בית → ניתוחים → שיטה אימונולוגית → תגובות המגלוטינציה (שיטה אימונולוגית)

תגובות צבירהמבוסס על אינטראקציה של מגיב (נוגדנים) עם אנטיגנים הממוקמים על פני השטח של תאים או חלקיקים זרים. כתוצאה מכך, נוצרים אגרגטים במידות גדולות, אשר משקעים וניתן לראות אותם אפילו בעין בלתי מזוינת. כך, קבוצת הדם נקבעת על פי מערכת ABO, הימצאות גורם ה-Rh בה וכו'. זוהי שיטת אבחון רגישה יותר בהשוואה לתגובות משקעים, שכן נפח המשקעים (אגלוטינאט) עולה על נפח המשקעים.

המגלוטינציה ישירה

בדיקת ההמגלוטינציה הישירה (RPHA) משמשת לאיתור אנטיגנים על פני השטח של מיקרואורגניזמים ואריתרוציטים, כמו גם נוגדנים אליהם.
ל סרה סטנדרטיתהמכיל נוגדנים, הוסף את חומר הבדיקה (דם). קצב תגובת האגלוטינציה הישירה קשור לכמות החומר הנבדק, לכמות וריכוז הסרום ולטמפרטורת הסביבה.

המגלוטינציה עקיפה

תְגוּבָה המאגלוטינציה עקיפהמבוצעת לאיתור נוגדנים בדם המטופל באמצעות אבחון אריתרוציטים. המגיב הוא אריתרוציטים, שעל פני השטח שלהם נמצא אנטיגן (חלבונים של מיקרואורגניזמים, רעלים, אלרגנים וכו ').
סרום הדם של המטופל מדולל בתמיסת נתרן כלוריד 0.9%, לאחר מכן מוסיפים אבחון אריתרוציטים ועוקבים אחר התוצאה. שיטת אבחון רגישה זו מזהה אנטיגנים אפילו בריכוזים נמוכים.

תגובת ההמגלוטינציה (RGA).

במעבדה משתמשים בשתי תגובות המגלוטינציה שונות.

ה-RGA הראשון מתייחס לסרולוגי. בתגובה זו, אריתרוציטים נאגרים בעת אינטראקציה עם הנוגדנים המתאימים (המגלוטינינים). התגובה נמצאת בשימוש נרחב לקביעת קבוצות דם.

ה-RHA השני אינו סרולוגי. בו, אגלוטינציה של אריתרוציטים נגרמת לא

נוגדנים, אבל חומרים מיוחדים שנוצרו על ידי וירוסים. לדוגמה, נגיף השפעת מצמיד אריתרוציטים של עוף ו שרקנים, וירוס פוליומיאליטיס - אריתרוציטים של כבשים. תגובה זו מאפשרת לשפוט את נוכחותו של וירוס מסוים בחומר הבדיקה.

התגובה מתבצעת במבחנות או על צלחות מיוחדות עם בארות. החומר שייבדק לנוכחות הנגיף מדולל בתמיסה איזוטונית מ-1:10 עד 1:1280; 0.5 מ"ל מכל דילול מעורבב בנפח שווה של תרחיף אריתרוציטים של 1-2%. בביקורת, 0.5 מ"ל של אריתרוציטים מעורבבים עם 0.5 מ"ל של תמיסה איזוטונית. את המבחנות מכניסים לתרמוסטט למשך 30 דקות, והצלחות נשארות בטמפרטורת החדר למשך 45 דקות.

התחשבנות בתוצאות.בְּ תוצאה חיוביתתגובה בתחתית הצינור או הבאר, נופל משקע של אריתרוציטים עם קצוות מסולסלים ("מטריה"), המכסה את כל תחתית הבאר. אם התוצאה שלילית, האריתרוציטים יוצרים משקעים צפופים עם קצוות חלקים ("כפתור"). אותו המשקע צריך להיות בשליטה. עוצמת התגובה מתבטאת בסימני "+".

תגובת ההמגלוטינציה

הטיטר של הנגיף הוא הדילול המקסימלי של החומר שבו מתרחשת אגלוטינציה.

תגובה לעיכוב ההמגלוטינציה

זוהי תגובה סרולוגית שבה ספציפית נוגדנים אנטי-ויראליים, אינטראקציה עם הנגיף (אנטיגן), לנטרל אותו ולשלול את היכולת לצבור אריתרוציטים, כלומר, לעכב את תגובת ההמגלוטינציה. תגובה זו מאפשרת לך לקבוע את סוג וסוג הווירוסים.

הגדרת תגובה. 0.25 מ"ל של סרום אנטי ויראלי מעורבב עם נפח שווה של חומר המכיל את הנגיף. את התערובת מנערים ומניחים בתרמוסטט למשך 30 דקות, ולאחר מכן מוסיפים 0.5 מ"ל של תרחיף אריתרוציטים 1-2%.

התחשבנות בתוצאות.עם ההגדרה הנכונה של הניסוי בבקרת נסיוב ואריתרוציטים, צריך להיווצר "כפתור" - אין גורם שמצמיד אריתרוציטים; בבקרת האנטיגנים נוצרת "מטריה" - הנגיף גרם לאגלוטינציה של אריתרוציטים. אם הסרום הומולוגי לנגיף הנחקר, נוצר "כפתור" - הסרום ניטרל את הנגיף.

תגובה עקיפה להמגלוטינציה

התגובה של hemagglutination עקיפה (פאסיבית) (RIHA) מבוססת על העובדה שאריתרוציטים, אם אנטיגן מסיס נספג על פני השטח שלהם, רוכשים את היכולת להצטבר בעת אינטראקציה עם נוגדנים לאנטיגן הנספג.

