Esant pirminiam sifiliui, tiriamos šankroidinės išskyros arba taškiniai limfmazgiai, ar nėra blyškiosios treponemos. Sergant antriniu sifiliu, medžiaga imama iš erozuotų papulių paviršiaus ant odos, gleivinių, įtrūkimų ir kt. Prieš paimant medžiagą, siekiant išvalyti nuo įvairių teršalų, pažeidimų paviršių (erozijų, opų, įtrūkimų). ) turi būti kruopščiai nuvalytas steriliu vatos-marlės tamponu, kuris sudrėkintas izotoniniu natrio chlorido tirpalu arba paskirti losjonus su tuo pačiu tirpalu. Nuvalytas paviršius džiovinamas sausu tamponu, o platinine kilpele ar mentele šiek tiek dirginamos periferinės zonos, tuo pat metu pirštais guminėje pirštinėje lengvai suspaudžiant elemento pagrindą, kol atsiras audinių skystis (serumas), iš kurių ruošiamasi tyrimams. Audinių skysčio gavimas yra svarbus diagnozuojant sifilį, nes blyški treponema randama limfinių kapiliarų spindiuose, audinių plyšiuose aplink limfagysles ir kraujagysles.

Regioninių limfmazgių punkcija

Oda virš limfmazgių apdorojama 96% alkoholio ir 3-5% alkoholio jodo tirpalu. Tada 1-uoju ir 2-uoju kairės rankos pirštais fiksuokite limfmazgį. Dešinė ranka paimkite sterilų švirkštą su keliais lašais izotoninio natrio chlorido tirpalo, kuris suleidžiamas lygiagrečiai išilginė ašis limfmazgis. Adata įvairiomis kryptimis stumiama į priešingą mazgo kapsulės sienelę ir švirkšto turinys lėtai suleidžiamas. Kairės rankos pirštais lengvai masažuojamas limfmazgis. Lėtai ištraukiant adatą, kartu ištraukiamas švirkšto stūmoklis, įsiurbiant limfmazgio turinį. Medžiaga uždedama ant stiklelio (jei medžiagos kiekis mažas, įlašinamas lašelis izotoninio natrio chlorido tirpalo) ir uždengiama dengiamuoju stikleliu. Natūralaus vaisto tyrimas atliekamas tamsiame regėjimo lauke, naudojant šviesos optinį mikroskopą su tamsaus lauko kondensatoriumi (40, 7x, 10x arba 15x objektyvas). Treponema pallidum galima rasti ir spalvotuose preparatuose. Dažant pagal Romanovsky-Giemsa, blyški treponema nusidažo rožine spalva, pagal Fontaną ir Morozovą - ruda (juoda), pagal Burri metodą tamsiame fone atskleidžiama nedažyta treponema.

Serologinė diagnostika

Svarba diagnozuojant sifilį, įvertinant gydymo efektyvumą, nustatant išgydymo kriterijų, identifikuojant paslėptas, atsparios formos priskiriamas standartinėms (klasikinėms) ir specifinėms serologinėms reakcijoms. Standartinės arba klasikinės serologinės reakcijos (SSR) apima:

• Wassermano reakcija (WR),
• Kahno ir Sachs-Vitebsky nuosėdinės reakcijos (citocholinė),
• reakcija ant stiklo (ekspresinis metodas),

konkrečiai:

• Treponema pallidum imobilizacijos reakcija (treponema pallidum reakcija),
• imunofluorescencinė reakcija (RIF).

Wassermano reakcija (WR)

- sukūrė A. Wasserman kartu su A. Neisseriu ir C. Brucku 1906 m. Wasserman reakcija pagrįsta komplemento fiksacijos reiškiniu (Bordet-Gengou reakcija) ir leidžia nustatyti anti-lipidinius antikūnus (reaginus). Pagal šiuolaikinės idėjos, Wassermano reakcijoje nustatomi makroorganizmo lipidų, o ne blyškiosios treponema, antikūnai, o reakcija atskleidžia autoimuninį procesą, kurį sukelia makroorganizmo audinių denatūracija dėl blyškiosios treponema ir susidaro lipoproteinų kompleksas. (konjugatas), kuriame lipidai (haptenai) yra determinantas.

RV paprastai diagnozuojama dviem ar trimis antigenais. Dažniausiai naudojamas labai jautrus kardiolipino antigenas (galvijų širdies ekstraktas, praturtintas cholesteroliu ir lecitinu) ir treponeminis antigenas (anatogeniškai kultivuotų treponemes pallidum suspensija ultragarsu). Kartu su paciento serumo atsinaujinimu šie antigenai sudaro imuninį kompleksą, galintį adsorbuoti ir surišti komplementą. Norint vizualiai nustatyti susidariusį kompleksą (reaginai + antigenas + komplementas), kaip indikatorius naudojama hemolizinė sistema (avies eritrocitų mišinys su hemoliziniu serumu). Jei komplementas yra prijungtas prie 1 reakcijos fazės (reaginai + antigenas + komplementas), hemolizė nevyksta – raudonieji kraujo kūneliai nusėda į lengvai pastebimas nuosėdas (PB teigiamas). Jei 1 fazėje komplementas nėra surištas, nes tiriamajame serume nėra reaginų, jį naudos hemolizinė sistema ir įvyks hemolizė (RT neigiama). Hemolizės sunkumo laipsnis nustatant RV vertinamas pliusais: visiškas hemolizės nebuvimas ++++ arba 4+ (RV yra ryškiai teigiamas); vos prasidėjusi hemolizė +++ arba 3+ (RV teigiamas); reikšminga hemolizė ++ arba 2+ (RV silpnai teigiamas); neaiškus hemolizės vaizdas ± (RV abejotina); visiška hemolizė – (Wassermann reakcija neigiama).

Be kokybinio PB įvertinimo, atliekamas ir kiekybinis įvertinimas įvairiais serumo praskiedimais (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Reagin titras nustatomas pagal maksimalų praskiedimą, kuris vis tiek duoda labai teigiamą (4+) rezultatą. Kiekybinis RV stadijos nustatymas yra svarbus diagnozuojant kai kurias klinikines sifilinės infekcijos formas, taip pat stebint gydymo efektyvumą. Šiuo metu Wasserman reakcija atliekama naudojant du antigenus (kardiolipiną ir treponeminį Reiterio padermę). Paprastai RV teigiamas tampa 5-6 savaites po užsikrėtimo 25-60% pacientų, 7-8 savaites - 75-96%, 9-19 savaičių - 100%, nors pastaraisiais metais kartais anksčiau ar vėliau. Tuo pačiu metu reagino titras palaipsniui didėja ir pasiekia maksimalią vertę (1:160-1:320 ir daugiau) esant generalizuotoms bėrimams (antriniam šviežiam sifiliui). Kai RV yra teigiamas, diagnozuojamas pirminis seropozityvus sifilis.
Su antrine šviežia ir antrinio pasikartojančio sifilio, RV yra teigiamas 100% pacientų, tačiau išsekusių pacientų, kurių imunitetas nusilpęs, galima pastebėti neigiamą rezultatą. Vėliau reagino titras palaipsniui mažėja ir antrinio pasikartojančio sifilio atveju dažniausiai neviršija 1:80-1:120.
Dėl tretinio sifilio RV yra teigiamas 65-70% pacientų ir paprastai stebimas žemas reagino titras (1:20-1:40). Esant vėlyvoms sifilio formoms (sifilis Vidaus organai, nervų sistema) teigiamas RV stebimas 50-80% atvejų. Reagin titras svyruoja nuo 1:5 iki 1:320.
Dėl latentinio sifilio teigiamas RV stebimas 100% pacientų. Reagino titras yra nuo 1:80 iki 1:640, o sergant vėlyvuoju latentiniu sifiliu – nuo ​​1:10 iki 1:20. Greitas reagino titro sumažėjimas (iki visiško negatyvumo) gydymo metu rodo gydymo efektyvumą.

