Начало → Анализи → Имунологичен метод → Реакции на хемаглутинация (имунологичен метод)

Реакции на аглутинациясе основават на взаимодействието на реагент (антитела) с антигени, разположени на повърхността на клетките или чужди частици. В резултат на това се образуват големи агрегати, които се утаяват и се виждат дори с невъоръжено око. По този начин кръвната група се определя според системата ABO, наличието на Rh фактор в нея и т.н. Това е по-чувствителен диагностичен метод в сравнение с реакциите на утаяване, тъй като обемът на утайката (аглутината) надвишава обема на утайка.

Директна хемаглутинация

Реакцията на директна хемаглутинация (DHR) се използва за откриване на повърхностни антигени на микроорганизми и червени кръвни клетки, както и на антитела към тях.
ДА СЕ стандартни серумисъдържащи антитела, се добавя тестовият материал (кръв). Скоростта на реакцията на директна аглутинация е свързана с количеството на тествания материал, количеството и концентрацията на серума и температурата на околната среда.

Индиректна хемаглутинация

реакция индиректна хемаглутинацияизвършва се за откриване на антитела в кръвта на пациента с помощта на диагностичен тест за еритроцити. Реагентът се състои от червени кръвни клетки, на повърхността на които има антиген (протеини на микроорганизми, токсини, алергени и др.).
Кръвният серум на пациента се разрежда с 0,9% разтвор на натриев хлорид, след което се добавя еритроцитна диагностика и се проследява резултатът. Този високочувствителен диагностичен метод открива антигени дори в малки концентрации.

Реакция на хемаглутинация (HRA).

В лабораторията се използват две реакции на хемаглутинация с различен механизъм на действие.

Първият RGA е серологичен. При тази реакция червените кръвни клетки се аглутинират при взаимодействие с подходящи антитела (хемаглутинини). Реакцията се използва широко за определяне на кръвни групи.

Вторият RGA не е серологичен. При него слепването на червените кръвни клетки не е причинено от

антитела, но специални вещества, образувани от вируси. Например, грипният вирус аглутинира пилешките червени кръвни клетки и морски свинчета, полиомиелит вирус - овчи червени кръвни клетки. Тази реакция позволява да се прецени наличието на определен вирус в изследвания материал.

Реакцията се провежда в епруветки или в специални плаки с ямки. Изследваният за наличие на вирус материал се разрежда с изотоничен разтвор от 1:10 до 1:1280; 0,5 ml от всяко разреждане се смесват с равен обем 1-2% суспензия на червени кръвни клетки. В контролата 0,5 ml еритроцити се смесват с 0,5 ml изотоничен разтвор. Епруветките се поставят в термостат за 30 минути, а плаките се оставят на стайна температура за 45 минути.

Отчитане на резултатите.При положителен резултатреакция, утайка от червени кръвни клетки с назъбени ръбове („чадър“) се появява на дъното на епруветката или ямката, покривайки цялото дъно на ямката. Ако резултатът е отрицателен, червените кръвни клетки образуват плътна утайка с гладки ръбове („копче“). Същата утайка трябва да бъде в контролата. Интензивността на реакцията се изразява със знаци "+".

Реакция на хемаглутинация

Титърът на вируса е максималното разреждане на материала, в който настъпва аглутинация.

Реакция на инхибиране на хемаглутинацията

Това е серологична реакция, при която специфични антивирусни антитела, взаимодействайки с вируса (антиген), неутрализира го и го лишава от способността да аглутинира червените кръвни клетки, т.е. инхибира реакцията на хемаглутинация. Тази реакция ви позволява да определите вида и вида на вирусите.

Настройка на реакция. 0,25 ml антивирусен серум се смесват с равен обем материал, съдържащ вируса. Сместа се разклаща и се поставя в термостат за 30 минути, след което се добавят 0,5 ml 1-2% суспензия на червени кръвни клетки.

Отчитане на резултатите.Ако експериментът е проведен правилно, трябва да се образува "бутон" в контрола на серума и еритроцитите - няма фактор, аглутиниращ еритроцитите; при контрола на антигена се образува "чадър" - вирусът причинява аглутинация на червените кръвни клетки. Ако серумът е хомоложен на изследвания вирус, се образува "бутон" - серумът е неутрализирал вируса.

Реакция на индиректна хемаглутинация

Индиректната (пасивна) реакция на хемаглутинация (RIHA) се основава на факта, че червените кръвни клетки, ако разтворим антиген е адсорбиран на повърхността им, придобиват способността да аглутинират при взаимодействие с антитела към адсорбирания антиген.

