Metóda sa najčastejšie používa v sérologických laboratóriách. Podstatou metódy je stanovenie prítomnosti alebo neprítomnosti skupinových antigénov A a B v testovanej krvi pomocou štandardných izohemaglutinačných sér, ako aj skupinových protilátok α a β pomocou štandardných erytrocytov. Reakcia so štandardnými sérami sa uskutočňuje tak, ako je opísané vyššie.
Reakcia so štandardnými erytrocytmi sa uskutočňuje nasledovne.
Potrebné vybavenie
Zariadenie na reakciu so štandardnými erytrocytmi sa líši tým, že vyžaduje štandardné erytrocyty troch krvných skupín: 0(I), A(II), B(III). Štandardné červené krvinky sa pripravujú z krvi darcov s vopred známou krvnou skupinou a uchovávajú sa pri teplote 4 – 8 °C. Čas použiteľnosti 2-3 dni.
Postup reakcie
1. Krv na výskum sa odoberie z žily do suchej skúmavky, odstredí sa alebo sa nechá 20-30 minút osamote, aby sa získalo sérum.
2. Tri veľké kvapky (0,1 ml) testovacieho krvného séra zo skúmavky sa aplikujú na označenú dosku pipetou a vedľa nich - jedna malá kvapka (0,01 ml) štandardných skupín erytrocytov.
3. Ďalšie aktivity sa vykonávajú podobne ako pri metóde s použitím štandardných izohemaglutinačných sér: zodpovedajúce kvapky sa zmiešajú so sklenenými tyčinkami, tableta sa pretrepe, pozoruje sa 5 minút, k aglutinačným kvapkám sa pridá izotonický roztok chloridu sodného a potom sa posudzuje sa výsledok.
Tabuľka 6-3. Vyhodnotenie výsledkov prierezového stanovenia krvnej skupiny
Interpretácia výsledkov
Vyhodnoťte údaje získané z oboch reakcií (so štandardnými izohemaglutinačnými sérami a štandardnými erytrocytmi – tabuľka 6-3).
Zvláštnosťou interpretácie výsledkov reakcie so štandardnými erytrocytmi je, že erytrocyty skupiny 0 (I) sa považujú za kontrolu (neobsahujú antigény, čo zásadne znemožňuje špecifickú aglutináciu s akýmkoľvek sérom).
Výsledok krížovej metódy sa považuje za spoľahlivý len vtedy, ak sa pri hodnotení výsledkov reakcie so štandardnými izohemaglutinačnými sérami a so štandardnými erytrocytmi zhodujú odpovede o testovanej krvnej skupine. Ak sa tak nestane, obe reakcie by sa mali zopakovať.
Stanovenie krvných skupín pomocou monoklonálnych protilátok
Potrebné vybavenie
Na stanovenie krvnej skupiny sa používajú monoklonálne protilátky, na výrobu ktorých sa využíva hybridómová biotechnológia.
Hybridóm je bunkový hybrid vytvorený fúziou nádorovej bunky kostnej drene (myelóm) s imunitným lymfocytom, ktorý syntetizuje špecifické monoklonálne protilátky. Hybridóm nadobúda vlastnosti oboch „rodičov“: schopnosť neobmedzeného rastu, charakteristickú pre nádorovú bunku, a schopnosť syntetizovať protilátky, charakteristickú pre imunitný lymfocyt.
Tabuľka 6-4. Schéma hodnotenia výsledkov stanovenia krvných skupín pomocou monoklonálnych protilátok (koliklony anti-A a anti-B)
Boli vyvinuté štandardné reagencie - monoklonálne protilátky: anti-A a anti-B koliklony, používané na stanovenie aglutinogénov erytrocytov.
Zoliklony sa používajú vo forme lyofilizovaného prášku červenej (anti-A) alebo modrej (anti-B) farby, prášok sa bezprostredne pred štúdiou zriedi izotonickým roztokom chloridu sodného.
