Dijagnoza je najvažniji korak u liječenju svake bolesti. Ovisno o ispravnoj dijagnozi nije samo uspješno liječenje, već i prilika da se spriječi razvoj komplikacija i popratne patologije. Što je serološko testiranje? Ovo je metoda dijagnostičke analize biološkog uzorka bolesnika na prisutnost antitijela i antigena. Test vam omogućuje prepoznavanje desetaka bolesti, fazu bolesti i praćenje liječenja.

Zašto je studija propisana?

Ova vrsta medicinskog istraživanja naširoko se koristi u raznim područjima medicine. Reakcija vezanja komplementa ili CFR usmjerena je na prepoznavanje specifičnih stanica u krvnom serumu, protutijela koja tijelo proizvodi za borbu protiv infekcija i virusa.

Izoserološka studija ima za cilj određivanje krvne grupe pacijenta, Rh faktora i drugih krvnih parametara.

• Serološke pretrage krvi koriste se u ginekologiji za otkrivanje spolno prenosivih bolesti. Serološka titracija također se koristi za sveobuhvatan pregled trudnica (toksoplazmoza, HIV, sifilis, itd.). Prilikom prijave trudnica ovo je obavezan test.
• U pedijatriji se serološkim pretragama potvrđuje dijagnoza “dječjih” bolesti (vodene kozice, rubeola, ospice i dr.) ako simptomi nisu izraženi i nije moguće utvrditi bolest na temelju kliničkih indikacija.
• Serološki testovi omogućuju venereolozima brzo i precizno postavljanje dijagnoze. Na sličnih simptoma i pritužbi, krvni test može otkriti antitijela na sifilis, giardiasis, ureplasmosis, klamidiju, herpes i druge bolesti.
• Gastroenergolozi, hepatolozi i infektolozi koriste serološke pretrage krvi za dijagnosticiranje virusnog hepatitisa.
• Liječnik može posumnjati na bilo koju zaraznu ili virusnu bolest. Za potvrdu se koriste serološke reakcije na specifična protutijela u tijelu. Provodi se analiza na encefalitis, brucelozu, hripavac, Dengue virus, virus imunodeficijencije, alergije itd.
• Serološka dijagnoza za hospitalizaciju ima važnu ulogu. Ova dijagnostička metoda može pokazati u kojoj je fazi razvoja bolest i je li potrebna hitna hospitalizacija ili je dovoljno ambulantno liječenje.

Kao biološki materijal Za pretragu se može koristiti uzorak sline i stolice, ali najčešće se koristi venska krv bolesnika. Testove za serološke testove treba uzeti iz kubitalne vene u laboratorijskim uvjetima. Prije polaganja testa trebate se posavjetovati sa svojim liječnikom i pripremiti se.

Priprema za analizu

Ova vrsta istraživanja provodi se u općinskim i gospodarskim ustanovama. Bolje je napraviti izbor u korist laboratorija koji ima najsuvremeniju opremu i ima samo pozitivne recenzije o svom radu. Za zaposlene pacijente, laboratorij može pružiti usluge prikupljanja krvi za RBC kod kuće.

U ovom slučaju pacijent ne mora gubiti vrijeme na putu, a redovi se eliminiraju.

Priprema za vađenje venske krvi uključuje nekoliko koraka: Opća pravila. Prije testa ne smijete jesti hranu, odnosno test se uzima na prazan želudac. Prilikom davanja krvi morate biti mirni i bezbrižni. Prije zahvata ne smijete se podvrgavati drugim postupcima (rentgen, ultrazvuk itd.). Nekoliko tjedana prije vađenja krvi potrebno je prekinuti uzimanje lijekova u dogovoru s liječnikom. Neke preporuke ovise o bolesti za koju se test provodi. Na primjer, prilikom testiranja na hepatitis, 2 dana prije testa iz prehrane se isključuju masna hrana i alkohol.

Reakcija fluorescencije

Jedna od vrsta seroloških reakcija je fluorescencija ili RIF. Ova metoda istraživanja provodi se pomoću reagensa koji ističe željena antitijela u krvnom serumu. Za izvođenje izravne serološke reakcije ili PIF-a, specifična protutijela obilježena su fluorescentnom tvari. Ovo je najbrža vrsta istraživanja koja se provodi u jednoj fazi.

Druga metoda, nazvana neizravna ili RNIF, provodi se u 2 faze. U prvom specifične stanice (protutijela) nemaju fluorescentne oznake, a u drugom se pomoću odgovarajuće obilježenih antitijela otkriva kompleks antigen-antitijelo. Reakcija sjaja pojavljuje se tek nakon kontakta s određenim protutijelom. Rezultat manipulacija procjenjuje se posebnim uređajem koji procjenjuje intenzitet zračenja, a također određuje oblik i veličinu predmeta koji se proučavaju. Uzročnik se utvrđuje s 90-95% pouzdanošću, ovisno o vrsti i stadiju bolesti.

Vezani imunosorbentni test

Za ELISA studije, serološke reakcije se provode korištenjem jedinstvenih stabilnih reagensa. Označene tvari vezane su za određeni (željeni) tip antitijela. Kao rezultat toga, serologija daje kvalitativnu ili kvantitativnu procjenu uzorka krvi pacijenta. Ako supstrat nema izražene markere, rezultat se smatra negativnim. U slučaju kvalitativne studije, pozitivan rezultat znači samo prisutnost antitijela u biološkom uzorku.

Serodijagnostika s kvantitativnim određivanjem stanica protutijela daje potpuniju sliku. Na temelju količine otkrivenih stanica liječnik može reći je li bolest u početnoj fazi, akutna ili je riječ o pogoršanju kroničnog oblika bolesti. Prilikom postavljanja dijagnoze također se uzimaju u obzir klinička slika i pritužbe pacijenta.

Značajke istraživanja

Prilikom testiranja na brucelozu, krvni serum se prati na samozadržavanje bez antigena. To vam omogućuje povećanje pouzdanosti testa. Nalaz testa na brucelozu može biti pozitivan, negativan ili neizražen, odnosno upitan. Ako se dobiju upitni rezultati, preporučuje se ponovno vađenje krvi. Bruceloza se također dijagnosticira na temelju rezultata hemokultura, koštane srži i likvora.

Prednosti i nedostaci serologije

Dijagnostika serološkim metodama široko se koristi u suvremenoj medicini. Ovaj test je posebno relevantan kada se identificiraju virusne i zarazne bolesti. Ista vrsta testova koristi se u geografskom probiru i zdravstvenim istraživanjima za sprječavanje epidemioloških izbijanja.

Serološki testovi imaju brojne prednosti.

• Bilo koja vrsta serološkog testa ima visoku pouzdanost.
• Serološki testovi se provode dosta brzo. Rezultat RSC-a poznat je unutar 24 sata, a možete ga dobiti putem interneta bez napuštanja doma. U posebni slučajevi na stacionarno liječenje test se provodi nekoliko sati.
• RSC omogućuje praćenje razvoja bolesti i praćenje učinkovitosti liječenja.
• Serološke metode istraživanja su jeftine i dostupne pacijentima.

Serološki testovi imaju i neke nedostatke. Kako bi pregled pružio najpouzdanije informacije, krvni test treba provesti uzimajući u obzir razdoblje inkubacije bolesti.

Herpes simplex tipa 1 i 2 može se utvrditi tek 2 tjedna nakon infekcije, a testiranje na virus imunodeficijencije provodi se 1, 3 i 6 mjeseci nakon kontakta s bolesnikom.

Na pouzdanost studije mogu utjecati ljudski faktori. Ako pacijent zanemari pravila za pripremu studije ili laboratorijski tehničar pogriješi u obradi uzorka krvi, može se dobiti lažan ili upitan rezultat. Ova situacija javlja se u otprilike 5% slučajeva. U pravilu, liječnik koji je pohađao, na temelju kliničkih indikacija, lako izračunava pogrešku RSC.

Serološka pretraga krvi moderan je i pouzdan način identificiranja takvih opasne bolesti kao što su HIV, hepatitis, bruceloza, spolno prenosive bolesti, itd. Ovaj dio medicine usmjeren je na proučavanje ljudske krvne plazme i njenih imunoloških svojstava. Serološka metoda ima široku primjenu, a cijena istraživanja u privatnim laboratorijima je relativno niska. Za provođenje analize koristi se suvremena oprema koja minimalizira utjecaj ljudskog faktora na rezultate istraživanja.

U kontaktu s

Wassermannov test (RW) najpopularniji je imunološki test koji se koristi za dijagnosticiranje sifilisa od njegova otkrića 1906. godine. RW pripada skupini reakcija vezanja komplementa (FFR) i temelji se na sposobnosti krvnog seruma oboljelog od sifilisa da tvori kompleks s odgovarajućim antigenima. Suvremene RSC metode koje se koriste za dijagnosticiranje sifilisa značajno se razlikuju po svojim antigenima od klasične Wassermannove reakcije, međutim, za njih se tradicionalno zadržava naziv "Wassermannova reakcija".

Protutijela koja proizvodi imunološki sustav pojavljuju se u krvi zaražene osobe. Uzročnik bolesti Treponema pallidum sadrži antigen kardiolipin koji uzrokuje stvaranje antitijela detektiranih RW. Pozitivna Wassermanova reakcija ukazuje na prisutnost takvih protutijela u krvi osobe, a na temelju toga se donosi zaključak o prisutnosti bolesti.

Reakcija hemolize pokazatelj je rezultata studije u RSC. Reakcija uključuje dvije komponente: crvena krvna zrnca ovaca i hemolitički serum. Hemolitički serum dobiva se imunizacijom kunića ovčjim crvenim krvnim stanicama. Inaktivira se 30 minuta na temperaturi od 56°C. Rezultati RSC-a procjenjuju se ovisno o prisutnosti ili odsutnosti hemolize u epruvetama. Prisutnost hemolize objašnjava se činjenicom da ako u ispitivanom serumu nema sifilitičkih protutijela, tada se ne javlja reakcija antigen-protutijelo, a sav komplement ide na reakciju eritrocita-hemolizina ovaca. A ako postoje specifična antitijela, komplement se potpuno potroši na reakciju antigen-antitijelo i ne dolazi do hemolize.

Svi sastojci za Wassermanovu reakciju uzimaju se u istom volumenu - 0,5 ili 0,25 ml. Za jaku fiksaciju komplementa na određeni kompleks smjesa ispitivanog seruma, antigena i komplementa stavlja se u termostat na temperaturu od 37° 45-60 minuta. (reakcija I. faze), nakon čega se dodaje hemolitički sustav koji se sastoji od ovčjih eritrocita i hemolitičkog seruma (reakcija II. faze). Zatim se epruvete ponovno stavljaju u termostat na 30-60 minuta dok u kontroli ne dođe do hemolize u kojoj se antigen zamjenjuje fiziološkom otopinom, a umjesto ispitnog seruma, fiziološka otopina. Antigeni za Wassermanovu reakciju proizvode se u gotovom obliku, s naznakom titra i metode razrjeđivanja.

