Diagnoze ir vissvarīgākais posms jebkuras slimības ārstēšanā. Atkarībā no pareizas diagnozes ir ne tikai veiksmīga ārstēšana, bet arī iespēja novērst komplikāciju attīstību un pavadošās patoloģijas. Kas ir seroloģiskā pārbaude? Šī ir pacienta bioloģiskā parauga diagnostiskās analīzes metode antivielu un antigēnu klātbūtnei. Pārbaude ļauj identificēt desmitiem slimību, slimības fāzi un uzraudzīt ārstēšanu.

Kāpēc pētījums ir noteikts?

Šāda veida medicīniskie pētījumi tiek plaši izmantoti dažādās medicīnas jomās. Komplementa fiksācijas reakcija jeb CFR ir vērsta uz specifisku šūnu identificēšanu asins serumā, antivielas, ko organisms ražo, lai cīnītos pret infekcijām un vīrusiem.

Izoseroloģiskais pētījums ir paredzēts, lai noteiktu pacienta asinsgrupu, Rh faktoru un citus asins parametrus.

• Seroloģiskās asins analīzes tiek izmantotas ginekoloģijā, lai noteiktu seksuāli transmisīvās slimības. Seroloģisko titrēšanu izmanto arī visaptverošai topošo māmiņu izmeklēšanai (toksoplazmoze, HIV, sifiliss u.c.). Reģistrējot grūtnieces, šī ir obligāta pārbaude.
• Pediatrijā izmanto seroloģiskos testus, lai apstiprinātu “bērnības” slimību (vējbakas, masaliņas, masalas u.c.) diagnozi, ja simptomi nav izteikti un slimību nav iespējams noteikt pēc klīniskām indikācijām.
• Seroloģiskie testi ļauj venerologiem ātri un precīzi noteikt diagnozi. Plkst līdzīgi simptomi un sūdzības, ar asins analīzi var noteikt antivielas pret sifilisu, žiardiozi, ureplazmozi, hlamīdijām, herpes un citām slimībām.
• Gastroenergologi, hepatologi un infektologi vīrusu hepatīta diagnosticēšanai izmanto seroloģiskās asins analīzes.
• Ārstam var būt aizdomas par jebkuru infekcijas vai vīrusu slimību. Apstiprināšanai tiek izmantotas seroloģiskās reakcijas pret specifiskām antivielām organismā. Tiek veikta analīze par encefalītu, brucelozi, garo klepu, Denges vīrusu, imūndeficīta vīrusu, alerģijām utt.
• Seroloģiskajai diagnozei hospitalizācijai ir svarīga loma. Šī diagnostikas metode var parādīt, kādā attīstības stadijā slimība ir un vai nepieciešama tūlītēja hospitalizācija vai pietiek ar ambulatoro ārstēšanu.

Kā bioloģiskais materiāls Pārbaudei var izmantot siekalu un izkārnījumu paraugu, bet visbiežāk tiek izmantotas pacienta venozās asinis. Seroloģisko testu testi jāņem no kubitālās vēnas laboratorijas apstākļos. Pirms testa veikšanas jums jākonsultējas ar savu ārstu un jāsagatavojas.

Gatavošanās analīzei

Šāda veida pētījumi tiek veikti gan pašvaldību, gan komerciestādēs. Labāk ir izdarīt izvēli par labu tai laboratorijai, kurai ir vismodernākais aprīkojums un par tās darbu ir tikai pozitīvas atsauksmes. Aizņemtiem pacientiem laboratorija var nodrošināt RBC asins savākšanas pakalpojumus mājās.

Šajā gadījumā pacientam nav jātērē laiks ceļā, un rindas tiek novērstas.

Sagatavošanās venozo asiņu savākšanai ietver vairākas darbības: vispārīgie noteikumi. Pirms testa nevajadzētu ēst pārtiku, tas ir, testu veic tukšā dūšā. Nododot asinis, jums jābūt miera stāvoklī un neuztraucieties. Pirms procedūras nevajadzētu veikt citas procedūras (rentgena starus, ultraskaņu utt.). Dažas nedēļas pirms asins paraugu ņemšanas, konsultējoties ar ārstējošo ārstu, medikamentu lietošana jāpārtrauc. Daži ieteikumi ir atkarīgi no slimības, kurai tiek veikta pārbaude. Piemēram, pārbaudot hepatītu, 2 dienas pirms testa no uztura tiek izslēgti trekni ēdieni un alkohols.

