Primārā sifilisa gadījumā tiek izmeklēti šankroidālie izdalījumi vai punktveida limfmezgli, lai noteiktu treponēmu pallidum. Sekundārā sifilisa gadījumā materiāls tiek ņemts no erodētu papulu virsmas uz ādas, gļotādām, plaisām utt. Pirms materiāla uzņemšanas, lai attīrītu no dažādiem piesārņotājiem, bojājumu virsmu (erozijas, čūlas, plaisas). ) rūpīgi jānoslauka ar sterilu vates marles tamponu, kas samitrināts izotoniskā nātrija hlorīda šķīdumā vai izraksta losjonus ar tādu pašu šķīdumu. Notīrīto virsmu nosusina ar sausu tamponu un ar platīna cilpu vai lāpstiņu nedaudz kairina perifērās zonas, tajā pašā laikā ar pirkstiem gumijas cimdā viegli saspiežot elementa pamatni, līdz parādās audu šķidrums (serums), no kā tiek sagatavota sagatavošanās pētniecībai. Audu šķidruma iegūšana ir svarīga sifilisa diagnosticēšanai, jo treponema pallidums atrodas limfātisko kapilāru lūmenos, audu plaisās ap limfātiskajiem un asinsvadiem.

Reģionālo limfmezglu punkcija

Ādu virs limfmezgliem apstrādā ar 96% spirta un 3-5% spirta joda šķīdumu. Pēc tam izmantojiet kreisās rokas 1. un 2. pirkstu, lai fiksētu limfmezglu. Labā roka paņemiet sterilu šļirci ar dažiem pilieniem izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma, ko injicē paralēli gareniskā ass limfmezgls. Adata tiek virzīta dažādos virzienos uz mezgla kapsulas pretējo sienu un lēnām tiek injicēts šļirces saturs. Ar kreisās rokas pirkstiem viegli iemasē limfmezglu. Lēnām izvelkot adatu, vienlaikus tiek izvilkts šļirces virzulis, aspirējot limfmezgla saturu. Materiālu uzklāj uz stikla priekšmetstikliņa (ja materiāla daudzums ir mazs, pievieno pilienu izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma) un pārklāj ar segstikliņu. Vietējās zāles izpēte tiek veikta tumšā redzes laukā, izmantojot gaismas optisko mikroskopu ar tumšā lauka kondensatoru (40, 7x, 10x vai 15x objektīvs). Treponema pallidum var atrast arī krāsainos preparātos. Krāsojot pēc Romanovska-Giemsas, gaiši treponēma tiek iekrāsota rozā, pēc Fontana un Morozova - brūna (melna), pēc Burri metodes uz tumša fona atklājas nekrāsota treponēma.

Seroloģiskā diagnoze

Nozīme sifilisa diagnosticēšanā, ārstēšanas efektivitātes novērtēšanā, izārstēšanas kritērija noteikšanā, slēpto, izturīgas formas piešķirtas standarta (klasiskām) un specifiskām seroloģiskām reakcijām. Standarta vai klasiskās seroloģiskās reakcijas (SSR) ietver:

• Vasermana reakcija (WR),
• Kāna un Saksa-Vitebska sedimentārās reakcijas (citoholiskas),
• reakcija uz stiklu (ekspress metode),

konkrēti:

• Treponema pallidum imobilizācijas reakcija (treponema pallidum reakcija),
• imunofluorescences reakcija (RIF).

Vasermana reakcija (WR)

- izstrādājis A. Vasermans kopā ar A. Neiseru un K. Bruku 1906. gadā. Vasermana reakcija balstās uz komplementa saistīšanās fenomenu (Bordē-Džengo reakcija) un ļauj noteikt anti-lipīdu antivielas (reagins). Saskaņā ar modernas idejas, Vasermana reakcijā tiek noteiktas antivielas pret makroorganisma lipīdiem, nevis treponema pallidum, un reakcija atklāj autoimūnu procesu, ko izraisa makroorganisma audu denaturācija ar treponema pallidum, veidojoties lipoproteīnu kompleksam. (konjugāts), kurā lipīdi (haptēni) ir noteicošais faktors.

RV parasti tiek diagnosticēts ar diviem vai trim antigēniem. Visbiežāk tiek izmantots ļoti jutīgs kardiolipīna antigēns (liellopu sirds ekstrakts, kas bagātināts ar holesterīnu un lecitīnu) un treponēmiskais antigēns (anatogēnas kultivētas treponemes pallidum suspensija ar ultraskaņu). Kopā ar pacienta seruma atjaunošanos šie antigēni veido imūnkompleksu, kas spēj adsorbēt un saistīt komplementu. Lai vizuāli noteiktu izveidoto kompleksu (reagins + antigēns + komplements), kā indikators tiek izmantota hemolītiskā sistēma (aitas eritrocītu maisījums ar hemolītisko serumu). Ja reakcijas 1. fāzē ir saistīts komplements (reagins + antigēns + komplements), hemolīze nenotiek - sarkanās asins šūnas izgulsnējas viegli pamanāmās nogulsnēs (PB pozitīvas). Ja 1. fāzē komplements nav saistīts, jo testa serumā nav reagīnu, to izmantos hemolītiskā sistēma un notiks hemolīze (RT negatīva). Hemolīzes smaguma pakāpe, stadējot RV, tiek novērtēta ar plusiem: pilnīga hemolīzes neesamība ++++ vai 4+ (RV ir krasi pozitīvs); tikko sākusies hemolīze +++ vai 3+ (RV pozitīvs); nozīmīga hemolīze ++ vai 2+ (RV vāji pozitīva); neskaidrs hemolīzes attēls ± (RV ir apšaubāms); pilnīga hemolīze - (Wassermann reakcija negatīva).

Papildus PB kvalitatīvajam novērtējumam tiek veikts kvantitatīvs novērtējums ar dažādiem seruma atšķaidījumiem (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Reagīna titru nosaka maksimālais atšķaidījums, kas joprojām dod krasi pozitīvu (4+) rezultātu. RV kvantitatīvā stadija ir svarīga dažu sifilīta infekcijas klīnisko formu diagnostikā, kā arī ārstēšanas efektivitātes uzraudzībā. Pašlaik Vasermana reakcija tiek veikta ar diviem antigēniem (kardiolipīnu un treponēmu izteikto Reitera celmu). Parasti RV kļūst pozitīva 5-6 nedēļas pēc inficēšanās 25-60% pacientu, 7-8 nedēļās - 75-96%, 9-19 nedēļās - 100%, lai gan pēdējie gadi dažreiz agrāk vai vēlāk. Tajā pašā laikā reagīna titrs pakāpeniski palielinās un sasniedz maksimālo vērtību (1:160-1:320 un vairāk) ģeneralizētu izsitumu (sekundāra svaiga sifilisa) gadījumā. Ja RV ir pozitīvs, tiek diagnosticēts primārais seropozitīvs sifiliss.
Ar sekundāro svaigu un sekundāra recidivējoša sifilisa gadījumā RV ir pozitīva 100% pacientu, bet noplicinātiem pacientiem ar novājinātu imunitāti var novērot negatīvu rezultātu. Pēc tam reagīna titrs pakāpeniski samazinās un sekundāra recidivējoša sifilisa gadījumā tas parasti nepārsniedz 1:80-1:120.
Par terciāro sifilisu RV ir pozitīvs 65-70% pacientu, un parasti tiek novērots zems reagīna titrs (1:20-1:40). Vēlīnās sifilisa formās (sifiliss iekšējie orgāni, nervu sistēma) pozitīvs RV tiek novērots 50-80% gadījumu. Reagin titrs svārstās no 1:5 līdz 1:320.
Par latentu sifilisu pozitīvs RV tiek novērots 100% pacientu. Reagīna titrs ir no 1:80 līdz 1:640 un ar vēlīnu latentu sifilisu no 1:10 līdz 1:20. Strauja reagīna titra samazināšanās (līdz pilnīgam negatīvismam) ārstēšanas laikā norāda uz ārstēšanas efektivitāti.