Technika reakcie
Anti-A a anti-B zoliklony sa aplikujú do bielej tablety, jedna veľká kvapka (0,1 ml) pod príslušnými nápismi: anti-A a anti-B. Vedľa nich sa aplikuje jedna malá kvapka (0,01 ml) testovanej krvi. Po zmiešaní zložiek sa aglutinačná reakcia pozoruje 2-3 minúty.
Interpretácia výsledkov
Vyhodnotenie výsledkov je veľmi jednoduché (tabuľka 6-4).
Metóda stanovenia krvnej skupiny pomocou koliklonov umožňuje opustiť štandardné izohemaglutinačné séra získané z darcovskej krvi.
Krv má špeciálne imunogenetické vlastnosti, podľa ktorých možno všetkých ľudí rozdeliť do určitých skupín. Každý človek musí vedieť, do ktorej krvnej skupiny patrí. To môže byť potrebné v prípade núdze zdravotná starostlivosť keď z akéhokoľvek dôvodu nie je možné spoľahlivo určiť krvnú skupinu. Potvrdili to výskumníci. Určením vašej krvnej skupiny bude človek schopný včas zistiť vlastnosti svojho zdravia a predchádzať chorobám.
Systém skupiny AB0 bol svetu odhalený spoločnosťou Landsteiner už v roku 1900. Neskôr sa skúmali ďalšie rozdiely medzi ľudskou a zvieracou krvou (napríklad).
Príslušnosť k krvnej skupine je pevne stanovená genetický kód a dedí sa s inými individuálnymi vlastnosťami. K tvorbe antigénu dochádza v prenatálnom období a počas života človeka nemení jeho špecifické vlastnosti.
Prvky krvného systému
V tekutej mobilnej krvnej plazme sú rovnomerne rozdelené bunkové elementy: erytrocyty, leukocyty a krvné doštičky. Formované prvky zaberajú až 35-45% celkového objemu krvi. Okrem toho plazma obsahuje tukové častice buniek, takzvaný „krvný prach“ (hemokónia). môže obsahovať špecifické antigény (aglutinogény A a B). V krvnej plazme možno detegovať protilátky (aglutiníny α a β). Kombinácie antigénov a protilátok umožňujú klasifikáciu krvných skupín podľa systému ABO.
Iné typy skupinových krvných systémov vyberajú iba prítomnosť antigénov v červených krvinkách. Protilátky proti nim sa zvyčajne objavia, keď sa príjemcovi podá nevhodná krvná, imunologická a fetálna.
Podľa systému AB0 sú všetci ľudia rozdelení do nasledujúcich skupín:
- Najprv 0 (I) () – v červených krvinkách nie sú žiadne antigény a v sére sa nachádzajú aglutiníny α a β
- Druhý A (II) – obsahuje aglutinogén A
- Tretí B (III) () – je prítomný aglutinogén B
- Štvrtý AB (IV) – aglutinogény erytrocytov A a B sú spolu fixované.
Systém AB0 umožňuje vyhnúť sa nebezpečné následky s nesprávnou transfúziou krvi. Pre ideálnu krvnú kompatibilitu je potrebné, aby krv darcu zodpovedala rovnakej skupine v systéme ABO ako krv pacienta. Transfúzia cudzej krvnej skupiny môže spôsobiť imunologickú inkompatibilitu a viesť k transfúznym komplikáciám. Pred zákrokom je potrebné študovať zloženie krvi a vykonať sériu testov kompatibility.
Laboratórne komponenty
Na určenie krvnej skupiny si pacient nevyžaduje špeciálnu prípravu, je len potrebné zdržať sa pitia alkoholu a nepiť žiadne lieky v predvečer analýzy.