Maksimalna pozitivnost Wassermanove reakcije obično se označava brojem križića: ++++ (oštro pozitivna reakcija) - označava potpunu odgodu hemolize; +++ (pozitivna reakcija) - odgovara značajnom kašnjenju hemolize, ++ (slabo pozitivna reakcija) - dokaz djelomičnog kašnjenja hemolize, + (dvojbena reakcija) - odgovara blagom kašnjenju hemolize. Negativni RW karakterizira potpuna hemoliza u svim epruvetama.

Međutim, ponekad su mogući lažno pozitivni rezultati - to je zbog činjenice da se kardiolipin također nalazi u određenim količinama u stanicama ljudskog tijela. Ljudski imunološki sustav ne stvara antitijela protiv "vlastitog" kardiolipina, ali postoje iznimke od ovog pravila, zbog kojih se kod potpuno zdrave osobe javlja pozitivna Wassermanova reakcija. To se osobito često opaža nakon teških virusnih i drugih bolesti - upale pluća, malarije, bolesti jetre i krvi, tijekom trudnoće, tj. u trenucima jakog slabljenja imunološkog sustava.

Ako liječnik posumnja da pacijent ima lažno pozitivan rezultat Wassermanove reakcije, može propisati niz dodatnih pretraga koje se obično koriste u dijagnosticiranju spolno prenosivih bolesti.

Bolesti i slučajevi u kojima liječnik može propisati krvni test za RW

Provođenje postupka uzimanja krvi za RW

Krv za RW se daje samo na prazan želudac. Posljednji obrok trebao bi biti najkasnije 6 sati prije testa. Medicinski radnik sjedne pacijenta ili ga položi na kauč i uzme 8-10 ml krvi iz kubitalne vene.

Ako je potrebno napraviti analizu na dojenčetu, uzorak se uzima iz kranijalne ili jugularne vene.

Priprema za krvni test za RW

Trebate prestati piti alkohol 1-2 dana prije testa. Također se ne preporučuje jesti masnu hranu - ona može iskriviti rezultate. Tijekom razdoblja pripreme za analizu, trebali biste se suzdržati od uzimanja lijekova digitalisa.

Kontraindikacije

Rezultat analize bit će lažan ako:

• osoba je bolesna od zarazne bolesti ili se tek oporavila od nje,
• u ženi razdoblje menstruacije,
• trudna u zadnjim tjednima prije poroda,
• prvih 10 dana nakon rođenja,
• prvih 10 dana bebina života.

S primarnim sifilisom, Wassermanova reakcija postaje pozitivna nakon 6-8 tjedana bolesti (u 90% slučajeva), a bilježi se sljedeća dinamika:

• u prvih 15-17 dana nakon infekcije reakcija je u većine bolesnika obično negativna;
• u 5-6. tjednu bolesti, u otprilike 1/4 bolesnika reakcija postaje pozitivna;
• u 7-8. tjednu bolesti RW u većini postaje pozitivan.

Kod sekundarnog sifilisa RW je uvijek pozitivan. Zajedno s drugim serološkim reakcijama (RPGA, ELISA, RIF), omogućuje ne samo otkrivanje prisutnosti patogena, već i približno trajanje infekcije.

S razvojem sifilitičke infekcije u 4. tjednu bolesti, nakon pojave primarnog sifiloma, Wassermanova reakcija prelazi iz negativne u pozitivnu, ostajući tako iu sekundarnom svježem iu sekundarnom rekurentnom razdoblju sifilisa. U latentnom sekundarnom razdoblju i bez liječenja, RW može postati negativan, tako da kad dođe do kliničkog recidiva sifilisa, ponovno postaje pozitivan. Stoga, u latentnom razdoblju sifilisa, negativna Wassermanova reakcija ne ukazuje na njegovu odsutnost ili izlječenje, već služi samo kao povoljan prognostički simptom.

S aktivnim lezijama tercijarnog razdoblja sifilisa, pozitivan RW javlja se u približno 3/4 slučajeva bolesti. Kada aktivne manifestacije tercijarnog razdoblja sifilisa nestanu, često se pretvara u negativnu. U ovom slučaju, negativna Wassermanova reakcija u bolesnika ne znači da nemaju sifilitičku infekciju.

Kod ranog kongenitalnog sifilisa RW je pozitivan u gotovo svim slučajevima i dragocjena je metoda za provjeru bolesti. Kod kasnog kongenitalnog sifilisa njegovi rezultati odgovaraju onima dobivenim u tercijarnom razdoblju stečenog sifilisa.

Proučavanje Wassermanove reakcije u krvi pacijenata sa sifilisom koji su podvrgnuti liječenju od velike je praktične važnosti. U nekih bolesnika, unatoč snažnoj antisifilitičnoj terapiji, Wassermanova reakcija ne postane negativna - to je takozvani serorezistentni sifilis. U ovom slučaju nema smisla provoditi beskrajnu antisifilitičku terapiju, postižući prijelaz pozitivnog RW-a u negativan.

Iz navedenog proizlazi da negativna Wassermanova reakcija nije uvijek znak odsutnosti sifilitičke infekcije u tijelu.

Pozitivna Wassermanova reakcija moguća je kod osoba s nizom drugih bolesti i stanja koja nisu povezana sa sifilisom:

Sve gore navedeno ukazuje da pozitivan rezultat Wassermanove reakcije još nije bezuvjetni dokaz prisutnosti sifilitičke infekcije.

Oporavak nakon testiranja

Nakon uzimanja krvne slike, liječnici preporučuju ispravan i Uravnotežena prehrana, kao i što više tekućine. Možete si priuštiti topli čaj i čokoladu. Bit će korisno suzdržati se od tjelesne aktivnosti i ni pod kojim uvjetima ne piti alkohol.

Norme

Normalno, u krvi treba promatrati hemolizu - to se smatra negativnom reakcijom na sifilis (Wassermannova reakcija je negativna). Ako hemoliza izostane, procjenjuje se stupanj reakcije koji ovisi o stadiju bolesti (označeno znakom "+"). No, treba znati da kod 3-5% potpuno zdravih ljudi reakcija može biti lažno pozitivna. Istodobno, u prvih 15-17 dana nakon infekcije, reakcija kod bolesnih osoba može biti lažno negativna.

Da bi se postavila točna dijagnoza, pacijent se ispituje sveobuhvatno. Opća analiza test krvi nije jako informativan, ne koristi se u dijagnosticiranju spolno prenosivih infekcija.

Vrste istraživanja i biomaterijali za analizu

Za identifikaciju bolesti koriste se različite tehnike i biomaterijali. U ranim stadijima sifilis se utvrđuje bakterioskopskim testom. Uzorci se ispituju pod mikroskopom. Uređaj vam omogućuje otkrivanje sojeva patogena. Kasnije se provode serološke pretrage. Zahvaljujući njima, u uzorcima se otkrivaju antigeni i antitijela na bolest.

Metode za određivanje spolno prenosivih infekcija dijele se u 2 kategorije:

• Izravno, otkrivajuće uzročnik bolesti. To uključuje: mikroskopiju tamnog polja, RIT analizu (infekcija kunića biomaterijalom za istraživanje), PCR metodu - lančanu reakciju polimeraze (uz njegovu pomoć pronalaze se genetski elementi patogena).
• Neizravni (serološki) testovi omogućuju otkrivanje protutijela na uzročnika. Proizvodi ih imunološki sustav kao odgovor na infekciju.

Serološke tehnike dijele se u 2 kategorije: treponemske i netreponemske.

Netreponemski, uključujući: test toluidin crvenim, RSC analizu, RPR test, test krvi ekspresnom RMP metodom.

Treponemalno, kombinirajući: imunobloting, RSK test, RIT analizu, RIF studiju, RPGA test, ELISA analizu.

Sadržaj informacija testova za infekciju varira. Najčešće se rade glavne vrste testova za sifilis, koje uključuju serološke metode. Za pacijente kojima je potreban pregled, liječnik propisuje pretrage pojedinačno.

Biomaterijal za istraživanje

Za identifikaciju Treponema pallidum, patogena koji izgleda poput spirale i uzrokuje sifilis, uzimaju se uzorci:

• venska krv;
• cerebrospinalna tekućina (sekret iz spinalnog kanala);
• sadržaj limfnih čvorova;
• ulceracijsko tkivo.

Ako je potrebno provesti testove za otkrivanje sifilisa, krv se donira ne samo iz kubitalne vene, već i iz prsta. Na izbor biomaterijala i metode ispitivanja utječu težina infekcije i opremljenost dijagnostičkog centra.

Izravno istraživanje

Uvjerljiv dokaz sifilisa je identifikacija uzročnika infekcije pod mikroskopom. Na taj se način uzročnik nađe kod 8 od 10 ispitanika.Negativan nalaz kod preostala 2 bolesnika ne znači da nisu zaraženi.

Istraživanje se provodi u primarnom i sekundarnom stadiju (stadiju) bolesti, koje karakterizira pojava kožnih osipa i sifiloma (ulceracija) na epitelna tkiva odnosno sluznice. Patogeni uzročnici spolno prenosivih bolesti nalaze se u iscjetku iz lezija.

Točnije, kompleksnim testom nazvanim RIF, imunofluorescentna reakcija, mogu se otkriti treponeme. Uzorak za istraživanje je prethodno tretiran fluorescentnim antitijelima. Spojevi koji mogu svijetliti lijepe se zajedno s bakterijama. Pregledavajući uzorke pod mikroskopom, u slučaju infekcije, laboratorijski tehničar vidi svjetlucave patogene.

Test se koristi za ranu dijagnozu bolesti. Što duže bolest traje, to je niža osjetljivost istraživačkih metoda. Osim toga, pada nakon liječenja osipa i čireva antisepticima i kod pacijenata koji su bili podvrgnuti liječenju. Povremeno test daje lažno negativne i lažno pozitivne rezultate.

RIT analiza je vrlo precizna metoda za otkrivanje sifilisa. Prilikom provođenja testa morate dugo čekati rezultate. Sve dok zaraženi kunić ne pokaže znakove infekcije. Test se koristi vrlo rijetko, unatoč činjenici da je izuzetno precizan.

Pomoću lančane reakcije polimeraze za sifilis određuju se genetski elementi uzročnika. Jedini nedostatak PCR-a je njegova visoka cijena.

Netreponemski testovi

Takvi krvni testovi pomažu identificirati protutijela koja se pojavljuju kao odgovor na kardiolipin, spoj povezan s općom strukturom membrana patogena.

Wassermanova reakcija (RW ili RW)

Najpoznatiji test za sifilis je Wassermanova reakcija. RV je uključen u kategoriju reakcija vezanja komplementa (CFR). Nove RSC metode imaju značajne razlike od tradicionalnih RW metoda. Ali oni su, kao i prije, označeni konceptom "Wassermannove reakcije".

Imunološki sustav sintetizira antitijela (markere) kao odgovor na invaziju treponema. Otkrivaju se krvnim testom za sifilis pomoću Wassermanove reakcije. Pozitivan rezultat RW potvrđuje da je ispitanik zaražen.

Reakcija hemolize – indeks RT analize. S njim međusobno djeluju dvije tvari: hemolitički serum i crvena krvna zrnca ovaca. Serum se dobiva imunizacijom zeca ovčjim crvenim krvnim stanicama. Zagrijavanjem se smanjuje aktivnost biološke tekućine.