Vasermana reakcijas trūkumi- nepietiekama jutība (in sākuma stadija primārais sifiliss negatīvs). Negatīvs tas ir arī 1/3 pacientu, ja viņi iepriekš ir ārstēti ar antibiotikām, pacientiem ar terciāro aktīvo sifilisu ar ādas un gļotādu bojājumiem, osteoartikulāro aparātu, iekšējo orgānu, centrālās nervu sistēmas bojājumiem un ar vēlu iedzimtu. sifiliss.
Konkrētības trūkums- Vasermana reakcija var būt pozitīva cilvēkiem, kuriem iepriekš nav bijis un nav sifilisa. Jo īpaši viltus pozitīvus (nespecifiskus) RV rezultātus novēro pacientiem, kuri cieš no sistēmiskas sarkanās vilkēdes, spitālības, malārijas, ļaundabīgiem audzējiem, aknu bojājumiem, plaša miokarda infarkta un citām slimībām, un dažreiz arī pilnīgi veseliem cilvēkiem.
Tiek konstatēta īslaicīga kļūdaini pozitīva Vasermana reakcija dažām sievietēm pirms vai pēc dzemdībām, narkotiku lietotājiem, pēc anestēzijas vai alkohola lietošanas. Kā likums, viltus pozitīvs RV ir vāji izteikts, bieži ar zemu reagīna titru (1:5-1:20), pozitīvu (3+) vai vāji pozitīvu (2+). Masveida seroloģisko aptauju laikā viltus pozitīvu rezultātu biežums ir 0,1-0,15%. Lai pārvarētu nepietiekamu jutību, viņi izmanto aukstuma testu (Kolyar reakcija), un tajā pašā laikā to veic ar citām seroloģiskām reakcijām.

Kāna un Saksa-Vitebska nogulumu reakcijas

Vasermana reakciju izmanto kombinācijā ar diviem nogulumu reakcijas (Kāns un Sakss-Vitebskis), inscenējot, tiek sagatavoti koncentrētāki antigēni. Ekspress metode (mikroreakcija uz stikla) ​​- attiecas uz lipīdu reakcijām un ir balstīta uz nokrišņu reakciju. To ievieto ar specifisku kardiolipīna antigēnu, no kura 1 pilienu sajauc ar 2-3 pilieniem testa asins seruma speciālas stikla plāksnes iedobēs.
Priekšrocība- atbildes saņemšanas ātrums (30-40 minūtēs). Rezultātus novērtē pēc nogulsnēto nogulšņu daudzuma un pārslu lieluma. Izteiksmīgums tiek definēts kā CSR - 4+, 3+, 2+ un negatīvs. Jāatzīmē, ka viltus pozitīvi rezultāti tiek novēroti biežāk nekā ar RV. Parasti ekspresmetodi izmanto masveida sifilisa izmeklējumiem, izmeklējumiem klīniskās diagnostikas laboratorijās, somatiskajās nodaļās un slimnīcās. Pamatojoties uz ekspresmetodes rezultātiem, sifilisa diagnostika ir aizliegta, tā lietošana grūtniecēm, donoriem, kā arī kontrolei pēc ārstēšanas ir izslēgta.

Treponema pallidum imobilizācijas reakcija (TPI)

Treponema pallidum imobilizācijas reakcija (TPI)- 1949. gadā ierosināja R. W. Nelsons un M. Mayer. Tas ir visprecīzākais sifilisa diagnostikas tests. Tomēr ražošanas sarežģītība un augstās izmaksas ierobežo tā izmantošanu. Pacientu asins serumā tiek noteiktas video specifiskas antivielas (imobilizīni), kas komplementa klātbūtnē izraisa Treponema pallidum nekustīgumu. Antigēns ir dzīvs patogēns Treponema pallidum, kas izolēts no trušiem, kas inficēti ar sifilisu. Izmantojot mikroskopu, tiek saskaitīta zaudētā kustība (imobilizētā) Treponema pallidum un novērtēti RIBT rezultāti: Treponema pallidum imobilizācija no 51 līdz 100% ir pozitīva; no 31 līdz 50% - vāji pozitīvs; no 21 līdz 30% - apšaubāmi; no 0 līdz 20% - negatīvs.
RIBT ir svarīgi, kad diferenciāldiagnoze atšķirt viltus pozitīvas seroloģiskās reakcijas no sifilisa izraisītām reakcijām. Vēlu kļūst pozitīvs nekā RV, RIF un tāpēc diagnostikai dažādas formas to neizmanto sifilisa ārstēšanai, lai gan sifilisa sekundārajā periodā tas ir pozitīvs 85-100% pacientu.
Sifilisa terciārajā periodā ar iekšējo orgānu, muskuļu un skeleta sistēmas un nervu sistēmas bojājumiem RIBT ir pozitīvs 98-100% gadījumu ( RV bieži ir negatīvs).
Jāatceras, ka RIBT var būt kļūdaini pozitīvs, ja testa serums satur treponemocīdu zāles (penicilīnu, tetraciklīnu, makrolītus utt.), kas izraisa Treponema pallidum nespecifisku imobilizāciju. Šim nolūkam asinis tiek pārbaudītas uz RIBT ne agrāk kā 2 nedēļas pēc antibiotiku un citu medikamentu lietošanas beigām.
RIBT, tāpat kā RIF, ārstēšanas procesā tiek lēni negatīvs, tāpēc ārstēšanas procesā to neizmanto kā kontroli.

Imunofluorescences reakcija (RIF)

Imunofluorescences reakcija (RIF)- 1954. gadā izstrādāja A.Kūns un pirmo reizi sifilīta infekcijas diagnostikai izmantoja Dīkons, Falkons, Hariss 1957. gadā. RIF pamatā ir netieša metode fluorescējošu antivielu noteikšanai. Ražošanas antigēns ir audu patogēns Treponema pallidum, kas fiksēts uz stikla priekšmetstikliņiem, uz kuriem tiek uzklāts testa serums. Ja testējamais serums satur prettreponēmas antivielas, kas saistītas ar IgM un IgG, tās spēcīgi saistās ar antigēnu – treponēmu, ko nosaka fluorescējošā mikroskopā, izmantojot pretsugas ("pretcilvēka") fluorescējošo serumu.
RIF rezultāti tiek ņemti vērā pēc bālas treponēmas mirdzuma intensitātes preparātā (dzeltenzaļš mirdzums). Ja serumā nav antitreponēmu antivielu, treponema pallidum netiek atklāta. Antivielu klātbūtnē tiek konstatēta bāla treponēma, kuras pakāpe ir izteikta plusos: 0 un 1+ - negatīva reakcija; no 2+ līdz 4+ - pozitīvs.
RIF attiecas uz grupu treponēmiskām reakcijām, un to ievada testa seruma 10 un 200 reižu atšķaidījumā (RIF-10 un RIF-200). RIF-10 tiek uzskatīts par jutīgāku, taču bieži tiek iegūti nespecifiski pozitīvi rezultāti nekā ar RIF-200 (tam ir augstāka specifika). Parasti, RIF kļūst pozitīvs agrāk nekā RV- pozitīvs primārā seronegatīvā sifilisa gadījumā 80% pacientu, 100% sifilisa sekundārajā periodā, vienmēr pozitīvs latentā sifilisa gadījumā un 95-100% gadījumu vēlīnās formās un iedzimtā sifilisa gadījumā.
RIF specifika palielinās pēc testa seruma pirmapstrādes ar sorbent-ultraskaņas treponēmu antigēnu, kas saista grupas antivielas (RIF - abs).
Indikācijas RIBT un RIF- latenta sifilisa diagnoze, lai apstiprinātu lipīdu reakciju kompleksa specifiku, ja ir aizdomas par sifilītu, pamatojoties uz pozitīvu RV. Pozitīvs RIBT un RIF liecina par latentu sifilisu. Kļūdaini pozitīva RT gadījumā ar dažādas slimības(sistēmiskā sarkanā vilkēde, ļaundabīgi audzēji utt.) un ja atkārtoti RIBT un RIF rezultāti ir negatīvi, tas norāda uz RV nespecifisko raksturu. Aizdomas par vēlīniem iekšējo orgānu, muskuļu un skeleta sistēmas, nervu sistēmas sifilītiskiem bojājumiem, ja pacientiem ir negatīvs RV. Aizdomas par primāro seronegatīvo sifilisu, kad pacientiem ar atkārtotiem pētījumiem par izdalījumiem no erozijas (čūlas) virsmas, punkciju no palielinātiem reģionālajiem limfmezgliem, treponema pallidum netiek konstatēta - šajā gadījumā tiek piešķirts tikai RIF - 10.
Pārbaudot personas ar negatīvu RV kuriem bija ilgstoši seksuāli un mājsaimniecības kontakti ar pacientiem ar sifilisu, ņemot vērā iespējamo iespēju nesenā pagātnē viņus ārstēt ar pretsifilīta līdzekļiem, kas izraisīja RV negatīvismu. Ar enzīmiem saistītais imūnsorbcijas tests (ELISA - enzīmu imūnsorbcijas tests) - metode, ko izstrādājuši E. Engvall et al., S. Avrames (1971). Būtība ir uz cietās fāzes nesēja virsmas sorbēta sifilīta antigēna apvienošana ar antivielu no pētāmā asins seruma un specifiska antigēna-antivielu kompleksa identificēšana, izmantojot ar enzīmu iezīmētu pretsugu imūno asins serumu. Tas ļauj vizuāli novērtēt ELISA rezultātus pēc substrāta krāsas izmaiņu pakāpes konjugātā iekļautā enzīma ietekmē. Neuzticami ELISA rezultāti var rasties sastāvdaļu nepietiekamas atšķaidīšanas, temperatūras un laika nosacījumu pārkāpuma, šķīdumu pH neatbilstības, laboratorijas stikla trauku piesārņojuma un nepareizas barotnes mazgāšanas tehnikas rezultātā.