Fluorescences reakcija

Viens no seroloģisko reakciju veidiem ir fluorescence jeb RIF. Šī pētījuma metode tiek veikta, izmantojot reaģentu, kas izceļ vēlamās antivielas asins serumā. Lai veiktu tiešu seroloģisko reakciju vai PIF, specifiskas antivielas tiek marķētas ar fluorescējošu vielu. Šis ir ātrākais izpētes veids, kas tiek veikts vienā posmā.

Vēl viena metode, ko sauc par netiešo vai RNIF, tiek veikta 2 posmos. Pirmajā specifiskām šūnām (antivielām) nav fluorescējošu marķējumu, bet otrajā tiek izmantotas atbilstoši marķētas antivielas, lai noteiktu antigēna-antivielu kompleksu. Mirdzuma reakcija parādās tikai pēc saskares ar konkrētu antivielu. Manipulāciju rezultātu novērtē ar speciālu ierīci, kas novērtē starojuma intensitāti un nosaka arī pētāmo objektu formu un izmērus. Infekcijas izraisītājs tiek noteikts ar 90-95% ticamību atkarībā no slimības veida un stadijas.

Saistīts imūnsorbcijas tests

ELISA pētījumiem seroloģiskās reakcijas tiek veiktas, izmantojot unikālus stabilus reaģentus. Marķētās vielas tiek pievienotas noteiktam (vēlamam) antivielu veidam. Rezultātā seroloģija nodrošina kvalitatīvu vai kvantitatīvu novērtējumu no pacienta asins parauga. Ja substrātam nav izteiktu marķieru, rezultāts tiek uzskatīts par negatīvu. Kvalitatīvā pētījuma gadījumā pozitīvs rezultāts nozīmē tikai antivielu klātbūtni bioloģiskajā paraugā.

Serodiagnostika ar antivielu šūnu kvantitatīvo noteikšanu sniedz pilnīgāku priekšstatu. Pēc konstatēto šūnu daudzuma ārsts var pateikt, vai slimība ir sākuma stadijā, akūta, vai arī tā ir hroniskas slimības formas paasinājums. Nosakot diagnozi, tiek ņemta vērā arī pacienta klīniskā aina un sūdzības.

Pētījuma iezīmes

Pārbaudot brucelozi, asins serums tiek kontrolēts, lai pārliecinātos, ka tas neaizkavē sevi bez antigēna. Tas ļauj palielināt testa ticamību. Brucelozes testa rezultāts var būt pozitīvs, negatīvs vai neizteikts, tas ir, apšaubāms. Ja tiek iegūti apšaubāmi rezultāti, ieteicams veikt atkārtotu asins paraugu ņemšanu. Brucelozi diagnosticē arī pēc asins sējumu, kaulu smadzeņu un cerebrospinālā šķidruma izmeklējumu rezultātiem.

Seroloģijas priekšrocības un trūkumi

Mūsdienu medicīnā plaši tiek izmantota diagnostika, izmantojot seroloģiskās metodes. Šis tests ir īpaši būtisks, identificējot vīrusu un infekcijas slimības. Tāda paša veida pārbaudes tiek izmantotas ģeogrāfiskajā skrīningā un veselības apsekojumos, lai novērstu epidemioloģiskos uzliesmojumus.

Seroloģiskajiem testiem ir vairākas priekšrocības.

• Jebkura veida seroloģiskajiem testiem ir augsta uzticamība.
• Seroloģiskās pārbaudes tiek veiktas diezgan ātri. RSC rezultāts ir zināms 24 stundu laikā, un to var iegūt, izmantojot internetu, neizejot no mājām. IN īpaši gadījumi plkst stacionāra ārstēšana testu veic vairākas stundas.
• RSC ļauj uzraudzīt slimības attīstību un uzraudzīt ārstēšanas efektivitāti.
• Seroloģiskās izpētes metodes ir zemas izmaksas un pieejamas pacientiem.