הגדרת תגובה.הסרום מחומם במשך 30 דקות ב-56 מעלות צלזיוס, מדולל ברצף ביחס של 1:10 - 1:1280 ומוזג למבחנות או בארות ב-0.25 מ"ל, ואז מוסיפים 2 טיפות של אריתרוציטים עם אנטיגנים ספוגים עליהם.

בקרות:תרחיף של אריתרוציטים עם אנטיגנים נספחים עליהם עם סרום חיסוני ברור, תרחיף של אריתרוציטים עם אנטיגנים שנספג עליהם בסרום תקין; השעיה של אריתרוציטים תקינים עם הסרום הנבדק. בביקורת הראשונה אמורה להתרחש אגלוטינציה, בשנייה ובשלישית היא לא אמורה להיות.

שאלות בקרה.

1. מה מעידה תוצאת RGA חיובית בין אריתרוציטים לחומר שנבדק לנוכחות הנגיף?

2. האם תתרחש תגובת אגלוטינציה של אריתרוציטים אם יתווספו להם וירוס והסרום המתאים לו? מה שם התגובה שחושפת את התופעה הזו?

עבודה מעשית מס' 12.

תגובה מחייבת משלים.

התגובה הקושרת המשלים (RCT) מבוססת על העובדה שקומפלקס אנטיגן-נוגדנים ספציפי סופח (קושר) משלים על עצמו תמיד.

תגובה זו נמצאת בשימוש נרחב בזיהוי אנטיגנים וסודיאגנוזה של זיהומים, במיוחד מחלות הנגרמות על ידי ספירוצ'טים (תגובת וסרמן), ריקטסי ווירוסים.

PCS היא תגובה סרולוגית מורכבת. זה כולל משלים ושתי מערכות אנטיגן-נוגדנים. בעיקרו של דבר, אלה שתי תגובות סרולוגיות.

המערכת הבסיסית הימנית מורכבת מאנטיגן ונוגדן (אחד ידוע, השני לא). מתווספת לו כמות מסוימת של השלמה. אם האנטיגן והנוגדן של מערכת זו מתאימים, הם יתחברו ויקשרו מחמאה. הקומפלקס המתקבל מפוזר דק ואינו נראה לעין.

היווצרותו של קומפלקס זה ידועה בעזרת מערכת המוליטית או אינדיקטור שנייה. הוא כולל אריתרוציטים של כבשים (אנטיגן) והסרום ההמוליטי המתאים להם (נוגדן), כלומר. תסביך חיסוני מוכן. במערכת זו, תמוגה אריתרוציטים יכולה להתרחש רק בנוכחות משלים. אם המשלים קשור למערכת הראשונה, אזי לא תהיה המוליזה במערכת השנייה; אין משלים בחינם. היעדר המוליזה (תוכן הצינור מעונן או שיש משקע אריתרוציטים בתחתית הצינור) נרשם כתוצאה חיובית של RSK.

אם במערכת הראשונה האנטיגן אינו מתאים לנוגדן, אזי הקומפלקס החיסוני לא נוצר והמחמאה תישאר חופשית. נשאר חופשי, המחמאה משתתפת במערכת השניה, גורמת להמוליזה, התוצאה של RSK היא שלילית (תוכן הצינורות שקוף - "דם לכה").

רכיבים, תגובות קיבוע משלים:

1. אנטיגן - בדרך כלל ליזאט, תמצית, הפטן,

לעתים רחוקות יותר השעיה של מיקרואורגניזמים.

2. נוגדן - סרום של מטופל.

3. משלים - סרום שפן ניסיונות.

4. אנטיגן - אריתרוציטים של כבשים.

5. נוגדן - המוליזין לאריתרוציטים של כבשים.

6. תמיסה איזוטונית.

לאור העובדה שה-RSC משתתף מספר גדול שלרכיבים מורכבים,

יש לבצע טיטרציה מראש ולקחת אותם לתוך התגובה בכמויות מדויקות ובנפחים שווים: 0.5 או 0.25 מ"ל, לעתים רחוקות יותר 0.2, 1.25 או 1.0 מ"ל (נפחים גדולים יותר נותנים תוצאה מדויקת יותר). הטיטרציה של מרכיבי התגובה מתבצעת באותו נפח כמו הניסוי, תוך החלפת המרכיבים החסרים בתמיסה איזוטונית.

מידע קשור:

חיפוש אתר:

התגובה של המאגלוטינציה עקיפה או פסיבית (RNHA או RPHA) רגישה וספציפית יותר מתגובת האגלוטינציה. תגובה זו משמשת גם בשני כיוונים.

1) לאיתור נוגדנים בסרום הדם של המטופל, נעשה שימוש באבחני אריתרוציטים, בהם האנטיגן נספג על פני אריתרוציטים המטופלים בטאנין. ביחס לתגובה זו, המונח RPHA משמש לעתים קרובות יותר.

סרום הבדיקה מדולל בבארות של צלחות פלסטיק ומוסיפים אבחון אריתרוציטים. עם תגובה חיובית, סרט דק מופיע לאורך קירות החור בצורה של "מטריית תחרה", עם תְגוּבָה חֲרִיפָה- משקע צפוף של אריתרוציטים בצורה של "כפתור".

2) כדי לזהות רעלים ואנטיגנים חיידקיים בחומר הנחקר, נעשה שימוש באבחון אריתרוציטים נוגדנים המתקבלים על ידי ספיחה של נוגדנים על אריתרוציטים. ביחס לתגובה זו, המונח RNGA משמש לעתים קרובות יותר. לדוגמה, בעזרת אבחון נוגדנים, מתגלים אנטיגן החיידק המגפה, אקזוטוקסין דיפתריה, אקזוטוקסין בוטולינום.

מהו אבחון אריתרוציטים? מהו אבחון אריתרוציטים נוגדנים?

