Диагнозата е най-важната стъпка в лечението на всяко заболяване. В зависимост от правилната диагноза е не само успешното лечение, но и възможността да се предотврати развитието на усложнения и съпътстващи патологии. Какво е серологично изследване? Това е метод за диагностичен анализ на биологична проба от пациент за наличие на антитела и антигени. Тестът ви позволява да идентифицирате десетки заболявания, фазата на заболяването и да наблюдавате лечението.

Защо е предписано изследването?

Този тип медицински изследвания се използват широко в различни области на медицината. Реакцията на фиксиране на комплемента или CFR е насочена към идентифициране на специфични клетки в кръвния серум, антитела, които тялото произвежда за борба с инфекциите и вирусите.

Изосерологичното изследване е насочено към определяне на кръвната група на пациента, Rh фактор и други кръвни параметри.

• Серологичните кръвни тестове се използват в гинекологията за откриване на болести, предавани по полов път. Серологичното титруване се използва и за цялостно изследване на бъдещи майки (токсоплазмоза, ХИВ, сифилис и др.). При регистрация на бременни жени това е задължително изследване.
• В педиатрията серологичните тестове се използват за потвърждаване на диагнозата "детски" заболявания (варицела, рубеола, морбили и др.), Ако симптомите не са изразени и не е възможно да се определи заболяването въз основа на клинични показания.
• Серологичните тестове позволяват на венеролозите бързо и точно да поставят диагноза. При подобни симптомии оплаквания, кръвен тест може да открие антитела срещу сифилис, лямблиоза, уреплазмоза, хламидия, херпес и други заболявания.
• Гастроенеролозите, хепатолозите и специалистите по инфекциозни заболявания използват серологични кръвни тестове за диагностициране на вирусен хепатит.
• Лекарят може да подозира инфекциозно или вирусно заболяване. За потвърждение се използват серологични реакции към специфични антитела в организма. Извършва се анализ за енцефалит, бруцелоза, магарешка кашлица, вирус на денга, вирус на имунна недостатъчност, алергии и др.
• Серологичната диагноза за хоспитализация играе важна роля. Този диагностичен метод може да покаже в какъв стадий на развитие е заболяването и дали е необходима незабавна хоспитализация или е достатъчно амбулаторно лечение.

Като биологичен материалЗа изследването може да се използва проба от слюнка и изпражнения, но най-често се използва венозна кръв на пациента. Тестовете за серологични тестове трябва да се вземат от кубиталната вена в лабораторни условия. Преди да направите теста, трябва да се консултирате с Вашия лекар и да се подготвите.

Подготовка за анализ

Този тип изследвания се извършват както в общински, така и в търговски институции. По-добре е да направите избор в полза на лабораторията, която разполага с най-модерното оборудване и има само положителни отзиви за работата си. За заети пациенти лабораторията може да предостави услуги за вземане на кръв за RBC у дома.

В този случай пациентът не трябва да губи време по пътя и опашките се елиминират.

Подготовката за вземане на венозна кръв включва няколко стъпки: Общи правила. Преди теста не трябва да ядете храна, тоест тестът се приема на празен стомах. Когато дарявате кръв, трябва да сте в състояние на спокойствие и да не се тревожите. Преди процедурата не трябва да се подлагате на други процедури (рентгенови лъчи, ултразвук и др.). Няколко седмици преди вземането на кръвна проба, лекарствата трябва да бъдат преустановени след консултация с лекуващия лекар. Някои препоръки зависят от заболяването, за което се извършва изследването. Например, при изследване за хепатит, 2 дни преди изследването от диетата се изключват мазни храни и алкохол.

Реакция на флуоресценция

Един от видовете серологични реакции е флуоресценцията или RIF. Този метод на изследване се извършва с помощта на реагент, който подчертава желаните антитела в кръвния серум. За извършване на директна серологична реакция или PIF специфичните антитела се маркират с флуоресцентно вещество. Това е най-бързият вид изследване, което се извършва на един етап.

Друг метод, наречен индиректен или RNIF, се извършва на 2 етапа. При първия специфичните клетки (антитела) нямат флуоресцентни етикети, а при втория се използват подходящо маркирани антитела за откриване на комплекса антиген-антитяло. Светещата реакция се появява само след контакт със специфично антитяло. Резултатът от манипулациите се оценява от специално устройство, което оценява интензитета на радиацията, а също така определя формата и размера на изследваните обекти. Инфекциозният агент се определя с 90-95% сигурност в зависимост от вида и стадия на заболяването.

Свързан имуносорбентен анализ

За изследванията ELISA серологичните реакции се провеждат с помощта на уникални стабилни реагенти. Белязаните вещества са прикрепени към специфичен (желан) тип антитяло. В резултат на това серологията осигурява качествена или количествена оценка от кръвната проба на пациента. Ако субстратът няма ясно изразени маркери, резултатът се счита за отрицателен. В случай на качествено изследване, положителен резултат означава само наличие на антитела в биологична проба.

Серодиагностиката с количествено определяне на клетките на антителата дава по-пълна картина. Въз основа на количеството открити клетки лекарят може да каже дали заболяването е в начален стадий, остро или е обостряне на хроничната форма на заболяването. При поставяне на диагнозата се вземат предвид клиничната картина и оплакванията на пациента.

Характеристики на изследването

При изследване за бруцелоза кръвният серум се следи за самозадържане без антиген. Това ви позволява да увеличите надеждността на теста. Резултатът от теста за бруцелоза може да бъде положителен, отрицателен или неизразен, т.е. съмнителен. Ако се получат съмнителни резултати, се препоръчва повторно вземане на кръвни проби. Бруцелозата се диагностицира и въз основа на резултатите от кръвни култури, изследвания на костен мозък и цереброспинална течност.

Предимства и недостатъци на серологията

Диагностиката с помощта на серологични методи се използва широко в съвременната медицина. Този тест е особено подходящ при идентифициране на вирусни и инфекциозни заболявания. Същият тип тестове се използват при географски скрининг и здравни проучвания за предотвратяване на епидемиологични огнища.

Серологичните тестове имат редица предимства.

• Всеки тип серологичен тест има висока надеждност.
• Серологичните тестове се извършват доста бързо. Резултатът от RSC е известен до 24 часа и можете да го получите по интернет, без да излизате от дома си. IN специални случаипри стационарно лечениетестът се провежда в продължение на няколко часа.
• RSC ви позволява да наблюдавате развитието на заболяването и да наблюдавате ефективността на лечението.
• Серологичните методи за изследване са евтини и достъпни за пациентите.

Серологичните тестове също имат някои недостатъци. За да може изследването да предостави най-надеждната информация, кръвният тест трябва да се извърши, като се вземе предвид инкубационният период на заболяването.

Херпес симплекс тип 1 и 2 може да се определи само 2 седмици след инфекцията, а тестването за вируса на имунната недостатъчност се извършва 1, 3 и 6 месеца след контакт с пациента.

Надеждността на изследването може да бъде повлияна от човешки фактори. Ако пациентът пренебрегне правилата за подготовка за изследването или лаборантът направи грешка при обработката на кръвната проба, може да се получи фалшив или съмнителен резултат. Тази ситуация се среща в приблизително 5% от случаите. Като правило, лекуващият лекар, въз основа на клинични показания, лесно изчислява грешката на RSC.

Серологичното кръвно изследване е модерен и надежден начин за идентифициране на такива опасни заболяваниякато ХИВ, хепатит, бруцелоза, полово предавани болести и др. Този раздел от медицината е насочен към изучаване на човешка кръвна плазма и нейните имунологични свойства. Серологичният метод е широко използван, а цената на изследването в частни лаборатории е сравнително ниска. За извършване на анализа се използва модерно оборудване, което минимизира влиянието на човешкия фактор върху резултатите от изследването.

Във връзка с

Тестът на Васерман (RW) е най-популярният имунологичен тест, използван за диагностициране на сифилис от откриването му през 1906 г. RW принадлежи към групата на реакциите на фиксиране на комплемента (FFR) и се основава на способността на кръвния серум на пациент със сифилис да образува комплекс със съответните антигени. Съвременните RSC методи, използвани за диагностициране на сифилис, се различават значително по своите антигени от класическата реакция на Васерман, но терминът „реакция на Васерман“ традиционно се запазва за тях.

Антителата, произведени от имунната система, се появяват в кръвта на заразения човек. Причинителят на заболяването Treponema pallidum съдържа антигена кардиолипин, който предизвиква производството на антитела, открити чрез RW. Положителната реакция на Васерман показва наличието на такива антитела в кръвта на човек и въз основа на това се прави заключение за наличието на заболяването.

Реакцията на хемолиза е индикатор за резултата от изследването в RSC. Реакцията включва два компонента: овчи червени кръвни клетки и хемолитичен серум. Хемолитичният серум се получава чрез имунизиране на заек с овчи червени кръвни клетки. Инактивира се за 30 минути при температура 56°C. Резултатите от RSC се оценяват в зависимост от наличието или отсъствието на хемолиза в епруветките. Наличието на хемолиза се обяснява с факта, че ако в тестовия серум няма сифилитични антитела, тогава реакцията антиген-антитяло не възниква и целият комплемент отива към реакцията на овчи еритроцит-хемолизин. И ако има специфични антитела, комплементът се изразходва напълно за реакцията антиген-антитяло и не настъпва хемолиза.

Всички съставки за реакцията на Васерман се вземат в същия обем - 0,5 или 0,25 ml. За силна фиксация на комплемента върху специфичен комплекс, смес от тест серум, антиген и комплемент се поставя в термостат при температура 37 ° за 45-60 минути. (фаза I реакция), след което се добавя хемолитична система, състояща се от овчи еритроцити и хемолитичен серум (фаза II реакция). След това епруветките отново се поставят в термостат за 30-60 минути, докато настъпи хемолиза в контролата, при която антигенът се заменя с физиологичен разтвор и вместо тест серум, физиологичен разтвор. Антигените за реакцията на Васерман се произвеждат в готов вид, като се посочва титърът и методът на разреждане.

