Coombsov test

Izravni Coombsov test je antiglobulinski test (aglutinacija u gelu koja omogućuje detekciju potpunih dvovalentnih protutijela), kojim se otkrivaju protutijela IgG klase i C3 komponenta komplementa na površini crvenih krvnih stanica. Tipično, protutijela otkrivena izravnim Coombsovim testom imaju široku specifičnost koja nije povezana s dobro utvrđenim antigenom. Pozitivan izravni Coombsov test jasno ukazuje da pacijent ima hemolitička anemija, iako ne boluju svi pacijenti s pozitivnim izravnim antiglobulinskim testom od ove bolesti. U otprilike 10% bolesnika izravnim Coombsovim testom ne mogu se utvrditi protutijela ili komponente komplementa na membrani crvenih krvnih stanica (test je negativan), ali ipak boluju od autoimune hemolitičke anemije. Da bi se razjasnila specifičnost protutijela u takvim slučajevima, koriste se testovi s njihovim ispiranjem. Izravni Coombsov test, pozitivan samo na komplement, obično se odnosi na hladna protutijela tipa IgM. U ovom slučaju IgM antitijela nije prisutan na crvenim krvnim stanicama kada bazalna temperatura tijela. Međutim, zbog činjenice da IgM antitijela aktivno fiksiraju komplement, a komplement ostaje na crvenim krvnim stanicama, kod ovog oblika autoimune hemolitičke anemije (bolest hladnog agutinina) Coombsov test će biti pozitivan samo na komplement.

Izravni Coombsov test pozitivan je na autoimunu hemolitičku anemiju uzrokovanu toplim protutijelima, autoimunu anemiju izazvanu lijekovima (pri uzimanju metildope do 20% bolesnika ima pozitivnu reakciju), adsorpcijski tip hemolitičke anemije, imunokompleksni tip hemolitičke anemija (test je pozitivan samo na C3), s autoimunom hemolitičkom anemijom uzrokovanom hladnim protutijelima - bolest hladnog aglutinina (test je pozitivan samo na C3). Kod paroksizmalne hladne hemoglobinurije direktni Coombsov test je negativan.
U akutnom razdoblju bolesti, zbog razaranja crvenih krvnih stanica na kojima se nalazi veliki broj protutijela, s hemolitičkom krizom, kao i s nedovoljnom količinom protutijela tijekom kroničnog tijeka bolesti, može se primijetiti negativan direktni Coombsov test.

:

• Važan uvjet za osiguranje kvalitete laboratorijska istraživanja krv se uzima materijal natašte, u jutarnje vrijeme(do 12:00 sati).
• 12 sati prije testa trebali biste izbjegavati piti alkohol, pušiti, jesti i ograničiti tjelesnu aktivnost.
• Ujutro na dan analize krvi možete piti vodu.
• Izbjegavajte uzimanje lijekova; Ako nije moguće prekinuti uzimanje lijeka, morate obavijestiti laboratorij.
• Preporučljivo je uzeti materijal prije provođenja bilo kakvih medicinskih dijagnostičkih postupaka.
• Prilikom procjene razine hormona u žena, važno je uzeti u obzir dan menstrualnog ciklusa Kada je najbolje vrijeme za određivanje određenih hormona? Ove informacije možete dobiti od svog liječnika.

Indeks	Karakteristično
Analizator i ispitni sustav	Gel kartice; DiaMed AG (Švicarska)
Referentne vrijednosti	Negativan rezultat / Pozitivan rezultat
Ometajući čimbenici. Lijekovi
Pozitivan test moguć je kod uzimanja sljedećih lijekova: acetaminofen, salicilna kiselina, aminopirin, antihistaminici, karbromal, cefalosporini, klorpromazin, klorpropamid, cisplatin, klonidin, dipiron, etosuksimid, fenfluramin, fuadin, hidralazin, hidroklorotiazid, ibuprofen, inzulin, izoniazid, levodopa, mefenaminska kiselina, melfalan, metadon, metildopa, metilsergid, nomifenzin , penicilamin, lini penicina , fenacetin, fenilbutazon, probenecid, prokainamid, kinidin, kinin, rifampin, streptomicin, sulfonamidi, derivati ​​sulfonilureje, tetraciklin, triamteren, trimelit anhidrid
Indikacije za upotrebu
Dijagnoza imunološke hemolitičke anemije, hemolitička bolest novorođenčad, imunološka hemolitička anemija izazvana lijekovima, hemolitičke transfuzijske reakcije
Interpretacija rezultata
Normalno je izravni Coombsov test negativan. Pozitivan Coombsov test za: autoimuna hemolitička anemija; hemolitička bolest novorođenčadi; imunološka hemolitička anemija izazvana lijekovima; hemolitičke transfuzijske reakcije

Antiglobulinski princip. Antieritrocitna protutijela nepotpunog tipa i molekule komplementa (C) koje se nalaze na površini eritrocita otkrivaju se – izravnim testom – njihovom aglutinacijom u kontaktu sa životinjskim serumom koji sadrži protutijela na humani antiglobulin (antiglobulinski serum). Nepotpuna antitijela koja su slobodna u serumu detektiraju se - neizravni test - tako da se pričvrste na mješavinu normalnih crvenih krvnih stanica grupe 0, čiji svi antigeni pripadaju poznatom Rh sustavu, a zatim se aglutiniraju pod utjecajem antiglobulinskog seruma.

Materijali, reagensi za Coombsov antiglobulinski test: epruvete 10/100 ml; graduirane pipete 1, 2 ml; Pasteurove pipete; tronošci; nebrušeno staklo; 8,5‰ otopina NaCl; crvene krvne stanice. Crvena krvna zrnca pacijenta, kao i ona iz skupine 0, bit će dobivena iz svježe uzete krvi pomoću sredstva protiv zgrušavanja (otopina EDTA).

