecipitation, na pumalit sa reaksyon ng Wassermann, ay may katulad na mekanismo. Ito ay mura, madaling gawin, mabilis na suriin, ngunit maaari ring magbigay ng maling positibong resulta. Ang dalawang pagsubok na ito ay ginagamit bilang mga pagsusuri sa pagsusuri.
Nagiging positibo ang RMP isang buwan pagkatapos ng paglitaw ng isang hard chancre. Para sa pagpapatupad nito, ginagamit ang dugo mula sa isang daliri.
Maaari bang mali ang pagsusuri sa syphilis? Tiyak na oo, lalo na kapag gumagamit ng mga pagsubok na hindi treponemal.
Mga sanhi ng acute false-positive na pagsusuri kapag gumagamit ng RMP:
- talamak na nakakahawang sakit;
- pulmonya;
- Atake sa puso;
- stroke;
- pinsala at pagkalason.
Ang mga talamak na maling positibong resulta ay kadalasang nangyayari sa mga sumusunod na sakit:
- tuberkulosis;
- brucellosis;
- leptospirosis;
- sarcoidosis;
- sakit sa rayuma;
- Nakakahawang mononucleosis;
- malignant na mga bukol;
- diabetes;
- cirrhosis ng atay at iba pa.
Kung may mga kontrobersyal na pagsusuri, ang treponemal serological test ay ginagamit upang linawin ang diagnosis.
RPR at toluidine red test
Ang rapid plasma reagin test (rpr syphilis test) ay isa pang uri ng reaksyon sa cardiolipin antigen. Ginagamit ito sa mga sumusunod na kaso:
- pagsusuri ng populasyon;
- hinala ng syphilis;
- pagsusuri ng donor.
Binanggit din namin ang pagsubok na may toluidine red. Ang lahat ng mga pamamaraang ito ay ginagamit upang suriin ang pagiging epektibo ng paggamot. Ang mga ito ay semi-quantitative, iyon ay, bumababa sila sa pagbawi at tumataas sa pag-ulit ng impeksiyon.
Ang mga negatibong resulta ng mga pagsusuring hindi treponemal ay malamang na nagpapahiwatig na ang paksa ay walang syphilis. Samakatuwid, ang mga pagsusuri na hindi treponemal ay ginagamit upang masuri ang lunas. Ang unang naturang pagsusuri ay dapat gawin 3 buwan pagkatapos makumpleto ang kurso ng paggamot.
Mga pagsubok sa treponemal
Ang mga pagsusuri sa treponemal ay batay sa paggamit ng mga treponemal antigens, na makabuluhang nagpapataas ng kanilang diagnostic value. Nalalapat ang mga ito sa mga sumusunod na sitwasyon:
- positibong pagsusuri sa pagsusuri (microrecipitation reaction);
- pagkilala sa isang maling positibong resulta ng screening;
- hinala ng syphilis;
- diagnostic ng mga nakatagong anyo;
- retrospective diagnosis kapag ang pasyente ay nagkaroon ng sakit nang mas maaga.
RIT at RIF
Ang pinakamataas na kalidad (highly sensitive at highly specific) ay RIT at RIF. Ang mga kawalan ng mga pamamaraang ito ay ang pagiging kumplikado, tagal, ang pangangailangan para sa modernong kagamitan at sinanay na mga tauhan. Sa karamihan ng mga gumaling na pasyente, ang mga pagsusuri sa treponemal ay nananatiling positibo sa loob ng maraming taon at samakatuwid ay hindi maaaring gamitin bilang isang pamantayan para sa pagpapagaling.
Naging positibo ang RIF dalawang buwan pagkatapos ng impeksyon. Kung ito ay negatibo, ang pasyente ay malusog; kung ito ay positibo, ang posibilidad ng sakit ay mataas.
Ang RIT ay kadalasang ginagamit lalo na sa mga pasyenteng may positibong kanser sa pantog upang maalis o makumpirma ang sakit. Ito ay lubos na sensitibo at nagbibigay-daan sa iyo upang sabihin nang may mahusay na katumpakan kung ang pasyente ay may syphilis o wala. Gayunpaman, ang pagsusuri ay nagiging positibo lamang tatlong buwan pagkatapos ng impeksyon.
Immunoblotting
Ang immunoblotting ay mas sensitibo kaysa sa RIF, ngunit hindi gaanong sensitibo kaysa sa RPHA. Ito ay madalas na ginagamit, pangunahin para sa pagsusuri ng neonatal syphilis.
Ang mga nakalistang pamamaraan ay hindi angkop para sa screening, iyon ay, ang mabilis na pagtuklas ng sakit, dahil sila ay nagiging positibo mamaya kaysa sa reaksyon ng microprecipitation.