Максималната положителност на реакцията на Васерман обикновено се обозначава с броя на кръстовете: ++++ (рязко положителна реакция) - показва пълно забавяне на хемолизата; +++ (положителна реакция) - съответства на значително забавяне на хемолизата, ++ (слабо положителна реакция) - доказателство за частично забавяне на хемолизата, + (съмнителна реакция) - съответства на леко забавяне на хемолизата. Отрицателният RW се характеризира с пълна хемолиза във всички епруветки.

Въпреки това, понякога са възможни фалшиви положителни резултати - това се дължи на факта, че кардиолипинът се намира в известни количества и в клетките на човешкото тяло. Човешката имунна система не създава антитела срещу „собствения“ кардиолипин, но има изключения от това правило, поради което положителна реакция на Васерман възниква при напълно здрав човек. Особено често това се наблюдава след тежки вирусни и други заболявания - пневмония, малария, чернодробни и кръвни заболявания, по време на бременност, т.е. в моменти на силно отслабване на имунната система.

Ако лекарят подозира, че пациентът има фалшив положителен резултат за реакцията на Васерман, той може да предпише редица допълнителни тестове, които обикновено се използват при диагностицирането на полово предавани болести.

Заболявания и случаи, при които лекарят може да предпише кръвен тест за RW

Провеждане на процедурата за вземане на кръвен тест за RW

Кръвта за RW се дарява само на празен стомах. Последното хранене трябва да бъде не по-късно от 6 часа преди изследването. Медицинският работник сяда пациента или го поставя на дивана и взема 8-10 ml кръв от кубиталната вена.

Ако трябва да се направи анализ на бебе, пробата се взема от черепната или югуларната вена.

Подготовка за кръвен тест за RW

Трябва да спрете да пиете алкохол 1-2 дни преди теста. Също така не се препоръчва да се ядат мазни храни - те могат да изкривят резултата. По време на подготовката за анализа трябва да се въздържате от приема на дигиталисови лекарства.

Противопоказания

Резултатът от анализа ще бъде грешен, ако:

• лицето е болно от инфекциозно заболяване или току-що се е възстановило от него,
• в жена период на менструация,
• бременна през последните седмици преди раждането,
• първите 10 дни след раждането,
• първите 10 дни от живота на бебето.

При първичен сифилис реакцията на Васерман става положителна на 6-8 седмица от заболяването (в 90% от случаите) и се отбелязва следната динамика:

• през първите 15-17 дни след инфекцията реакцията при повечето пациенти обикновено е отрицателна;
• на 5-6-та седмица на заболяването при приблизително 1/4 от пациентите реакцията става положителна;
• на 7-8-та седмица на заболяването, RW става положителен в мнозинството.

При вторичен сифилис RW винаги е положителен. Заедно с други серологични реакции (RPGA, ELISA, RIF) позволява не само да се открие наличието на патогена, но и да се установи приблизителната продължителност на инфекцията.

С развитието на сифилитична инфекция през 4-та седмица от заболяването, след началото на първичния сифилом, реакцията на Васерман преминава от отрицателна към положителна, оставайки така както във вторичния пресен, така и във вторичния рецидивиращ период на сифилис. В латентния вторичен период и без лечение RW може да стане отрицателен, така че когато настъпи клиничен рецидив на сифилис, той отново да стане положителен. Следователно, в латентния период на сифилис, отрицателната реакция на Васерман не показва неговото отсъствие или излекуване, а служи само като благоприятен прогностичен симптом.

При активни лезии на третичния период на сифилис положителният RW се среща при приблизително 3/4 от случаите на заболяването. Когато активните прояви на третичния период на сифилис изчезнат, той често се превръща в отрицателен. В този случай отрицателната реакция на Васерман при пациенти не означава, че нямат сифилитична инфекция.

При ранен вроден сифилис RW е положителен в почти всички случаи и е ценен метод за верификация на заболяването. При късен вроден сифилис неговите резултати съответстват на тези, получени в третичния период на придобития сифилис.

Изследването на реакцията на Васерман в кръвта на пациенти със сифилис, подложени на лечение, е от голямо практическо значение. При някои пациенти, въпреки енергичната антисифилитична терапия, реакцията на Васерман не се превръща в отрицателна - това е така нареченият серорезистентен сифилис. В този случай няма смисъл да се провежда безкрайна антисифилитична терапия, постигайки прехода на положителен RW към отрицателен.

От горното следва, че отрицателната реакция на Васерман не винаги е признак за липса на сифилитична инфекция в организма.

Положителна реакция на Васерман е възможна при хора с редица други заболявания и състояния, които не са свързани със сифилис:

Всичко по-горе показва, че положителният резултат от реакцията на Васерман все още не е безусловно доказателство за наличието на сифилитична инфекция.

Възстановяване след тестване

След вземане на кръвен тест лекарите препоръчват правилното и балансирана диета, както и колкото се може повече течност. Можете да си позволите топъл чай и шоколад. Ще бъде полезно да се въздържате от физическа активност и при никакви обстоятелства да не пиете алкохол.

Норми

Обикновено трябва да се наблюдава хемолиза в кръвта - това се счита за отрицателна реакция към сифилис (реакцията на Васерман е отрицателна). При липса на хемолиза се оценява степента на реакцията, която зависи от стадия на заболяването (маркирани със знаци "+"). Все пак трябва да знаете, че при 3-5% от напълно здрави хора реакцията може да е фалшиво положителна. В същото време, през първите 15-17 дни след инфекцията, реакцията при болни хора може да бъде фалшиво отрицателна.

За да се установи точна диагноза, пациентът се изследва цялостно. Общ анализкръвният тест не е много информативен, не се използва за диагностициране на полово предавани инфекции.

Видове изследвания и биоматериали за анализ

За идентифициране на заболяването се използват различни техники и биоматериали. В ранните етапи сифилисът се определя с помощта на бактериоскопско изследване. Пробите се изследват под микроскоп. Устройството ви позволява да откривате щамове на патогени. По-късно се извършват серологични изследвания. Благодарение на тях в пробите се откриват антигени и антитела на болестта.

Методите за определяне на полово предавани инфекции са разделени на 2 категории:

• Директен, разкриващ патоген. Те включват: микроскопия в тъмно поле, RIT анализ (инфекция на зайци с биоматериал за изследване), PCR метод - полимеразна верижна реакция (с негова помощ се откриват генетичните елементи на патогена).
• Индиректните (серологични) тестове позволяват откриване на антитела срещу патогена. Те се произвеждат от имунната система като отговор на инфекция.

Серологичните техники са разделени на 2 категории: трепонемни и нетрепонемни.

Нетрепонемни, включително: тест за толуидиново червено, RSC анализ, RPR тест, кръвен тест по експресния RMP метод.

Treponemal, съчетаващ: имуноблотинг, RSK тест, RIT анализ, RIF изследване, RPGA тест, ELISA анализ.

Информационното съдържание на тестовете за инфекция варира. Най-често се правят основните видове тестове за сифилис, които включват серологични методи. За пациентите, които се нуждаят от преглед, лекарят предписва изследвания индивидуално.

Биоматериал за изследване

За идентифициране на Treponema pallidum, патоген, който изглежда като спирала и причинява сифилис, се вземат проби:

• венозна кръв;
• цереброспинална течност (секрет от гръбначния канал);
• съдържанието на лимфните възли;
• язвена тъкан.

Ако е необходимо да се проведат тестове за откриване на сифилис, кръвта се дарява не само от кубиталната вена, но и от пръста. Изборът на биоматериал и методът на изследване се влияят от тежестта на инфекцията и оборудването на диагностичния център.

Директно изследване

Убедително доказателство за сифилис е идентифицирането на инфекциозни агенти под микроскоп. По този начин патогенът се открива при 8 от 10 субекта.Отрицателен резултат при останалите 2 пациенти не означава, че те не са заразени.

Изследването се извършва в първичния и вторичния стадий (етапи) на заболяването, които се характеризират с появата на кожни обриви и сифиломи (язви) по кожата. епителни тъканиили лигавици. Патогените, които причиняват болести, предавани по полов път, се откриват в секрета от лезиите.

По-точно, сложен тест, наречен RIF, имунофлуоресцентна реакция, може да открие трепонема. Пробата за изследване е предварително обработена с флуоресцентни антитела. Съединенията, които могат да светят, се слепват с бактериите. Изследвайки проби под микроскоп, в случай на инфекция, лаборантът вижда искрящи патогени.

Тестът се използва за ранна диагностика на заболяването. Колкото по-дълго продължава заболяването, толкова по-ниска е чувствителността на изследователските методи. Освен това пада след третиране на обриви и язви с антисептици и при пациенти, преминали лечение. Понякога тестът дава фалшиво отрицателни и фалшиво положителни резултати.

RIT анализът е много точен метод за откриване на сифилис. Когато провеждате тест, трябва да чакате дълго време за резултати. Докато заразеният заек покаже признаци на инфекция. Тестът се използва много рядко, въпреки факта, че е изключително точен.

С помощта на полимеразна верижна реакция за сифилис се определят генетичните елементи на патогените. Единственият недостатък на PCR е високата цена.

Нетрепонемни тестове

Такива кръвни тестове помагат да се идентифицират антитела, които се появяват в отговор на кардиолипин, съединение, свързано с общата структура на мембраните на патогените.

Реакция на Васерман (RW или RW)

Най-известният тест за сифилис е реакцията на Васерман. RV е включен в категорията на реакциите на свързване на комплемента (CFR). Новите RSC методи имат значителни разлики от традиционните RW. Но те се обозначават, както и преди, с понятието "реакция на Васерман".

Имунната система синтезира антитела (маркери) в отговор на трепонемна инвазия. Те се откриват чрез кръвен тест за сифилис чрез реакцията на Васерман. Положителният резултат от RW потвърждава, че субектът е заразен.

Реакция на хемолиза – индекс на RT анализ. С него взаимодействат две вещества: хемолитичен серум и овчи червени кръвни клетки. Серумът се получава чрез имунизиране на заек с овчи червени кръвни клетки. Активността на биологичната течност се намалява при нагряване.