Pasīvā hemaglutinācijas reakcija (RPHA)

Kā sifilisa diagnostikas testu piedāvājuši T.Rātlevs (1965,1967), T.Tomizava (1966). Reakcijas makromodifikācija tiek saukta par TRHA, mikromodifikācija ir MNA-TR, automatizētā versija ir AMNA-TR, reakcija ar poliurīnvielas makrokapsulām sarkano asins šūnu vietā ir MSA-TR. RPGA jutība un specifika ir līdzīga RIBT, RIF, bet RPGA ir mazāka jutība agrīnās sifilisa formās, salīdzinot ar RIF-abs, un lielāka jutība vēlākās iedzimta sifilisa formās. RPGA tiek piegādāta kvalitatīvā un kvantitatīvā versijā.

Asins savākšanas tehnika seroloģiskajiem testiem

Lai pētītu RV, RIF, RIBT, asinis no elkoņa kaula vēnas ņem tukšā dūšā vai ne agrāk kā 4 stundas pēc ēšanas, izmantojot sterilu šļirci vai vienu adatu (pēc gravitācijas). Savākšanas vietā āda tiek iepriekš apstrādāta ar 70% spirtu. Šļirce un adata jāmazgā ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu. 5-7 ml testa asiņu ielej tīrā, sausā, aukstā mēģenē. Uz mēģenes tiek pielīmēta tukša papīra lapa ar pacienta uzvārdu, iniciāļiem, slimības vēsturi vai ambulatorās kartes numuru un asins savākšanas datumu. Pēc asiņu ņemšanas mēģeni ievieto ledusskapī ar temperatūras apstākļi+4°+8°С līdz nākamajai dienai. Nākamajā dienā serumu nolej testēšanai. Ja asinis netiek lietotas nākamajā dienā, serums ir jāizlej no recekļa un jāuzglabā ledusskapī ne ilgāk kā 1 nedēļu. RIBT testēšanai mēģenei jābūt īpaši sagatavotai un sterilai. Ja tiek pārkāpti noteikumi par asins savākšanu pētniecībai, nosacījumu neievērošana var izraisīt rezultātu sagrozīšanu.
Nav ieteicams ņemt asins paraugus pārbaudei pēc ēšanas, dzeršanas vai dzeršanas medikamentiem, pēc dažādu vakcīnu ievadīšanas, laikā menstruālais cikls sieviešu vidū.
Pētījumiem ar ekspresmetodi asinis tika ņemtas no pirksta gala, kā to dara, ņemot ESR, bet asinis tika ņemtas no 1 kapilāra vairāk. Ekspres metodi var veikt arī ar asins serumu, kas iegūts ar venopunktūru. Ja ir nepieciešama asins analīze attālās laboratorijās, asiņu vietā var nosūtīt sauso serumu (sausā piliena metode). Lai to izdarītu, nākamajā dienā pēc asiņu ņemšanas serumu atdala no recekļa un ievelk sterilā šļircē 1 ml daudzumā. Pēc tam serumu 2 atsevišķu apļu veidā lej uz biezas rakstāmpapīra (vaska papīra vai celofāna) sloksnes, kuras izmērs ir 6x8 cm.Uz lapas brīvās malas uzraksta uzvārdu, subjekta iniciāļus un asins paraugu ņemšanas datumu. papīrs. Papīru ar serumu sargā no tiešiem saules stariem un atstāj istabas temperatūrā līdz nākamajai dienai. Serums izžūst mazu, spīdīgas dzeltenīgas stiklveida plēves loku veidā. Pēc tam papīra sloksnes ar žāvētu serumu tiek sarullētas kā farmaceitiskais pulveris un nosūtītas uz laboratoriju, norādot diagnozi un izmeklēšanas mērķi.

Seroloģiskā rezistence

Dažiem (2% vai vairāk) pacientiem ar sifilisu, neraugoties uz pilnīgu antisifilītu terapiju, pēc ārstēšanas beigām negatīvas seroloģiskās reakcijas palēninās (trūkst) līdz 12 mēnešiem vai ilgāk. Rodas tā sauktā seroloģiskā rezistence, kas pēdējos gados ir bieži novērota. Pastāv seroloģiskās rezistences formas:

• Taisnība(absolūts, beznosacījuma) - nepieciešams veikt papildu pretsifilītu ārstēšanu, apvienojot ar nespecifisku terapiju, lai palielinātu ķermeņa imūno spēkus.
• Radinieks- pēc pilnīgas ārstēšanas bāla treponēma veido cistas vai L formas, kas organismā atrodas zemu virulentā stāvoklī un rezultātā papildu ārstēšana nemaina seroloģisko reakciju rādītājus, īpaši RIF un RIBT.

Tajā pašā laikā cistu formās notiek nelieli vielmaiņas procesi, un cistu formu čaumalas ir svešs proteīns (antigēns). Lai pasargātu sevi, organisms ražo specifiskas antivielas, kas ir pozitīvas vai izteikti pozitīvas, ja tiek veiktas seroloģiskās reakcijas un nav slimības izpausmju. Ar L formām vielmaiņas procesi ir vairāk samazināti, un antigēnas īpašības nav vai ir nedaudz izteiktas. Specifiskas antivielas netiek ražotas vai tās ir nelielos daudzumos, seroloģiskās reakcijas ir vāji pozitīvas vai negatīvas. Jo ilgāks laika posms no inficēšanās brīža, jo lielāks skaits Treponema pallidums tiek pārveidotas par izdzīvošanas formām (cistām, sporām, L formām, graudiņiem), kurās antisifilīta terapija nav efektīva.

Pseidopretestība- pēc ārstēšanas, neskatoties uz pozitīvām seroloģiskām reakcijām, Treponema pallidum organismā nav. Organismā nav antigēna, bet turpinās antivielu veidošanās, kas tiek konstatētas seroloģisko reakciju laikā.
Seroloģiskā rezistence var attīstīties šādu iemeslu dēļ:

• nepietiekama ārstēšana, neņemot vērā slimības ilgumu un stadiju;
• nepietiekama deva un jo īpaši tādēļ, ka nav ņemts vērā pacientu ķermeņa svars;
• intervāla pārkāpums starp zāļu ievadīšanu;
• Treponema pallidum saglabāšana organismā neskatoties uz pilnvērtīgu specifiska ārstēšana, pateicoties rezistencei pret penicilīnu un citām ķīmijterapijas zālēm, ja ir slēpti, enstēti bojājumi iekšējos orgānos, nervu sistēmā, limfmezgli, kas nav pieejami antibakteriālas zāles(treponema pallidum bieži tiek konstatēta rētaudos daudzus gadus pēc terapijas beigām; treponema pallidum dažreiz tiek konstatēta limfmezglos 3-5 gadus pēc antisifilīta terapijas);
• aizsargspēku samazināšana dažādu slimību un intoksikāciju gadījumos (endokrinopātijas, alkoholisms, narkomānija utt.);
• vispārējs izsīkums (ēdot pārtiku ar sliktu vitamīnu, olbaltumvielu, tauku saturu).

Turklāt bieži tiek atklāts viltus seroloģisko reakciju pozitivitāte, kas nav saistīta ar sifilisa klātbūtni pacientiem un ko izraisa:

• pavadošā nespecifiskas slimības iekšējie orgāni, sirds un asinsvadu sistēmas traucējumi, reimatisms, endokrīnās un nervu sistēmas disfunkcija, smagas hroniskas dermatozes, ļaundabīgi audzēji;
• nervu sistēmas bojājumi (smagas traumas, smadzeņu satricinājums, garīgās traumas);
• grūtniecība; hroniskas intoksikācijas alkohols, nikotīna narkotikas; infekcijas slimības (malārija, tuberkuloze, vīrusu hepatīts, dizentērija, tīfs, vēdertīfs un recidivējošais drudzis).

Šie faktori var ietekmēt organisma imunoloģisko reaktivitāti gan sifilīta izpausmju aktīvās attīstības periodā, gan to regresijas laikā.

Laboratorijas diagnostika izmanto vairākus sifilisa testus vienlaikus, lai iegūtu visprecīzāko rezultātu. Tas aizņem vairāk laika, bet sniedz visprecīzāko atbildi.

