Kumbso testas

Tiesioginis Kumbso testas – tai antiglobulino testas (agliutinacija gelyje, leidžianti aptikti pilnus dvivalečius antikūnus), kuriuo aptinkami IgG klasės antikūnai ir komplemento C3 komponentas raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje. Paprastai tiesioginiu Kumbso testu aptikti antikūnai turi platų specifiškumą, kuris nėra susijęs su nusistovėjusiu antigenu. Teigiamas tiesioginis Kumbso testas aiškiai rodo, kad pacientas turi hemolizinė anemija, nors ne visi pacientai, kurių tiesioginis antiglobulino testas teigiamas, serga šia liga. Maždaug 10% pacientų raudonųjų kraujo kūnelių membranoje esančių antikūnų ar komplemento komponentų negalima nustatyti tiesioginiu Kumbso testu (testas yra neigiamas), tačiau, nepaisant to, jie kenčia nuo autoimuninės hemolizinės anemijos. Norint išsiaiškinti antikūnų specifiškumą tokiais atvejais, naudojami jų eliuavimo testai. Tiesioginis Kumbso testas, teigiamas tik komplementui, paprastai reiškia IgM tipo antikūnus peršalimui. Tokiu atveju IgM antikūnai nėra ant raudonųjų kraujo kūnelių, kai bazinė temperatūra kūnai. Tačiau dėl to, kad IgM antikūnai aktyviai fiksuoja komplementą, o komplementas lieka ant raudonųjų kraujo kūnelių, sergant šia autoimuninės hemolizinės anemijos forma (šalta agutinino liga), Kumbso testas bus teigiamas tik komplementui.

Tiesioginis Kumbso testas teigiamas dėl autoimuninės hemolizinės anemijos, kurią sukelia šilti antikūnai, autoimuninės vaistų sukeltos mažakraujystės (vartojant metildopą, iki 20% pacientų teigiama reakcija), hemolizinės anemijos vaistų adsorbcijos tipo, imuninio kompleksinio hemolizinio tipo anemijos. mažakraujystė (testas teigiamas tik C3), su autoimunine hemolizine anemija, kurią sukelia peršalimo antikūnai - šalto agliutinino liga (testas teigiamas tik C3). Esant paroksizminei šaltai hemoglobinurijai, tiesioginis Kumbso testas yra neigiamas.
Ūminiu ligos laikotarpiu dėl raudonųjų kraujo kūnelių naikinimo, ant kurių didelis skaičius antikūnų, esant hemolizinei krizei, taip pat esant nepakankamam antikūnų kiekiui lėtinės ligos eigos metu, gali būti stebimas neigiamas tiesioginis Kumbso testas.

:

• Svarbi sąlyga norint užtikrinti kokybę laboratoriniai tyrimai kraujas paima medžiagą tuščiu skrandžiu ryto laikas(iki 12 val.).
• Likus 12 valandų iki tyrimo neturėtumėte gerti alkoholio, rūkyti, valgyti ir riboti fizinį aktyvumą.
• Kraujo tyrimo rytą galite gerti vandenį.
• Venkite vartoti vaistus; Jeigu vaistų vartojimo nutraukti neįmanoma, būtina informuoti laboratoriją.
• Patartina paimti medžiagą prieš atliekant bet kokias medicinines diagnostikos procedūras.
• Vertinant moterų hormonų lygį, svarbu atsižvelgti į dieną mėnesinių ciklas Kada geriausias laikas nustatyti tam tikrus hormonus? Šią informaciją galite gauti iš savo gydytojo.

Indeksas	Charakteristika
Analizatorius ir testavimo sistema	Gelio kortelės; „DiaMed AG“ (Šveicarija)
Etaloninės vertės	Neigiamas rezultatas / Teigiamas rezultatas
Trukdantys veiksniai. Vaistai
Teigiamas testas galimas vartojant šiuos vaistus: acetaminofenas, salicilo rūgštis, aminopirinas, antihistamininiai vaistai, karbromalis, cefalosporinai, chlorpromazinas, chlorpropamidas, cisplatina, klonidinas, dipironas, etosuksimidas, fenfluraminas, fuadinas, hidralazinas, hidrochlorotiazidas, ibuprofenas, insulinas, izoniazidas, levodopa, mefenamino rūgštis, metilo fenamino rūgštis, melionas, melionas icilaminas, penicinas linas , fenacetinas, fenilbutazonas, probenecidas, prokainamidas, chinidinas, chininas, rifampinas, streptomicinas, sulfonamidai, sulfonilkarbamido dariniai, tetraciklinas, triamterenas, trimelito anhidridas
Naudojimo indikacijos
Imuninės hemolizinės anemijos diagnozė, hemolizinė liga naujagimiams, vaistų sukelta imuninė hemolizinė anemija, hemolizinės transfuzijos reakcijos
Rezultatų interpretacija
Paprastai tiesioginis Kumbso testas yra neigiamas. Teigiamas Kumbso testas: autoimuninė hemolizinė anemija; naujagimių hemolizinė liga; vaistų sukelta imuninė hemolizinė anemija; hemolizinės transfuzijos reakcijos

Antiglobulino principas. Nepilno tipo anti-eritrocitų antikūnai ir komplemento molekulės (C), esančios eritrocitų paviršiuje, aptinkamos – tiesioginis tyrimas – jų agliutinacijos būdu kontaktuojant su gyvūno serumu, kuriame yra antikūnų prieš žmogaus antiglobuliną (antiglobulino serumą). Neišsamūs serume laisvi antikūnai nustatomi – netiesioginis tyrimas – prijungiant juos prie normalių 0 grupės raudonųjų kraujo kūnelių mišinio, kurių visi antigenai priklauso žinomai Rh sistemai, o vėliau agliutinuojami veikiant antiglobulino serumui.

Medžiagos, reagentai Kumbso antiglobulino tyrimui: mėgintuvėliai 10/100 ml; graduotos pipetės 1,2 ml; Pasteur pipetės; Trikojai; šlifuoto stiklo skaidres; 8,5‰ NaCl tirpalas; raudonieji kraujo kūneliai. Paciento raudonieji kraujo kūneliai, taip pat priklausantys 0 grupei, bus paimti iš šviežiai paimto kraujo, naudojant antikoaguliantą (EDTA tirpalą).