Индикаторите на RV зависят от това дали е настъпила хемолиза или не. В проба без маркери настъпва хемолиза. В този случай реакцията към антигените е невъзможна. Комплементът се изразходва за взаимодействие с овчи червени кръвни клетки. Когато в пробата има маркери, комплиментът реагира с антигените. В този случай не настъпва хемолиза.

Компонентите за RW се измерват в равни количества. Пробата, съдържаща серум, антиген и комплемент, се нагрява. Към пробата се добавят агнешки еритроцити и серум. Съхранявайте при температура 37 градуса до хемолиза на контролната проба, която съдържа физиологичен разтвор вместо антигена.

За провеждане на RT се използват готови антигени. Титрите и технологията за разреждането им са посочени на опаковките. Положителният RW резултат се обозначава с кръстове. Готови резултатитестовете се обозначават, както следва:

• ++++ – максимално положителен (забавена хемолиза);
• +++ – положителен (хемолизата е значително забавена);
• ++ – слабо положителен (хемолизата е частично забавена);
• + – съмнително (хемолизата е леко забавена).

При отрицателна RT, хемолизата беше напълно постигната във всички проби. Но в някои случаи се получават фалшиви положителни данни. Това се случва, когато кардиолипинът навлезе в клетките. Защитни механизмине произвеждат маркери за „нативен“ кардиолипин.

Понякога обаче възникват изключителни ситуации. Положителният RW се открива при неинфектирани хора. Това е възможно, ако пациентът е страдал сериозно заболяванепричинени от вируси (пневмония, малария, туберкулоза, чернодробни и кръвни патологии). Положителна RV се среща при бременни жени. Това се дължи на факта, че имунната система е прекомерно отслабена.

Ако има подозрение, че резултатът от теста за сифилис е фалшиво положителен, пациентът се изследва допълнително. Проблемът е, че тази инфекция не може да бъде открита с помощта на един клиничен лабораторен тест. Някои изследвания дават неверни показатели, които могат да бъдат както отрицателни, така и положителни.

Подробният анализ за сифилис помага да се получат надеждни данни. Благодарение на него те инсталират истинска диагноза: докажете инфекция или я изключете. В допълнение, разширеният тест ви позволява да спрете развитието на инфекцията и да премахнете ненужната терапия.

RSK и RMP

При тестване за сифилис традиционната реакция на Васерман се използва изключително рядко. Вместо това се използва методът RSK. Тестът дава положителен резултат 2 месеца след заразяването. При вторичната форма на заболяването той е положителен в почти 100% от случаите.

Методът на микропреципитация (MPM) е изследване с механизъм, подобен на реакцията на Васерман. Техниката е лесна за изпълнение. Извършва се бързо. За изследване за сифилис в този случай се взема кръв от пръст. Техниката дава положителен резултат 30 дни след появата на сифилома. Не са изключени грешки по време на изследването. Фалшиво положителни данни се получават на фона на: обострени инфекции, пневмония, инфаркт, инсулт, интоксикация.

Следното води до грешни тестове:

След откриване на съмнителен тест за сифилис се правят трепонемни изследвания. Те помагат да се изясни диагнозата.

RPR и тест с толуидиново червено

Методът на плазмения реагин (RPR) е друг аналог на реакцията на Васерман. Използва се при необходимост:

• преглед на асимптоматични лица;
• потвърждаване на сифилис;
• преглед на дарената кръв.

Тестът с толуидиново червено, подобно на RPR, се извършва за оценка на динамиката лекарствена терапия. Техните показатели спадат, когато болестта отстъпи, и се увеличават, когато патологията се повтори.

Нетрепонемните тестове показват колко е възстановен пациентът. Получаването на отрицателни резултати за сифилис показва, че болестта е напълно оттеглена. Първият преглед се прави 3 месеца след курса на терапията.

Трепонемни изследвания

Извършват се високопродуктивни тестове с помощта на трепонемни антигени. Те се извършват, когато:

• получен е положителен резултат с метода RMP;
• необходимо е да се разпознаят грешни данни, произтичащи от скринингови тестове;
• Подозрение за развитие на сифилис;
• необходимо е да се диагностицира скрита инфекция;
• е необходимо да се проведе ретроспективна диагностика.

RIF и RIT тестове

При много лекувани пациенти трепонемното изследване на проби дава положителни резултати за дълго време. По тях не може да се съди за степента на ефективност на лечението. RIT и RIF са свръхчувствителни тестове. Благодарение на тях се получават надеждни данни. Тези анализи са трудоемки, изискват значително време и съвременно оборудване. Те могат да се извършват от квалифицирани здравни работници.

При извършване на RIF тест за сифилис положителни данни се получават 2 месеца след инфекцията. Отрицателните параметри потвърждават, че субектът е здрав. Положителен - предполага, че човекът е заразен.

RIT се извършва, когато реакцията на микропреципитация е положителна. Този кръвен тест за сифилис помага да се отхвърли или потвърди наличието на инфекция. Тестът е свръхчувствителен, той точно показва дали пациентът е заразен или здрав. Но изследването дава надеждни данни само 3 месеца след като трепонемите попаднат в тялото.

Имуноблотинг метод

Свръхпрецизните тестове включват имуноблотинг. Този кръвен тест рядко се прави за сифилис. Използва се при изследване на новородени. Не е подходящ за бърз тест. Положителните резултати се получават със закъснение. Те се получават много по-рано чрез метода на микропреципитацията.

ELISA и RPGA

Информативните свръхпрецизни методи за изследване включват тестове ELISA и RPGA. С тяхна помощ се извършва бърза диагностика. Лаборантите правят огромен брой такива тестове. Благодарение на тях е възможно да се монтират точна диагноза.

Тестът RPGA за сифилис е положителен 30 дни след проникването на патогена в тялото. Използва се за диагностициране на първичната инфекция при поява на язви и обриви.

Благодарение на него е възможно да се идентифицират напреднали, тайно протичащи, както и вродени форми на патология. Но се провежда заедно с нетрепонемни и трепонемни тестове. Цялостната диагностика гарантира надеждността на резултатите. Тройното изследване доказва с точност наличието или липсата на полово предавана инфекция.

Положителната реакция продължава през цялото време голям сегментвреме. Поради тази причина изследването не се използва за оценка на ефективността на лечението.

ELISA тестът е положителен 21 дни след заразяването. Тестът понякога дава грешни резултати. Те се появяват при системни патологии и нарушени метаболитни процеси. Тяхната ефективност е под въпрос при дете, родено от заразена майка.

Грешките, получени при серологичните методи на изследване, станаха причина за откриването на прогресивни диагностични методи. Газовата хроматография и масспектрометрията не осигуряват фалшиви резултати. Единствената пречка за масовото им използване е високата им цена.

Алгоритъм за диагностика

• Когато сифилисът е в първична фаза (до 60 дни от момента на заразяването), патогенът се търси на тъмен фон или се използват флуоресцентни антитела за откриването им.
• Ако патологията е в първична, вторична или латентна форма, се използват RMP и ELISA. RPGA кръвен тест за сифилис помага да се потвърдят резултатите.
• В случай на рецидив на вторична инфекция се анализира отделянето на язви и обриви. Патогените се отстраняват от пробите и се изследват с помощта на микроскопия.
• Когато заболяването навлезе в третична фаза, 1/3 от пациентите имат отрицателен RMP. В същото време резултатите от ELISA и RPGA са положителни. Те обаче не винаги показват третичния период, но потвърждават, че лицето преди това е претърпяло инфекция. Слабо положителен тест е доказателство за пълно излекуване, а не за развитие на третична фаза.
• За потвърждаване на вроден сифилис се вземат кръвни тестове от майката и бебето. Сравнете данните от RMP тестове. Взема се предвид, че ELISA и RPGA на бебето са положителни. Диагнозата се потвърждава с помощта на техниката на имуноблотинг.

Сифилисът, както всяка системна патология, засяга цялото тяло. Следователно, изследването за него се провежда по време на бременност, преди аборт. Пациентите се подлагат на RMP, ELISA, RPGA.

Как да се тествате

Венеролог изпраща пациенти за анализ. Частни лаборатории правят анонимни изследвания за сифилис по желание на клиента. За да направите теста, не е необходимо направление от лекар.

Правила за провеждане на изследването:

• Кръвта се взема в лабораторията сутрин на гладно (изяжда се след процедурата). Преди теста ви е позволено да пиете само вода.
• 2 дни преди изследването е забранено да се ядат мазни храни и да се пие алкохол.
• Кръвта се взема от пръст или вена.
• Колко време продължава изследването? Обикновено не повече от ден. Тълкуването на тестовете за сифилис се получава от лаборантите или лекуващия лекар.
• Колко време е валиден тестът? След 3 месеца резултатите от теста стават невалидни. Отново се дават под наем.

Ако преписът от анализа показва, че тестът е положителен, трябва да посетите венеролог, който ще предпише допълнителен преглед, за да потвърди точно диагнозата и да избере необходимия режим на лечение.

Изследване на съдържанието на гръбначния стълб

Диагнозата невросифилис се поставя след изследване на цереброспиналната течност. Този анализ се прави:

• хора с латентна форма на инфекция;
• при симптоми на заболявания на нервната система;
• асимптоматичен, напреднал невросифилис;
• възстановени пациенти с положителни серологични реакции.

Лекарят дава направление за изследване на цереброспиналната течност. Пункция се взема от гръбначния канал в 2 тръби. Пункцията се смазва с йод и се покрива със стерилна салфетка. След процедурата пациентът остава на легло в продължение на 2 дни.

В 1 проба се определя количеството протеин, клетки и следи от менингит. Във втората проба се изчисляват антитела срещу причинителя на сифилис. За целта те правят следните тестове: RV, RMP, RIF и RIBT.

В зависимост от това колко нарушения са открити, има 4 вида цереброспинална течност. Всеки от тях показва специфично увреждане на нервната система. Лекарят диагностицира:

В допълнение, резултатите от теста се използват за преценка на възстановяването на пациента.

