В случай на първичен сифилис, секретът от шанкроида или точковите лимфни възли се изследват за treponema pallidum. В случай на вторичен сифилис, материалът се взема от повърхността на ерозирани папули по кожата, лигавиците, пукнатини и др. Преди да вземете материала, за да почистите от различни замърсители, повърхността на лезиите (ерозии, язви, пукнатини) ) трябва да се избърсват старателно със стерилен тампон от памучна марля, който се навлажнява с изотоничен разтвор на натриев хлорид или се предписват лосиони със същия разтвор. Почистената повърхност се подсушава със сух тампон и с платинена бримка или шпатула леко се раздразват периферните зони, като същевременно леко се притиска основата на елемента с пръсти в гумена ръкавица до появата на тъканна течност (серум), от които се изготвя подготовката за изследване. Получаването на тъканна течност е важно за диагностицирането на сифилис, тъй като treponema pallidus се намират в лумените на лимфните капиляри, в тъканните пукнатини около лимфните и кръвоносните съдове.

Пункция на регионални лимфни възли

Кожата над лимфните възли се третира с 96% алкохол и 3-5% алкохолен разтвор на йод. След това използвайте първия и втория пръст на лявата ръка, за да фиксирате лимфния възел. Дясна ръкавземете стерилна спринцовка с няколко капки изотоничен разтвор на натриев хлорид, който се инжектира паралелно надлъжна ослимфен възел. Иглата се натиска в различни посоки към противоположната стена на капсулата на възела и съдържанието на спринцовката се инжектира бавно. С пръстите на лявата ръка лимфният възел се масажира леко. Когато иглата се изтегли бавно, буталото на спринцовката се изтегля едновременно, аспирирайки съдържанието на лимфния възел. Материалът се нанася върху предметно стъкло (ако количеството материал е малко, се добавя капка изотоничен разтвор на натриев хлорид) и се покрива с покривно стъкло. Изследването на нативното лекарство се извършва в тъмно зрително поле с помощта на светлооптичен микроскоп с кондензатор на тъмно поле (40, 7x, 10x или 15x обектив). Treponema pallidum може да се намери и в цветни препарати. Когато се оцветяват по Romanovsky-Giemsa, бледите трепонеми се оцветяват в розово, според Fontan и Morozov - кафяво (черно), според метода на Burri, неоцветените трепонеми се разкриват на тъмен фон.

Серологична диагностика

Значение при диагностицирането на сифилис, оценка на ефективността на лечението, установяване на критерий за излекуване, идентифициране на скрити, устойчиви формиприписани на стандартни (класически) и специфични серологични реакции. Стандартните или класически серологични реакции (SSR) включват:

• реакция на Васерман (WR),
• седиментни реакции на Кан и Сакс-Витебски (цитохолични),
• реакция върху стъкло (експресен метод),

към конкретно:

• реакция на обездвижване на treponema pallidum (реакция на treponema pallidum),
• имунофлуоресцентна реакция (RIF).

Реакция на Васерман (WR)

- разработен от А. Васерман заедно с А. Найсер и К. Брук през 1906 г. Реакцията на Васерман се основава на феномена на фиксиране на комплемента (реакция на Bordet-Gengou) и позволява определянето на антилипидни антитела (реагини). Според модерни идеи, в реакцията на Васерман се определят антитела към липидите на макроорганизма, а не treponema pallidum, и реакцията разкрива автоимунен процес, който се причинява от денатурация на тъканите на макроорганизма от treponema pallidum с образуването на липопротеинов комплекс (конюгат), при който определящ фактор са липидите (хаптените).

RV обикновено се диагностицира с два или три антигена. Най-често използваните са високочувствителен кардиолипинов антиген (екстракт от говеждо сърце, обогатен с холестерол и лецитин) и трепонемален антиген (обработена с ултразвук суспензия от анатогенни култивирани трепонеми pallidum). Заедно със серумните реагини на пациента, тези антигени образуват имунен комплекс, способен да адсорбира и свързва комплемента. За визуално определяне на образувания комплекс (реагини + антиген + комплемент) като индикатор се използва хемолитичната система (смес от овчи еритроцити с хемолитичен серум). Ако комплементът е свързан във фаза 1 на реакцията (реагини + антиген + комплемент), хемолиза не настъпва - червените кръвни клетки се утаяват в лесно забележима утайка (PB положителен). Ако във фаза 1 комплементът не е свързан поради липсата на реагини в тестовия серум, той ще бъде използван от хемолитичната система и ще настъпи хемолиза (RT отрицателен). Степента на тежест на хемолизата при стадиране на RV се оценява чрез плюсове: пълна липса на хемолиза ++++ или 4+ (RV е рязко положителен); едва започнала хемолиза +++ или 3+ (RV положителен); значителна хемолиза ++ или 2+ (RV слабо положителен); неясна картина на хемолиза ± (RV е съмнителен); пълна хемолиза - (отрицателна реакция на Васерман).

В допълнение към качествената оценка на PB има количествена оценка с различни серумни разреждания (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Титърът на реагин се определя от максималното разреждане, което все още дава рязко положителен (4+) резултат. Количественото стадиране на RV е важно при диагностицирането на някои клинични форми на сифилитична инфекция, както и при проследяване на ефективността на лечението. Понастоящем реакцията на Васерман се извършва с два антигена (кардиолипин и трепонемален щам на Reiter). По правило RV става положителен на 5-6 седмица след инфекцията при 25-60% от пациентите, на 7-8 седмица - при 75-96%, на 9-19 седмица - при 100%, въпреки че при последните годинипонякога по-рано или по-късно. В същото време титърът на реагин постепенно се увеличава и достига максимална стойност (1: 160-1: 320 и повече) в случай на генерализирани обриви (вторичен пресен сифилис). Когато RV е положителен, се поставя диагноза първичен серопозитивен сифилис.
С вторични свежии вторичен рецидивиращ сифилис, RV е положителен при 100% от пациентите, но при изтощени пациенти с отслабен имунитет може да се наблюдава отрицателен резултат. Впоследствие титърът на реагин постепенно намалява и при вторичен рецидивиращ сифилис обикновено не надвишава 1:80-1:120.
За третичен сифилис RV е положителен при 65-70% от пациентите и обикновено се наблюдава нисък реагинов титър (1:20-1:40). При късни форми на сифилис (сифилис вътрешни органи, нервна система) положителен RV се наблюдава в 50-80% от случаите. Титърът на реагин варира от 1:5 до 1:320.
За латентен сифилисположителен RV се наблюдава при 100% от пациентите. Титърът на реагин е от 1:80 до 1:640, а при късен латентен сифилис от 1:10 до 1:20. Бързото намаляване на титъра на реагин (до пълна негативност) по време на лечението показва ефективността на лечението.