0 grupės raudonieji kraujo kūneliai turėtų būti parinkti taip, kad jie būtų iš normalių asmenų ir juose būtų visi Rh antigenai. Jas galima laikyti iki 7 dienų autologinėje plazmoje + 4°C temperatūroje. Jei nėra 0 grupės raudonųjų kraujo kūnelių, galima naudoti žinomą antigeninę mozaiką, 0 grupės raudonųjų kraujo kūnelių, Rh teigiamų ir Rh neigiamų raudonųjų kraujo kūnelių mišinį.

Serumas pacientas turi būti šviežiai atrinktas.

Antiglobulino serumas pagamino institutas. Dr. I. Cantacuzino, tiekiamas liofilizuotas 1 ml ampulėse. Ištirpinus serumą laikyti -20°C temperatūroje.

Kumbso antiglobulino tyrimo technika:
A) Tiesioginis Kumbso testas: Išskalaukite paciento raudonuosius kraujo kūnelius 3 kartus 8,5‰ NaCl tirpalas.
Ant kelių stiklelių užlašinkite didelį lašą antiglobulino serumo skiedimo, o šalia – nedidelį lašelį paciento eritrocitų nuosėdų; sumaišykite lašus su stiklo kampu. Paruoštą medžiagą palikite ant stalo 5 minutes, tada patikrinkite, ar nėra agliutinatų. Jei rezultatas teigiamas, nustatykite didžiausią agliutinacijos titrą.

b) Netiesioginis Kumbso testas: 0 grupės eritrocitai, Rh teigiami ir Rh neigiami, 3 kartus nuplaukite 8,5‰ NaCl tirpalu ir padėkite į paciento serumą 2 lašais eritrocitų 8-10 serumo lašų, ​​tada inkubuokite 60 minučių 37° temperatūra SU. Po to dar kartą tris kartus nuplaukite raudonuosius kraujo kūnelius ir apdorokite juos antiglobulino serumu pagal instrukcijas tiesioginis testas Combs.

Kada mes kalbame apie apie šaltus aktyvius antikūnus jautrinti 0 grupės raudonuosius kraujo kūnelius 60 minučių. esant + 4°C temperatūrai.

Pastaba 1) Neatlikite tiesioginio Kumbso tyrimo su raudonaisiais kraujo kūneliais, kurie vieną ar kelias dienas buvo laikomi + 4°C arba kambario temperatūroje, nes rezultatai gali būti klaidingai teigiami dėl neužbaigtų šaltai aktyvių antikūnų, esančių normaliame serume, fiksacijos. 2) Esant sunkiai hiperproteinemijai, raudonuosius kraujo kūnelius plaukite 4-5 kartus ir sulfosalicilo rūgštimi patikrinkite, ar paskutiniame plovimo skystyje nėra serumo baltymų.

Galimas 2 μg IgG/ml likutis eritrocitų nuosėdose gali neutralizuoja antiglobulino serumą. Kumbso testą taip pat galima atlikti naudojant monospecifinius anti-IgG, -IgM, -IgA -C3 ir -C4 serumus, siekiant išsiaiškinti ląstelių, esančių raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje, tipą, pavyzdžiui, pacientams, sergantiems autoimunine hemolizine liga. anemija.

Kumbso testas– prie paviršiaus pritvirtintų arba plazmoje ištirpusių antikūnų nustatymo tyrimas. Jis naudojamas imunizacijai ir antikūnams prieš raudonuosius kraujo kūnelius nustatyti. Antrasis pavadinimas yra antiglobulino testas. Jis gali būti tiesioginis arba netiesioginis.

At tiesioginis antiglobulino tyrimas aptinka raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje fiksuotus antikūnus. Atliekamas įtarus dėl kitų autoimuninių ligų, pavartojus vaistų (metildopos, penicilino, chinino) ir kt.

Raudonieji kraujo kūneliai buvo įjautrinti in vivo – prie jų jau tvirtai prisirišę antikūnai, o pridėjus antiglobulino serumo (anti-IgG) įjautrintos ląstelės sulimpa, o tai matoma plika akimi.

Netiesioginis Kumbso testas nustato anti-eritrocitinius antikūnus kraujo plazmoje, jis atliekamas prieš kraujo perpylimą ir jo metu.

Anti-eritrocitų antikūnai – tai autoantikūnų rūšis, t.y. antikūnų prieš savo audinius. Autoantikūnai atsiranda patologinio reaktyvumo metu Imuninė sistema kai kuriems vaistams, pavyzdžiui, didelėms penicilino dozėms.

Raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje yra įvairių cheminės struktūros(glikolipidai, sacharidai, glikoproteinai ir baltymai), medicinoje vadinami antigenais. Žmogus iš savo tėvų paveldi specifinį antigenų žemėlapį ant kiekvieno raudonojo kraujo kūnelio.

Antigenai sujungiami į grupes ir tada kraujas skirstomas į kelias grupes – pagal AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy sistemą. Žymiausi ir reikšmingiausi gydytojo darbe yra AB0 ir Rh faktorius (Rh).

AB0 sistema

Žmogaus Rh būsena nustatoma pagal šių antigenų buvimą. Ypač svarbus eritrocitų antigenas yra antigenas D. Jei jis yra, tada jie kalba apie Rh teigiamas kraujo RhD, o jei jo nėra – oi Rh neigiamas Rhd.

Jei atitinkamas antikūnas prisijungia prie eritrocitų antigenų, eritrocitas sunaikinamas - hemolizė.

Indikacijos

Pagrindinė indikacija, skirta tiesioginisantiglobulino testas- įtarus hemolizinę anemiją. Dažniausiai atliekama esant pirminei autoimuninei hemolizinei anemijai, hemolizei sergant reumatine, navikine, užkrečiamos ligos, vaistų sukelta hemolizė.

Jei anemija atsiranda praėjus kelioms dienoms ar mėnesiams po kraujo perpylimo arba užsitęsus geltai naujagimiui, taip pat atliekamas tiesioginis Kumbso testas.

Netiesioginisatliekamas antiglobulino tyrimas prieš kraujo perpylimą ir Rh neigiamos moters nėštumo metu.