Настройка на реакция.Серумът се нагрява в продължение на 30 минути при 56 °C, разрежда се последователно в съотношение 1:10 - 1:1280 и се излива в 0,25 ml в епруветки или ямки, където след това се капват 2 капки червени кръвни клетки с адсорбирани върху тях антигени. добавен.

контроли:суспензия от еритроцити с адсорбирани върху тях антигени с очевидно имунен серум, суспензия от еритроцити с адсорбирани върху тях антигени с нормален серум; суспензия от нормални червени кръвни клетки с тест серум. При първата контрола трябва да настъпи аглутинация, а при втората и третата да не настъпи.

Контролни въпроси.

1. Какво показва положителен резултат от рентгеново изследване между червените кръвни клетки и материала, който се изследва за наличие на вирус?

2. Ще възникне ли реакция на аглутинация на червените кръвни клетки, ако към тях се добави вирус и съответният му серум? Как се нарича реакцията, която разкрива това явление?

ПРАКТИЧЕСКА РАБОТА № 12.

Реакция на фиксиране на комплемента.

Реакцията на фиксиране на комплемента (FFR) се основава на факта, че специфичен комплекс антиген-антитяло винаги адсорбира (свързва) комплемента към себе си.

Тази реакция се използва широко при идентифициране на антигени и серодиагностика на инфекции, особено заболявания, причинени от спирохети (реакция на Васерман), рикетсии и вируси.

RKS е сложна серологична реакция. Включва комплемент и две системи антиген-антитяло. По същество това са две серологични реакции.

Дясната основна система се състои от антиген и антитяло (едното е известно, другото не). Към него се добавя известно количество комплемент. Ако антигенът и антитялото на тази система съвпадат, те ще се свържат и ще свържат комплимент. Полученият комплекс е фино диспергиран и невидим.

Образуването на този комплекс се открива с помощта на втора хемолитична или индикаторна система. Той включва овчи червени кръвни клетки (антиген) и съответния хемолитичен серум (антитела), т.е. готов имунен комплекс. В тази система лизисът на червените кръвни клетки може да настъпи само в присъствието на комплемент. Ако комплементът е свързан с първата система, тогава във втората система няма да има хемолиза, т.к няма безплатно допълнение. Липсата на хемолиза (съдържанието на епруветката е мътна или има утайка от еритроцити на дъното) се записва като положителен резултат от RSC.

Ако в първата система антигенът не съответства на антитялото, тогава имунният комплекс няма да се образува и комплементът ще остане свободен. Оставайки свободен, комплиментът участва във втората система, причинявайки хемолиза, резултатът от RSC е отрицателен (съдържанието на тръбите е прозрачно - „лакирана кръв“).

Компоненти, реакции на фиксиране на комплемента:

1. Антиген - обикновено лизат, екстракт, хаптен,

по-рядко суспензия от микроорганизми.

2. Антитяло - серум на пациента.

3. Комплемент - серум от морско свинче.

4. Антиген - овчи еритроцити.

5. Антитяло - хемолизин към овчи еритроцити.

6. Изотоничен разтвор.

Поради факта, че РСК участва голям бройсложни компоненти,

първо трябва да се титруват и да се включат в реакцията в точни количества и равни обеми: 0,5 или 0,25, по-рядко 0,2, 1,25 или 1,0 ml (по-големите обеми дават по-точен резултат). Титруването на реакционните компоненти се извършва в същия обем като експеримента, като липсващите съставки се заместват с изотоничен разтвор.

Свързана информация:

Търсене в сайта:

Тестът за индиректна или пасивна хемаглутинация (IRHA или RPHA) е по-чувствителен и специфичен от теста за аглутинация. Тази реакция също се използва в две посоки.

1) За откриване на антитела в кръвния серум на пациента се използва еритроцитна диагностика, при която антигенът се адсорбира върху повърхността на третирани с танин еритроцити. Във връзка с тази реакция по-често се използва терминът RPGA.

Тестовият серум се разрежда в ямките на пластмасови плаки и се добавя еритроцитен диагностикум. Ако реакцията е положителна, по стените на дупката се появява тънък филм под формата на „дантелен чадър“; отрицателна реакция- гъста утайка от еритроцити под формата на "копче".

2) За откриване на токсини и бактериални антигени в изследвания материал се използва антитяло еритроцитна диагностика, получена чрез адсорбция на антитела върху еритроцити. Във връзка с тази реакция по-често се използва терминът RNGA. Например, с помощта на диагностика на антитела се откриват антигенът на чумния бацил, дифтериен екзотоксин и ботулинов екзотоксин.

Какво представлява еритроцитният диагностикум? Какво представлява еритроцитният диагностикум с антитела?