Vezmite si so sebou odporúčanie od lekára do laboratória. Je dobré si vopred zakúpiť jednorazovú súpravu na odber krvi alebo injekčnú striekačku – tá spoľahlivo ochráni pred možnou infekciou počas odberu. alebo žily. U dojča krv sa zvyčajne odoberá z päty.
Určenie krvnej skupiny je založené na aglutinačnej reakcii, pri ktorej vznikajú zlepené vločky červených krviniek. Priprav sa na laboratórny výskum pre krvnú skupinu zahŕňa štandardné sérum a erytrocyty vo forme roztoku, kontrolné činidlá, fyziologický roztok(chlorid sodný 0,9%) a špeciálne biele plastové alebo porcelánové taniere, pipety.
Aby bolo laboratórium spoľahlivé, musí mať teplotu vzduchu medzi 21-24°C a jasné osvetlenie. Všetky spotrebné komponenty musia byť skontrolované, či sú v súlade s jednou sériou, podmienkami používania a podmienkami skladovania. Prítomnosť suspenzie, sedimentu alebo zákalu v roztokoch erytrocytov a sére je neprijateľná.
Stanovenie sérami
Na bielom štítku sú v poradí vyznačené názvy krvných skupín 0, A, B. Na štítok oproti jeho nápisu sa aplikujú veľké kvapky štandardného séra skupín 0(I), A(II), B(III). a vedľa séra inej série: dva riadky sa získajú kvapky
Na odstránenie chýb sa používa použitie rôznych sérií činidiel. Každá kvapka štandardného séra sa opatrne zmieša s malou kvapkou krvi pacienta. Všetky manipulácie sa vykonávajú pomocou pipety alebo sklenenej tyčinky. Potom sa platnička trochu potrasie a výsledok štúdie sa vyhodnotí v každej kvapke. Ak sa do piatich minút vytvoria vločky aglutinovaných červených krviniek, výsledok sa považuje za pozitívny.
Ak chcete vylúčiť možná chyba, každá kvapka krvi na tanieri sa zmieša s kvapkou fyziologického roztoku a počká sa ďalších päť minút. Ak sa vločky začnú usadzovať vo všetkých kvapkách, potom sa reakcia monitoruje zmiešaním testovanej krvi a štandardného roztoku séra skupiny AB(IV). V druhom prípade by sa agregácia červených krviniek nemala zaznamenávať.
Určenie krvnej skupiny na základe získaných výsledkov:
- Skupina 1 – červené krvinky sa nezlepili ani v jednej kvapke
- - pozitívna reakcia krvi so sérami skupín 0(I) a B(III)
- Tretia skupina – krvná aglutinácia so štandardnými sérami 0(I) a A(II)
- – pozitívny výsledok v troch kvapkách a negatívny s kontrolným sérom AB(IV).
Na určenie typu plazmy existuje krížová metóda, pri ktorej sa navyše používajú štandardné červené krvinky. Táto metóda stanovenia krvnej skupiny pomáha identifikovať plazmatické skupiny protilátok α a β a otvára viac úplný popis krvi. Krížová metóda sa používa pred transfúziou krvi. Vopred sa odoberú vzorky venóznej krvi, tá sa usadí a plazma sa oddelí od vytvorených prvkov.
Niekedy sa namiesto štandardných sér používajú roztoky Tsoliklonu s monoklonálnymi protilátkami. Získavajú sa za účasti technológií genetického inžinierstva.
Kedy, je veľmi dôležitá kvalifikačná úroveň zdravotnícky pracovník, jeho presnosť a pozornosť. Chybný výsledok môže byť spôsobený nesprávnym poradím aplikácie činidiel, použitím špinavých alebo mokrých pipiet, nevhodnými činidlami a zanedbaním kontrolnej štúdie.
Vzácnosť výsledkov
Pri analýze lekárskych štatistík sa ukazuje, že prvá krvná skupina je najbežnejšia - až 65% celkovej populácie Zeme. Nasleduje druhý s výsledkom 25 % a tretí (asi 8 % populácie). Najvzácnejším výsledkom pri určovaní krvných skupín je štvrtá skupina, najmä s negatívnym Rh faktorom.