Visbiežāk RIF analīzes rezultāts tiek parādīts skaitļos. Dekodēšanai ir šādi simboli:

• asas pozitīvs rezultāts apzīmē ar 4 plusiem (++++);
• pozitīvu rezultātu norāda 3 plusi (+++);
• vāji pozitīvs rezultāts ar 2 plusiem (++);
• apšaubāms rezultāts 1 plus (+);
• negatīvs rezultāts tiek apzīmēts ar 1 mīnus (-).

Sifilisa RIF rezultāts tiek parādīts arī procentos, kas ir atkarīgs no saistīto baktēriju kvantitatīvā rādītāja:

• ja rezultāts ir negatīvs, imobilizācija ir līdz 20%;
• ar vāji pozitīvu rezultātu imobilizācija svārstās no 20 līdz 50%;
• ar pozitīvu rezultātu imobilizācija ir virs 50%.

Ja rezultāts ir pozitīvs atbildi, tad tas norāda uz slimības klātbūtni.

Ja rezultāts vāji pozitīvs, tad tas norāda uz vienu atlikušo antivielu daudzumu asinīs.

Negatīvs rezultāts norāda uz treponema pallidum neesamību, kas nozīmē, ka pacients ir vesels.

Mūsu klīnikas pieredzējuši ārsti ātri un ar augstu precizitāti noteiks sifilisu. Mēs esam sociāli orientēti uz visiem iedzīvotāju segmentiem, tāpēc RIF analīzes izmaksas ir lētas. Cena ir norādīta mūsu vietnes tabulā.

Sifilisa seroloģiskajā diagnostikā ir ļoti svarīgi iegūt ticamu un precīzu rezultātu.

Lai uzlabotu datu kvalitāti, tiek veiktas noteiktas darbības:

• Testa serumu atšķaida 200 reizes (1:200), lai izvairītos no viltus pozitīvām reakcijām. Tad viņi saka, ka tas tiek veikts sifilisa pārbaude RIF 200.
• Citā variantā, atšķaidot serumu 1:5, papildus tiek izmantots īpašs absorbents, kas savāc “liekās” antivielas, lai tās neizkropļo rezultātus.

Treponēmu izmērs spēlē arī pētnieku rokās. Fluorescējošā mikroskopijā ir skaidri redzami lieli spirohetu mikrobu ķermeņi. Ja ar fosforu iezīmētās olbaltumvielas no seruma tiem “pieķeras”. Standartizēta antigēna un seruma izmantošana ļauj maksimāli palielināt RIF jutīgumu un specifiskumu sifilisa diagnostikā.

Privātās RIF analīzes iespējas: RIF absorbcija

Viens no alternatīvi veidi sauc par RIF-Abs. Tas atšķiras no parastās metodes ar zemo testa seruma atšķaidījumu - 1:5 pret 1:200, kā parasti.

Koncentrētais paraugs satur daudz aktīvo olbaltumvielu molekulu.

Lai izvairītos no jutīguma un palielinātu to, serumu apstrādā ar īpašu absorbentu, kas izgatavots no sifilītu spirohetu fragmentiem. Sorbents savāc pārāk aktīvas antivielas, un pēc tam paraugu apstrādā ar rūpniecisku ar fosforu iezīmētu serumu. Pateicoties šai iepriekšējai sagatavošanai, tiek likvidētas visas nevajadzīgās molekulas, kas varētu ietekmēt testa rezultātus.

Tas tiek novietots saskaņā ar šādām norādēm:

• Pozitīvs uz klīniskās pašsajūtas fona un bez infekcijas riska anamnēzes.
• Pozitīvs RV pacientiem ar hroniskām slimībām.
• Negatīvs RV, ja parādās simptomi, kas ir aizdomīgi par sifilisu.

Pirmie pozitīvie rezultāti parādās jau 15.-16. dienā no inficēšanās brīža. Ja reakcija mainās no pozitīvas uz negatīvu, tas liecina par pilnīgu sifilisa izārstēšanu. Kļūdaini pozitīva rezultāta iespējamība ir mazāka par 0,4%.

Šāda situācija var rasties, izmeklējot vēža slimniekus, alkoholiķus, grūtnieces un cilvēkus ar imūnsistēmas traucējumiem.

Zināma daļa ir saistīta ar tehniskām kļūdām, jo ​​ražošana ir diezgan sarežģīta. Ir gadījumi, kad ir jānošķir iedzimta patoloģija no iegūtās. To var izdarīt, ja meklējat dažādi veidi antivielas pacienta asinīs.

Antivielas pret M klases sifilisu (IgM) parādās drīz pēc inficēšanās un ir daudz ātrākas nekā IgG. Ļauj tos identificēt sifilisa RIF absorbcijas analīze IgM. Ja šīs reakcijas rezultāti ir pozitīvi, mēs varam runāt par nesenu infekciju. Tādā veidā var atšķirt atkārtotas inficēšanās gadījumus no recidīva vai konstatēt bērna inficēšanos pēc dzemdībām.

Pamatojoties uz šīs RIF analīzes metodes rezultātiem, tiek izdarīts arī secinājums par agrīna sifilisa ārstēšanas efektivitāti.

Ja jums ir aizdomas par sifilisu, sazinieties ar pieredzējušu venerologu.

Sifilisu pavada daudzi simptomi un ir liels skaits klīniskās formas. Tās atpazīšanas pamatā ir visaptveroša pacienta klīniskā un laboratoriskā izmeklēšana. Vispārīga analīze asinis sifilisa gadījumā satur maz informācijas, tāpēc tās neizmanto slimības diagnosticēšanai.

Analīzei var ņemt šādus materiālus:

• asinis no pirksta un vēnas;
• cerebrospinālais šķidrums - cerebrospinālais šķidrums;
• cietā šankra izdalīšanās (čūlas);
• reģionālo limfmezglu zonas.

Materiāla un diagnostikas metodes izvēle ir atkarīga no slimības stadijas. Par to, kādi testi tiek veikti attiecībā uz sifilisu, mēs runāsim nākamajā sadaļā.

Slimību laboratoriskās diagnostikas metožu klasifikācija

Sākotnējā stadijā varat izmantot bakterioskopisko metodi, kuras pamatā ir patogēna - Treponema pallidum - identificēšana mikroskopā. Nākotnē plaši tiek izmantoti seroloģiskie testi, kuru pamatā ir mikrobu antigēnu un organisma ražoto antivielu noteikšana bioloģiskajā materiālā.

Bakterioloģiskie pētījumi netiek veikti, jo mākslīgos apstākļos sifilisa izraisītājs ļoti slikti aug uz barības vielu barotnēm.

Visas treponēmas noteikšanas metodes, tas ir, sifilisa testu veidi, ir sadalītas divās lielās grupās:

1. Tiešā, kas tieši nosaka pašu mikrobu:

• tumšā lauka mikroskopija (treponēmu noteikšana uz tumša fona);
• RIT tests – trušu inficēšanās ar testa materiālu;
• polimerāze ķēdes reakcija(PCR), kas nosaka mikroorganisma ģenētiskā materiāla sadaļas.

2. Netiešā (seroloģiskā), pamatojoties uz antivielu noteikšanu pret mikrobu, ko organisms ražo, reaģējot uz infekciju.

Seroloģiskie testi ir sadalīti divās grupās

Ne-treponēma:

• komplementa fiksācijas reakcija ar kardiolipīna antigēnu (CCk);
• mikronogulsnēšanas reakcija (MPR);
• ātrā plazmas reagīna (RPR) tests;
• tests ar toluidīna sarkano.

Treponemāls:

• komplementa fiksācijas reakcija ar treponēmālo antigēnu (RSCT);
• Treponēmas imobilizācijas reakcija (RTI vai RIBT);
• imunofluorescences reakcija (RIF);
• reakcija pasīvā hemaglutinācija(RPGA);
• enzīmu imūntests (ELISA);
• imūnblotēšana.

Šo analīžu metodes ir diezgan sarežģītas, tāpēc mēs galvenokārt pievērsīsimies tam, kad tās tiek veiktas un cik precīzu informāciju tās sniedz.

Uzreiz teiksim, ka sifilisa diagnostikas pamatā ir seroloģiskās metodes. Kā sauc sifilisa pārbaudi: katrā gadījumā pārbaude var ietvert dažādas tehnikas. Tālāk mēs par tiem runāsim sīkāk.

Tiešie testi

To noteikšana mikroskopā pārliecinoši pierāda treponēmu klātbūtni. Sifilisa iespējamība sasniedz 97%. Taču mikrobus var konstatēt tikai 8 no 10 pacientiem, tāpēc negatīvs tests neizslēdz slimību.

Diagnoze tiek veikta periodos, kad ir šankre vai izsitumi uz ādas. Tieši šo infekcijas elementu izdalījumos viņi meklē slimības izraisītājus.