Crvena krvna zrnca skupine 0 trebaju biti odabrana na takav način da potječu od normalnih osoba i sadrže sve Rh antigeni. Mogu se čuvati do 7 dana u autolognoj plazmi na +4°C. U nedostatku crvenih krvnih stanica skupine 0, može se koristiti poznati antigenski mozaik, mješavina crvenih krvnih stanica skupine 0, Rh-pozitivnih i Rh-negativnih crvenih krvnih stanica.

Serum pacijent mora biti svježe odabran.

Antiglobulinski serum u produkciji Instituta. dr. I. Cantacuzino, dostupan je u liofiliziranom obliku u ampulama od 1 ml. Nakon otapanja serum čuvati na -20°C.

Tehnika Coombsovog antiglobulinskog testa:
A) Izravni Coombsov test: Isperite pacijentova crvena krvna zrnca 3 puta 8,5‰ otopina NaCl.
Na nekoliko stakalca nanijeti veliku kap razrjeđenja antiglobulinskog seruma, a pored nje malu kap sedimenta eritrocita bolesnika; pomiješajte kapljice s kutom čaše. Pripremljeni materijal ostaviti na stolu 5 minuta, zatim ispitati prisutnost aglutinata. Ako je rezultat pozitivan, odrediti maksimalni aglutinacijski titar.

b) Indirektni Coombsov test: eritrociti skupine 0, Rh-pozitivni i Rh-negativni, isprati 3 puta s 8,5‰ otopinom NaCl i izložiti serumu pacijenta u omjeru 2 kapi eritrocita na 8-10 kapi seruma, zatim inkubirati 60 minuta na temperatura od 37 ° C. Nakon toga ponovno tri puta isperite crvena krvna zrnca i tretirajte ih antiglobulinskim serumom, prema uputama za izravni test Coombs.

Kada govorimo o o hladnim aktivnim protutijelima senzibilizirati crvene krvne stanice skupine 0 tijekom 60 minuta. na temperaturi od +4°C.

Bilješka 1) Nemojte izvoditi izravni Coombsov test na crvenim krvnim stanicama pohranjenim jedan ili nekoliko dana na + 4°C ili sobnoj temperaturi, budući da rezultati mogu biti lažno pozitivni zbog fiksacije nepotpunih antitijela aktivnih na hladnoću prisutnih u normalnom serumu. 2) U slučajevima teške hiperproteinemije, isperite crvena krvna zrnca 4-5 puta i provjerite odsutnost serumskih proteina u posljednjoj tekućini za pranje pomoću sulfosalicilne kiseline.

Mogući ostatak od 2 μg IgG/ml u sedimentu eritrocita može neutralizirati antiglobulinski serum. Coombsov test također se može provesti korištenjem monospecifičnih anti-IgG, -IgM, -IgA -C3 i -C4 seruma kako bi se razjasnio tip stanica smještenih na površini crvenih krvnih stanica, na primjer, kod pacijenata koji boluju od autoimune hemolitičke anemija.

Coombsov test– test za otkrivanje antitijela pričvršćenih na površinu ili otopljenih u plazmi. Koristi se za otkrivanje imunizacije i antitijela na crvena krvna zrnca. Drugi naziv je antiglobulinski test. Može biti izravna ili neizravna.

Na direktni antiglobulinski test otkriva antitijela fiksirana na površini crvenih krvnih stanica. Provodi se u slučaju sumnje, drugih autoimunih bolesti, nakon uzimanja lijekova (metildopa, penicilin, kinin) itd.

Crvena krvna zrnca senzibilizirana su in vivo – antitijela su već čvrsto vezana za njih, a dodatak antiglobulinskog seruma (anti-IgG) uzrokuje slijepljenje senzibiliziranih stanica, što je vidljivo golim okom.

Indirektni Coombsov test detektira antieritrocitna protutijela u krvnoj plazmi, provodi se prije transfuzije krvi i tijekom.

Antieritrocitna antitijela su vrsta autoantitijela, tj. antitijela protiv vlastitih tkiva. Autoantitijela se javljaju tijekom patološke reaktivnosti imunološki sustav za neke lijekove, na primjer, visoke doze penicilina.

Crvena krvna zrnca na svojoj površini sadrže razne kemijske strukture(glikolipidi, saharidi, glikoproteini i proteini), u medicini nazvani antigeni. Osoba nasljeđuje od svojih roditelja specifičnu kartu antigena na svakom crvenom krvnom zrncu.

Antigeni se spajaju u skupine i potom se krv dijeli u nekoliko skupina – prema sustavu AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Najpoznatiji i najznačajniji u radu liječnika su AB0 i Rh faktor (Rh).

AB0 sustav

Rh status osobe određen je prisutnošću ovih antigena. Posebno važan antigen eritrocita je antigen D. Ako je prisutan, onda govore o Rh pozitivna krv RhD, a ako ga nema – oh Rh negativan Rhd.

Ako se odgovarajuće antitijelo veže za antigene eritrocita, eritrocit se uništava - hemoliza.

Indikacije

Glavna indikacija za direktnoantiglobulinski test- sumnja na hemolitičku anemiju. Najčešće se radi kod primarne autoimune hemolitičke anemije, hemolize kod reumatskih, tumorskih, zarazne bolesti, hemoliza izazvana lijekovima.

Ako se anemija pojavi nekoliko dana ili mjeseci nakon transfuzije krvi ili kod dugotrajne žutice u novorođenčeta, provodi se i izravni Coombsov test.

Neizravnoradi se antiglobulinski test prije transfuzije krvi i tijekom trudnoće Rh-negativne žene.

