Coombsov test– test za otkrivanje antitijela pričvršćenih na površinu ili otopljenih u plazmi. Koristi se za otkrivanje imunizacije i antitijela na crvena krvna zrnca. Drugi naslov antiglobulinski test. Može biti izravna ili neizravna.

Na direktni antiglobulinski test otkriva antitijela fiksirana na površini crvenih krvnih stanica. Provodi se ako postoji sumnja na, na druge autoimune bolesti, nakon uzimanja lijekova (metildopa, penicilin, kinin) itd.

Crvena krvna zrnca senzibilizirana su in vivo – antitijela su već čvrsto vezana za njih, a dodatak antiglobulinskog seruma (anti-IgG) uzrokuje slijepljenje senzibiliziranih stanica, što je vidljivo golim okom.

Indirektni Coombsov test detektira antieritrocitna protutijela u krvnoj plazmi, provodi se prije transfuzije krvi i tijekom.

Antieritrocitna antitijela su vrsta autoantitijela, tj. antitijela protiv vlastitih tkiva. Autoantitijela nastaju kada imunološki sustav abnormalno reagira na određene lijekove, kao što su visoke doze penicilina.

Crvena krvna zrnca na svojoj površini sadrže razne kemijske strukture(glikolipidi, saharidi, glikoproteini i proteini), u medicini nazvani antigeni. Osoba nasljeđuje od svojih roditelja specifičnu kartu antigena na svakom crvenom krvnom zrncu.

Antigeni se spajaju u skupine i potom se krv dijeli u nekoliko skupina – prema sustavu AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Najpoznatiji i najznačajniji u radu liječnika su AB0 i Rh faktor (Rh).

AB0 sustav

Rh status osobe određen je prisutnošću ovih antigena. Posebno važan antigen eritrocita je antigen D. Ako je prisutan, onda govore o Rh pozitivna krv RhD, a ako ga nema – oh Rh negativan Rhd.

Ako se odgovarajuće antitijelo veže za antigene eritrocita, eritrocit se uništava - hemoliza.

Indikacije

Glavna indikacija za direktnoantiglobulinski test- sumnja na hemolitičku anemiju. Najčešće se provodi kod primarnih autoimunih bolesti. hemolitička anemija, hemoliza kod reumatskih, tumorskih, zaraznih bolesti, hemoliza izazvana lijekovima.

Ako se anemija pojavi nekoliko dana ili mjeseci nakon transfuzije krvi ili kod dugotrajne žutice u novorođenčeta, provodi se i izravni Coombsov test.

Neizravnoradi se antiglobulinski test prije transfuzije krvi i tijekom trudnoće Rh-negativne žene.

Autoimuna hemolitička anemija

Autoimuna hemolitička anemija (primarna)– klasična autoimuna bolest nepoznatog uzroka. Interakcija unutar imunološkog sustava je poremećena, što dovodi do percepcije vlastitih crvenih krvnih zrnaca kao stranih. U limfnim čvorovima se sintetiziraju antitijela klase IgG (reagiraju na t 37°C) i/ili IgM (na t 40°C) koja, kada se pričvrste na površinu eritrocita, pokreću niz enzima ( sustav komplementa) i “buše” stijenku eritrocita što dovodi do njegove destrukcije – hemolize.

Prvi simptomi uzrokovani su uništavanjem crvenih krvnih stanica i smanjenjem hemoglobina. Među njima:

• umor, opća slabost, razdražljivost
• dispneja
• bolovi u trbuhu i prsima, mučnina
• tamna boja urina
• bol u leđima
• ikterična promjena boje kože i sluznica
• smanjenje broja crvenih krvnih stanica i

Izravan pozitivan rezultat Coombs testovi 100% potvrđuje dijagnozu autoimune hemolitičke anemije, dokazujući njezino autoimuno podrijetlo. Istodobno, negativan rezultat ne omogućuje uklanjanje dijagnoze.

Sekundarna hemolitička anemija

Sekundarna autoimuna hemolitička anemija i pozitivan test Coombs se može pojaviti sa sljedećim bolestima:

• Evansov sindrom
• infekcija pneumonijom

Pozitivan antiglobulinski test kod ovih bolesti jedan je od simptoma, a ne kriterij za dijagnozu.

Hemolitička bolest novorođenčadi

Uzrok hemolitička bolest novorođenčad - nekompatibilnost krvne grupe majke i fetusa, u većini slučajeva prema Rh sustavu, u pojedinačnim slučajevima - prema sustavu AB0, kazuistički - prema drugim antigenima.

Rh sukob se razvija ako fetus Rh-negativne žene naslijedi Rh-pozitivnu krv od oca.

Bolest se kod novorođenčeta razvija samo ako je majka već razvila antitijela na odgovarajuće antigene, što se događa nakon prethodnih trudnoća, pobačaja i transfuzije nekompatibilne krvi. Najviše uobičajeni razlog poticanje sinteze antitijela na antigene membrane eritrocita – porođaj (feto-maternalno krvarenje). Prvo rođenje uglavnom se odvija bez komplikacija, ali kasniji su prepuni hemolitičke bolesti novorođenčeta u prvim danima nakon rođenja.

Simptomi hemolitičke bolesti novorođenčadi:

• žutost kože
• , i sluznice
• povećana jetra i slezena
• problemi s disanjem
• oticanje cijelog tijela
• ekscitacija i postupna depresija središnjeg živčanog sustava

Anemija nakon transfuzije krvi

Indirektni Coombsov test provodi se prije transfuzije krvi za procjenu kompatibilnosti, a izravni Coombsov test - nakon njega ako se sumnja na posttransfuzijsku hemolizu, tj. u prisutnosti simptoma kao što su groznica, suzenje (pročitajte dolje). Svrha analize je identificirati protutijela na transfuzirane crvene krvne stanice koja su se vezala na crvene krvne stanice primatelja i uzrokuju posttransfuzijsku hemolizu, kao i prerano uklanjanje donorskih crvenih krvnih stanica iz krvotoka primatelj (onaj koji je primio krv).

Simptomi:

• povećanje tjelesne temperature
• kožni osip
• bol u leđima
• Crvena
• mučnina
• vrtoglavica

Dekodiranje

Vrijedno je podsjetiti da su temeljna pravila za dešifriranje izravnih i neizravnih antiglobulinskih testova ista. Jedina razlika je mjesto antitijela – u krvi ili na crvenim krvnim stanicama.

• Ako direktni Coombsov test je negativan– to znači da antitijelo ne “sjeda” na crvena krvna zrnca te treba dalje tražiti uzrok simptoma i napraviti neizravni Coombsov test
• ako se utvrdi pozitivan rezultat Coombsovog testa nakon transfuzije krvi, infekcija, lijekova - pozitivnost traje do 3 mjeseca (životni vijek crvenih krvnih zrnaca je 120 dana - 3 mjeseca)
• pozitivan rezultat antiglobulinskog testa za autoimunu bolest traje mjesecima ili čak godinama

Norma

• direktni Coombsov test – negativan
• neizravni Coombsov test – negativan

Kvalitativno pozitivan rezultat mjeri se brojem pluseva od jedan do četiri (+, ++, +++, ++++), a kvantitativno u digitalnom obliku - 1:16, 1:256 itd.