Еритроцитните диагностикуми са червени кръвни клетки (третирани с танин или формалин) с антигени, извлечени от бактерии, адсорбирани върху тях, и се използват при RPHA (реакции на пасивна хемаглутинация). В случай, че RPGA се използва за откриване на антиген в секретите на пациентите, в тъканите и т.н., се използват „диагностикуми на антитела“, т.е. червени кръвни клетки, сенсибилизирани с антитела.

В RNGA антителата в кръвния серум се откриват с помощта на антигенен еритроцитен диагностикум, който представлява еритроцити с адсорбирани върху тях антигени.

Методика за настройка на реакциите. Реакция на коаглутинация.

- фиксиране на червени кръвни клетки с формалдехид или глутарови или акрилови алдехиди. Така обработените червени кръвни клетки се съхраняват дълго време. По-често за целта се използват еритроцити от овце, хора, кокоши и др.;
— обработка на фиксирани еритроцити с разтвор на танин. В резултат на това червените кръвни клетки придобиват способността необратимо да адсорбират протеини (вируси и антитела) на повърхността си;
- сенсибилизация на танизирани еритроцити от вируси или антитела.

Реакция на коаглутинация (CAR)

Реакцията на коаглутинация се използва за определяне на антигени с помощта на антитела, адсорбирани върху протеин А на стафилококови клетки (диагностикум на антитела).
Протеин А има афинитет към Fc фрагмента на имуноглобулините, следователно такива бактерии, третирани с имунен диагностичен серум, неспецифично адсорбират серумни антитела, които след това взаимодействат с активни центрове със съответните микроби, изолирани от пациенти. В резултат на коаглутинацията се образуват люспи, състоящи се от стафилококи, диагностични серумни антитела и открития микроб.

Аглутиниращи серуми: какво съдържат; как се получават, за какво се използват; Какъв е титърът на аглутиниращия серум?

Аглутиниращият серум се получава чрез имунизиране на зайци (интравенозно, подкожно или интраперитонеално) със суспензия от убити бактерии, като се започне с доза от 200 милиона, след това 500 милиона, 1 милиард, 2 милиарда микробни тела в 1 ml, на интервали от 5 дни. 7-8 дни след последната имунизация се взема кръв и се определя титърът на антителата.

Титърът на аглутиниращ серум е максималното разреждане на серума, при което настъпва аглутинация със съответния микроорганизъм.

Аглутиниращите серуми се използват за идентифициране на микроби в пълномащабна реакция на аглутинация.

Реакция на хемаглутинация (HRA)

Ако изследваният микроорганизъм е аглутиниран със серум до титъра или до половината от стойността на титъра, може да се счита, че принадлежи към вида, чието име е посочено върху етикета на ампулата.

Какви са разликите между поливалентни и моновалентни (монорецепторни) аглутиниращи серуми; Защо имунизацията на заек с микроби от един вид произвежда серум, съдържащ антитела към няколко антигена?

Монорецепторните серуми са серуми, съдържащи антитела само към един антиген, и поливалентни серуми, които дават реакции на аглутинация с две или три свързани бактерии, които имат общ антиген. Аглутиниращите серуми се използват за идентифициране на микроорганизми в реакция на аглутинация. Недостатъкът на такива серуми е, че те са способни да дават реакции на групова аглутинация, т.к те съдържат антитела срещу бактерии, които имат общи антигени.

Реакция на хемаглутинация. Описание и приложение

Основава се на факта, че червените кръвни клетки, върху които предварително са адсорбирани антигени, придобиват способността да аглутинират в присъствието на хомоложни серуми (антитела).

В този случай червените кръвни клетки действат като носители със специфични детерминанти, чиято аглутинация възниква в резултат на реакцията антиген + антитяло.

Червените кръвни клетки, към повърхността на които антигените са здраво прикрепени, се наричат ​​диагностикум на еритроцитен антиген или еритроцити, сенсибилизирани с антиген.

Друг вид RNGA - антителата се адсорбират върху повърхността на еритроцитите и последващата им аглутинация се извършва в присъствието на хомоложен антиген. В този случай такива еритроцити се наричат ​​диагностикум на еритроцитни антитела или еритроцити, сенсибилизирани от антитела.

Въз основа на тези два основни методологични подхода са разработени и използвани много модификации на RNGA. Така като носители се използват малки стандартни частици латекс. В този случай реакцията се нарича реакция на латексна аглутинация (RLA) или се използва Стафилококус ауреус- реакция на коаглутинация и др. Обикновено еритроцитните диагностикуми се приготвят в предприятията на биологичната промишленост, а основният опит на RNGA се извършва в диагностични лаборатории.