Autoimuninė hemolizinė anemija

Autoimuninė hemolizinė anemija (pirminė)– klasikinė autoimuninė liga, kurios priežastys nežinomos. Sutrinka imuninės sistemos sąveika, todėl savo raudonieji kraujo kūneliai suvokiami kaip svetimi. Limfmazgiuose sintetinami IgG klasės (reaguoja esant t 37°C) ir (arba) IgM (esant t 40°C) antikūnai, kurie, prisitvirtinę prie eritrocito paviršiaus, sužadina daugybę fermentų ( komplemento sistema) ir „perforuoja“ eritrocito sienelę, o tai sukelia jo sunaikinimą – hemolizę.

Pirmuosius simptomus sukelia ir raudonųjų kraujo kūnelių sunaikinimas, ir hemoglobino kiekio sumažėjimas. Tarp jų:

• nuovargis, bendras silpnumas, dirglumas
• dusulys
• pilvo ir krūtinės skausmas, pykinimas
• tamsi šlapimo spalva
• nugaros skausmas
• ikterinis odos ir gleivinių spalvos pasikeitimas
• raudonųjų kraujo kūnelių skaičiaus sumažėjimas ir

Tiesioginis teigiamas rezultatas Kumbso testai 100% patvirtina autoimuninės hemolizinės anemijos diagnozę, įrodant jos autoimuninę kilmę. Tuo pačiu metu neigiamas rezultatas neleidžia pašalinti diagnozės.

Antrinė hemolizinė anemija

Antrinė autoimuninė hemolizinė anemija ir teigiamas Kumbso testas gali atsirasti sergant šiomis ligomis:

• Evanso sindromas
• pneumonijos infekcija

Teigiamas šių ligų antiglobulino testas yra vienas iš simptomų, o ne diagnozės kriterijus.

Naujagimio hemolizinė liga

Priežastis naujagimių hemolizinė liga - motinos ir vaisiaus kraujo grupės nesuderinamumas, daugeliu atvejų pagal Rh sistemą, pavieniais atvejais - pagal AB0 sistemą, kazuistiškai - pagal kitus antigenus.

Rh konfliktas išsivysto, jei Rh neigiamos moters vaisius paveldi Rh teigiamą kraują iš tėvo.

Liga naujagimiui išsivysto tik tuo atveju, jei motina jau sukūrė antikūnus prieš atitinkamus antigenus, o tai atsitinka po ankstesnių nėštumų, abortų ir nesuderinamų kraujo perpylimų. Dauguma bendra priežastis suaktyvinanti antikūnų prieš eritrocitų membranos antigenus sintezę – gimdymą (vaisiaus ir motinos kraujavimas). Pirmas gimdymas paprastai vyksta be komplikacijų, tačiau vėlesniais jau pirmomis dienomis po gimimo atsiranda naujagimio hemolizinė liga.

Naujagimio hemolizinės ligos simptomai:

• odos pageltimas
• , ir gleivinės
• padidėjusios kepenys ir blužnis
• kvėpavimo problemos
• viso kūno patinimas
• sužadinimas ir laipsniškas centrinės nervų sistemos slopinimas

Anemija po kraujo perpylimo

Netiesioginis Kumbso testas atliekamas prieš kraujo perpylimą suderinamumui įvertinti, o tiesioginis Kumbso testas – po jo, jei įtariama hemolizė po perpylimo, t.y. esant tokiems simptomams kaip karščiavimas, laistymas (skaitykite toliau). Analizės tikslas – nustatyti antikūnus prieš perpiltus raudonuosius kraujo kūnelius, kurie prisijungė prie recipiento raudonųjų kraujo kūnelių ir yra hemolizės po perpylimo priežastis, taip pat priešlaikinį donoro raudonųjų kraujo kūnelių pašalinimą iš paciento kraujotakos. recipientas (tas, kuris gavo kraują).

Simptomai:

• kūno temperatūros padidėjimas
• odos bėrimas
• nugaros skausmas
• raudona
• pykinimas
• galvos svaigimas

Dekodavimas

Verta prisiminti, kad pagrindinės tiesioginių ir netiesioginių antiglobulino tyrimų iššifravimo taisyklės yra vienodos. Skiriasi tik antikūnų vieta – kraujyje ar ant raudonųjų kraujo kūnelių.

• Jeigu tiesioginis Kumbso testas yra neigiamas– tai reiškia, kad antikūnas „nesėdi“ ant raudonųjų kraujo kūnelių, todėl reikia toliau ieškoti simptomų priežasties ir atlikti tyrimą. netiesioginis pavyzdys Combs
• Jeigu teigiamas rezultatas Kumbso testas nustatytas po kraujo perpylimo, infekcijų, vaistų – pozityvumas išlieka iki 3 mėnesių (raudonųjų kraujo kūnelių gyvavimo laikas 120 dienų – 3 mėn.)
• teigiamas antiglobulino testo rezultatas autoimuninė liga trunka mėnesius ir net metus

Norm

• tiesioginis Kumbso testas – neigiamas
• netiesioginis Kumbso testas – neigiamas

Kokybiškai teigiamas rezultatas matuojamas pliusų skaičiumi nuo vieno iki keturių (+, ++, +++, ++++), o kiekybiškai skaitmenine forma - 1:16, 1:256 ir kt.

Taip. Jūsų gydytojas tikrai turėtų žinoti, kad jums buvo perpiltas kraujas, nes tai turi įtakos teisingam tyrimo rezultatų aiškinimui dabar. Gavus kažkieno kito (nors daug kartų tirto) kraują, visada yra tikimybė, kad jūsų organizme atsiras antikūnų prieš perpiltą kraują. Būtent šie antikūnai suteiks bloga įtaka apie sveikatos būklę. Vėlesniems kraujo perpylimams gydytojas turi žinoti, kad jums jau buvo perpylimas, o tai reiškia, kad buvo laiko antikūnų sintezei. Nėščioms moterims ši informacija yra dar aktualesnė.

3. Jei motinos ir vaiko Rh faktorius nesutampa, ar visi vaikai sirgs?

Priklauso nuo to, ar vaikas Rh teigiamas, ar neigiamas (RhD). I, II, III ir IV kraujo grupių nešiotojai gali būti Rh teigiami arba neigiami. Esant situacijai, kai motina yra Rh neigiama, o vaikas Rh teigiamas, antikūnai bus gaminami jau pirmojo nėštumo metu, tačiau tik po pirmojo gimdymo (arba nėštumo nutraukimo) bus tiesioginis kontaktas tarp motinos ir motinos kraujo. vaikas. Hemolizinis antikūnų poveikis pasireikš tik antrojo ir vėlesnių gimdymų metu, o tai sukels naujagimio hemolizinę ligą.