אריתרוציטים אבחוניים הם אריתרוציטים (מטופלים בטאנין או פורמלין) עם אנטיגנים המופקים מחיידקים שנספגים עליהם ומשמשים ב-RPHA (תגובת המאגלוטינציה פסיבית). במקרה שבו משתמשים ב-RPGA לזיהוי אנטיגן בהפרשות של חולים, ברקמות וכו', משתמשים ב"אבחוני נוגדנים", כלומר אריתרוציטים שעברו רגישות בנוגדנים.

ב-RNGA מגלים נוגדנים בסרום הדם באמצעות אנטיגני אריתרוציטים דיאגנוסטיקום, שהוא אריתרוציטים עם אנטיגנים נספגים עליהם.

טכניקה של קביעת תגובות. תגובת קרישה.

- קיבוע של אריתרוציטים עם פורמלדהיד או אלדהידים גלוטריים או אקריליים. אריתרוציטים מעובדים כאלה מאוחסנים במשך זמן רב. לעתים קרובות יותר, אריתרוציטים של כבשים, בני אדם, תרנגולות וכו 'משמשים למטרה זו;
- טיפול באריתרוציטים קבועים עם תמיסת טאנין. כתוצאה מכך, אריתרוציטים רוכשים את המאפיין של ספיגה בלתי הפיכה של חלבונים (וירוסים ונוגדנים) על פני השטח שלהם;
- רגישות של אריתרוציטים מוזנים על ידי וירוסים או נוגדנים.

תגובת קרישה (RCA)

תגובת הקרישה משמשת לקביעת אנטיגנים באמצעות נוגדנים הנספגים על חלבון A של תאי סטפילוקוקוס (נוגדנים דיאגנוסטיקום).
לחלבון A יש זיקה למקטע Fc של אימונוגלובולינים; לכן, חיידקים כאלה שטופלו בסרום אבחנתי חיסוני סופחים באופן לא ספציפי נוגדנים בסרום, אשר לאחר מכן מקיימים אינטראקציה עם מרכזים פעילים עם החיידקים המתאימים מבודדים מהמטופלים. כתוצאה מהקרישה נוצרים פתיתים המורכבים מסטפילוקוקים, נוגדנים סרום אבחנתיים והחיידק הנקבע.

סרומים מאגרים: מה הם מכילים; איך הם מתקבלים, למה הם משמשים; מהו הטיטר של סרום אגלוטינציה?

סרום אגרוטיני מתקבל על ידי חיסון של ארנבות (תוך ורידי, תת עורי או תוך צפק) עם תרחיף של חיידקים מומתים, החל במינון של 200 מיליון, לאחר מכן 500 מיליון, 1 מיליארד, 2 מיליארד גופים מיקרוביאליים ב-1 מ"ל, במרווחים של 5 ימים. 7-8 ימים לאחר החיסון האחרון, לוקחים דם וקובעים את טיטר הנוגדנים.

הטיטר של סרום אגלוטינציה הוא הדילול המרבי של נסיוב שבו מתרחשת אגלוטינציה עם המיקרואורגניזם המתאים.

סראים אגרולים משמשים לזיהוי חיידק בתגובת אגלוטינציה ממושכת.

תגובה להמגלוטינציה (RHA)

אם המיקרואורגניזם הנחקר נאגר על ידי סרום לטיטר או למחצית מערך הטיטר, ניתן לראות בו כשייך למין ששמו מצוין על תווית האמפולה.

מה הם ההבדלים בין סרה מצמידה רב-ערכית וחד ערכית (חד-רצפטנית); מדוע חיסון של ארנב עם חיידקים ממין אחד מייצר סרום המכיל נוגדנים למספר אנטיגנים?

סרה מונורצפטורים - סרה המכילה נוגדנים לאנטיגן אחד בלבד, וסרה רב ערכית, הנותנת תגובות אגלוטינציה עם שניים או שלושה חיידקים קשורים בעלי אנטיגן משותף. סרומים אגרולים משמשים לזיהוי מיקרואורגניזמים בתגובת האגלוטינציה. החיסרון של סמים כאלה הוא שהם מסוגלים לתת תגובות אגלוטינציה קבוצתיות, tk. הם מכילים נוגדנים לחיידקים שיש להם אנטיגנים משותפים.

תגובת ההמגלוטינציה. תיאור ויישום

זה מבוסס על העובדה כי אריתרוציטים, שעליהם אנטיגנים נספגים מראש, רוכשים את היכולת להצטבר בנוכחות סרה הומולוגית (נוגדנים).

במקרה זה, אריתרוציטים ממלאים את התפקיד של נשאים עם דטרמיננטים ספציפיים, שהאגלוטינציה שלהם מתרחשת כתוצאה מתגובת האנטיגן + נוגדן.

אריתרוציטים, שעל פני השטח שלהם אנטיגנים מחוברים בחוזקה, נקראים אנטיגנים אריתרוציטים, או אריתרוציטים שעברו רגישות על ידי אנטיגן.

סוג נוסף של RNHA - נוגדנים נספגים על פני האריתרוציטים והאצטגרציה שלהם מתרחשת לאחר מכן בנוכחות אנטיגן הומולוגי. במקרה זה, אריתרוציטים כאלה נקראים אבחון נוגדן אריתרוציטים, או אריתרוציטים שעברו רגישות על ידי נוגדנים.

על בסיס שתי גישות מתודולוגיות בסיסיות אלו, פותחו שינויים רבים של RNGA ונמצאים בשימוש. אז, חלקיקים סטנדרטיים קטנים של לטקס משמשים כנשאים. במקרה זה, התגובה נקראת תגובת לטקס אגלוטינציה (RLA) או משמשת Staphylococcus aureus- תגובת קרישה וכו'. בדרך כלל, אבחון אריתרוציטים מוכנים במפעלים של התעשייה הביולוגית, והניסיון העיקרי של RNGA כבר מותקן במעבדות אבחון.