Приготвянето на еритроцитна диагностика включва следните стъпки:

• фиксиране на червени кръвни клетки с формалдехид или глутарови или акрилови алдехиди. Така обработените червени кръвни клетки се съхраняват дълго време. По-често за целта се използват еритроцити от овце, хора, кокоши и др.;
• третиране на фиксирани еритроцити с разтвор на танин. В резултат на това червените кръвни клетки придобиват способността необратимо да адсорбират протеини (вируси и антитела) на повърхността си;
• сенсибилизация на танизирани еритроцити от вируси или антитела.

Трябва да се отбележи, че методите за приготвяне на еритроцитни диагностикуми за вирусни инфекцииразличен.

Процедурата за извършване на RNGA за откриване и определяне на титъра на антитялото е както следва:

• равни дози еритроцити, сенсибилизирани с антиген, се добавят към последователни 2-кратни разреждания на серум;
• сместа се оставя за 2-3 часа при стайна температура или за 16-18 часа при 4 °C;
• вземете предвид резултатите. Ако серумът съдържа антитела срещу вируса, с който са сенсибилизирани червените кръвни клетки, се наблюдава хемаглутинация, която се оценява в кръстове.

Титърът на антитялото в серума се приема за най-високото разреждане на серума, което все още осигурява хемаглутинация чрез най-малко две кръстосвания.

RNGA се придружава от всички съответни контроли. Обикновено реакцията се провежда с помощта на микрометод.

RNGA ви позволява да разрешите следните диагностични проблеми:

• откриване на антитела и определяне на техния титър в кръвния серум с помощта на известен диагностикум на еритроцитния антиген;
• откриване и идентифициране на непознат вирус чрез диагностика на известни еритроцитни антитела.

Предимства на RNGA: висока чувствителност, простота на техниката на поставяне и скорост на реакция. Важно е обаче да се отбележи, че възникват големи трудности при подготовката на стабилна диагностика на еритроцитите (голяма зависимост от чистотата на използваните компоненти, необходимостта от избор на режим на фиксация, танизация и сенсибилизация на еритроцитите за всеки тип вирус).

Ако намерите грешка, моля, изберете част от текста и натиснете Ctrl+Enter.

Във връзка с

РЕАКЦИЯ НА ИНДИРЕКТНА ХЕМАГЛУТИНАЦИЯ, RNGA
(тест за индиректна хемаглутинация)

Метод за откриване на антигени и антитела, основан на способността на червените кръвни клетки, на повърхността на които антигените или антителата са предварително адсорбирани, да аглутинират в присъствието на хомоложни серуми или съответни антигени.

При откриване на антигени реакцията се индикира чрез тест за обратна пасивна хемаглутинация, а при откриване на антитела - чрез тест за пасивна хемаглутинация. RNGA намери широко приложение за идентифициране на серологични маркери на инфекция с вируса на хепатит В, особено HBsAg и антитела към него.

В момента е разработен различни методипроизводство на еритроцитни диагностикуми, които се различават по методите за сенсибилизиране на еритроцитите (използвайки танин, глутаралдехид, хромен хлорид, риванол и др.), техните видове (човек, овца, пиле, пуйка и др.), възможности за стадиране на реакцията ( в микротитър плаки, епруветки, капиляри и др.) и записване на резултатите (визуално и инструментално). Комплекти за диагностика на еритроцити за откриване на HBsAg и анти-HBs се произвеждат от много предприятия и фирми както у нас, така и в чужбина.

По-често RNGA се извършва в микротитърни плаки, в които предварително се приготвят разреждания на тестовия серум и контролни проби. След добавяне на еритроцитния диагностикум и инкубация се записват резултатите от реакцията. Пробите, в които настъпва аглутинация на червени кръвни клетки, приличащи на обърнат „чадър“, се считат за положителни. Ако реакцията е отрицателна, червените кръвни клетки се утаяват на дъното на дупката под формата на пръстен или диск.

За потвърждаване на специфичността на получените резултати реакцията се провежда както с „експериментален“ еритроцитен диагностикум (т.е. еритроцити, сенсибилизирани с антиген или антитела), така и с „контролен“ диагностикум (т.е. еритроцити, които не са сенсибилизирани с антиген или антитела). Наличието на положителна реакция с „контролно“ диагностично лекарство показва фалшиво положителна реакция. За да се елиминират неспецифичните реакции, тест серумът се третира с несенсибилизирани еритроцити. Предпоставка за провеждане на RNGA е реакция на неутрализация, т.е. тест за потвърждение.