Da. Vaš liječnik svakako treba znati da ste primili transfuziju krvi, budući da to sada utječe na ispravno tumačenje rezultata pretraga. Kada primate tuđu (iako mnogo puta testiranu) krv, uvijek postoji mogućnost da će vaše tijelo razviti antitijela protiv transfuzirane krvi. Ta će antitijela osigurati loš utjecaj o zdravstvenom stanju. Za naknadne transfuzije krvi liječnik mora znati da ste već primili transfuziju, što znači da je bilo vremena za sintezu antitijela. Za trudnice su ove informacije još važnije.

3. Ako postoji neusklađenost Rh faktora između majke i djeteta, hoće li sva djeca biti bolesna?

Ovisi o tome je li dijete Rh pozitivno ili negativno (RhD). Nosioci krvnih grupa I, II, III i IV mogu biti Rh pozitivni ili negativni. U situaciji kada je majka Rh negativna, a dijete Rh pozitivno, antitijela će se stvarati već s prvom trudnoćom, no tek nakon prvog poroda (ili prekida trudnoće) dolazi do izravnog kontakta između krvi majke i majke. dijete. Hemolitički učinak protutijela ostvarit će se tek tijekom drugog i sljedećih poroda, što će dovesti do hemolitičke bolesti novorođenčeta.

Svaka žena s negativnim Rh faktorom treba pažljivo pregledati tijekom trudnoće i nakon poroda preventivno liječenje kako bi se spriječila pojava protutijela i daljnjih komplikacija.

4. Tijekom trudnoće, je li potrebno znati krvnu grupu mog muža prije izvođenja Coombsovog testa?

Morate ne samo znati, već i provjeriti krvnu grupu biološkog oca djeteta tijekom trudnoće.

Podaci

• prvi put predložen u Cambridgeu 1945
• prag osjetljivosti - najmanje 300 fiksiranih molekula antitijela na jednom crvenom krvnom zrncu
• broj antitijela koja pokreću hemolizu - pojedinačno za svaku osobu (od 16-30 do 300)
• dinamika ostalih laboratorijskih pokazatelja hemolitičke anemije (hemoglobin, bilirubin, retikulociti) može se normalizirati, a Coombsov test će ostati na istoj razini

Coombsov test zadnji put je modificirao: 16. ožujka 2018 Marija Bodjan

Coombs, Morant, Reis 1945. predložili su antiglobulinski test, osmišljen za otkrivanje nepotpunih antieritrocitnih protutijela, koji je kasnije nazvan Coombsov test. Suština ovu metodu je da antiglobulinski serum koji sadrži antitijela na humane imunoglobuline, kada reagira s crvenim krvnim stanicama senzibiliziranim nepotpunim antitijelima, dovodi do njihove aglutinacije.

Ovisno o tome jesu li protutijela fiksirana na površini crvenih krvnih stanica ili su u slobodnom stanju u krvnoj plazmi, koristi se izravni ili neizravni Coombsov test.

Izravni Coombsov test provodi se u slučajevima kada postoji razlog za pretpostavku da su crvene krvne stanice koje se proučavaju već jesu in vivo su senzibilizirani odgovarajućim antitijelima, tj. prva faza reakcije - fiksacija protutijela na površini crvenih krvnih stanica - dogodila se u tijelu, a naknadni dodatak antiglobulinskog seruma uzrokuje aglutinaciju senzibiliziranih stanica.

Pomoću neizravnog Coombsovog testa otkrivaju se nepotpuna antitijela prisutna u testnom serumu. U ovom slučaju reakcija se odvija u dvije faze. Prva faza je inkubacija ispitivanih eritrocita s ispitivanim serumom, tijekom koje se antitijela sadržana u uzorku ispitivanog seruma fiksiraju na površini eritrocita. Drugi korak je dodavanje antiglobulinskog seruma.

Do sada se Coombsov test naširoko koristi u laboratorijskoj praksi za dijagnosticiranje imunopatoloških stanja, osobito kod autoimune hemolitičke anemije, koju karakterizira uništavanje crvenih krvnih stanica zbog vezanja stanične membrane na protutijela i (ili) komponente sustav komplementa. Koristi se za otkrivanje prisutnosti Ig G na membrani eritrocita (obično Ig G1 i Ig G3), koji mogu aktivirati komplement, a ponekad i komplement (C3d). Međutim, u akutnom razdoblju bolesti, zbog razaranja crvenih krvnih stanica na kojima se nalazi veliki broj protutijela, s hemolitičkom krizom, kao i s nedovoljnom količinom protutijela tijekom kroničnog tijeka bolesti, može se primijetiti negativan direktni Coombsov test.

Mora se naglasiti da neizravni Coombsov test ostaje najbolja metoda individualni odabir medija za transfuziju, jer vam omogućuje da najtočnije odredite individualnu kompatibilnost davatelja i primatelja antigenima eritrocita.

Dodatni izravni antiglobulinski test na prisutnost autoantitijela preporučuje se kod pregleda svih primatelja organa i tkiva u predtransplantacijskom razdoblju te primatelja krvotvornih matičnih stanica i nakon transplantacije.

Osim u imunohematologiji i transfuziologiji, antiglobulinski testovi imaju široku primjenu u dijagnostici brojnih patoloških stanja: hematoloških bolesti, uključujući limfoproliferativne bolesti, sistemske bolesti vezivno tkivo, Sjogrenova bolest, kronični aktivni hepatitis itd.

Coombsovi testovi aktivno se koriste u medicinskoj genetici i forenzičkoj medicini za određivanje površinskih antigena eritrocita.

Coombsov test je prilično radno intenzivna metoda istraživanja koja zahtijeva posebnu pažnju u njegovoj provedbi. Kada se koristi, postoje neke poteškoće povezane, osobito s tumačenjem slabo pozitivnih reakcija. Poznato je da lažne slabo pozitivne ili negativne reakcije pri provođenju Coombsovih testova mogu biti posljedica nedovoljno učinkovitog pranja crvenih krvnih stanica, neutralizacije antiglobulinskog reagensa tragovima seruma, kao i kontakta s nemasnom površinom na kojoj se nalazi antiglobulin. može se popraviti, čime gubi svoju aktivnost. Još jedan nedostatak Coombsovog testa je nestabilnost antiglobulinskog reagensa, čija priprema i skladištenje ima određene značajke, što također otežava kvantifikaciju reakcije hemaglutinacije s antiglobulinskim serumom.

Osim toga, studije koje su proveli A. Holburn, D. Voak i sur. , pokazalo je da uzrok lažno negativnih rezultata može biti pretjerano mućkanje prilikom resuspendiranja suspenzije crvenih krvnih stanica. Pogrešni rezultati pri izvođenju antiglobulinskih testova također mogu biti uzrokovani prisutnošću u antiglobulinskom reagensu mješavine anti-komplementarnih protutijela, posebno na komponente komplementa C3d-, C3c-, C4c- i C4d-, koja su adsorbirana na površini testirati crvena krvna zrnca tijekom inkubacije i stvoriti privid pozitivnog rezultata.

Ovi se nedostaci mogu lako otkloniti temeljitim pranjem uzoraka koji se proučavaju i praćenjem uvjeta reakcije.

U posljednjem desetljeću korištena je izotonična fiziološka otopina niske ionske jakosti (LISS) kako bi se smanjilo vrijeme potrebno za izvođenje neizravnog Coombsovog testa i povećala njegova osjetljivost.

Neosporna prednost antiglobulinskih testova, prema brojnim autorima, je njihova visoka osjetljivost, koja znatno premašuje njihovu rezoluciju. alternativne metode testovi koji se koriste za otkrivanje neaglutinirajućih protutijela.