Kiekviena moteris, kurios Rh faktorius yra neigiamas, turi būti atidžiai ištirtas nėštumo metu ir po gimdymo profilaktinis gydymas išvengti antikūnų atsiradimo ir tolesnių komplikacijų.

4. Ar nėštumo metu prieš atliekant Kumbso testą būtina žinoti vyro kraujo grupę?

Nėštumo metu reikia ne tik žinoti, bet ir pasitikrinti vaiko biologinio tėvo kraujo grupę.

Duomenys

• pirmą kartą pasiūlyta Kembridže 1945 m
• jautrumo slenkstis – mažiausiai 300 fiksuotų antikūnų molekulių ant vieno raudonojo kraujo kūnelio
• antikūnų, sukeliančių hemolizę, skaičius - kiekvienam asmeniui individualiai (nuo 16-30 iki 300)
• kitų laboratorinių hemolizinės anemijos rodiklių (hemoglobino, bilirubino, retikulocitų) dinamika gali normalizuotis, o Kumbso testas išliks tokio paties lygio.

Kumbso testas paskutinį kartą buvo pakeistas: 2018 m. kovo 16 d Marija Bodyan

Antiglobulino testą, skirtą nepilniems anti-eritrocitų antikūnams aptikti, pasiūlė Coombs, Morant, Reis 1945 m., o vėliau jis buvo pavadintas Kumbso testu. Esmė šis metodas yra tai, kad antiglobulino serumas, kuriame yra antikūnų prieš žmogaus imunoglobulinus, reaguodamas su raudonaisiais kraujo kūneliais, įjautrintais nepilnais antikūnais, sukelia jų agliutinaciją.

Priklausomai nuo to, ar antikūnai yra fiksuoti raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje, ar yra laisvos būklės kraujo plazmoje, naudojamas tiesioginis ar netiesioginis Kumbso testas.

Tiesioginis Kumbso testas atliekamas tais atvejais, kai yra pagrindo manyti, kad tiriami raudonieji kraujo kūneliai jau yra in vivo buvo įjautrinti atitinkamais antikūnais, t.y. organizme įvyko pirmoji reakcijos fazė – antikūnų fiksacija raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje, o vėlesnis antiglobulino serumo pridėjimas sukelia įjautrintų ląstelių agliutinaciją.

Naudojant netiesioginį Kumbso testą, tiriamame serume aptinkami nepilni antikūnai. Tokiu atveju reakcija vyksta dviem etapais. Pirmasis etapas – tiriamųjų eritrocitų inkubavimas su tiriamuoju serumu, kurio metu tiriamojo serumo mėginyje esantys antikūnai fiksuojami eritrocitų paviršiuje. Antrasis žingsnis yra antiglobulino serumo pridėjimas.

Iki šiol Kumbso testas buvo plačiai naudojamas laboratorinėje praktikoje imunopatologinių būklių diagnostikai, ypač autoimuninei hemolizinei anemijai, kuriai būdingas raudonųjų kraujo kūnelių sunaikinimas dėl surišimo. ląstelės membrana su antikūnais ir (ar) komplemento sistemos komponentais. Jis naudojamas nustatyti Ig G buvimą eritrocitų membranoje (dažniausiai Ig G1 ir Ig G3), kuris gali aktyvuoti komplementą, o kartais ir komplementą (C3d). Tačiau ūminiu ligos laikotarpiu dėl raudonųjų kraujo kūnelių, ant kurių buvo užregistruotas daug antikūnų, sunaikinimo, hemolizinės krizės metu, taip pat esant nepakankamam antikūnų kiekiui lėtinės ligos eigoje. liga, gali būti stebimas neigiamas tiesioginis Kumbso testas.

Reikia pabrėžti, kad netiesioginis Kumbso testas išlieka geriausias metodas individualus perpylimo terpės pasirinkimas, nes leidžia tiksliausiai nustatyti individualų donoro ir recipiento suderinamumą pagal eritrocitų antigenus.

Tiriant visus organų ir audinių recipientus prieštransplantacijos laikotarpiu ir kraujodaros kamieninių ląstelių recipientus taip pat po transplantacijos, rekomenduojamas papildomas tiesioginis antiglobulino tyrimas autoantikūnams nustatyti.

Be imunohematologijos ir transfuziologijos, antiglobulino tyrimai plačiai naudojami diagnozuojant daugybę patologinių būklių: hematologinių ligų, įskaitant limfoproliferacines ligas, sisteminės ligos jungiamasis audinys, Sjogreno liga, lėtinis aktyvus hepatitas ir kt.

Kumbso testai aktyviai naudojami medicinos genetikoje ir teismo medicinos paviršiniams eritrocitų antigenams nustatyti.

Kumbso testas yra gana daug darbo reikalaujantis tyrimo metodas, kurio įgyvendinimas reikalauja ypatingo kruopštumo. Naudojant jį, kyla tam tikrų sunkumų, ypač susijusių su silpnai teigiamų reakcijų aiškinimu. Yra žinoma, kad klaidingai silpni teigiami arba neigiamos reakcijos Atliekant Kumbso testus, jie gali būti nepakankamai veiksmingo raudonųjų kraujo kūnelių plovimo, antiglobulino reagento neutralizavimo serumo pėdsakais pasekmė, taip pat sąlyčio su riebalais nesuteptu paviršiumi, ant kurio galima pritvirtinti antiglobuliną, taip prarandant savo aktyvumą. . Kitas Kumbso testo trūkumas – antiglobulino reagento, kurio paruošimas ir laikymas turi tam tikrų ypatybių, nestabilumas, dėl ko taip pat sunku kiekybiškai įvertinti hemagliutinacijos reakciją su antiglobulino serumu.