Pokazatelji RV ovise o tome je li došlo do hemolize ili ne. U uzorku bez markera dolazi do hemolize. U ovom slučaju, reakcija na antigene je nemoguća. Komplement se troši u interakciji s crvenim krvnim stanicama ovaca. Kada u uzorku ima markera, kompliment reagira s antigenima. U tom slučaju ne dolazi do hemolize.

Komponente za RW mjere se u jednakim količinama. Uzorak koji sadrži serum, antigen i komplement se zagrijava. Uzorku se dodaju janjeći eritrociti i serum. Držati na temperaturi od 37 stupnjeva dok ne dođe do hemolize u kontrolnom uzorku koji umjesto antigena sadrži fiziološku otopinu.

Za provođenje RT koriste se gotovi antigeni. Titri i tehnologija njihovog razrjeđivanja navedeni su na pakiranjima. Pozitivan RW rezultat označen je križićima. Gotovi rezultati testovi su označeni kako slijedi:

• ++++ – maksimalno pozitivno (hemoliza odgođena);
• +++ – pozitivan (hemoliza je značajno odgođena);
• ++ – slabo pozitivan (hemoliza je bila djelomično odgođena);
• + – dvojbeno (hemoliza je malo odgođena).

Uz negativnu RT, hemoliza je u potpunosti postignuta u svim uzorcima. Ali u nekim slučajevima dobivaju se lažno pozitivni podaci. To se događa kada kardiolipin uđe u stanice. Obrambeni mehanizmi ne proizvode markere za "nativni" kardiolipin.

Međutim, povremeno se dogode iznimne situacije. Pozitivan RW otkriva se kod neinficiranih ljudi. To je moguće ako je pacijent patio ozbiljna bolest uzrokovane virusima (upala pluća, malarija, tuberkuloza, patologije jetre i krvi). Pozitivan RV javlja se kod trudnica. To je zbog činjenice da je imunološki sustav pretjerano oslabljen.

Ako postoji sumnja da je rezultat testa na sifilis lažno pozitivan, pacijent se dodatno ispituje. Problem je u tome što se ova infekcija ne može otkriti samo jednim kliničkim laboratorijskim testom. Neke studije daju lažne pokazatelje, koji mogu biti i negativni i pozitivni.

Detaljna analiza na sifilis pomaže u dobivanju pouzdanih podataka. Zahvaljujući njemu oni instaliraju prava dijagnoza: dokazati infekciju ili je isključiti. Osim toga, prošireni test omogućuje vam zaustavljanje razvoja infekcije i uklanjanje nepotrebne terapije.

RSK i RMP

Kod testiranja na sifilis, tradicionalna Wassermanova reakcija koristi se izuzetno rijetko. Umjesto toga, koristi se RSK metoda. Test daje pozitivan rezultat 2 mjeseca nakon infekcije. U sekundarnom obliku bolesti pozitivan je u gotovo 100% slučajeva.

Metoda mikroprecipitacije (MPM) je studija s mehanizmom sličnim Wassermanovoj reakciji. Tehnika je jednostavna za implementaciju. Izvodi se brzo. Za testiranje na sifilis, u ovom slučaju, krv se izvlači iz prsta. Tehnika daje pozitivan rezultat 30 dana nakon pojave sifiloma. Pogreške tijekom istraživanja nisu isključene. Lažno pozitivni podaci dobivaju se na pozadini: pogoršanih infekcija, upale pluća, srčanog udara, moždanog udara, intoksikacije.

Sljedeće dovodi do pogrešnih testova:

Nakon otkrivanja upitnog testa na sifilis, provode se studije treponema. Oni pomažu razjasniti dijagnozu.

RPR i test toluidin crvenila

Metoda reagina u plazmi (RPR) je još jedan analog Wassermanove reakcije. Koristi se po potrebi:

• pregledati asimptomatske osobe;
• potvrditi sifilis;
• pregledati darovanu krv.

Test s toluidin crvenim, kao i RPR, provodi se za procjenu dinamike terapija lijekovima. Njihovi pokazatelji padaju kada se bolest povuče, a povećavaju se kada se patologija ponovi.

Netreponemski testovi pokazuju koliko se pacijent oporavio. Dobivanje negativnih rezultata za sifilis ukazuje na to da se bolest potpuno povukla. Prvi pregled se radi 3 mjeseca nakon terapije.

Studije treponema

Visoko produktivni testovi provode se pomoću treponemskih antigena. Izvode se kada:

• RMP metodom dobiven je pozitivan rezultat;
• potrebno je prepoznati pogrešne podatke koji proizlaze iz testova probira;
• Sumnja na razvoj sifilisa;
• potrebno je dijagnosticirati skrivenu infekciju;
• potrebno je provesti retrospektivnu dijagnostiku.

RIF i RIT testovi

Kod mnogih liječenih bolesnika treponemsko testiranje uzoraka daje pozitivne rezultate dulje vrijeme. Po njima se ne može procijeniti stupanj učinkovitosti liječenja. RIT i RIF su ultra-osjetljivi testovi. Zahvaljujući njima dobivaju se pouzdani podaci. Ove analize su radno intenzivne, zahtijevaju dosta vremena i naprednu opremu. Mogu ih provoditi kvalificirani zdravstveni radnici.

Prilikom provođenja RIF testa za sifilis, pozitivni podaci dobivaju se 2 mjeseca nakon infekcije. Negativni parametri potvrđuju da je ispitanik zdrav. Pozitivno - sugerira da je osoba zaražena.

RIT se provodi kada je reakcija mikroprecipitacije pozitivna. Ovaj krvni test za sifilis pomaže opovrgnuti ili potvrditi prisutnost infekcije. Test je ultraosjetljiv, točno pokazuje da li je pacijent zaražen ili zdrav. Ali studija daje pouzdane podatke samo 3 mjeseca nakon što treponemi uđu u tijelo.

Metoda imunoblotinga

Ultraprecizni testovi uključuju imunobloting. Ovaj krvni test rijetko se radi za sifilis. Koristi se pri pregledu novorođenčadi. Nije prikladan za brzo testiranje. Pozitivni rezultati se postižu sa zakašnjenjem. Oni se dobivaju mnogo ranije metodom mikroprecipitacije.

ELISA i RPGA

Informativne ultraprecizne metode istraživanja uključuju ELISA i RPGA testove. Uz njihovu pomoć provodi se brza dijagnostika. Laboratorijski tehničari rade veliki broj takvih testova. Zahvaljujući njima moguće je instalirati točna dijagnoza.

RPGA test na sifilis je pozitivan 30 dana nakon ulaska uzročnika u tijelo. Koristi se za dijagnosticiranje primarne infekcije kada se pojave čirevi i osipi.

Zahvaljujući njemu, moguće je identificirati napredne, tajno u tijeku, kao i kongenitalne oblike patologije. Ali provodi se zajedno s netreponemskim i treponemskim testovima. Sveobuhvatna dijagnostika jamči pouzdanost rezultata. Trostruko testiranje točno dokazuje prisutnost ili odsutnost spolno prenosive infekcije.

Pozitivna reakcija traje cijelo vrijeme veliki segment vrijeme. Iz tog razloga, studija se ne koristi za procjenu učinkovitosti liječenja.

ELISA test je pozitivan 21 dan nakon infekcije. Test ponekad daje pogrešne rezultate. Pojavljuju se u sustavnim patologijama i poremećenim metaboličkim procesima. Njihova je učinkovitost upitna kod djeteta rođenog od zaražene majke.

Pogreške dobivene serološkim istraživačkim metodama postale su razlogom za otkrivanje progresivnih dijagnostičkih metoda. Plinska kromatografija i masena spektrometrija ne daju lažni rezultati. Jedina prepreka njihovoj masovnoj upotrebi je njihova visoka cijena.

Algoritam dijagnoze

• Kada je sifilis u primarnoj fazi (do 60 dana od trenutka infekcije), uzročnik se traži na tamnoj podlozi ili se za njegovo otkrivanje koriste fluorescentna protutijela.
• Ako je patologija u primarnom, sekundarnom ili latentnom obliku, koriste se RMP i ELISA. RPGA test krvi za sifilis pomaže potvrditi rezultate.
• U slučaju recidiva sekundarne infekcije, analizira se iscjedak ulceracija i osipa. Patogeni se uklanjaju iz uzoraka i proučavaju pomoću mikroskopa.
• Kada bolest uđe u tercijarnu fazu, 1/3 bolesnika ima negativan RMP. Istodobno, rezultati ELISA i RPGA su pozitivni. Međutim, oni ne ukazuju uvijek na tercijarno razdoblje, već potvrđuju da je osoba prethodno preboljela infekciju. Slabo pozitivan test je dokaz potpunog izlječenja, a ne razvoja tercijarne faze.
• Kako bi se potvrdio kongenitalni sifilis, uzimaju se krvne pretrage majke i djeteta. Usporedite podatke iz RMP testova. Uzima se u obzir da su bebini ELISA i RPGA pozitivni. Dijagnoza se potvrđuje tehnikom imunoblotinga.

Sifilis, kao i svaka sustavna patologija, utječe na cijelo tijelo. Stoga se testiranje na njega provodi tijekom trudnoće, prije pobačaja. Pacijenti se podvrgavaju RMP, ELISA, RPGA.

Kako se testirati

Venereolog šalje pacijente na analizu. Privatni laboratoriji rade anonimne pretrage na sifilis na zahtjev naručitelja. Za testiranje nije potrebna liječnička uputnica.

Pravila za provođenje studije:

• Krv se vadi u laboratoriju ujutro natašte (jede se nakon zahvata). Prije testa smijete piti samo vodu.
• 2 dana prije pregleda zabranjeno je jesti masnu hranu i piti alkohol.
• Krv se uzima iz prsta ili vene.
• Koliko dugo traje studij? Obično ne više od jednog dana. Tumačenje testova za sifilis dobiva se od laboratorijskih tehničara ili liječnika.
• Koliko dugo test vrijedi? Nakon 3 mjeseca rezultati testa postaju nevažeći. Opet se daju u najam.

Ako prijepis analize pokaže da je test pozitivan, trebate posjetiti venereologa, koji će propisati dodatni pregled za točnu potvrdu dijagnoze i odabir potrebnog režima liječenja.

Ispitivanje sadržaja kralježnice

Dijagnoza neurosifilisa postavlja se nakon pretrage cerebrospinalne tekućine. Ova analiza se radi:

• osobe s latentnim oblikom infekcije;
• za simptome bolesti živčanog sustava;
• asimptomatski, uznapredovali neurosifilis;
• oporavljeni pacijenti s pozitivnim serološkim reakcijama.

Liječnik daje uputnicu za analizu likvora. Uzima se punkcija iz spinalnog kanala u 2 cijevi. Punkcija je podmazana jodom i prekrivena sterilnim ubrusom. Nakon zahvata pacijent ostaje u krevetu 2 dana.

U 1 uzorku utvrđuje se količina proteina, stanica i tragova meningitisa. U drugom uzorku izračunavaju se protutijela na uzročnika sifilisa. Da bi to učinili, rade sljedeće testove: RV, RMP, RIF i RIBT.