הכנת אבחון אריתרוציטים כוללת את השלבים הבאים:

• קיבוע של אריתרוציטים עם פורמלדהיד או אלדהידים גלוטריים או אקריליים. אריתרוציטים מעובדים כאלה מאוחסנים במשך זמן רב. לעתים קרובות יותר, אריתרוציטים של כבשים, בני אדם, תרנגולות וכו 'משמשים למטרה זו;
• טיפול באריתרוציטים קבועים עם תמיסת טאנין. כתוצאה מכך, אריתרוציטים רוכשים את המאפיין של ספיגה בלתי הפיכה של חלבונים (וירוסים ונוגדנים) על פני השטח שלהם;
• רגישות של אריתרוציטים מזויפים על ידי וירוסים או נוגדנים.

יצוין כי שיטות ההכנה של אבחון אריתרוציטים עבור זיהום ויראלישונה.

הטכניקה להגדרת RNHA לאיתור וקביעת טיטר נוגדנים היא כדלקמן:

• לדילול רציף של פי 2 של סרום הוסף מינונים שווים של אריתרוציטים שעברו רגישות על ידי אנטיגן;
• משאירים את התערובת למשך 2-3 שעות בטמפרטורת החדר או למשך 16-18 שעות ב-4 מעלות צלזיוס;
• לקחת בחשבון את התוצאות. אם הסרום מכיל נוגדנים לנגיף שאיתו נרשמו אריתרוציטים, נצפה בהמגלוטינציה, המוערכת בהצלבות.

טיטר נוגדני סרום נלקח כדילול הגבוה ביותר של סרום שעדיין מספק המגלוטינציה בשני הצלבות לפחות.

RNGA מלווה בכל הבקרות הרלוונטיות. בדרך כלל הם מכניסים את התגובה לפי שיטת המיקרו.

RNHA מאפשר לפתור את משימות האבחון הבאות:

• לזהות נוגדנים ולקבוע את הטיטר שלהם בסרום הדם באמצעות אבחון אנטיגני אריתרוציטים ידוע;
• לזהות ולזהות וירוס לא ידוע באמצעות אבחון נוגדן אריתרוציטים ידוע.

יתרונות RNGA: רגישות גבוהה, טכניקת הגדרה קלה ותגובה מהירה. עם זאת, חשוב לציין שקיימים קשיים גדולים בהכנת אבחוני אריתרוציטים יציבים (תלות רבה בטוהר הרכיבים המשמשים, הצורך בבחירת אופן הקיבוע, השיזוף וסנסיטיזציה של אריתרוציטים לכל סוג וירוס) .

אם אתה מוצא שגיאה, אנא בחר קטע טקסט והקש Ctrl+Enter.

בקשר עם

תגובה של הגלוטינציה עקיפה, RNGA
(בדיקת המגלוטינציה עקיפה)

שיטה לזיהוי אנטיגנים ונוגדנים, המבוססת על יכולתם של אריתרוציטים, שעל פני השטח שלהם נספגים מראש אנטיגנים או נוגדנים, להצטבר בנוכחות סרה הומולוגית או אנטיגנים מתאימים.

כאשר מתגלים אנטיגנים, התגובה מצוינת בהמגלוטינציה פסיבית הפוכה - ROPHA (בדיקת המגלוטינציה פסיבית הפוכה), וכאשר מתגלים נוגדנים - בהמגלוטינציה פסיבית - RPHA (בדיקת המגלוטינציה פסיבית). RNHA מצאה יישום רחב לאיתור סמנים סרולוגיים של זיהום בנגיף הפטיטיס B, במיוחד HBsAg ונוגדנים אליו.

כרגע מפותח שיטות שונותייצור אבחוני אריתרוציטים, שונים בשיטות הרגישות של אריתרוציטים (באמצעות טאנין, גלוטראלדהיד, כרום כלוריד, ריבנול וכו'), המינים שלהם (אדם, איל, עוף, הודו וכו'), אפשרויות להגדרת התגובה ( בצלחות מיקרוטיטר, מבחנות, נימים וכו') ורישום תוצאות (ויזואלי ואינסטרומנטלי). אבחון אריתרוציטים לאיתור HBsAg ואנטי-HBs מיוצרים על ידי מפעלים וחברות רבות בארץ ובחו"ל.

לעתים קרובות יותר, RNHA מתבצע בצלחות מיקרוטיטר, בהן מכינים מראש דילולים של סרום הבדיקה ודגימות הבקרה. לאחר החדרת אבחון אריתרוציטים והדגירה, תוצאות התגובה נרשמות. דגימות שבהן מתרחשת אגלוטינציה של אריתרוציטים, בעלות צורה של "מטריה הפוכה", נחשבות חיוביות. עם תגובה שלילית, אריתרוציטים מתיישבים לתחתית הבאר בצורה של טבעת או דיסק.

כדי לאשר את הספציפיות של התוצאות שהתקבלו, התגובה מבוצעת הן עם אבחון אריתרוציטים "ניסיוני" (כלומר, אריתרוציטים רגישים עם אנטיגן או נוגדנים) והן עם אבחון "בקרה" (כלומר, אריתרוציטים אינם רגישים עם אנטיגן או נוגדנים) . נוכחות של תגובה חיובית עם תוצר אבחון "שליטה" מעידה על תגובה חיובית כוזבת. כדי למנוע תגובות לא ספציפיות, הסרום הבדיקה מטופל באריתרוציטים לא רגישים. תנאי מוקדם לביצוע RNGA הוא תגובת נטרול, כלומר בדיקת אישור.