Efektīvāka, bet tajā pašā laikā dārgāka un sarežģīta analīze– treponēmu noteikšana pēc pirmapstrādes ar fluorescējošām antivielām. Tās ir vielas, kas “pielīp” mikrobiem un veido “spīdumu” mikroskopa laukā.

Metožu jutīgums samazinās, ilgstoši slimojot, ārstējot čūlas un izsitumus ar antiseptiķiem, kā arī pēc ārstēšanas.

Bioloģiskā metode RIT diagnosticēšanai ir ļoti specifiska, bet dārga, un rezultāts tiek iegūts tikai caur ilgu laiku kad inficētam dzīvniekam slimība attīstās. Pašlaik metode praktiski netiek izmantota, lai gan tā ir praktiski visprecīzākā no visām. Lieliska asins analīze sifilisam, lai noteiktu treponēmu ģenētisko materiālu, ir PCR. Tās vienīgais ierobežojums ir salīdzinoši augstās diagnostikas izmaksas.

Seroloģiskās metodes

Ne-treponēmas testi

RSKk un RMP

Slavenākais no šiem testiem ir Vasermana reakcija. Tas ir veids ātra diagnostika(sifilisa eksprestests), pamatojoties uz līdzīgu antivielu reakciju no slima cilvēka asinīm pret pašiem treponēmiem un kardiolipīnu, kas iegūts no liellopu sirds. Šīs antivielu un kardiolipīna mijiedarbības rezultātā veidojas pārslas.

Krievijā šī analīze praktiski nav lietots. To aizstāja ar mikronogulsnēšanas reakciju. Metodes trūkums ir tās zemā specifika. Viltus pozitīvs tests asinis sifilisam rodas tuberkulozes, asins slimību, sistēmiskās sarkanās vilkēdes, grūtniecības laikā, pēc bērna piedzimšanas, menstruālās asiņošanas laikā un daudzos citos gadījumos. Tāpēc ar pozitīvu RW vairāk precīzas metodes diagnostika

Pēc inficēšanās reakcija kļūst pozitīva pēc diviem mēnešiem. Ar sekundāro sifilisu tas ir pozitīvs gandrīz visiem pacientiem.

Mikronogulsnēšanas reakcijai, kas aizstāja Vasermana reakciju, ir līdzīgs mehānisms. Tas ir lēts, viegli īstenojams, ātri novērtējams, bet var arī dot viltus pozitīvu rezultātu. Šie divi testi tiek izmantoti kā skrīninga testi.

RMP kļūst pozitīvs mēnesi pēc šankra parādīšanās. Lai to veiktu, tiek izmantotas pirksta asinis.

Vai sifilisa tests var būt nepareizs? Protams, jā, īpaši, ja izmanto testus bez treponēmas.

Akūtu viltus pozitīvu paraugu cēloņi, lietojot RMP:

• akūtas infekcijas slimības;
• pneimonija;
• miokarda infarkts;
• insults;
• traumas un saindēšanās.

Hroniski viltus pozitīvi rezultāti bieži rodas šādām slimībām:

• tuberkuloze;
• bruceloze;
• leptospiroze;
• sarkoidoze;
• reimatiskas slimības;
• Infekciozā mononukleoze;
• ļaundabīgi audzēji;
• cukura diabēts;
• aknu ciroze un citi.

Ja rodas strīdīgi testi, diagnozes precizēšanai izmanto treponēmas seroloģiskos testus.

RPR un toluidīna sarkanais tests

Ātrais plazmas reagīna tests (sifilisa rpr tests) ir cita veida reakcija ar kardiolipīna antigēnu. To lieto šādos gadījumos:

• iedzīvotāju skrīnings;
• aizdomas par sifilisu;
• donoru pārbaude.

Pieminēsim arī testu ar toluidīna sarkano. Visas šīs metodes tiek izmantotas, lai novērtētu ārstēšanas efektivitāti. Tie ir daļēji kvantitatīvi, tas ir, tie samazinās līdz ar atveseļošanos un palielinās ar infekcijas recidīvu.

Netreponēmu testu negatīvie rezultāti, visticamāk, norāda, ka subjektam nav sifilisa. Tādēļ, lai novērtētu izārstēšanu, tiek izmantoti ne-treponemālie testi. Pirmā šāda analīze jāveic 3 mēnešus pēc ārstēšanas kursa pabeigšanas.

Treponēmas testi

Treponēmas testi ir balstīti uz treponēmu antigēnu izmantošanu, kas ievērojami palielina to diagnostisko vērtību. Tos izmanto šādās situācijās:

• pozitīvs skrīninga tests (mikroprecipitācijas reakcija);
• viltus pozitīvu skrīninga rezultātu atpazīšana;
• aizdomas par sifilisu;
• latento formu diagnostika;
• retrospektīva diagnoze, ja pacients iepriekš bija slimojis ar šo slimību.

RIT un RIF

Augstākās kvalitātes (ļoti jutīgas un ļoti specifiskas) ir RIT un RIF. Šo metožu trūkumi ir sarežģītība, laiks un nepieciešamība pēc moderna aprīkojuma un apmācīta personāla. Lielākajai daļai izārstēto pacientu treponēmas testi paliek pozitīvi daudzus gadus, un tāpēc tos nevar izmantot kā izārstēšanas kritēriju.

RIF kļūst pozitīvs divus mēnešus pēc inficēšanās. Ja tas ir negatīvs, pacients ir vesels, ja tas ir pozitīvs, saslimšanas iespējamība ir augsta.

RIT īpaši bieži izmanto pozitīvu urīnpūšļa vēža rezultātu gadījumā, lai izslēgtu vai apstiprinātu slimību. Tas ir ļoti jutīgs un ļauj ar lielu precizitāti noteikt, vai pacientam ir vai nav sifiliss. Tomēr tests kļūst pozitīvs tikai trīs mēnešus pēc inficēšanās.

Imunoblotēšana

Imunoblotēšana ir pat jutīgāka nekā RIF, bet mazāk jutīga nekā RPHA. To lieto reti, galvenokārt sifilisa diagnosticēšanai jaundzimušajiem.

Uzskaitītās metodes nav piemērotas skrīningam, tas ir, ātrai slimības noteikšanai, jo tās kļūst pozitīvas vēlāk nekā mikronogulsnes reakcija.

ELISA un RPGA

Mūsdienu augsti informatīvas standartizētas metodes sifilisa diagnosticēšanai - ELISA un RPGA. Tie ir lēti, ātri uzstādīti un pārbaudīti lielos daudzumos. Šos testus var izmantot, lai apstiprinātu diagnozi.

RPGA analīze kļūst pozitīva primārā seropozitīvā sifilisa gadījumā, tas ir, ar šankra parādīšanos (mēnesi pēc inficēšanās). Tas ir īpaši vērtīgs, diagnosticējot vēlu un iedzimtas formas slimības. Tomēr diagnostikas precizitātei RPGA ir jāpapildina ar vismaz vienu netreponēmu un vienu treponēmu testu. Šis trīskāršais tests ir visdrošākais sifilisa tests. RPGA trūkums - saglabāšana pozitīva reakcija ilgā laika periodā, kas neļauj testu izmantot kā izārstēšanas kritēriju.

ELISA tests sifilisa noteikšanai kļūst pozitīvs trīs nedēļas pēc slimības. ELISA trūkums ir tas, ka tā var būt nepatiesa. Viltus pozitīva reakcija rodas, ja sistēmiskas slimības, vielmaiņas traucējumi, kā arī bērniem, kas dzimuši slimām mātēm.

Trūkumi seroloģiskās metodes noveda pie vismodernāko metožu izstrādes, kas nedod kļūdas, bet joprojām ir dārgas un tiek reti izmantotas - gāzu hromatogrāfija un masas spektrometrija.

Algoritms sifilīta infekcijas diagnosticēšanai dažādos posmos

Primārajā seronegatīvajā periodā (līdz 2 mēnešiem pēc inficēšanās) treponēmas meklēšanu veic tumšā laukā vai izmantojot fluorescējošas antivielas.

Primārā seropozitīvā, sekundārā un latenta sifilisa gadījumā izmanto RMP un ELISA, un RPGA izmanto kā apstiprinošu testu.

Pacientiem ar sekundārā sifilisa recidīviem tiek pārbaudīti izsitumu elementi, mēģinot no tiem izolēt treponēmus mikroskopiskai izmeklēšanai.

Terciārajā periodā urīnpūšļa vēzis ir negatīvs trešdaļai pacientu. ELISA un RPGA rezultāti ir pozitīvi, taču tie var neliecināt par terciāro sifilisu, bet gan par iepriekšēju slimību. Vāji pozitīvs tests norāda uz atveseļošanos, nevis terciāro sifilisu.