Недостатъци на реакцията на Васерман- недостатъчна чувствителност (в начална фазапървичен сифилис отрицателен). Отрицателен е и при 1/3 от пациентите, ако са били лекувани с антибиотици в миналото, при пациенти с третичен активен сифилис с лезии на кожата и лигавиците, костно-ставния апарат, вътрешните органи, централната нервна система и с късна вродена сифилис.
Липса на специфичност- реакцията на Васерман може да бъде положителна при хора, които не са имали и нямат сифилис. По-специално, фалшиво положителни (неспецифични) резултати от RV се наблюдават при пациенти, страдащи от системен лупус еритематозус, проказа, малария, злокачествени новообразувания, увреждане на черния дроб, обширен миокарден инфаркт и други заболявания, а понякога и при напълно здрави хора.
Открива се краткотрайна фалшиво положителна реакция на Васерманпри някои жени преди или след раждане, при злоупотребяващи с наркотици, след анестезия или пиене на алкохол. По правило фалшиво положителният RV е слабо изразен, често с нисък реагинов титър (1:5-1:20), положителен (3+) или слабо положителен (2+). По време на масови серологични изследвания честотата на фалшиво положителни резултати е 0,1-0,15%. За да се преодолее недостатъчната чувствителност, те използват студения тест (реакция на Kolyar) и в същото време се провеждат с други серологични реакции.

Седиментни реакции на Кан и Сакс-Витебски

Реакцията на Васерман се използва в комбинация с две седиментни реакции (Кан и Сакс-Витебски), когато се постави на етап, се приготвят по-концентрирани антигени. Експресен метод (микрореакция върху стъкло) - отнася се към липидните реакции и се основава на реакцията на утаяване. Поставя се със специфичен кардиолипинов антиген, 1 капка от който се смесва с 2-3 капки от изследвания кръвен серум в ямките на специална стъклена плака.
Предимство- скорост на получаване на отговор (за 30-40 минути). Резултатите се оценяват по количеството отложена утайка и размера на люспите. Експресивността се определя като КСО - 4+, 3+, 2+ и отрицателна. Трябва да се отбележи, че фалшиво положителни резултати се наблюдават по-често, отколкото при RV. По правило експресният метод се използва за масови изследвания за сифилис, за изследвания в клинико-диагностични лаборатории, соматични отделения и болници. Въз основа на резултатите от експресния метод диагностицирането на сифилис е забранено, използването му при бременни жени, донори, както и за контрол след лечение е изключено.

Реакция на имобилизация на Treponema pallidum (TPI)

Реакция на имобилизация на Treponema pallidum (TPI)- предложен през 1949 г. от R. W. Nelson и M. Mayer. Това е най-специфичният диагностичен тест за сифилис. Сложността и високата цена на производството обаче ограничават използването му. В кръвния серум на пациентите се определят видеоспецифични антитела (иммобилизини), които водят до неподвижност на Treponema pallidum в присъствието на комплемент. Антигенът е жива патогенна Treponema pallidum, изолирана от зайци, заразени със сифилис. С помощта на микроскоп се преброява загубената подвижност (имобилизирана) Treponema pallidum и се оценяват резултатите от RIBT: имобилизацията на Treponema pallidum от 51 до 100% е положителна; от 31 до 50% - слабо положителен; от 21 до 30% - съмнително; от 0 до 20% - отрицателни.
RIBT има значение кога диференциална диагноза за разграничаване на фалшиво положителни серологични реакции от реакции, причинени от сифилис. Късно става положително от RV, RIF и следователно за диагностика различни формине се използва за сифилис, въпреки че във вторичния период на сифилис е положителен при 85-100% от пациентите.
В третичния период на сифилис с увреждане на вътрешните органи, опорно-двигателния апарат и нервната система, RIBT е положителен в 98-100% от случаите ( RV често е отрицателен).
Трябва да се помни, че RIBT може да бъде фалшиво положителен, ако тестовият серум съдържа трепонемоцидни лекарства (пеницилин, тетрациклин, макролити и др.), Които причиняват неспецифично обездвижване на Treponema pallidum. За тази цел кръвта се изследва за RIBT не по-рано от 2 седмици след края на приема на антибиотици и други лекарства.
RIBT, подобно на RIF, бавно се отрицава по време на процеса на лечение, така че не се използва като контрола по време на процеса на лечение.

Имунофлуоресцентна реакция (RIF)

Имунофлуоресцентна реакция (RIF)- разработен през 1954 г. от A. Coons и използван за първи път за диагностика на сифилитична инфекция от Deacon, Falcone, Harris през 1957 г. RIF се основава на индиректен метод за определяне на флуоресцентни антитела. Антигенът за производство е тъканно патогенна Treponema pallidum, фиксирана върху предметни стъкла, върху които се нанася тест серумът. Ако тестовият серум съдържа анти-трепонемни антитела, свързани с IgM и IgG, те силно се свързват с антигена - трепонема, който се открива във флуоресцентен микроскоп с помощта на антивидов ("античовешки") флуоресцентен серум.
Резултати от RIFсе вземат предвид от интензитета на блясъка на бледа трепонема в препарата (жълто-зелен блясък). При липса на антитрепонемни антитела в серума трепонема палидум не се открива. При наличие на антитела се открива блясък на бледа трепонема, чиято степен се изразява в плюсове: 0 и 1+ - отрицателна реакция; от 2+ до 4+ - положително.
RIF се отнася до групови трепонемни реакции и се прилага в 10- и 200-кратно разреждане на тестовия серум (RIF-10 и RIF-200). RIF-10 се счита за по-чувствителен, но често се получават неспецифични положителни резултати, отколкото с RIF-200 (той има по-висока специфичност). обикновено, RIF става положителен по-рано от RV- положителен при първичен серонегативен сифилис при 80% от пациентите, при 100% във вторичния период на сифилис, винаги положителен при латентен сифилис и в 95-100% от случаите при късни форми и вроден сифилис.
Специфика на RIFсе увеличава след предварителна обработка на тестовия серум със сорбент-ултразвуков трепонен антиген, който свързва групови антитела (RIF - abs).
Индикации за RIBT и RIF- диагностика на латентен сифилис за потвърждаване на спецификата на комплекса от липидни реакции в случай на съмнение за сифилитична инфекция въз основа на положителен RV. Положителните RIBT и RIF са доказателство за латентен сифилис. В случай на фалшиво положително RT с различни заболявания(системен лупус еритематозус, злокачествени новообразуванияи т.н.) и ако повтарящите се резултати от RIBT и RIF са отрицателни, това показва неспецифичния характер на RV. Подозрение за късни сифилитични лезии на вътрешните органи, опорно-двигателния апарат, нервната система, ако пациентите имат отрицателен RV. Подозрение за първичен серонегативен сифилис, когато при пациенти с многократни изследвания на отделяне от повърхността на ерозия (язва), пункция от увеличени регионални лимфни възли, трепонема палидум не се открива - в този случай се дава само RIF - 10.
При изследване на лица с отрицателен RVкоито са имали дългосрочни сексуални и битови контакти с пациенти със сифилис, като се има предвид вероятната възможност за тяхното лечение в близкото минало с антисифилитични лекарства, които са причинили RV негативност. Ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA - enzymelinked imunosorbent assay) - метод, разработен от E. Engvall и др., S. Avrames (1971). Същността се състои в комбиниране на сифилитичен антиген, сорбиран върху повърхността на твърдофазен носител с антитяло от изследвания кръвен серум и идентифициране на специфичен комплекс антиген-антитяло с помощта на ензимно маркиран антивидов имунен кръвен серум. Това ви позволява визуално да оцените резултатите от ELISA чрез степента на промяна в цвета на субстрата под действието на ензима, включен в конюгата. Ненадеждни резултати от ELISA могат да възникнат в резултат на недостатъчно разреждане на съставките, нарушаване на температурните и времевите условия, несъответствие на рН на разтворите, замърсяване на лабораторни стъклени съдове и неправилна техника за измиване на средата.