Be to, tyrimai, atlikti A. Holburn, D. Voak ir kt. , parodė, kad klaidingai neigiamų rezultatų priežastis gali būti per didelis purtymas sumaišant raudonųjų kraujo kūnelių suspensiją. Klaidingus rezultatus atliekant antiglobulino tyrimus taip pat gali lemti antiglobulino reagento anti-komplementarių antikūnų, ypač C3d-, C3c-, C4c- ir C4d-komplemento komponentų, kurie yra adsorbuoti ant kūno paviršiaus. inkubacijos metu ištirkite raudonuosius kraujo kūnelius ir sukurkite teigiamo rezultato vaizdą.

Šiuos trūkumus galima lengvai pašalinti kruopščiai nuplaunant tiriamus mėginius ir stebint reakcijos sąlygas.

Pastarąjį dešimtmetį mažo jonų stiprumo izotoninis druskos tirpalas (LISS) buvo naudojamas siekiant sutrumpinti laiką, reikalingą atlikti netiesioginį Kumbso testą ir padidinti jo jautrumą.

Neabejotinas antiglobulino testų pranašumas, pasak daugelio autorių, yra didelis jų jautrumas, kuris žymiai viršija jų skiriamąją gebą. alternatyvūs metodai testai, naudojami neagliutinuojantiems antikūnams aptikti.

Palyginome kraujo serumo tyrimo metodų skiriamąją gebą dėl nepilnų antikūnų, naudojant poligliuciną, želatiną ir antiglobulino serumą. Tyrimo metu 140 izoimuninių donorų kraujo serumo mėginių buvo stebimi nepilnų anti-D antikūnų titrai, naudojant želatinos, poligliucino ir netiesioginius antiglobulino tyrimus. Šių metodų formuluotė buvo atlikta pagal visuotinai priimtus metodus.

Nustatyta, kad pagal jų skiriamąją gebą eritrocitų jautrinimo anti-D antikūnais nustatymo metodai yra išdėstyti taip: jautriausias yra netiesioginis Kumbso testas, po to – želatinos testas, o mažiausiai informatyvus – poligliucino testas. Šios eksperimentų serijos rezultatai visiškai atitinka literatūros duomenis, kas leidžia daryti tokią išvadą aukštas lygis Kumbso testų jautrumas, leidžiantis labai tiksliai nustatyti, ar organizme yra anti-eritrocitų antikūnų, kurie nesukelia raudonųjų kraujo kūnelių agliutinacijos.

Tačiau praktikoje atliekant Kumbso tyrimus, pasitaiko atvejų, kai nepilnų antikūnų neaptinkama, nors klinikinis ligos vaizdas ar ankstesnė imunizacija rodo galimą jų buvimą. Tokiais atvejais galima daryti prielaidą, kad antikūnų kiekis yra nepakankamas, kad juos nusodintų antiglobulino serumo antikūnai.

Šią išvadą patvirtino ir mūsų pačių atliktas eksperimentas, kurio metu, taikant analitinės ląstelių mikroelektroforezės metodą, buvo nustatytas anti-D antikūnų buvimas ant tiriamųjų eritrocitų, kurių netiesioginiame Kumbso teste neaptikta. Šioje eksperimentų serijoje antiglobulino serumas buvo dedamas į eritrocitus, iš anksto inkubuotus su serumais, gautais iš imunizuotų donorų kraujo vykstančios antikūnų genezės laikotarpiu, t.y. laikotarpiu, kai antikūnai juose nebuvo aptikti naudojant žinomus metodus, įskaitant Kumbso testą.

Atliktų tyrimų metu buvo pateikti statistiniai įrodymai, kad raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje yra nepilnų antikūnų. reikšmingas pokytisįjautrintų raudonųjų kraujo kūnelių elektroforezinio mobilumo dydis, pridėjus antiglobulino serumo. Reikėtų pažymėti, kad anti-D antikūnai vėliau buvo nustatyti visiems imunizuotiems donorams atliekant netiesioginį Kumbso testą kraujo serume.

Gillerand ir kt. taip pat parodė, kad antiglobulino tyrimams būdingas tam tikras jautrumo slenkstis: teigiamas rezultatas pastebimas tik tada, kai vieno raudonojo kraujo kūnelio paviršiuje užfiksuojama ne mažiau kaip 500 Ig G molekulių.

Be to, literatūroje pateikiama įrodymų, kad galimas neigiamas Kumbso testo rezultatas gali būti susijęs su mažu antikūnų, kurie jautrina raudonuosius kraujo kūnelius, afinitetu, dėl kurio jie lengvai išsivalo nuo raudonųjų kraujo kūnelių paviršiaus plovimo proceso metu. .

Atsižvelgdami į tai, kas išdėstyta pirmiau, galime daryti išvadą, kad kai kuriais atvejais neigiamas Kumbso testo rezultatas dar nėra įrodymas, kad raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje nėra fiksuotų antikūnų.

Yra žinoma, kad Kumbso reakcijos yra labai specifinės ir gali aptikti daugumą neišsamių antikūnų tipų. Tačiau, kaip rodo kai kurie eksperimentiniai duomenys, antiglobulino testai gali būti teigiami ir neimunologinėmis sąlygomis. E. Muirhead ir kt. antrą dieną po fenilhidrazino vartojimo buvo stebimi šunys teigiamas testas Combs. Toks greitas teigiamos reakcijos atsiradimas prieštarauja jos imunologiniam pobūdžiui ir, veikiau, yra susijęs su nespecifine baltymo adsorbcija eritrocitų paviršiuje.

M. Williams ir kt. nustatė, kad klavulano rūgštis taip pat gali sukelti teigiamą reakciją, kuri, pasak autorių, yra susijusi su nespecifine plazmos baltymų adsorbcija eritrocitų paviršiuje. Panašus poveikis buvo pastebėtas gydant cefalosporinų grupės antibiotikais.

Minėtų tyrimų autoriai pabrėžia teigiamų Kumbso testų rezultatų neimunologinį pobūdį ir tvirtina, kad šios medžiagos gali modifikuoti raudonųjų kraujo kūnelių membranas, dėl kurių raudonieji kraujo kūneliai gali adsorbuoti baltymus (ypač albuminas), kurie paprastai yra kraujo plazmoje ir neturi antikūnų savybių. Be to, gali būti, kad ksenobiotikas, adsorbuotas ant ląstelės paviršiaus, yra ryšys tarp ląstelės membranos ir plazmos baltymų.