Nosakot "iedzimta sifilisa" diagnozi, tiek ņemta vērā slimības klātbūtne mātei, mātes un bērna krūts vēža sastopamības biežuma atšķirība, pozitīvs ELISA un RPGA jaundzimušajam, kā arī imūnblotēšana.

Grūtniecēm obligāti jāpārbauda sifiliss, īpaši tām, kurām jau ir bijis nedzīvs dzemdības, neattīstīta grūtniecība vai agrīni aborti. Viņi veic RMP, ELISA, RPGA. Pirms grūtniecības pārtraukšanas viņi tiek pārbaudīti, lai noteiktu slimības klātbūtni.

Noteikumi sifilisa testa iegūšanai

Lai saņemtu nosūtījumu uz laboratoriju, jums jāapmeklē vietējais ārsts. Ja vēlaties pārbaudīties ātrāk, to var izdarīt privātā laboratorijā bez nosūtījuma (piemēram, Invitro laboratorijas ātri un anonīmi veic sifilisa pārbaudi).

Kā veikt sifilisa pārbaudi? Asinis tiek nodotas no rīta, tukšā dūšā. Jūs varat dzert tikai tīru ūdeni.

Sagatavošana: Divas dienas pirms testa no uztura jāizslēdz taukaini ēdieni un jo īpaši alkohols.

Kā tiek veikta analīze? parastajā veidā no pirksta vai elkoņa kaula vēnas.

Cik ilgs laiks nepieciešams, lai pārbaudītu sifilisu? Testa rezultāts parasti ir gatavs nākamajā dienā. Stenogrammu var paņemt no ārsta vai laboratorijas.

Cik ilgi analīze ir derīga? Līdz trim mēnešiem.

Cerebrospinālā šķidruma analīze

Dažos gadījumos, lai diagnosticētu neirosifilisu, tiek veikts cerebrospinālā šķidruma tests.

Šī pārbaude ir paredzēta visiem pacientiem ar latentais sifiliss ja tiem ir nervu sistēmas patoloģijas pazīmes, kā arī ar latentu un vēlīnu neirosifilisu.

Turklāt analīze tiek veikta visiem pacientiem pēc atveseļošanās, ja viņiem saglabājas pozitīvas seroloģiskās reakcijas. Mēs jau rakstījām mūsu rakstā, ka šī parādība notiek diezgan bieži.

Cerebrospinālā šķidruma analīzi sifilisa noteikšanai nosaka un veic tikai ārsts.

Cerebrospinālais šķidrums tiek iegūts ar punkciju starp diviem skriemeļiem jostasvieta. To savāc 4 ml divās mēģenēs. Pēc tam punkcijas vietu apstrādā ar jodu un pārklāj ar sterilu pārsēju. Pēc punkcijas pacientam vismaz 3-4 stundas jāguļ uz vēdera ar paceltu gultas kāju galu, pēc tam viņš var gulēt uz sāniem. Gultas režīms pēc punkcijas ir norādīts divas dienas.

Cerebrospinālais šķidrums no pirmās mēģenes tiek pārbaudīts, izmantojot vispārpieņemtas reakcijas uz olbaltumvielu saturu, šūnām un meningīta (smadzeņu apvalka iekaisuma) pazīmju noteikšanu.

Cerebrospinālais šķidrums no otrās caurules tiek pārbaudīts, lai noteiktu antivielu saturu pret treponēmu, izmantojot Wasserman reakciju, RMP, RIF un RIBT, ko mēs apspriedām iepriekš.

Pēc traucējumu smaguma izšķir četrus izmaiņu veidus cerebrospinālajā šķidrumā. Tos analizējot, ārsts var secināt par dažādu nervu sistēmas bojājumu formu esamību (asinsvadu neirosifiliss, sifilīts meningīts, meningovaskulārais sifiliss, tabes dorsalis, vēlais mezenhimālais neirosifiliss), kā arī par pacienta atveseļošanos ar pozitīvu seroloģisko. testiem.

fonta izmērs

PSRS Veselības ministrijas RĪKOJUMS 02-09-85 1161 PAR SIFILISA SEROLOĢISKĀS DIAGNOZES UZLABOŠANU (kopā ar NORĀDĪJUMIEM PAR... Aktuāli 2018.g.

RIF - ABS iestatīšanas metodika

Pārbaudīts asins serums

Asinis asins seruma iegūšanai ņem no antecubitālās vēnas tīrā un sausā mēģenē 5 ml tilpumā un apstrādā tāpat kā Vasermana reakcijai. Asins serumu inaktivē vienu reizi 56° temperatūrā 30 minūtes. Sakarā ar to, ka RIF-abs ir novietots nesterili, sterilu konteineru izmantošana un sterilu nosacījumu ievērošana asins seruma uzglabāšanā nav nepieciešama. Tas ir svarīgi tikai ilgākai asins seruma saglabāšanai pirms pārbaudes.

Kā antigēns tiek izmantota patogēna bāla Treponema celma Nichols suspensija no truša 7 dienu orhīta. Veseli trušu tēviņi ar negatīviem Vasermana testa un RIT rezultātiem tiek inficēti intratestikulāri, un, ja rodas orhīts, treponemes pallidum tiek izņemtas no sēkliniekiem tāpat kā RIT antigēna iegūšanas gadījumā. Iegūto bālās treponēmas suspensiju lej no olu gabaliņiem sterilās mēģenēs ar kokvilnas aizbāžņiem un atstāj ledusskapī 4°C uz dienu, pēc tam atdala no nogulsnēm un visu laiku uzglabā tādos pašos apstākļos. izmantošanas.

Antigēna iegūšanai un uzglabāšanai nepieciešama sterilu apstākļu ievērošana, jo ar to pašu antigēnu reakciju var veikt 2-4 mēnešu laikā. Antigēnam jāizvēlas suspensija, kurā nav novērota treponēmu aglutinācija un ir pietiekams to daudzums. Antigēnu var iegūt ampulās no citām laboratorijām. Pirms katras reakcijas suspensiju labi samaisa un pārbauda mikroskopā ar tumšā lauka kondensatoru, lai noteiktu tās blīvumu. Lai veiktu RIF-abs, ir nepieciešama suspensija, kas satur 40-60 treponēmus tumšā redzes laukā, ja ir biezāka suspensija, tā ir jāatšķaida.

Kā RIF-abs sorbentu var izmantot ultraskaņas treponemālo antigēnu RBC, ko ražo Kauņas uzņēmums PSRS Veselības ministrijas baktēriju preparātu ražošanai. Tā ir kultivētu Treponema pallidum V, VII, VIII, IX un Reitera celmu maisījuma suspensija, kas iznīcināta ar ultraskaņu. Katra sorbenta sērija ir jātitrē pirms lietošanas RIF-abs diagnostikas nolūkos.

Sorbentu titrēšana

Sorbentus titrē uz sifilisa slimnieku asins serumiem, dodot strauji (4+) un vāji (2+) pozitīvu rezultātu RIF atšķaidījumā 1:5, kā arī uz asins serumiem personām, kurām nav sifilīta infekcija, kas rada negatīvu rezultātu RIF-5 un nespecifisku pozitivitāti (2+ vai vairāk).

Sorbenta titra noteikšanas piemērs

Visu sorbentu atšķaida ar fosfāta buferšķīdumu, pH = 7,2, 2, 3, 4 reizes vai vairāk. Paņemiet 3 asins serumus no pacientiem ar sifilisu, no kuriem viens sniedz izteikti pozitīvu (4+) rezultātu RIF-5, 2 - vāji pozitīvu (2+) un 5 asins serumus no cilvēkiem, kuriem nav sifilīta infekcijas, no kuriem 3 sniedz nespecifiskus rezultātus un RIF-5 (2+ vai vairāk). Visu asins serumu 5 reizes atšķaida ar sorbentu, savukārt 2, 3, 4 vai vairāk reizes atšķaida ar fosfāta buferšķīdumu. Pēc tam reakcijā tiek pārbaudīts asins serums. Pēc rezultātu ņemšanas tiek izvēlēts sorbenta atšķaidījums, pie kura sifilisa slimnieku sorbētie asins serumi saglabā pozitivitātes pakāpi, kas ir līdzīga tai, kas iegūta ar asins serumiem, kas atšķaidīti ar fosfātu buferšķīdumu, un brīvu personu asins serumi. no sifilīta infekcijas nerada mirdzumu. Šis sorbenta atšķaidījums ir tā titrs.

Sorbenta titrs šajā gadījumā bija atšķaidījums 1:3, pie kura visi asins serumi no pacientiem ar sifilisu saglabāja kontroles pozitivitātes pakāpi, un tajā pašā laikā nespecifisko pozitivitāti nesifilīta asins serumā. tika droši noņemts.