בהשוואה לשיטות כמו RPG, VIEF ו-RSK, לתגובה של המגלוטינציה עקיפה יש רגישות גבוהה יותר (פי 200-400). לפיכך, ניתן לזהות HBsAg ב-TPHA בריכוזים של 6-10 ng/ml. פשטות התגובה והמהירות (20 - 30 דקות) קבעו את היישום הרחב השיטה הזאתבשירות עירוי דם לגילוי HBsAg.

בנוסף לאבחון אריתרוציטים, פותחו תכשירי אבחון לגילוי HBsAg ואנטי-HBs ועבור גילויים anti-HBs, anti-HBs ממחלקת IgM (וריאנט פאזה מוצק), HBeAg, אנטיגן של וירוס הפטיטיס A ונוגדנים אליו, עם זאת, כולם לא מצאו שימוש בבריאות הציבור המעשית.

התגובה של המאגלוטינציה עקיפה (RIGA).

RIGA משמש בשתי גרסאות: עם אנטיגנים ידועים לאיתור נוגדנים עם נוגדנים ידועים לזיהוי יתר לחץ דם. תגובה זו היא ספציפית ומשמשת לאבחון מחלות הנגרמות על ידי חיידקים וריקטסיה. כדי לבצע RIGA, נעשה שימוש באבחון אריתרוציטים, שהוכן על ידי ספיחה של AG או AT על אריתרוציטים, בהתאם למטרת המחקר (איור 10.3). במקרים חיוביים, מידת צמיחת אריתרוציטים מסומנת בפלוסים. ארבעה פלוסים מעריכים את התגובה, שיש לה צורה של סרט דק של אריתרוציטים נדבקים (מטריה) המכסה את תחתית המבחנה; נוכחות של סרט עם קצוות תחרה מסולסלים מסומנת על ידי שני פלוסים. הטיטר נלקח כדילול המגביל של חומר הבדיקה, שגרם לאגלוטינציה של אריתרוציטים בשני פלוסים.

אורז. 10.3.

1 - אריתרוציטים, 2 - אריתרוציטים AG, 3 - AG מצומד, 4-AT

RGA ותגובת עיכוב hemagglutination (RTGA).

כפי שכבר צוין, RGA מבוסס על יכולתם של אריתרוציטים להיצמד זה לזה כאשר אנטיגנים מסוימים נספגים עליהם. אלנטואים, מי שפיר, תרחיף של ממברנות כוריון-אלנטואיות של עוברי עוף, תרחיפים ותמציות מתרבויות או איברים של בעלי חיים נגועים בנגיפים, חומר זיהומי מקומי משמשים כחומר הבדיקה להמגלוטינציה. RGA אינה תגובה סרולוגית, מכיוון שהיא מתרחשת ללא השתתפות של סרום חיסוני ומשמשת לבחירת דילול העבודה של AG לקביעת RTGA או נוכחות AG (וירוס) בחומר הבדיקה (לדוגמה, עם שפעת). התגובה משתמשת באריתרוציטים של בעלי חיים, ציפורים, בני אדם עם קבוצת דם I (0). כדי להגדיר RGA משוער, טיפה של תרחיף 5% של אריתרוציטים וטיפה של חומר הבדיקה מוחלים על שקף זכוכית, מעורבב היטב. עם תוצאה חיובית, לאחר 1-2 דקות לצפות באופן מקרוסקופי במראה של אגלוטינציה פלוקולנטית של אריתרוציטים. כדי להגדיר RHA בשורה מורחבת בבארות של לוחות פוליסטירן, מכינים דילולים גדלים כפולים של חומר הבדיקה על מי מלח פיזיולוגיבנפח של 0.5 מ"ל. 0.5 מ"ל של השעיה 0.25-1% של אריתרוציטים מתווספים לכל המבחנות. התוצאות נלקחות בחשבון לאחר שקיעה מלאה של אריתרוציטים בביקורת (אריתרוציטים + סליין). התגובה נלקחת בחשבון על ידי אופי משקע האריתרוציטים. במקרים חיוביים, מידת הצבירה מסומנת בפלוסים. ארבעה פלוסים מעריכים את התגובה, שיש לה צורה של סרט דק של אריתרוציטים מודבקים המכסה את תחתית המבחנה (מטריה), התגובה עם פערים בסרט מסומנת בשלושה פלוסים, נוכחות של סרט עם קצוות תחרה מסולסלים של אריתרוציטים מודבקים מסומן על ידי שני פלוסים, משקע מתקלף של אריתרוציטים מוקף באזור של גושים אריתרוציטים צמודים מתאים פלוס אחד. משקע אריתרוציטים מוגדר בחדות, שלא ניתן להבחין מהבקרה, מראה את היעדר אגלוטינציה. הטיטר נלקח כדילול המגביל של חומר הבדיקה, שגרם לאגלוטינציה של אריתרוציטים בשני פלוסים. אם תוצאת ה-RHA חיובית, המחקר נמשך על ידי קביעת סוג הנגיף המבודד באמצעות HA RT עם סרה ספציפית לסוג. RTGA מבוסס על יכולתו של אנטי-סרום לדכא המגלוטינציה ויראלית, שכן הנגיף המנטרל על ידי נוגדנים ספציפיים מאבד את יכולתו לצבור תאי דם אדומים. להקלדה משוערת של וירוסים, נעשה שימוש בשיטת הירידה על זכוכית. לקביעה סופית של סוג השיוך של הנגיף המבודד וטיטרציה של נוגדנים בסרה, מניחים RTHA מורחב במבחנות או בארות. לשם כך מכינים דילולים פי שניים של סרה בתמיסת מלח פיזיולוגית ויוצקים ל-0.25 מ"ל. לדילול הסרום מוסיפים טיפה אחת מהחומר המכיל את הנגיף וטיפה אחת של תרחיף 1% של אריתרוציטים. בעת שימוש ב-RTGA לקביעת סוג הנגיף, משתמשים בסמים ספציפיים לסוג, שמתווספים לנפח שווה של דילול העבודה של AG. סוג השיוך של הנגיף המבודד נקבע על ידי הסרום החיסוני הספציפי, שהראה את הטיטר הגבוה ביותר של נוגדנים לנגיף זה. RGA ו-RTGA נמצאים בשימוש נרחב לאבחון זיהומים ויראליים ( דלקת מוח קרציות, שפעת וכו') על מנת לזהות נוגדנים ספציפיים ולזהות וירוסים רבים לפי האנטיגנים שלהם.