Тълкуването на тестовете е задача на лекаря. Само той може да направи правилните заключения, ако е необходимо, да предпише допълнителни изследвания и да постави точна диагноза. Не трябва да правите самодиагностика в случай на опасна системна патология. Грешка в диагнозата води до сериозни последствия.

Реакция на свързване на комплемента (CFR)

Реакцията на свързване на комплемента (FFR) се провежда в две фази: в първата фаза антигенът се комбинира с тестовия серум, в който се предполага наличието на антитела, добавя се комплемент и се инкубира в термостат за 30 минути.

Втора фаза: добавете хемолитична система (овчи червени кръвни клетки + хемолитичен серум). След инкубация в термостат за 30 минути, резултатът се взема предвид.

При положителен RSC, серумните антитела, комбинирайки се с антигена, образуват имунен комплекс, който прикрепя комплемента, и няма да настъпи хемолиза. Ако реакцията е отрицателна (няма антитела в тестовия серум), комплементът ще остане свободен и ще настъпи хемолиза.

RSC се използва за серологична диагностика на сифилис, гонорея, тиф и други заболявания.

Имунните реакции, използващи маркирани антигени и антитела, се основават на факта, че една от съставките, участващи в реакцията (антигени или антитела), се комбинира с някакъв вид етикет, който може лесно да бъде открит. Като етикети се използват флуорохроми (RIF), ензими (ELISA), радиоизотопи (RIA) и електронно-плътни съединения (IEM).

Ензимно-свързаният имуносорбентен анализ (ELISA), подобно на други имунни тестове, се използва: 1) за откриване на неизвестен антиген с помощта на известни антитела или 2) за откриване на антитела в кръвен серум с помощта на известен антиген. Особеността на реакцията е, че известна реакционна съставка се комбинира с ензим (например пероксидаза). Наличието на ензима се определя с помощта на субстрат, който се оцветява, когато ензимът действа. Най-широко използваният е твърдофазният ELISA.

1) Откриване на антиген. Първият етап е адсорбцията на специфични антитела върху твърдата фаза, която се използва като повърхности от полистирен или поливинилхлорид на ямките на пластмасови панели. Вторият етап е добавянето на тестовия материал, в който се предполага наличието на антиген. Антигенът се свързва с антитела. След това ямките се измиват. Третият етап е добавянето на специфичен серум, съдържащ антитела срещу даден антиген, белязани с ензим. Маркираните антитела се прикрепват към антигени и излишъкът се отстранява чрез промиване. По този начин, ако тестовият материал съдържа антигени, върху повърхността на твърдата фаза се образува комплекс антитяло-антиген-антитяло, белязан с ензим. За откриване на ензима се добавя субстрат. За пероксидазата субстратът е ортофенилендиамин, смесен с H 2 O 2 в буферен разтвор. Под действието на ензима се образуват продукти с кафяв цвят.

2) Откриване на антитела. Първият етап е адсорбцията на специфични антигени по стените на ямките. Обикновено в търговските системи за тестване антигените вече са адсорбирани на повърхността на ямките. Вторият етап е добавянето на тест серум. При наличие на антитела се образува комплекс антиген-антитяло. Третият етап - след промиване в ямките се добавят антиглобулинови антитела (антитела срещу човешки глобулини), маркирани с ензим. Резултатите от реакцията се оценяват, както е описано по-горе.

Очевидно положителните и очевидно отрицателните проби, които се предлагат в търговските системи, се използват като контроли.

ELISA се използва за диагностициране на много инфекциозни заболявания, по-специално HIV инфекция и вирусен хепатит.

Имуноблотингът е вид ELISA (комбинация от електрофореза и ELISA). Биополимерите, като антигените на човешкия имунодефицитен вирус, се разделят с помощта на гел електрофореза. След това отделените молекули се пренасят върху повърхността на нитроцелулозата в същия ред, в който са били в гела. Процесът на прехвърляне се нарича петно, а полученият отпечатък е петно. Този отпечатък се влияе от тестовия серум. След това се добавя белязан с пероксидаза античовешки глобулинов серум, след това субстратът, който става кафяв под действието на ензима. Кафяви ивици се образуват на места, където антителата са се комбинирали с антигени. Методът ви позволява да откривате антитела към отделни вирусни антигени.

Радиоимуноанализ (RIA). Методът ви позволява да определите количеството антиген в тестовата проба. Първо към имунния серум се добавя материал, за който се предполага, че съдържа антиген, след което се добавя известен антиген, маркиран с радиоизотоп, например I 125. В резултат на това откриваемият (небелязан) и известен белязан антиген се свързва с ограничено количество антитела. Тъй като белязаният антиген се добавя в определена доза, е възможно да се определи коя част от него е свързана с антителата и коя част е останала свободна поради конкуренция с небелязания антиген и е била отстранена. Количеството белязан антиген, свързан с антителата, се определя с помощта на брояч. Тя е обратно пропорционална на количеството открит антиген.

Имуноелектронна микроскопия (IEM). Антиген, например грипен вирус, е прикрепен към специфичен антисерум, белязан с електронно плътно вещество. Металосъдържащи протеини (феритин, хемоцианин) или колоидно злато се използват като етикети. По време на микроскопията се правят снимки в електронен микроскоп, в които се виждат вириони на грип с прикрепени към тях тъмни точки - молекули на белязани антитела.

Придобит имунитет, неговата разлика от наследствен (специфичен, вроден). Видове придобит имунитет.

Задача.Тригодишното дете на семейството - Валери, се разболя от дифтерия. Други членове на семейството не са се разболявали, а майката е имала дифтерия в детството, а бащата е ваксиниран с дифтериен токсоид. По-голяма сестраНаташа, на пет години, не беше ваксинирана с дифтериен токсоид по едно време поради медицински противопоказания, така че трябваше да се подложи на спешна профилактика с помощта на антидифтериен антитоксичен серум. По-малкият брат Виталий, на три месеца, не се разболя, въпреки че не беше ваксиниран с нищо. В къщата има котка и куче, не са болни. За всеки член на семейството и за животни посочете типа имунитет, който ги е предпазил от заболяване.

Какво е антиген? Какви вещества могат да бъдат антигени? Пълноценни антигени и хаптени, как се различават един от друг? Структура на антигена. Как се нарича частта от молекулата на антигена, която определя неговата специфичност? Назовете антигените, които познавате. Какво представляват автоантигените? Антигенна структура на микробна клетка. Флагеларни и соматични антигени; локализация, буквено обозначение, химическа природа, връзка с температурата, метод на приготвяне, практическа употреба. Анатоксин, неговите свойства, приложение, производство. Каква тъкан изгражда имунната система на тялото? Посочете централните и периферните органи на човешката имунна система. Опишете процеса на формиране на хуморален и клетъчен имунен отговор. Посочете клетките, които улавят и усвояват антигена; клетки, които взаимодействат при формирането на хуморален имунитет, клетъчен имунитет; клетки, които се трансформират и стават плазмени клетки, които произвеждат антитела; клетки, които стимулират този процес; клетки, които потискат имунния отговор; клетки, които убиват туморни клетки и инфектирани с вируси клетки. Какво представляват антителата? Как да получите имунен серум? Как да получите серум, който да неутрализира тетаничния токсин? Срещу какви антигени се образуват антитоксини, аглутинини и хемолизини? Какви антитела се образуват при въвеждане на дифтериен токсоид в тялото? дифтерийни бактерии? Химическа природа и структура на антителата. Какво е активното място на имуноглобулина? Избройте класовете имуноглобулини и техните свойства. Посочете класа имуноглобулини, които могат да проникнат през плацентата. Към кой клас принадлежат секреторните имуноглобулини? Динамика на натрупване на антитела. Как се различава вторичният имунен отговор от първичния? Как знанията за динамиката на имунния отговор се използват в практическата медицина? Какво представляват имунните реакции, какъв е техният механизъм, фази на реакцията. В кои 2 посоки се използват имунните реакции? Избройте имунните реакции.

Задача.Заменете липсващите думи с „анатоксин“ или „антитоксин“: _________ е антиген, _________ е антитяло, __________ създава активен имунитет, когато се въведе в тялото, __________ създава пасивен имунитет, когато се въведе в тялото, __________ се получава чрез имунизиране на животни, ___________ се получава от токсин при излагане на формалин и топлина, ___________ неутрализира токсините, __________ предизвиква образуването на антитела в тялото.

Реакция на аглутинация: какво е аглутинация, какво е антиген, какво е антитяло; методи за настройка, какви контроли се задават и защо; как трябва да изглеждат контролите. Аглутиниращи серуми, какво съдържат, как се получават, за какво се използват; Какъв е титърът на аглутиниращия серум? Индиректна (пасивна) реакция на хемаглутинация: какво служи като антиген в тази реакция, как се получава, механизмът на реакцията. Какво представлява еритроцитният диагностикум? Какво представлява еритроцитният диагностикум с антитела? Реакции на утаяване: какво е утаяване, какво служи като антиген; Как да получите утаяващ серум? Какъв е титърът на преципитиращия серумен? Методи на настройка, практическо приложение.

Реакция на свързване на комплемента (CFR): принцип на CFR; какво се образува, когато имунният серум взаимодейства със специфичен антиген; какво се случва с комплемента, ако той присъства по време на това взаимодействие? Каква е съдбата на комплемента, ако няма специфичен афинитет между антигена и антителата? Ако крайният резултат от RSC е хемолиза, това означава ли положителен или отрицателен резултат? Методика за създаване на RSC. Защо тест серумът трябва да бъде инактивиран? Хемолитичен серум: какво съдържа, как се получава, какъв е титърът и как се определя? Допълнение: химическа природа, връзка с висока температура, къде се съдържа? Как комплементът може да бъде унищожен? Какво на практика се използва като допълнение?

Задача.Петно от кръв е открито по дрехите на обвинения в убийство. По каква реакция може да се определи дали е човешка кръв; какво в тази реакция ще бъде антиген и какво ще бъдат антитела; Какъв диагностичен препарат трябва да има в лабораторията за тази реакция, как се приготвя?