Реакция на пасивна хемаглутинация (RPHA)

Предложен като диагностичен тест за сифилис от T.Rathlev (1965,1967), T.Tomizawa (1966). Макромодификацията на реакцията се нарича TRHA, микромодификацията е MNA-TR, автоматизираната версия е AMNA-TR, реакцията с полиурея макрокапсули вместо червени кръвни клетки е MSA-TR. Чувствителността и специфичността на RPGA са подобни на RIBT, RIF, но RPGA има по-малка чувствителност при ранни форми на сифилис в сравнение с RIF-abs и по-голяма чувствителност при по-късни форми на вроден сифилис. RPGA се доставя в качествена и количествена версия.

Техника за вземане на кръв за серологични тестове

За изследване на RV, RIF, RIBT кръвта се взема от лакътната вена на празен стомах или не по-рано от 4 часа след хранене с помощта на стерилна спринцовка или една игла (гравитационно). На мястото на събиране кожата е предварително обработена със 70% алкохол. Спринцовката и иглата трябва да се измият с изотоничен разтвор на натриев хлорид. 5-7 ml тестова кръв се излива в чиста, суха и студена епруветка. Върху епруветката се залепва празен лист хартия с фамилното име, инициалите на пациента, медицинската история или номера на амбулаторната карта и датата на вземане на кръвта. След вземане на кръв епруветката се поставя в хладилник с температурни условия+4°+8°С до следващия ден. На следващия ден серумът се източва за тестване. Ако кръвта не се използва на следващия ден, серумът трябва да се източи от съсирека и да се съхранява в хладилник за не повече от 1 седмица. За RIBT изследване епруветката трябва да бъде специално подготвена и стерилна. В случай на нарушение на правилата за вземане на кръв за изследване, неспазването на условията може да доведе до изкривяване на резултатите.
Не се препоръчва да се вземат кръвни проби за изследване след хранене, пиене или пиене лекарства, след прилагане на различни ваксини, по време на менструален цикълсред жените.
За изследване по експресния метод е взета кръв от върха на пръста, както се прави при вземането му за ESR, но кръвта е взета от 1 капиляр повече. Експресният метод може да се извърши и с кръвен серум, получен чрез венепункция. Ако има нужда от изследване на кръвта в отдалечени лаборатории, може да се изпрати сух серум вместо кръв (метод на сухи капки). За да направите това, на следващия ден след вземане на кръв, серумът се отделя от съсирека и се изтегля в стерилна спринцовка в количество от 1 ml. След това серумът се излива под формата на 2 отделни кръга върху лента от дебела хартия за писане (восъчна хартия или целофан) с размери 6x8 см. Фамилията, инициалите на субекта и датата на вземане на кръвта се изписват върху свободния ръб на кръвта. хартия. Хартията със серума се пази от пряка слънчева светлина и се оставя на стайна температура до следващия ден. Серумът изсъхва под формата на малки кръгчета от блестящ жълтеникав стъклен филм. След това ленти хартия с изсушен серум се навиват като фармацевтичен прах и се изпращат в лабораторията, като се посочва диагнозата и целта, за която се изследва.

Серологична резистентност

При някои (2% или повече) пациенти със сифилис, въпреки пълната антисифилитична терапия, има забавяне (липса) на отрицателни серологични реакции след края на лечението до 12 месеца или повече. Възниква така наречената серологична резистентност, която се наблюдава често през последните години. Има форми на серологична резистентност:

• Вярно(абсолютно, безусловно) - необходимо е да се проведе допълнително антисифилитично лечение, комбинирано с неспецифична терапия за повишаване на имунните сили на организма.
• Относително- след пълно лечение, бледата трепонема образува кисти или L-форми, които са в тялото в ниско вирулентно състояние и в резултат на това допълнително лечениене променя показателите на серологичните реакции, особено RIF и RIBT.

В същото време в кистозните форми протичат незначителни метаболитни процеси, а черупките на кистозните форми са чужд протеин (антиген). За да се предпази, организмът произвежда специфични антитела, които са положителни или силно положителни при извършване на серологични реакции и липса на прояви на заболяването. При L-формите метаболитните процеси са по-намалени и антигенните свойства липсват или са слабо изразени. Специфични антитела не се произвеждат или са в малки количества, серологичните реакции са слабо положителни или отрицателни. Колкото по-дълъг е периодът от момента на инфекцията, толкова по-голям брой Treponema pallidum се трансформират в форми за оцеляване (цисти, спори, L-форми, зърна), при които антисифилитичната терапия не е ефективна.

Псевдорезистентност- след лечение, въпреки положителните серологични реакции, Treponema pallidum отсъства в организма. В тялото няма антиген, но продължава производството на антитела, които се откриват по време на серологични реакции.
Серологичната резистентност може да се развие поради:

• неадекватно лечение, без да се вземат предвид продължителността и стадия на заболяването;
• недостатъчна доза и по-специално поради неотчитане на телесното тегло на пациентите;
• нарушение на интервала между прилагането на лекарството;
• запазване на Treponema pallidum в тялото въпреки пълноценното специфично лечение, поради резистентността им към пеницилин и други химиотерапевтични лекарства при наличие на скрити, енцистни лезии във вътрешните органи, нервната система, лимфни възли, които са недостъпни за антибактериални лекарства(treponema pallidum често се открива в белег много години след края на терапията; treponema pallidum понякога се открива в лимфните възли 3-5 години след антисифилитична терапия);
• намаляване на защитните сили при различни заболявания и интоксикации (ендокринопатии, алкохолизъм, наркомания и др.);
• общо изтощение (приемане на храна, бедна на витамини, протеини, мазнини).

В допълнение, често се откриват фалшиви положителни резултати от серологични реакции, които не са свързани с наличието на сифилис при пациенти и се причиняват от:

• придружаващ неспецифични заболяваниявътрешни органи, заболявания на сърдечно-съдовата система, ревматизъм, дисфункция на ендокринната и нервната система, тежки хронични дерматози, злокачествени новообразувания;
• увреждане на нервната система (тежки наранявания, сътресение, психическа травма);
• бременност; хронична интоксикацияалкохол, никотинови лекарства; инфекциозни заболявания (малария, туберкулоза, вирусен хепатит, дизентерия, тиф, коремен тиф и рецидивираща треска).

Тези фактори могат да повлияят на имунологичната реактивност на организма както в периода на активно развитие на сифилитичните прояви, така и по време на тяхната регресия.

Лабораторна диагностикаизползва няколко теста за сифилис наведнъж, за да получи най-точния резултат. Това отнема повече време, но дава най-точния отговор.