ELISA at RPGA
Modernong lubos na nagbibigay-kaalaman na standardized na pamamaraan para sa pag-diagnose ng syphilis - ELISA at RPHA. Ang mga ito ay mura, mabilis na naka-install at nasubok sa maraming dami. Maaaring gamitin ang mga pagsusuring ito upang kumpirmahin ang diagnosis.
Ang pagsusuri ng RPHA ay nagiging positibo sa pangunahing seropositive syphilis, iyon ay, sa hitsura ng isang matigas na chancre (isang buwan pagkatapos ng impeksyon). Ito ay lalong mahalaga sa diagnosis ng huli, at congenital forms mga sakit. Gayunpaman, ang RPHA ay dapat dagdagan ng hindi bababa sa isang non-treponemal at isang treponemal na pagsubok para sa tumpak na diagnosis. Ang nasabing triple test ay ang pinaka-maaasahang pagsusuri para sa syphilis. Ang kawalan ng RPGA ay ang pangangalaga positibong reaksyon sa loob ng mahabang panahon, na hindi pinapayagan ang pagsubok na gamitin bilang isang criterion para sa lunas.
Ang isang ELISA test para sa syphilis ay nagiging positibo kasing aga ng tatlong linggo pagkatapos ng sakit. Ang kawalan ng ELISA ay maaari itong maging mali. Ang isang maling positibong reaksyon ay nangyayari kapag mga sistematikong sakit, metabolic disorder, gayundin sa mga batang ipinanganak sa mga maysakit na ina.
Bahid mga pamamaraan ng serological humantong sa pagbuo ng mga pinaka-advanced na pamamaraan na hindi nagbibigay ng mga error, ngunit sa ngayon ay mahal at bihirang ginagamit - gas chromatography at mass spectrometry.
Algorithm para sa pag-diagnose ng syphilitic infection sa iba't ibang yugto
Sa pangunahing seronegative period (hanggang 2 buwan pagkatapos ng impeksyon), ang isang paghahanap para sa treponema ay isinasagawa sa isang madilim na larangan o gamit ang mga fluorescent antibodies.
Sa pangunahing seropositive, secondary at latent syphilis, ginagamit ang RMP at ELISA, at ang RPHA ay ginagamit bilang confirmatory test.
Sa mga pasyente na may mga relapses ng pangalawang syphilis, ang mga elemento ng pantal ay sinusuri, sinusubukang ihiwalay ang treponema mula sa kanila para sa mikroskopikong pagsusuri.
Sa tertiary period, negatibo ang RMP sa ikatlong bahagi ng mga pasyente. Ang ELISA at RPHA ay positibo, ngunit maaaring hindi ito nagpapahiwatig ng tertiary syphilis, ngunit isang nakaraang sakit. Ang mahinang positibong pagsusuri ay mas malamang na magpahiwatig ng paggaling kaysa sa tertiary syphilis.
Kapag gumagawa ng diagnosis ng "congenital syphilis", ang pagkakaroon ng sakit sa ina, ang pagkakaiba sa mga rate ng RMP sa ina at anak, positibong ELISA at RPHA sa bagong panganak, at immunoblotting ay isinasaalang-alang.
Ang mga buntis na kababaihan ay dapat suriin para sa syphilis, lalo na ang mga nagkaroon na ng panganganak na may patay na fetus, hindi umuunlad na pagbubuntis, maagang pagkakuha. Isinasagawa nila ang RMP, ELISA, RPGA. Suriin ang pagkakaroon ng sakit at bago wakasan ang pagbubuntis.
Mga panuntunan para sa pagkuha ng pagsusuri para sa syphilis
Upang makakuha ng referral sa laboratoryo, kailangan mong bisitahin ang iyong doktor sa distrito. Kung gusto mong kumuha ng pagsusulit nang mas mabilis, maaari itong gawin sa isang pribadong laboratoryo nang walang referral (halimbawa, ang mga laboratoryo ng Invitro ay gumagawa ng pagsusuri para sa syphilis nang mabilis at hindi nagpapakilala).
Paano magpasuri para sa syphilis? Ang dugo ay ibinibigay sa umaga, sa walang laman na tiyan. Purong tubig lang ang pwede mong inumin.
Paghahanda: dalawang araw bago ang pagsubok, ang mga mataba na pagkain at lalo na ang alkohol ay dapat na hindi kasama sa diyeta.
Paano kinuha ang pagsusuri? sa karaniwang paraan mula sa isang daliri o cubital vein.
Magkano ang ginagawa ng pagsusuri sa syphilis? Ang resulta ng pagsusulit ay karaniwang handa sa susunod na araw. Ang transcript ay maaaring kunin mula sa isang doktor o sa isang laboratoryo.