Seroloģiskajiem testiem ir arī daži trūkumi. Lai izmeklēšana sniegtu visuzticamāko informāciju, asins analīze jāveic, ņemot vērā slimības inkubācijas periodu.

1. un 2. tipa herpes simplex var noteikt tikai 2 nedēļas pēc inficēšanās, un imūndeficīta vīrusa pārbaudi veic 1, 3 un 6 mēnešus pēc saskares ar pacientu.

Pētījuma ticamību var ietekmēt cilvēka faktori. Ja pacients neievēro pētījuma sagatavošanas noteikumus vai laboratorijas tehniķis pieļauj kļūdu asins parauga apstrādē, var iegūt nepatiesu vai apšaubāmu rezultātu. Šāda situācija rodas aptuveni 5% gadījumu. Parasti ārstējošais ārsts, pamatojoties uz klīniskajām indikācijām, viegli aprēķina RSC kļūdu.

Seroloģiskā asins analīze ir moderns un uzticams veids, kā to identificēt bīstamas slimības piemēram, HIV, hepatīts, bruceloze, STS uc Šīs medicīnas sadaļas mērķis ir pētīt cilvēka asins plazmu un tās imunoloģiskās īpašības. Seroloģiskā metode tiek plaši izmantota, un pētījumu izmaksas privātajās laboratorijās ir salīdzinoši zemas. Analīzes veikšanai tiek izmantota moderna aparatūra, kas samazina cilvēka faktora ietekmi uz pētījuma rezultātiem.

Saskarsmē ar

Vasermana tests (RW) ir vispopulārākais imunoloģiskais tests, ko izmanto sifilisa diagnosticēšanai kopš tā atklāšanas 1906. gadā. RW pieder komplementa fiksācijas reakciju (FFR) grupai un balstās uz sifilisa pacienta asins seruma spēju veidot kompleksu ar atbilstošajiem antigēniem. Mūsdienu RSC metodes, ko izmanto sifilisa diagnosticēšanai, pēc to antigēniem būtiski atšķiras no klasiskās Vasermana reakcijas, tomēr tradicionāli tām tiek saglabāts termins “Vasermana reakcija”.

Imūnsistēmas ražotās antivielas parādās inficētas personas asinīs. Slimības izraisītājs Treponema pallidum satur antigēnu kardiolipīnu, kas izraisa RW noteikto antivielu veidošanos. Pozitīva Vasermana reakcija norāda uz šādu antivielu klātbūtni cilvēka asinīs, un, pamatojoties uz to, tiek izdarīts secinājums par slimības klātbūtni.

Hemolīzes reakcija ir RSC pētījuma rezultāta rādītājs. Reakcijā ietilpst divi komponenti: aitas sarkanās asins šūnas un hemolītiskais serums. Hemolītisko serumu iegūst, imunizējot trušu ar aitas sarkanajām asins šūnām. Tas tiek inaktivēts 30 minūtes 56°C temperatūrā. RSC rezultātus novērtē atkarībā no hemolīzes esamības vai neesamības mēģenēs. Hemolīzes klātbūtne ir izskaidrojama ar to, ka, ja testa serumā nav sifilīta antivielu, tad antigēna-antivielu reakcija nenotiek, un viss komplements nonāk aitas eritrocītu-hemolizīna reakcijā. Un, ja ir specifiskas antivielas, komplements tiek pilnībā iztērēts antigēna-antivielu reakcijai un hemolīze nenotiek.