Usporedili smo rezoluciju metoda za ispitivanje krvnih seruma na prisutnost nepotpunih protutijela pomoću poliglucina, želatine i antiglobulinskog seruma. Tijekom istraživanja titri nepotpunih anti-D protutijela praćeni su u 140 uzoraka krvnog seruma izoimunih darivatelja pomoću želatinskih, poliglucinskih i indirektnih antiglobulinskih testova. Formulacija ovih metoda provedena je u skladu s općeprihvaćenim metodama.

Utvrđeno je da su metode za otkrivanje senzibilizacije eritrocita anti-D protutijelima po rezoluciji raspoređene na sljedeći način: najosjetljiviji je neizravni Coombsov test, zatim želatinski test, a najmanje informativan je poliglucinski test. Rezultati dobiveni ovom serijom eksperimenata u potpunosti odgovaraju literaturnim podacima, što nam omogućuje zaključak da visoka razina osjetljivost Coombsovih testova, što omogućuje s visokim stupnjem sigurnosti identificirati prisutnost anti-eritrocitnih protutijela u tijelu koja ne uzrokuju aglutinaciju crvenih krvnih stanica.

Međutim, pri provođenju Coombsovih testova u praksi ima slučajeva da se nekompletna antitijela ne detektiraju, iako klinička slika bolesti ili prethodna imunizacija upućuju na njihovu moguću prisutnost. U takvim slučajevima može se pretpostaviti da je količina antitijela nedovoljna da bi se taložila antitijelima antiglobulinskog seruma.

Ovaj zaključak potvrdili smo i vlastitim pokusom u kojem je metodom analitičke mikroelektroforeze stanica utvrđena prisutnost anti-D protutijela na ispitivanim eritrocitima koja nisu bila detektirana indirektnim Coombsovim testom. U ovoj seriji eksperimenata, antiglobulinski serum dodan je eritrocitima prethodno inkubiranim sa serumima dobivenim iz krvi imuniziranih darivatelja tijekom razdoblja antitijeloogeneze u tijeku, tj. tijekom razdoblja kada antitijela u njima nisu otkrivena poznatim metodama, uključujući Coombsov test.

U provedenim studijama dani su statistički dokazi o prisutnosti nepotpunih protutijela na površini crvenih krvnih stanica. značajna promjena veličina elektroforetske pokretljivosti senzibiliziranih crvenih krvnih stanica nakon dodatka antiglobulinskog seruma. Treba napomenuti da su anti-D antitijela naknadno određena kod svih imuniziranih darivatelja indirektnim Coombsovim testom u krvnom serumu.

Gillerand i sur. također je pokazalo da su antiglobulinski testovi karakterizirani određenim pragom osjetljivosti: pozitivan rezultat se bilježi samo kada je najmanje 500 molekula Ig G zabilježeno na površini jedne crvene krvne stanice.

Osim toga, literatura pruža dokaze da mogući negativni rezultat Coombsovog testa može biti povezan s niskim afinitetom protutijela koja senzibiliziraju crvena krvna zrnca, zbog čega se lako eluiraju s površine crvenih krvnih zrnaca tijekom procesa pranja. .

Uzimajući u obzir gore navedeno, možemo zaključiti da u nekim slučajevima negativan rezultat Coombsovog testa još nije dokaz odsutnosti protutijela fiksiranih na površini crvenih krvnih stanica.

Poznato je da su Coombsove reakcije vrlo specifične i mogu detektirati većinu vrsta nepotpunih protutijela. Međutim, kako pokazuju neki eksperimentalni podaci, antiglobulinski testovi mogu biti pozitivni i u neimunološkim stanjima. E. Muirhead i sur. drugi dan nakon davanja fenilhidrazina psima uočen je pozitivan Coombsov test. Takva brza pojava pozitivne reakcije argumentira njezinu imunološku prirodu i, prije, povezana je s nespecifičnom adsorpcijom proteina na površini eritrocita.

M. Williams i sur. otkrili su da klavulanska kiselina također može izazvati pozitivnu reakciju, koja je, prema autorima, povezana s nespecifičnom adsorpcijom proteina plazme na površini eritrocita. Sličan učinak primijećen je tijekom liječenja cefalosporinskim antibioticima.

Autori gore navedenih studija naglašavaju neimunološki karakter pozitivnih rezultata Coombsovih testova i inzistiraju na tome da su te tvari sposobne izazvati modifikaciju membrana crvenih krvnih stanica, zbog čega crvene krvne stanice mogu adsorbirati proteine ​​(osobito, albumin) koji su normalno prisutni u krvnoj plazmi i nemaju svojstva antitijela. Osim toga, moguće je da ksenobiotik, adsorbiran na površini stanice, služi kao veza između stanične membrane i proteina plazme.

Za ispravno tumačenje rezultata antiglobulinskih testova treba uzeti u obzir i kvantitativni omjer između mladih i zrelih crvenih krvnih stanica u perifernoj krvi. Utvrđeno je da se retikulociti izolirani iz tijela u razdoblju pojačane regeneracije eritrona mogu aglutinirati antiglobulinskim serumom.

Pozitivan rezultat izravnog antiglobulinskog testa javlja se s različitim patološka stanja, praćen poremećajima imunološkog sustava, upalnim procesima koji dovode do nespecifične adsorpcije antitijela različitih specifičnosti na membranama eritrocita. To sugerira da molekule Ig G ne stupaju u interakciju sa specifičnim antigenima eritrocita, već su samo fiksirane na površini stanica koje se proučavaju.

Treba uzeti u obzir da je kod izvođenja Coombsovog testa u slučajevima bolesti karakteriziranih razvojem disproteinemije ili pojavom paraproteina, pozitivan rezultat rezultat prisutnosti proteina na površini eritrocita koji nemaju svojstva antitijela, što također ukazuje na nedostatak specifičnosti antiglobulinskih testova s ​​obzirom na prirodu proteina otkrivenog uz njihovu pomoć.

Stoga, kako su pokazala brojna istraživanja, pozitivni rezultati izravnih i neizravnih antiglobulinskih testova nisu apsolutni dokaz prisutnosti protutijela, jer pozitivne reakcije također se može promatrati u različitim patološkim stanjima koja nisu povezana s izosenzibilizacijom ili autosenzibilizacijom tijela. Stoga je samo usporedba rezultata nekoliko imunoseroloških metoda s klinička slika bolesti omogućuje potpunu procjenu razvoja patološkog procesa.

Pozitivan neizravni antiglobulinski test s negativnim izravnim testom obično ukazuje na prisutnost slobodnih aloantitijela u ispitivanom serumu, povezanih s prethodnim transfuzijama krvi ili trudnoćama.

Coombsov test je često pozitivan tijekom egzacerbacije paroksizmalne noćne hemoglobinurije; pozitivan Coombsov test s anti-C3 i anti-C3dg je marker bolesti hladnog aglutinina.

U slučajevima kada postoji visok rizik od razvoja hemolitičke bolesti novorođenčeta, veliki značaj Za postavljanje dijagnoze (najčešće u trudnoći) i po potrebi dinamičko praćenje pojave i promjene titra protutijela raspolažu rezultatima izravnih i neizravnih antiglobulinskih testova. Najčešće je hemolitička bolest novorođenčadi povezana s nekompatibilnošću majke i fetusa za antigen D, rjeđe za antigene ABO sustava, a još rjeđe za druge antigene (C, c, K itd.). Antitijela nastala tijekom ovog procesa La, budući da su u pravilu nepotpuna antitijela Ig G klase, jasno se otkrivaju u neizravnom antiglobulinskom testu. Kod ove bolesti od velike je važnosti ispravno utvrđen titar i specifičnost identificiranih protutijela, budući da postoji određena korelacija između razine antieritrocitnih protutijela u krvi trudnice i moguća prognoza ozbiljnost hemolitičke bolesti.