Wassermano reakcijos trūkumai- nepakankamas jautrumas (in Pradinis etapas neigiamas pirminis sifilis). Jis taip pat neigiamas 1/3 pacientų, jei jie anksčiau buvo gydyti antibiotikais, pacientams, sergantiems tretiniu aktyviu sifiliu su odos ir gleivinių, osteoartikulinio aparato, vidaus organų, centrinės nervų sistemos pažeidimais ir vėlyvais įgimtais. sifilis.
Specifiškumo trūkumas- Wasserman reakcija gali būti teigiama žmonėms, kurie anksčiau nesirgo ir neserga sifiliu. Visų pirma, klaidingai teigiami (nespecifiniai) RV rezultatai pastebimi pacientams, sergantiems sistemine raudonąja vilklige, raupsais, maliarija, piktybiniais navikais, kepenų pažeidimais, išplitusiu miokardo infarktu ir kitomis ligomis, o kartais ir visiškai sveikiems žmonėms.
Aptinkama trumpalaikė klaidingai teigiama Wasserman reakcija kai kurioms moterims prieš gimdymą arba po jo, piktnaudžiaujančiomis narkotikais, po anestezijos ar alkoholio vartojimo. Paprastai klaidingai teigiamas RV yra silpnai išreikštas, dažnai su žemu reagino titru (1:5-1:20), teigiamas (3+) arba silpnai teigiamas (2+). Masinių serologinių tyrimų metu klaidingai teigiamų rezultatų dažnis yra 0,1-0,15%. Norėdami įveikti nepakankamą jautrumą, jie naudoja šalčio testą (Kolyar reakcija) ir tuo pačiu metu atlieka kitas serologines reakcijas.

Kahno ir Sachso-Vitebskio nuosėdinės reakcijos

Wasserman reakcija naudojama kartu su dviem nuosėdų reakcijos (Kahnas ir Sachsas-Vitebskis), kai stadija, paruošiami labiau koncentruoti antigenai. Greitasis metodas (mikroreakcija ant stiklo) - reiškia lipidų reakcijas ir yra pagrįstas nusodinimo reakcija. Jis dedamas su specifiniu kardiolipino antigenu, kurio 1 lašas sumaišomas su 2-3 lašais tiriamojo kraujo serumo į specialios stiklinės plokštelės šulinėlius.
Privalumas- atsakymo gavimo greitis (per 30-40 minučių). Rezultatai vertinami pagal nusėdusių nuosėdų kiekį ir dribsnių dydį. Išraiškingumas apibrėžiamas kaip CSR – 4+, 3+, 2+ ir neigiamas. Reikėtų pažymėti, kad klaidingai teigiami rezultatai pastebimi dažniau nei naudojant RV. Paprastai greitasis metodas naudojamas masiniams sifilio tyrimams, tyrimams klinikinės diagnostikos laboratorijose, somatiniuose skyriuose ir ligoninėse. Remiantis greitojo metodo rezultatais, sifilio diagnozė draudžiama, jo vartojimas nėščioms moterims, donorams, taip pat kontrolei po gydymo draudžiamas.

Treponema pallidum imobilizacijos reakcija (TPI)

Treponema pallidum imobilizacijos reakcija (TPI)– 1949 metais pasiūlė R. W. Nelsonas ir M. Mayeris. Tai specifiškiausias sifilio diagnostinis testas. Tačiau gamybos sudėtingumas ir didelės sąnaudos riboja jo naudojimą. Pacientų kraujo serume nustatomi vaizdo specifiniai antikūnai (imobilizinai), dėl kurių atsiranda Treponema pallidum nejudrumas esant komplementui. Antigenas yra gyvas patogeninis Treponema pallidum, išskirtas iš sifiliu užsikrėtusių triušių. Mikroskopu suskaičiuojamas prarastas judrumas (imobilizuotas) Treponema pallidum ir įvertinami RIBT rezultatai: Treponema pallidum imobilizacija nuo 51 iki 100% yra teigiama; nuo 31 iki 50% - silpnai teigiamas; nuo 21 iki 30% - abejotina; nuo 0 iki 20% – neigiamas.
RIBT svarbu kada diferencinė diagnostika atskirti klaidingai teigiamas serologines reakcijas nuo sifilio sukeltų reakcijų. Vėlyvas tampa teigiamas nei RV, RIF ir todėl diagnostikai skirtingos formos jis nenaudojamas nuo sifilio, nors antriniu sifilio periodu jis teigiamas 85-100 proc.
Tretiniu sifilio periodu, kai pažeisti vidaus organai, raumenų ir kaulų sistema bei nervų sistema, RIBT teigiamas 98-100% atvejų. RV dažnai yra neigiamas).
Reikia atsiminti, kad RIBT gali būti klaidingai teigiamas, jei tiriamajame serume yra treponemocidinių vaistų (penicilino, tetraciklino, makrolitų ir kt.), kurie sukelia nespecifinę Treponema pallidum imobilizaciją. Šiuo tikslu kraujas tiriamas dėl RIBT ne anksčiau kaip po 2 savaičių po antibiotikų ir kitų vaistų vartojimo pabaigos.
RIBT, kaip ir RIF, gydymo proceso metu yra lėtai neigiamas, todėl gydymo procese nenaudojamas kaip kontrolė.

Imunofluorescencinė reakcija (RIF)

Imunofluorescencinė reakcija (RIF)- 1954 m. sukūrė A. Coons ir pirmą kartą sifilinės infekcijos diagnozei panaudojo Deacon, Falcone, Harris 1957 m. RIF yra pagrįstas netiesioginiu fluorescencinių antikūnų nustatymo metodu. Gamybai skirtas antigenas yra audinių patogeninė Treponema pallidum, pritvirtinta ant stiklelių, ant kurių užtepamas tiriamasis serumas. Jei tiriamajame serume yra antitreponeminių antikūnų, susijusių su IgM ir IgG, jie stipriai jungiasi su antigenu – treponema, kuri aptinkama fluorescenciniu mikroskopu, naudojant antirūšinį („anti-žmogaus“) fluorescencinį serumą.
RIF rezultatai yra atsižvelgiama į blyškios treponemos švytėjimo intensyvumą preparate (geltonai žalias švytėjimas). Jei serume nėra antitreponeminių antikūnų, blyški treponema neaptinkama. Esant antikūnams, aptinkamas blyškios treponemos švytėjimas, kurio laipsnis išreiškiamas pliusais: 0 ir 1+ - neigiama reakcija; nuo 2+ iki 4+ – teigiamas.
RIF reiškia grupines treponemines reakcijas ir yra skiriamas 10 ir 200 kartų praskiedus tiriamąjį serumą (RIF-10 ir RIF-200). RIF-10 laikomas jautresniu, tačiau dažnai gaunami nespecifiniai teigiami rezultatai nei naudojant RIF-200 (jo specifiškumas didesnis). Paprastai, RIF tampa teigiamas anksčiau nei RV- teigiamas pirminio seronegatyvaus sifilio atveju 80% pacientų, 100% antriniu sifilio periodu, visada teigiamas latentiniu sifiliu ir 95-100% atvejų vėlyvomis formomis ir įgimtu sifiliu.
RIF specifiškumas padidėja po išankstinio tiriamojo serumo apdorojimo sorbentiniu-ultragarsiniu treponeminiu antigenu, kuris suriša grupinius antikūnus (RIF – abs).
RIBT ir RIF indikacijos- latentinio sifilio diagnozė, siekiant patvirtinti lipidų reakcijų komplekso specifiškumą įtariamos sifilinės infekcijos atveju, remiantis teigiamu RV. Teigiamas RIBT ir RIF yra latentinio sifilio įrodymas. Klaidingai teigiamo RT atveju su įvairių ligų(sisteminė raudonoji vilkligė, piktybiniai navikai ir tt) ir jei pakartotiniai RIBT ir RIF rezultatai yra neigiami, tai rodo nespecifinį RV pobūdį. Įtarimas dėl vėlyvųjų sifilinių vidaus organų, raumenų ir kaulų sistemos, nervų sistemos pažeidimų, jei ligoniai turi neigiamą RV. Įtarus pirminį seronegatyvų sifilį, kai pakartotinai tiriant išskyras iš erozijos paviršiaus (opos), punkcija iš padidėjusių regioninių limfmazgių, treponema pallidum nenustatoma – tokiu atveju skiriamas tik RIF – 10.
Tiriant asmenis, turinčius neigiamą RV kurie turėjo ilgalaikių lytinių ir buitinių kontaktų su sifiliu sergančiais pacientais, atsižvelgiant į tikėtiną galimybę neseniai juos gydyti vaistais nuo sifilio, kurie sukėlė RV negatyvumą. Su fermentais susietas imunosorbentas tyrimas (ELISA – enziminis imunosorbentinis tyrimas) – metodas, sukurtas E. Engvall ir kt., S. Avrames (1971). Esmė yra sifilinio antigeno, sorbuoto ant kietosios fazės nešiklio paviršiaus, sujungimas su tiriamo kraujo serumo antikūnu ir specifinio antigeno-antikūno komplekso nustatymas naudojant fermentu pažymėtą anti-rūšinį imuninį kraujo serumą. Tai leidžia vizualiai įvertinti ELISA rezultatus pagal substrato spalvos pokyčio laipsnį, veikiant fermentui, įtrauktam į konjugatą. Nepatikimi ELISA rezultatai gali atsirasti dėl nepakankamo ingredientų praskiedimo, temperatūros ir laiko sąlygų pažeidimo, tirpalų pH nenuoseklumo, laboratorinių stiklinių indų užteršimo ir netinkamos terpės plovimo technikos.