Dėl teisinga interpretacija Antiglobulino tyrimų rezultatuose taip pat reikia atsižvelgti į kiekybinį jaunų ir subrendusių raudonųjų kraujo kūnelių santykį periferiniame kraujyje. Nustatyta, kad sustiprintos eritrono regeneracijos laikotarpiu iš organizmo išskirtus retikulocitus gali agliutinuoti antiglobulino serumas.

Teigiamas tiesioginio antiglobulino tyrimo rezultatas atsiranda su skirtingais patologinės būklės, lydimas imuninės sistemos sutrikimų, uždegiminių procesų, lemiančių nespecifinę skirtingo specifiškumo antikūnų adsorbciją ant eritrocitų membranų. Tai rodo, kad Ig G molekulės nesąveikauja su specifiniais eritrocitų antigenais, o yra tik fiksuotos tiriamų ląstelių paviršiuje.

Reikėtų atsižvelgti į tai, kad atliekant Kumbso testą sergant ligomis, kurioms būdinga disproteinemijos išsivystymas arba paraproteinų atsiradimas, teigiamas rezultatas gaunamas dėl to, kad eritrocitų paviršiuje yra baltymų, kurie neturi antikūnų, o tai taip pat rodo antiglobulino tyrimų specifiškumo trūkumą dėl jų pagalba aptikto baltymo pobūdžio.

Taigi, kaip parodė daugybė tyrimų, teigiami tiesioginių ir netiesioginių antiglobulino tyrimų rezultatai nėra absoliutus antikūnų buvimo įrodymas, nes teigiamų reakcijų gali būti stebimas ir esant įvairioms patologinėms būsenoms, nesusijusioms su organizmo izosensibilizacija ar autosensibilizacija. Todėl tik kelių imunoserologinių metodų rezultatų palyginimas su klinikinis vaizdas ligos leidžia visapusiškai įvertinti besivystantį patologinį procesą.

Teigiamas netiesioginis antiglobulino testas su neigiamu tiesioginiu testu dažniausiai rodo, kad tiriamajame serume yra laisvų aloantikūnų, susijusių su ankstesniais kraujo perpylimais ar nėštumu.

Kumbso testas dažnai būna teigiamas paūmėjus paroksizminei nakčiai hemoglobinurijai; teigiamas Kumbso testas su anti-C3 ir anti-C3dg yra šalto agliutinino ligos žymuo.

Tais atvejais, kai yra didelė rizika susirgti naujagimio hemolizine liga, didelę reikšmę Norėdami nustatyti diagnozę (dažniausiai nėštumo metu) ir, jei reikia, dinamiškai stebėti antikūnų titro išvaizdą ir pokyčius, turite tiesioginių ir netiesioginių antiglobulino tyrimų rezultatus. Dažniausiai naujagimių hemolizinė liga siejama su motinos ir vaisiaus nesuderinamumu antigenui D, rečiau – ABO sistemos antigenams, dar rečiau – kitiems antigenams (C, c, K ir kt.). Šio proceso metu susidaro antikūnai La, kaip taisyklė, yra nepilni Ig G klasės antikūnai, aiškiai aptinkami atliekant netiesioginį antiglobulino testą. Sergant šia liga, teisingai nustatytas nustatytų antikūnų titras ir specifiškumas turi didelę reikšmę, nes yra tam tikra koreliacija tarp antieritrocitų antikūnų kiekio nėščios moters kraujyje ir galima prognozė hemolizinės ligos sunkumas.

Taip pat būtinas netiesioginis Kumbso testas klinikinė praktika siekiant užtikrinti saugią transfuzijos terapiją. Jo įgyvendinimas yra privalomas donorų ir įvairių kategorijų recipientų imunohematologinių tyrimų, taip pat visų gydymo įstaigų pacientų, kuriems gali prireikti kraujo ir jo komponentų perpylimo, įprastinių tyrimų komponentas.

Netiesioginis antiglobulino testas naudojamas šiais atvejais:

Tikslesniam Rh priklausomybės (antigeno D) nustatymui, esant neaiškiems Rh faktoriaus nustatymo kitais metodais (poligliucinu, želatina ir kt.) rezultatams;

Nustatyti silpnus eritrocitų antigenus (Kell, Duffy, Kidd, Lewis ir kt. sistemas) ir antikūnus prieš šiuos antigenus;

Alioimuniniams anti-eritrocitiniams antikūnams, įskaitant antikūnus, sukeliančius hemolizines reakcijas po transfuzijos, aptikti ir identifikuoti;

Nustatyti AB0 sistemos imuninių antikūnų buvimą perpylimo hemolizinių komplikacijų metu;

Kaip suderinamumo testas, skirtas individualiam perpilto kraujo ir jo komponentų atrankai.

Taigi Kumbso testas yra svarbus diagnostinis testas, naudojamas įvairiose medicinos srityse (hematologijoje, akušerijoje, reumatologijoje, transfuziologijoje, klinikinėje ir laboratorinėje diagnostikoje ir kt.). Kumbso testo atlikimo ypatumų išmanymas padės padidinti gautų rezultatų patikimumą ir prisidės prie teisingo laboratorinių duomenų interpretavimo.

Literatūra

1. Antikūnai. Metodai / red. D. Katie. - M.: Mir, 1991 m.

2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadžijevas A.B.. // Anemijos transfuzinė terapija: vadovėlis. vadovas gydytojams. - M.: Prakt. Medicina, 2005. - P. 105-106.

3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfuziologija. - 2006. - Nr. 2. - P. 39-62.

4. Donskovas S.I.// Rezus sistemos kraujo grupės: teorija ir praktika. - M.: VINITI RAS, 2005. - P. 180-186, 195.

5.Imunoserologija (reguliaciniai dokumentai) / komp. A.G. Bashlay, S.I. Donskovas. - M.: VINITI RAS, 1998.

6.Kraujo sistemos tyrimas klinikinėje praktikoje / red. G.I. Kozinetsas, V.A. Makarova. - M.: Triada-X, 1997 m.

7. Levinas V.I. Į eritrodierezės ir eritropoezės mechanizmą ūminiu laikotarpiu pohemoraginė anemija: autoriaus santrauka. dis. ...kand. medus. Sci. – Minskas, 1968 m.