Visas Wasserman reakcijas sastāvdaļas tiek ņemtas tādā pašā tilpumā - 0,5 vai 0,25 ml. Spēcīgai komplementa fiksācijai pie noteikta kompleksa testa seruma, antigēna un komplementa maisījumu ievieto termostatā 37° temperatūrā uz 45-60 minūtēm. (I fāzes reakcija), pēc tam pievieno hemolītisko sistēmu, kas sastāv no aitas eritrocītiem un hemolītiskā seruma (II fāzes reakcija). Pēc tam mēģenes atkal ievieto termostatā uz 30–60 minūtēm, līdz notiek hemolīze kontrolē, kurā antigēns tiek aizstāts ar fizioloģisko šķīdumu, un testa seruma vietā fizioloģiskais šķīdums. Vasermana reakcijas antigēni tiek ražoti gatavā veidā, norādot titru un atšķaidīšanas metodi.

Vasermana reakcijas maksimālo pozitivitāti parasti apzīmē ar krustiņu skaitu: ++++ (asi pozitīva reakcija) - norāda uz pilnīgu hemolīzes aizkavēšanos; +++ (pozitīva reakcija) - atbilst ievērojamai hemolīzes aizkavēšanai, ++ (vāji pozitīva reakcija) - pierādījumi par daļēju hemolīzes aizkavēšanos, + (šaubīga reakcija) - atbilst nelielai hemolīzes aizkavēšanai. Negatīvu RW raksturo pilnīga hemolīze visās mēģenēs.

Tomēr dažreiz ir iespējami viltus pozitīvi rezultāti - tas ir saistīts ar faktu, ka kardiolipīns dažos daudzumos ir atrodams arī cilvēka ķermeņa šūnās. Cilvēka imūnsistēma nerada antivielas pret savu “pašu” kardiolipīnu, taču šim noteikumam ir izņēmumi, kuru dēļ pilnīgi veselam cilvēkam rodas pozitīva Vasermana reakcija. Īpaši bieži tas novērojams pēc smagām vīrusu un citām slimībām – pneimonijas, malārijas, aknu un asins slimībām, grūtniecības laikā, t.i. imūnsistēmas nopietnas pavājināšanās brīžos.

Ja ārstam ir aizdomas, ka pacientam ir kļūdaini pozitīvs Vasermana reakcijas rezultāts, viņš var noteikt vairākas papildu pārbaudes, kuras parasti izmanto seksuāli transmisīvo slimību diagnosticēšanai.

Slimības un gadījumi, kad ārsts var nozīmēt RW asins analīzi

RW asins analīzes procedūras veikšana

Asinis RW tiek ziedotas tikai tukšā dūšā. Pēdējai ēdienreizei jābūt ne vēlāk kā 6 stundas pirms testa. Medicīnas darbinieks nosēdina pacientu vai novieto uz dīvāna un paņem 8-10 ml asiņu no kubitālās vēnas.

Ja analīze jāveic zīdainim, paraugu ņem no galvaskausa vai jūga vēnas.

Gatavošanās RW asins analīzei

Jums jāpārtrauc alkohola lietošana 1-2 dienas pirms testa. Tāpat nav ieteicams ēst treknus ēdienus – tie var izkropļot rezultātus. Analīzes sagatavošanas laikā jums vajadzētu atturēties no digitalis medikamentu lietošanas.

Kontrindikācijas

Analīzes rezultāts būs nepatiess, ja:

• persona ir slima ar infekcijas slimību vai tikko no tās atlabusi,
• sievietē menstruāciju periods,
• grūtniecība pēdējās nedēļās pirms dzemdībām,
• pirmās 10 dienas pēc dzimšanas,
• pirmās 10 mazuļa dzīves dienas.

Ar primāro sifilisu Vasermana reakcija kļūst pozitīva 6-8 slimības nedēļās (90% gadījumu), un tiek novērota šāda dinamika:

• pirmajās 15-17 dienās pēc inficēšanās reakcija vairumam pacientu parasti ir negatīva;
• slimības 5.-6. nedēļā aptuveni 1/4 pacientu reakcija kļūst pozitīva;
• slimības 7.-8. nedēļā vairumam RW kļūst pozitīvs.

Sekundārā sifilisa gadījumā RW vienmēr ir pozitīvs. Kopā ar citām seroloģiskām reakcijām (RPGA, ELISA, RIF) tas ļauj ne tikai noteikt patogēna klātbūtni, bet arī noskaidrot aptuveno infekcijas ilgumu.