התגובה של המגלוטינציה עקיפה (RIHA)

השימוש בתכשירי אבחון נספחים מבוסס על עיקרון ההכרה האימונולוגית של מבני פני השטח המיושמים כל הזמן בטבע. מנקודת מבט זו, אין הבדלים מהותיים בין השימוש למשל בתא מיקרוביאלי או בנשא מלאכותי עמוס באנטיגן (נוגדנים). נשאים שונים משמשים כבסיס להכנות שנספגו - תאים מיקרוביאליים, אריתרוציטים, לטקס, בנטונין, כולסטרול, Sephadex, Dermatol, פחמן פעיל, נבגי פטריות וכו'.

לאחר עבודתו של A.T. Kravchenko (1945), אריתרוציטים נטולי כדאיות ומקובעים עם ריאגנטים כימיים שונים הפכו לשימוש הנפוץ ביותר כנשא של אנטיגן או נוגדנים. על פי העיקרון של שימוש באריתרוציטים (גם מקומיים וגם קבועים) כנשא של האנטיגן, התגובה של hemagglutination עקיפה (פאסיבית) הפכה נפוצה.

ההצעה להשתמש בתגובת ההמגלוטינציה העקיפה (IHA) למטרות אבחון עלתה על בסיס ידע שפותח בעבר על פעילות הספיחה הגבוהה של אריתרוציטים. בהשוואה לנשאים רבים אחרים של אנטיגנים ונוגדנים, לאריתרוציטים יש יתרונות מסוימים בתגובה להמגלוטינציה עקיפה. ראשית, באיזוטוני תמיסות מלחהם יוצרים הידבקות יציבה למדי ואינם מסתפקים זמן קצר. שנית, תאי הדם האדומים של אותו מין בעלי חיים זהים בגודלם. ולבסוף, אריתרוציטים בקלות יחסית ישירות או כתוצאה מעיבוד מיוחד מצמידים רכיבים פעילים שונים מבחינה סרולוגית.

יצירת אבחוני אריתרוציטים מאריתרוציטים מיוצבים מאפשרת להתגבר על הקשיים המתעוררים בעת שימוש באדמית מקומית.

במחקר של אריתרוציטים שטופלו במקבעים שונים, הוקמו כמה מהמאפיינים הנפוצים שלהם:

במורפולוגיה, הם למעשה אינם שונים מאלה טריים;

לא עובר המוליזה בתמיסות היפוטוניות, במים ולאחר הקפאה-הפשרה;

ניתן לייבוש בהקפאה;

מבני פני השטח שלהם שומרים על היכולת לעבור שינוי כימי (למשל, טאנין, תרכובות דיאזו) ולהגיב עם אנטיגנים ונוגדנים.

הקריטריון העיקרי לאיכותם של אריתרוציטים קבועים הוא האפשרות להשתמש בהם להשגת תכשירים רגישים בהעדר אגלוטינציה לא ספציפית בנוזלים מייצבים.

הכנת פני השטח של אריתרוציטים על מנת להגביר את יכולת הספיגה של אנטיגנים חשובה בתכנון תכשירי אבחון. נפוץ במיוחד הטיפול באריתרוציטים עם טאנין.

בהשפעתו משתנה תכונות אנטיגניותאריתרוציטים (חדירות, קצב שקיעה), עמידותם להשפעות המוליטיות של מסוימות חומצות שומן. עם זאת, העיקר מושג - אריתרוציטים מזויפים הם בעלי יכולת ספיגה גבוהה בהרבה של חלבונים, שנמצאת כיום בשימוש נרחב בייצור אנטיגנים ונוגדנים באיכות גבוהה.

יחד עם הטניזציה של אריתרוציטים, לייצור אבחון אריתרוציטים והכנת נשא אנטיגן, משתמשים בריאגנטים כימיים כגון ברומלין, טריאופסין ואשלגן פריודאט, אשר גם משנים את קרומי האריתרוציטים.

לאחר הכנת פני השטח של אריתרוציטים, הכי הרבה תהליך חשוב- תהליך ההמוסנסיטיזציה - שלב סופיייצור אבחון אריתרוציטים.

לחיזוק הקשר בין הנשא לאנטיגן נעשה שימוש בחומרים מצמידים שונים - ביסדיאזובנזידין, דיפלואורודיניטרובנזין, ציאניד כלוריד, קדמיום כלורי וחומצה אצטית, ברום כלוריד, פורמלדהיד, גלוטאראלדהיד, ציאנוגן ברומיד, רינול, אמדול וכו'.

השימוש בחומרים מצמידים עוזר להעלים את החסרונות שיש לאדתרוציטים משוננים המשמשים לרגישות ללא חומרים מצמידים.

החומרים המצומדים הנפוצים ביותר הם כרום כלוריד, גלוטאראלדהיד, דיאזול שחור C ואמידול. תהליך הרגישות עם כרום כלוריד מתרחש מהר מאוד - מ 4 עד 10 דקות, מה שמושך את תשומת לב החוקרים. במקרה זה, נעשה שימוש בריכוזי כרום כלוריד מ-0.05 עד 2%, ה-pH אינו נמוך מ-5.0 בטמפרטורה של תערובת התגובה של 20-250 C. בתהליך הרגישות עם כרום כלוריד, קבוצות קרבוקסיל של חלבוני ממברנה אריתרוציטים מופעלים. כתוצאה מכך נוצר קשר קוולנטי בין קרום האריתרוציטים לסנסיטין.