Ovisno o tome koliko je kršenja otkriveno, postoje 4 vrste cerebrospinalne tekućine. Svaki ukazuje na specifično oštećenje živčanog sustava. Liječnik dijagnosticira:

Osim toga, rezultati ispitivanja koriste se za procjenu oporavka pacijenta.

Tumačenje testova zadatak je liječnika. Samo on može izvući ispravne zaključke, po potrebi propisati dodatne preglede i postaviti točnu dijagnozu. Ne biste trebali raditi samodijagnozu u slučaju opasne sistemske patologije. Pogreška u dijagnozi ima ozbiljne posljedice.

Reakcija vezanja komplementa (CFR)

Reakcija vezanja komplementa (FFR) provodi se u dvije faze: u prvoj fazi se antigen spoji s ispitivanim serumom u kojem se pretpostavlja prisutnost protutijela, doda se komplement i inkubira u termostatu 30 minuta.

Druga faza: dodati hemolitički sustav (eritrociti ovaca + hemolitički serum). Nakon inkubacije u termostatu od 30 minuta, rezultat se uzima u obzir.

S pozitivnim RSC, serumska protutijela, kombinirajući se s antigenom, tvore imunološki kompleks koji pričvršćuje komplement, te neće doći do hemolize. Ako je reakcija negativna (nema protutijela u ispitivanom serumu), komplement će ostati slobodan i doći će do hemolize.

RSC se koristi za serološku dijagnostiku sifilisa, gonoreje, tifusa i drugih bolesti.

Imunološke reakcije pomoću obilježenih antigena i protutijela temelje se na činjenici da je jedan od sastojaka uključenih u reakciju (antigeni ili protutijela) kombiniran s nekom vrstom oznake koja se može lako otkriti. Fluorokromi (RIF), enzimi (ELISA), radioizotopi (RIA) i spojevi gusti elektroni (IEM) koriste se kao oznake.

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), kao i drugi imunološki testovi, koristi se: 1) za otkrivanje nepoznatog antigena pomoću poznatih antitijela ili 2) za otkrivanje antitijela u krvnom serumu pomoću poznatog antigena. Osobitost reakcije je u tome što se poznati reakcijski sastojak kombinira s enzimom (na primjer, peroksidazom). Prisutnost enzima utvrđuje se pomoću supstrata koji postaje obojen djelovanjem enzima. Najviše se koristi čvrsta faza ELISA.

1) Detekcija antigena. Prva faza je adsorpcija specifičnih protutijela na čvrstu fazu, koja se koristi kao polistirenske ili polivinilkloridne površine jažica plastičnih ploča. Druga faza je dodavanje ispitivanog materijala, u kojem se pretpostavlja prisutnost antigena. Antigen se veže za antitijela. Nakon toga, jažice se isperu. Treća faza je dodavanje specifičnog seruma koji sadrži antitijela protiv određenog antigena, obilježena enzimom. Označena antitijela se vežu za antigene, a višak se uklanja pranjem. Dakle, ako ispitivani materijal sadrži antigene, na površini krute faze nastaje kompleks antitijelo-antigen-antitijelo obilježen enzimom. Za detekciju enzima dodaje se supstrat. Za peroksidazu, supstrat je ortofenilendiamin pomiješan s H 2 O 2 u puferskoj otopini. Pod djelovanjem enzima nastaju produkti smeđe boje.

2) Detekcija antitijela. Prva faza je adsorpcija specifičnih antigena na stijenke jažica. Tipično, u komercijalnim testnim sustavima, antigeni su već adsorbirani na površini jažica. Druga faza je dodavanje testnog seruma. U prisustvu antitijela nastaje kompleks antigen-antitijelo. Treća faza - nakon ispiranja, u jažice se dodaju antiglobulinska antitijela (antitijela protiv humanih globulina), obilježena enzimom. Rezultati reakcije se procjenjuju kao što je gore opisano.

Očito pozitivni i očito negativni uzorci, koji su dostupni u komercijalnim sustavima, koriste se kao kontrole.

ELISA se koristi za dijagnosticiranje mnogih zaraznih bolesti, posebice HIV infekcije i virusnog hepatitisa.

Imunobloting je vrsta ELISA-e (kombinacija elektroforeze i ELISA-e). Biopolimeri, kao što su antigeni virusa humane imunodeficijencije, odvajaju se elektroforezom u gelu. Zatim se odvojene molekule prenose na površinu nitroceluloze istim redom kojim su bile u gelu. Proces prijenosa naziva se upijanje, a dobiveni otisak je mrlja. Na ovaj otisak utječe testni serum. Zatim se dodaje antihumani globulinski serum obilježen peroksidazom, zatim supstrat koji pod djelovanjem enzima postaje smeđi. Smeđe pruge nastaju na mjestima gdje su se protutijela spojila s antigenima. Metoda vam omogućuje otkrivanje protutijela na pojedinačne antigene virusa.

Radioimunotest (RIA). Metoda vam omogućuje određivanje količine antigena u ispitivanom uzorku. Najprije se u imunološki serum dodaje materijal koji navodno sadrži antigen, zatim se dodaje poznati antigen obilježen radioizotopom, na primjer I 125. Kao rezultat toga, detektabilni (neobilježeni) i poznati obilježeni antigen veže se na ograničenu količinu protutijela. Budući da se obilježeni antigen dodaje u određenoj dozi, moguće je utvrditi koji je njegov dio vezan za protutijela, a koji je zbog kompeticije s neobilježenim antigenom ostao slobodan i uklonjen. Količina obilježenog antigena vezanog na protutijela određuje se pomoću brojača. Obrnuto je proporcionalna količini otkrivenog antigena.

Imunoelektronska mikroskopija (IEM). Antigen, na primjer, virus influence, vezan je za specifičan antiserum označen elektronskom gustom supstancom. Kao oznake koriste se proteini koji sadrže metal (feritin, hemocijanin) ili koloidno zlato. Tijekom mikroskopa se u elektronskom mikroskopu snimaju fotografije na kojima su vidljivi virioni influence na koje su pričvršćene tamne točkice – molekule obilježenih antitijela.

Stečena imunost, njezina razlika od nasljedne (specifične, urođene). Vrste stečenog imuniteta.

Zadatak. Obiteljsko trogodišnje dijete, Valery, razboljelo se od difterije. Ostali članovi obitelji nisu obolijevali, a majka je u djetinjstvu imala difteriju, a otac je cijepljen toksoidom difterije. Starija sestra Natasha, stara pet godina, svojedobno nije bila cijepljena toksoidom difterije zbog medicinskih kontraindikacija, pa je morala biti podvrgnuta hitnoj profilaksi uz pomoć antitoksičnog seruma protiv difterije. Mlađi brat Vitaly, star tri mjeseca, nije obolio, iako nije ničim cijepljen. U kući su mačka i pas, nisu bolesni. Za svakog člana obitelji i za životinje navedite vrstu imuniteta koja ih je spriječila da se razbole.

Što je antigen? Koje tvari mogu biti antigeni? Punopravni antigeni i hapteni, kako se međusobno razlikuju? Struktura antigena. Kako se zove dio molekule antigena koji određuje njegovu specifičnost? Navedite antigene koje poznajete. Što su autoantigeni? Antigenska struktura mikrobne stanice. Flagelarni i somatski antigeni; lokalizacija, slovna oznaka, kemijska priroda, odnos prema temperaturi, način pripreme, praktičnu upotrebu. Anatoksin, njegova svojstva, primjena, proizvodnja. Koje tkivo čini imunološki sustav tijela? Navedite središnje i periferne organe ljudskog imunološkog sustava. Opišite proces formiranja humoralnog i staničnog imunološkog odgovora. Navedite stanice koje hvataju i probavljaju antigen; stanice koje međusobno djeluju u stvaranju humoralne imunosti, stanične imunosti; stanice koje se transformiraju i postaju plazma stanice koje proizvode antitijela; stanice koje potiču ovaj proces; stanice koje suzbijaju imunološki odgovor; stanice koje ubijaju tumorske stanice i stanice zaražene virusom. Što su antitijela? Kako doći do imunološkog seruma? Kako dobiti serum koji bi neutralizirao toksin tetanusa? Protiv kojih antigena nastaju antitoksini, aglutinini i hemolizini? Koja se protutijela stvaraju kada se toksoid difterije unese u tijelo? bakterije difterije? Kemijska priroda i struktura protutijela. Koje je aktivno mjesto imunoglobulina? Navedite klase imunoglobulina i njihova svojstva. Navedite klasu imunoglobulina koji mogu prodrijeti kroz placentu. Kojoj klasi pripadaju sekretorni imunoglobulini? Dinamika nakupljanja protutijela. Kako se sekundarni imunološki odgovor razlikuje od primarnog? Kako se znanje o dinamici imunološkog odgovora koristi u praktičnoj medicini? Što su imunološke reakcije, koji je njihov mehanizam, faze reakcije. U koja 2 smjera se koriste imunološke reakcije? Navedite imunološke reakcije.

Zadatak. Zamijenite riječi koje nedostaju s "anatoksin" ili "antitoksin": _________ je antigen, _________ je protutijelo, __________ unošenjem u organizam stvara aktivnu imunost, __________ unošenjem u tijelo stvara pasivnu imunost, __________ se dobiva imunizacijom životinja, ___________ se dobiva iz toksina kada je izložen formalinu i toplini, ___________ neutralizira toksine, __________ uzrokuje stvaranje protutijela u tijelu.

Reakcija aglutinacije: što je aglutinacija, što je antigen, što je antitijelo; metode postavljanja, koje se kontrole postavljaju i zašto; kako bi kontrole trebale izgledati. Aglutinacijski serumi, što sadrže, kako se dobivaju, čemu služe; Koji je titar aglutinirajućeg seruma? Neizravna (pasivna) reakcija hemaglutinacije: što služi kao antigen u ovoj reakciji, kako se dobiva, mehanizam reakcije. Što je eritrocitni dijagnostikum? Što je dijagnostikum eritrocita s antitijelima? Precipitacijske reakcije: što je precipitacija, što služi kao antigen; Kako dobiti taloženi serum? Koji je titar taloženog seruma? Metode postavljanja, praktična primjena.

Reakcija vezanja komplementa (CFR): princip CFR; što nastaje kada imunološki serum stupi u interakciju sa specifičnim antigenom; što se događa s komplementom ako je prisutan tijekom ove interakcije? Kakva je sudbina komplementa ako ne postoji specifičan afinitet između antigena i protutijela? Ako je krajnji rezultat RSC hemoliza, znači li to pozitivan ili negativan rezultat? Metodologija uspostave RSC. Zašto se testni serum mora inaktivirati? Hemolitički serum: što sadrži, kako se dobiva, koji je titar i kako se određuje? Komplement: kemijska priroda, odnos prema visoka temperatura, gdje se nalazi? Kako se komplement može uništiti? Što se praktično koristi kao komplement?