Výsledky stanovenia krvnej skupiny zaznamená zdravotnícky pracovník, ktorý vykonal rozbor, do ambulantnej karty alebo do dokladu totožnosti (cestovného pasu). Musí byť uvedený dátum štúdie a podpis zodpovedného zdravotníckeho pracovníka.
INŠTRUKCIE
O manipulačnej technike
„Stanovenie krvnej skupiny pomocou
séra (podľa systému ABO) »
podľa špeciality
2-79 01 01 "Medicína",
2-79 01 31 „Ošetrovateľstvo“
Stanovenie krvnej skupiny pomocou
štandardná izohemaglutinácia
séra (podľa systému ABO)
Indikácie: potreba transfúzie krvi, príprava na operáciu.
Materiálna podpora:
1) dve série štandardných hemaglutinačných sér v špeciálnych stojanoch;
2) fľaša s izotonickým roztokom chloridu sodného;
3) označené tablety;
5) pipeta na odber krvi;
6) pipety na izotonický roztok;
7) presýpacie hodiny počas 5 minút;
8) rukavice;
9) regulovaný dezinfekčný prostriedok.
Stanovenie krvnej skupiny sa vykonáva v miestnosti s dobrým osvetlením a teplotou +15 až +20 °C. Manipulácia sa vykonáva v rukaviciach. Ak dôjde k poraneniam kože, sestra je dočasne pozastavená z práce. V prípade kontaktu krvi s pokožkou alebo sliznicami sa liečba vykonáva podľa aktuálnych pokynov.
Postupnosť vykonávania:
1. Skontrolujte kvalitu štandardných hemaglutinačných sér:
1) farebným označením;
2) vzhľad(svetlé, priehľadné);
3) bezpečnosť ampulky;
4) prítomnosť správne navrhnutého štítku s uvedením krvnej skupiny, titra, dátumu exspirácie, miesta prípravy;
2. Položte na stôl:
1) dve sady štandardných hemaglutinačných sér troch skupín (O, A, B) dvoch sérií a jedna ampulka s AB sérom (IV), každá ampulka musí mať pipetu;
2) fľaša s izotonickým roztokom, pipeta;
3) sterilná označená tableta;
4) sklenené sklíčka (sklené tyčinky);
5) pipeta na odber krvi;
6) presýpacie hodiny;
3. Napíšte svoje celé meno na tablet. pacient, krvná skupina;
4. Noste rukavice;
5. Naneste 1 kvapku (0,1 ml) štandardného hemaglutinačného séra z troch skupín po dvoch sériách na tabletu do zodpovedajúcich otvorov v tablete;
6. Aplikujte 1 kvapku krvi z prsta alebo zo skúmavky pomocou pipety do príslušnej kyvety;
7. Do každej štrbiny tablety vedľa séra dajte 1 malú kvapku (0,1 ml) testovanej krvi v pomere krv: činidlo -1:10 (odoberte krv z veľkej kvapky pomocou rôznych sklenených tyčiniek);
8. Zmiešajte krv s činidlom, po premiešaní jemne potraste tabletou v rukách. Pridajte 1 kvapku 0,9% roztoku chloridu sodného ku kvapkám séra s červenými krvinkami, kde došlo k aglutinácii, ale nie skôr ako po 3 minútach;
9. Vyhodnoťte výsledok 5 minút po začiatku reakcie:
1) aglutinačná reakcia môže byť pozitívna a negatívna;
2) ak bolo podané sérum pozitívna reakcia To znamená, že krv obsahuje oba AB aglutinogény, v takom prípade by sa mala vykonať dodatočná kontrolná štúdia so štandardným sérom skupiny AB (IV);
10. Dezinfikujte odpadový materiál.
Indikácie: potreba transfúzie krvi a jej zložiek.