Pretsugas luminiscējošais serums

Lai pētītu cilvēka asins serumus RIF-abs, ir nepieciešams ar fluorohromu iezīmēts asins serums dzīvniekiem, kuri imunizēti ar cilvēka seruma proteīnu. Liofilizētu luminiscējošu serumu sterilos apstākļos izšķīdina destilētā ūdenī tilpumā, kas norādīts uz ampulu etiķetes, ielej sterilā mēģenē ar gumijas aizbāzni un lietošanas laikā uzglabā 4°C temperatūrā 1-2 mēnešus.

Reakcijas dienā nepieciešamo šī seruma daudzumu atšķaida ar titru ar destilētu ūdeni. Uz etiķetes norādītais seruma darba atšķaidījums nav piemērots reakcijas iestatīšanai sifilisa serodiagnostikas nolūkā, tāpēc katras sērijas titrs jānosaka no jauna.

Tabula Nr.13

Sorbentu titrēšanas rezultāti

Asins serumi pārbaudīti	RIF-5 rezultāti
	Asins seruma atšķaidīšana 1:5 ar buferšķīdumu (K)	Asins seruma atšķaidīšana 1:5 ar sorbentu atšķaidījumā
		1: 2	1: 3	1: 4
Asins serums pacientam ar sifilisu
N 1	4+	3+	4+	4+
N 2	2+	1+	2+	2+
N 3	2+		2+	2+
Nesifilīts asins serums
N 1	3+		1+	2+
N 2	2/3+			2+
N 3	2+			2+
N 4	2+			2+
N 5

Pretsugas luminiscējošā seruma titrēšana

Ņem 5 asins serumus no pacientiem ar sifilisu un 5 asins serumus no veseliem cilvēkiem, atšķaida tos 5 reizes ar sorbentu (ņemot vērā tā titru) un veic reakciju, izmantojot II fāzē dažādus luminiscējoša seruma atšķaidījumus pret sērijas cilvēka seruma globulīniem. kuru titrs tiek noteikts. Jāņem vērā, ka luminiscējošu serumu titrs, ko šobrīd ražo pēc nosauktā IEM. N.F. Gamaleja, svārstās, iestatot RIF-abs no 1:100 līdz 1:140. Ņemot vērā reakciju, jāņem vērā provizoriskais luminiscējošā seruma titrs, ka atšķaidīšana, ja to lieto ar pozitīviem asins serumiem, nodrošina labu treponēmu mirdzumu. tika iegūts, un ar negatīvu antigēna luminiscenci nav saņemta. Lielāks luminiscējošā seruma atšķaidījums nekā titrs samazina reakcijas jutību, un mazāks atšķaidījums izraisa specifiskuma samazināšanos. Pēc provizoriskā titra noteikšanas tas jāprecizē līdz vairāk pozitīvie un negatīvie asins serumi. Par galīgo titru var uzskatīt tādu, kas tiek pārbaudīts uz 100 asins serumiem, un vismaz 20 no tiem jābūt no pacientiem ar sifilisu.

Lai novērstu dīgtspēju, pēc sausā luminiscējošā seruma atšķaidīšanas ar destilētu ūdeni tam jāpievieno mortiolāts ar ātrumu 1 tilpums tā šķīduma 1: 1000 līdz 9 tilpumi luminiscējošā seruma. Lietojot jaunas vienas un tās pašas sērijas ampulas, titrs jāpārbauda un jānoskaidro tikai 10 acīmredzami pozitīviem un negatīviem asins serumiem.

Piemērs luminiscējoša pretsugas seruma provizoriskā titra noteikšanai

Tiek sagatavoti 60 preparāti, kas numurēti no 1 līdz 60. Tiek ņemti 10 asins serumi - 5 no sifilisa slimniekiem, 5 no veseliem cilvēkiem. Visu asins serumu 5 reizes atšķaida ar titrētu sorbentu.

Uz zālēm ar numuru 1-10, 11-20, 21-30, 31-40, 41-50, 51-60 reakcijas I fāzē tiek izmantoti tie paši 10 asins serumi, kas 5 reizes atšķaidīti ar sorbentu. Reakcijas II fāzē luminiscējošu serumu, kas atšķaidīts attiecībā 1:100, lieto 1-10 zālēm, 1:110 līdz 11-20, 1:120 līdz 21-30, 1:130 līdz 31-40, 1 līdz 41-50. : 140, 51-60 - 1: 150.

RIF-abs iestatīšanas tehnika

Preparātus sagatavo no antigēna uz plāniem, labi attaukotiem stikla priekšmetstikliņiem, uz aizmugurējā puse kas ar stikla griezēju iezīmēti apļos ar diametru 0,7 cm (10 apļi uz 1 stikla priekšmetstikliņa). Apļa ietvaros uz stikla tiek uzklāta Treponema pallidum antigēna suspensija. Pastēra pipetes noslēgtais gals apļveida kustībā suspensiju izkliedē aplī, žāvē gaisā un 10 minūtes fiksē ķīmiski tīrā acetonā. Tad zāles ir numurētas. Inaktivētos testa asins serumus 5 reizes atšķaida ar sorbentu, kas atšķaidīts ar titru ar buferšķīdumu. Statīvā ievieto vairākas mēģenes, kuru skaits un skaits atbilst pārbaudāmo asins serumu skaitam un skaitam. Ar pipeti ievadiet mēģenēs 0,2 ml atšķaidīta sorbenta, pēc tam pievienojiet 0,05 ml visa testa asins seruma un labi samaisiet. Asins serumu var atšķaidīt, izmantojot Florinsky aparātu. Asins serumu, kas atšķaidīts ar sorbentu, uzklāj uz antigēna tā, lai uztriepe vienmērīgi pārklātu, un preparātus ievieto mitrā kamerā, kas ir noslēgta ar vāku un ievieto termostatā 37 ° temperatūrā uz 30 minūtēm (I fāze). reakcija). Pēc pirmās fāzes preparātus rūpīgi mazgā 2 porcijās fosfāta buferšķīduma, un preparātus ievieto otrajā porcijā uz 10 minūtēm, žāvē, pēc tam tos atkal ievieto mitrā kamerā, iegūst luminiscējošu serumu, kas atšķaidīts ar titru. uzklāj un atstāja istabas temperatūrā 30 minūtes (II fāzes reakcijas). Otrās fāzes beigās preparātus mazgā ar fosfāta buferšķīdumu, kā aprakstīts iepriekš, žāvē un uz uztriepes virsmas uzklāj pilienu neluminiscējošas imersijas eļļas (dimetilftalāta).

Preparātu izmeklēšanu veic dienasgaismas mikroskopā ar dzīvsudraba-kvarca lampu DRSh-250 ar iegremdēšanas sistēmu, 4X vai 5X okulāru, SZS-7 vai 14, FS-1 filtriem. BS-8 un ZhS-18 vai T-2N. Reakcija tiek ņemta vērā, novērtējot Treponema pallidum spīdumu. Asins serumi, kas piešķir 4+, 3+ un 2+ mirdzumu, RIF-abs tiek uzskatīti par pozitīviem. Briljantzaļdzeltens spīdums novērtēts ar 4+, spilgts - 3+, vājš mirdzums - 2+. Asins serumi, kas piešķir mirdzumu 1+ (treponēma preparātā ir krāsoti intensīvāk nekā fons) vai to nedod, tiek uzskatīti par negatīviem.

Katrā RIF-abs iestatījumā ir jāizmanto šādas vadīklas:

Spēcīga pozitīva kontrole. Sifilisa slimnieka asins serums, kas 5 reizes atšķaidot ar buferšķīdumu dod luminiscenci 4+. Atšķaidot 5 reizes ar sorbentu, asins serumam nevajadzētu zaudēt savu pozitivitātes pakāpi vairāk kā par 1+.

Vāja pozitīvā kontrole. Vesels vai atšķaidīts sifilisa pacienta asins serums, kas, 5 reizes atšķaidot ar buferšķīdumu, dod vāju antigēna luminiscences pakāpi 2+. Atšķaidot ar sorbentu, tā pozitivitātei jāsaglabājas.

Nespecifiska kontrole. Nesifilīts asins serums, kas, atšķaidot ar buferšķīdumu, dod fluorescenci vismaz 2+. Atšķaidot ar sorbentu, tā pozitivitāte ir jānovērš.

Antigēna, sorbenta, luminiscējošā seruma kontroli var uzstādīt tikai tad, ja tiek izmantotas jaunas šo sastāvdaļu sērijas.

RIF-abs veikšanas metodika ar kapilārām asinīm

RIF-abs var veikt ne tikai ar asins serumu, bet arī ar asinīm, kas ņemtas no pirksta. Šo RIF-abs modifikāciju var izmantot, izmeklējot bērnus attiecībā uz sifilisu, kad pieaugušajiem ir grūti iegūt asinis no vēnas, kā arī veicot masveida dažādu populāciju sifilisa izmeklēšanu.