Zadatak. Na odjeći muškarca optuženog za ubojstvo pronađena je mrlja krvi. Kojom se reakcijom može utvrditi radi li se o ljudskoj krvi; što će u ovoj reakciji biti antigen, a što protutijela; Koji bi dijagnostički lijek trebao biti dostupan u laboratoriju za ovu reakciju, kako se priprema?

Zadatak. Kako koristiti reakciju taloženja za određivanje je li uzorak mesa dostavljen na analizu velik goveda ili konjsko meso; koji su dijagnostički lijekovi potrebni?

Reakcija oborine u agar gel, metode postavljanja, praktična primjena.

Što pokazuje serološka pretraga krvi?

Što pokazuje serološka pretraga krvi? Dijagnostičke mjere su najvažnija faza u liječenju bilo koje bolesti. Uspjeh liječenja ne ovisi samo o propisanim lijekovima, već iu velikoj mjeri o tome koliko je ispravno postavljena dijagnoza.

Osim toga, dijagnoza vam omogućuje sprječavanje komplikacija i popratnih bolesti. Serološkim testom krvi bolesnika utvrđuje se prisutnost protutijela i antigena. Studija pomaže pronaći mnoge bolesti, odrediti njihovu fazu i pratiti napredak liječenja.

Što je serologija?

Serologija je grana imunologije koja proučava reakcije antigena na antitijela. Ova grana medicine bavi se proučavanjem krvne plazme i njezinih imunoloških karakteristika.

Danas je serološki test krvi na antitijela pouzdan način otkrivanja virusa humane imunodeficijencije, hepatitisa, bruceloze, spolno prenosivih bolesti i drugih bolesti opasnih po život. Hajde da shvatimo u kojim slučajevima je propisano.

Indikacije za upotrebu

Serološka pretraga krvi neophodna je za utvrđivanje uzročnika bolesti ako je teško postaviti dijagnozu.

Za izvođenje ove reakcije, antigeni patogena uvode se u plazmu, a zatim laboratorijski pomoćnik proučava proces koji je u tijeku. Ili izvršiti povratni udar: V zaraženu krv Protutijela se primjenjuju kako bi se odredio specifični identitet patogena.

Opseg primjene

Ova se studija koristi u razne industrije lijek. Ova reakcija identificira specifične stanice i antitijela koja proizvodi tijelo za borbu protiv infekcija i virusa.

Osim toga, krvna grupa osobe određuje se serološkom metodom.

Slična serološka pretraga krvi koristi se u ginekologiji za dijagnosticiranje spolno prenosivih bolesti. Ova se metoda također koristi za sveobuhvatne preglede trudnica (otkrivanje toksoplazmoze, HIV-a, sifilisa itd.). Polaganje ovog testa je obavezno prilikom registracije na antenatalnu kliniku.

U djece se serološka reakcija koristi za potvrdu dijagnoze takozvanih "dječjih" bolesti (vodene kozice, ospice, rubeola, itd.) Ako simptomi nemaju izražene manifestacije i nemoguće je identificirati bolest analizom kliničkih indikacija. .

Otkrivanje spolno prenosivih bolesti

Za venereologe ovo testiranje je doista nezamjenjivo i omogućuje vrlo točnu dijagnozu.

Uz zamagljenu kliničku sliku, serološki test krvi za sifilis, giardijazu, ureaplazmozu, klamidiju, herpes i druge bolesti može brzo otkriti prisutnost protutijela.

Virusne i zarazne bolesti

Serološku analizu aktivno koriste gastroenterolozi, hepatolozi i stručnjaci za zarazne bolesti za dijagnosticiranje virusnog hepatitisa.

Dešifriranje serološkog testa krvi omogućuje određivanje stadija bolesti i odgovor na pitanje koliko je trenutno potrebna hospitalizacija. Kako se pravilno pripremiti?

Priprema za test

Serološke pretrage krvi rade se u javnim i komercijalnim klinikama. Prednost treba dati laboratoriju sa suvremenom opremom i kvalificiranim osobljem.

Biološki uzorci za pretragu mogu biti slina i feces, ali najčešće se koristi venska krv bolesnika. Krv za serološki test uzima se iz kubitalne vene u laboratoriju. Prije polaganja testa trebate se posavjetovati sa svojim liječnikom o pripremi za ovaj postupak.

Da biste se pripremili za serološki test, morate slijediti nekoliko jednostavnih pravila.

Krv se daje u mirnom stanju prije jela, odnosno natašte. Prije toga ne biste se trebali podvrgavati drugim pretragama, poput rendgena, ultrazvuka itd.

Nekoliko tjedana prije davanja krvi potrebno je izbjegavati uzimanje antibakterijskih i nekih drugih lijekova. Određene preporuke u ovom slučaju ovise o bolesti za koju se radi pretraga. Na primjer, test na hepatitis uključuje eliminaciju masne hrane i alkohola 48 sati prije postupka.

Reakcija fluorescencije

Među vrstama seroloških reakcija postoji reakcija fluorescencije. Ova tehnika koristi reagens koji osvjetljava antitijela u krvnom serumu.

Postavljanje izravne serološke reakcije uključuje označavanje specifičnih protutijela fluorescentnom tvari. Ova reakcija je najbrža i odvija se u jednoj fazi.

Druga opcija za provođenje takve analize naziva se neizravno ili RNIF. Provodi se u dvije faze. U prvom koraku antitijela nisu obilježena fluorescentnim oznakama, au drugom se prikladno obilježena antitijela koriste za identifikaciju antigena i antitijela. Sjaj se javlja tek nakon što se veže na specifično antitijelo.

Što pokazuje serološka pretraga krvi? Rezultat cijelog postupka procjenjuje se posebnim uređajem koji analizira snagu zračenja i otkriva oblik i veličinu predmeta koji se proučava. Uzročnici zaraznih bolesti otkrivaju se rezultatom čija je pouzdanost %, ovisno o vrsti i stadiju patologije.

Vezani imunosorbentni test

Ove vrste seroloških ispitivanja koriste jedinstvene, stabilne reagense. Čini se da se označene tvari lijepe na željena antitijela. Kao rezultat toga, dobivamo kvalitativni ili kvantitativni rezultat.

Ako se ne pronađu izraženi markeri, rezultat će se smatrati negativnim. Ako se tijekom kvalitativne studije otkrije prisutnost protutijela u biološkim uzorcima, tada se rezultat testa smatra pozitivnim. Kvantificiranjem stanica analiza daje točniji rezultat.

Analizom pokazatelja analize (na primjer, zbroj identificiranih stanica), stručnjak utvrđuje je li bolest u početnoj fazi, u akutnoj fazi ili se kronični oblik patologije pogoršao. Da bi postavio dijagnozu, liječnik uzima u obzir ne samo podatke serološke studije, već i kliničku sliku bolesti.

Značajke ovog testa

Provođenje ove analize ne može uvijek pružiti 100% pouzdanost da je određena bolest otkrivena. Događa se da rezultati mogu biti dvosmisleni i potrebni su drugi postupci.

Na primjer, tijekom testa na brucelozu, krvni serum se kontrolira za samozadržavanje bez antigena. To značajno povećava pouzdanost testiranja. Test na brucelozu može biti pozitivan ili negativan, a može izazvati i sumnju.

Ako dobijete upitne rezultate koji nemaju nedvosmisleno tumačenje, preporuča se ponoviti test. Osim toga, bruceloza se može otkriti hemokulturama, testiranjem Koštana srž i cerebrospinalnu tekućinu.

Prednosti serološkog testa krvi

Dijagnostičke tehnike pomoću seroloških reakcija naširoko se koriste u suvremenoj medicinskoj praksi. To se osobito često radi pri određivanju virusnih i zaraznih patologija.

Isti se testovi koriste tijekom geografskog probira i medicinskog pregleda kako bi se spriječilo epidemiološko širenje infekcije.

Prednosti metode uključuju:

• Visoka razina samopouzdanja.
• Brza reakcija i rezultati. Rezultati RSC-a poznati su unutar 24 sata. U posebnoj situaciji, u bolničkom okruženju, analiza će biti spremna za nekoliko sati.
• Praćenje razvoja bolesti i učinkovitosti terapije.
• Niska cijena i pristupačnost za pacijente.

Nedostaci metode

Međutim, serološke studije imaju i svoje nedostatke.

To uključuje činjenicu koju analiza treba uzeti u obzir trajanje inkubacije bolesti kako bi se dobila pouzdanija slika.

Na primjer, definicija herpes simplex prvi ili drugi tip je moguć tek nakon 14 dana od trenutka infekcije. Analiza na prisutnost virusa imunodeficijencije provodi se 30 dana, 90 dana i šest mjeseci nakon kontakta sa zaraženom osobom.

Naravno, na pouzdanost rezultata može utjecati i ljudski faktor: zanemarivanje pravila za pripremu uzorkovanja krvi ili pogreška laboratorijskog pomoćnika prilikom provođenja reakcije.

Prema statistikama, pogrešan rezultat može se dobiti u 5% slučajeva. Iskusni liječnik, prilikom pregleda pacijenta, proučavajući kliničku sliku, u većini slučajeva može izračunati učinjenu pogrešku.

Koji krvni testovi se uzimaju za sifilis: RW, RPGA, ELISA, VDRL, RPR, RIBT, tumačenje rezultata testa

Sifilis je zarazna bolest uzrokovana spirohetom Treponema pallidum, sklona progresivnom kroničnom tijeku, s jasnom periodizacijom kliničkih simptoma.

Prevladavanje spolnog prijenosa nad kontaktnim i transplacentalnim prijenosom svrstava ovu bolest među spolno prenosive bolesti (STD, SPI). Osim ovih načina prijenosa infekcije, posebnu ulogu ima umjetni put (od latinskog "artificio" - umjetno stvoren).

Tipično je za medicinske ustanove, uglavnom se provodi u bolničkom okruženju. Infekcija se javlja putem transfuzije krvi, raznih kirurške operacije, invazivne dijagnostičke metode.

Unatoč karanteni darovane krvi, problem identificiranja sifilisa kod darivatelja različite faze bolest je još uvijek aktualna.

Stoga dijagnostičke mjere za sifilis zahtijevaju standardizaciju, uvođenje novih osjetljivih i informativnih metoda identifikacije, kao i minimiziranje pogrešaka i netočne interpretacije rezultata ispitivanja.

Klasifikacija laboratorijskih dijagnostičkih metoda

Dijagnoza sifilisa ima neke značajke i razlikuje se od dijagnoze drugih bakterijske infekcije. Složena struktura i antigenska svojstva Treponema pallidum uzrokuju pogreške u tumačenju rezultata seroloških reakcija.

Postoje 3 glavne skupine pacijenata kojima se nudi krvni test za sifilis:

1. 1 Probir i liječnički pregled skupina stanovništva (uključujući trudnoću, prijavu u antenatalnu kliniku, zapošljavanje i upis u zdravstveni karton itd.).
2. 2 Probir u rizičnim skupinama (nezaštićeni spolni odnosi s osobom zaraženom sifilisom, osobe nakon prisilnog spolnog odnosa, osobe zaražene HIV-om i dr.).
3. 3 Osobe sa simptomima bolesti ili osobe za koje se sumnja da imaju sifilitičku infekciju.

svi laboratorijske metode uvjetno se dijele na izravne i neizravne.