Pasyvioji hemagliutinacijos reakcija (RPHA)

Kaip diagnostinį sifilio tyrimą pasiūlė T.Rathlev (1965,1967), T.Tomizawa (1966). Reakcijos makromodifikacija vadinama TRHA, mikromodifikacija – MNA-TR, automatizuota versija – AMNA-TR, reakcija su polikarbamido makrokapsulėmis vietoj raudonųjų kraujo kūnelių – MSA-TR. RPGA jautrumas ir specifiškumas yra panašus į RIBT, RIF, tačiau RPGA yra mažiau jautrus ankstyvoms sifilio formoms, palyginti su RIF-abs, ir didesnis jautrumas vėlesnėms įgimto sifilio formoms. RPGA tiekiama kokybinėmis ir kiekybinėmis versijomis.

Kraujo paėmimo technika serologiniams tyrimams

Norint ištirti RV, RIF, RIBT, kraujas iš alkūnkaulio venos imamas tuščiu skrandžiu arba ne anksčiau kaip praėjus 4 valandoms po valgio steriliu švirkštu arba viena adata (pagal gravitaciją). Paėmimo vietoje oda iš anksto apdorojama 70% alkoholiu. Švirkštą ir adatą reikia nuplauti izotoniniu natrio chlorido tirpalu. Į švarų, sausą, šaltą mėgintuvėlį supilama 5-7 ml tiriamojo kraujo. Ant mėgintuvėlio klijuojamas tuščias lapelis su paciento pavarde, inicialais, ligos istorija arba ambulatorinės kortelės numeriu ir kraujo paėmimo data. Paėmus kraują mėgintuvėlis dedamas į šaldytuvą su temperatūros sąlygos+4°+8°С iki kitos dienos. Kitą dieną serumas nusausinamas tyrimui. Jei kraujas kitą dieną nepanaudotas, serumą reikia nupilti iš krešulio ir laikyti šaldytuve ne ilgiau kaip 1 savaitę. RIBT tyrimui mėgintuvėlis turi būti specialiai paruoštas ir sterilus. Pažeidus kraujo paėmimo tyrimams taisykles, nesilaikant sąlygų gali būti iškraipyti rezultatai.
Nerekomenduojama imti kraujo mėginių tyrimams po valgio, gėrimo ar gėrimo vaistai, po įvairių vakcinų skyrimo, per mėnesinių ciklas tarp moterų.
Tyrimams ekspreso metodu kraujas buvo paimtas iš piršto galiuko, kaip daroma imant AKS, bet kraujas paimtas iš 1 kapiliaro daugiau. Greitąjį metodą galima atlikti ir su kraujo serumu, gautu venopunkcijos būdu. Esant poreikiui tirti kraują atokiose laboratorijose, vietoj kraujo galima siųsti sausą serumą (sauso lašo metodas). Norėdami tai padaryti, kitą dieną po kraujo paėmimo serumas atskiriamas nuo krešulio ir įtraukiamas į sterilų 1 ml švirkštą. Tada serumas 2 atskirų apskritimų pavidalu pilamas ant storo rašomojo popieriaus (vaškinio popieriaus arba celofano), kurių matmenys 6x8 cm, juostelės, laisvajame krašte užrašoma tiriamojo pavardė, inicialai ir kraujo paėmimo data. popierius. Popierius su serumu saugomas nuo tiesioginių saulės spindulių ir paliekamas kambario temperatūroje iki kitos dienos. Serumas džiūsta mažų blizgios gelsvos stiklinės plėvelės apskritimų pavidalu. Po to popieriaus juostelės su džiovintu serumu susukamos kaip farmaciniai milteliai ir siunčiami į laboratoriją, nurodant diagnozę ir tyrimo tikslą.

Serologinis atsparumas

Kai kuriems (2% ir daugiau) sifiliu sergantiems pacientams, nepaisant visiško antisifilinio gydymo, neigiamų serologinių reakcijų sulėtėjimas (nėra) pasibaigus gydymui iki 12 mėnesių ar ilgiau. Pasireiškia vadinamasis serologinis atsparumas, kuris pastaraisiais metais buvo dažnai stebimas. Yra serologinio atsparumo formų:

• Tiesa(absoliutus, besąlyginis) – būtina atlikti papildomą antisifilinį gydymą, derinant su nespecifine terapija, siekiant padidinti organizmo imunines jėgas.
• Giminaitis- po pilno gydymo blyški treponema sudaro cistas arba L formas, kurios organizme yra mažai virulentiškos ir dėl to papildomas gydymas nekeičia serologinių reakcijų, ypač RIF ir RIBT, rodiklių.

Tuo pačiu metu cistos formose vyksta nedideli medžiagų apykaitos procesai, o cistos formų apvalkalai yra svetimas baltymas (antigenas). Kad apsisaugotų, organizmas gamina specifinius antikūnus, kurie būna teigiami arba stipriai teigiami, kai atliekamos serologinės reakcijos ir nėra ligos apraiškų. Naudojant L formas, medžiagų apykaitos procesai yra labiau susilpnėję, o antigeninės savybės nėra arba yra šiek tiek išreikštos. Specifinių antikūnų nesigamina arba jų yra mažai, serologinės reakcijos yra silpnai teigiamos arba neigiamos. Kuo ilgesnis laikotarpis nuo užsikrėtimo momento, tuo daugiau Treponema pallidums virsta išgyvenimo formomis (cistomis, sporomis, L formomis, grūdeliais), kurioms antisifilinis gydymas neveiksmingas.

Pseudo pasipriešinimas- po gydymo, nepaisant teigiamų serologinių reakcijų, Treponema pallidum organizme nėra. Antigeno organizme nėra, tačiau toliau gaminasi antikūnai, kurie nustatomi serologinių reakcijų metu.
Serologinis atsparumas gali išsivystyti dėl:

• netinkamas gydymas, neatsižvelgiant į ligos trukmę ir stadiją;
• nepakankama dozė, ypač dėl to, kad nebuvo atsižvelgta į pacientų kūno svorį;
• intervalo tarp vaisto vartojimo pažeidimas;
• Treponema pallidum išsaugojimas organizme, nepaisant visaverčio specifinis gydymas, dėl jų atsparumo penicilinui ir kitiems chemoterapiniams vaistams esant paslėptiems, encitriniams vidaus organų, nervų sistemos pažeidimams, limfmazgiai, kurie yra neprieinami antibakteriniai vaistai(blyški treponema dažnai randama randiniame audinyje praėjus daugeliui metų po gydymo pabaigos; blyški treponema kartais randama limfmazgiuose praėjus 3-5 metams po antisifilinio gydymo);
• apsauginių jėgų mažinimas sergant įvairiomis ligomis ir intoksikacijomis (endokrinopatijos, alkoholizmas, narkomanija ir kt.);
• bendras išsekimas (valgant maistą, kuriame stinga vitaminų, baltymų, riebalų).

Be to, dažnai nustatomas klaidingas serologinių reakcijų pozityvumas, nesusijęs su sifiliu pacientams ir kurį sukelia:

• palyda nespecifinės ligos vidaus organai, širdies ir kraujagyslių sistemos sutrikimai, reumatas, endokrininės ir nervų sistemos disfunkcija, sunkios lėtinės dermatozės, piktybiniai navikai;
• nervų sistemos pažeidimas (sunkūs sužalojimai, smegenų sukrėtimas, psichinė trauma);
• nėštumas; lėtinė intoksikacija alkoholis, nikotino vaistai; infekcinės ligos (maliarija, tuberkuliozė, virusinis hepatitas, dizenterija, šiltinė, vidurių šiltinė ir pasikartojanti karštinė).

Šie veiksniai gali turėti įtakos imunologiniam organizmo reaktyvumui tiek aktyvaus sifilio apraiškų vystymosi laikotarpiu, tiek jų regresijos metu.

Laboratorinė diagnostika vienu metu naudoja kelis sifilio tyrimus, kad gautų tiksliausią rezultatą. Tai užtrunka daugiau laiko, bet pateikia tiksliausią atsakymą.