В сравнение с методи като RPG, VIEF и RSK реакцията на индиректна хемаглутинация има по-висока чувствителност (200 - 400 пъти). Така HBsAg в RPGA може да се открие в концентрации от 6-10 ng/ml. Простотата на реакцията и бързината (20 - 30 минути) определят широкото му използване този методв службата по кръвопреливане за откриване на HBsAg.

В допълнение към еритроцитната диагностика за откриване на HBsAg и anti-HBs са разработени и диагностични препарати за идентифициранеанти-HBc, анти-HBc клас IgM (твърдофазова версия), HBeAg, антиген на вируса на хепатит А и антитела към него, но всички те не са намерили приложение в практическото здравеопазване.

Реакция на индиректна хемаглутинация (RIHA).

RIGA се използва в две версии: с известни антитела за откриване на антитела с известни антитела за откриване на антитела. Тази реакция е специфична и се използва за диагностициране на заболявания, причинени от бактерии и рикетсии. За извършване на RIGA се използва еритроцитна диагностика, приготвена чрез адсорбция на AG или AT върху еритроцити, в зависимост от целта на изследването (фиг. 10.3). При положителни случаи степента на аглутинация на еритроцитите се отбелязва с плюсове. Четири плюса оценяват реакция, която има формата на тънък слой от адхезивни червени кръвни клетки (чадър), покриващ дъното на епруветката; наличието на филм с изпъкнали дантелени ръбове се обозначава с два плюса. Като титър се приема максималното разреждане на тестовия материал, предизвикало аглутинация на еритроцитите с два плюса.

Ориз. 10.3.

1 - червени кръвни телца, 2 - еритроцитна AG, 3 - конюгиран AG, 4-AT

RHA и реакция на инхибиране на хемаглутинацията (HAI).

Както вече беше отбелязано, RHA се основава на способността на еритроцитите да се слепват, когато върху тях се адсорбират определени антигени. Като тестов материал за хемаглутинация се използват алантоична и амниотична течност, суспензия от хорион-алантоични мембрани на пилешки ембриони, суспензии и екстракти от култури или органи на животни, заразени с вируси, и нативен инфекциозен материал. RGA не е серологична реакция, тъй като протича без участието на имунен серум и се използва за избор на работното разреждане на антиген за определяне на RGA или наличието на антиген (вирус) в тестовия материал (например за грип ). Реакцията използва червени кръвни клетки от животни, птици и хора с кръвна група I (0). За да се установи приблизителна RGA, капка от 5% суспензия на еритроцити и капка от тестовия материал се нанасят върху предметно стъкло и се смесват добре. При положителен резултат след 1-2 минути макроскопски се наблюдава появата на флокулентна аглутинация на еритроцитите. За да поставите RGA в разгънат ред в ямките на полистиренови плаки, пригответе двойно увеличаващи се разреждания на тестовия материал на физиологичен разтворв обем от 0,5 мл. Във всички епруветки се добавят 0,5 ml 0,25-1% суспензия от червени кръвни клетки. Резултатите се вземат предвид след пълно утаяване на еритроцитите в контролата (еритроцити + физиологичен разтвор). Реакцията се взема предвид от естеството на еритроцитната утайка. В положителни случаи степента на аглутинация се отбелязва с плюсове. Реакция, която изглежда като тънък филм от лепкави червени кръвни клетки, покриващ дъното на епруветка (чадър), се оценява с четири плюса; реакция с празнини във филма се отбелязва с три плюса; наличието на филм с назъбена дантела краищата на лепкавите червени кръвни клетки се отбелязват с два плюса; флокулентна утайка от червени кръвни клетки, заобиколена от зона от аглутинирани бучки еритроцити, съответства на един плюс. Рязко изразена еритроцитна утайка, неразличима от контролата, показва липсата на аглутинация. Като титър се приема максималното разреждане на тестовия материал, предизвикало аглутинация на еритроцитите с два плюса. Ако резултатът от RGA е положителен, изследването продължава, като се определя вида на изолирания вирус с помощта на RT GA с типово специфични серуми. RTGA се основава на свойството на антисерума да потиска вирусната хемаглутинация, тъй като вирусът, неутрализиран от специфични антитела, губи способността си да аглутинира червените кръвни клетки. За пробно типизиране на вируси се използва капковия метод върху стъкло. За окончателно установяване на вида на изолирания вирус и титриране на антителата в серума, в епруветки или ямки се поставя разширен рентгенов тест. За тази цел се приготвят двойни разреждания на серуми във физиологичен разтвор и се разпределят в 0,25 ml. Към серумните разреждания добавете една капка материал, съдържащ вируса, и една капка 1% суспензия от червени кръвни клетки. При използване на RTGA за определяне на типа на вируса се използват типоспецифични серуми, които се добавят към равен обем от работното разреждане на AG. Типът на изолирания вирус се определя от специфичния имунен серум, който показва най-висок титър на антитела към този вирус. RGA и RTGA се използват широко за диагностика на вирусни инфекции ( енцефалит, пренасян от кърлежи, грип и др.), за да се открият специфични антитела и да се идентифицират много вируси чрез техните антитела.