Autoimuna hemolitička anemija

Autoimuna hemolitička anemija (primarna)– klasična autoimuna bolest nepoznatog uzroka. Interakcija unutar imunološkog sustava je poremećena, što dovodi do percepcije vlastitih crvenih krvnih zrnaca kao stranih. U limfnim čvorovima se sintetiziraju protutijela klase IgG (reagiraju na t 37°C) i/ili IgM (na t 40°C) koja, kada se pričvrste na površinu eritrocita, pokreću niz enzima ( sustav komplementa) i “buše” stijenku eritrocita što dovodi do njegove destrukcije – hemolize.

Prvi simptomi uzrokovani su uništavanjem crvenih krvnih stanica i smanjenjem hemoglobina. Među njima:

• umor, opća slabost, razdražljivost
• dispneja
• bolovi u trbuhu i prsima, mučnina
• tamna boja urina
• bol u leđima
• ikterična promjena boje kože i sluznica
• smanjenje broja crvenih krvnih stanica i

Izravan pozitivan rezultat Coombs testovi 100% potvrđuje dijagnozu autoimune hemolitičke anemije, dokazujući njezino autoimuno podrijetlo. Istodobno, negativan rezultat ne omogućuje uklanjanje dijagnoze.

Sekundarna hemolitička anemija

Sekundarna autoimuna hemolitička anemija i pozitivan Coombsov test mogu se javiti kod sljedećih bolesti:

• Evansov sindrom
• infekcija pneumonijom

Pozitivan antiglobulinski test kod ovih bolesti jedan je od simptoma, a ne kriterij za dijagnozu.

Hemolitička bolest novorođenčadi

Uzrok hemolitička bolest novorođenčadi - nekompatibilnost krvne grupe majke i fetusa, u većini slučajeva prema Rh sustavu, u pojedinačnim slučajevima - prema sustavu AB0, kazuistički - prema drugim antigenima.

Rh sukob se razvija ako fetus Rh-negativne žene naslijedi Rh-pozitivnu krv od oca.

Bolest se kod novorođenčeta razvija samo ako je majka već razvila antitijela na odgovarajuće antigene, što se događa nakon prethodnih trudnoća, pobačaja i transfuzije nekompatibilne krvi. Najviše uobičajeni razlog poticanje sinteze antitijela na antigene membrane eritrocita – porođaj (feto-maternalno krvarenje). Prvo rođenje uglavnom se odvija bez komplikacija, ali kasniji su prepuni hemolitičke bolesti novorođenčeta u prvim danima nakon rođenja.

Simptomi hemolitičke bolesti novorođenčadi:

• žutost kože
• , i sluznice
• povećana jetra i slezena
• problemi s disanjem
• oticanje cijelog tijela
• ekscitacija i postupna depresija središnjeg živčanog sustava

Anemija nakon transfuzije krvi

Indirektni Coombsov test provodi se prije transfuzije krvi za procjenu kompatibilnosti, a izravni Coombsov test - nakon njega ako se sumnja na posttransfuzijsku hemolizu, tj. u prisutnosti simptoma kao što su groznica, suzenje (pročitajte dolje). Svrha analize je identificirati protutijela na transfuzirane crvene krvne stanice koja su se vezala na crvene krvne stanice primatelja i uzrokuju posttransfuzijsku hemolizu, kao i prerano uklanjanje donorskih crvenih krvnih stanica iz krvotoka primatelj (onaj koji je primio krv).

Simptomi:

• povećanje tjelesne temperature
• kožni osip
• bol u leđima
• Crvena
• mučnina
• vrtoglavica

Dekodiranje

Vrijedno je podsjetiti da su temeljna pravila za dešifriranje izravnih i neizravnih antiglobulinskih testova ista. Jedina razlika je mjesto antitijela – u krvi ili na crvenim krvnim stanicama.

• Ako direktni Coombsov test je negativan– to znači da antitijelo ne “sjeda” na crvena krvna zrnca i uzrok simptoma treba dalje tražiti i liječiti neizravni uzorak Coombs
• Ako pozitivan rezultat Coombsov test otkriven nakon transfuzije krvi, infekcija, lijekova - pozitivnost traje do 3 mjeseca (životni vijek crvenih krvnih zrnaca 120 dana - 3 mjeseca)
• pozitivan rezultat antiglobulinskog testa sa autoimuna bolest traje mjesecima pa i godinama

Norma

• direktni Coombsov test – negativan
• neizravni Coombsov test – negativan

Kvalitativno pozitivan rezultat mjeri se brojem pluseva od jedan do četiri (+, ++, +++, ++++), a kvantitativno u digitalnom obliku - 1:16, 1:256 itd.

Da. Vaš liječnik svakako treba znati da ste primili transfuziju krvi, budući da to sada utječe na ispravno tumačenje rezultata pretraga. Kada primate tuđu (doduše mnogo puta testiranu) krv, uvijek postoji mogućnost da će vaše tijelo razviti antitijela protiv transfuzirane krvi. Ta će antitijela osigurati loš utjecaj o zdravstvenom stanju. Za naknadne transfuzije krvi liječnik mora znati da ste već primili transfuziju, što znači da je bilo vremena za sintezu antitijela. Za trudnice su ove informacije još važnije.

3. Ako postoji neusklađenost Rh faktora između majke i djeteta, hoće li sva djeca biti bolesna?

Ovisi o tome je li dijete Rh pozitivno ili negativno (RhD). Nosioci krvnih grupa I, II, III i IV mogu biti Rh pozitivni ili negativni. U situaciji kada je majka Rh negativna, a dijete Rh pozitivno, antitijela će se stvarati već s prvom trudnoćom, ali tek nakon prvog poroda (ili prekida trudnoće) doći će do izravnog kontakta između krvi majke i majke. dijete. Hemolitički učinak protutijela ostvarit će se tek tijekom drugog i sljedećih poroda, što će dovesti do hemolitičke bolesti novorođenčeta.