Nevyhnutné podmienky: miestnosť s dobrým osvetlením a teplotou od 15 o do 25 o C.
Vybavenie: dve sady štandardných hemaglutinačných sér skupín I (O), II (A), III (B) dvoch rôznych sérií a jedna ampulka séra IV (AB) (do každej ampulky so sérom sa vloží suchá, čistá pipeta ), fľaša s izotonickým roztokom chloridu sodného s pipetou, čistá umytá suchá špeciálna označená alebo kameninová doska, sklenené podložné sklíčka, sklenené tyčinky, sterilné oštepovité ihly na prepichnutie mäsa prsta, sterilné gázové guľôčky, alkohol, presýpacie hodiny na 5 minút.
| Etapy | Odôvodnenie |
| 1.Pred začatím práce si umyte ruky a nasaďte si sterilné rukavice. | Za účelom infekčnej bezpečnosti zdravotníckeho personálu pri práci s krvou. |
| 2. Skontrolujte, či má každá ampulka štandardného séra pas – štítok s uvedením krvnej skupiny, čísla šarže, titra, dátumu spotreby, miesta výroby. Je zakázané používať ampulku bez označenia. Sérum by malo byť ľahké a priehľadné, ampulka neporušená, titer nie menší ako 1:32. Séra sú umiestnené v špeciálnych stojanoch v 2 radoch. | Štandardné séra: I (O) – bezfarebné – bez pásikov na etikete; II (A) – modrá – 2 pruhy na štítku modrej farby; III (B) – červená – na štítku sú 3 červené pruhy; IV (AB) – žltá – na štítku sú 4 žlté pruhy. Prítomnosť vločiek a sedimentov je znakom nevhodnosti srvátky. Séra s platnosť vypršala skladovanie je nevhodné na použitie. |
| 3. Naneste jednu kvapku séra z dvoch sérií skupín I (O), II (A), III (B) na štandardnú doštičku alebo rozdelenú farebnou ceruzkou na 4 štvorce. | Na tanieriku rozdelenom farebnou ceruzkou je potrebné v každom štvorčeku uviesť krvnú skupinu. Na štandardnú doštičku alebo rozdelenú farebnou ceruzkou na 4 štvorce naneste jednu kvapku séra z dvoch sérií I (O), II (A), III (B), IV (AB), aby ste odstránili chyby pri odčítaní výsledku. |
| 4. Kvapka krvi zo skúmavky alebo prsta sa aplikuje pipetou alebo sklenenou tyčinkou alebo vedľa každej kvapky séra (krv by mala byť 10-krát menšia ako sérum) a zmiešaná s rôznymi sklenenými tyčinkami alebo rôzne rohy sklíčko. | Na získanie krvi z prsta sa konček prsta ošetrí alkoholom a koža sa prepichne ihlou - kopijou. Prvá kvapka krvi sa odstráni gázovou guľôčkou, potom sa nasledujú rôzne rohy podložného sklíčka, aby sa vylúčila falošná aglutinačná reakcia. |
| 5.Po premiešaní jemne pokývajte tanierom v rukách. | Pre rýchlejšiu a presnejšiu aglutináciu červených krviniek. |
| 6. Keď dôjde k aglutinácii, ale nie skôr ako po 3 minútach, pridajte 1 kvapku 0,9 % chloridu sodného do každej kvapky séra s červenými krvinkami, kde došlo k aglutinácii, premiešajte platňu pretrepávaním a pokračujte v pozorovaní, kým neuplynie 5 minút. | Pri pozitívnej izohemaglutinačnej reakcii sa vločky a zrná z adhezívnych červených krviniek neoddeľujú, keď sa pridá a mieša izotonický roztok chloridu sodného. O negatívna reakcia Kvapky séra na doštičke sú priehľadné, rovnomerne ružovej farby a neobsahujú vločky ani zrniečka. |