Най-често резултатът от RIF анализа се представя в цифри. Декодирането има следните символи:

• остър положителен резултатозначава се с 4 плюса (++++);
• положителен резултат се обозначава с 3 плюса (+++);
• слабо положителен резултат с 2 плюса (++);
• съмнителен резултат 1 плюс (+);
• отрицателен резултат се обозначава с 1 минус (-).

Резултатът от RIF за сифилис също е представен като процент, който зависи от количествения показател на свързаните бактерии:

• при отрицателен резултат имобилизацията е до 20%;
• при слабо положителен резултат имобилизацията варира от 20 до 50%;
• при положителен резултат обездвижването е над 50%.

Ако резултатът е положителенотговор, тогава това показва наличието на болестта.

Ако резултатът слабо положителен, тогава това показва еднократно количество остатъчни антитела в кръвта.

Отрицателнарезултатът показва липсата на treponema pallidum, което означава, че пациентът е здрав.

Опитните лекари в нашата клиника ще диагностицират сифилис бързо и с висока точност. Следователно ние сме социално ориентирани към всички слоеве от населението цената на RIF анализа е евтина. Цената е представена в таблицата на нашия уебсайт.

При серологичната диагностика на сифилис е много важно да се получи надежден и точен резултат.

За подобряване на качеството на данните се предприемат определени действия:

• Тестовият серум се разрежда 200 пъти (1:200), за да се избегнат фалшиво положителни реакции. После казват, че се изпълнява тест за сифилис RIF 200.
• При друг вариант, при разреждане на серума 1: 5, допълнително се използва специален абсорбент, който събира „допълнителни“ антитела, така че да не изкривяват резултатите.

Размерът на трепонемите също играе в ръцете на изследователите. Големи микробни тела на спирохети са ясно видими при флуоресцентна микроскопия. Ако маркирани с фосфор протеини от серума се „прилепят“ към тях. Използването на стандартизиран антиген и серум ни позволява да увеличим максимално чувствителността и специфичността на RIF при диагностицирането на сифилис.

Опции за частен RIF анализ: RIF абсорбция

Един от алтернативни начининаречен RIF-Abs. Различава се от обичайния метод по ниското разреждане на тест-серума - 1:5 срещу 1:200, както обикновено.

Концентрираната проба съдържа много активни протеинови молекули.

За да се избегне и увеличи чувствителността, серумът се третира със специален абсорбент, направен от фрагменти от сифилитични спирохети. Сорбентът събира прекалено активни антитела и след това пробата се третира с промишлен серум, белязан с фосфор. Благодарение на тази предварителна подготовка се елиминират всички ненужни молекули, които биха могли да повлияят на резултатите от теста.

Поставя се по следните показания:

• Положителен на фона на клиничното благополучие и без анамнеза за рискове от инфекция.
• Положителна RV при пациенти, страдащи от хронични заболявания.
• Отрицателен RV, когато се появят симптоми, подозрителни за сифилис.

Първите положителни резултати се появяват още на 15-16-ия ден от момента на заразяването. Ако реакцията се промени от положителна към отрицателна, това е сигнал за пълно излекуване на сифилис. Вероятността за фалшив положителен резултат е по-малка от 0,4%.

Тази ситуация може да възникне при преглед на пациенти с рак, алкохолици, бременни жени и хора, страдащи от имунни нарушения.

Известна част се дължи на технически грешки, тъй като производството е доста сложно. Има моменти, когато е необходимо да се разграничи вродена патология от придобита. Можете да направите това, ако търсите различни видовеантитела в кръвта на пациента.

Антителата срещу сифилис клас M (IgM) се появяват скоро след инфекцията и са много по-бързи от IgG. Позволява ви да ги идентифицирате анализ за сифилис RIF абсорбция IgM. Ако резултатите от тази реакция са положителни, тогава можем да говорим за скорошна инфекция. По този начин случаите на повторно заразяване могат да бъдат разграничени от рецидив или да се открие инфекция на дете след раждане.

Въз основа на резултатите от тази техника за RIF анализ също се прави заключение за ефективността на лечението на ранен сифилис.

Ако подозирате сифилис, свържете се с опитен венеролог.

Сифилисът е придружен от множество симптоми и има голям бройклинични форми. Разпознаването му се основава на цялостно клинично и лабораторно изследване на пациента. Общ анализкръвта за сифилис носи малко информация, така че не се използва за диагностициране на заболяването.

Следните материали могат да бъдат взети за анализ:

• кръв от пръст и вена;
• цереброспинална течност - цереброспинална течност;
• отделяне на твърд шанкър (язви);
• области на регионалните лимфни възли.

Изборът на материал и диагностичен метод зависи от стадия на заболяването. Ще говорим за това какви тестове се вземат за сифилис в следващия раздел.

Класификация на методите за лабораторна диагностика на заболявания

В началния етап можете да използвате бактериоскопския метод, базиран на идентифицирането на патогена - Treponema pallidum - под микроскоп. В бъдеще широко се използват серологични тестове, базирани на определяне на микробни антигени и антитела, произведени от тялото в биологичен материал.

Бактериологичните изследвания не се провеждат, тъй като причинителят на сифилис се развива много слабо върху хранителни среди при изкуствени условия.

Всички методи за откриване на трепонема, т.е. видове тестове за сифилис, са разделени на две големи групи:

1. Директен, който директно открива самия микроб:

• микроскопия в тъмно поле (откриване на трепонеми на тъмен фон);
• RIT тест – заразяване на зайци с изследвания материал;
• полимераза верижна реакция(PCR), който открива участъци от генетичния материал на микроорганизма.

2. Непряко (серологично), основаващо се на откриването на антитела срещу микроба, които се произвеждат от тялото в отговор на инфекция.

Серологичните тестове се разделят на две групи

Нетрепонемни:

• реакция на фиксиране на комплемента с кардиолипинов антиген (CCk);
• реакция на микропреципитация (MPR);
• бърз тест за плазмен реагин (RPR);
• тест с толуидиново червено.

трепонема:

• реакция на фиксиране на комплемента с трепонемален антиген (RSCT);
• реакция на обездвижване на Treponema (RTI или RIBT);
• имунофлуоресцентна реакция (RIF);
• реакция пасивна хемаглутинация(RPGA);
• ензимен имуноанализ (ELISA);
• имуноблотинг.

Методите на тези анализи са доста сложни, затова ще се съсредоточим основно върху това кога се извършват и колко точна информация предоставят.

Да кажем веднага, че основата за диагностициране на сифилис са серологичните методи. Как се нарича тестът за сифилис: във всеки случай изследването може да включва различни техники. По-долу ще говорим за тях по-подробно.

Директни тестове

Откриването им под микроскоп убедително доказва наличието на трепонеми. Вероятността от сифилис достига 97%. Микробите обаче могат да бъдат открити само при 8 от 10 пациенти, така че отрицателният тест не изключва заболяването.

Диагнозата се извършва в периоди, когато има шанкър или кожен обрив. Именно в изхвърлянето на тези инфекциозни елементи те търсят причинителите на болестта.