Neizravni Coombsov test također je neophodan u klinička praksa kako bi se osigurala sigurna transfuzijska terapija. Njegova provedba obvezna je komponenta imunohematoloških studija davatelja i različitih kategorija primatelja, kao i rutinskih pregleda svih pacijenata u zdravstvenim ustanovama kojima može biti potrebna transfuzija krvi i njezinih komponenti.

Indirektni antiglobulinski test se koristi u sljedećim slučajevima:

Za točnije određivanje Rh pripadnosti (antigen D) u slučaju nejasnih rezultata određivanja Rh faktora drugim metodama (poliglukin, želatina i dr.);

Identificirati slabe antigene eritrocita (sustavi Kell, Duffy, Kidd, Lewis itd.) i antitijela na te antigene;

Za detekciju i identifikaciju aloimunih antieritrocitnih protutijela, uključujući protutijela koja uzrokuju hemolitičke posttransfuzijske reakcije;

Odrediti prisutnost imunoloških protutijela AB0 sustava tijekom transfuzijskih hemolitičkih komplikacija;

Kao test kompatibilnosti za individualni odabir transfuzirane krvi i njezinih komponenti.

Stoga je Coombsov test važna dijagnostička pretraga koja se koristi u raznim područjima medicine (hematologija, opstetricija, reumatologija, transfuziologija, klinička i laboratorijska dijagnostika itd.). Poznavanje osobitosti izvođenja Coombsovog testa pomoći će povećati pouzdanost dobivenih rezultata i pridonijet će ispravnom tumačenju laboratorijskih podataka.

Književnost

1. Antitijela. Metode / ur. D. Katie. - M.: Mir, 1991.

2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadžijev A.B.. // Transfuzijska terapija anemije: udžbenik. priručnik za liječnike. - M.: Prakt. Medicina, 2005. - Str. 105-106.

3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfuziologija. - 2006. - br. 2. — Str. 39—62.

4. Donskov S.I.// Krvne grupe Rhesus sustava: teorija i praksa. - M.: VINITI RAS, 2005. - P. 180-186, 195.

5.Imunoserologija (regulatorni dokumenti) / komp. A.G. Bashlay, S.I. Donskov. - M.: VINITI RAS, 1998.

6.Proučavanje krvnog sustava u kliničkoj praksi / ur. G.I. Kozinets, V.A. Makarova. - M.: Triada-X, 1997.

7. Levin V.I. O mehanizmu eritrodijereze i eritropoeze tijekom akutnog posthemoragijska anemija: autorski sažetak. dis. ...kand. med. Sci. - Minsk, 1968.

8. Ragimov A.A., Bayramalibeyli I.E.. // Osnove dijagnostike, prevencije i liječenja anemije. - M.: GOU VUNMC MH RF, 2002. - P. 204-209.

9. Chumakova E.D.. // Stvarni problemi hematologija i transfuziologija: zbornik radova VI kongresa hematologa i transfuziologa Republike Bjelorusije, Minsk, 24.-25. svibnja 2007. / ur. A.I. Svirnovsky, M.P. Potapneva. - Minsk: Republički znanstveni i praktični centar za hematologiju i transfuziologiju, 2007. - S. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lancet. - 1945. - God. 2. - 15. str.

11. Freedman J. // J. Clin. Pathol. - 1979. - Vol. 32. - Str. 1014-1018.

12. Holburn A.M.. Kontrola kvalitete. Metode u hematologiji/ur. I. Cavill. - Edinburgh: Churchill Livingstone, 1982. - Sv. 4. - Str. 34-50.

13. Khan S.// CMAJ. - 2006. - Vol. 175, N 8. - Str. 919.

14. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (dodatak 7). - Str. 719-721.

15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Vol. 63 (dodatak 7). - Str. 716-718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// Novi engl. J. Med. —1976. - Vol. 277. - Str. 123-125.

17. Muirhead E.E., GrovesM., Brian S. // J. Lab. Clin. Med. —1954. - Vol. 44. - Str. 902-903.

18. Rosse W.F.//Hosp. Prac. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., MooreB. et al. //Biotestovi Bull. - 1986. - Vol. 1. - Str. 41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. et al. Strojevi za pranje stanica za antiglobulinske testove. Ponovljeno testiranje - nova metoda koja pokazuje neučinkovitost jednog naširoko korištenog stroja - Sorvall CW1-AF2: izvješće Tehničkom ogranku DHSS-a, veljača 1991.

21. Williams M.E., Thomas D., Harman C.P.. et al. //Antimikrobna sredstva i kemoterapija. —1985. - Str. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H.. // CMAJ. - 2006. - Vol. 174, N 3. - Str. 305-307.

Medicinske vijesti. - 2008. - br. 3. - str. 33-36.

Pažnja! Članak je namijenjen medicinskim stručnjacima. Ponovno ispisivanje ovog članka ili njegovih fragmenata na internetu bez hiperveze na izvor smatra se kršenjem autorskih prava.

- studija koja pomaže u određivanju sadržaja nepotpunih anti-eritrocitnih protutijela u krvi. Ovaj antiglobulinski test omogućuje otkrivanje antitijela na kod trudnica.

Osim toga, omogućuje vam da početne faze dijagnosticirati hemolitičku anemiju u novorođenčadi s Rh konfliktom. To pomaže spriječiti uništavanje crvenih krvnih stanica potrebnih za normalno stvaranje krvi. Ovaj test osmislio je 1945. godine Robert Coombs, po čemu je i dobio ime.

Coombsov test je višenamjenski test koji omogućuje pravovremeno dijagnosticiranje hematopoetskih poremećaja kod odraslih i djece.

Postoje sljedeće vrste takvih testova:

1. Izravni Coombsov test– omogućuje vam određivanje protutijela koja se nalaze na površini crvenih krvnih stanica. Obično je takva studija propisana za sumnju na hemolizu, autoimunu hemolitičku anemiju ili druge autoimune bolesti. Osim toga, provodi se nakon terapija lijekovima lijekovi na bazi kinina, penicilina ili metildope ili nakon transfuzije krvi. Da biste dobili točnije rezultate, morate potpuno prestati uzimati lijekove najmanje 1 tjedan prije studije.
2. Indirektni Coombsov test– test koji se može koristiti za otkrivanje antieritrocitnih protutijela u plazmi. Obično se izvodi tijekom trudnoće i prije transfuzije krvi. Antieritrocitna protutijela pojavljuju se u krvi osobe tijekom reaktivnog imunološkog sustava ili kao reakcija na određene lijekove. Za točniju studiju provodi se nekoliko uzorkovanja odjednom u razmaku od 2 sata.

Indikacije za upotrebu

Coombsov test se izvodi samo ako postoje ozbiljne indikacije. Riječ je o skupoj i dugotrajnoj studiji koja je specifičan test.