| 7.Po 5 minútach odčítajte reakciu v prechádzajúcom svetle. Ak je aglutinácia nejasná, do zmesi séra a krvi sa dodatočne pridá jedna kvapka 0,9% roztoku chloridu sodného, potom sa urobí záver o príslušnosti k skupine; možné sú nasledujúce 4 kombinácie: a) všetky tri séra v oboch sériách nespôsobujú aglutináciu. Testovaná krv skupiny I (O); b) negatívna izohemaglutinačná reakcia so sérom skupiny I (O) a III (B), testovaná krv skupiny II (A); c) izohemaglutinačná reakcia je negatívna so sérom skupiny III (B) v oboch sériách a pozitívna so sérami skupiny I (O) a II (A). Testovaná krv skupiny III (B); d) séra skupín I (O), II (A), III (B) dávajú pozitívnu reakciu v oboch sériách. Krv patrí do skupiny IV (AB). Ale predtým, ako urobíme takýto záver, je potrebné vykonať izohemaglutinačnú reakciu so štandardným sérom skupiny IV (AB) použitím rovnakej metódy. Negatívna izohemaglutinačná reakcia nám umožňuje konečne klasifikovať testovanú krv ako skupinu IV (AB) | a) neprítomnosť aglutinácie vo všetkých kvapkách naznačuje, že v testovanej krvi nie je žiadny aglutinogén, t.j. krv patrí do skupiny I (O); b) začiatok aglutinácie v kvapkách so sérom O (I) a B (III) naznačuje, že v krvi je aglutinogén A, t.j. krv patrí do skupiny II (A); c) prítomnosť aglutinácie v kvapkách so sérami skupiny I (O) a II (A) naznačuje, že testovaná krv obsahuje aglutinogén B, t.j. krv patrí do skupiny III (B); d) aglutinácia vo všetkých kvapkách indikuje prítomnosť aglutinogénov A a B v testovanej krvi, t.j. krv patrí do skupiny IV (AB), avšak vzhľadom na to, že aglutinácia so všetkými sérami je možná v dôsledku nešpecifickej reakcie, je potrebné na platničku aplikovať kvapku séra skupiny IV (AB) a pridať 1 kvapku testu krv k nej v pomere 10: 1; sérum a krv sa transfúzia a výsledok pozorujte do 5 minút. Ak nedôjde k aglutinácii, potom je testovaná krv klasifikovaná ako skupina IV (AB). |
| 8. Identifikácia iných kombinácií naznačuje nesprávne určenie krvnej skupiny pacienta. | V prípade slabej aglutinácie a vo všetkých pochybných prípadoch sa krv znovu testuje štandardnými sérami z iných sérií. |
| 9. Chyby pri určovaní krvnej skupiny a nezistená aglutinácia môžu byť spôsobené: 1) slabou aktivitou štandardného séra alebo nízkou aglutinovateľnosťou erytrocytov; 2) nadmerné množstvo testovanej krvi pridané do štandardného séra; 3) oneskorená aglutinačná reakcia s vysoká teplotaživotné prostredie. | Aby ste sa vyhli chybám: 1) použite aktívne sérum s dostatočne vysokým titrom 1:32; 2) pomer objemu testovanej krvi a štandardného séra je 1:10; 3) štúdia sa vykonáva pri teplote nepresahujúcej 25 o C; 4) vyhodnotenie výsledkov najskôr 5 minút po štúdii; 5) prísne a starostlivo dodržiavať všetky pravidlá štúdie. |
Úloha č.1.
6-ročné dieťa je na ústavná liečba s diagnózou ascariáza. Počas ošetrovateľského vyšetrenia zdravotná sestra dostali nasledujúce údaje: sťažnosti na nevoľnosť, vracanie, bolesť v pupku, strata chuti do jedla, strata hmotnosti, únava, nepokojný spánok, nočné desy. Chorý niekoľko týždňov.