Dažniausiai RIF analizės rezultatas pateikiamas skaičiais. Dekodavimas turi šiuos simbolius:

• aštrus teigiamas rezultatasžymimas 4 pliusais (++++);
• teigiamas rezultatas žymimas 3 pliusais (+++);
• silpnai teigiamas rezultatas su 2 pliusais (++);
• abejotinas rezultatas 1 pliusas (+);
• neigiamas rezultatas žymimas 1 minusu (-).

Sifilio RIF rezultatas taip pat pateikiamas procentais, kuris priklauso nuo susijusių bakterijų kiekybinio rodiklio:

• jei rezultatas neigiamas, imobilizacija yra iki 20%;
• esant silpnai teigiamam rezultatui, imobilizacija svyruoja nuo 20 iki 50%;
• esant teigiamam rezultatui, imobilizacija yra didesnė nei 50%.

Jei rezultatas yra teigiamas atsakymas, tai rodo ligos buvimą.

Jei rezultatas silpnai teigiamas, tada tai rodo vieną likutinių antikūnų kiekį kraujyje.

Neigiamas rezultatas rodo, kad treponema pallidum nėra, o tai reiškia, kad pacientas yra sveikas.

Patyrę gydytojai mūsų klinikoje greitai ir tiksliai diagnozuos sifilį. Esame socialiai orientuoti į visus gyventojų sluoksnius, todėl RIF analizės kaina yra nebrangi. Kaina pateikta mūsų svetainėje esančioje lentelėje.

Serologinėje sifilio diagnozėje labai svarbu gauti patikimą ir tikslų rezultatą.

Siekiant pagerinti duomenų kokybę, imamasi tam tikrų veiksmų:

• Tiriamasis serumas skiedžiamas 200 kartų (1:200), kad būtų išvengta klaidingai teigiamų reakcijų. Tada jie sako, kad tai vykdoma sifilio tyrimas RIF 200.
• Kitame variante, skiedžiant serumą santykiu 1:5, papildomai naudojamas specialus absorbentas, kuris surenka „papildomus“ antikūnus, kad jie neiškraipytų rezultatų.

Treponemų dydis taip pat yra tyrėjų rankose. Fluorescencinės mikroskopijos metu aiškiai matomi dideli spirochetų mikrobų kūnai. Jei prie jų „prilimpa“ fosforu pažymėti baltymai iš serumo. Standartizuoto antigeno ir serumo naudojimas leidžia maksimaliai padidinti RIF jautrumą ir specifiškumą diagnozuojant sifilį.

Privačios RIF analizės parinktys: RIF absorbcija

Vienas iš alternatyvių būdų vadinamas RIF-Abs. Jis skiriasi nuo įprasto metodo mažu tiriamojo serumo praskiedimu – 1:5, palyginti su 1:200, kaip įprasta.

Koncentruotame mėginyje yra daug aktyvių baltymų molekulių.

Siekiant išvengti ir padidinti jautrumą, serumas yra apdorojamas specialiu absorbentu, pagamintu iš sifilinių spirochetų fragmentų. Sorbentas surenka pernelyg aktyvius antikūnus, o tada mėginys apdorojamas pramoniniu fosforu pažymėtu serumu. Dėl šio išankstinio paruošimo pašalinamos visos nereikalingos molekulės, galinčios turėti įtakos tyrimo rezultatams.

Jis dedamas pagal šias indikacijas:

• Teigiamas atsižvelgiant į klinikinę savijautą ir jokios infekcijos rizikos istoriją.
• Teigiamas RV pacientams, sergantiems lėtinėmis ligomis.
• Neigiamas RV, kai atsiranda įtartinų sifilio simptomų.

Pirmieji teigiami rezultatai atsiranda jau 15-16 dieną nuo užsikrėtimo momento. Jei reakcija pasikeičia iš teigiamos į neigiamą, tai rodo visišką sifilio išgydymą. Klaidingai teigiamo rezultato tikimybė yra mažesnė nei 0,4%.

Tokia situacija gali susidaryti apžiūrint vėžiu sergančius ligonius, alkoholikus, nėščias moteris ir žmones, sergančius imuniteto sutrikimais.

Tam tikra dalis yra dėl techninių klaidų, nes gamyba yra gana sudėtinga. Būna atvejų, kai reikia atskirti įgimtą patologiją nuo įgytos. Tai galite padaryti, jei ieškote skirtingi tipai antikūnų paciento kraujyje.

Antikūnai prieš M klasės sifilį (IgM) atsiranda netrukus po užsikrėtimo ir yra daug greičiau nei IgG. Leidžia juos atpažinti sifilio RIF absorbcijos analizė IgM. Jei šios reakcijos rezultatai yra teigiami, galime kalbėti apie neseniai įvykusią infekciją. Tokiu būdu galima atskirti pakartotinio užsikrėtimo atvejus nuo atkryčio arba nustatyti vaiko infekciją po gimdymo.

Remiantis šios RIF analizės technikos rezultatais, taip pat daroma išvada apie ankstyvojo sifilio gydymo efektyvumą.

Jei įtariate sifilį, kreipkitės į patyrusį venerologą.

Sifilį lydi daugybė simptomų ir yra didelis skaičius klinikinės formos. Jo atpažinimas grindžiamas išsamiu klinikiniu ir laboratoriniu paciento ištyrimu. Bendra analizė kraujas dėl sifilio turi mažai informacijos, todėl jis nenaudojamas ligai diagnozuoti.

Analizei gali būti paimtos šios medžiagos:

• kraujas iš piršto ir venos;
• cerebrospinalinis skystis – smegenų skystis;
• kietojo šankro (opų) išskyros;
• regioninių limfmazgių sritys.

Medžiagos ir diagnostikos metodo pasirinkimas priklauso nuo ligos stadijos. Apie tai, kokie tyrimai atliekami dėl sifilio, kalbėsime kitame skyriuje.

Laboratorinės ligos diagnostikos metodų klasifikacija

Pradiniame etape galite naudoti bakterioskopinį metodą, pagrįstą patogeno - Treponema pallidum - nustatymu mikroskopu. Ateityje plačiai naudojami serologiniai tyrimai, pagrįsti mikrobų antigenų ir organizmo gaminamų antikūnų biologinėje medžiagoje nustatymu.

Bakteriologiniai tyrimai neatliekami, nes dirbtinėmis sąlygomis sifilio sukėlėjas labai prastai auga maistinėse terpėse.

Visi treponemos nustatymo metodai, ty sifilio tyrimų tipai, yra suskirstyti į dvi dideles grupes:

1. Tiesioginis, kuris tiesiogiai aptinka patį mikrobą:

• tamsaus lauko mikroskopija (treponemų aptikimas tamsiame fone);
• RIT testas – triušių užkrėtimas tiriamąja medžiaga;
• polimerazė grandininė reakcija(PGR), kuris aptinka mikroorganizmo genetinės medžiagos dalis.

2. Netiesioginis (serologinis), pagrįstas antikūnų prieš mikrobą, kuriuos organizmas gamina reaguodamas į infekciją, aptikimu.

Serologiniai tyrimai skirstomi į dvi grupes

Ne treponeminis:

• komplemento fiksavimo reakcija su kardiolipino antigenu (CCk);
• mikroprecipitacijos reakcija (MPR);
• greito plazmos reagino (RPR) testas;
• bandymas su toluidino raudonu.

Treponemalis:

• komplemento fiksavimo reakcija su treponeminiu antigenu (RSCT);
• Treponemos imobilizacijos reakcija (RTI arba RIBT);
• imunofluorescencinė reakcija (RIF);
• reakcija pasyvi hemagliutinacija(RPGA);
• fermentinis imunologinis tyrimas (ELISA);
• imunoblotingas.

Šių analizių metodai yra gana sudėtingi, todėl daugiausia dėmesio skirsime tam, kada jos atliekamos ir kiek tikslios informacijos jos pateikia.

Iš karto pasakykime, kad sifilio diagnozavimo pagrindas yra serologiniai metodai. Kaip vadinamas sifilio tyrimas: kiekvienu atveju tyrimas gali apimti skirtingos technikos. Žemiau apie juos kalbėsime išsamiau.

Tiesioginiai testai

Jų aptikimas mikroskopu įtikinamai įrodo treponemų buvimą. Tikimybė susirgti sifiliu siekia 97%. Tačiau mikrobų galima aptikti tik 8 iš 10 pacientų, todėl neigiamas testas neatmeta ligos.