Svaka žena s negativnim Rh faktorom treba pažljivo pregledati tijekom trudnoće i nakon poroda preventivno liječenje kako bi se spriječila pojava protutijela i daljnjih komplikacija.

4. Tijekom trudnoće, je li potrebno znati krvnu grupu mog supruga prije izvođenja Coombsovog testa?

Morate ne samo znati, već i provjeriti krvnu grupu biološkog oca djeteta tijekom trudnoće.

Podaci

• prvi put predložen u Cambridgeu 1945
• prag osjetljivosti - najmanje 300 fiksiranih molekula antitijela na jednom crvenom krvnom zrncu
• broj antitijela koja pokreću hemolizu - pojedinačno za svaku osobu (od 16-30 do 300)
• dinamika ostalih laboratorijskih pokazatelja hemolitičke anemije (hemoglobin, bilirubin, retikulociti) može se normalizirati, a Coombsov test će ostati na istoj razini

Coombsov test zadnji put je modificirao: 16. ožujka 2018 Marija Bodjan

Coombs, Morant, Reis 1945. predložili su antiglobulinski test, osmišljen za otkrivanje nepotpunih antieritrocitnih protutijela, koji je kasnije nazvan Coombsov test. Suština ovu metodu je da antiglobulinski serum koji sadrži antitijela na humane imunoglobuline, kada reagira s crvenim krvnim stanicama senzibiliziranim nepotpunim antitijelima, dovodi do njihove aglutinacije.

Ovisno o tome jesu li protutijela fiksirana na površini crvenih krvnih stanica ili su u slobodnom stanju u krvnoj plazmi, koristi se izravni ili neizravni Coombsov test.

Izravni Coombsov test provodi se u slučajevima kada postoji razlog za pretpostavku da su crvene krvne stanice koje se proučavaju već jesu in vivo su senzibilizirani odgovarajućim antitijelima, tj. prva faza reakcije - fiksacija protutijela na površini crvenih krvnih stanica - dogodila se u tijelu, a naknadni dodatak antiglobulinskog seruma uzrokuje aglutinaciju senzibiliziranih stanica.

Pomoću neizravnog Coombsovog testa otkrivaju se nepotpuna antitijela prisutna u testnom serumu. U ovom slučaju reakcija se odvija u dvije faze. Prva faza je inkubacija ispitivanih eritrocita s ispitivanim serumom, tijekom koje se antitijela sadržana u uzorku ispitivanog seruma fiksiraju na površini eritrocita. Drugi korak je dodavanje antiglobulinskog seruma.

Do sada se Coombsov test naširoko koristi u laboratorijskoj praksi za dijagnosticiranje imunopatoloških stanja, posebice kod autoimune hemolitičke anemije, koju karakterizira uništavanje crvenih krvnih stanica zbog vezanja stanična membrana s protutijelima i (ili) komponentama sustava komplementa. Koristi se za otkrivanje prisutnosti Ig G na membrani eritrocita (obično Ig G1 i Ig G3), koji mogu aktivirati komplement, a ponekad i komplement (C3d). Međutim, u akutnom razdoblju bolesti, zbog razaranja crvenih krvnih zrnaca na kojima je zabilježen veliki broj protutijela, tijekom hemolitičke krize, kao i kod nedovoljnog broja protutijela tijekom kroničnog tijeka bolesti, može se dogoditi da se u slučaju nedovoljnog broja protutijela u eritrocitu, tijekom kroničnog tijeka bolesti. može se primijetiti negativan direktni Coombsov test.

Mora se naglasiti da neizravni Coombsov test ostaje najbolja metoda individualni odabir medija za transfuziju, jer vam omogućuje da najtočnije odredite individualnu kompatibilnost davatelja i primatelja antigenima eritrocita.

Dodatni izravni antiglobulinski test na prisutnost autoantitijela preporučuje se kod pregleda svih primatelja organa i tkiva u predtransplantacijskom razdoblju te primatelja krvotvornih matičnih stanica i nakon transplantacije.

Osim u imunohematologiji i transfuziologiji, antiglobulinski testovi imaju široku primjenu u dijagnostici brojnih patoloških stanja: hematoloških bolesti, uključujući limfoproliferativne bolesti, sistemske bolesti vezivno tkivo, Sjogrenova bolest, kronični aktivni hepatitis itd.

Coombsovi testovi aktivno se koriste u medicinskoj genetici i sudska medicina za određivanje površinskih antigena eritrocita.

Coombsov test je prilično radno intenzivna metoda istraživanja koja zahtijeva posebnu pažnju u njegovoj provedbi. Kada se koristi, postoje neke poteškoće povezane, osobito s tumačenjem slabo pozitivnih reakcija. Poznato je da lažni slabi pozitivni odn negativne reakcije kod izvođenja Coombsovih testova mogu biti posljedica nedovoljno učinkovitog pranja crvenih krvnih stanica, neutralizacije antiglobulinskog reagensa tragovima seruma, kao i kontakta s nemasnom površinom na koju se antiglobulin može fiksirati, čime gubi svoju aktivnost . Još jedan nedostatak Coombsovog testa je nestabilnost antiglobulinskog reagensa, čija priprema i skladištenje ima određene značajke, što također otežava kvantifikaciju reakcije hemaglutinacije s antiglobulinskim serumom.