Gaano kabisa ang pagsusuri? Hanggang tatlong buwan.
Pagsusuri ng cerebrospinal fluid
Sa ilang mga kaso, ang pagsusuri ng CSF ay kinukuha upang masuri ang neurosyphilis.
Ang pagsusuring ito ay inireseta para sa lahat ng mga pasyenteng may nakatagong syphilis kung mayroon silang mga palatandaan ng isang patolohiya ng sistema ng nerbiyos, pati na rin sa latent at late neurosyphilis.
Bilang karagdagan, ang pagsusuri ay isinasagawa sa lahat ng mga pasyente pagkatapos ng paggaling, habang pinapanatili ang kanilang mga positibong serological reaksyon. Isinulat na namin sa aming artikulo na ang hindi pangkaraniwang bagay na ito ay madalas na nangyayari.
Ang pagsusuri ng CSF para sa syphilis ay inireseta at isinasagawa lamang ng isang doktor.
Ang cerebrospinal fluid ay nakukuha sa pamamagitan ng pagbutas sa pagitan ng dalawang vertebrae panlikod. Ito ay nakolekta sa 4 ml sa dalawang test tubes. Pagkatapos ang lugar ng pagbutas ay ginagamot ng yodo at tinatakpan ng isang sterile bandage. Pagkatapos ng pagbutas, ang pasyente ay dapat humiga sa kanyang tiyan na may nakataas na dulo ng paa ng kama nang hindi bababa sa 3-4 na oras, pagkatapos ay maaari siyang humiga sa kanyang tagiliran. Pahinga sa kama pagkatapos ng pagbutas ay ipinapakita ito sa loob ng dalawang araw.
Ang cerebrospinal fluid mula sa unang test tube ay sinusuri gamit ang pangkalahatang tinatanggap na mga reaksyon sa nilalaman ng protina, mga selula, at ang pagpapasiya ng mga palatandaan ng meningitis (pamamaga ng meninges).
Ang cerebrospinal fluid mula sa pangalawang test tube ay sinusuri para sa nilalaman ng mga antibodies sa treponema gamit ang reaksyon ng Wasserman, RMP, RIF at RIBT, na aming tinalakay sa itaas.
Ayon sa kalubhaan ng mga paglabag, mayroong apat na uri ng mga pagbabago sa cerebrospinal fluid. Sa pagsusuri sa kanila, maaaring tapusin ng doktor na mayroong iba't ibang anyo ng pinsala sa sistema ng nerbiyos (vascular neurosyphilis, syphilitic meningitis, meningovascular syphilis, dorsal tabes, late mesenchymal neurosyphilis), pati na rin ang pagbawi ng pasyente na may positibong serological test.
laki ng font
ORDER ng Ministry of Health ng USSR na may petsang 02-09-85 1161 ON IMPROVEMENT OF SEROLOGICAL DIAGNOSIS OF SYPHILIS (kasama ang INSTRUCTIONS FOR ... Relevant in 2018
Paraan ng pagtatakda ng RIF - ABS
Sinuri ang serum ng dugo
Ang dugo upang makakuha ng serum ng dugo ay kinukuha mula sa cubital vein papunta sa isang malinis at tuyo na test tube sa dami ng 5 ml at pinoproseso sa parehong paraan tulad ng para sa pag-set up ng reaksyon ng Wasserman. Ang serum ng dugo ay hindi aktibo nang isang beses sa temperatura na 56° sa loob ng 30 minuto. Dahil sa ang katunayan na ang RIF-abs ay inilagay na hindi sterile, ang paggamit ng mga sterile na pinggan at pagsunod sa mga kondisyon ng sterility kapag nag-iimbak ng sera ng dugo ay hindi kinakailangan. Ito ay mahalaga lamang para sa isang mas mahabang pangangalaga ng sera ng dugo bago ang pag-aaral.
Bilang isang antigen, ang isang suspensyon ng pathogenic pale treponemas ng Nichols strain mula sa isang 7-araw na rabbit orchitis ay ginagamit. Ang mga malulusog na lalaking kuneho na may negatibong resulta ng Wasserman at RIT ay nahawaan ng intratesticularly at, kapag nangyari ang orchitis, ang mga maputlang treponema ay tinanggal mula sa mga testicle sa parehong paraan tulad ng sa kaso ng pagkuha ng antigen para sa RIT. Ang nagresultang suspensyon ng maputlang treponema ay ibinuhos mula sa mga piraso ng testicle sa mga sterile test tube na may mga cotton plug at iniwan sa refrigerator sa 4 ° para sa isang araw, pagkatapos nito ay ihiwalay ito sa sediment at nakaimbak sa ilalim ng parehong mga kondisyon para sa buong panahon ng paggamit.