Attīstoties sifilītai infekcijai slimības 4. nedēļā, pēc primārās sifilomas rašanās, Vasermana reakcija pāriet no negatīvas uz pozitīvu, saglabājoties gan sekundārajā svaigā, gan sekundārā recidivējošā sifilisa periodā. Latentajā sekundārajā periodā un bez ārstēšanas RW var kļūt negatīvs, tāpēc, kad notiek klīnisks sifilisa recidīvs, tas atkal kļūst pozitīvs. Tāpēc sifilisa latentā periodā negatīva Vasermana reakcija neliecina par tās neesamību vai izārstēšanu, bet kalpo tikai kā labvēlīgs prognostisks simptoms.

Ar aktīviem sifilisa terciārā perioda bojājumiem pozitīvs RW rodas aptuveni 3/4 slimības gadījumu. Kad sifilisa terciārā perioda aktīvās izpausmes izzūd, tas bieži kļūst negatīvs. Šajā gadījumā negatīva Wasserman reakcija pacientiem neliecina, ka viņiem nav sifilīta infekcijas.

Agrīna iedzimta sifilisa gadījumā RW ir pozitīvs gandrīz visos gadījumos un ir vērtīga metode slimības pārbaudīšanai. Vēlīnā iedzimtā sifilisa gadījumā tā rezultāti atbilst tiem, kas iegūti iegūtā sifilisa terciārajā periodā.

Liela praktiska nozīme ir Vasermana reakcijas izpētei to pacientu asinīs, kuri tiek ārstēti ar sifilisu. Dažiem pacientiem, neskatoties uz enerģisku pretsifilīta terapiju, Vasermana reakcija nekļūst negatīva – tas ir tā sauktais serorezistentais sifiliss. Šajā gadījumā nav jēgas veikt bezgalīgu antisifilītu terapiju, panākot pozitīvas RW pāreju uz negatīvu.

No iepriekš minētā izriet, ka negatīva Wasserman reakcija ne vienmēr liecina par sifilīta infekcijas neesamību organismā.

Pozitīva Vasermana reakcija ir iespējama cilvēkiem ar vairākām citām slimībām un stāvokļiem, kas nav saistīti ar sifilisu:

Viss iepriekš minētais norāda, ka pozitīvs Wasserman reakcijas rezultāts vēl nav beznosacījuma pierādījums sifilīta infekcijas klātbūtnei.

Atveseļošanās pēc pārbaudes

Pēc asins analīzes veikšanas ārsti iesaka pareizu un sabalansēta diēta, kā arī pēc iespējas vairāk šķidruma. Var atļauties siltu tēju un šokolādi. Noderēs atturēties no fiziskām aktivitātēm un nekādā gadījumā nelietot alkoholu.

Normas

Parasti asinīs ir jānovēro hemolīze - to uzskata par negatīvu reakciju uz sifilisu (Vasermana reakcija ir negatīva). Ja hemolīzes nav, tiek novērtēta reakcijas pakāpe, kas ir atkarīga no slimības stadijas (apzīmēta ar “+” zīmēm). Tomēr jums jāzina, ka 3-5% pilnīgi veselu cilvēku reakcija var būt kļūdaini pozitīva. Tajā pašā laikā pirmajās 15-17 dienās pēc inficēšanās reakcija slimiem cilvēkiem var būt kļūdaini negatīva.

Lai noteiktu precīzu diagnozi, pacientam tiek veikta visaptveroša pārbaude. Vispārīga analīze asins analīzes nav īpaši informatīvas, to neizmanto seksuāli transmisīvo infekciju diagnosticēšanai.

Pētījumu veidi un biomateriāli analīzei

Lai identificētu slimību, tiek izmantotas dažādas metodes un biomateriāli. Agrīnās stadijās sifilisu nosaka, izmantojot bakterioskopisku testu. Paraugus pārbauda zem mikroskopa. Ierīce ļauj noteikt patogēnu celmus. Seroloģiskās pārbaudes tiek veiktas vēlāk. Pateicoties tiem, paraugos tiek atklāti slimības antigēni un antivielas.