Задача.Как да използвате реакцията на утаяване, за да определите дали проба от месо, доставена за анализ, е голяма говедаили конско месо; какви диагностични лекарства са необходими?

Реакция на утаяване в агар гел, методи на настройка, практическо приложение.

Какво показва серологичният кръвен тест?

Какво показва серологичният кръвен тест? Диагностичните мерки са най-важният етап в лечението на всяко заболяване. Успехът на лечението зависи не само от предписаните лекарства, но и до голяма степен от това колко правилно е поставена диагнозата.

В допълнение, диагностиката ви позволява да предотвратите усложнения и съпътстващи заболявания. С помощта на серологичен тест на кръвта на пациента се открива наличието на антитела и антигени. Проучването помага да се открият много заболявания, да се определи тяхната фаза и да се следи напредъкът на лечението.

Какво е серология?

Серологията е клон на имунологията, който изучава реакциите на антигени към антитела. Този раздел на медицината се занимава с изследване на кръвната плазма и нейните имунологични характеристики.

Днес серологичният кръвен тест за антитела е надежден начин за откриване на човешки имунодефицитен вирус, хепатит, бруцелоза, полово предавани болести и други животозастрашаващи заболявания. Нека да разберем в какви случаи се предписва.

Показания за употреба

Необходим е серологичен кръвен тест за идентифициране на причинителя на заболяването, ако е трудно да се постави диагноза.

За да се извърши тази реакция, антигените на патогените се въвеждат в плазмата и след това протичащият процес се изследва от лаборант. Или изпълнявайте обратна реакция: В заразена кръвПрилагат се антитела, за да се определи специфичната идентичност на патогена.

Обхват на приложение

Това изследване се използва в различни индустриилекарство. Тази реакция идентифицира специфични клетки и антитела, произведени от тялото за борба с инфекциите и вирусите.

В допълнение, кръвната група на човек се определя чрез серологичен метод.

Подобен серологичен кръвен тест се използва в гинекологията за диагностициране на полово предавани болести. Този метод се използва и за цялостни изследвания на бременни жени (откриване на токсоплазмоза, ХИВ, сифилис и др.). Преминаването на този тест е задължително при регистрация в предродилна клиника.

При деца се използва серологична реакция за потвърждаване на диагнозата на така наречените „детски“ заболявания (варицела, морбили, рубеола и др.), Ако симптомите нямат изразени прояви и е невъзможно да се идентифицира заболяването чрез анализ на клинични показания .

Откриване на полово предавани болести

За венеролозите това изследване е наистина незаменимо и ви позволява да поставите диагноза много точно.

При замъглена клинична картина, серологичен кръвен тест за сифилис, лямблиоза, уреаплазмоза, хламидия, херпес и други заболявания може бързо да открие наличието на антитела.

Вирусни и инфекциозни заболявания

Серологичният анализ се използва активно от гастроентеролози, хепатолози и специалисти по инфекциозни заболявания за диагностициране на вирусен хепатит.

Дешифрирането на серологичен кръвен тест дава възможност да се определи стадият на заболяването и да се отговори на въпроса колко е необходима хоспитализация в момента. Как да се подготвим правилно?

Подготовка за теста

Серологичните кръвни тестове се правят както в обществени, така и в търговски клиники. Предпочитание трябва да се даде на лаборатория с модерно оборудване и квалифициран персонал.

Биологичните проби за изследване могат да бъдат слюнка и изпражнения, но в повечето случаи се използва венозна кръв на пациента. Кръв за серологичен тест се взема от кубиталната вена в лаборатория. Преди да вземете теста, трябва да се консултирате с Вашия лекар относно подготовката за тази процедура.

За да се подготвите за серологичен тест, трябва да следвате няколко прости правила.

Кръвта се дарява в спокойно състояние преди хранене, тоест на празен стомах. Преди това не трябва да се подлагате на други изследвания, като рентгенови лъчи, ултразвук и др.

Необходимо е да се избягва приема на антибактериални и някои други лекарства няколко седмици преди кръводаряване. Определени препоръки в този случай зависят от заболяването, за което се прави изследването. Например, тестът за хепатит включва елиминиране на мазни храни и алкохол 48 часа преди процедурата.

Реакция на флуоресценция

Сред видовете серологични реакции има флуоресцентна реакция. Тази техника използва реагент, който осветява антителата в кръвния серум.

Създаването на директна серологична реакция включва маркиране на специфични антитела с флуоресцентно вещество. Тази реакция е най-бързата и се извършва на един етап.

Друг вариант за провеждане на такъв анализ се нарича индиректен или RNIF. Провежда се на два етапа. В първия етап антителата не се маркират с флуоресцентни етикети, а във втория се използват подходящо белязани антитела за идентифициране на антигени и антитела. Сиянието се появява само след свързване със специфично антитяло.

Какво показва серологичният кръвен тест? Резултатът от цялата процедура се оценява от специално устройство, което анализира силата на излъчването и разкрива формата и размера на обекта, който се изследва. Причинителите на инфекциозните заболявания се откриват с резултат, чиято достоверност е %, в зависимост от вида и стадия на патологията.

Свързан имуносорбентен анализ

Тези типове серологично изследване използват уникални, стабилни реагенти. Маркираните вещества изглежда се придържат към желаните антитела. В резултат на това получаваме качествен или количествен резултат.

Ако не се открият изразени маркери, резултатът ще се счита за отрицателен. Ако по време на качествено изследване се открие наличие на антитела в биологични проби, резултатът от теста се счита за положителен. Чрез количествено определяне на клетките анализът дава по-точен резултат.

Анализирайки показателите за анализ (например сумата от идентифицирани клетки), специалистът определя дали заболяването е в начален стадий, в остър стадий или дали хроничната форма на патологията се е влошила. За да постави диагноза, лекарят взема предвид не само данните от серологичното изследване, но и клиничната картина на заболяването.

Характеристики на този тест

Извършването на този анализ не винаги е в състояние да осигури 100% увереност, че определено заболяване е открито. Случва се резултатите да са двусмислени и да са необходими други процедури.

Например, по време на тест за бруцелоза, кръвният серум се контролира за самозадържане без антиген. Това значително повишава надеждността на тестването. Тестът за бруцелоза може да бъде положителен или отрицателен и може също да предизвика съмнения.

Ако получите съмнителни резултати, които нямат недвусмислено тълкуване, препоръчително е да направите теста отново. В допълнение, бруцелозата може да бъде открита чрез кръвни култури, изследване Костен мозъки цереброспинална течност.

Предимства на серологичен кръвен тест

Диагностичните техники, използващи серологични реакции, се използват широко в съвременната медицинска практика. Това се прави особено често при определяне на вирусни и инфекциозни патологии.

Същите тестове се използват по време на географски скрининг и медицински преглед за предотвратяване на епидемиологичното разпространение на инфекцията.

Предимствата на метода включват:

• Високо ниво на увереност.
• Бърза реакция и резултати. Резултатите от RSC са известни до 24 часа. В специална ситуация, в болнична обстановка, анализът ще бъде готов след няколко часа.
• Проследяване на развитието на заболяването и ефективността на терапията.
• Ниска цена и достъпност за пациентите.

Недостатъци на метода

Въпреки това, серологичните изследвания също имат своите недостатъци.

Те включват факта, че анализът трябва да вземе предвид инкубационен периодзаболявания, за да се получи по-достоверна картина.

Например определението херпес симплекспървият или вторият тип е възможен само след 14 дни от момента на заразяването. Анализът за наличие на вируса на имунната недостатъчност се извършва 30 дни, 90 дни и шест месеца след контакт със заразен човек.

Разбира се, надеждността на резултатите може да бъде повлияна и от човешкия фактор: пренебрегване на правилата за подготовка за вземане на кръв или грешка, допусната от лабораторния асистент при провеждане на реакцията.

Според статистиката в 5% от случаите може да се получи грешен резултат. Опитен лекар, когато преглежда пациент, след като е проучил клиничната картина, в повечето случаи може да изчисли допуснатата грешка.

Какви кръвни тестове се вземат за сифилис: RW, RPGA, ELISA, VDRL, RPR, RIBT, тълкуване на резултатите от теста

Сифилисът е инфекциозно заболяване, причинено от спирохета Treponema pallidum, склонно към прогресиращо хронично протичане, с ясна периодизация на клиничните симптоми.

Преобладаването на половия път над контактното и трансплацентарното предаване нарежда това заболяване сред полово предаваните болести (ППБ, ППИ). В допълнение към тези методи за предаване на инфекцията, специална роля играе изкуственият път (от латински "artificio" - изкуствено създаден).

Характерно е за лечебни заведения, прилагани предимно в болнична обстановка. Заразяването става чрез кръвопреливане, различни хирургични операции, инвазивни диагностични методи.

Въпреки карантината на дарената кръв, проблемът с идентифицирането на сифилис при донори различни етапиболестта все още е актуална.

Следователно диагностичните мерки за сифилис изискват стандартизация, въвеждане на нови чувствителни и информативни методи за идентификация, както и минимизиране на грешките и неправилното тълкуване на резултатите от теста.

Класификация на лабораторните диагностични методи

Диагнозата сифилис има някои особености и се различава от диагнозата на други бактериални инфекции. Сложната структура и антигенните свойства на Treponema pallidum причиняват грешки при интерпретацията на резултатите от серологичните реакции.

Има 3 основни групи пациенти, на които се предлага кръвен тест за сифилис:

1. 1 Скрининг и медицински преглед на групи от населението (включително бременност, регистрация в предродилна клиника, заетост и регистрация на медицински картон и т.н.).
2. 2 Скрининг в рискови групи (незащитен секс с лице, заразено със сифилис, хора след принудителен сексуален контакт, заразени с ХИВ и т.н.).
3. 3 Лица със симптоми на заболяването или лица със съмнение за сифилитична инфекция.

всичко лабораторни методиусловно се разделят на преки и непреки.

Директни методи

1. 1 Идентифициране на Treponema pallidum в тъмно поле (микроскопия в тъмно поле).
2. 2 Инфекция на експериментални животни (култивиране в лабораторни животни).
3. 3 PCR (полимеразна верижна реакция).
4. 4 ДНК сонда или хибридизация на нуклеинова киселина.