לתגובה של hemagglutination עקיפה יש סגוליות גבוהה, שכן הצבירה של אריתרוציטים מתרחשת כתוצאה מהאינטראקציה של האנטיגן עם נוגדנים הנספגים על אריתרוציטים. המאפיין הייחודי שלו הוא רגישות גבוהה: מתגלה בו 0.02-0.05 מיקרוגרם של חלבון נוגדן. במונחים של רגישות, הוא עולה באופן משמעותי על התגובות של אימונודיפוזיה, אימונופלואורסצנטי, אימונודיפוזיה רדיאלית, קיבוע משלים וניטרול. RNGA פחות רגיש מהשיטות של רדיואימונואלקטרופורזה, קביעת כמות החלבון של נוגדנים רדיואקטיביים בחומר האימונוסורבנט, אנזים immunoassay.

היתרונות של RNGA כוללים יכולת שחזור גבוהה מספיק, קלות יישום וצורך בכמויות מינימליות של מרכיבים, במיוחד בעת שימוש בשיטת המיקרו.

RNGA ב השנים האחרונותמצא יישום נרחב באבחון של rhinotracheitis זיהומיות, שלשולים, זיהום בנגיף אדנו, זיהום רוטה וקורונה, parainfluenza - 3 וזיהום סינציציאלי בדרכי הנשימה.

אנו נותנים דוגמה לייצור ושימוש באבחון אריתרוציטים לזיהוי נוגדנים לזיהומי רוטציה וקורונה.

שיטת ההכנה של אבחון נוגדנים לאיתור אנטיגנים של רוטה וקורונה ב-RNGA היא כדלקמן: השגת השעיה של אריתרוציטים; תיקון האקרוליינים שלהם; tanization, המאפשר השגת ספיגה יציבה של החלבון הנדרש על אריתרוציטים; רגישות של אריתרוציטים tanized עם אימונוגלובולינים; קביעת הספציפיות של האבחון המוכן. הכנת תרחיף של אריתרוציטים מתבצעת על ידי נטילת דם של איל בריא מבחינה קלינית לתוך בקבוקון עם חרוזי זכוכית. לאחר דפיברינציה בדם, יש לשטוף אריתרוציטים 3-5 פעמים בתמיסת נתרן כלורי איזוטונית (0.9%) על ידי צנטריפוגה למשך 15-20 דקות ב-400 גרם.

על מנת לייצב את תאי הדם האדומים, הם מטופלים באקרולין. כידוע, פעולתו מתונה מעט מפורמלדהיד, ומעניקה יציבות ועוד פעילות גבוההאריתרוציטים. לשם כך, נפחים שווים של השעיה 10% של אריתרוציטים מעורבבים עם תמיסה של 0.2% של אקרוליין שהוכנה בתמיסת חיץ פוספט (PBS) עם pH של 7.2. ההשעיה שהתקבלה נשמרת למשך 30 דקות ב-37 מעלות צלזיוס, ערבוב יסודי, ולאחר מכן שחרור אקרוליין על ידי צנטריפוגה חוזרת למשך 5 דקות ב-600-800 גרם עד שהריח הספציפי נעלם לחלוטין. היתרון של אריתרוציטים שהוכנו בדרך זו הוא שהם נקצרים לעתיד, יכול הרבה זמןלהתמיד ללא המוליזה.

לאחר מכן, אריתרוציטים מיוצבים בריכוז של 10% נשמרים ב-2-4 מעלות צלזיוס ב-PBS עם pH של 7.2 למשך חודשיים.

כדי להגביר את יכולת הספיחה והשקיעה של אריתרוציטים, יש צורך לשכך אותם על ידי ערבוב חלקים שווים של תרחיף 10% של אריתרוציטים שטופים ותמיסת טאנין ב-PBS ו-pH 7.2 בדילול של 1:30,000. התערובת מעורבת היטב ונשמרת ב-370 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות, ולאחר מכן נשטפים האריתרוציטים היטב מטאנין פעמיים ב-PBS עם pH 7.2 ושלוש פעמים עם תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית עם pH 7.2-7.4.

הזמן האופטימלי להבטיח קבלת אבחון אריתרוציטים באיכות גבוהה הוא רגישותם תוך 24-48 שעות לאחר הטיפול בטאנין.

בתהליך הכנת אבחון, תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית 0.3% פנולית עם 0.1% סרום נורמלי של ארנב או סוס, שהושבתה בעבר ב-56 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות ונספגה על ידי אריתרוציטים רגילים של כבשים, משמשת כממס ומשמר. 37 מעלות צלזיוס. למשך 30 דקות

יש לבצע רגישות של אריתרוציטים מזויפים עם נסיוב היפראימוני נגד נגיף קורונה בקנה מידה גדול וגדול, בהתאמה. בקר(מיוצר במכון המחקר הכל-רוסי לרפואה וטרינרית ניסויית על שם י.ר. קובלנקו). במקביל, מינון הרגישות (ריכוז החלבון) של סרום חיסון נגד רוטה הוא 280 מיקרוגרם/מ"ל, וזה של הסרום החיסוני לקורונה הוא 260 מיקרוגרם/מ"ל.