Objektívne: Koža je bledá, podkožná tuková vrstva nedostatočne vyvinutá, palpačná bolesť v oblasti pupka. Stolica podľa chlapca bez patológie.
Destinácia:
1. Výkaly na mne/červ
2. Všeobecný krvný test
4. Diéta č.5
Úlohy:
1. Identifikujte uspokojenie toho, aké potreby sú porušené, a pacientove problémy.
2. Zdôvodnite problémy pacienta.
3. Definujte ciele a vytvorte plán ošetrovateľskej intervencie s motiváciou.
4. Škrabanie na enterobiázu
Úloha č.2.
Pacient sa sťažuje na zvýšenie teploty do 39°C, slabosť, slabosť celého tela, bolesti svalov, kĺbov, bolesti pri pohybe očné buľvy, suchý bolestivý kašeľ, herpetické vyrážky na perách.
objektívne: koža vysoká vlhkosť, horná pera herpetické vyrážky, hyperémia spojoviek, slzenie, hyperémia v hltane, ťažké dýchanie v pľúcach. Srdcová frekvencia - 86 za minútu, krvný tlak 110/70 mm Hg. čl. Pečeň a slezina nie sú zväčšené. Fyziologické účinky sú nevýrazné.
V krvnom teste: L - 4,5 * 10 9 / l, p / i - 3; s/ya - 40; l-52; m-5; ESR-18 mm/hod.
Cvičenie
1. Identifikovať problémy pacienta, ktorých uspokojenie je narušené; formulovať a zdôvodňovať pacientove problémy.
2. Stanovte si ciele a urobte si plán. ošetrovateľské intervencie s motiváciou.
3. Vysvetlite pravidlá nastavenia inzulínu.
Stanovenie krvnej skupiny sa vykonáva v miestnosti s dobrým osvetlením pri teplote +15 - +25 0 C.
Na štítku na určenie krvnej skupiny je vľavo napísané 0ab (anti-A+B), v strede Ab (anti-B) a vpravo Ba (anti-A), horný okraj– priezvisko a iniciály osoby, ktorej krvná skupina sa zisťuje.
Pod príslušným označením krvnej skupiny sa na platničku aplikuje jedna veľká kvapka (0,1 ml) štandardných sér zodpovedajúcich skupín 2 sérií. Celkovo sa získa 6 kvapiek, ktoré tvoria dva rady po troch kvapkách v nasledujúcom poradí zľava doprava: 0ab (anti-A + B), Ab (anti-B) a Ba (anti-A).
Malá kvapka (0,01 ml) testovanej krvi sa aplikuje vedľa každej kvapky séra, pričom sa udržiava pomer 10:1.
Zmiešajte kvapku séra s kvapkou krvi pomocou samostatnej čistej sklenenej tyčinky.
Po premiešaní kvapiek doštičku pretrepte, potom ju nechajte 1-2 minúty v pokoji a znova pravidelne pretrepávajte.
Priebeh reakcie sa sleduje počas 5 minút. Aglutinácia začína počas prvých 10-30 sekúnd, ale pozorovanie by sa malo vykonávať až 5 minút kvôli možnosti neskoršej aglutinácie s červenými krvinkami obsahujúcimi slabé odrody antigénov A alebo B.
Po 3 minútach sa ku kvapkám zmesi séra s erytrocytmi, v ktorých došlo k aglutinácii, pridá jedna kvapka (0,05 ml) izotonického roztoku chloridu sodného a pozorovanie pokračuje s periodickým pretrepávaním doštičky až do uplynutia 5 minút.
Vyhodnotenie výsledku: reakcia v každej kvapke môže byť pozitívna (prítomnosť aglutinácie červených krviniek) alebo negatívna (neprítomnosť aglutinácie).