По-ефективни, но в същото време по-скъпи и комплексен анализ– откриване на трепонеми след предварителна обработка с флуоресцентни антитела. Това са вещества, които се „залепват” за микробите и образуват „блясък” в полето на микроскопа.

Чувствителността на методите намалява при продължителна продължителност на заболяването, лечение на язви и обриви с антисептици, а също и след лечение.

Биологичният метод за диагностициране на РИТ е високоспецифичен, но скъп, а резултатът се получава само чрез за дълго времекогато заразено животно развие болестта. В момента методът практически не се използва, въпреки че е практически най-точният от всички. Отличен кръвен тест за сифилис за откриване на генетичния материал на трепонемите е PCR. Единственото му ограничение е относително високата цена на диагностиката.

Серологични методи

Нетрепонемни тестове

RSKk и RMP

Най-известният от тези тестове е реакцията на Васерман. Това е пътят бърза диагностика(експресен тест за сифилис), базиран на подобна реакция на антитела от кръвта на болен човек към самите трепонеми и към кардиолипин, получен от говеждо сърце. В резултат на това взаимодействие на антитела и кардиолипин се образуват люспи.

В Русия този анализпрактически не се използва. Тя беше заменена от реакцията на микроутаяване. Недостатъкът на метода е неговата ниска специфичност. Фалшиво положителен тесткръв за сифилис се среща при туберкулоза, заболявания на кръвта, системен лупус еритематозус, по време на бременност, след раждането на дете, по време на менструално кървене и в много други случаи. Следователно, с положителен RW, повече точни методидиагностика

След заразяване реакцията става положителна след два месеца. При вторичен сифилис е положителен при почти всички пациенти.

Реакцията на микроутаяване, която замени реакцията на Васерман, има подобен механизъм. Той е евтин, лесен за изпълнение, бърз за оценка, но може да даде и фалшив положителен резултат. Тези два теста се използват като скрининг тестове.

RMP става положителен месец след появата на шанкра. За извършването му се използва кръв от пръст.

Може ли тестът за сифилис да е грешен? Разбира се, че да, особено когато се използват нетрепонемни тестове.

Причини за остри фалшиво положителни проби при използване на RMP:

• остри инфекциозни заболявания;
• пневмония;
• инфаркт на миокарда;
• удар;
• наранявания и отравяния.

Хроничните фалшиво положителни резултати често се появяват при следните заболявания:

• туберкулоза;
• бруцелоза;
• лептоспироза;
• саркоидоза;
• ревматични заболявания;
• Инфекциозна мононуклеоза;
• злокачествени тумори;
• диабет;
• цироза на черния дроб и други.

Ако възникнат противоречиви тестове, за изясняване на диагнозата се използват трепонемни серологични тестове.

RPR и тест с толуидиново червено

Бързият плазмен реагин тест (тест за сифилис rpr) е друг вид реакция с кардиолипинов антиген. Използва се в следните случаи:

• скрининг на населението;
• подозрение за сифилис;
• преглед на донора.

Нека споменем и теста с толуидиново червено. Всички тези методи се използват за оценка на ефективността на лечението. Те са полуколичествени, тоест намаляват с възстановяване и се увеличават с рецидив на инфекцията.

Отрицателните резултати от нетрепонемните тестове най-вероятно показват, че субектът няма сифилис. Следователно, нетрепонемни тестове се използват за оценка на излекуване. Първият такъв анализ трябва да се направи 3 месеца след приключване на курса на лечение.

Трепонемни тестове

Трепонемните тестове се основават на използването на трепонемни антигени, което значително повишава тяхната диагностична стойност. Те се използват в следните ситуации:

• положителен скринингов тест (реакция на микропреципитация);
• разпознаване на фалшиво положителни резултати от скрининг;
• подозрение за сифилис;
• диагностика на латентни форми;
• ретроспективна диагноза, когато пациентът преди това е страдал от заболяването.

RIT и RIF

Най-високо качество (високо чувствителни и силно специфични) са RIT и RIF. Недостатъците на тези методи са сложността, времето и необходимостта от модерно оборудване и обучен персонал. При повечето излекувани пациенти трепонемните тестове остават положителни в продължение на много години и следователно не могат да се използват като критерий за излекуване.

RIF става положителен два месеца след заразяването. Ако е отрицателен, пациентът е здрав, ако е положителен, вероятността от заболяване е голяма.

RIT се използва особено често в случай на положителни резултати от рак на пикочния мехур, за да се изключи или потвърди заболяването. Той е много чувствителен и ви позволява да разберете с голяма точност дали пациентът има сифилис или не. Тестът обаче става положителен само три месеца след заразяването.

Имуноблотинг

Имуноблотингът е дори по-чувствителен от RIF, но по-малко чувствителен от RPHA. Използва се рядко, главно за диагностика на сифилис при новородени.

Изброените методи не са подходящи за скрининг, тоест бързо откриване на заболяването, тъй като стават положителни по-късно от реакцията на микропреципитация.

ELISA и RPGA

Съвременни високоинформативни стандартизирани методи за диагностика на сифилис - ELISA и RPGA. Те са евтини, бързо инсталирани и тествани в големи количества. Тези тестове могат да се използват за потвърждаване на диагнозата.

Анализът на RPGA става положителен при първичен серопозитивен сифилис, тоест с появата на шанкър (месец след инфекцията). Особено ценен е при диагностициране на късни и вродени формизаболявания. Въпреки това, RPGA трябва да бъде допълнен от поне един нетрепонемален и един трепонемален тест за диагностична точност. Този троен тест е най-надеждният тест за сифилис. Недостатък на RPGA - консервация положителна реакцияв продължение на дълъг период от време, което не позволява изследването да се използва като критерий за излекуване.

Тестът ELISA за сифилис става положителен три седмици след заболяването. Недостатъкът на ELISA е, че може да бъде фалшив. Фалшиво положителна реакция възниква, когато системни заболявания, метаболитни нарушения, както и при деца, родени от болни майки.

недостатъци серологични методидоведе до разработването на най-модерните методи, които не дават грешки, но все още са скъпи и рядко използвани - газова хроматография и масспектрометрия.

Алгоритъм за диагностициране на сифилитична инфекция на различни етапи

В първичния серонегативен период (до 2 месеца след инфекцията) търсенето на трепонема се извършва в тъмно поле или с помощта на флуоресцентни антитела.

За първичен серопозитивен, вторичен и латентен сифилис се използват RMP и ELISA, а RPGA се използва като потвърждаващ тест.

При пациенти с рецидиви на вторичен сифилис се изследват елементи на обрива, като се опитват да изолират трепонемите от тях за микроскопско изследване.

В третичния период ракът на пикочния мехур е отрицателен при една трета от пациентите. ELISA и RPGA са положителни, но те може да не показват третичен сифилис, а предишно заболяване. Слабо положителен тест показва възстановяване, а не третичен сифилис.

При поставяне на диагнозата „вроден сифилис“ се вземат предвид наличието на заболяването при майката, разликата в честотата на рак на гърдата при майката и детето, положителни ELISA и RPGA при новороденото и имуноблотинг.