Izravne metode

1. 1 Identifikacija Treponema pallidum u tamnom polju (mikroskopija tamnog polja).
2. 2 Infekcija pokusnih životinja (uzgoj u laboratorijskim životinjama).
3. 3 PCR (lančana reakcija polimerazom).
4. 4 DNA sonda ili hibridizacija nukleinske kiseline.

Indirektne metode

Serološke reakcije su laboratorijske dijagnostičke metode koje se temelje na dokazivanju protutijela (skraćeno AT) na antigene Treponema pallidum (skraćeno AG). Oni su od primarne važnosti za potvrdu dijagnoze.

1. 1 Netreponemski testovi:
   • Wassermanova reakcija (WRS);
   • Reakcija mikrotaloženja (MR, RMP) i njeni analozi, koji su navedeni u nastavku;
   • Brzi plazma reagin test (RPR, RPR);
   • Serumski test s crvenim toluidinom (TRUST);
   • Netreponemski test Laboratorija za istraživanje spolnih bolesti - VDRL.
2. 2 Treponemalni testovi:
   • Treponema pallidum otopina za imobilizaciju – RIBT/RIT;
   • Otopina za imunofluorescenciju - RIF, FTA (razrjeđenja seruma RIF-10, RIF-200, RIF-abs);
   • R-cija pasivne hemaglutinacije (RPGA, TRPGA, TPHA);
   • Imunoenzimski test (ELISA, EIA);
   • Imunobloting.

Slika 1 - Algoritam za serodijagnostiku sifilisa

Histomorfološke metode

Ove se metode svode na utvrđivanje značajki histomorfologije sifilitičkih manifestacija. Pozornost se posvećuje suptilnostima strukture šankra. Međutim, diferencijalna dijagnoza infekcije pomoću histologije vrlo je teška. Histomorfologija se koristi s drugim laboratorijskim i kliničkim pretragama.

Mikroskopija u tamnom polju Treponema pallidum

Ova se metoda temelji na izravnoj detekciji treponeme pallidum u ispitivanom materijalu pomoću mikroskopa i posebnih uređaja (najčešće iscjedak iz erozija i čireva, rjeđe cerebrospinalna tekućina i druge podloge).

Skarifikacijom, struganjem, stiskanjem iz erozija i ulcerativnih defekata dobiva se eksudat, a zatim se pripremljeni pripravak ispituje pod mikroskopom.

Tipično, treponema pallidum se otkriva u pripravku dobivenom iz šankra, iz žarišta sekundarnog svježeg, sekundarnog rekurentnog sifilisa, kao i punktata limfnih čvorova i placente.

Na temelju fenomena malih čestica koje svijetle u tamnom polju kada ih pogodi snop svjetlosti (Tyndallov fenomen), metoda savršeno omogućuje razlikovanje uzročnika sifilisa od ostalih treponema na temelju morfoloških razlika i razlika u načinu kretanja sifilisa. bakterija.

Za mikroskopiranje se koristi poseban kondenzor tamnog polja odgovarajuće optičke rezolucije. Lijek se dobiva metodom usitnjene kapi (kap materijala nanese se na čisto, nemasno predmetno stakalce i prekrije vrlo tankim pokrovnim stakalcem).

Ulje za uranjanje kapne se na pokrovno stakalce. Okretanjem cijevi i okretanjem povećala podešava se željena rasvjeta.

U tamnom polju mikroskopa otkrivaju se krvne stanice, epitelne stanice i uzročnik sifilisa. Treponema pallidum izgleda kao spirala, vrlo tanka, emitira srebrnastu boju, s glatkim pokretima.

Slika 2 - Mikroskopija tamnog polja kao način vizualizacije Treponema pallidum u materijalu koji se proučava. Izvor ilustracije - CDC

Treponema pallidum se mora razlikovati od ostalih treponema, uključujući Tr. refringens, koji se mogu naći u orofarinksu i na sluznici spolnih organa. Ova bakterija čini kaotične pokrete, ima široke i asimetrične, prilično grube kovrče. Osim toga, Treponema pallidum se razlikuje od Tr. Microdentium, Tr. Buccalis i Tr. vincenti.

Vizualizacija bakterija u tamnom polju ponekad je dopunjena reakcijom fluorescencije. U tu svrhu nativnom materijalu dodaju se antitreponemska protutijela obilježena fluorescentnom bojom. U tom slučaju nastaje kompleks nazvan antigen-antitijelo (skraćeno AG-AT), koji je predmet proučavanja pomoću fluorescentnog mikroskopa.

Metoda lančane reakcije polimerazom (PCR).

PCR, razvijen 1991. za otkrivanje molekule deoksiribonukleinske kiseline (DNA) Treponema pallidum, vrlo je osjetljiv i specifičan, što omogućuje otkrivanje fragmenata DNA patogena.

Ova se analiza temelji na kopiranju kratkih dijelova DNA iz blijede spirohete, koja zadovoljava navedene parametre i prisutna je u uzorku. Sve se to izvodi u umjetnim uvjetima (in vitro). Reakcija se provodi u uređaju - termocikleru, koji osigurava periodizaciju temperaturnih ciklusa. Dolazi do hlađenja nakon čega slijedi zagrijavanje epruveta s pogreškom od 0,1˚C.

DNA matrica se zagrijava 2 minute na temperaturi od 92-98˚C ( Maksimalna temperatura koristi se ako je polimeraza termostabilna). Zagrijavanjem se DNA lanci odvajaju zbog raspada vodikovih veza između njih. U koraku žarenja, temperatura reakcije se smanjuje kako bi se primer vezao na jednolančani šablon.

Žarenje traje oko 30 sekundi, a tijekom tog vremena se sintetiziraju stotine nukleotida. Novosintetizirane molekule se kopiraju polimerazom, pri čemu dolazi do umnožavanja specifičnih fragmenata deoksiribonukleinske kiseline. Naknadna detekcija fragmenata provodi se elektroforezom u agar gelu.

PCR dijagnoza sifilisa još uvijek je eksperimentalne prirode, ali je opravdana kada se otkrije kongenitalna infekcija, u složenim dijagnostičkim slučajevima ili kada je sadržaj Treponema pallidum minimalan u ispitivanom materijalu.

DNA hibridizacija

Hibridizacija DNA provodi se in vitro i temelji se na potpunom ili djelomičnom spajanju dviju jednolančanih molekula DNA u jednu molekulu. U slučaju potpune korespondencije komplementarnih fragmenata, spajanje se događa lako. Ako je komplementarno podudaranje djelomično, tada se spajanje DNA lanaca odvija sporo. Na temelju vremena lančane fuzije može se procijeniti stupanj komplementarnosti.

Kada se DNA zagrijava u puferskoj otopini, vodikove veze se prekidaju pomoću dušikovih baza koje su komplementarne, uzrokujući odvajanje lanaca DNA. Zatim se od dvije denaturirane deoksiribonukleinske kiseline dobiva lijek. Kada se ohlade, jednolančane regije postaju renaturirane. Nastaje takozvani DNA hibrid.

Metoda vam omogućuje procjenu i analizu brzine žarenja, uzimajući u obzir karakteristike (sličnosti i razlike) DNK između vrsta ili unutar vrste.

Upotreba DNK sonde uključuje hibridizaciju obilježenog fragmenta DNK sa specifičnom regijom DNK za identifikaciju komplementarnih nukleotidnih sekvenci. Skupina nezasićenih atoma (kromofora) ili radioaktivnih izotopa koristi se za označavanje sonde.

DNA sonda se koristi za heterogenu i homogenu detekciju nukleinskih kiselina. Uloga sonde je identificirati područja gdje je došlo do spajanja mete i sonde. Detekcija u homogenom sustavu ima prednost jer omogućuje praćenje hibridizacije molekula DNA u stvarnom vremenu.

Bit metode je denaturacija i renaturacija DNA (ponovno spajanje lanaca DNA). Proces renaturacije nukleinske kiseline i DNA sonde završava stvaranjem "hibrida".

Specifične sekvence nukleinskih kiselina hibridiziraju se s DNK sondom i, na taj način, se otkrivaju i omogućuju procjenu količine DNK u materijalu koji se proučava.

Infekcija laboratorijskih životinja

Visoka osjetljivost kunića na Treponema pallidum (oko 99,9%) omogućuje im da se koriste u dijagnostici sifilitičke infekcije.

Infekcija kunića provodi se u istraživačkim centrima i predstavlja "zlatni standard" za procjenu osjetljivosti drugih metoda.

Vratimo se treponemskim i netreponemskim testovima, jer se oni najčešće koriste. Razmotrimo njihove prednosti i nedostatke, kao i pogreške u tumačenju rezultata.

Netreponemski testovi

To su testovi za određivanje IgG i IgM protutijela na standardizirani kardiolipinski antigen. Njihov značajan nedostatak je njihova relativno niska specifičnost.

Niska cijena i jednostavnost provedbe omogućuju svrstavanje ovih testova u dijagnostičke testove neophodne za postavljanje preliminarne dijagnoze i probir stanovništva.

To su netreponemski testovi koji se uzimaju prilikom podnošenja zahtjeva za zdravstveni karton, prijave za posao ili prijave u kliniku za trudnice.

1. 1 Minimalna osjetljivost u fazi primarnog sifilisa – 70%;
2. 2 Minimalna osjetljivost u fazi kasnog sifilisa – 30%;
3. 3 Mogućnost lažno negativnih i lažno pozitivnih rezultata;
4. 4 Intenzitet rada izvođenja RSK.

1. 1 Relativno niska cijena testne proizvodnje;
2. 2 Primite brzi odgovor;
3. 3 Mogućnost njihove upotrebe za probir.

Dobivanje lažno pozitivnih ili slabo pozitivnih uzoraka moguće je u sljedećim slučajevima:

1. 1 Kršenje tehnologije izvođenja prilikom blokiranja kompleksa AG-AT.
2. 2 Pacijent ima autoimune bolesti (reumatoidni artritis, reumatizam, sklerodermija, sistemski eritematozni lupus, sarkoidoza, itd.).
3. 3 Zloćudne neoplazme.
4. 4 Virusne i bakterijske infekcije.
5. 5 Endokrine bolesti ( autoimuni tiroiditis, dijabetes).
6. 6 Trudnoća.
7. 7 Konzumiranje alkohola.
8. 8 Konzumiranje masne hrane.
9. 9 Senilna dob.

Kao što možete vidjeti s popisa, postoji mnogo razloga za netočan rezultat. Stoga treba biti vrlo oprezan s tim. Razmotrimo još dva uzorka uz RSC. Ovo je reakcija mikroprecipitacije i VDLR (njegova modifikacija).

Reakcija vezanja komplementa (RSK, Wasserman, RW)

Ovo je test koji se temelji na sposobnosti komplementa da se veže na AG-AT komplekse. Formirani kompleks identificira se pomoću hemolitičkog sustava. Kardiolipinski antigen značajno povećava osjetljivost testa.

Osjetljiva je i Kolmerova reakcija, koja se sastoji od izvođenja pri različitim temperaturnim uvjetima. Dakle, prva faza Kolmerove reakcije odvija se na temperaturi od 20˚C pola sata, a druga faza na temperaturi od 4-8˚C tijekom 20 sati. Za to vrijeme dolazi do fiksacije komplementa.