הרגישות מתבצעת על ידי ערבוב של נפחים שווים של אריתרוציטים שזופים וסרום חיסון שחומם מראש למשך 30 דקות ב-560C בריכוז אופטימלי. בנוסף מוסיפים 3 חלקים מתמיסת נתרן כלוריד איזוטונית עם pH של 7.2 ו-5 חלקים מתמיסת כרום כלורי 0.1%. התערובת, תוך ערבוב מדי פעם, נשמרת בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות. לאחר הזמן שצוין, התערובת נשטפת ביסודיות באמצעות PBS עם PH של 7.2, ולאחר מכן מעבירים מחדש את האבחונים האריתרוציטים המוכנים בחומר משמר לריכוז של 1%. האבחון המוכן שומר על איכויותיו הבסיסיות למשך 8 חודשים, אם מאוחסן ב-4 מעלות צלזיוס.

בכל שלבי ייצור האבחונים, מעקב אחר צבירה עצמית. הספציפיות של האבחונים המוכנים נקבעת על ידי שלב RNGA, שבו נעשה שימוש באנטיגנים סטנדרטיים של נגיפי RTI, PG-3, אדנו-וירוסים, שלשולים נגיפיים, כמו גם אנטיגנים של רוטה וקורונה.

בעת הגדרת RNHA, מכינים דילולים כפולים סדרתיים של החומר המכיל את הנגיף הנחקר (השעיה של 20-50% של דגימות צואה), ולאחר מכן מוסיפים נפח שווה של אבחון אריתרוציטים לכל באר. יש לנער את הצלחות ביסודיות מספר פעמים, להשאיר אותם בטמפרטורת החדר עד שהאריתרוציטים ישובבו לחלוטין בבקרה. אינדקס תגובה חיובית- אגלוטינציה של אריתרוציטים דיאגנוסטיקום בעוצמת אגלוטינציה של 2+ בטיטר של 1:4 ומעלה.

תגובת המגלוטינציה פסיבית)

שיטה לאיתור וזיהוי של אנטיגנים או נוגדנים, המבוססת על תופעת אגלוטינציה של אריתרוציטים המתרחשת בנוכחותם, שעל פני השטח שלהם נספגו בעבר הספציפי או האנטיגנים המתאימים.

1. אנציקלופדיה רפואית קטנה. - M.: אנציקלופדיה רפואית. 1991-96 2. ראשית בריאות. - מ.: האנציקלופדיה הרוסית הגדולה. 1994 3. מילון אנציקלופדי תנאים רפואיים. - מ.: האנציקלופדיה הסובייטית. - 1982-1984.

ראה מהי "תגובת ההמגלוטינציה העקיפה" במילונים אחרים:

תגובה עקיפה להמגלוטינציה- בדיקת מעבדה RNGA באמצעות אבחון אריתרוציטים. [מילון מונחים אנגלי-רוסי למונחים בסיסיים בנושא חיסונים וחיסונים. ארגון הבריאות העולמי, 2009] נושאים חיסון, חיסון מילים נרדפות RNGA EN ... ... מדריך מתרגם טכני

- (RNGA; שם נרדף לתגובת hemagglutination פסיבית) שיטה לאיתור וזיהוי אנטיגנים או נוגדנים, המבוססת על תופעת הצבירה של אריתרוציטים המתרחשת בנוכחותם, שעל פני השטח שלהם נספגו בעבר ... ... גָדוֹל מילון רפואי

- (RPHA) ראה תגובה של המגלוטינציה עקיפה ... מילון רפואי גדול

עמוד זה הוא מילון מונחים. # א ... ויקיפדיה

הקיצורים העיקריים המקובלים במילון האנציקלופדי הווטרינרי- a., aa, artena, arteriae aa ana (באופן שווה) האקדמיה למדעי הרפואה של ברית המועצות מדע רפואיהאקדמיה למדעים של ברית המועצות האקדמיה למדעים של ברית המועצות Bac. חיידקי הבצילוס. חיידק BSSR SSR ביילורוסיתב., vv. מאה, מאה ו', v. vena, venae VASKHNIL מסדר כל האיחוד של לנין ו ... ...

למונח זה יש משמעויות אחרות, ראה מגפה. מחלת כלבים (מחלת קארה), מדבקת חריפה או תת-חריפה מחלה נגיפית, המתבטא בחום, קטאר של הריריות, נגעי עור, מרכזי ... ... ויקיפדיה

- (renes) איבר הפרשה ואנדוקריני מזווג, אשר באמצעות תפקוד השתן מווסת את ההומאוסטזיס הכימי של הגוף. ANATOMO PHYSIOLOGICAL OUTLINE הכליות ממוקמות בחלל הרטרופריטונאלי (רטרופריטונאלי) על ... ... אנציקלופדיה רפואית

I (trichinelosis; מילה נרדפת: trichinosis, "נפיחות") הלמינתיאזיס מקבוצת הנמטודוזיס, המאופיינת בחום, מיאלגיה, נפיחות בפנים, פריחות בעור, אאוזינופיליה בדם, ובמצב חמור איברים פנימייםומרכזי ...... אנציקלופדיה רפואית

- (נמטודוזות) הלמינתיאזות הנגרמות על ידי נמטודות מהסוג נמטודה. בין שאר הלמינתיאזות, N. יש הערך הגבוה ביותרבפתולוגיה אנושית, רובם הם גיאוהלמינתיאזים (ראה Helminthiases); התפתחות הביצים או הזחלים שלהם ...... אנציקלופדיה רפואית

אפידידימיטיס זיהומית- אורז. 1. עלייה באשך השמאלי באיל עם אפידידימיטיס זיהומית. אורז. 1. עלייה באשך השמאלי באיל עם אפידידימיטיס זיהומית. כבשה מדבקת epididymitis (Epididymitis infectiosa arietum), זיהומית כרונית ... ... מילון אנציקלופדי וטרינרי

ראה תגובת המגלוטינציה עקיפה... מילון רפואי גדול