8. Ragimovas A.A., Bayramalibeyli I.E.. // Anemijos diagnostikos, profilaktikos ir gydymo pagrindai. - M.: GOU VUNMC MH RF, 2002. - P. 204-209.

9. Chumakova E.D.. // Faktinės problemos hematologija ir transfuziologija: VI Baltarusijos Respublikos hematologų ir transfuziologų kongreso medžiaga, Minskas, 2007 m. gegužės 24-25 d. / red. A.I. Svirnovskis, M.P. Potapneva. - Minskas: Respublikinis mokslinis ir praktinis hematologijos ir transfuziologijos centras, 2007. - P. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lancetas. - 1945. - T. 2. - P. 15.

11. Freedmanas J. // J. Klinas. Pathol. - 1979. - T. 32. - P. 1014-1018.

12. Holburnas A.M.. Kokybės kontrolė. Methods in Hematology / red. I. Cavill. - Edinburgas: Churchill Livingstone, 1982. - T. 4. - P. 34-50.

13. Khanas S.// CMAJ. - 2006. - T. 175, N 8. - P. 919.

14. Komatsu F.// Nipponas Rinsho. - 2005. - T. 63 (7 priedas). - P. 719-721.

15. Komatsu F.// Nipponas Rinsho. - 2005. - T. 63 (7 priedas). - P. 716-718.

16. Molthanas L., Reidenbergas M.M., Eihmanas M.F.// Naujoji angl. J. Med. – 1976 m. – t. 277. - P. 123-125.

17. Muirhead E.E., GrovesM., Brianas S. // J. Lab. Clin. Med. – 1954 m. – t. 44. - P. 902-903.

18. Rosse W.F.//Hosp. Prac. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., Moore'asB. ir kt. //Biotests Bull. - 1986. - T. 1. - P. 41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. ir kt. Ląstelių plovimo mašinos antiglobulino tyrimams. Pakartotinis bandymas – naujas metodas, parodantis vienos plačiai naudojamos mašinos – Sorvall CW1-AF2 – neefektyvumą: ataskaita DHSS techniniam skyriui, 1991 m. vasario mėn.

21. Williamsas M.E., Thomas D., Harmanas C.P.. ir kt. //Antimikrobiniai agentai ir chemoterapija. – 1985 m. - P. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H.. // CMAJ. - 2006. - T. 174, N 3. - P. 305-307.

Medicinos naujienos. - 2008. - Nr. 3. - 33-36 p.

Dėmesio! Straipsnis skirtas medicinos specialistams. Šio straipsnio ar jo fragmentų perspausdinimas internete be hipersaito į šaltinį laikomas autorių teisių pažeidimu.

Arba ištirpintas plazmoje.

Sinonimai: antiglobulino testas, Kumbso testas, AGT, netiesioginis / tiesioginis antiglobulino testas, IAT, NAT, DAT, netiesioginis / tiesioginis Kumbso testas

Kumbso testas yra

analizė, kuri nustato imunizaciją ir antikūnus prieš raudonuosius kraujo kūnelius.

Kumbso testo tipai

• tiesioginis Kumbso testas– aptinka raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje fiksuotus antikūnus. Atliekama, jei įtariama autoimuninė hemolizinė anemija, hemolizė sergant autoimuninėmis ligomis, pavartojus vaistų (metildopos, penicilino, chinino), po kraujo perpylimo ir naujagimio hemolizinės ligos.

Raudonieji kraujo kūneliai buvo įjautrinti in vivo – prie jų jau tvirtai prisirišę antikūnai, o pridėjus antiglobulino serumo (anti-IgG) įjautrintos ląstelės sulimpa, o tai matoma plika akimi.

• netiesioginis Kumbso testas– nustato anti-eritrocitų antikūnus kraujo plazmoje, atliekama prieš kraujo perpylimą ir nėštumo metu.

Anti-eritrocitų antikūnai – tai autoantikūnų rūšis, t.y. antikūnų prieš savo audinius. Autoantikūnas atsiranda, kai imuninė sistema nenormaliai reaguoja į tam tikrus vaistus, pavyzdžiui, dideles penicilino dozes.

Raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje yra įvairių cheminių struktūrų (glikolipidų, sacharidų, glikoproteinų ir baltymų), medicinoje vadinamų. antigenai. Žmogus iš savo tėvų paveldi specifinį antigenų žemėlapį ant kiekvieno raudonojo kraujo kūnelio.

Antigenai sujungiami į grupes ir šalia šios kraujas skirstomas į kelias grupes – pagal AB0 sistema, Rhesus, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Žymiausi ir reikšmingiausi gydytojo darbe yra AB0 ir Rh faktorius (Rh).

AB0 sistema

Rezus priklausymasžmogų lemia šių antigenų buvimas. Ypač svarbus eritrocitų antigenas yra antigenas D. Jei jis yra, tada jie kalba apie Rh teigiamą kraujo RhD, o jei jo nėra, jie kalba apie Rh neigiamą Rhd.

Jei atitinkamas antikūnas prisijungia prie eritrocitų antigenų, eritrocitas sunaikinamas - hemolizuoja.

Naudojimo indikacijos tiesioginis antiglobulino tyrimas

• pirminė autoimuninė hemolizinė anemija
• hemolizinė anemija sergant autoimuninėmis, navikinėmis, infekcinėmis ligomis
• vaistų sukelta autoimuninė hemolizinė anemija
• hemolizinė anemija po perpylimo (dienos – mėnesiai)
• naujagimio hemolizinė liga (vienos iš kraujo grupių nesuderinamumas)

Naudojimo indikacijos netiesioginis antiglobulino tyrimas

• prieš kraujo perpylimą
• Rh neigiamos moters nėštumo metu

Autoimuninė hemolizinė anemija

Autoimuninė hemolizinė anemija (pirminė)– klasikinė autoimuninė liga, kurios priežastys nežinomos. Daroma prielaida, kad imuninės sistemos lygmenyje yra sąveikos proceso sutrikimas, dėl kurio savo raudonieji kraujo kūneliai suvokiami kaip svetimi. Ląstelės gamina IgG klasės (reaguoja esant t 37°C) ir (arba) IgM (esant t 40°C) antikūnus, prisitvirtinančius prie eritrocitų paviršiaus, suaktyvindamos daugybę fermentų (komplemento sistemą) ir „perforuodami“. eritrocitų sienelė, dėl kurios jis sunaikinamas, hemolizė.