Ang pagkuha at pag-iimbak ng antigen ay nangangailangan ng pagsunod sa mga kondisyon ng sterility, tk. na may parehong antigen, ang reaksyon ay maaaring isagawa sa loob ng 2-4 na buwan. Para sa antigen, dapat piliin ng isa ang suspensyon kung saan ang treponema agglutination ay hindi sinusunod at mayroong sapat na halaga ng mga ito. Ang antigen ay maaaring makuha sa mga ampoules mula sa iba pang mga laboratoryo. Bago ang bawat reaksyon, ang suspensyon ay mahusay na pinaghalo at sinusuri sa ilalim ng isang mikroskopyo na may isang dark field condenser upang matukoy ang density nito. Upang itakda ang RIF-abs, kinakailangan na magkaroon ng isang suspensyon na naglalaman ng 40-60 treponemas sa madilim na larangan ng paningin; kung mayroong isang mas makapal na suspensyon, dapat itong matunaw.
Bilang isang sorbent para sa RIF-abs, ang ultrasonified treponemal antigen para sa RSK, na ginawa ng Kaunas enterprise para sa produksyon ng mga bacterial na paghahanda ng USSR Ministry of Health, ay maaaring gamitin. Ito ay isang suspensyon ng pinaghalong mga kulturang maputlang treponema ng mga strain V, VII, VIII, IX at Reiter na nawasak ng ultrasound. Ang bawat serye ng sorbent ay dapat na titrated bago gamitin sa RIF-abs para sa mga layuning diagnostic.
Titration ng sorbents
Ang mga sorbents ay titrated sa sera ng dugo ng mga pasyente na may syphilis, na nagbibigay ng isang matalas na (4+) at mahina (2+) positibong resulta sa RIF sa isang pagbabanto ng 1: 5, pati na rin sa sera ng dugo ng mga taong walang syphilitic. impeksyon, na nagbibigay ng negatibong resulta sa RIF-5 at hindi tiyak na positibo (2+ o higit pa).
Isang halimbawa ng pagtukoy sa titer ng isang sorbent
Ang buong sorbent ay diluted na may phosphate buffer, pH = 7.2, 2, 3, 4 na beses o higit pa. 3 blood sera ang kinukuha mula sa mga pasyenteng may syphilis, isa sa mga ito ay nagbibigay ng matinding positibong (4+) na resulta sa RIF-5, 2 - mahinang positibo (2+), at 5 blood sera mula sa mga taong walang syphilitic infection, 3 sa mga ito magbigay ng hindi tiyak na mga resulta at RIF-5 (2+ at higit pa). Ang lahat ng sera ng dugo ay diluted 5 beses na may sorbent na diluted 2, 3, 4 o higit pang beses na may phosphate buffer. Pagkatapos ang serum ng dugo ay sinusuri sa reaksyon. Matapos isaalang-alang ang mga resulta, ang pagbabanto ng sorbent ay pinili, kung saan ang sorbed blood sera ng mga pasyente na may syphilis ay nagpapanatili ng isang antas ng positivity na katulad ng nakuha sa blood sera na diluted na may phosphate buffer, at ang blood sera ng mga taong libre mula sa syphilitic infection ay hindi kumikinang. Ang pagbabanto ng sorbent ay ang titer nito.
Ang titer ng sorbent sa kasong ito ay isang pagbabanto ng 1: 3, kung saan ang lahat ng sera ng dugo ng mga pasyente na may syphilis ay nagpapanatili ng antas ng positibong nakuha sa kontrol, at sa parehong oras, ang hindi tiyak na positibo ng di-syphilitic na dugo maaasahang tinanggal si sera.
Anti-species luminescent serum
Ang serum ng dugo na may label na fluorochrome mula sa mga hayop na nabakunahan ng protina ng serum ng tao ay kinakailangan upang pag-aralan ang sera ng dugo ng tao sa RIF-abs. Ang freeze-dried luminescent serum ay natutunaw sa ilalim ng mga sterile na kondisyon sa distilled water sa dami na ipinahiwatig sa label ng mga ampoules, ibinuhos sa isang sterile tube na may rubber stopper at nakaimbak sa 4°C sa loob ng 1-2 buwan habang ginagamit.
Sa araw ng reaksyon, ang kinakailangang halaga ng serum na ito ay diluted ayon sa titer na may distilled water. Ang gumaganang serum dilution na ipinahiwatig sa label ay hindi angkop para sa pag-set up ng isang reaksyon para sa layunin ng syphilis serodiagnosis, kaya ang titer ng bawat serye ay dapat na matukoy muli.