Бременните жени трябва да бъдат изследвани за сифилис, особено тези, които вече са имали мъртво раждане, неразвита бременност или ранни спонтанни аборти. Те извършват RMP, ELISA, RPGA. Те се изследват за наличие на заболяване преди прекъсване на бременността.

Правила за получаване на тест за сифилис

За да получите направление за лабораторията, трябва да посетите местния лекар. Ако искате да се изследвате по-бързо, това може да стане в частна лаборатория без направление (например лабораториите Инвитро правят тест за сифилис бързо и анонимно).

Как да се изследваме за сифилис?Кръвта се дарява сутрин, на празен стомах. Можете да пиете само чиста вода.

Приготвяне:Два дни преди теста трябва да изключите от диетата си мазни храни и особено алкохол.

Как се прави анализът?по обичайния начин от пръст или лакътна вена.

Колко време отнема изследването за сифилис?Резултатът от теста обикновено е готов на следващия ден. Преписът може да бъде взет от лекар или лаборатория.

Колко дълго е валиден анализът?До три месеца.

Анализ на цереброспиналната течност

В някои случаи се взема изследване на цереброспиналната течност за диагностициране на невросифилис.

Този преглед се предписва на всички пациенти с латентен сифилисако имат признаци на патология на нервната система, както и с латентен и късен невросифилис.

В допълнение, анализът се извършва на всички пациенти след възстановяване, ако поддържат положителни серологични реакции. Вече писахме в нашата статия, че това явление се случва доста често.

Анализът на цереброспиналната течност за сифилис се предписва и извършва само от лекар.

Цереброспиналната течност се получава чрез пункция между два прешлена лумбална област. Събира се по 4 ml в две епруветки. След това мястото на пункцията се третира с йод и се покрива със стерилна превръзка. След пункцията пациентът трябва да лежи по корем с повдигнат крак на леглото поне 3-4 часа, след което може да легне настрани. Почивка на леглослед пункцията е показан за два дни.

Цереброспиналната течност от първата епруветка се изследва с помощта на общоприети реакции за съдържание на протеини, клетки и определяне на признаци на менингит (възпаление на менингите).

Цереброспиналната течност от втората тръба се изследва за съдържанието на антитела срещу трепонема, като се използва реакцията на Васерман, RMP, RIF и RIBT, които обсъдихме по-горе.

Според тежестта на нарушенията се разграничават четири вида промени в цереброспиналната течност. Анализирайки ги, лекарят може да заключи за наличието на различни форми на увреждане на нервната система (съдов невросифилис, сифилитичен менингит, менинговаскуларен сифилис, tabes dorsalis, късен мезенхимен невросифилис), както и за възстановяването на пациента с положителни серологични резултати. тестове.

размер на шрифта

ЗАПОВЕД на Министерството на здравеопазването на СССР от 02-09-85 1161 ЗА ПОДОБРЯВАНЕ НА СЕРОЛОГИЧНАТА ДИАГНОСТИКА НА СИФИЛИС (заедно с ИНСТРУКЦИИ ЗА... От значение през 2018 г.

Методика за настройка на RIF - ABS

Тестван кръвен серум

Кръвта за получаване на кръвен серум се взема от антекубиталната вена в чиста и суха епруветка в обем от 5 ml и се обработва по същия начин, както при реакцията на Васерман. Кръвният серум се инактивира еднократно при температура 56° за 30 минути. Поради факта, че RIF-abs е поставен нестерилен, не е необходимо използването на стерилни контейнери и спазването на стерилни условия при съхранение на кръвен серум. Важно е само за по-дълго запазване на кръвните серуми преди изследване.

Като антиген се използва суспензия от щам Nichols на патогенна бледа Treponema от 7-дневен орхит на заек. Здрави мъжки зайци с отрицателни резултати от теста на Васерман и RIT се заразяват интратестикуларно, а при поява на орхит трепонемите pallidum се отстраняват от тестисите по същия начин, както при получаване на антиген за RIT. Получената суспензия от бледа трепонема се излива от парченцата яйца в стерилни епруветки с памучни запушалки и се оставя в хладилник при 4°C за един ден, след което се отделя от утайката и се съхранява при същите условия за целия период на употреба.

Получаването и съхранението на антигена изисква спазване на стерилни условия, т.к със същия антиген може да се направи реакция в рамките на 2-4 месеца. За антигена трябва да изберете суспензия, в която не се наблюдава аглутинация на трепонемите и има достатъчно количество от тях. Антигенът може да се получи в ампули от други лаборатории. Преди всяка реакция суспензията се разбърква добре и се изследва под микроскоп с кондензатор за тъмно поле, за да се определи нейната плътност. За извършване на RIF-abs е необходима суспензия, съдържаща 40-60 трепонема в тъмно зрително поле, ако има по-дебела суспензия, тя трябва да се разреди.

Като сорбент за RIF-abs може да се използва ултразвуков трепонен антиген за червени кръвни клетки, произведен от Каунаското предприятие за производство на бактериални препарати на Министерството на здравеопазването на СССР. Това е суспензия от смес от култивирани щамове Treponema pallidum V, VII, VIII, IX и Reiter, унищожени чрез ултразвук. Всяка серия сорбент трябва да бъде титрувана преди употреба в RIF-abs за диагностични цели.

Титруване на сорбенти

Сорбентите се титруват върху кръвните серуми на пациенти със сифилис, даващи рязко (4+) и слабо (2+) положителен резултат в RIF при разреждане 1:5, както и върху кръвни серуми на лица, свободни от сифилитична инфекция, даваща отрицателен резултат при RIF-5 и неспецифична позитивност (2+ или повече).

Пример за определяне на титъра на сорбента

Целият сорбент се разрежда с фосфатен буфер, pH = 7,2, 2, 3, 4 пъти или повече. Вземете 3 кръвни серума от пациенти със сифилис, един от които дава силно положителен (4+) резултат при RIF-5, 2 - слабо положителен (2+) и 5 ​​кръвни серума от хора без сифилитична инфекция, 3 от които дават неспецифични резултати и RIF-5 (2+ или повече). Целият кръвен серум се разрежда 5 пъти със сорбент, разрежда се на свой ред 2, 3, 4 или повече пъти с фосфатен буфер. След това кръвният серум се изследва в реакцията. След като се вземат предвид резултатите, се избира разреждане на сорбента, при което сорбираните кръвни серуми на пациенти със сифилис запазват степен на положителност, подобна на тази, получена с кръвни серуми, разредени с фосфатен буфер, и кръвни серуми на лица, свободни от сифилитична инфекция не произвеждат блясък. Това разреждане на сорбента е неговият титър.

Титърът на сорбента в този случай е разреждане 1: 3, при което всички кръвни серуми от пациенти със сифилис запазват степента на положителност, получена в контролата, и в същото време неспецифичната положителност на несифилитични кръвни серуми беше надеждно отстранен.

Антивидов луминисцентен серум

За изследване на човешки кръвни серуми в RIF-abs е необходим белязан с флуорохром кръвен серум от животни, имунизирани с човешки серумен протеин. Лиофилизираният луминисцентен серум се разтваря при стерилни условия в дестилирана вода в обема, посочен на етикета на ампулите, излива се в стерилна епруветка с гумена запушалка и се съхранява при 4°C за 1-2 месеца по време на употреба.