Obično se sljedeće situacije smatraju indikacijama za njegovu provedbu:

1. Tijekom transfuzije krvi. Test vam omogućuje da utvrdite hoće li se krv primatelja ukorijeniti u ljudskom tijelu, kao i da li je donacija moguća. U ovom slučaju potrebno je ispitati materijal i od davatelja i od primatelja. Važno je odrediti prirodu protutijela, jer ako su nekompatibilna u tijelu na pozadini Rh sukoba, imunološki sustav. To dovodi do razvoja ozbiljne bolesti, i u u rijetkim slučajevimačak i smrt.
2. Prije kirurške intervencije kada postoji opasnost od gubitka krvi. To se radi kako bi liječnik mogao odmah uvesti prikladnu krv za obnavljanje tijela.
3. Za otkrivanje Rh senzibilizacije. Rhesus je specifičan antigen koji se pojavljuje u tijelu svake žene tijekom trudnoće. Ako majka ima pozitivan Rh, a otac negativan, ili obrnuto, za dijete nema ovisnosti - može naslijediti bilo koga. Ako dijete dobije suprotni rezus od majke, postoji visok rizik od senzibilizacije. Ovu pojavu karakterizira miješanje krvi majke i djeteta. To se može dogoditi i tijekom trudnoće i tijekom poroda.

Ako dođe do Rhesus sukoba u tijelu trudne žene, imunološki sustav majke počinje percipirati njezin fetus kao strano tijelo. Zbog toga postoji veliki rizik da će ga početi napadati.

Kao rezultat takvih radnji, beba može razviti ozbiljne patologije. Najčešće se javlja eritroblastoza - pojava u kojoj djetetovo tijelo ne može proizvesti dovoljno crvenih krvnih stanica.

Osim toga, zbog Rh sukoba, fetalna smrt može nastupiti u maternici ili odmah nakon rođenja. Pravilnim pristupom liječenju takve se ozbiljne posljedice lako mogu izbjeći.

Odstupanja od norme

Na pozitivan rezultat Na temelju Coombsove reakcije liječnik zaključuje da u krvnom serumu postoje antitijela na crvena krvna zrnca. To znači da krv davatelja možda nije kompatibilna s krvlju pacijenta.

Ako se u tijelu trudnice s Rh-negativnom krvlju dijagnosticira pozitivan rezultat, tada njezino tijelo sadrži antitijela na krv fetusa.

To ukazuje na Rh sukob, koji zahtijeva izuzetno pažljiv pristup liječničkom vođenju trudnoće, kao i poštivanje svih uputa i preporuka žene.

Ako su antitijela prisutna u krvi djeteta, dijagnosticira se hemolitička bolest novorođenčeta. U tom se slučaju provodi ponovljena studija kako bi se utvrdilo dolazi li do povećanja razine antitijela u krvi buduće majke ili ne.

Moguće komplikacije Coombsovog testa

Coombsov test je prilično siguran test koji omogućuje dijagnosticiranje niza autoimune bolesti. Obično rijetko uzrokuje komplikacije negativne posljedice povezan s uzorkovanjem krvi.

Oni su:

• Krvarenje ili krvarenja ispod kože
• Vrtoglavica i nesvjestica
• Zarazna infekcija

7 295

– antiglobulinski test čiji je cilj identificirati u Rh-negativnoj krvi nepotpuna anti-eritrocitna protutijela na Rh faktor - specifični protein koji se nalazi na površini eritrocita Rh-pozitivne krvi. Postoje dvije vrste ovog testa: izravni - otkrivanje protutijela na površini crvenih krvnih stanica, neizravni - otkrivanje protutijela u krvnom serumu. Izravna ispitivanja provode se u dijagnostici i praćenju liječenja bolesti krvi: hemolitička anemija, hemolitička bolest novorođenčadi i dr. Provodi se neizravni test za procjenu kompatibilnosti krvi davatelja i primatelja tijekom transfuzije, kao i za određivanje prisutnosti i rizika od Rh sukoba pri planiranju i vođenju trudnoće. Materijal za Coombsov test je venska krv, studija se provodi metodama koje se temelje na reakciji aglutinacije. Obično oba testa daju negativan rezultat. Analiza je gotova u roku od jednog dana.

Coombsov test – Kliničko ispitivanje Rh-negativna krv, usmjerena na otkrivanje antitijela na Rh faktor. Test se koristi za prepoznavanje rizika od razvoja Rh konflikta i hemolitičkih reakcija. U svakoj osobi površina crvenih krvnih stanica sadrži određeni skup antigena ili aglutinogena - spojeva različite prirode, čija se prisutnost ili odsutnost koristi za određivanje krvne grupe i Rh faktora. Postoje mnoge vrste antigena, uključujući medicinska praksa Najveću praktičnu važnost imaju aglutinogeni A i B, koji određuju krvnu grupu, te aglutinogen D, Rh faktor. S pozitivnim Rh faktorom, D antigeni se otkrivaju na vanjskoj membrani eritrocita, ali s negativnim faktorom, nisu.

Coombsov test, koji se naziva i antiglobulinski test, ima za cilj otkrivanje nepotpunih antieritrocitnih antitijela na sustav Rh faktora u krvi. Protutijela na Rh faktor su specifični imunoglobulini koji se stvaraju u Rh negativnoj krvi kada u nju uđu crvene krvne stanice s aglutinogenima D. To se može dogoditi kada se miješa krv fetusa i trudnice, tijekom transfuzije krvi bez prethodne krvi tipkanje. Coombsov test postoji u dvije verzije - izravnoj i neizravnoj. Radeći izravni test Coombs otkriva antitijela pričvršćena na površinu crvenih krvnih stanica. Studija se koristi za određivanje uzroka hemolitičke reakcije. Indirektni Coombsov test je usmjeren na otkrivanje antieritrocitnih protutijela u krvnoj plazmi. Neophodno je utvrditi kompatibilnost krvi između davatelja i primatelja ili majke i fetusa, a pomaže u sprječavanju razvoja Rh konflikta i naknadne hemolize crvenih krvnih stanica.

Krv za obje verzije Coombsovog testa uzima se iz vene. Analiza se provodi aglutinacijom pomoću antiglobulinskog seruma. Rezultati studije koriste se u hematologiji za utvrđivanje uzroka hemolitičkih reakcija, u kirurgiji i reanimaciji pri provođenju transfuzije krvi, u opstetriciji i ginekologiji pri praćenju trudnoće kod žena s Rh-negativnom krvlju.

Indikacije

Izravni Coombsov test, koji otkriva antitijela pričvršćena na površinu crvenih krvnih stanica, propisan je za hemolitičke reakcije (uništavanje crvenih krvnih stanica) različitog podrijetla. Studija je indicirana za primarnu autoimunu hemolitičku anemiju, posttransfuzijsku hemolitičku anemiju, hemolitičku bolest novorođenčadi, hemolizu eritrocita uzrokovanu autoimunim, tumorskim ili zarazne bolesti, kao i recepcija lijekovi, na primjer, kinidin, metildopa, prokainamid. Neizravni Coombsov test, koji određuje antitijela u krvnoj plazmi, koristi se za sprječavanje razvoja Rh sukoba. Indiciran je za pacijente koji se pripremaju za transfuziju krvi, kao i za trudnice s negativnim Rh faktorom, pod uvjetom da budući otac djeteta ima pozitivan Rh faktor.

Za određivanje Rh kompatibilnosti, Coombsov test nije propisan pacijentima s Rh pozitivnom krvlju. U tim slučajevima na površini crvenih krvnih zrnaca već postoje antigeni, stvaranje protutijela ne može se potaknuti transfuzijom krvi ili ulaskom fetalne krvi u krvotok trudnice. Također, studija nije indicirana za trudnice ako oba roditelja imaju negativan Rh faktor - nasljednu recesivnu osobinu. Dijete u takvim parovima uvijek ima Rh-negativnu krv, imunološki sukob s majkom je nemoguć. U hemolitičkim patologijama, antiglobulinski test se ne koristi za praćenje uspješnosti terapije, budući da rezultati ne odražavaju aktivnost procesa uništavanja crvenih krvnih stanica.