Diagnozė atliekama tais laikotarpiais, kai yra šansų ar odos bėrimas. Būtent šių infekcinių elementų išskyrose jie ieško ligos sukėlėjų.

Efektyvesnis, bet tuo pačiu brangesnis ir sudėtinga analizė– treponemų aptikimas po išankstinio apdorojimo fluorescenciniais antikūnais. Tai medžiagos, kurios „prilimpa“ prie mikrobų ir sukuria „švytėjimą“ mikroskopo lauke.

Metodų jautrumas mažėja ilgai sergant, gydant opas ir bėrimus antiseptikais, taip pat po gydymo.

Biologinis RIT diagnozavimo metodas yra labai specifinis, bet brangus, o rezultatas gaunamas tik per ilgam laikui kai užsikrėtęs gyvūnas suserga šia liga. Šiuo metu metodas praktiškai nenaudojamas, nors praktiškai pats tiksliausias iš visų. Puikus sifilio kraujo tyrimas treponemų genetinei medžiagai nustatyti yra PGR. Vienintelis jos apribojimas yra santykinai didelė diagnostikos kaina.

Serologiniai metodai

Ne treponeminiai testai

RSKk ir RMP

Garsiausias iš šių testų yra Wassermano reakcija. Šiuo keliu greita diagnostika(ekspresinis sifilio testas), pagrįstas panašia antikūnų iš sergančio žmogaus kraujo reakcija į pačius treponemus ir į kardiolipiną, gautą iš galvijų širdies. Dėl šios antikūnų ir kardiolipino sąveikos susidaro dribsniai.

Rusijoje šią analizę praktiškai nenaudotas. Jis buvo pakeistas mikronusodinimo reakcija. Metodo trūkumas yra mažas jo specifiškumas. Klaidingai teigiamas testas kraujas dėl sifilio atsiranda sergant tuberkulioze, kraujo ligomis, sistemine raudonąja vilklige, nėštumo metu, gimus vaikui, kraujavimo iš menstruacijų metu ir daugeliu kitų atvejų. Todėl, esant teigiamam RW, daugiau tikslūs metodai diagnostika

Po užsikrėtimo reakcija tampa teigiama po dviejų mėnesių. Sergant antriniu sifiliu jis teigiamas beveik visiems pacientams.

Mikronusodinimo reakcija, kuri pakeitė Wassermano reakciją, turi panašų mechanizmą. Jis nebrangus, lengvai įgyvendinamas, greitai įvertinamas, tačiau gali duoti ir klaidingai teigiamą rezultatą. Šie du testai naudojami kaip atrankos testai.

RMP tampa teigiamas praėjus mėnesiui po šankro atsiradimo. Tam naudojamas kraujas iš piršto.

Ar sifilio testas gali būti klaidingas? Žinoma, taip, ypač naudojant ne treponeminius testus.

Ūmių klaidingai teigiamų mėginių priežastys naudojant RMP:

• ūminės infekcinės ligos;
• plaučių uždegimas;
• miokardinis infarktas;
• insultas;
• traumų ir apsinuodijimų.

Lėtiniai klaidingai teigiami rezultatai dažnai atsiranda sergant šiomis ligomis:

• tuberkuliozė;
• bruceliozė;
• leptospirozė;
• sarkoidozė;
• reumatinės ligos;
• infekcinė mononukleozė;
• piktybiniai navikai;
• diabetas;
• kepenų cirozė ir kt.

Jei atsiranda prieštaringų tyrimų, diagnozei patikslinti naudojami treponeminiai serologiniai tyrimai.

RPR ir toluidino raudonojo testas

Greitas plazmos reagino testas (sifilio rpr testas) yra dar vienas reakcijos su kardiolipino antigenu tipas. Jis naudojamas šiais atvejais:

• gyventojų patikra;
• įtarimas dėl sifilio;
• donoro apžiūra.

Taip pat paminėkime testą su toluidino raudonuoju. Visi šie metodai naudojami gydymo veiksmingumui įvertinti. Jie yra pusiau kiekybiniai, tai yra, jų mažėja sveikstant ir didėja, kai infekcija atsinaujina.

Neigiami ne treponeminių tyrimų rezultatai greičiausiai rodo, kad tiriamasis neserga sifiliu. Todėl išgydymui įvertinti naudojami netreponeminiai testai. Pirmoji tokia analizė turėtų būti atlikta praėjus 3 mėnesiams po gydymo kurso pabaigos.

Treponeminiai tyrimai

Treponeminiai tyrimai yra pagrįsti treponeminių antigenų naudojimu, o tai žymiai padidina jų diagnostinę vertę. Jie naudojami šiose situacijose:

• teigiamas atrankos testas (mikroprecipitacijos reakcija);
• klaidingai teigiamų atrankos rezultatų atpažinimas;
• įtarimas dėl sifilio;
• latentinių formų diagnostika;
• retrospektyvi diagnozė, kai pacientas anksčiau sirgo šia liga.

RIT ir RIF

Aukščiausios kokybės (labai jautrios ir labai specifinės) yra RIT ir RIF. Šių metodų trūkumai yra sudėtingumas, laikas ir modernios įrangos bei apmokyto personalo poreikis. Daugumos išgydytų pacientų treponeminiai testai išlieka teigiami daugelį metų, todėl jų negalima naudoti kaip gydymo kriterijų.

RIF tampa teigiamas praėjus dviem mėnesiams po užsikrėtimo. Jei jis neigiamas, pacientas yra sveikas, jei teigiamas, susirgimo tikimybė yra didelė.

RIT ypač dažnai taikomas esant teigiamiems šlapimo pūslės vėžio rezultatams, siekiant atmesti arba patvirtinti ligą. Jis yra labai jautrus ir leidžia labai tiksliai pasakyti, ar pacientas serga sifiliu, ar ne. Tačiau testas tampa teigiamas tik praėjus trims mėnesiams po užsikrėtimo.

Imunoblotingas

Imunoblotavimas yra net jautresnis nei RIF, bet mažiau jautrus nei RPGA. Jis naudojamas retai, daugiausia naujagimių sifiliui diagnozuoti.

Išvardinti metodai netinka patikrai, tai yra greitam ligos nustatymui, nes teigiami tampa vėliau nei mikroprecipitacijos reakcija.

ELISA ir RPGA

Šiuolaikiniai labai informatyvūs standartizuoti sifilio diagnozavimo metodai – ELISA ir RPGA. Jie yra nebrangūs, greitai montuojami ir išbandomi dideliais kiekiais. Šie testai gali būti naudojami diagnozei patvirtinti.

RPGA analizė tampa teigiama sergant pirminiu seropozityviu sifiliu, tai yra, atsiradus šankui (praėjus mėnesiui po užsikrėtimo). Jis ypač vertingas diagnozuojant vėlyvą ir įgimtos formos ligų. Tačiau RPGA turi būti papildyta bent vienu netreponeminiu ir vienu treponeminiu tyrimu, kad būtų nustatytas diagnostinis tikslumas. Šis trigubas testas yra patikimiausias sifilio testas. RPGA trūkumas – tausojimas teigiama reakcija ilgą laiką, o tai neleidžia testo naudoti kaip išgydymo kriterijaus.

ELISA testas sifiliui nustatyti tampa teigiamas praėjus trims savaitėms po ligos. ELISA trūkumas yra tas, kad jis gali būti klaidingas. Klaidingai teigiama reakcija atsiranda, kai sisteminės ligos, medžiagų apykaitos sutrikimų, taip pat sergančių motinų gimusiems vaikams.

Trūkumai serologiniai metodai paskatino sukurti pažangiausius metodus, kurie neduoda klaidų, bet vis dar yra brangūs ir retai naudojami – dujų chromatografija ir masių spektrometrija.

Sifilinės infekcijos diagnozavimo skirtingais etapais algoritmas

Pirminiu seronegatyviu laikotarpiu (iki 2 mėnesių po užsikrėtimo) treponemos paieška atliekama tamsiame lauke arba naudojant fluorescencinius antikūnus.

Pirminiam seropozityviam, antriniam ir latentiniam sifiliui gydyti naudojami RMP ir ELISA, o RPGA – kaip patvirtinantis testas.

Sergantiesiems antrinio sifilio atkryčiais tiriami bėrimo elementai, bandant iš jų išskirti treponemus mikroskopiniam tyrimui.

Trečiuoju laikotarpiu šlapimo pūslės vėžys yra neigiamas trečdaliui pacientų. ELISA ir RPGA yra teigiami, tačiau jie gali rodyti ne tretinį sifilį, o ankstesnę ligą. Silpnai teigiamas testas rodo pasveikimą, o ne tretinį sifilį.