Kod izvođenja RSC-a moguće je dobiti dramatično pozitivne rezultate. Razlog je vjerojatno visok titar protutijela u nerazrijeđenom serumu. U tom slučaju uzorci se daju s opadajućim dozama.

Da bi se razlikovali stadiji sifilisa i procijenila učinkovitost antisifilitičkog liječenja, određuje se količina AT u serumu.

Pozitivnost uzorka procjenjuje se križanjima, a razrjeđenje seruma također je naznačeno u Wassermanovoj, Kolmerovoj i Kannovoj reakciji.

Reakcija mikrotaloženja

Budući da je složenost izvođenja gore navedenih testova velika, za širinu pokrivenosti kliničkim pregledom različite grupe populacije, razvijena je ubrzana metoda za serodijagnostiku sifilisa, tzv. ekspresna metoda - mikroprecipitacijska reakcija (skraćeno MR, RMP).

Izvodi se s kardiolipinskim antigenom i pomoćnim tvarima. Njegova prednost je prikupljanje periferne krvi za istraživanje. To značajno ubrzava kako samu tehniku ​​tako i rad laboratorijskih tehničara.

Slika 2 - Reakcija mikroprecipitacije (shema)

Za izvođenje MR-a potrebna je plazma ili inaktivirani serum krvi bolesnika (sadrže antitijela). Zatim se plazma stavlja u označene jažice. Zatim se ispitnom materijalu doda kap kardiolipinskog antigena, promiješa i protrese. Kao rezultat toga, u serumu zaražene osobe pojavljuju se karakteristične ljuskice, različitog intenziteta.

Ovo je kvalitetan uzorak. Za kvantitativnu procjenu koristi se 10 razrjeđenja seruma koji se stavljaju u 10 jažica s odgovarajućim označavanjem. Kod kvalitativne MR odgovor je naznačen u obliku križića (plus) ili minusa; kod kvantitativne MR je naznačen titar antitijela (1:2, 1:4 i tako dalje).

Prisutnost ljuskica smatra se pozitivnim ili slabo pozitivnim odgovorom. Pojava flokulata moguća je čak i u odsutnosti bolesti, stoga se konačna procjena dobivenog rezultata provodi nakon kontrolne studije ili drugih reakcija (RIBT, RIF, ELISA, RPGA).

Metoda koju preporučuje Svjetska zdravstvena organizacija za određivanje stupnja reakcije s lipoidnim antigenom (AG) s pravom se smatra najboljom među ostalim standardnim netreponemskim testovima. Razvijen u SAD-u, Georgia u laboratoriju za spolno prenosive bolesti (Venereal Diseases Research Laboratories).

Kao naziv za uzorak poslužila je skraćenica institucije - VDRL. VDRL je modifikacija MR-a. Serum bolesnika sa sifilisom se inaktivira i stavlja na predmetno staklo. Antigen koji se koristi sastoji se od kardiolipina, kolesterola i lecitina u različitim postocima. Odgovor se registrira gotovo odmah.

U prisutnosti antitijela u serumu dolazi do izrazite flokulacije. Serum postaje reaktivan nakon 4 tjedna od infekcije. Za procjenu količine protutijela, serum se prethodno eksponencijalno razrijedi.

1. 1 relativno visoka osjetljivost;
2. 2 relativno visoka specifičnost;
3. 3 jednostavnost implementacije;
4. 4 niske cijene reagensa;
5. 5 dobivanje brzog odgovora.

Nedostatak VDRL-a je njegova relativno visoka stopa lažno pozitivnih rezultata.

Njihovi uzroci su iste gore navedene bolesti.

Treponemalni testovi se izvode sa specifičnim antigenima Treponema pallidum. Oni su nužni i obvezni za postavljanje konačne dijagnoze. To su reakcija imunofluorescencije (RIF), reakcija neizravne hemaglutinacije (IPHA), enzimski imunoanaliza (ELISA) itd.

Nakon pozitivan rezultat netreponemske testove (RPR, MP, VDRL) uvijek treba raditi treponemske testove (obično kombinacija – RPGA, ELISA, RIF).

Treponemski testovi su složeniji za izvođenje od brzih testova i zahtijevaju više novca.

Ova reakcija (skraćeno RIF) koristi se za dijagnosticiranje sifilisa, uključujući latentne oblike, te za dvostruku provjeru pozitivnih i lažno pozitivnih uzoraka.

RIF se temelji na sjaju obilježenih antitijela u kombinaciji s kompleksom antigen-antitijelo pod kvarcnom lampom. Metoda se počela koristiti 60-ih godina i odlikovala se jednostavnošću implementacije i visokom specifičnošću (koja je malo inferiorna u odnosu na RIBT).

Ima nekoliko modifikacija: RIF-10, RIF-200 i RIF-abs.

RIF je najosjetljiviji kada se razrijedi 10 puta, a ostali su specifičniji. RIF se provodi u dvije faze. Bolesnikov krvni serum dodaje se AG. Formira se kompleks AG-AT koji se proučava u sljedećoj fazi. Zatim se mikroskopski identificira kompleks obilježen fluorokromom. Ako se ne primijeti sjaj, to ukazuje na odsutnost specifičnih protutijela u krvnom serumu.

RIF-200 je najvrjednije od svih razrjeđenja. Metoda je namijenjena dijagnostici raznih oblika sifilisa, posebno latentni sifilis i ponovna provjera pozitivnih uzoraka.

Reakcija imobilizacije Treponema pallidum (skraćeno RIBT, RIT) jedna je od složenih seroloških pretraga koja zahtijeva značajan napor i financijske troškove. RIBT se koristi sve rjeđe, ali njegova važnost ostaje u dijagnostici latentnog sifilisa.

Od velike je važnosti u prepoznavanju lažno pozitivnih nalaza u trudnica, a temelji se na imobilizaciji bakterija u prisutnosti imobilizina – kasnih antitijela.

Rezultat se procjenjuje na temelju postotka (%) imobiliziranih treponema pomoću posebne tablice:

1. 1 Od 0 do 20 - negativan test.
2. 2 Od 21 do 50 - slabo pozitivan test.
3. 3 Od 50 dodatnih pozitivnih reakcija.

Lažno pozitivni rezultati također su mogući kada se koristi RIBT. Dakle, netočan odgovor je moguć tijekom infekcije tropskim trepanematazama, kao i kod tuberkuloze, ciroze jetre, sarkoidoze i starijih pacijenata.

Ovaj test krvi za sifilis naziva se test pasivne hemaglutinacije (skraćeno test krvi za RPHA, THRHA).

Antigen za RPHA priprema se iz crvenih krvnih stanica ovaca obloženih fragmentima Treponema pallidum (dobivenih od zaraženih kunića (vidi sliku 4)). Za analizu se koristi venska krv (plazma ili inaktivirani serum) bolesnika.

Kada se antigen doda serumu bolesnika sa sifilisom, nastaje kompleks AG-AT, što dovodi do aglutinacije crvenih krvnih stanica. aglutinaciju laboratorijski tehničar utvrđuje subjektivno.

Slika 3 - Shema RPHA (reakcija pasivne hemaglutinacije)

Uzorak se ocjenjuje pozitivnim kada se pojave aglutinati ujednačene ružičaste boje. Crveno bojenje precipitata ukazuje na taloženje crvenih krvnih stanica. RPGA je vrlo osjetljiv i vrlo specifičan.

Reakcija mikrohemaglutinacije

To je pojednostavljena verzija RPGA. Razlikuje se od gore opisanog testa po tome što zahtijeva manje antigena, razrjeđivača i seruma za izvođenje reakcije. 4 sata nakon inkubacije seruma, uzorak se može procijeniti. Koristi se za probir i masovna ispitivanja na sifilis.

Vezani imunosorbentni test

Imunoenzimski test (skraćeno ELISA) temelji se na specifičnoj reakciji antigen-antitijelo. Biološki materijal (krvni serum bolesnika, cerebrospinalna tekućina) unosi se u jažice na čijoj su čvrstoj površini fiksirani antigeni treponema pallidum. Ispitni materijal se inkubira, zatim se isperu antitijela koja se nisu vezala na antigene (vidi sliku 5).

Identifikacija dobivenog kompleksa provodi se u fazi fermentacije pomoću imunološkog seruma obilježenog enzimom. Na kemijska reakcija enzim boji nastale komplekse. Intenzitet bojenja ovisi o količini specifičnih protutijela u krvi bolesnika i bilježi se spektrofotometrom.

Slika 4 - Shema ELISA (imunoenzimski test)

Osjetljivost ELISA je više od 95%. Metoda se koristi u automatiziranom načinu za proučavanje izbornih populacijskih skupina: donora, trudnica i drugih, kako bi se razjasnila dijagnoza pozitivnih i lažno pozitivnih netreponemskih testova.

Imunobloting

Imunobloting je vrlo osjetljiva metoda, modifikacija jednostavne ELISA. Reakcija se temelji na elektroforezi s odvajanjem antigena Treponema pallidum.

Odvojene imunodeterminante se prenose na nitrocelulozni papir i razvijaju u ELISA testu. Zatim se serum inkubira i nevezana antitijela se isperu. Dobiveni materijal se tretira imunoglobulinima (IgM ili IgG) obilježenim enzimom.

Klinička procjena rezultata laboratorijske dijagnostike sifilisa

U tablici 1 u nastavku dali smo moguće rezultate ispitivanja i njihovo tumačenje. Kao što možete vidjeti u tablici, sveobuhvatna procjena testova je od primarne važnosti prilikom dešifriranja.

Tablica 1 - Tumačenje rezultata seroloških reakcija (pretrage krvi za sifilis). Za pregled kliknite na tablicu

Reaktivnost testa također se procjenjuje pomoću "križića":

1. 1 Maksimalni odgovor (oštro pozitivan test) označen je s 4 križića.
2. 2 Pozitivan test označen je s 3 križića.
3. 3 Slabo pozitivna reakcija označena je s dva križića.
4. 4 Jedan križić označava sumnjiv i negativan rezultat.
5. 5 Negativni odgovor označava se znakom minus.

Problem optimizacije laboratorijske dijagnostike sifilisa nije izgubio svoju važnost do danas. Suvremene dijagnostičke metode, unatoč želji znanstvenika da dijagnostiku dovedu na najveću moguću razinu osjetljivosti i specifičnosti, zahtijevaju kontrolna testiranja i individualan pristup.

Značajka sifilitičke infekcije je fenomen serorezistencije, koji nikada nije primio znanstveno objašnjenje. Dijagnoza se postavlja nakon potpunog pregleda bolesnika epidemiološkim, kliničkim i laboratorijskim metodama.

U kontekstu ekonomskog i tehničkog razvoja medicine, također se uočava napredak u razvoju novih kriterija za dijagnosticiranje sifilisa. Sve to će vam omogućiti brzo, uspješno i precizno liječenje pacijenata.

Zarazne bolesti pokreću stvaranje odgovarajućih protutijela u krvi bolesne osobe. Ovako to funkcionira imunološka obrana tijelo.