Talahanayan Blg. 13
Mga resulta ng sorbent titration
| Sinuri ang sera ng dugo | Mga resulta ng RIF-5 | |||
| Pagtunaw ng sera ng dugo 1: 5 buffer (K) | Dilution ng blood sera 1: 5 sorbent sa dilution | |||
| 1: 2 | 1: 3 | 1: 4 | ||
| Serum ng dugo ng isang pasyente na may syphilis | ||||
| N 1 | 4+ | 3+ | 4+ | 4+ |
| N 2 | 2+ | 1+ | 2+ | 2+ |
| N 3 | 2+ | 2+ | 2+ | |
| Non-syphilitic blood serum | ||||
| N 1 | 3+ | 1+ | 2+ | |
| N 2 | 2/3+ | 2+ | ||
| N 3 | 2+ | 2+ | ||
| N 4 | 2+ | 2+ | ||
| N 5 | ||||
Titration ng antispecies luminescent serum
Kumuha sila ng 5 blood sera mula sa mga pasyenteng may syphilis at 5 blood sera mula sa malusog na tao, dilute ang mga ito ng 5 beses na may sorbent (isinasaalang-alang ang titer nito) at tumutugon gamit ang iba't ibang dilution ng luminescent serum sa phase II laban sa human serum globulins ng serye na natutukoy ang titer. Dapat itong isaalang-alang na ang titer ng luminescent sera na kasalukuyang ginawa ng IEM. Ang N.F. Gamalei, ay nagbabago kapag ang RIF-abs ay itinakda mula 1: 100 hanggang 1: 140. Kapag isinasaalang-alang ang reaksyon, ang paunang titer ng luminescent serum ay dapat isaalang-alang na ang pagbabanto, kapag ginamit na may positibong blood sera, isang magandang glow ng treponemas ay nakuha, at may negatibong glow ng antigen na hindi natanggap. Ang isang mas mataas na pagbabanto ng luminescent serum kaysa sa titer ay humahantong sa pagbawas sa sensitivity ng reaksyon, at isang mas maliit sa pagbaba ng specificity. Pagkatapos matukoy ang paunang titer, dapat itong pinuhin ng higit pa positibo at negatibong sera ng dugo. Ang huling titer ay maaaring ituring na isa na nasubok sa 100 blood sera, at hindi bababa sa 20 sa mga ito ay dapat na mula sa mga pasyenteng may syphilis.
Upang maiwasan ang pagtubo pagkatapos ng pagbabanto ng dry luminescent serum na may distilled water, kinakailangang magdagdag ng morthiolate dito sa rate ng 1 volume ng 1: 1000 solution nito sa 9 volume ng luminescent serum. Kapag kumukuha ng mga bagong ampoules ng parehong serye, ang titer ay dapat lamang suriin at linawin para sa 10 kilalang positibo at negatibong sera ng dugo.
Isang halimbawa ng pagtukoy sa paunang titer ng luminescent na anti-species na serum
Maghanda ng 60 na gamot, bilangin ang mga ito mula 1 hanggang 60. Uminom ng 10 blood sera - 5 mula sa mga pasyenteng may syphilis, 5 mula sa malulusog na tao. Ang lahat ng sera ng dugo ay diluted 5 beses na may diluted ngunit titer sorbent.
Sa may bilang na 1-10, 11-20, 21-30, 31-40, 41-50, 51-60 na mga gamot ay inilapat sa unang yugto ng reaksyon na may parehong 10 sera ng dugo, diluted 5 beses na may sorbent. Sa II phase ng reaksyon, luminescent serum diluted 1: 100 ay inilapat sa 1-10 paghahanda, 1: 110 sa 11-20, 1: 120 sa 21-30, 1: 130 sa 31-40, 1: 130 sa 41-50 : 140, sa 51-60 - 1:150.