Diagnozuojant „įgimtą sifilį“, atsižvelgiama į motinos ligos buvimą, motinos ir vaiko krūties vėžio dažnio skirtumą, teigiamas ELISA ir RPGA naujagimiui bei imunoblotavimą.

Nėščios moterys turi būti ištirtos dėl sifilio, ypač tos, kurios jau pagimdė negyvai, nėštumas neišsivysčiusi arba persileidimas buvo ankstyvas. Jie atlieka RMP, ELISA, RPGA. Prieš nutraukiant nėštumą, jie tiriami dėl ligos.

Sifilio tyrimo atlikimo taisyklės

Norėdami gauti siuntimą į laboratoriją, turite apsilankyti pas vietinį gydytoją. Norintiems išsitirti greičiau, tai galima padaryti privačioje laboratorijoje be siuntimo (pavyzdžiui, Invitro laboratorijos greitai ir anonimiškai atlieka tyrimą dėl sifilio).

Kaip išsitirti dėl sifilio? Kraujas duodamas ryte, tuščiu skrandžiu. Galite gerti tik švarų vandenį.

Paruošimas: Likus dviem dienoms iki tyrimo, iš dietos turite pašalinti riebų maistą ir ypač alkoholį.

Kaip atliekama analizė?įprastu būdu iš piršto ar alkūnkaulio venos.

Kiek laiko užtrunka pasitikrinti dėl sifilio? Bandymo rezultatas paprastai yra paruoštas kitą dieną. Nuorašas gali būti paimtas iš gydytojo arba laboratorijos.

Kiek laiko galioja analizė? Iki trijų mėnesių.

Cerebrospinalinio skysčio analizė

Kai kuriais atvejais neurosifiliui diagnozuoti atliekamas smegenų skysčio tyrimas.

Šis tyrimas skiriamas visiems pacientams, sergantiems latentinis sifilis jeigu jie turi nervų sistemos patologijos požymių, taip pat su latentiniu ir vėlyvuoju neurosifiliu.

Be to, analizė atliekama visiems pacientams po pasveikimo, jei išlieka teigiamos serologinės reakcijos. Savo straipsnyje jau rašėme, kad šis reiškinys pasitaiko gana dažnai.

Smegenų skysčio analizę dėl sifilio skiria ir atlieka tik gydytojas.

Cerebrospinalinis skystis gaunamas punkcija tarp dviejų slankstelių juosmens sritis. Jis surenkamas po 4 ml dviejuose mėgintuvėliuose. Tada punkcijos vieta apdorojama jodu ir uždengiama steriliu tvarsčiu. Po punkcijos pacientas bent 3-4 valandas turi gulėti ant pilvo, pakėlus lovos kojos galą, tada gali gulėti ant šono. Lovos poilsis po punkcijos nurodoma dvi paras.

Smegenų skystis iš pirmojo mėgintuvėlio tiriamas taikant visuotinai priimtas reakcijas į baltymų kiekį, ląsteles ir nustatant meningito (smegenų dangalų uždegimo) požymius.

Smegenų skystis iš antrojo mėgintuvėlio tiriamas, ar nėra antikūnų prieš treponemą, naudojant Wassermano reakciją, RMP, RIF ir RIBT, kurias aptarėme aukščiau.

Pagal sutrikimų sunkumą išskiriami keturi smegenų skysčio pakitimų tipai. Išanalizavęs juos, gydytojas gali daryti išvadą apie įvairių formų nervų sistemos pažeidimus (kraujagyslių neurosifilį, sifilinį meningitą, meningovaskulinį sifilį, tabes dorsalis, vėlyvąjį mezenchiminį neurosifilį), taip pat apie paciento, kurio serologinis tyrimas teigiamas, pasveikimą. bandymai.

šrifto dydis

TSRS Sveikatos apsaugos ministerijos Įsakymas 02-09-85 1161 DĖL SEROLOGINĖS SIFILIO DIAGNOZĖS TOBULINIMO (kartu su INSTRUKCIJA DĖL... Aktualu 2018 m.

RIF – ABS nustatymo metodika

Ištirtas kraujo serumas

Kraujas kraujo serumui gauti iš prieškubitalinės venos paimamas į švarų ir sausą mėgintuvėlį 5 ml tūrio ir apdorojamas taip pat, kaip ir Wasserman reakcijai. Kraujo serumas inaktyvuojamas vieną kartą 56° temperatūroje 30 minučių. Dėl to, kad RIF-abs yra dedamas nesterilus, sterilių indų naudojimas ir sterilių sąlygų laikymasis kraujo serumo laikymo metu nėra būtinas. Tai svarbu tik ilgesniam kraujo serumo išsaugojimui prieš tyrimą.

Kaip antigenas naudojama patogeninės blyškios Treponema padermės Nichols suspensija nuo 7 dienų triušio orchito. Sveiki triušių patinai, kurių Wasserman testo ir RIT rezultatai yra neigiami, yra užkrėsti intratestikuliariai, o atsiradus orchitui, treponemes pallidum pašalinamos iš sėklidžių taip pat, kaip ir gaunant antigeną RIT. Gauta blyškios treponemos suspensija iš kiaušinių gabalėlių supilama į sterilius mėgintuvėlius su medvilniniais kamščiais ir paliekama parai šaldytuve 4°C temperatūroje, po to atskiriama nuo nuosėdų ir visą laikotarpį laikoma tomis pačiomis sąlygomis. naudojimo.

Norint gauti ir laikyti antigeną, reikia laikytis sterilių sąlygų, nes su tuo pačiu antigenu reakcija gali būti atlikta per 2-4 mėnesius. Antigenui reikėtų pasirinkti suspensiją, kurioje treponemų agliutinacijos nepastebėta ir jų yra pakankamai. Antigeną galima gauti ampulėse iš kitų laboratorijų. Prieš kiekvieną reakciją suspensija gerai išmaišoma ir tiriama mikroskopu su tamsaus lauko kondensatoriumi, siekiant nustatyti jos tankį. Norint atlikti RIF-abs, tamsiame matymo lauke būtina suspensija, kurioje būtų 40-60 treponemų, jei yra tirštesnė suspensija, ją reikia praskiesti.

Kaip RIF-abs sorbentas gali būti naudojamas ultragarsinis treponeminis RBC antigenas, pagamintas Kauno įmonės SSRS Sveikatos apsaugos ministerijos bakterijų preparatų gamybai. Tai kultivuotų Treponema pallidum V, VII, VIII, IX ir Reiter padermių, sunaikintų ultragarsu, mišinio suspensija. Kiekviena sorbento serija turi būti titruojama prieš naudojant RIF-abs diagnostikos tikslais.

Sorbentų titravimas

Sorbentai titruojami pacientų, sergančių sifiliu, kraujo serumuose, duodant staigų (4+) ir silpnai (2+) teigiamą rezultatą RIF, praskiedus 1:5, taip pat asmenų, kurių kraujo serume nėra sifilinė infekcija, duodanti neigiamą RIF-5 rezultatą ir nespecifinį teigiamą (2+ ar daugiau).

Sorbento titro nustatymo pavyzdys

Visas sorbentas skiedžiamas fosfatiniu buferiu, pH = 7,2, 2, 3, 4 ar daugiau kartų. Iš pacientų, sergančių sifiliu, paimkite 3 kraujo serumus, iš kurių vienas duoda stipriai teigiamą (4+) RIF-5 rezultatą, 2 – silpnai teigiamą (2+) ir 5 kraujo serumus iš žmonių, nesergančių sifiliu, iš kurių 3 pateikti nespecifinius rezultatus ir RIF-5 (2+ ar daugiau). Visas kraujo serumas 5 kartus skiedžiamas sorbentu, 2, 3, 4 ar daugiau kartų praskiedžiamas fosfatiniu buferiu. Tada reakcijoje tiriamas kraujo serumas. Atsižvelgus į gautus rezultatus, parenkamas sorbento skiedimas, kuriame sifiliu sergančių pacientų sorbuotas kraujo serumas išlaiko teigiamumo laipsnį, panašų į tą, kuris gaunamas atskiestus fosfatiniu buferiu, o laisvų asmenų kraujo serumai. nuo sifilinės infekcijos nesukelia švytėjimo. Šis sorbento praskiedimas yra jo titras.

Sorbento titras šiuo atveju buvo praskiedimas 1:3, kai visi sifiliu sergančių pacientų kraujo serumai išlaikė kontrolinėje gautą teigiamumo laipsnį ir tuo pačiu nespecifinį nesifilinio kraujo serumo teigiamumą. buvo patikimai pašalintas.