Osim toga, studije koje su proveli A. Holburn, D. Voak i sur. , pokazalo je da uzrok lažno negativnih rezultata može biti pretjerano mućkanje prilikom resuspendiranja suspenzije crvenih krvnih stanica. Pogrešni rezultati pri izvođenju antiglobulinskih testova također mogu biti uzrokovani prisutnošću u antiglobulinskom reagensu mješavine anti-komplementarnih protutijela, posebno na komponente komplementa C3d-, C3c-, C4c- i C4d-, koja su adsorbirana na površini testirati crvena krvna zrnca tijekom inkubacije i stvoriti privid pozitivnog rezultata.

Ovi se nedostaci mogu lako otkloniti temeljitim pranjem uzoraka koji se proučavaju i praćenjem uvjeta reakcije.

U posljednjem desetljeću korištena je izotonična fiziološka otopina niske ionske jakosti (LISS) kako bi se smanjilo vrijeme potrebno za izvođenje neizravnog Coombsovog testa i povećala njegova osjetljivost.

Neosporna prednost antiglobulinskih testova, prema brojnim autorima, je njihova visoka osjetljivost, koja znatno premašuje njihovu rezoluciju. alternativne metode testovi koji se koriste za otkrivanje neaglutinirajućih protutijela.

Usporedili smo rezoluciju metoda za ispitivanje krvnih seruma na prisutnost nepotpunih protutijela pomoću poliglucina, želatine i antiglobulinskog seruma. Tijekom istraživanja titri nepotpunih anti-D protutijela praćeni su u 140 uzoraka krvnog seruma izoimunih darivatelja pomoću želatinskih, poliglucinskih i indirektnih antiglobulinskih testova. Formulacija ovih metoda provedena je u skladu s općeprihvaćenim metodama.

Utvrđeno je da su metode za otkrivanje senzibilizacije eritrocita anti-D protutijelima po rezoluciji raspoređene na sljedeći način: najosjetljiviji je neizravni Coombsov test, zatim želatinski test, a najmanje informativan je poliglucinski test. Rezultati dobiveni ovom serijom eksperimenata u potpunosti odgovaraju literaturnim podacima, što nam omogućuje zaključak da visoka razina osjetljivost Coombsovih testova, što omogućuje s visokim stupnjem sigurnosti identificirati prisutnost anti-eritrocitnih protutijela u tijelu koja ne uzrokuju aglutinaciju crvenih krvnih stanica.

Međutim, pri provođenju Coombsovih testova u praksi ima slučajeva da se nekompletna antitijela ne detektiraju, iako klinička slika bolesti ili prethodna imunizacija upućuju na njihovu moguću prisutnost. U takvim slučajevima može se pretpostaviti da je količina antitijela nedovoljna da bi se taložila antitijelima antiglobulinskog seruma.

Ovaj zaključak potvrdili smo i vlastitim pokusom u kojem je metodom analitičke mikroelektroforeze stanica utvrđena prisutnost anti-D protutijela na ispitivanim eritrocitima koja nisu bila detektirana indirektnim Coombsovim testom. U ovoj seriji eksperimenata, antiglobulinski serum dodan je eritrocitima prethodno inkubiranim sa serumima dobivenim iz krvi imuniziranih darivatelja tijekom razdoblja antitijeloogeneze u tijeku, tj. tijekom razdoblja kada antitijela u njima nisu otkrivena poznatim metodama, uključujući Coombsov test.

U provedenim studijama dani su statistički dokazi o prisutnosti nepotpunih protutijela na površini crvenih krvnih stanica. značajna promjena veličina elektroforetske pokretljivosti senzibiliziranih crvenih krvnih stanica nakon dodatka antiglobulinskog seruma. Treba napomenuti da su anti-D antitijela naknadno određena kod svih imuniziranih darivatelja indirektnim Coombsovim testom u krvnom serumu.

Gillerand i sur. također je pokazalo da su antiglobulinski testovi karakterizirani određenim pragom osjetljivosti: pozitivan rezultat se bilježi samo kada je najmanje 500 molekula Ig G zabilježeno na površini jedne crvene krvne stanice.

Osim toga, literatura pruža dokaze da mogući negativni rezultat Coombsovog testa može biti povezan s niskim afinitetom protutijela koja senzibiliziraju crvena krvna zrnca, zbog čega se lako eluiraju s površine crvenih krvnih zrnaca tijekom procesa pranja. .

Uzimajući u obzir gore navedeno, možemo zaključiti da u nekim slučajevima negativan rezultat Coombsovog testa još nije dokaz odsutnosti protutijela fiksiranih na površini crvenih krvnih stanica.

Poznato je da su Coombsove reakcije vrlo specifične i mogu detektirati većinu vrsta nepotpunih protutijela. Međutim, kako pokazuju neki eksperimentalni podaci, antiglobulinski testovi mogu biti pozitivni i u neimunološkim stanjima. E. Muirhead i sur. drugi dan nakon primjene fenilhidrazina promatrani su psi pozitivan test Coombs. Takva brza pojava pozitivne reakcije argumentira njezinu imunološku prirodu i, prije, povezana je s nespecifičnom adsorpcijom proteina na površini eritrocita.

M. Williams i sur. otkrili su da klavulanska kiselina također može izazvati pozitivnu reakciju, koja je, prema autorima, povezana s nespecifičnom adsorpcijom proteina plazme na površini eritrocita. Sličan učinak primijećen je tijekom liječenja cefalosporinskim antibioticima.

Autori gore navedenih studija naglašavaju neimunološki karakter pozitivnih rezultata Coombsovih testova i inzistiraju na tome da su te tvari sposobne izazvati modifikaciju membrana crvenih krvnih stanica, zbog čega crvene krvne stanice mogu adsorbirati proteine ​​(osobito, albumin) koji su normalno prisutni u krvnoj plazmi i nemaju svojstva antitijela. Osim toga, moguće je da ksenobiotik, adsorbiran na površini stanice, služi kao veza između stanične membrane i proteina plazme.