Ograničenje Coombsovog testa je zahtjevnost postupka istraživanja - za dobivanje pouzdanih rezultata potrebno je pridržavati se temperaturnih i vremenskih uvjeta, pravila za pripremu reagensa i biomaterijala. Prednosti Coombsovog testa uključuju njegovu visoku osjetljivost. Kod hemolitičke anemije, rezultati ovog testa ostaju pozitivni, čak i ako su razine hemoglobina, bilirubina i retikulocita normalizirane.

Priprema za analizu i prikupljanje materijala

Materijal koji se koristi za izvođenje Coombsovog testa je venska krv. Ne postoje posebni zahtjevi za vrijeme postupka vađenja krvi i za pripremu pacijenta. Kao i kod svake studije, preporuča se napraviti pauzu nakon jela od najmanje 4 sata i prestati pušiti u zadnjih 30 minuta. tjelesna aktivnost, Izbjegavajte emocionalni stres. Također je vrijedno unaprijed razgovarati sa svojim liječnikom o potrebi prestanka uzimanja lijekova - neki lijekovi mogu iskriviti rezultate Coombsovog testa. Krv se uzima štrcaljkom iz kubitalne vene, rjeđe iz vene na nadlanici. U roku od nekoliko sati materijal se isporučuje u laboratorij.

Kod izvođenja izravnog Coombsovog testa serumu krvi bolesnika dodaje se antiglobulinski serum. Nakon nekog vremena, smjesa se ispituje na prisutnost aglutinata - oni nastaju ako postoje antitijela na crvenim krvnim stanicama. Ako je nalaz pozitivan, određuje se aglutinacijski titar. Indirektni Coombsov test sastoji se od više koraka. Najprije se antitijela prisutna u serumu fiksiraju na ubrizgane crvene krvne stanice tijekom inkubacije. Zatim se u uzorak dodaje antiglobulinski serum, nakon nekog vremena utvrđuje se prisutnost i titar aglutinata. Period analize je 1 dan.

Normalni rezultati

Normalno, rezultat izravnog Coombsovog testa je negativan (-). To znači da u krvi nema protutijela povezanih s crvenim krvnim zrncima i ona ne mogu izazvati hemolizu. Normalan rezultat Indirektni Coombsov test također je negativan (-), odnosno u krvnoj plazmi nema antitijela na Rh faktor. Kada se priprema za transfuziju krvi za primatelja, to znači kompatibilnost s krvlju davatelja; kada se prati trudnoća, to znači odsutnost Rh senzibilizacije majke, nizak rizik od razvoja imunološkog sukoba. Fiziološki čimbenici, poput prehrane ili tjelesne aktivnosti, ne mogu utjecati na rezultat testa. Stoga, ako je rezultat pozitivan, potrebna je konzultacija liječnika.

Dijagnostička vrijednost analize

Pozitivan rezultat Coombsovog testa izražava se kvalitativno, od (+) do (++++), ili kvantitativno, titrima od 1:16 do 1:256. Određivanje koncentracije protutijela na crvenim krvnim stanicama iu krvnom serumu provodi se u obje vrste uzoraka. Ako je izravni Coombsov test pozitivan, otkrivaju se antitijela na vanjskoj membrani crvenih krvnih stanica, koja dovode do uništenja tih krvnih stanica. Uzrok može biti transfuzija krvi bez prethodne tipizacije - posttransfuzijska hemolitička reakcija, kao i eritroblastoza novorođenčeta, hemolitička reakcija zbog primjene lijekova, primarna ili sekundarna autoimuna hemolitička anemija. Sekundarna destrukcija crvenih krvnih stanica može biti uzrokovana sistemskim eritemskim lupusom, Evansovim sindromom, Waldenströmovom makroglobulinemijom, paroksizmalnom hladnom hemoglobinurijom, kroničnom limfocitnom leukemijom, limfomom, infektivnom mononukleozom, sifilisom, mikoplazmom pneumonije.

Pozitivan rezultat neizravnog Coombsovog testa ukazuje na prisutnost antitijela na Rh faktor u plazmi. U praksi to znači da je došlo do Rh senzibilizacije i postoji mogućnost razvoja Rh konflikta nakon infuzije krvi davatelja tijekom trudnoće. Radi sprječavanja komplikacija u trudnoći, žene s pozitivnim rezultatom Coombsovog testa stavljaju se u poseban registar.

Liječenje abnormalnosti

Coombsov test odnosi se na izoserološke studije. Njegovi rezultati omogućuju prepoznavanje hemolitičke reakcije, kao i određivanje kompatibilnosti krvi davatelja i primatelja, majke i fetusa, kako bi se spriječio razvoj Rh sukoba. Ako je rezultat testa pozitivan, trebate potražiti savjet od svog liječnika - opstetričar-ginekologa, hematologa, kirurga.

Odobreno naredbom Roszdravnadzora

o korištenju "Seta reagensa za određivanje antigena i protutijela Rhesus sustava u ljudskoj krvi"
(AGS za Coombs test)

TU 9398-102-51203590-2012

RU br. RZN 2013/1255 od 11.10.2013.

I. UVOD

Standardni serum za Coombsov test sadrži specifična heteroimuna protutijela na proteine ​​ljudske krvi i namijenjen je za primjenu u dvije opcije reakcije - izravnom i neizravnom Coombsovom testu.

Izravni Coombsov test koristi se za određivanje senzibilizacije eritrocita in vivo kod hemolitičke bolesti novorođenčadi i kod bolesnika s autoimunim oblikom kronične hemolitičke anemije, kao i kod nekih drugih stanja. Provođenje izravnog Coombsovog testa sastoji se u činjenici da se serum za Coombsov test dodaje crvenim krvnim stanicama koje se proučavaju, prethodno ispranim od proteina vlastite plazme. Ako su crvena krvna zrnca senzibilizirana in vivo, reakcija rezultira njihovom aglutinacijom.

Indirektni Coombsov test koristi se kao test za identifikaciju stanja osjetljivosti tijela, omogućujući otkrivanje antitijela koja su u slobodnom stanju u krvnom serumu osobe koja se testira; kao test kompatibilnosti transfuzirane krvi, kada se proučava učinak seruma primatelja na crvene krvne stanice namjeravanog davatelja; i kao test za određivanje različitih skupina antigena u eritrocitima korištenjem preliminarne izloženosti standardnim serumima koji sadrže protutijela poznate specifičnosti. Indirektni Coombsov test (sve opcije) proizvedeno u dvije faze, od kojih je prva inkubacija ispitnog (ili standardnog) seruma sa standardnim (ili testnim) eritrocitima, tj. senzibilizacija eritrocita in vitro. Druga faza je stvarna reakcija sa serumom za Coombsov test, koji se izvodi na isti način kao i direktni Coombsov test.