Косвени методи

Серологичните реакции са лабораторни диагностични методи, базирани на откриването на антитела (съкратено AT) към антигените на Treponema pallidum (съкратено AG). Те са от първостепенно значение за потвърждаване на диагнозата.

1. 1 Нетрепонемни тестове:
   • реакция на Васерман (WRS);
   • Реакция на микропреципитация (MR, RMP) и нейните аналози, които са дадени по-долу;
   • Бърз плазмен реагин тест (RPR, RPR);
   • Тест за серум с червен толуидин (TRUST);
   • Нетрепонемно изследване на Лаборатория за изследване на венерически болести - VDRL.
2. 2 Трепонемни теста:
   • Treponema pallidum имобилизиращ разтвор – RIBT/RIT;
   • Имунофлуоресцентен разтвор - RIF, FTA (серумни разреждания RIF-10, RIF-200, RIF-abs);
   • R-ция на пасивна хемаглутинация (RPGA, TRPGA, TPHA);
   • Ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA, EIA);
   • Имуноблотинг.

Фигура 1 - Алгоритъм за серодиагностика на сифилис

Хистоморфологични методи

Тези методи се свеждат до идентифициране на характеристиките на хистоморфологията на сифилитичните прояви. Обръща се внимание на тънкостите на структурата на шанкра. Въпреки това диференциалната диагноза на инфекцията с помощта на хистология е много трудна. Хистоморфологията се използва с други лабораторни и клинични тестове.

Микроскопия в тъмно поле на Treponema pallidum

Този метод се основава на директното откриване на treponema pallidum в тестовия материал с помощта на микроскоп и специални устройства (най-често изхвърляне от ерозии и язви, по-рядко гръбначно-мозъчна течности други субстрати).

С помощта на скарификация, изстъргване, изстискване се получава ексудат от ерозии и язвени дефекти, след което приготвеният препарат се изследва под микроскоп.

Обикновено treponema pallidum се открива в препарат, получен от шанкър, от огнища на вторичен пресен, вторичен рецидивиращ сифилис, както и пунктат от лимфни възли и плацента.

Въз основа на феномена на малки частици, светещи в тъмно поле, когато бъдат ударени от лъч светлина (феномен на Тиндал), методът позволява перфектно разграничаване на причинителя на сифилис от други трепонеми въз основа на морфологични разлики и разлики в начините на движение на бактерия.

За микроскопия се използва специален кондензатор за тъмно поле с подходяща оптична разделителна способност. Лекарството се получава по метода на смачкани капки (капка от материала се нанася върху чисто, обезмаслено предметно стъкло и се покрива с много тънко покривно стъкло).

Имерсионното масло се накапва върху покривното стъкло. Чрез завъртане на тръбата и завъртане на лупата се регулира желаното осветление.

В тъмното поле на микроскопа се откриват кръвни клетки, епителни клетки и причинителя на сифилис. Treponema pallidum изглежда като спирала, много тънка, излъчваща сребрист цвят, с плавни движения.

Фигура 2 - Микроскопия в тъмно поле като начин за визуализиране на Treponema pallidum в изследвания материал. Източник на илюстрацията - CDC

Treponema pallidum трябва да се разграничава от другите трепонеми, включително Tr. refringens, които могат да бъдат намерени в орофаринкса и върху лигавицата на гениталните органи. Тази бактерия прави хаотични движения, има широки и асиметрични, доста груби къдрици. Освен това Treponema pallidum се отличава от Tr. Microdentium, Tr. Buccalis и Tr. Винченти.

Визуализацията на бактерии в тъмно поле понякога се допълва от флуоресцентна реакция. За целта към нативния материал се добавят антитрепонемни антитела, маркирани с флуоресцентно багрило. В този случай се образува комплекс, наречен антиген-антитяло (съкратено AG-AT), който е обект на изследване с помощта на флуоресцентен микроскоп.

Метод на полимеразна верижна реакция (PCR).

PCR, разработен през 1991 г. за откриване на молекулата на дезоксирибонуклеиновата киселина (ДНК) на Treponema pallidum, е силно чувствителен и специфичен, позволявайки откриването на ДНК фрагменти на патогена.

Този анализ се основава на копиране на къси участъци от ДНК от бледата спирохета, която отговаря на зададените параметри и присъства в пробата. Всичко това се извършва при изкуствени условия (ин витро). Реакцията се осъществява в апарат - термоциклер, който осигурява периодизация на температурните цикли. Настъпва охлаждане, последвано от нагряване на епруветките с грешка от 0,1˚C.

ДНК матрицата се нагрява в продължение на 2 минути при температура 92-98˚C ( Максимална температураизползва се, ако полимеразата е термостабилна). При нагряване нишките на ДНК се разделят поради разпадането на водородните връзки между тях. В етапа на отгряване реакционната температура се намалява, за да се свърже праймерът с едноверижния шаблон.

Отгряването отнема около 30 секунди, през което време се синтезират стотици нуклеотиди. Новосинтезираните молекули се копират от полимераза, в резултат на което се умножават специфични фрагменти на дезоксирибонуклеиновата киселина. Последващото откриване на фрагменти се извършва с помощта на агар гел електрофореза.

PCR диагнозата на сифилис все още е експериментална по природа, но е оправдана при откриване на вродена инфекция, в сложни диагностични случаи или когато съдържанието на Treponema pallidum е минимално в тестовия материал.

ДНК хибридизация

ДНК хибридизацията се извършва in vitro и се основава на пълно или частично свързване на две едноверижни ДНК молекули в една молекула. В случай на пълно съответствие на допълващи се фрагменти, сливането става лесно. Ако комплементарното съвпадение е частично, тогава свързването на ДНК вериги става бавно. Въз основа на времето на сливане на веригата може да се оцени степента на взаимно допълване.

Когато ДНК се нагрява в буферен разтвор, водородните връзки се разкъсват от азотни бази, които са комплементарни, което води до разминаване на ДНК веригите. След това се получава лекарство от две денатурирани дезоксирибонуклеинови киселини. Когато се охладят, едноверижните региони се ренатурират. Образува се т. нар. ДНК хибрид.

Методът ви позволява да оцените и анализирате скоростта на отгряване, като вземете предвид характеристиките (прилики и разлики) на ДНК между видовете или в рамките на един вид.

Използването на ДНК сонда включва хибридизиране на белязан ДНК фрагмент със специфична ДНК област за идентифициране на комплементарни нуклеотидни последователности. Група от ненаситени атоми (хромофори) или радиоактивни изотопи се използват за маркиране на сондата.

ДНК сондата се използва за хетерогенно и хомогенно откриване на нуклеинови киселини. Ролята на сондата е да идентифицира областите, където е настъпило сливането на цел-сонда. Откриването в хомогенна система има предимството да позволява да се наблюдава хибридизацията на ДНК молекулите в реално време.

Същността на метода е ДНК денатурация и ренатурация (повторно обединяване на ДНК вериги). Процесът на ренатурация на нуклеиновата киселина и ДНК сондата завършва с образуването на "хибрид".

Специфични последователности на нуклеинова киселина се хибридизират с ДНК сондата и по този начин се откриват и позволяват да се оцени количеството ДНК в изследвания материал.

Инфекция на лабораторни животни

Високата чувствителност на зайците към Treponema pallidum (около 99,9%) им позволява да се използват при диагностицирането на сифилитична инфекция.

Инфекцията на зайци се извършва в изследователски центрове и е „златен стандарт“ за оценка на чувствителността на други методи.

Да се ​​върнем към трепонемните и нетрепонемните тестове, тъй като те се използват най-често. Нека разгледаме техните предимства и недостатъци, както и грешките при тълкуването на резултатите.

Нетрепонемни тестове

Това са тестове за определяне на IgG и IgM антитела към стандартизиран кардиолипинов антиген. Техният съществен недостатък е относително ниската им специфичност.

Ниската цена и лекотата на изпълнение позволяват тези тестове да бъдат класифицирани като диагностични тестове, необходими за установяване на предварителна диагноза и скрининг сред населението.

Това са нетрепонемни тестове, които се вземат при кандидатстване за медицинско досие, кандидатстване за работа или регистрация в предродилна клиника.

1. 1 Минимална чувствителност в стадий на първичен сифилис – 70%;
2. 2 Минимална чувствителност в стадий на късен сифилис – 30%;
3. 3 Възможност за фалшиво отрицателни и фалшиво положителни резултати;
4. 4 Трудоемкост на изпълнение на RSK.

1. 1 Относително ниска цена на тестовата продукция;
2. 2 Получаване на бърз отговор;
3. 3 Възможност за използването им за скрининг.

Получаването на фалшиво положителни или слабо положителни проби е възможно в следните случаи:

1. 1 Нарушение на технологията на изпълнение при блокиране на комплекса AG-AT.
2. 2 Пациентът има автоимунни заболявания (ревматоиден артрит, ревматизъм, склеродермия, системен лупус еритематозус, саркоидоза и др.).
3. 3 Злокачествени новообразувания.
4. 4 Вирусни и бактериални инфекции.
5. 5 Ендокринни заболявания ( автоимунен тиреоидит, диабет).
6. 6 Бременност.
7. 7 Пиене на алкохол.
8. 8 Ядене на мазни храни.
9. 9 Старческа възраст.

Както можете да видите от списъка, има много причини за неправилен резултат. Следователно, човек трябва да бъде много предпазлив от него. Нека разгледаме още две проби заедно с RSC. Това е реакция на микроутаяване и VDLR (негова модификация).

Реакция на фиксиране на комплемента (RSK, Васерман, RW)

Това е тест, базиран на способността на комплемента да се свързва с AG-AT комплекси. Образуваният комплекс се идентифицира с помощта на хемолитичната система. Кардиолипиновият антиген значително повишава чувствителността на теста.