RIF-abs setting technique
Ang mga paghahanda ay inihanda mula sa antigen sa manipis, well-defatted glass slide, sa reverse side kung aling mga bilog na may diameter na 0.7 cm ang minarkahan ng pamutol ng salamin (10 bilog sa 1 glass slide). Sa loob ng bilog, ang isang antigen-suspension ng maputlang treponemas ay inilapat sa salamin. Selyadong dulo ng isang Pasteur pipette sa isang pabilog na galaw ang suspensyon ay ipinamahagi sa loob ng bilog, pinatuyo sa hangin at naayos sa loob ng 10 minuto sa purong kemikal na acetone. Pagkatapos ay binibilang ang mga gamot. Ang inactivated test blood sera ay diluted 5 beses na may sorbent na diluted sa titer na may buffer solution. Ang isang bilang ng mga test tube ay inilalagay sa isang rack, ang bilang at bilang nito ay tumutugma sa bilang at bilang ng nasubok na sera ng dugo. Ang sorbent na diluted ng titer ay ibinuhos sa mga test tube na may pipette sa 0.2 ml, pagkatapos ay 0.05 ml ng buong test blood serum ay idinagdag at pinaghalong mabuti. Ang pagbabanto ng serum ng dugo ay maaaring isagawa gamit ang Florinsky apparatus. Ang serum ng dugo na diluted na may sorbent ay inilalapat sa antigen upang pantay na masakop ang smear, at ang mga paghahanda ay inilalagay sa isang mahalumigmig na silid, na sarado na may takip at inilagay sa isang thermostat sa 37° sa loob ng 30 minuto (I reaction phase ). Matapos ang unang yugto, ang mga paghahanda ay maingat na hinugasan sa 2 bahagi ng phosphate buffer, at ang mga paghahanda ay inilalagay sa pangalawang bahagi sa loob ng 10 minuto, pinatuyo, pagkatapos nito ay muling inilagay sa isang mahalumigmig na silid, luminescent serum na diluted sa titer ay inilalapat. at iniwan sa temperatura ng silid sa loob ng 30 minuto (Mga reaksyon sa Phase II). Sa pagtatapos ng ikalawang yugto, ang mga paghahanda ay hinuhugasan ng phosphate buffer tulad ng inilarawan sa itaas, tuyo at inilapat sa ibabaw ng mga pahid na patak ng patak ng non-luminescent immersion oil (dimethyl phthalate).
Ang pagsusuri ng mga paghahanda ay isinasagawa sa isang fluorescent microscope na may mercury-quartz lamp DRSh-250 na may isang sistema ng paglulubog, isang eyepiece 4X o 5X, mga filter ng SZS-7 o 14, FS-1. BS-8 at ZhS-18 o T-2N. Ang accounting para sa reaksyon ay isinasagawa sa pamamagitan ng pagtatasa ng glow ng maputlang treponema. Sa RIF-abs, ang blood sera ay itinuturing na positibo, na nagbibigay ng glow sa 4+, 3+ at 2+. Ang makikinang na berde-dilaw na glow ay na-rate na 4+, maliwanag - 3+, mahinang glow 2+. Ang blood sera ay itinuturing na negatibo kung nagbibigay sila ng glow ng 1+ (treponemas sa paghahanda ay mas matindi ang kulay kaysa sa background) o hindi ito ibibigay.
Sa bawat pagbabalangkas ng RIF-abs, ang mga sumusunod na kontrol ay dapat gamitin:
Biglang positibong kontrol. Ang serum ng dugo ng isang pasyente na may syphilis, na nagbibigay ng isang glow ng 4+ kapag diluted na may buffer 5 beses. Kapag natunaw ng 5 beses sa isang sorbent, ang serum ng dugo ay hindi dapat mawala ang antas ng pagiging positibo ng higit sa 1+.
Mahina ang positibong kontrol. Buo o diluted blood serum ng isang pasyente na may syphilis, na nagbibigay ng mahinang antas ng antigen luminescence na 2+ kapag natunaw ng buffer nang 5 beses. Kapag natunaw ng isang sorbent, ang positivity nito ay dapat mapanatili.
nonspecific na kontrol. Non-syphilitic blood serum, na, kapag natunaw ng buffer, ay nagbibigay ng fluorescence ng hindi bababa sa 2+. Kapag natunaw ng isang sorbent, ang positivity nito ay dapat alisin.
Ang mga kontrol ng antigen, sorbent, luminescent serum ay maaari lamang itakda kapag gumagamit ng bagong serye ng mga sangkap na ito.
Paraan ng pagtatakda ng RIF-abs na may capillary blood
Ang pagtatakda ng RIF-abs ay posible hindi lamang sa serum ng dugo, kundi pati na rin sa dugo na kinuha mula sa isang daliri. Ang pagbabagong ito ng RIF-abs ay maaaring gamitin kapag sinusuri ang mga bata para sa syphilis, kapag mahirap kumuha ng dugo mula sa ugat sa mga matatanda, at kapag mass screening ang iba't ibang contingent para sa syphilis.
Kapag nagtatakda ng RIF-abs na may dugo, ang parehong mga sangkap ng reaksyon ay ginagamit tulad ng kapag nagtatakda ng RIF-abs na may serum ng dugo (antigen, sorbent, luminescent serum). Ang titer ng luminescent serum ay tinutukoy ayon sa pamamaraan sa itaas, ngunit kapag nagse-set up ng isang reaksyon sa dugo. Pagkatapos mabutas ang daliri ng pasyente, ang dugo para sa pagsusuri ay kinuha gamit ang isang micropipette sa marka ng 0.1 ml, mabilis na hinipan sa isang test tube na naglalaman ng 0.3 ml ng distilled water, lubusan na hinaluan ng isang pipette at sinala sa pamamagitan ng isang filter ng papel na binasa ng distilled water. . Ang pag-set up ng isang reaksyon na may diluted na dugo ay posible kapwa sa araw ng pagkuha nito, at pagkatapos ng 1-2 araw, sa kondisyon na ito ay naka-imbak sa 4 °.