Određivanje prisutnosti protutijela na određeni virus ili bakteriju omogućuje otkrivanje početka bolesti prije nego što se pojave glavni simptomi. Danas serološki testovi daju najpotpuniju sliku. Stoga ćemo u ovom članku govoriti o serološkim pretragama.

Što su serološki testovi

Metode proučavanja bioloških materijala ljudi i životinja kojima se u njima mogu otkriti protutijela ili antigeni koje tijelo proizvodi kao zaštitnu reakciju u borbi protiv infekcija nazivaju se serološke studije. Takve se metode koriste za određivanje uzročnika infekcije, kao iu svrhu:

• određivanje krvne grupe,
• proučavanje imuniteta određivanjem razine njegove humoralne komponente,
• određivanje tkivnih antigena.

Kome je propisano?

Zašto to učiniti?

Stručnjaci ovu metodu cijene kao način kvalitetne dijagnoze bolesti.

• Ako je pacijent u fazi bolesti, preporučuje se provođenje ponovljenih studija u intervalima od otprilike tjedan dana kako bi se pratila učinkovitost primijenjenog liječenja.
• Serološki testovi često se koriste kako bi se utvrdilo koji je uzročnik uzrokovao bolest nakon što ju je bolesnik prebolio.

Vrste postupaka

Serološke metode istraživanja temelje se na različitim reakcijama:

• Reakcija neutralizacije oslanja se na svojstvo protutijela imunološkog seruma da djeluju kao neutralizirajuće sredstvo protiv samih toksina ili mikroorganizama, sprječavajući njihove štetne učinke.
• Reakcija aglutinacije, koji je pak podijeljen u sljedeće podvrste:
  • izravne reakcije - koriste se za ispitivanje krvnog seruma na prisutnost protutijela. Ubijeni mikrobi dodaju se sastavu koji se proučava, a ako se pojavi talog u obliku pahuljica, to znači da je reakcija na ovu vrstu mikroba pozitivna;
  • reakcija neizravne hemaglutinacije provodi se uvođenjem u krvni serum eritrocita na kojima su adsorbirani antigeni; ovi agensi stupaju u interakciju s istom vrstom antigena prisutnih u krvnom serumu, što rezultira nazubljenim talogom.
• Reakcija koja uključuje komplement koristi se za otkrivanje zaraznih bolesti. Metoda se provodi aktivacijom komplementa i promatranjem reakcija koje se odvijaju u mediju koji se proučava.
• Reakcija taloženja provodi se slojevitim nanošenjem otopine antigena na tekući medij – imunološki serum. Antigen koji se koristi za ovu metodu je topiv. Reakcija je da kompleks antigen-antitijelo prolazi kroz taloženje; nastali talog naziva se talog.
• Reakcija pomoću obilježenih antigena i antitijela temelji se na činjenici da mikrobi ili tkivni antigeni, obrađeni na određeni način, stječu sposobnost emitiranja svjetlosti pod utjecajem ultraljubičastih zraka. Metoda se koristi ne samo za dijagnosticiranje antigena, već i za određivanje ljekovite tvari, enzimi, hormoni.

Kontraindikacije za

Budući da metoda uključuje proučavanje biološkog materijala pacijenta, ne može imati negativan učinak na ljude. Stoga nema kontraindikacija za uporabu.

Studija je potpuno sigurna.

U nastavku ćemo opisati kako se provodi serološki test.

Indikacije za ispitivanje

Metoda se koristi za određivanje uzročnika infekcije, uključujući sljedeće bolesti:

• HIV infekcija,
• toksoplazmoza,
• zarazne bolesti stečene seksualnim kontaktom;
• difterija,
• Dostupnost ;
• bruceloza,
• stafilokokne infekcije,
• hepatitis.

Metoda se također koristi za prepoznavanje sljedećih bolesti:

• opistorhijaza,
• amebijaza,
• cisticerkoza,
• giardijaza,
• upala pluća.

Priprema za postupak

Za postupak nisu potrebne posebne pripreme. Mora se poštovati jedan uvjet: uzorkovanje krvi vrši se na prazan želudac.

U nastavku je opisan algoritam uzorkovanja (uzimanja) krvi (materijala) za serološke pretrage.

Provođenje analize

Krv se uzima iz ulne vene. Da bi studija uspjela, krv se ne uzima štrcaljkom, već gravitacijom. Igla bez štrcaljke umetne se u venu i u epruvetu se prikupi do 5 ml krvi.

Tijekom postupka pacijent osjeća blagu nelagodu dok se igla uvodi u venu. Sljedeći koraci nisu nimalo zabrinjavajući.

Tumačenje rezultata serološke pretrage krvi opisano je u nastavku.

Dekodiranje rezultata

Dobivene rezultate treba promatrati zajedno s kliničkom slikom bolesti, provjeravajući sumnju na dijagnozu pomoću nekoliko pretraga. To je zbog činjenice da su testovi specifični i ponekad nemaju apsolutnu osjetljivost na zarazne bolesti.

Cijena sveobuhvatne serološke pretrage krvi opisana je u nastavku.

Prosječna cijena postupka

Cijena zahvata ovisit će o vrsti studije. Sastoji se od troškova analize i troškova antitijela na određeni patogen. Prosječna cijena postupka je unutar 700 rubalja.

Serološke reakcije opisane su u videu ispod:

Serološka metoda je skup reakcija temeljen na interakcija antigen-antitijelo (Ag-Ab) i usmjerena na identifikaciju antitijela na antigene uzročnika zaraznih bolesti ili same mikrobne antigene u krvnom serumu i drugim tjelesnim tekućinama. Serološku metodu karakterizira visoka osjetljivost i specifičnost. Većina reakcija ove metode lako se provodi i bilježi, dostupne su širokom rasponu laboratorija, obično su sigurne, ekonomične i podložne standardizaciji. DO nedostatke Serološka metoda može se pripisati: 1) neizravnoj prirodi rezultata, kada se etiologija bolesti ne procjenjuje izolacijom patogena, već tjelesnim (imunološkim) odgovorom na patogen; 2) potreba za parenteralnom intervencijom u tijelu pacijenta; 3) u većini slučajeva kasna dijagnoza, što se objašnjava prirodnom dinamikom humoralnog imunološkog odgovora; 4) mogućnost pogrešnog tumačenja anamnestičkih abs (kao rezultat prethodne bolesti ili cijepljenja) za abs za trenutnu infekciju. Pri određivanju mikrobnih antigena 3 i 4 nema nedostataka, ali je potrebno uzeti u obzir karakteristike cirkulacije antigena različitih mikroba i korelirati te značajke s mogućnošću uzimanja materijala za istraživanje.

Faze serološke metode:

1) uzimanje materijali za istraživanje. U većini slučajeva materijal je krvni serum. Dobiva se nakon stvaranja krvnog ugruška, krv treba prikupiti u strogo aseptičnim uvjetima prema standardnim tehnikama,

2) izbor serološke reakcije za određeni slučaj ovisi o svrsi istraživanja, sumnji na bolest, fazi bolesti, materijalu za ispitivanje, osjetljivosti reakcije i mogućnostima pojedinog laboratorija. Za otkrivanje Abs, kao i Ag, koriste se reakcije aglutinacije ( RA), pasivna hemaglutinacija ( RPGA)), imunofluorescencija (GREBEN), inhibicija hemaglutinacije ( RTGA), taloženje, flokulacija, reakcija vezanja komplementa (FFR), itd.

3) postavljanje serološke reakcije,

4) registracija serološke reakcije radi utvrđivanja prisutnosti seroloških markera infekcije.

Različite serološke reakcije karakterizira nekoliko opće karakteristike:

1) budući da su sve serološke reakcije reakcije interakcije između Ab i Ag, tada se u svim slučajevima za utvrđivanje prisutnosti Ab u supstratu koji se proučava koristi skup poznatih standardnih korpuskularnih ili topljivih Ag, tzv. dijagnostikumi. S druge strane, za utvrđivanje prisutnosti Ag, skup imunološki dijagnostički serumi,

2) interakcija Ag i Ab događa se samo u prisutnosti elektrolita, koji je obično izotonična otopina natrijevog klorida ili puferske smjese; pH sustava treba biti oko 7,

3) stvaranje kompleksa Ag-At zahtijeva razdoblje inkubacije pod posebnim temperaturnim uvjetima (od +4 ° C do 37 ° C). Stvaranje specifičnog imunološkog kompleksa događa se brzo; pojava vidljiva golim okom (aglutinacija, liza itd.) - polako, nakon nekoliko sati ili čak dana,

4) obje komponente serološke reakcije (antigen i protutijela) moraju biti prisutne u jednakom omjeru. Višak bilo koje od komponenti blokira stvaranje kompleksa Ag-At i pridonosi lažno negativnim rezultatima.

Serološke reakcije bilježe se vizualno, ponekad pomoću povećala. Bit uzimanja u obzir serološke reakcije svodi se na utvrđivanje fenomena vezanja Ag i Ab stvaranjem kompleksa Ag-At. Vizualno, formiranje Ag-At kompleksa prate dva glavna fenomena - aglutinacija i taloženje. Razlike među njima određene su karakteristikama antigena i za njih specifičnih protutijela. U isto vrijeme, među mikrobnim antigenima postoje i oni koji induciraju sintezu ne-precipitirajućih; formiranje Ag-Ab kompleksa u ovom slučaju nije popraćeno ni fenomenom aglutinacije ni fenomenom taloženja, a identificiranje činjenica formiranja kompleksa Ag-Ab zahtijeva označavanje dijagnostičke komponente reakcije posebnim oznakama ili prijenos dijagnostičkog antigena u drugo stanje agregacije.

Pri procjeni reakcije koriste se 3 glavna kriterija: 1) prisutnost i intenzitet reakcije (u plusevima, itd.); 2) dijagnostički titar, 3) porast titra Ab tijekom bolesti 4 puta ili više. Prisutnost reakcije određuje se vizualnim fenomenima ili vezanjem imunokemijskog markera. Za procjenu intenziteta serološke reakcije koristi se princip 4 “+” (Tablica 7).

Tablica 7.

Sustav za procjenu seroloških reakcija s 4 "+" za reakcije aglutinacije i precipitacije

Za kvantitativno predstavljanje rezultata serološke reakcije koristi se koncept titra antitijela ili antigena. Za određivanje razine Ab (odnosno Ag titra) potrebno je provesti serološku reakciju pripremom većeg broja razrjeđenja krvnog seruma ili drugog materijala (titrirati). Pri izradi razrjeđenja krvnog seruma koristi se otopina elektrolita (najčešće izotonična otopina natrijeva klorida). Korak razrjeđivanja (titracija) određuje se omjerom volumena otopine elektrolita i volumena krvnog seruma. Na primjer, uz uzastopna razrjeđivanja s korakom od 2 puta, jednaki volumeni otopine elektrolita i krvnog seruma miješaju se u 1. epruveti, s korakom od 5 puta, 1 volumen seruma dodaje se u 4 volumna dijela elektrolita. otopine, s korakom od 10 puta - s 9 1 volumen krvnog seruma dodaje se volumenu otopine elektrolita (tablica 8).