Реакцията на Kolmer също е чувствителна, което се състои в извършването й при различни температурни условия. По този начин първата фаза на реакцията на Колмер протича при температура 20˚C за половин час, втората фаза при температура 4-8˚C за 20 часа. През това време се извършва фиксация на комплемента.

При извършване на RSC е възможно да се получат драматично положителни резултати. Причината вероятно е висок титър на антитела в неразреден серум. В този случай пробите се дават с намаляващи дози.

За да се разграничат етапите на сифилис и да се оцени ефективността на антисифилитичното лечение, се определя количеството на AT в серума.

Положителността на пробата се оценява чрез кръстосване, а разреждането на серума също се показва в реакциите на Васерман, Колмер и Кан.

Реакция на микроутаяване

Тъй като сложността на извършването на горните тестове е висока, за широчината на покритието на клиничния преглед различни групипопулация е разработен ускорен метод за серодиагностика на сифилис, така нареченият експресен метод - реакция на микропреципитация (съкратено MR, RMP).

Извършва се с кардиолипинов антиген и спомагателни вещества. Предимството му е събирането на периферна кръв за изследване. Това значително ускорява както самата техника, така и работата на лаборантите.

Фигура 2 - Реакция на микроутаяване (схема)

За извършване на MR е необходима плазма или инактивиран серум от кръвта на пациента (те съдържат антитела). След това плазмата се поставя в маркирани ямки. След това към тестовия материал се добавя капка кардиолипинов антиген, разбърква се и се разклаща. В резултат на това в серума на заразения човек се появяват характерни люспи с различна интензивност.

Това е качествена проба. За количествена оценка се използват 10 разреждания на серум, поставени в 10 ямки с подходящо етикетиране. При качествен MR отговорът е показан под формата на кръстове (плюси) или минус; при количествен MR се посочва титърът на антителата (1: 2, 1: 4 и т.н.).

Наличието на люспи се счита за положителен или слабо положителен отговор. Появата на флокулат е възможна дори при липса на заболяване, поради което окончателната оценка на получения резултат се извършва след контролно изследване или други реакции (RIBT, RIF, ELISA, RPGA).

Методът, препоръчан от Световната здравна организация за поставяне на реакция с липоиден антиген (AG), с право се счита за най-добрият сред другите стандартни нетрепонемни тестове. Разработено в САЩ, Джорджия в лабораторията за болести, предавани по полов път (Venereal Diseases Research Laboratories).

Съкращението на институцията послужи като име на извадката - VDRL. VDRL е модификация на MR. Серумът от пациент със сифилис се инактивира и се поставя върху предметно стъкло. Използваният антиген се състои от кардиолипин, холестерол и лецитин в различни проценти. Отговорът се регистрира почти веднага.

При наличие на антитела в серума се наблюдава отчетлива флокулация. Серумът става реактивен след 4 седмици от инфекцията. За да се оцени количеството на антителата, серумът се разрежда предварително експоненциално.

1. 1 относително висока чувствителност;
2. 2 относително висока специфичност;
3. 3 лекота на изпълнение;
4. 4 ниска цена на реагентите;
5. 5 получаване на бърз отговор.

Недостатък на VDRL е неговата относително висока честота на фалшиво положителни резултати.

Техните причини са същите заболявания, изброени по-горе.

Трепонемните тестове се извършват със специфични антигени на Treponema pallidum. Те са необходими и задължителни за поставяне на окончателна диагноза. Това са имунофлуоресцентна реакция (RIF), реакция на индиректна хемаглутинация (IPHA), ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) и др.

След положителен резултатнетрепонемни тестове (RPR, MP, VDRL) винаги трябва да се извършват трепонемни тестове (обикновено комбинация - RPGA, ELISA, RIF).

Трепонемните тестове са по-сложни за изпълнение от бързите тестове и изискват повече пари.

Тази реакция (съкратено RIF) се използва за диагностициране на сифилис, включително латентни форми, и за двойна проверка на положителни и фалшиво положителни проби.

RIF се основава на сиянието на белязани антитела, когато се комбинира с комплекс антиген-антитяло под кварцова лампа. Методът започва да се използва през 60-те години и се отличава с лекота на изпълнение и висока специфичност (която е малко по-ниска от RIBT).

Има няколко модификации: RIF-10, RIF-200 и RIF-abs.

RIF е най-чувствителен при 10-кратно разреждане, а останалите са по-специфични. RIF се осъществява на две фази. Кръвният серум на пациента се добавя към АГ. Образува се комплекс AG-AT, който се изследва в следващата фаза. След това белязаният с флуорохром комплекс се идентифицира чрез микроскопия. Ако не се наблюдава блясък, това показва липсата на специфични антитела в кръвния серум.

RIF-200 е най-ценното от всички разреждания. Методът е предназначен за диагностициране на различни форми на сифилис, особено латентен сифилиси повторна проверка на положителни проби.

Реакцията на имобилизация на Treponema pallidum (съкратено RIBT, RIT) е един от сложните серологични тестове, който изисква значителни усилия и финансови разходи. RIBT се използва все по-рядко, но значението му остава в диагностиката на латентен сифилис.

Има голямо значение при разпознаване на фалшиво положителни резултати при бременни жени и се основава на обездвижването на бактерии в присъствието на имобилизини – късни антитела.

Резултатът се оценява въз основа на процента (%) на имобилизираните трепонеми, като се използва специална таблица:

1. 1 От 0 до 20 - отрицателен тест.
2. 2 От 21 до 50 - слабо положителен тест.
3. 3 От 50 допълнителни положителни реакции.

Фалшиво положителни резултати са възможни и при използване на RIBT. По този начин е възможен неправилен отговор при инфекция с тропически трепанематази, както и при туберкулоза, цироза на черния дроб, саркоидоза и пациенти в напреднала възраст.

Този кръвен тест за сифилис се нарича тест за пасивна хемаглутинация (съкратено като кръвен тест за RPHA, THRHA).

Антигенът за RPHA се приготвя от овчи червени кръвни клетки, покрити с фрагменти от Treponema pallidum (получени от заразени зайци (вижте Фигура 4)). Анализът използва венозна кръв (плазма или инактивиран серум) на пациента.

Когато се добави антиген към серума на пациент със сифилис, се образува комплекс AG-AT, което води до аглутинация на червените кръвни клетки. аглутинацията се определя субективно от лаборант.

Фигура 3 - Схема на RPHA (реакция на пасивна хемаглутинация)

Пробата се оценява като положителна, когато се появят аглутинати с равномерен розов цвят. Червеното оцветяване на утайката показва утаяване на червени кръвни клетки. RPHA е силно чувствителен и много специфичен.

Реакция на микрохемаглутинация

Това е опростена версия на RPGA. Различава се от описания по-горе тест по това, че изисква по-малко антиген, разредител и серум за извършване на реакцията. 4 часа след инкубиране на серума, пробата може да бъде оценена. Използва се за скрининг и масови изследвания за сифилис.

Свързан имуносорбентен анализ

Ензимно-свързаният имуносорбентен анализ (съкратено ELISA) се основава на специфична реакция антиген-антитяло. Биологичен материал (кръвен серум на пациента, гръбначно-мозъчна течност) се въвежда в ямки, върху твърдата повърхност на които са фиксирани антигени на treponema pallidum. Тестовият материал се инкубира, след което антителата, които не са се свързали с антигените, се отмиват (виж Фигура 5).

Идентифицирането на получения комплекс се извършва на етапа на ферментация, като се използва имунен серум, маркиран с ензима. При химическа реакцияензимът оцветява получените комплекси. Интензитетът на оцветяването зависи от количеството специфични антитела в кръвта на пациента и се регистрира със спектрофотометър.

Фигура 4 - Схема на ELISA (ензимно-свързан имуносорбентен анализ)

Чувствителността на ELISA е повече от 95%. Методът се използва в автоматизиран режим за изследване на елективни групи от населението: донори, бременни жени и други, за изясняване на диагнозата на положителни и фалшиво положителни нетрепонемни тестове.

Имуноблотинг

Имуноблотингът е високочувствителен метод, модификация на обикновения ELISA. Реакцията се основава на електрофореза с разделяне на антигените на Treponema pallidum.

Отделените имунодетерминанти се прехвърлят върху нитроцелулозна хартия и се проявяват в ELISA. След това серумът се инкубира и несвързаните антитела се отмиват. Полученият материал се третира с имуноглобулини (IgM или IgG), белязани с ензим.

Клинична оценка на резултатите от лабораторната диагностика на сифилис

В таблица 1 по-долу сме предоставили възможни резултати от теста и тяхната интерпретация. Както можете да видите в таблицата, цялостната оценка на тестовете е от първостепенно значение при дешифрирането.

Таблица 1 - Интерпретация на резултатите от серологичните реакции (кръвни тестове за сифилис). За да видите, щракнете върху таблицата

Реактивността на теста също се оценява с помощта на "кръстове":

1. 1 Максималният отговор (рязко положителен тест) е обозначен с 4 кръстчета.
2. 2 Положителният тест се обозначава с 3 кръстчета.
3. 3 Слабо положителна реакция се обозначава с два кръста.
4. 4 Един кръст показва съмнителен и отрицателен резултат.
5. 5 Отрицателният отговор се отбелязва със знак минус.

Проблемът за оптимизиране на лабораторната диагностика на сифилис не е загубил своята актуалност и до днес. Съвременните диагностични методи, въпреки желанието на учените да доведат диагностиката до възможно най-високи нива на чувствителност и специфичност, изискват контролни изследвания и индивидуален подход.

Характеристика на сифилитичната инфекция е феноменът на серорезистентност, който никога не е получавал научно обяснение. Диагнозата се поставя след пълно изследване на пациента с епидемиологични, клинични и лабораторни методи.

На фона на икономическото и техническо развитие на медицината се наблюдава напредък и в разработването на нови критерии за диагностициране на сифилис. Всичко това ще ви позволи бързо, успешно и прецизно лечение на пациентите.

Инфекциозните заболявания инициират производството на подходящи антитела в кръвта на болен човек. Ето как работи имунна защитатяло.