Za ispravno tumačenje Rezultati antiglobulinskih testova također trebaju uzeti u obzir kvantitativni omjer između mladih i zrelih crvenih krvnih stanica u perifernoj krvi. Utvrđeno je da se retikulociti izolirani iz tijela u razdoblju pojačane regeneracije eritrona mogu aglutinirati antiglobulinskim serumom.

Pozitivan rezultat izravnog antiglobulinskog testa javlja se s različitim patološka stanja, praćen poremećajima imunološkog sustava, upalnim procesima koji dovode do nespecifične adsorpcije antitijela različitih specifičnosti na membranama eritrocita. To sugerira da molekule Ig G ne stupaju u interakciju sa specifičnim antigenima eritrocita, već su samo fiksirane na površini stanica koje se proučavaju.

Treba uzeti u obzir da je kod izvođenja Coombsovog testa u slučajevima bolesti karakteriziranih razvojem disproteinemije ili pojavom paraproteina, pozitivan rezultat rezultat prisutnosti proteina na površini eritrocita koji nemaju svojstva antitijela, što također ukazuje na nedostatak specifičnosti antiglobulinskih testova s ​​obzirom na prirodu proteina otkrivenog uz njihovu pomoć.

Stoga, kako su pokazala brojna istraživanja, pozitivni rezultati izravnih i neizravnih antiglobulinskih testova nisu apsolutni dokaz prisutnosti protutijela, jer pozitivne reakcije također se može promatrati u različitim patološkim stanjima koja nisu povezana s izosenzibilizacijom ili autosenzibilizacijom tijela. Stoga je samo usporedba rezultata nekoliko imunoseroloških metoda s klinička slika bolesti omogućuje potpunu procjenu razvoja patološkog procesa.

Pozitivan neizravni antiglobulinski test s negativnim izravnim testom obično ukazuje na prisutnost slobodnih aloantitijela u ispitivanom serumu, povezanih s prethodnim transfuzijama krvi ili trudnoćama.

Coombsov test je često pozitivan tijekom egzacerbacije paroksizmalne noćne hemoglobinurije; pozitivan Coombsov test s anti-C3 i anti-C3dg je marker bolesti hladnog aglutinina.

U slučajevima kada postoji visok rizik od razvoja hemolitičke bolesti novorođenčeta, veliki značaj Za postavljanje dijagnoze (najčešće u trudnoći) i po potrebi dinamičko praćenje pojave i promjene titra protutijela raspolažu rezultatima izravnih i neizravnih antiglobulinskih testova. Najčešće je hemolitička bolest novorođenčadi povezana s nekompatibilnošću majke i fetusa za antigen D, rjeđe za antigene ABO sustava, a još rjeđe za druge antigene (C, c, K itd.). Antitijela nastala tijekom ovog procesa La, budući da su u pravilu nepotpuna antitijela Ig G klase, jasno se otkrivaju u neizravnom antiglobulinskom testu. Kod ove bolesti od velike je važnosti ispravno utvrđen titar i specifičnost identificiranih protutijela, budući da postoji određena korelacija između razine antieritrocitnih protutijela u krvi trudnice i moguća prognoza ozbiljnost hemolitičke bolesti.

Neizravni Coombsov test također je neophodan u klinička praksa kako bi se osigurala sigurna transfuzijska terapija. Njegova provedba obvezna je komponenta imunohematoloških studija davatelja i različitih kategorija primatelja, kao i rutinskih pregleda svih pacijenata u zdravstvenim ustanovama kojima može biti potrebna transfuzija krvi i njezinih komponenti.

Indirektni antiglobulinski test se koristi u sljedećim slučajevima:

Za točnije određivanje Rh pripadnosti (antigen D) u slučaju nejasnih rezultata određivanja Rh faktora drugim metodama (poliglukin, želatina i dr.);

Identificirati slabe antigene eritrocita (sustavi Kell, Duffy, Kidd, Lewis itd.) i antitijela na te antigene;

Za detekciju i identifikaciju aloimunih antieritrocitnih protutijela, uključujući protutijela koja uzrokuju hemolitičke posttransfuzijske reakcije;

Odrediti prisutnost imunoloških protutijela AB0 sustava tijekom transfuzijskih hemolitičkih komplikacija;

Kao test kompatibilnosti za individualni odabir transfuzirane krvi i njezinih komponenti.

Stoga je Coombsov test važna dijagnostička pretraga koja se koristi u raznim područjima medicine (hematologija, opstetricija, reumatologija, transfuziologija, klinička i laboratorijska dijagnostika itd.). Poznavanje osobitosti izvođenja Coombsovog testa pomoći će povećati pouzdanost dobivenih rezultata i pridonijet će ispravnom tumačenju laboratorijskih podataka.

Književnost

1. Antitijela. Metode / ur. D. Katie. - M.: Mir, 1991.

2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadžijev A.B.. // Transfuzijska terapija anemije: udžbenik. priručnik za liječnike. - M.: Prakt. Medicina, 2005. - Str. 105-106.

3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfuziologija. - 2006. - br. 2. — Str. 39—62.

4. Donskov S.I.// Krvne grupe Rhesus sustava: teorija i praksa. - M.: VINITI RAS, 2005. - P. 180-186, 195.

5.Imunoserologija (regulatorni dokumenti) / komp. A.G. Bashlay, S.I. Donskov. - M.: VINITI RAS, 1998.

6.Proučavanje krvnog sustava u kliničkoj praksi / ur. G.I. Kozinets, V.A. Makarova. - M.: Triada-X, 1997.