Kaagad bago i-set up ang reaksyon, 0.1 ml ng buong sorbent ay idinagdag sa lahat ng mga sample ng dugo na kasama sa setting ng reaksyon, halo-halong may pipette at nanginginig, at inilagay sa isang thermostat sa 37° sa loob ng 30 minuto. Pagkatapos ang dugo na ginagamot sa sorbent ay inilapat sa antigen smears at inilagay sa isang mamasa-masa na silid sa 37° (phase 1 ng reaksyon). Matapos ang pag-expire ng panahon ng pagkakalantad, ang mga paghahanda ay hinuhugasan sa unang bahagi ng phosphate buffer upang walang mga bakas ng dugo sa mga slide at sila ay inilagay sa loob ng 10 minuto sa pangalawang bahagi ng buffer. Pagkatapos ng pagpapatayo ng mga smears, ang pangalawang yugto ng reaksyon ay isinasagawa. Kasabay nito, ang luminescent serum laban sa mga globulin ng tao, na natunaw ayon sa titer na itinatag para sa pagbabagong ito ng RIF, ay inilalapat sa mga paghahanda. Ang mga slide sa humid chamber ay muling inilagay sa isang thermostat sa 37°.
Pagkatapos ng 30 minuto, ang mga paghahanda ay muling hugasan sa 2 bahagi ng pospeyt buffer para sa 10 minuto, tuyo at naka-mount para sa fluorescence microscopy. Ang pag-aaral ng mga gamot at ang pagtatala ng mga resulta ng reaksyon ay isinasagawa sa parehong paraan tulad ng kapag nagtatakda ng RIF-abs na may serum ng dugo.
Paraan ng pagtatakda ng RIF-200
Ang paraan ng pagtatakda ng RIF-abs at RIF-200 ay malapit na. Kapag nagse-set up ng RIF-200, ang pagproseso ng test blood sera, paghahanda ng antigen, paghahanda ng anti-species luminescent serum at ang titration nito ay isinasagawa sa parehong paraan tulad ng kapag nagse-set up ng RIF-abs. Dapat lamang itong isaalang-alang na ang mga titer ng luminescent serum na kasalukuyang ginawa sa RIF-200 ay mula 1:20 hanggang 1:50.
Pagtatakda ng diskarteng RIF-200
Ang nasubok na sera ng dugo ay diluted 200 beses na may phosphate buffer. Upang gawin ito, 3 hilera ng mga test tube ang inilalagay sa isang rack, ang bilang at pagnunumero kung saan sa bawat hilera ay tumutugma sa bilang at pagnunumero ng nasubok na sera ng dugo sa working journal. Sa unang hilera, ang buong test blood sera ay ibinuhos, sa pangalawang hilera, 0.45 ml ng buffer ay ibinuhos sa mga test tube, sa ikatlong hilera, 0.95 ml ng buffer. Sa pangalawang hilera, ang isang 10-tiklop na pagbabanto ng sera ng dugo ay inihanda, kung saan ang 0.05 ML ng test blood serum ay kinuha mula sa bawat tubo ng unang hilera na may hiwalay na 1 ml na nagtapos na pipette, na inilipat sa kaukulang tubo ng pangalawa. hilera at halo-halong may buffer na magagamit doon. Mula sa bawat tubo ng pangalawang hilera, ang parehong pipette ay ginagamit upang ilipat ang 0.05 ml ng test blood serum na diluted ng 10 beses sa kaukulang test tube ng ikatlong hilera at ang pagbabanto ng 200 beses ay nakuha.
Kapag nagse-set up ng isang reaksyon sa mga paghahanda na inilagay sa isang mahalumigmig na silid, ang test blood serum na diluted 200 beses ay inilapat upang ang kanilang mga numero na ipinahiwatig sa mga test tube ay tumutugma sa mga numero sa mga glass slide. Pagkatapos ng aplikasyon sa mga paghahanda ng serum ng dugo, ang basa-basa na silid ay inilalagay sa loob ng 30 minuto sa isang termostat na may temperatura na 37° (I phase ng reaksyon). Pagkatapos ang mga paghahanda ay hugasan ng 10 minuto sa 2 bahagi ng buffer at tuyo. Pagkatapos nito, muli silang inilagay sa isang mamasa-masa na silid at luminescent serum na diluted sa titer ay inilalapat sa lahat (phase II ng reaksyon). Ang pangalawang yugto ay isinasagawa sa loob ng 30 minuto sa temperatura ng silid, pagkatapos kung saan ang mga paghahanda ay hugasan ng 10 minuto, tuyo at naka-mount para sa fluorescence microscopy.