Реакция на индиректна хемаглутинация (IRHA)

Използването на сорбирани диагностични лекарства се основава на принципа на имунологично разпознаване на повърхностните структури, който постоянно се реализира в природата. От тази гледна точка няма принципни разлики между използването например на микробна клетка или изкуствен носител, зареден с антиген (антитела). За основа на сорбираните лекарства се използват различни носители - микробни клетки, еритроцити, латекс, бентонин, холестерол, сефадекс, дерматол, Активен въглен, гъбични спори и др.

След работата на AT Кравченко (1945) еритроцитите, лишени от жизнеспособност и фиксирани с различни химически реактиви, станаха най-разпространени като носители на антигени или антитела. Въз основа на принципа на използване на еритроцити (както нативни, така и фиксирани) като носител на антиген, индиректната (пасивна) реакция на хемаглутинация стана широко разпространена.

Предложението за използване на реакцията на индиректна хемаглутинация (IRHA) за диагностични цели възникна въз основа на предварително разработени знания за високата сорбционна активност на еритроцитите. В сравнение с много други носители на антигени и антитела, еритроцитите имат известни предимства в реакцията на индиректна хемаглутинация. Първо, в изотоничен режим солеви разтворите образуват доста стабилна адхезия и не се утаяват кратко време. Второ, червените кръвни клетки на един и същи животински вид са еднакви по размер. И накрая, за еритроцитите е относително лесно да прикрепят различни серологично активни компоненти директно или в резултат на специална обработка.

Създаването на еритроцитна диагностика от стабилизирани еритроцити позволява да се преодолеят трудностите, възникващи при използването на нативни еритроцити.

При изследване на еритроцитите, третирани с различни фиксиращи вещества, бяха установени някои от техните общи свойства:

По отношение на морфологията те практически не се различават от пресните;

Да не се хемолизира в хипотонични разтвори, във вода и след замразяване-размразяване;

Може да се изсуши чрез замразяване;

Техните повърхностни структури запазват способността си да бъдат химически модифицирани (например танин, диазо съединения) и да реагират с антигени и антитела.

Основният критерий за качеството на фиксираните еритроцити е възможността да се използват за получаване на сенсибилизирани лекарства при липса на неспецифично залепване в стабилизиращи течности.

Подготовката на повърхността на еритроцитите с цел повишаване на сорбционния капацитет за антигени е важна при проектирането на диагностични лекарства. Особено разпространено е лечението на червените кръвни клетки с танин.

Под негово влияние те се променят антигенни свойстваеритроцити (пропускливост, скорост на утаяване), тяхната устойчивост на хемолитичните ефекти на някои мастни киселини. Основното обаче се постига - танизираните еритроцити имат значително по-голяма сорбционна способност на протеини, което в момента се използва широко в производството на висококачествена диагностика на антигени и антитела.

Наред с дъбените еритроцити, химически реагенти като бромелаин, трипсин, калиев периодат, които също модифицират мембраните на еритроцитите, се използват за получаване на еритроцитни диагностикуми и приготвяне на антигенни носители.

След подготовката на повърхността на червените кръвни клетки, най важен процес- процес на хемосенсибилизация - финален етаппроизводство на еритроцитна диагностика.

За укрепване на връзката между носителя и антигена се използват различни конюгиращи вещества - бисдиазобензидин, дифлуородинитробензин, цианоген хлорид, кадмиев хлорид и ацетат, бромен хлорид, формалдехид, глутаралдехид, цианоген бромид, риванол, амидол и др.

Използването на конюгиращи вещества помага да се премахнат недостатъците, които имат танизираните еритроцити, използвани за сенсибилизация без конюгиращи вещества.

Най-широко използваните конюгиращи вещества са хромов хлорид, глутаралдехид, черен диазол С и амидол. Процесът на сенсибилизация с хромов хлорид протича много бързо - от 4 до 10 минути, което привлича вниманието на изследователите. В този случай се използват концентрации на хромен хлорид от 0,05 до 2%, pH не е по-ниско от 5,0 при температура на реакционната смес от 20-250 С. В процеса на сенсибилизация с хромен хлорид се активират карбоксилните групи на протеините на еритроцитната мембрана . В резултат на това се образува ковалентна връзка между мембраната на червените кръвни клетки и сенситина.