В деня на реакцията необходимото количество от този серум се разрежда титърно с дестилирана вода. Работното разреждане на серума, посочено на етикета, не е подходящо за поставяне на реакция с цел серодиагностика на сифилис, поради което титърът на всяка серия трябва да се определя отново.

Таблица № 13

Резултати от титруване на сорбента

Тествани кръвни серуми	Резултати от RIF-5
	Разреждане на кръвен серум 1:5 с буфер (К)	Разреждане на кръвен серум 1: 5 с разреден сорбент
		1: 2	1: 3	1: 4
Кръвен серум на пациент със сифилис
N 1	4+	3+	4+	4+
N 2	2+	1+	2+	2+
N 3	2+		2+	2+
Несифилитичен кръвен серум
N 1	3+		1+	2+
N 2	2/3+			2+
N 3	2+			2+
N 4	2+			2+
N 5

Титруване на антивидов луминисцентен серум

Вземете 5 кръвни серума от пациенти със сифилис и 5 кръвни серума от здрави хора, разредете ги 5 пъти със сорбент (като вземете предвид неговия титър) и извършете реакция, като използвате във фаза II различни разреждания на луминисцентен серум срещу човешки серумни глобулини от серията чийто титър се определя. Трябва да се има предвид, че титърът на луминесцентните серуми, произвеждани в момента от IEM на името на. N.F. Gamaleya, варира при настройване на RIF-abs от 1: 100 до 1: 140. Когато се вземе предвид реакцията, предварителният титър на луминесцентния серум трябва да се счита, че разреждането, когато се използва с положителни кръвни серуми, добро светене на трепонемите е получена и с отрицателна луминесценция на антигена не е получена. По-голямото разреждане на луминесцентния серум от титъра води до намаляване на чувствителността на реакцията, а по-малкото разреждане води до намаляване на специфичността. След определяне на предварителния титър, той трябва да бъде изяснен от Повече ▼положителни и отрицателни кръвни серуми. За краен титър може да се счита този, който е тестван върху 100 кръвни серума, като поне 20 от тях трябва да са от пациенти със сифилис.

За да се предотврати покълването, след разреждане на сухия луминисцентен серум с дестилирана вода е необходимо да се добави мортиолат към него в размер на 1 обем от неговия разтвор 1: 1000 до 9 обема луминисцентен серум. При вземане на нови ампули от същата серия, титърът трябва да се провери и изясни само за 10 явно положителни и отрицателни кръвни серума.

Пример за определяне на предварителния титър на луминисцентен антиспециален серум

Приготвят се 60 препарата, номерирани от 1 до 60. Вземат се 10 кръвни серума - 5 от болни от сифилис, 5 от здрави хора. Целият кръвен серум се разрежда 5 пъти с титриран сорбент.

На препарати с номера 1-10, 11-20, 21-30, 31-40, 41-50, 51-60, във фаза I на реакцията се прилагат същите 10 кръвни серума, разредени 5 пъти със сорбент. Във фаза II на реакцията луминисцентен серум, разреден 1:100, се прилага към 1-10 лекарства, 1:110 към 11-20, 1:120 към 21-30, 1:130 към 31-40, 1 към 41-50 : 140, при 51-60 - 1: 150.

Техника за настройка на RIF-abs

Препаратите се приготвят от антигена върху тънки, добре обезмаслени предметни стъкла, на задна странаот които кръгове с диаметър 0,7 cm се маркират със стъклорез (10 кръга на 1 предметно стъкло). В рамките на кръга върху стъклото се нанася антигенна суспензия на Treponema pallidum. Запечатаният край на пипетата на Пастьор в кръгово движениесуспензията се разпределя в кръга, суши се на въздух и се фиксира за 10 минути в химически чист ацетон. След това лекарствата се номерират. Инактивираните тестови кръвни серуми се разреждат 5 пъти със сорбент, разреден по титър с буферен разтвор. В стелаж се поставят няколко епруветки, чийто брой и брой съответстват на броя и броя на изследваните кръвни серуми. Пипетирайте 0,2 ml разреден сорбент в епруветки, след това добавете 0,05 ml цял кръвен серум и разбъркайте добре. Кръвният серум може да се разреди с помощта на апарата Florinsky. Върху антигена се нанася кръвен серум, разреден със сорбент, така че да покрие равномерно намазката, а препаратите се поставят във влажна камера, която се затваря с капак и се поставя в термостат при 37° за 30 минути (фаза I на реакцията). След първата фаза препаратите се промиват внимателно в 2 порции фосфатен буфер, а във втората част препаратите се поставят за 10 минути, изсушават се, след което отново се поставят във влажна камера, луминисцентен серум, разреден по титър. прилага се и се оставя на стайна температура за 30 минути (фаза II реакции). В края на втората фаза препаратите се промиват с фосфатен буфер, както е описано по-горе, изсушават се и върху повърхността на намазките се нанася капка нелуминесцентно имерсионно масло (диметилфталат).

Изследването на препаратите се извършва във флуоресцентен микроскоп с живачно-кварцова лампа DRSh-250 с потапяща система, окуляр 4X или 5X, филтри SZS-7 или 14, FS-1. BS-8 и ZhS-18 или T-2N. Реакцията се взема предвид чрез оценка на блясъка на Treponema pallidum. Кръвните серуми, които дават блясък 4+, 3+ и 2+, се считат за положителни в RIF-abs. Брилянтен зелено-жълт блясък се оценява на 4+, ярък - 3+, слаб блясък - 2+. Кръвните серуми, които дават блясък 1+ (трепонема в препарата са оцветени по-интензивно от фона) или не го дават, се считат за отрицателни.

Във всяка настройка на RIF-abs трябва да се използват следните контроли:

Силен положителен контрол. Кръвен серум на пациент със сифилис, даващ луминесценция 4+ при 5-кратно разреждане с буфер. При 5-кратно разреждане със сорбент кръвният серум не трябва да губи степента си на положителност с повече от 1+.

Слаба положителна контрола. Пълен или разреден кръвен серум на пациент със сифилис, даващ слаба степен на луминесценция на антигена 2+ при 5-кратно разреждане с буфер. Когато се разрежда със сорбент, неговата положителност трябва да остане.

Неспецифичен контрол. Несифилитичен кръвен серум, който дава флуоресценция най-малко 2+, когато се разрежда с буфер. Когато се разрежда със сорбент, неговата положителност трябва да се елиминира.

Контролите на антиген, сорбент, луминисцентен серум могат да се инсталират само при използване на нови серии от тези съставки.

Методика за извършване на RIF-abs с капилярна кръв

RIF-abs може да се извършва не само с кръвен серум, но и с кръв, взета от пръст. Тази модификация на RIF-abs може да се използва при изследване на деца за сифилис, когато е трудно да се получи кръв от вена при възрастни и по време на масово изследване на различни популации за сифилис.