Определянето на наличието на антитела към определен вирус или бактерия позволява да се разбере за началото на заболяването, преди да се появят основните му симптоми. Днес серологичните тестове дават най-пълната картина. Ето защо в тази статия ще говорим за серологични изследвания.

Какво представляват серологичните тестове

Методите за изследване на биологични материали от хора и животни, които могат да открият антитела или антигени в тях, които тялото произвежда като защитна реакция в борбата срещу инфекциите, се наричат ​​серологични изследвания. Такива методи се използват за определяне на причинителя на инфекцията, както и за целите на:

• определяне на кръвна група,
• изучаване на имунитета чрез определяне на нивото на неговия хуморален компонент,
• определяне на тъканни антигени.

На кого се предписва?

защо да го правиш

Методът се оценява от специалистите като начин за качествена диагностика на заболяването.

• Ако пациентът е на етапа на заболяването, се препоръчва да се провеждат повторни изследвания на интервали от приблизително една седмица, за да се наблюдава ефективността на използваното лечение.
• Серологичните тестове често се използват, за да се определи кой патоген е причинил заболяването, след като пациентът го е претърпял.

Видове процедури

Серологичните методи за изследване се основават на различни реакции:

• Реакция на неутрализацияразчита на свойството на имунните серумни антитела да действат като неутрализиращ агент срещу самите токсини или микроорганизми, предотвратявайки техните увреждащи ефекти.
• Реакция на аглутинация, който от своя страна е разделен на следните подвидове:
  • директни реакции - те се използват за изследване на кръвен серум за наличие на антитела. Убитите микроби се добавят към изследвания състав и ако се появи утайка под формата на люспи, това означава, че реакцията към този вид микроби е положителна;
  • реакцията на индиректна хемаглутинация се осъществява чрез въвеждане в кръвния серум на еритроцити, върху които са адсорбирани антигени; тези агенти взаимодействат със същия вид антигени, присъстващи в кръвния серум, което води до назъбена утайка.
• Реакция, включваща комплементизползвани за откриване на инфекциозни заболявания. Методът се реализира чрез активиране на комплемента и наблюдение на реакциите, протичащи в изследваната среда.
• Реакция на утаяванесе извършва чрез наслояване на разтвор на антиген върху течна среда - имунен серум. Антигенът, използван за този метод, е разтворим. Реакцията е, че комплексът антиген-антитяло претърпява утаяване; получената утайка се нарича преципитат.
• Реакция с използване на маркирани антигени и антителасе основава на факта, че микробите или тъканните антигени, обработени по определен начин, придобиват способността да излъчват светлина под въздействието на ултравиолетовите лъчи. Методът се използва не само за диагностициране на антигени, но и за определяне лекарствени вещества, ензими, хормони.

Противопоказания за

Поради факта, че методът включва изследване на биологичния материал на пациента, той не може да има отрицателно въздействие върху хората. Следователно, няма противопоказания за употреба.

Изследването е напълно безопасно.

По-долу ще опишем как се провежда серологичен тест.

Показания за изследване

Методът се използва за определяне на причинителя на инфекцията, включително при следните заболявания:

• HIV инфекция,
• токсоплазмоза,
• инфекциозни заболявания, придобити чрез сексуален контакт;
• дифтерия,
• Наличност ;
• бруцелоза,
• стафилококови инфекции,
• хепатит.

Методът се използва и за идентифициране на следните заболявания:

• описторхоза,
• амебиаза,
• цистицеркоза,
• лямблиоза,
• пневмония.

Подготовка за процедурата

Не се изисква специална подготовка за процедурата. Трябва да се спазва едно условие: вземането на кръв се извършва на празен стомах.

Алгоритъмът за вземане на проби (вземане) на кръв (материал) за серологично изследване е описан по-долу.

Извършване на анализ

Кръвта се взема от лакътната вена. За да работи изследването, кръвта се изтегля не със спринцовка, а чрез гравитация. Във вената се вкарва игла без спринцовка и в епруветка се събират до 5 ml кръв.

По време на процедурата пациентът изпитва лек дискомфорт, тъй като иглата се вкарва във вената. Последващите стъпки не са никак тревожни.

Тълкуването на резултатите от серологичен кръвен тест е описано по-долу.

Декодиране на резултатите

Получените резултати трябва да се разглеждат във връзка с клиничната картина на заболяването, като се проверява подозираната диагноза с помощта на няколко теста. Това се дължи на факта, че тестовете са специфични и понякога нямат абсолютна чувствителност към инфекциозни заболявания.

Цената за цялостен серологичен кръвен тест е описана по-долу.

Средна цена на процедурата

Цената на процедурата ще зависи от вида на изследването. Състои се от цената на анализа и цената на антителата към специфичен патоген. Средната цена на процедурата е в рамките на 700 рубли.

Серологичните реакции са описани във видеото по-долу:

Серологичен методе набор от реакции, основани на взаимодействие антиген-антитяло (Ag-Ab)и насочени към идентифициране на антитела срещу антигени на патогени на инфекциозни заболявания или самите микробни антигени в кръвен серум и други телесни течности. Серологичният метод се характеризира с висока чувствителност и специфичност. Повечето реакции на този метод са лесни за провеждане и записване, достъпни са за широк кръг лаборатории, обикновено са безопасни, икономични и подлежат на стандартизация. ДА СЕ недостатъциСерологичният метод може да се дължи на: 1) индиректния характер на резултата, когато етиологията на заболяването се преценява не от изолирането на патогена, а от (имунния) отговор на организма към патогена; 2) необходимостта от парентерална намеса в тялото на пациента; 3) в повечето случаи късна диагноза, което се обяснява с естествената динамика на хуморалния имунен отговор; 4) възможността за погрешно приемане на анамнестичния Abs (в резултат на предишно заболяване или ваксинация) за Abs към текуща инфекция. При определяне на микробни антигени 3 и 4 няма недостатъци, но е необходимо да се вземат предвид характеристиките на циркулацията на антигените на различни микроби и да се съпоставят тези характеристики с възможността за вземане на материал за изследване.

Етапи на серологичния метод:

1) вземане материали за изследване. В повечето случаи материалът е кръвен серум. Получава се след образуване на кръвен съсирек, кръвта трябва да се вземе при строго асептични условия съгласно стандартните техники,

2) изборът на серологична реакция за даден случай зависи от целта на изследването, предполагаемото заболяване, фазата на заболяването, материала за изследването, чувствителността на реакцията и възможностите на конкретна лаборатория. За откриване на Abs, както и на Ags, се използват реакции на аглутинация ( RA), пасивна хемаглутинация ( RPGA)), имунофлуоресценция (РИФ), инхибиране на хемаглутинацията ( RTGA), валежи, флокулация, реакция на свързване на комплемента (FFR) и др.

3) създаване на серологична реакция,

4) регистриране на серологична реакция, за да се определи наличието на серологични маркери на инфекция.

Различните серологични реакции се характеризират с няколко основни характеристики:

1) тъй като всички серологични реакции са реакции на взаимодействие между Ab и Ag, тогава във всички случаи, за да се установи наличието на Ab в изследвания субстрат, набор от известни стандартни корпускулярни или разтворими Ag, наречени диагностикуми. От своя страна, за да се установи наличието на Ag, набор от имунни диагностични серуми,

2) взаимодействието на Ag и Ab се осъществява само в присъствието на електролит, който обикновено е изотоничен разтвор на натриев хлорид или буферни смеси; pH на системата трябва да бъде около 7,

3) образуването на комплекса Ag-At изисква инкубационен период при специални температурни условия (от +4 ° C до 37 ° C). Образуването на специфичен имунен комплекс става бързо; явление, видимо с просто око (аглутинация, лизис и др.) - бавно, след няколко часа или дори дни,

4) и двата компонента на серологичната реакция (антиген и антитела) трябва да присъстват в еквивалентни пропорции. Излишъкът от някой от компонентите блокира образуването на комплекса Ag-At и допринася за фалшиво отрицателни резултати.

Серологичните реакции се записват визуално, понякога с помощта на лупа. Същността на отчитането на серологичната реакция се свежда до определяне на феномена на свързване на Ag и Ab чрез образуване на комплекса Ag-At. Визуално образуването на комплекса Ag-At се съпровожда от две основни явления - аглутинация и утаяване. Разликите между тях се определят от характеристиките на антигените и антителата, специфични за тях. В същото време сред микробните антигени има и такива, които индуцират синтеза на непреципитиращи; образуването на комплекса Ag-Ab в този случай не е придружено нито от феномена на аглутинация, нито от феномена на утаяване и идентифициране фактът на образуване на комплекса Ag-Ab изисква маркиране на диагностичния компонент на реакцията със специални етикети или прехвърляне на диагностичния антиген в друго състояние на агрегация.

При оценката на реакцията се използват 3 основни критерия: 1) наличие и интензивност на реакцията (в плюсове и др.); 2) диагностичен титър, 3) повишаване на титъра на Ab в хода на заболяването 4 пъти или повече. Наличието на реакция се определя чрез визуални феномени или чрез свързване на имунохимичен маркер. За да се оцени интензивността на серологичната реакция, се използва принципът 4 "+" (Таблица 7).

Таблица 7.

Система за оценка на серологичните реакции с 4 "+" за реакции на аглутинация и преципитация

За количествено представяне на резултатите от серологична реакция се използва концепцията за титър на антитяло или антиген. За да се определи нивото на Ab (или Ag титър), е необходимо да се извърши серологична реакция чрез приготвяне на редица разреждания на кръвен серум или друг материал (титруване). При приготвяне на разреждания на кръвен серум се използва електролитен разтвор (най-често изотоничен разтвор на натриев хлорид). Етапът на разреждане (титруване) се определя от съотношението на обема на електролитния разтвор и обема на кръвния серум. Например, при последователни разреждания на стъпки от 2 пъти, равни обеми електролитен разтвор и кръвен серум се смесват в 1-ва епруветка; със стъпка от 5 пъти, 1 обем серум се добавя към 4 обемни части от електролитния разтвор. ; със стъпка от 10 пъти - до 9 1 обем кръвен серум се добавя към обема на електролитния разтвор (Таблица 8).