Реакцията на индиректна хемаглутинация е силно специфична, тъй като адхезията на еритроцитите възниква в резултат на взаимодействието на антигена с антителата, адсорбирани върху еритроцитите. Неговата отличителна черта е високата му чувствителност: той открива 0,02-0,05 μg протеин на антитялото. По отношение на чувствителността той значително превъзхожда реакциите на имунодифузия, имунофлуоресценция, радиална имунодифузия, фиксиране на комплемента и неутрализация. RNGA е по-малко чувствителен от методите на радиоимуноелектрофореза, определяне на количеството протеин на радиоактивни антитела в имуносорбент и ензимен имуноанализ.

Предимствата на RNGA включват сравнително висока възпроизводимост, лекота на прилагане и необходимостта от минимални количества съставки, особено при използване на микрометод.

RNGA в последните годининамери широко приложение при диагностицирането на инфекциозен ринотрахеит, диария, аденовирусна инфекция, рота и коронавирусни инфекции, парагрип - 3 и респираторна синцитиална инфекция.

Даваме пример за производството и използването на еритроцитна диагностика за откриване на антитела срещу рота и коронавирусни инфекции.

Методът за приготвяне на диагностика на антитела за идентифициране на рота и коронавирусни антигени в RNGA е както следва: получаване на суспензия от еритроцити; фиксиране на техните акролеини; танизиране, което позволява получаване на стабилна сорбция на необходимия протеин върху червените кръвни клетки; сенсибилизация на танизирани еритроцити с имуноглобулини; определяне на спецификата на изготвения диагностикум. Приготвянето на суспензия от еритроцити се извършва чрез събиране на кръв от клинично здрава овца в колба със стъклени перли. След дефибриниране на кръвта червените кръвни клетки трябва да се промият 3-5 пъти с изотоничен (0,9%) разтвор на натриев хлорид чрез центрофугиране за 15-20 минути при 400 g.

За да се стабилизират червените кръвни клетки, те се третират с акролеин. Както е известно, действието му е малко по-меко от формалдехида и осигурява стабилност и др висока активностчервени кръвни телца За да направите това, равни обеми от 10% суспензия от еритроцити се смесват с 0,2% разтвор на акролеин, приготвен във фосфатен буферен разтвор (PBS) с рН 7,2. Получената суспензия се държи 30 минути при 37°С, като се разбърква старателно, последвано от отстраняване на акролеина чрез повторно центрофугиране за 5 минути при 600-800g до пълното изчезване на специфичната миризма. Предимството на червените кръвни клетки, приготвени по този начин, е, че те се съхраняват за бъдеща употреба и могат дълго времесе запазва без да претърпява хемолиза.

Впоследствие, стабилизираните червени кръвни клетки в 10% концентрация се държат при 2-4 °C в PBS с рН 7,2 в продължение на два месеца.

За да се увеличи сорбционният капацитет и седиментацията на червените кръвни клетки, е необходимо да се танизират чрез смесване на равни части от 10% суспензия от промити червени кръвни клетки и разтвор на танин в PBS и рН 7,2 при разреждане 1:30 000. Сместа се разбърква старателно и се държи при 370 С в продължение на 15 минути, след което червените кръвни клетки се промиват старателно от танин два пъти в PBS с рН 7,2 и три пъти с изотоничен разтвор на натриев хлорид с рН 7,2-7,4.

Оптималният период за гарантиране на получаването на висококачествени еритроцитни диагностикуми е тяхната сенсибилизация в рамките на 24-48 часа след третирането им с танин.

В процеса на производство на диагностикуми като разтворител и консервант се използва 0,3% фенолизиран изотоничен разтвор на натриев хлорид с 0,1% нормален заешки или конски серум, предварително инактивиран при 56°C за 30 минути и адсорбиран от нормални овчи еритроцити.37°C за 30 минути.

Сенсибилизацията на танизираните еритроцити трябва да се извършва с хиперимунен серум, съответно срещу рота и големи коронавируси говеда(произведено във Всеруския изследователски институт по експериментална ветеринарна медицина на името на Y.R. Kovalenko). В този случай сенсибилизиращата доза (концентрация на протеин) на антиротавирусен имунен серум е 280 μg/ml, а тази на имунния серум към коронавирус е 260 μg/ml.