Seksuāli transmisīvo infekciju noteikšanas metodes ir iedalītas 2 kategorijās:

• Tieša, atklājoša patogēns. Tajos ietilpst: tumšā lauka mikroskopija, RIT analīze (trušu inficēšana ar biomateriālu pētniecībai), PCR metode - polimerāzes ķēdes reakcija (ar tās palīdzību tiek atrasti patogēna ģenētiskie elementi).
• Netiešās (seroloģiskās) pārbaudes ļauj noteikt patogēnu antivielas. Tos ražo imūnsistēma, reaģējot uz infekciju.

Seroloģiskās metodes ir iedalītas 2 kategorijās: treponēmālas un netreponēmālas.

Netreponēma, tai skaitā: toluidīna sarkanais tests, RSC analīze, RPR tests, asins analīze, izmantojot ekspress RMP metodi.

Treponēma, kombinēšana: imūnblotēšana, RSK tests, RIT analīze, RIF pētījums, RPGA tests, ELISA analīze.

Infekcijas testu informācijas saturs ir atšķirīgs. Visbiežāk tiek veikti galvenie sifilisa pārbaužu veidi, kas ietver seroloģiskās metodes. Pacientiem, kuriem nepieciešama pārbaude, ārsts izraksta pārbaudes individuāli.

Biomateriāls pētījumiem

Lai identificētu Treponema pallidum, patogēnu, kas izskatās pēc spirāles un izraisa sifilisu, tiek ņemti paraugi:

• venozās asinis;
• cerebrospinālais šķidrums (izdalīšanās no mugurkaula kanāla);
• limfmezglu saturs;
• čūlas audi.

Ja ir nepieciešams veikt pārbaudes sifilisa noteikšanai, asinis tiek ziedotas ne tikai no kubitālās vēnas, bet arī no pirksta. Biomateriāla izvēli un izmeklēšanas metodi ietekmē infekcijas smagums un diagnostikas centra aprīkojums.

Tiešā izpēte

Pārliecinoši pierādījumi par sifilisu ir infekcijas izraisītāju identificēšana mikroskopā. Tādā veidā patogēns tiek konstatēts 8 no 10 subjektiem.Negatīvs rezultāts 2 atlikušajiem pacientiem nenozīmē, ka viņi nav inficēti.

Pētījums tiek veikts slimības primārajā un sekundārajā stadijā (stadijā), kam raksturīga ādas izsitumu un sifilomu (čūlu) parādīšanās uz ādas. epitēlija audi vai gļotādām. Patogēni, kas izraisa seksuāli transmisīvās slimības, ir atrodami izdalījumos no bojājumiem.

Precīzāk, komplekss tests, ko sauc par RIF, imūnfluorescences reakciju, var noteikt treponēmas. Pētījumam paraugs tiek iepriekš apstrādāts ar fluorescējošām antivielām. Savienojumi, kas var spīdēt, salīp kopā ar baktērijām. Pārbaudot paraugus mikroskopā, infekcijas gadījumā laborants redz dzirkstošus patogēnus.

Testu izmanto slimības agrīnai diagnostikai. Jo ilgāk slimība turpinās, jo zemāka ir pētījumu metožu jutība. Turklāt tas nokrīt pēc izsitumu un čūlu ārstēšanas ar antiseptiskiem līdzekļiem un pacientiem, kuriem ir veikta ārstēšana. Reizēm tests rada viltus negatīvus un viltus pozitīvus rezultātus.

RIT analīze ir ļoti precīza metode sifilisa noteikšanai. Veicot testu, jums ilgi jāgaida rezultāti. Līdz brīdim, kad inficētajam trusim parādās infekcijas pazīmes. Testu izmanto ļoti reti, neskatoties uz to, ka tas ir ārkārtīgi precīzs.

Izmantojot sifilisa polimerāzes ķēdes reakciju, tiek noteikti patogēnu ģenētiskie elementi. Vienīgais PCR trūkums ir tā augstās izmaksas.

Ne-treponēmas testi

Šādas asins analīzes palīdz identificēt antivielas, kas parādās, reaģējot uz kardiolipīnu, savienojumu, kas saistīts ar patogēnu membrānu vispārējo struktūru.