Anti-rūšinis liuminescencinis serumas

Norint ištirti žmogaus kraujo serumą RIF-abs, reikalingas fluorochromu pažymėtas gyvūnų, imunizuotų žmogaus serumo baltymu, kraujo serumas. Liofilizuotas liuminescencinis serumas steriliomis sąlygomis ištirpinamas distiliuotame vandenyje, kurio tūris nurodytas ant ampulių etiketės, supilamas į sterilų mėgintuvėlį su guminiu kamščiu ir naudojimo metu laikomas 4°C temperatūroje 1-2 mėnesius.

Reakcijos dieną reikalingas šio serumo kiekis titru praskiedžiamas distiliuotu vandeniu. Etiketėje nurodytas darbinis serumo skiedimas netinka reakcijai sifilio serodiagnostikos tikslais sukelti, todėl kiekvienos serijos titras turi būti nustatomas iš naujo.

Lentelė Nr.13

Sorbento titravimo rezultatai

Ištirtas kraujo serumas	RIF-5 rezultatai
	Kraujo serumo skiedimas buferiu santykiu 1:5 (K)	Kraujo serumo skiedimas 1:5 praskiedus sorbentą
		1: 2	1: 3	1: 4
Sergančiojo sifiliu kraujo serumas
N 1	4+	3+	4+	4+
N 2	2+	1+	2+	2+
N 3	2+		2+	2+
Nesifilinis kraujo serumas
N 1	3+		1+	2+
N 2	2/3+			2+
N 3	2+			2+
N 4	2+			2+
N 5

Anti-rūšinio liuminescencinio serumo titravimas

Paimkite 5 kraujo serumus iš pacientų, sergančių sifiliu, ir 5 kraujo serumus iš sveikų žmonių, 5 kartus praskieskite sorbentu (atsižvelgiant į jo titrą) ir atlikite reakciją II fazėje naudodami įvairius liuminescencinio serumo skiedimus prieš serijos žmogaus serumo globulinus. kurio titras nustatomas. Reikėtų atsižvelgti į tai, kad šiuo metu pavadinto IEM gaminamų liuminescencinių serumų titras. N.F. Gamaleya, nustatant RIF-abs svyruoja nuo 1:100 iki 1:140. Atsižvelgiant į reakciją, reikia atsižvelgti į preliminarų liuminescencinio serumo titrą, kad praskiedimas, kai naudojamas teigiamas kraujo serumas, geras treponemų švytėjimas buvo gautas, o su neigiama antigeno liuminescencija nebuvo gauta. Didesnis liuminescencinio serumo praskiedimas nei titras sumažina reakcijos jautrumą, o mažesnis praskiedimas sumažina specifiškumą. Nustačius preliminarų titrą, jį reikėtų išsiaiškinti iki daugiau teigiami ir neigiami kraujo serumai. Galutiniu titru galima laikyti tą, kuris ištirtas 100 kraujo serumų, iš kurių bent 20 turėtų būti iš pacientų, sergančių sifiliu.

Siekiant išvengti daigumo, atskiedus sausą liuminescencinį serumą distiliuotu vandeniu, į jį reikia įpilti mortiolato 1 tūrio jo tirpalo 1: 1000–9 tūrių liuminescencinio serumo greičiu. Vartojant naujas tos pačios serijos ampules, titras turi būti tikrinamas ir patikslintas tik dėl 10 akivaizdžiai teigiamų ir neigiamų kraujo serumų.

Liuminescencinio priešrūšinio serumo preliminaraus titro nustatymo pavyzdys

Paruošiama 60 preparatų, sunumeruoti nuo 1 iki 60. Paimama 10 kraujo serumų - 5 sergančiųjų sifiliu, 5 sveikų žmonių. Visas kraujo serumas skiedžiamas 5 kartus titruotu sorbentu.

Ant vaistų, kurių numeriai 1-10, 11-20, 21-30, 31-40, 41-50, 51-60, I reakcijos fazėje naudojami tie patys 10 kraujo serumų, praskiestų 5 kartus sorbentu. II reakcijos fazėje liuminescencinis serumas, praskiestas santykiu 1:100, taikomas 1-10 vaistų, 1:110 - 11-20, 1:120 - 21-30, 1:130 - 31-40, 1:41-50 : 140, 51–60 – 1: 150.

RIF-abs nustatymo technika

Preparatai ruošiami iš antigeno ant plonų, gerai nuriebalintų stiklelių, ant nugaros pusė kurie stiklo pjaustytuvu sužymėti į 0,7 cm skersmens apskritimus (10 apskritimų ant 1 stiklelio). Apskritimo viduje ant stiklo užtepama Treponema pallidum antigeno suspensija. Užsandarintas Pasteur pipetės galas sukamaisiais judesiais suspensija paskirstoma apskritime, džiovinama ore ir fiksuojama 10 minučių chemiškai gryname acetone. Tada vaistai sunumeruojami. Inaktyvuotas tiriamasis kraujo serumas 5 kartus skiedžiamas sorbentu, praskiestu titru buferiniu tirpalu. Į stovą dedami keli mėgintuvėliai, kurių skaičius ir skaičius atitinka tiriamų kraujo serumų skaičių ir skaičių. Pipete įpilkite 0,2 ml praskiesto sorbento į mėgintuvėlius, tada įpilkite 0,05 ml viso tiriamojo kraujo serumo ir gerai išmaišykite. Kraujo serumą galima atskiesti Florinsky aparatu. Ant antigeno užtepamas sorbentu praskiestas kraujo serumas, kad tepinėlis tolygiai pasidengtų, o preparatai patalpinami į drėgną kamerą, kuri uždaroma dangteliu ir 30 minučių dedama į 37° temperatūros termostatą (I fazė). reakcija). Po pirmos fazės preparatai kruopščiai nuplaunami 2 porcijomis fosfatinio buferio, o preparatai dedami į antrąją dalį 10 minučių, išdžiovinami, po to vėl dedami į drėgną kamerą, supilamas liuminescencinis serumas, praskiestas titru. užtepama ir paliekama kambario temperatūroje 30 minučių (II fazės reakcijos). Antrosios fazės pabaigoje preparatai plaunami fosfatiniu buferiu, kaip aprašyta aukščiau, išdžiovinami ir ant tepinėlių paviršiaus užlašinamas lašas neliuminescencinės imersinės alyvos (dimetilftalato).

Preparatų tyrimas atliekamas fluorescenciniu mikroskopu su DRSh-250 gyvsidabrio-kvarco lempa su panardinamąja sistema, 4X arba 5X okuliaru, SZS-7 arba 14, FS-1 filtrais. BS-8 ir ZhS-18 arba T-2N. Į reakciją atsižvelgiama vertinant Treponema pallidum švytėjimą. Kraujo serumai, suteikiantys 4+, 3+ ir 2+ švytėjimą, laikomi teigiamais RIF-abs. Ryškiai žaliai geltonas švytėjimas vertinamas 4+, ryškus - 3+, silpnas švytėjimas - 2+. Neigiamais laikomi kraujo serumai, kurie suteikia švytėjimą 1+ (preparate esantys treponema dažomi intensyviau nei fonas) arba jo nesuteikia.

Kiekvienoje RIF-abs sąrankoje turi būti naudojami šie valdikliai:

Stipri teigiama kontrolė. Sergančiojo sifiliu kraujo serumas, 5 kartus praskiedus buferiu suteikiantis liuminescenciją 4+. Praskiedus sorbentu 5 kartus, kraujo serumas neturėtų prarasti savo pozityvumo daugiau nei 1+.

Silpna teigiama kontrolė. Viso arba atskiesto paciento, sergančio sifiliu, kraujo serumas, kuris 5 kartus atskiedus buferiu suteikia silpną antigeno liuminescencijos laipsnį 2+. Atskiedus sorbentu, jo pozityvumas turi išlikti.

Nespecifinė kontrolė. Nesifilinis kraujo serumas, kuris atskiedus buferiu suteikia fluorescenciją mažiausiai 2+. Praskiedus sorbentu, jo pozityvumas turėtų būti pašalintas.

Antigeno, sorbento, liuminescencinio serumo kontrolę galima įdiegti tik naudojant naujas šių ingredientų serijas.

RIF-abs atlikimo su kapiliariniu krauju metodika

RIF-abs galima atlikti ne tik kraujo serumu, bet ir krauju, paimtu iš piršto. Ši RIF-abs modifikacija gali būti naudojama tiriant vaikus dėl sifilio, kai suaugusiems sunku paimti kraują iš venos ir masiškai tiriant įvairias populiacijas dėl sifilio.