Сенсибилизацията се извършва чрез смесване на равни обеми дъбени еритроцити и имунен серум, предварително загрят за 30 минути при 560C в оптимална концентрация. Освен това добавете 3 части изотоничен разтвор на натриев хлорид с рН 7,2 и 5 части 0,1% разтвор на хромен хлорид. Сместа, като се разбърква от време на време, се оставя на стайна температура за 5 минути. След определеното време сместа се промива старателно с PBS с рН 7,2 и след това приготвените еритроцитни диагностикуми се ресуспендират в консервант до концентрация 1%. Приготвеният диагностикум запазва основните си качества в продължение на 8 месеца, при условие че се съхранява при 4°C.

На всички етапи от производството на диагностикума се наблюдава самоаглутинацията. Специфичността на подготвените диагностикуми се определя чрез поставяне на RNGA, където като антигени се използват стандартни диагностикуми на IRT вируси, AI - 3, аденовируси, вирусна диария, както и рота и коронавирусни антигени.

При извършване на RNGA се приготвят последователни двойни разреждания на тестовия вируссъдържащ материал (20-50% суспензия от фекални проби), след което към всяка ямка се добавя равен обем диагностична течност за еритроцити. Плаките трябва да се разклатят старателно няколко пъти и да се оставят на стайна температура, докато еритроцитите в контролата се утаят напълно. Индекс положителна реакция- аглутинация на еритроцитния диагностикум с интензитет на аглутинация 2+ в титър 1:4 и по-висок.

реакция на пасивна хемаглутинация)

метод за откриване и идентифициране на антигени или антитела, базиран на феномена на аглутинация на червените кръвни клетки, който възниква в тяхно присъствие, на чиято повърхност предварително са адсорбирани съответните специфични или антигени.

1. Малка медицинска енциклопедия. - М.: Медицинска енциклопедия. 1991-96 2. Първо здравеопазване. - М.: Велика руска енциклопедия. 1994 3. Енциклопедичен речник медицински термини. - М.: Съветска енциклопедия. - 1982-1984 г.

Вижте какво е „реакция на непряка хемаглутинация“ в други речници:

реакция на индиректна хемаглутинация- RNGA Лабораторен тест с еритроцитни диагностикуми. [Англо-руски речник на основните термини във ваксинологията и имунизацията. Световна здравна организация, 2009] Теми ваксинология, имунизация Синоними RNGA EN... ... Ръководство за технически преводач

- (RNHA; синоним на реакция на пасивна хемаглутинация) метод за откриване и идентифициране на антигени или антитела, базиран на феномена на аглутинация на еритроцитите, който възниква в тяхно присъствие, върху повърхността на която те са били предварително адсорбирани... .. . Голям медицински речник

- (RPHA) виж реакция на индиректна хемаглутинация... Голям медицински речник

Тази страница е речник. # A... Уикипедия

Основни съкращения, приети във Ветеринарния енциклопедичен речник- a., aa, artena, arteriae aa ana (еднакво) Академия на медицинските науки на СССР Академия медицински наукиАкадемия на науките на СССР на Академията на науките на СССР Бак. Bacillus Bact. Бактерия BSSR Белоруска ССРвек, век век, векове v., vv. vena, venae ВАСХНИЛ Всесъюзен орден на Ленин и... ...

Този термин има и други значения, вижте Чума. Чумата на месоядните (болест на Каре) остра или подостра заразна вирусно заболяване, проявяваща се с треска, катарално възпаление на лигавиците, кожни лезии, централна ... ... Wikipedia

- (renes) сдвоен отделителен и ендокринен орган, който регулира химическата хомеостаза на тялото чрез функцията за образуване на урина. АНАТОМО-ФИЗИОЛОГИЧНА СКИЦА Бъбреците са разположени в ретроперитонеалното пространство (Retroperitoneal space) на... ... Медицинска енциклопедия

I (трихинелоза; синоним: трихинелоза, "подпухнал") хелминтиаза от групата на нематодите, характеризираща се с треска, миалгия, подуване на лицето, кожни обриви, кръвна еозинофилия и в тежки случаи лезии вътрешни органии централен...... Медицинска енциклопедия

- (нематодози) хелминтози, причинени от нематоди, кръгли червеи от клас Nematoda. Сред другите хелминтози, N. имат най-висока стойноств човешката патология повечето от тях са геохелминтиаза (виж Хелминтоза); развитието на техните яйца или ларви... ... Медицинска енциклопедия

инфекциозен епидидимит- Ориз. 1. Уголемяване на левия тестис при овца с инфекциозен епидидимит. Ориз. 1. Уголемяване на левия тестис при овца с инфекциозен епидидимит. инфекциозен епидидимит по овце (Epididymitis infectiosa arietum), хроничен инфекциозен... ... Ветеринарен енциклопедичен речник

Вижте реакция на индиректна хемаглутинация... Голям медицински речник