Vasermana reakcija (RW vai RW)

Slavenākais sifilisa tests ir Vasermana reakcija. RV ir iekļauta komplementa saistīšanās reakciju (CFR) kategorijā. Jaunajām RSC metodēm ir būtiskas atšķirības no tradicionālās RW. Taču tos, tāpat kā iepriekš, apzīmē ar jēdzienu “Vasermana reakcija”.

Imūnsistēma sintezē antivielas (marķierus), reaģējot uz treponēmas invāziju. Tos nosaka, veicot asins analīzi attiecībā uz sifilisu, izmantojot Vasermana reakciju. Pozitīvs RW rezultāts apstiprina, ka subjekts ir inficēts.

Hemolīzes reakcija – RT analīzes indekss. Ar to mijiedarbojas divas vielas: hemolītiskais serums un aitas sarkanās asins šūnas. Serumu iegūst, imunizējot trušus ar aitas sarkanajām asins šūnām. Karsējot tiek samazināta bioloģiskā šķidruma aktivitāte.

RV indikatori ir atkarīgi no tā, vai hemolīze ir notikusi vai nē. Paraugā, kurā nav marķieru, notiek hemolīze. Šajā gadījumā reakcija uz antigēniem nav iespējama. Komplements tiek pavadīts mijiedarbībā ar aitas sarkanajām asins šūnām. Ja paraugā ir marķieri, kompliments reaģē ar antigēniem. Šajā gadījumā hemolīze nenotiek.

RW komponenti tiek mērīti vienādos daudzumos. Paraugu, kas satur serumu, antigēnu un komplementu, karsē. Paraugam pievieno jēra eritrocītus un serumu. Uzglabāt 37 grādu temperatūrā, līdz notiek hemolīze kontroles paraugā, kas satur fizioloģisko šķīdumu, nevis antigēnu.

Lai veiktu RT, tiek izmantoti gatavi antigēni. Titri un to atšķaidīšanas tehnoloģija ir norādīti uz iepakojumiem. Pozitīvs RW rezultāts tiek apzīmēts ar krustiņiem. Gatavi rezultāti testi ir apzīmēti šādi:

• ++++ – maksimāli pozitīvs (hemolīze aizkavējusies);
• +++ – pozitīvs (hemolīze ievērojami aizkavējas);
• ++ – vāji pozitīva (hemolīze daļēji aizkavējās);
• + – šaubīgi (hemolīze nedaudz aizkavējās).

Ar negatīvu RT hemolīze tika pilnībā sasniegta visos paraugos. Bet dažos gadījumos tiek iegūti kļūdaini pozitīvi dati. Tas notiek, kad kardiolipīns iekļūst šūnās. Aizsardzības mehānismi nerada marķierus “vietējam” kardiolipīnam.

Tomēr reizēm rodas ārkārtējas situācijas. Pozitīvs RW tiek konstatēts neinficētiem cilvēkiem. Tas ir iespējams, ja pacients ir cietis nopietna slimība ko izraisa vīrusi (pneimonija, malārija, tuberkuloze, aknu un asins patoloģijas). Pozitīvs RV rodas grūtniecēm. Tas ir saistīts ar faktu, ka imūnsistēma ir pārmērīgi novājināta.

Ja ir aizdomas, ka testa rezultāts uz sifilisu ir viltus pozitīvs, pacients tiek izmeklēts tālāk. Problēma ir tāda, ka šo infekciju nevar noteikt, izmantojot vienu klīnisku laboratorijas testu. Daži pētījumi sniedz nepatiesus rādītājus, kas var būt gan negatīvi, gan pozitīvi.

Detalizēta sifilisa analīze palīdz iegūt ticamus datus. Pateicoties viņam, viņi uzstāda patiesa diagnoze: pierādīt infekciju vai izslēgt to. Turklāt paplašinātais tests ļauj apturēt infekcijas attīstību un novērst nevajadzīgu terapiju.