7. Levin V.I. O mehanizmu eritrodijereze i eritropoeze tijekom akutnog posthemoragijska anemija: autorski sažetak. dis. ...kand. med. Sci. - Minsk, 1968.

8. Ragimov A.A., Bayramalibeyli I.E.. // Osnove dijagnostike, prevencije i liječenja anemije. - M.: GOU VUNMC MH RF, 2002. - P. 204-209.

9. Chumakova E.D.. // Stvarni problemi hematologija i transfuziologija: zbornik radova VI kongresa hematologa i transfuziologa Republike Bjelorusije, Minsk, 24.-25. svibnja 2007. / ur. A.I. Svirnovsky, M.P. Potapneva. - Minsk: Republički znanstveni i praktični centar za hematologiju i transfuziologiju, 2007. - S. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lancet. - 1945. - God. 2. - 15. str.

11. Freedman J. // J. Clin. Pathol. - 1979. - Vol. 32. - Str. 1014-1018.

12. Holburn A.M.. Kontrola kvalitete. Metode u hematologiji/ur. I. Cavill. - Edinburgh: Churchill Livingstone, 1982. - Sv. 4. - Str. 34-50.

13. Khan S.// CMAJ. - 2006. - Vol. 175, N 8. - Str. 919.

14. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (dodatak 7). - Str. 719-721.

15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (dodatak 7). - Str. 716-718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// Novi engl. J. Med. —1976. - Vol. 277. - Str. 123-125.

17. Muirhead E.E., GrovesM., Brian S. // J. Lab. Clin. Med. —1954. - Vol. 44. - Str. 902-903.

18. Rosse W.F.//Hosp. Prac. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., MooreB. et al. //Biotestovi Bull. - 1986. - Vol. 1. - Str. 41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. et al. Strojevi za pranje stanica za antiglobulinske testove. Ponovljeno testiranje - nova metoda koja pokazuje neučinkovitost jednog naširoko korištenog stroja - Sorvall CW1-AF2: izvješće Tehničkom ogranku DHSS-a, veljača 1991.

21. Williams M.E., Thomas D., Harman C.P.. et al. //Antimikrobna sredstva i kemoterapija. —1985. - Str. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H.. // CMAJ. - 2006. - Vol. 174, N 3. - Str. 305-307.

Medicinske vijesti. - 2008. - br. 3. - str. 33-36.

Pažnja! Članak je namijenjen medicinskim stručnjacima. Ponovno ispisivanje ovog članka ili njegovih fragmenata na internetu bez hiperveze na izvor smatra se kršenjem autorskih prava.

Ili otopljen u plazmi.

Sinonimi: antiglobulinski test, Coombsov test, AGT, neizravni/izravni antiglobulinski test, IAT, NAT, DAT, neizravni/izravni Coombsov test

Coombsov test je

analiza koja otkriva imunizaciju i antitijela na crvena krvna zrnca.

Vrste Coombsovog testa

• direktni Coombsov test– otkriva antitijela fiksirana na površini crvenih krvnih stanica. Provodi se kod sumnje na autoimunu hemolitičku anemiju, hemolizu u autoimunim bolestima, nakon uzimanja lijekova (metildopa, penicilin, kinin), nakon transfuzije krvi i hemolitičke bolesti novorođenčeta.

Crvena krvna zrnca senzibilizirana su in vivo – antitijela su već čvrsto vezana za njih, a dodatak antiglobulinskog seruma (anti-IgG) uzrokuje slijepljenje senzibiliziranih stanica, što je vidljivo golim okom.

• neizravni Coombsov test– otkriva antieritrocitna protutijela u krvnoj plazmi, izvodi se prije transfuzije krvi i tijekom trudnoće.

Antieritrocitna antitijela su vrsta autoantitijela, tj. antitijela protiv vlastitih tkiva. Autoantitijela nastaju kada imunološki sustav abnormalno reagira na određene lijekove, kao što su visoke doze penicilina.

Crvena krvna zrnca na svojoj površini sadrže različite kemijske strukture (glikolipide, saharide, glikoproteine ​​i proteine), u medicini tzv. antigeni. Osoba nasljeđuje od svojih roditelja specifičnu kartu antigena na svakom crvenom krvnom zrncu.

Antigeni se spajaju u skupine i uz to se krv dijeli u nekoliko skupina - prema AB0 sustav, Rhesus, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Najpoznatiji i najznačajniji u radu liječnika su AB0 i Rh faktor (Rh).

AB0 sustav

Rhesus pripadnost osoba je određena prisutnošću ovih antigena. Posebno važan antigen eritrocita je antigen D. Ako ga ima, onda govore o Rh-pozitivnom RhD krvi, a ako ga nema, onda govore o Rh-negativnom Rhd.

Ako se odgovarajuće antitijelo veže za antigene eritrocita, eritrocit se uništava - hemolizira.

Indikacije za upotrebu direktni antiglobulinski test

• primarna autoimuna hemolitička anemija
• hemolitička anemija u autoimunim, tumorskim, zaraznim bolestima
• autoimuna hemolitička anemija izazvana lijekovima
• posttransfuzijska hemolitička anemija (dani - mjeseci)
• hemolitička bolest novorođenčadi (neusklađenost jedne od krvnih grupa)

Indikacije za upotrebu neizravni antiglobulinski test

• prije transfuzije krvi
• tijekom trudnoće Rh-negativne žene

Autoimuna hemolitička anemija

Autoimuna hemolitička anemija (primarna)– klasična autoimuna bolest nepoznatog uzroka. Pretpostavlja se da postoji poremećaj u procesu interakcije na razini imunološkog sustava, što dovodi do percepcije vlastitih crvenih krvnih zrnaca kao stranih. Stanice proizvode protutijela klase IgG (reagiraju na t 37°C) i/ili IgM (na t 40°C), pričvršćuju se na površinu eritrocita, pokreću niz enzima (sustav komplementa) i "perforiraju" stijenke eritrocita, što dovodi do njegovog uništenja - hemoliza.