Inscenējot RIF-abs ar asinīm, tiek izmantotas tās pašas reakcijas sastāvdaļas, kas RIF-abs inscenējot ar asins serumu (antigēns, sorbents, luminiscējošais serums). Luminiscējošā seruma titru nosaka pēc iepriekš minētās shēmas, bet inscenējot reakciju ar asinīm. Pēc pacienta pirksta caurduršanas ar mikropipeti līdz 0,1 ml atzīmei paņem asinis testēšanai, ātri iepūš mēģenē, kurā ir 0,3 ml destilēta ūdens, rūpīgi sajauc ar pipeti un filtrē caur papīra filtru, kas samitrināts ar destilētu ūdeni. Reakciju ar atšķaidītām asinīm var veikt savākšanas dienā vai pēc 1-2 dienām, ja tās uzglabā 4°C.

Tūlīt pirms reakcijas visiem reakcijā iekļautajiem asins paraugiem pievieno 0,1 ml visa sorbenta, sajauc ar pipeti un krata un ievieto termostatā 37° temperatūrā uz 30 minūtēm. Pēc tam ar sorbentu apstrādātās asinis tiek uzklātas uz antigēna uztriepes un ievietotas mitrā kamerā 37° temperatūrā (reakcijas 1. fāze). Pēc iedarbības perioda beigām preparātus mazgā pirmajā fosfāta buferšķīduma daļā, lai uz priekšmetstikliņiem nepaliktu asiņu pēdas, un ievieto buferšķīduma otrajā daļā uz 10 minūtēm. Pēc uztriepes žāvēšanas tiek veikta reakcijas II fāze. Šajā gadījumā preparātiem tiek uzklāts luminiscējošais serums pret cilvēka globulīniem, kas atšķaidīts atbilstoši šai RIF modifikācijai noteiktajam titram. Brilles mitrajā kamerā atkal tiek ievietotas termostatā 37 ° temperatūrā.

Pēc 30 minūtēm priekšmetstikliņus vēlreiz mazgā 2 porcijās fosfāta buferšķīduma 10 minūtes, žāvē un uzstāda fluorescences mikroskopijai. Zāļu izpēte un reakcijas rezultātu reģistrēšana tiek veikta tāpat kā veicot RIF-abs ar asins serumu.

RIF-200 iestatīšanas metodika

RIF-abs un RIF-200 iestatīšanas metode ir līdzīga. Iestatot RIF-200, testa asins serumu apstrāde, antigēna sagatavošana, pretsugas luminiscējošā seruma sagatavošana un tā titrēšana tiek veikta tāpat kā RIF-abs iestatīšanas gadījumā. Jāņem tikai vērā, ka pašlaik RIF-200 ražotā luminiscējošā seruma titri ir robežās no 1:20 līdz 1:50.

RIF-200 iestatīšanas tehnika

Testa asins serumus atšķaida 200 reizes ar fosfāta buferšķīdumu. Lai to izdarītu, stendā ievieto 3 mēģeņu rindas, kuru skaits un numerācija katrā rindā atbilst pārbaudīto asins serumu skaitam un numerācijai darba burtnīcā. Pirmajā rindā mēģenēs ielej veselus testa asins serumus, otrajā rindā mēģenēs ielej 0,45 ml buferšķīduma, trešajā - 0,95 ml buferšķīduma. Otrajā rindā sagatavo 10-kārtīgu asins seruma atšķaidījumu, kuram no katras pirmās rindas mēģenes ar atsevišķu 1 ml graduētu pipeti ņem 0,05 ml izmeklējamā asins seruma un pārnes uz atbilstošo mēģenē. otro rindu un sajauc ar tur pieejamo buferi. No katras otrās rindas mēģenes, izmantojot to pašu pipeti, pārnes 0,05 ml 10 reizes atšķaidīta testa asins seruma attiecīgajā trešās rindas mēģenē un iegūst 200-kārtīgu atšķaidījumu.

Uzstādot reakciju, 200 reizes atšķaidīti testa asins serumi tiek uzklāti uz zālēm, kas ievietotas mitrā kamerā, lai to skaits, kas norādīts uz mēģenēm, atbilstu cipariem uz priekšmetstikliņiem. Pēc asins seruma uzklāšanas preparātiem mitro kameru uz 30 minūtēm ievieto termostatā ar 37° temperatūru (reakcijas I fāze). Pēc tam preparātus 10 minūtes mazgā 2 buferšķīduma daļās un žāvē. Pēc tam tos atkal ievieto mitrā kamerā un tiem visiem uzklāj luminiscējošu serumu, kas atšķaidīts ar titru (reakcijas II fāze). Otro fāzi veic 30 minūtes istabas temperatūrā, pēc tam preparātus mazgā 10 minūtes, žāvē un uzstāda fluorescences mikroskopijai.

RIF-200 rezultāti tiek ņemti vērā tāpat kā RIF-abs.

Gadījumā, ja klīnicisti interesējas par fluorescējošo antivielu titru pacienta asins serumā, RIF-abs un RIF-200 jāievada ar testa asins serumu sērijveida atšķaidīšanu, un fluorescējošo antivielu titrs jāuzskata par augstāko atšķaidījumu. asins serums, kas joprojām dod pozitīvu reakcijas rezultātu. Titru ierasts apzīmēt ar skaitli, kas raksturo pārbaudāmā asins seruma atšķaidījuma pakāpi, piemēram, 5, 10, 20, 40 utt. (RIF-abs) vai 200, 400, 800 utt. (RIF-200).

Iestatot abas reakcijas modifikācijas, testa asins serumu atšķaidīšanai un preparātu mazgāšanai pēc I un II fāzes jāizmanto šāda sastāva fosfāta buferšķīdums: 1 litrs destilēta ūdens, 6,8 g nātrija hlorīda, 1,48 g diaizvietota nātrija fosfāta, 0,43 g monoaizvietota kālija fosfāta (PH = 7,2). Sagatavoto šķīdumu istabas temperatūrā uzglabā ne ilgāk kā nedēļu.

Tā kā fluorescējošu antivielu klātbūtnē ir iespējams iegūt negatīvus rezultātus, pacientu ārstēšanas laikā ar penicilīnu nevajadzētu pārbaudīt asinis un serumu RIF-abs un RIF-200.

RIF-t iestatīšanas metodika

Savlaicīga sifilisa izraisītu nervu sistēmas bojājumu diagnostika ir aktuāls jautājums cīņā pret šo slimību. Sakarā ar to, ka RIF-c ir jutīgāks par visiem citiem testiem, ko izmanto cerebrospinālā šķidruma sifilisa diagnostikai, šo RIF modifikāciju var ieteikt centrālās nervu sistēmas sifilītisku bojājumu diagnosticēšanai visu veidu sifilisa gadījumā.

Lai pārbaudītu RIF-c, tiek izmantots tas pats antigēns, luminiscējošais serums, ko RIF-abs un RIF-200 testēšanai ar asins serumu. Līdzīgi ir arī fluorescējošo antivielu noteikšana cerebrospinālajā šķidrumā un asins serumā un reakcijas reģistrēšana.

Cerebrospinālais šķidrums tiek ievadīts reakcijā neinaktivēts un neskarts. Pirms reakcijas veikšanas to var uzglabāt ledusskapja saldētavas nodalījumā mēģenēs zem gumijas aizbāžņiem līdz 2 nedēļām. Atkausēšana tiek veikta istabas temperatūrā.

RIF-t iestatīšanas tehnika

Reakcijas I fāzē pret antigēnu tiek uzklāts 0,05 ml neatšķaidīta testa cerebrospinālā šķidruma, preparātus ievieto mitrā kamerā uz 30 minūtēm istabas temperatūrā. Pēc tam tos 10 minūtes mazgā ar fosfāta buferšķīdumu, pH = 7,2, un žāvē. II fāzē preparātiem tiek uzklāts atšķaidīts luminiscējošais serums, kas tiek titrēts, kad tiek konstatēta reakcija ar cerebrospinālo šķidrumu. Preparātus 30 minūtes tur istabas temperatūrā mitrā kamerā, mazgā, žāvē un uzstāda fluorescences mikroskopijai.

Kļūdu avoti

1. Reaģentu sagatavošanas, uzglabāšanas un reakcijas iestatīšanas nosacījumu neievērošana.

2. Zema luminiscējošā seruma kvalitāte un neprecīza tā titra noteikšana.

3. Testējamā materiāla vai luminiscējošā seruma uzklāšana, iestatot reakciju nevis uz zālēm, bet uz priekšmetstikliņa otru pusi.

4. Nepareizs apgaismojuma iestatījums fluorescences mikroskopā.

5. Zema antigēna kvalitāte.