Hemolizinės anemijos simptomai

• nuovargis, bendras silpnumas, dirglumas
• dusulys
• pilvo skausmas, pykinimas
• tamsi šlapimo spalva
• nugaros skausmas
• ikterinis odos ir gleivinių spalvos pasikeitimas
• padidėjusios kepenys, blužnis
• raudonųjų kraujo kūnelių ir hemoglobino kiekio sumažėjimas atliekant bendrą kraujo tyrimą

Teigiamas rezultatas tiesiai Kumbso testai 100% patvirtina autoimuninės hemolizinės anemijos diagnozę, įrodant jos autoimuninę kilmę. Tuo pačiu metu neigiamas rezultatas neleidžia pašalinti diagnozės.

Antrinė autoimuninė hemolizinė anemija ir teigiamas Kumbso testas gali atsirasti sergant šiomis ligomis:

• sisteminė raudonoji vilkligė
• Evanso sindromas
• Waldenströmo makroglobulinemija
• paroksizminė šalto hemoglobinurija
• lėtinė limfocitinė leukemija
• limfomos
• Infekcinė mononukleozė
• Mycoplasma pneumoniae infekcija
• sifilis

Teigiamas antiglobulino testas šioms ligoms nėra naudingas diagnostinis kriterijus, bet yra vienas iš ligos simptomų.

Naujagimio hemolizinė liga

Priežastis naujagimių hemolizinė liga - motinos ir vaisiaus kraujo grupių nesuderinamumas, daugeliu atvejų pagal Rh sistemą, pavieniais atvejais - pagal AB0 sistemą, kazuistiškai - pagal kitus antigenus.

Rh konfliktas išsivysto, jei Rh neigiamos moters vaisius paveldi Rh teigiamą kraują iš tėvo.

Liga naujagimiui išsivysto tik tuo atveju, jei motinai jau atsirado antikūnų prieš atitinkamus antigenus, o tai atsitinka po ankstesnių nėštumų, gimdymo, abortų ir nesuderinamų kraujo perpylimų. Dažniausia priežastis, sukelianti antikūnų prieš eritrocitų membranos antigenus sintezę, yra gimdymas (vaisiaus ir motinos kraujavimas). Pirmas gimdymas paprastai vyksta be komplikacijų, tačiau vėlesniais jau pirmomis dienomis po gimimo atsiranda naujagimio hemolizinė liga.

Naujagimio hemolizinės ligos simptomai

• odos pageltimas
• anemija
• odos ir gleivinių blyškumas
• padidėjusios kepenys ir blužnis
• kvėpavimo problemos
• viso kūno patinimas
• sužadinimas ir laipsniškas centrinės nervų sistemos slopinimas

Anemija po kraujo perpylimo

Netiesioginis Kumbso testas atlikti prieš kraujo perpylimą, siekiant įvertinti suderinamumą, ir tiesioginis Kumbso testas- po jos, jei įtariama potransfuzinė hemolizė, t.y. jei turite simptomų, tokių kaip karščiavimas, šaltkrėtis, laistymas (skaitykite toliau). Analizės tikslas – nustatyti antikūnus prieš perpiltus raudonuosius kraujo kūnelius, kurie prisijungė prie recipiento raudonųjų kraujo kūnelių ir yra hemolizės po perpylimo priežastis, taip pat priešlaikinį donoro raudonųjų kraujo kūnelių pašalinimą iš paciento kraujotakos. recipientas (tas, kuris gavo kraują).

Hemolizinės reakcijos simptomai po kraujo perpylimo

• kūno temperatūros padidėjimas
• odos bėrimas
• nugaros skausmas
• raudona šlapimo spalva
• pykinimas
• galvos svaigimas

Kumbso testo dekodavimas

Verta prisiminti, kad pagrindinės tiesioginių ir netiesioginių antiglobulino tyrimų iššifravimo taisyklės yra vienodos. Skiriasi tik antikūnų vieta – kraujyje arba jau ant raudonųjų kraujo kūnelių – ant raudonųjų kraujo kūnelių.

• Jeigu tiesioginis Kumbso testas yra neigiamas– tai reiškia, kad antikūnas „nesėdi“ ant raudonųjų kraujo kūnelių, todėl reikia toliau ieškoti simptomų priežasties ir atlikti netiesioginį Kumbso testą.
• jei teigiamas Kumbso testo rezultatas nustatomas po kraujo perpylimo, infekcijų, vaistų – teigiamas rezultatas gali išlikti iki 3 mėnesių (raudonųjų kraujo kūnelių gyvenimo trukmė 120 dienų – 3 mėn.)
• teigiamas antiglobulino tyrimo rezultatas autoimuninei ligai nustatyti gali trukti mėnesius ar net metus

Kumbso bandymo standartai

• tiesioginis Kumbso testas- neigiamas
• netiesioginis Kumbso testas- neigiamas

Kokybiškai teigiamas rezultatas matuojamas pliusų skaičiumi nuo vieno iki keturių (+, ++, +++, ++++), o kiekybiškai skaitmenine forma - 1:16, 1:256 ir kt.

4 faktai apie Kumbso testą

• pirmą kartą pasiūlyta Kembridže 1945 m
• jautrumo slenkstis – mažiausiai 300 fiksuotų antikūnų molekulių ant vieno raudonojo kraujo kūnelio
• antikūnų, sukeliančių hemolizę, skaičius - kiekvienam asmeniui individualiai (nuo 16-30 iki 300)
• kitų laboratorinių hemolizinės anemijos rodiklių (hemoglobino, bilirubino, retikulocitų) dinamika gali normalizuotis, o Kumbso testas išliks tokio paties lygio.

Antiglobulino tyrimo trūkumai

• negalima nustatyti antigeno prisijungimo prie antikūno stiprumo
• nežinomas surištų antikūnų skaičius
• nenustato antikūno tipo
• teigiamas Kumbso testas nepadės nustatyti jo priežasties
• 0,5% sveikų žmonių turėti teigiamą Kumbso testą be jokių hemolizinės anemijos požymių
• netinka gydymo sėkmei stebėti, nes tai nenurodys eritrocitų hemolizės aktyvumo