Simptomi hemolitičke anemije

• umor, opća slabost, razdražljivost
• dispneja
• bolovi u trbuhu, mučnina
• tamna boja urina
• bol u leđima
• ikterična promjena boje kože i sluznica
• povećana jetra, slezena
• smanjenje broja crvenih krvnih stanica i hemoglobina u općoj analizi krvi

Pozitivan rezultat ravno Coombs testovi 100% potvrđuje dijagnozu autoimune hemolitičke anemije, dokazujući njezino autoimuno podrijetlo. Istodobno, negativan rezultat ne omogućuje uklanjanje dijagnoze.

Sekundarna autoimuna hemolitička anemija i pozitivan Coombsov test mogu se javiti kod sljedećih bolesti:

• sistemski eritematozni lupus
• Evansov sindrom
• Waldenströmova makroglobulinemija
• paroksizmalna hladna hemoglobinurija
• kronična limfocitna leukemija
• limfomi
• Infektivna mononukleoza
• Infekcija Mycoplasma pneumoniae
• sifilis

Pozitivan antiglobulinski test za ove bolesti ne služi dijagnostički kriterij, ali je jedan od simptoma bolesti.

Hemolitička bolest novorođenčadi

Uzrok hemolitička bolest novorođenčadi - nekompatibilnost krvnih grupa u majke i fetusa, u većini slučajeva prema Rh sustavu, u pojedinačnim slučajevima - prema sustavu AB0, kazuistički - prema drugim antigenima.

Rh sukob se razvija ako fetus Rh-negativne žene naslijedi Rh-pozitivnu krv od oca.

Bolest se kod novorođenčeta razvija samo ako je majka već razvila antitijela na odgovarajuće antigene, što se događa nakon prethodnih trudnoća, poroda, pobačaja i transfuzije nekompatibilne krvi. Najčešći razlog pokretanja sinteze antitijela na antigene membrane eritrocita je porođaj (feto-maternalno krvarenje). Prvo rođenje uglavnom se odvija bez komplikacija, ali kasniji su prepuni hemolitičke bolesti novorođenčeta u prvim danima nakon rođenja.

Simptomi hemolitičke bolesti novorođenčadi

• žutost kože
• anemija
• bljedilo kože i sluznica
• povećana jetra i slezena
• problemi s disanjem
• oticanje cijelog tijela
• ekscitacija i postupna depresija središnjeg živčanog sustava

Anemija nakon transfuzije krvi

Indirektni Coombsov test provedeno prije transfuzije krvi za procjenu kompatibilnosti, i direktni Coombsov test- nakon toga, ako se sumnja na posttransfuzijsku hemolizu, tj. ako imate simptome kao što su vrućica, zimica, suzenje (pročitajte dolje). Svrha analize je identificirati protutijela na transfuzirane crvene krvne stanice koja su se vezala na crvene krvne stanice primatelja i uzrokuju posttransfuzijsku hemolizu, kao i prerano uklanjanje donorskih crvenih krvnih stanica iz krvotoka primatelj (onaj koji je primio krv).

Simptomi hemolitičke reakcije nakon transfuzije krvi

• povećanje tjelesne temperature
• kožni osip
• bol u leđima
• crvena boja urina
• mučnina
• vrtoglavica

Dekodiranje Coombsovog testa

Vrijedno je podsjetiti da su temeljna pravila za dešifriranje izravnih i neizravnih antiglobulinskih testova ista. Jedina razlika je mjesto antitijela - u krvi ili već na crvenom krvnom zrncu - na crvenom krvnom zrncu.

• Ako direktni Coombsov test je negativan– to znači da antitijelo ne “sjeda” na crvena krvna zrnca i potrebno je dalje tražiti uzrok simptoma te napraviti neizravni Coombsov test
• ako se pozitivan nalaz Coombsovog testa otkrije nakon transfuzije krvi, infekcija, lijekova - pozitivnost može trajati do 3 mjeseca (životni vijek crvenih krvnih zrnaca je 120 dana - 3 mjeseca)
• pozitivan rezultat antiglobulinskog testa za autoimunu bolest može trajati mjesecima ili čak godinama

Coombsov test standarda

• direktni Coombsov test- negativno
• neizravni Coombsov test- negativno

Kvalitativno pozitivan rezultat mjeri se brojem pluseva od jedan do četiri (+, ++, +++, ++++), a kvantitativno u digitalnom obliku - 1:16, 1:256 itd.

4 činjenice o Coombsovom testu

• prvi put predložen u Cambridgeu 1945
• prag osjetljivosti - najmanje 300 fiksiranih molekula antitijela na jednom crvenom krvnom zrncu
• broj antitijela koja pokreću hemolizu - pojedinačno za svaku osobu (od 16-30 do 300)
• dinamika ostalih laboratorijskih pokazatelja hemolitičke anemije (hemoglobin, bilirubin, retikulociti) može se normalizirati, a Coombsov test će ostati na istoj razini

Nedostaci antiglobulinskog testa

• ne može se odrediti snaga vezanja antigena na protutijelo
• nepoznat broj vezanih antitijela
• ne određuje vrstu antitijela
• pozitivan Coombsov test neće pomoći u određivanju njegovog uzroka
• 0,5% zdravi ljudi imati pozitivan Coombsov test bez ikakvih znakova hemolitičke anemije
• nije pogodan za praćenje uspješnosti liječenja, jer neće pokazati aktivnost hemolize eritrocita