Rôzne kombinácie pozitívnych a negatívnych výsledkov umožňujú posúdiť skupinovú príslušnosť testovanej krvi (pozri tabuľku 1).
stôl 1
Znamienko plus (+) označuje prítomnosť aglutinácie, znamienko mínus (-) označuje jej neprítomnosť.
Ako je možné vidieť z tabuľky, výsledok sa hodnotí v závislosti od reakcie skúmaných červených krviniek so štandardnými sérami skupiny Oab (anti-A+B), Ab (anti-B), Ba (anti-A) . V prípadoch, keď sa získa pozitívny výsledok so sérom zo všetkých troch skupín, na vylúčenie nešpecifickej aglutinácie sa vykoná kontrolný test so štandardným sérom skupiny ABO(IV), ktoré neobsahuje skupinové aglutiníny. Len absencia aglutinácie v tejto kontrolnej vzorke nám umožňuje považovať pozitívny výsledok so sérami skupín Oab (anti-A+B), Ab (anti-B), Ba (anti-A) za pravdivý, t.j. testovaná krv patrí do skupiny AB(IV). V prítomnosti panaglutinácie, t.j. aglutinácia so všetkými sérami a teda neschopnosť určiť skupinovú príslušnosť podľa systému ABO, krv pacienta musí byť zaslaná do SPC alebo do OPK na vyšetrenie izoserológom.
3. Stanovenie krvnej skupiny ABO pomocou monoklonálnych činidiel anti-A, anti-B, anti-AB.
Reagencie anti-A, anti-B, anti-AB sú určené na stanovenie ľudských krvných skupín ABO systému v priamych hemaglutinačných reakciách a používajú sa namiesto alebo súbežne s polyklonálnymi imunitnými hemaglutinačnými sérami.
Postup pri vykonávaní štúdie:
Reagencie anti-A, anti-B, anti-AB aplikujte na tabletu alebo doštičku pomocou jednotlivých pipiet, jednu veľkú kvapku (0,1 ml) pod príslušnými štítkami.
Aplikujte jednu malú kvapku testovanej krvi (0,01-0,03 ml) vedľa kvapiek reagencií.
Zmiešajte krv s činidlom (v jamke tablety - dôkladne umytou suchou guľôčkou, pretrepte tabletu; na platni - čistou individuálnou suchou tyčinkou).
Postup reakcie s činidlami by sa mal monitorovať jemným trepaním doštičky alebo tablety počas 5 minút. Aglutinácia erytrocytov sa zvyčajne vyskytuje v prvých 3-5 sekundách, ale pozorovanie by malo pokračovať kvôli neskoršiemu výskytu aglutinácie s erytrocytmi obsahujúcimi slabé typy antigénov A alebo B.
Výsledok reakcie v každej kvapke môže byť pozitívny alebo negatívny. Pozitívny výsledok je vyjadrený aglutináciou (zlepením) červených krviniek. Aglutináty sú viditeľné voľným okom vo forme malých červených agregátov, ktoré sa rýchlo zlepia do veľkých vločiek. Pri negatívnej reakcii zostáva kvapka rovnomerne sfarbená do červena a nie sú v nej zistené žiadne aglutináty.
Zohľadnenie výsledkov aglutinačnej reakcie pri určovaní krvných skupín pomocou monoklonálnych činidiel je uvedené v tabuľke 2:
tabuľka 2
(+ ) – prítomnosť aglutinácie; (-) – absencia aglutinácie
O pozitívny výsledok aglutinačné reakcie so všetkými reagenciami musia vylúčiť spontánnu nešpecifickú aglutináciu testovaných červených krviniek, pre ktorú by ste mali na povrchu zmiešať 1 kvapku izotonického roztoku chloridu sodného s 1 kvapkou testovaných červených krviniek. Krv možno klasifikovať ako skupinu AB(IV) iba vtedy, ak nedochádza k aglutinácii červených krviniek v izotonickom roztoku chloridu sodného.