При поставяне на RIF-abs с кръв се използват същите реакционни съставки, както при поставяне на RIF-abs с кръвен серум (антиген, сорбент, луминесцентен серум). Титърът на луминесцентния серум се определя съгласно горната схема, но при поставяне на реакция с кръв. След пробиване на пръста на пациента кръвта за изследване се изтегля с микропипета до марката 0,1 ml, бързо се издухва в епруветка, съдържаща 0,3 ml дестилирана вода, разбърква се старателно с пипета и се филтрира през хартиен филтър, навлажнен с дестилирана вода. Реакцията с разредена кръв може да се извърши или в деня на вземане, или след 1-2 дни, при условие че се съхранява при 4°C.

Непосредствено преди реакцията към всички кръвни проби, включени в реакцията, се добавят 0,1 ml цял сорбент, смесват се с пипета и се разклащат и се поставят в термостат при 37° за 30 минути. След това кръвта, обработена със сорбента, се нанася върху антигенните петна и се поставя във влажна камера при 37° (фаза 1 на реакцията). След изтичане на периода на експозиция препаратите се промиват с първата порция фосфатен буфер, за да не останат следи от кръв върху предметните стъкла и се поставят във втората част от буфера за 10 минути. След изсушаване на намазките се провежда II фаза на реакцията. В този случай към препаратите се прилага луминесцентен серум срещу човешки глобулини, разреден според титъра, установен за тази модификация на RIF. Стъклата в мократа камера отново се поставят в термостат при 37°.

След 30 минути предметните стъкла се промиват отново в 2 порции фосфатен буфер за 10 минути, изсушават се и се поставят за флуоресцентна микроскопия. Изследването на лекарствата и записването на резултатите от реакцията се извършват по същия начин, както при извършване на RIF-abs с кръвен серум.

Методология за настройка на RIF-200

Методът за настройка на RIF-abs и RIF-200 е подобен. При настройване на RIF-200, обработката на тестови кръвни серуми, приготвянето на антиген, приготвянето на антивидов луминесцентен серум и неговото титруване се извършват по същия начин, както при настройката на RIF-abs. Трябва само да се има предвид, че титрите на луминесцентния серум, произвеждан в момента в RIF-200, варират от 1:20 до 1:50.

Техника за настройка на RIF-200

Тестовите кръвни серуми се разреждат 200 пъти с фосфатен буфер. За да направите това, в стойка се поставят 3 реда епруветки, чийто брой и номерация във всеки ред съответстват на броя и номерацията на изследваните кръвни серуми в работната книга. В първия ред се изсипват цели тестови кръвни серуми, във втория ред се изсипват 0,45 ml буфер в епруветките, в третия - 0,95 ml буфер. Във втория ред се приготвя 10-кратно разреждане на кръвния серум, за което от всяка епруветка на първия ред се вземат по 0,05 ml от пробния кръвен серум с отделна градуирана пипета от 1 ml, прехвърлени в съответната епруветка на втория ред и се смесва с наличния там буфер. От всяка епруветка от втория ред, като използвате същата пипета, прехвърлете 0,05 ml от тестовия кръвен серум, разреден 10 пъти, в съответната епруветка от третия ред и получете 200-кратно разреждане.

При установяване на реакция тестовите кръвни серуми, разредени 200 пъти, се прилагат към лекарства, поставени във влажна камера, така че техните номера, посочени в епруветките, да съответстват на номерата на предметните стъкла. След нанасяне на кръвен серум върху препаратите, влажната камера се поставя за 30 минути в термостат с температура 37 ° (I фаза на реакцията). След това препаратите се промиват за 10 минути в 2 порции буфер и се изсушават. След това те отново се поставят във влажна камера и върху всички тях се прилага луминесцентен серум, разреден по титър (II фаза на реакцията). Втората фаза се провежда за 30 минути при стайна температура, след което препаратите се промиват за 10 минути, изсушават се и се монтират за флуоресцентна микроскопия.

Резултатите от RIF-200 се вземат предвид по същия начин като RIF-abs.

В случай, че клиницистите се интересуват от титъра на флуоресцентните антитела в кръвния серум на пациента, RIF-abs и RIF-200 трябва да се прилагат със серийно разреждане на тестовите кръвни серуми и титърът на флуоресцентните антитела трябва да се счита за най-високото разреждане на кръвния серум, който все още дава положителен резултат от реакцията. Обичайно е титърът да се обозначава с число, характеризиращо степента на разреждане на тествания кръвен серум, например 5, 10, 20, 40 и др. (RIF-abs) или 200, 400, 800 и т.н. (RIF-200).

При установяване на двете модификации на реакцията трябва да се използва фосфатен буфер със следния състав за разреждане на изследваните кръвни серуми и за измиване на препаратите след фази I и II: 1 литър дестилирана вода, 6,8 g натриев хлорид, 1,48 g двузаместен натриев фосфат, 0.43 g монозаместен калиев фосфат (PH = 7.2). Приготвеният разтвор се съхранява при стайна температура за не повече от седмица.

Поради възможността за получаване на отрицателни резултати при наличие на флуоресцентни антитела, кръвта и серумът не трябва да се изследват в RIF-abs и RIF-200 по време на лечение на пациенти с пеницилин.

Методика за настройка на РИФ-ц

Ранното диагностициране на увреждане на нервната система, дължащо се на сифилис, е неотложен проблем в борбата срещу това заболяване. Поради факта, че RIF-c е по-чувствителен от всички други тестове, използвани за диагностика на сифилис чрез цереброспинална течност, тази модификация на RIF може да се препоръча за диагностициране на сифилитични лезии на централната нервна система при всички форми на сифилис.

За тестване на RIF-c се използва същият антиген, луминесцентен серум, както за тестване на RIF-abs и RIF-200 с кръвен серум. Определянето на флуоресцентни антитела в цереброспиналната течност и кръвния серум и записването на реакцията също са подобни.

Цереброспиналната течност се въвежда в реакцията неактивирана и непокътната. Преди да се проведе реакцията, може да се съхранява във фризерното отделение на хладилника в епруветки под гумени запушалки до 2 седмици. Размразяването се извършва при стайна температура.

Техника за настройка на РИФ-ц

Във фаза I на реакцията към антигена се прилагат 0,05 ml неразредена изследвана цереброспинална течност, препаратите се поставят във влажна камера за 30 минути при стайна температура. След това се промиват с фосфатен буфер, рН = 7,2, в продължение на 10 минути и се сушат. Във фаза II към препаратите се прилага разреден луминисцентен серум, който се титрира при установяване на реакция с цереброспиналната течност. Препаратите се държат при стайна температура в продължение на 30 минути във влажна камера, измиват се, изсушават се и се поставят за флуоресцентна микроскопия.

Източници на грешки

1. Неспазване на условията за подготовка, съхранение на реактивите и настройка на реакцията.

2. Ниско качество на луминесцентния серум и неточно определяне на неговия титър.

3. Прилагане на тестовия материал или луминисцентен серум при задаване на реакция не към лекарството, а към другата страна на предметното стъкло.

4. Неправилна настройка на осветлението във флуоресцентния микроскоп.

5. Ниско качество на антигена.