Konačni rezultat reakcije u izravnim i neizravnim Coombsovim testovima nastaje zbog interakcije standardni serum za Coombsov test, s antitijelima (protein ljudske krvi) fiksiranim na crvena krvna zrnca. Ovaj se rezultat očituje kao aglutinacija crvenih krvnih stanica. Za promatranje aglutinacije treba koristiti bijelu porculansku ili bilo koju bijelu pločicu s površinom koja se moči kako bi se nanesene kapi dobro pomiješale i ne bi se raširile po površini pločice. Izmiješane kapi treba lagano rasporediti po tanjuru, otprilike do veličine novčića od 2 kopejke.
II. PRIPREMA REAKCIJSKIH SASTOJKA

Testni serum za određivanje prisutnosti i specifičnosti protutijela u njemu dobiva se iz krvi osobe koja se ispituje bez dodavanja konzervansa. Čuvati na temperaturi od + 4–8 0 C ne više od 2 dana ili zamrznuti 1 mjesec.

Serum za ispitivanje kompatibilnosti dobiva se na isti način, ali se koristi s rokom trajanja ne duljim od 2 dana.

Crvena krvna zrnca namijenjena određivanju određenih izoantigena u njima pripremaju se nekom vrstom konzervansa od osobe čija se krv ispituje. Također možete koristiti sediment crvenih krvnih stanica iz krvi uzete bez konzervansa.

Prilikom testiranja kompatibilnosti koristi se krv davatelja, izvučena kroz iglu iz bočice pripremljene za transfuziju.

U svim slučajevima, crvene krvne stanice se 3-4 puta isperu u epruvetama od plazme dodavanjem 8-10 volumena izotonične otopine natrijevog klorida na jedan volumen crvenih krvnih stanica, nakon čega slijedi miješanje i centrifugiranje na 1500-2000 okretaja u minuti tijekom 5- 10 minuta (do potpune sedimentacije eritrocita). Nakon svakog centrifugiranja, supernatant se usisava.
III. REAKCIJSKE TEHNIKE

Ispitni eritrociti pripremaju se u obliku 5% suspenzije, za što se jedna kap četiri puta ispranih eritrocita pomiješa u epruveti s 19 kapi izotonične otopine natrijeva klorida.

Jedna kap (0,05 ml) 5%-tne suspenzije crvenih krvnih stanica prenese se na bijelu ploču i razmaže. Ploča se protrese i promatra 3 minute da se vidi je li došlo do aglutinacije crvenih krvnih stanica. Ako nije došlo do aglutinacije, dodajte 1-2 kapi standardnog seruma za Coombsov test, dobro promiješajte kapi, zatim lagano protresite pločicu, zatim je ostavite jednu ili dvije minute i ponovno protresite. Istodobno, rezultat se prati 10 minuta, što se izražava u prisutnosti ili odsutnosti aglutinacije.
Tumačenje rezultata izravnog Coombsovog testa.

Nema aglutinacije – negativan test

Prisutnost aglutinacije – pozitivan test, koji ukazuje na senzibilizaciju crvenih krvnih zrnaca koja se testiraju, odnosno apsorpciju antitijela na njima, koja se dogodila in vivo u ljudskom tijelu (novorođenče, pacijent). Ako aglutinacija ispitivanih crvenih krvnih stanica dogodilo prije dodavanja serum za Coombsov test; rezultat izravnog testa se ne uzima u obzir.
2. Indirektni Coombsov test

Namijenjen za dokazivanje izoantitijela u krvnom serumu ispitivane osobe

Koristi se u slučajevima kada je potrebno utvrditi sadrži li krv bolesnika, trudnice, darivatelja i sl. izoimuna protutijela nepotpunog oblika i utvrditi njihovu specifičnost. Za reakciju se koristi krvni serum osobe koja se ispituje i standardne crvene krvne stanice poznate specifičnosti. Među ovih 8-10 ili više uzoraka crvenih krvnih stanica trebale bi postojati razlike u faktorima iz drugih sustava i vrlo je važno da svaki od ovih faktora bude sadržan u barem jednom uzorku crvenih krvnih stanica. Panel uključuje i uzorke Rh-negativnih eritrocita s različitim kombinacijama antigena drugih sustava, tako da među njima ima Duffy-pozitivnih i Duffy-negativnih, koji bi se pak dijelili na Kell-pozitivne i Kell-negativne, Kidd-pozitivan i Kidd-negativan itd. Kao negativna kontrola, ako je moguće, u reakciju se uključuju eritrociti osobe čiji se serum ispituje.

Tehnika reakcije

U stalak se postavlja određeni broj centrifugalnih ili drugih epruveta volumena 3-10 ml, prema broju uzoraka eritrocita uključenih u reakciju. Epruvete se obilježe i prema etiketi se u njih doda 1 mala kap (0,01 ml) ispranih standardnih crvenih krvnih zrnaca. U svaku epruvetu nakapaju se tri kapi ispitnog seruma, epruvete se snažno protresu kako bi se crvene krvne stanice pomiješale sa serumom i stave u termostat na 37 0 C na 45 minuta. Nakon inkubacije, epruvete se izvade iz termostata, a crvene krvne stanice se isperu dodavanjem izotonične otopine natrijevog klorida na vrh epruvete, miješanjem i zatim centrifugiranjem. Ispiranje se ponavlja 3-4 puta, svaki put pažljivo isisavanje supernatanta, zatim se u isprane crvene krvne stanice dodaju 2 kapi izotonične otopine natrijevog klorida kako bi se dobilo približno 5% suspenzije (kada koristite epruvete za centrifugiranje, možete se ograničiti do dva puta pranja).

Po 1 kap 5% suspenzije eritrocita iz svake epruvete prenese se na bijelu pločicu, tu se doda 1-2 kapi standardnog seruma za Coombsov test i serum dobro pomiješa s eritrocitima. Ploča se lagano protrese, zatim ostavi na miru 1-2 minute i ponovno povremeno protrese, dok se istovremeno promatra rezultat reakcije 20 minuta.

Interpretacija rezultata

Nema znakova aglutinacije (negativan rezultat) u svim uzorcima znači da ispitivani serum ne sadrži nepotpuna antitijela na skupinu antigena koja se nalazi u standardnim crvenim krvnim stanicama uključenim u studiju.

Ako u nekim ili većini kapi, uz kontrolu, promatranom aglutinacija , to znači da ispitivani serum sadrži nepotpuna antitijela protiv antigena eritrocita. O pitanju specifičnosti ovih antitijela odlučuje se usporedbom pozitivnih i negativne reakcije s antigenskom strukturom crvenih krvnih stanica uključenih u reakciju. Pitanje aktivnosti ovih protutijela rješava se titracijom.

Primjer 1. Aglutinacija se dogodila kod svih uzoraka eritrocita koji sadrže Rh 0 (D) faktor, neovisno o prisutnosti ili odsutnosti drugih faktora ovog sustava i drugih sustava, dok kod svih Rh 0 (D) - negativnih uzoraka aglutinacija nije uočena (tj. neovisno o prisutnosti ili odsutnosti drugih faktora) – to znači da ispitivani serum sadrži nepotpuna anti-rezus antitijela – Rh 0 (D).

Primjer 2. Aglutinacija se dogodila kod svih uzoraka eritrocita koji sadrže Duffy faktor, neovisno o prisutnosti ili odsutnosti antigena Rhesus sustava i drugih sustava, dok nije zabilježena aglutinacija kod svih Duffy-negativnih uzoraka, što znači da ispitivani serum sadrži nepotpune antigene. antitijela. -Duffy.

Dodatak. Ako ustanova nema kompletan panel standardnih crvenih krvnih stanica, ali postoji potreba za testiranjem seruma na prisutnost protutijela, preporuča se provesti studiju s 25-30 nasumičnih uzoraka crvenih krvnih stanica zdravih osoba grupa 0 (I) ili serum istog naziva kao i testni serum. Time će biti moguće riješiti problem prisutnosti ili odsutnosti antitijela na većinu antigena Rh-Hr, Duffy, Kell, Kidd sustava.