Statant RIF-abs su krauju, naudojami tie patys reakcijos ingredientai, kaip ir statant RIF-abs su kraujo serumu (antigenas, sorbentas, liuminescencinis serumas). Liuminescencinio serumo titras nustatomas pagal pirmiau pateiktą schemą, tačiau vykstant reakcijai su krauju. Pradūrus paciento pirštą, mikropipete iki 0,1 ml žymės paimamas tyrimui skirtas kraujas, greitai pučiamas į mėgintuvėlį, kuriame yra 0,3 ml distiliuoto vandens, pipete kruopščiai išmaišomas ir filtruojamas per popierinį filtrą, suvilgytą distiliuotu vandeniu. Reakciją su atskiestu krauju galima atlikti arba paėmimo dieną, arba po 1-2 dienų, jei jis laikomas 4°C temperatūroje.

Prieš pat reakciją į visus kraujo mėginius, įtrauktus į reakciją, įpilama 0,1 ml viso sorbento, sumaišoma pipete ir suplakama ir 30 minučių pastatoma į 37° temperatūros termostatą. Tada sorbentu apdorotas kraujas dedamas ant antigeno tepinėlių ir dedamas į drėgną 37° temperatūros kamerą (1 reakcijos fazė). Pasibaigus ekspozicijos laikotarpiui, preparatai plaunami pirmąja fosfatinio buferio dalimi, kad ant stiklelių neliktų kraujo pėdsakų, ir dedami į antrąją buferio dalį 10 minučių. Išdžiovinus tepinėlius, atliekama II reakcijos fazė. Šiuo atveju preparatams taikomas liuminescencinis serumas prieš žmogaus globulinus, praskiestas pagal šiai RIF modifikacijai nustatytą titrą. Stiklai šlapioje kameroje vėl dedami į 37° termostatą.

Po 30 minučių stikleliai vėl plaunami 2 porcijomis fosfatinio buferio 10 minučių, džiovinami ir tvirtinami fluorescencinei mikroskopijai. Vaistų tyrimas ir reakcijos rezultatų registravimas atliekamas taip pat, kaip ir atliekant RIF-abs su kraujo serumu.

RIF-200 nustatymo metodika

RIF-abs ir RIF-200 nustatymo metodas yra panašus. Nustatant RIF-200, tiriamojo kraujo serumo apdorojimas, antigeno paruošimas, antirūšinio liuminescencinio serumo paruošimas ir jo titravimas atliekamas taip pat, kaip ir nustatant RIF-abs. Reikėtų tik atsižvelgti į tai, kad šiuo metu RIF-200 gaminamo liuminescencinio serumo titrai svyruoja nuo 1:20 iki 1:50.

RIF-200 nustatymo technika

Tiriamasis kraujo serumas 200 kartų praskiedžiamas fosfatiniu buferiu. Tam į stovą dedamos 3 eilės mėgintuvėlių, kurių skaičius ir numeracija kiekvienoje eilutėje atitinka tiriamų kraujo serumų skaičių ir numeraciją darbo knygelėje. Pirmoje eilėje pilamas viso tiriamojo kraujo serumas, antroje eilėje į mėgintuvėlius pilama 0,45 ml buferio, trečioje - 0,95 ml buferio. Antroje eilėje paruošiamas 10 kartų praskiestas kraujo serumas, kuriam iš kiekvieno pirmosios eilės mėgintuvėlio atskira 1 ml graduota pipete paimama po 0,05 ml tiriamojo kraujo serumo, perpilama į atitinkamą antrą eilutę ir sumaišyti su ten esančiu buferiu. Iš kiekvieno antros eilės mėgintuvėlio ta pačia pipete perpilkite 0,05 ml 10 kartų praskiesto tiriamojo kraujo serumo į atitinkamą trečios eilės mėgintuvėlį ir gaukite 200 kartų praskiedimą.

Nustatant reakciją, 200 kartų praskiestas tiriamojo kraujo serumas užtepamas ant drėgnoje kameroje patalpintų vaistų, kad jų numeriai, nurodyti mėgintuvėliuose, atitiktų skaičius ant stiklelių. Preparatus užtepus kraujo serumu, drėgna kamera 30 minučių dedama į 37° temperatūros termostatą (I reakcijos fazė). Tada preparatai 10 minučių plaunami 2 dalimis buferio ir džiovinami. Po to jie vėl dedami į drėgną kamerą ir ant visų užtepamas liuminescencinis serumas, praskiestas titru (II reakcijos fazė). Antroji fazė atliekama 30 minučių kambario temperatūroje, po to preparatai 10 minučių plaunami, džiovinami ir montuojami fluorescencinei mikroskopijai.

Į RIF-200 rezultatus atsižvelgiama taip pat, kaip ir į RIF-abs.

Tuo atveju, kai gydytojai domisi fluorescencinių antikūnų titrais paciento kraujo serume, RIF-abs ir RIF-200 turėtų būti skiriami nuosekliai praskiedus tiriamojo kraujo serumą, o fluorescencinių antikūnų titras turėtų būti laikomas didžiausiu kraujo serumas, kuris vis tiek duoda teigiamą reakcijos rezultatą. Įprasta titrą žymėti skaičiumi, apibūdinančiu tiriamojo kraujo serumo praskiedimo laipsnį, pavyzdžiui, 5, 10, 20, 40 ir kt. (RIF-abs) arba 200, 400, 800 ir kt. (RIF-200).

Nustatant abi reakcijos modifikacijas, tiriamojo kraujo serumui atskiesti ir preparatams po I ir II fazių plauti turi būti naudojamas tokios sudėties fosfatinis buferis: 1 litras distiliuoto vandens, 6,8 g natrio chlorido, 1,48 g dipakeisto natrio fosfato, 0,43 g monopakeisto kalio fosfato (PH = 7,2). Paruoštas tirpalas laikomas kambario temperatūroje ne ilgiau kaip savaitę.

Dėl galimybės gauti neigiamų rezultatų, kai yra fluorescencinių antikūnų, gydymo penicilinu metu kraujo ir serumo RIF-abs ir RIF-200 tyrimų negalima atlikti.

RIF-t nustatymo metodika

Ankstyva sifilio sukelto nervų sistemos pažeidimo diagnostika yra aktuali problema kovojant su šia liga. Atsižvelgiant į tai, kad RIF-c yra jautresnis nei visi kiti sifilio smegenų skysčio diagnozei naudojami tyrimai, ši RIF modifikacija gali būti rekomenduojama diagnozuojant sifilinius centrinės nervų sistemos pažeidimus sergant visų formų sifiliu.

Norint ištirti RIF-c, naudojamas tas pats antigenas, liuminescencinis serumas, kaip ir tiriant RIF-abs ir RIF-200 su kraujo serumu. Fluorescuojančių antikūnų nustatymas smegenų skystyje ir kraujo serume bei reakcijos registravimas taip pat panašus.

Smegenų skystis į reakciją patenka neinaktyvuotas ir nepažeistas. Prieš pradedant reakciją, jis gali būti laikomas šaldytuvo šaldiklio skyriuje mėgintuvėliuose su guminiais kamščiais iki 2 savaičių. Atšildymas atliekamas kambario temperatūroje.

RIF-t nustatymo technika

Reakcijos į antigeną I fazėje uždedama 0,05 ml neskiesto tiriamojo smegenų skysčio, preparatai patalpinami į drėgną kamerą 30 minučių kambario temperatūroje. Tada jie 10 minučių plaunami fosfatiniu buferiu, pH = 7,2, ir džiovinami. II fazėje preparatams tepamas praskiestas liuminescencinis serumas, kuris titruojamas, kai nustatoma reakcija su smegenų skysčiu. Preparatai 30 minučių laikomi kambario temperatūroje drėgnoje kameroje, nuplaunami, išdžiovinami ir montuojami fluorescencinei mikroskopijai.

Klaidų šaltiniai

1. Reagentų paruošimo, laikymo ir reakcijos nustatymo sąlygų nesilaikymas.

2. Žema liuminescencinio serumo kokybė ir netikslus jo titro nustatymas.

3. Bandomosios medžiagos arba liuminescencinio serumo užtepimas nustatant reakciją ne į vaistą, o į kitą stiklelio pusę.

4. Neteisingas apšvietimo nustatymas fluorescenciniame mikroskope.

5. Žema antigeno kokybė.