Ang accounting para sa mga resulta ng RIF-200 ay isinasagawa sa parehong paraan tulad ng RIF-abs.
Sa kaso kung ang mga clinician ay interesado sa titer ng fluorescent antibodies sa blood serum ng pasyente, ang RIF-abs at RIF-200 ay dapat gamitin kasama ng serial dilution ng nasubok na blood sera at ang titer ng fluorescent antibodies ay dapat ituring na pinakamataas na dilution ng serum ng dugo, na nagbibigay pa rin ng positibong resulta ng reaksyon. Nakaugalian na italaga ang isang titer bilang isang numero na nagpapakilala sa antas ng pagbabanto ng nasubok na serum ng dugo, halimbawa, 5, 10, 20, 40, atbp. (RIF-abs) o 200, 400, 800, atbp. (RIF-200).
Kapag nagse-set up ng parehong mga pagbabago ng reaksyon para sa pagbabanto ng nasubok na sera ng dugo at para sa paghuhugas ng mga paghahanda pagkatapos ng mga phase I at II, dapat gamitin ang isang phosphate buffer ng sumusunod na komposisyon: 1 l ng distilled water, 6.8 g ng sodium chloride, 1.48 g ng disubstituted sodium phosphate, 0. 43 g ng monosubstituted potassium phosphate (PH = 7.2). Ang handa na solusyon ay nakaimbak sa temperatura ng silid nang hindi hihigit sa isang linggo.
Dahil sa posibilidad na makakuha ng mga negatibong resulta sa pagkakaroon ng mga fluorescent antibodies, ang dugo at serum ng dugo ay hindi dapat suriin sa RIF-abs at RIF-200 sa panahon ng paggamot ng mga pasyente na may penicillin.
diskarte sa setting ng RIF-c
Ang maagang pagsusuri ng mga sugat ng nervous system sa syphilis ay isang kagyat na isyu sa paglaban sa sakit na ito. Dahil sa ang katunayan na ang RIF-c ay mas sensitibo kaysa sa lahat ng iba pang mga pagsubok na ginagamit para sa CSF diagnosis ng syphilis, ang pagbabagong ito ng RIF ay maaaring irekomenda para sa pagsusuri ng syphilitic lesyon ng central nervous system sa lahat ng anyo ng syphilis.
Para sa pagtatanghal ng RIF-c, ang parehong antigen, luminescent serum, ay ginagamit bilang para sa pagtatanghal ng RIF-abs at RIF-200 na may serum ng dugo. Ang pagpapasiya ng fluorescent antibodies sa cerebrospinal fluid at blood serum at ang pagpaparehistro ng reaksyon ay magkatulad din.
Ang cerebrospinal fluid ay ipinapasok sa reaksyon na hindi aktibo at buo. Bago i-set up ang reaksyon, maaari itong iimbak sa freezer compartment ng refrigerator sa mga test tube sa ilalim ng rubber stoppers nang hanggang 2 linggo. Ang lasaw ay isinasagawa sa temperatura ng silid.
diskarte sa setting ng RIF-c
Sa phase I ng reaksyon, ang 0.05 ml ng undiluted test cerebrospinal fluid ay inilapat sa antigen, ang mga paghahanda ay inilalagay sa isang mahalumigmig na silid sa loob ng 30 minuto sa temperatura ng silid. Pagkatapos ay hugasan sila ng phosphate buffer, pH = 7.2, para sa 10 minuto, tuyo. Sa phase II, ang luminescent serum na diluted sa titer ay inilapat sa mga paghahanda, na na-titrated kapag nagse-set up ng isang reaksyon sa cerebrospinal fluid. Ang mga paghahanda ay pinananatili sa temperatura ng silid sa loob ng 30 minuto sa isang mahalumigmig na silid, hugasan, tuyo, naka-mount para sa fluorescent microscopy.
Pinagmumulan ng mga pagkakamali
1. Hindi pagsunod sa mga kondisyon para sa paghahanda, pag-iimbak ng mga reagents at ang setting ng reaksyon.
2. Mababang kalidad ng luminescent serum at hindi tumpak na pagpapasiya ng titer nito.
3. Paglalapat ng test material o luminescent serum kapag nagse-set up ng reaksyon hindi sa gamot, ngunit sa kabilang panig ng glass slide.
4. Maling setting ng pag-iilaw sa fluorescent microscope.
5. Mababang kalidad ng antigen.