Ako se dobije pozitivan rezultat, daljnji zaključak o specifičnosti otkrivenih antitijela može se donijeti posebnom studijom s punim panelom standardnih crvenih krvnih stanica.

3. Tehnika izvođenja neizravnog Coombsovog testa kao testa kompatibilnosti transfuzirane krvi

Kako bi se spriječila nekompatibilnost tijekom transfuzije krvi, prije transfuzije moraju se provesti sljedeći testovi kompatibilnosti:

1. 
   Test kompatibilnosti ABO krvnih grupa koji se izvodi u avionu na sobnoj temperaturi.
2. 
   Testovi kompatibilnosti za Rh faktor i druge izoantigene.

Inkompatibilnost za Rh faktor i neke druge izoantigene može ovisiti kako o prisutnosti potpunih protutijela (određenih u slanoj sredini na 37 0 C u epruvetama), tako i najčešće o nepotpunim protutijelima, za što je posredni Coombsov test najvažniji. osjetljiv.

Jedna mala (0,01 ml) kap ispranih eritrocita donora, uzeta kroz iglu iz bočice krvi namijenjene transfuziji, prenese se na dno centrifuge ili druge epruvete volumena 3-4 ml i ukapaju se 3 kapi pacijentove krvi. dodaju se serum. Epruveta se protrese da se eritrociti pomiješaju sa serumom, nakon čega se stavi u termostat na 37 0 C 45 minuta. Nakon inkubacije, na vrh epruvete doda se izotonična otopina natrijevog klorida, sadržaj epruvete se promiješa i centrifugira 5-10 minuta. Ovo ispiranje crvenih krvnih stanica ponavlja se 3 puta, svaki put pažljivo uklanjajući supernatant. Kada koristite epruvete za centrifugiranje, možete se ograničiti na dva puta pranje. Dodajte 2 kapi izotonične otopine natrijevog klorida u isprane crvene krvne stanice kako biste dobili približno 5% suspenziju.

1 kap 5% suspenzije crvenih krvnih stanica prenese se na bijelu pločicu, dodaju se 1-2 kapi standardnog seruma za Coombsov test i serum se dobro pomiješa s crvenim krvnim stanicama. Zatim se ploča lagano protrese, ostavi na miru 1-2 minute i povremeno ponovno protrese, promatrajući rezultat 20 minuta.

Bilješka: U slučaju Rh inkompatibilnosti, aglutinacija se obično javlja unutar prve minute, ali s niskim titrom Rh antitijela (ili drugih antitijela), aglutinacija se može pojaviti kasnije, ponekad do dvadesete minute.
Tumačenje rezultata:

Vidljivi su aglutinati u obliku grudica na očišćenoj ili potpuno izbijeljenoj podlozi - to znači da krv davatelja nekompatibilan krvlju primatelja i ne može mu se transfuzirati.

Odsutnost znakovi aglutinacije znače da krv bolesnika ne sadrži nepotpuna protutijela na crvena krvna zrnca davatelja u odnosu na Rh faktor i druge izoantigene na koje bi se mogla stvoriti nepotpuna protutijela.

Indirektni Coombsov test osjetljiv je samo na nepotpuna antitijela.
4. Tehnika neizravnog Coombsovog testa za određivanje antigenska struktura crvene krvne stanice

Ovaj se test koristi za određivanje prisutnosti ili odsutnosti antigena bilo koje skupine crvenih krvnih stanica korištenjem standardnog seruma koji sadrži odgovarajuća protutijela u nepotpunom obliku.

Najčešće se neizravni Coombsov test koristi za određivanje antigena Kell (K), Duffy (Fy), Kidd (Jk), a također i za određivanje slabog antigena Rh sustava (Du).

Prije nastavka određivanja antigena, crvene krvne stanice koje se proučavaju treba testirati izravnim Coombsovim testom. Ako je rezultat izravnog testa pozitivan, ne može se provesti određivanje antigena neizravnim Coombsovim testom, već se u tu svrhu moraju koristiti druge reakcije.

Za reakciju se koriste centrifugalne ili druge epruvete volumena 3-4 ml u količini od tri: jedna za ispitni uzorak eritrocita i dvije za 1 malu (0,01 ml) kap tri puta ispranih ispitnih eritrocita. na dnu prve epruvete dodaju se kontrolni eritrociti u drugu epruvetu koja sadrži željeni antigen (na primjer, Duffy-pozitivna) i u treću epruvetu - negativna kontrola (Duffy-negativna). Dodajte 2-3 kapi standardnog seruma (u ovom primjeru anti-Duffy) u sve epruvete. Epruvete se protresu da se sadržaj promiješa i stave u termostat na 37 0 C na 45 minuta. Nakon takve inkubacije, epruvete se uklone iz termostata, na vrh se doda izotonična otopina natrijevog klorida, sadržaj se temeljito promiješa i centrifugira na 1500-2000 tisuća okretaja u minuti 5-10 minuta. Nakon centrifugiranja, supernatant se pažljivo odsisa i ovo ispiranje crvenih krvnih stanica se ponovi 4 puta. (Kad koristite epruvete za centrifugiranje, možete se ograničiti na dva puta pranje).

Dodajte 2 kapi izotonične otopine natrijevog klorida u isprane crvene krvne stanice kako biste dobili približno 5% suspenziju. Po 1 kap 5% suspenzije eritrocita iz svake epruvete prenese se na bijelu ploču, na svaku kap eritrocita doda se 1-2 kapi standardnog seruma za Coombsov test i promiješa. Ploča se lagano protrese, zatim se ostavi 1-2 minute i ponovno povremeno protrese, dok se istovremeno promatra tijek reakcije 20 minuta.
Interpretacija rezultata

Prisutnost aglutinacije crvena krvna zrnca (pozitivan rezultat) znači da krv sadrži željeni antigen (u ovom primjeru Duffy-pozitivna krv).

Nema aglutinacije (negativan rezultat) znači da testirana krv ne sadrži željeni antigen (Duffy negativan).

Rezultat se uzima u obzir kao istinit nakon provjere kontrolnih uzoraka, tj. u primjeru ako je rezultat pozitivan kod Duffy-pozitivnog uzorka i negativan kod Duffy-negativnog uzorka.

5. Obrazac za otpuštanje

Reagens je dostupan u tekućem obliku u bočicama od 5 ili 10 ml (1 ml sadrži 10 doza). Kao konzervans koristi se natrijev azid u konačnoj koncentraciji od 0,1%.

6.Skladištenje

Rok trajanja: dvije godine u hladnjaku na 2-8°C. Otvorena boca prikladna je za uporabu ako se čuva u hladnjaku, hermetički zatvorena, tijekom cijelog roka valjanosti.

Razlozi za reklamaciju su: neaktivnost, nespecifičnost, narušavanje cjelovitosti bočice, prisutnost ljuskica, istekao datum isteka reagensa. Prilikom reklamacije navedite datum primitka, dobavljača (ako proizvod niste primili od proizvođača), broj serije i razloge zbog kojih je reagens utvrđen neprikladnim. Molimo priložiti protokol s rezultatima ispitivanja reagensa i 2-3 neotvorene boce s reagensom
Prigovor treba uputiti proizvođaču LLC "MEDICLON": 127276