RSK un RMP

Pārbaudot sifilisu, tradicionālā Wasserman reakcija tiek izmantota ārkārtīgi reti. Tā vietā tiek izmantota RSK metode. Tests dod pozitīvu rezultātu 2 mēnešus pēc inficēšanās. Sekundārajā slimības formā tas ir pozitīvs gandrīz 100% gadījumu.

Mikroprecipitācijas metode (MPM) ir pētījums, kura mehānisms ir līdzīgs Vasermana reakcijai. Tehnika ir viegli īstenojama. Tas tiek veikts ātri. Lai pārbaudītu sifilisu, šajā gadījumā asinis tiek ņemtas no pirksta. Tehnika dod pozitīvu rezultātu 30 dienas pēc sifilomas parādīšanās. Kļūdas pētījuma laikā nav izslēgtas. Kļūdaini pozitīvi dati tiek iegūti, ņemot vērā: saasinātas infekcijas, pneimoniju, sirdslēkmi, insultu, intoksikāciju.

Tālāk norādītie gadījumi noved pie kļūdainiem testiem:

Atklājot apšaubāmu sifilisa testu, tiek veikti treponēmas pētījumi. Tie palīdz noskaidrot diagnozi.

RPR un toluidīna sarkanais tests

Plazmas reagin metode (RPR) ir vēl viens Wasserman reakcijas analogs. To lieto, ja nepieciešams:

• pārbaudīt asimptomātiskus cilvēkus;
• apstiprināt sifilisu;
• pārbaudīt ziedotās asinis.

Toluidīna sarkanais tests, tāpat kā RPR, tiek veikts, lai novērtētu dinamiku zāļu terapija. To rādītāji samazinās, kad slimība atkāpjas, un palielinās, kad patoloģija atkārtojas.

Netreponēmas testi parāda, cik daudz pacients ir atveseļojies. Negatīvu sifilisa rezultātu saņemšana liecina, ka slimība ir pilnībā atkāpusies. Pirmā pārbaude tiek veikta 3 mēnešus pēc terapijas kursa.

Treponēmas pētījumi

Ļoti produktīvi testi tiek veikti, izmantojot treponēmas antigēnus. Tie tiek veikti, kad:

• tika iegūts pozitīvs rezultāts ar RMP metodi;
• nepieciešams atpazīt kļūdainus datus, kas izriet no skrīninga pārbaudēm;
• Aizdomas par sifilisa attīstību;
• ir nepieciešams diagnosticēt slēptu infekciju;
• ir nepieciešams veikt retrospektīvu diagnozi.

RIF un RIT testi

Daudziem ārstētiem pacientiem paraugu testēšana ar treponēmu dod pozitīvus rezultātus ilgu laiku. Tos nevar izmantot, lai spriestu par ārstēšanas efektivitātes pakāpi. RIT un RIF ir īpaši jutīgi testi. Pateicoties viņiem, tiek iegūti ticami dati. Šīs analīzes ir darbietilpīgas, tās prasa ievērojamu laiku un modernu aprīkojumu. Tos var veikt kvalificēti veselības aprūpes darbinieki.

Veicot RIF testu sifilisa noteikšanai, pozitīvi dati tiek iegūti 2 mēnešus pēc inficēšanās. Negatīvie parametri apstiprina, ka subjekts ir vesels. Pozitīvs - liecina, ka persona ir inficēta.

RIT veic, ja mikronogulsnēšanas reakcija ir pozitīva. Šī sifilisa asins analīze palīdz atspēkot vai apstiprināt infekcijas klātbūtni. Tests ir īpaši jutīgs, tas precīzi norāda, vai pacients ir inficēts vai vesels. Bet pētījums sniedz ticamus datus tikai 3 mēnešus pēc treponēmu iekļūšanas organismā.

Imunoblotēšanas metode

Īpaši precīzi testi ietver imūnblotēšanu. Šo asins analīzi sifilisa gadījumā veic reti. To lieto, pārbaudot jaundzimušos. Tas nav piemērots ātrai pārbaudei. Pozitīvi rezultāti tiek iegūti ar kavēšanos. Tos daudz agrāk iegūst ar mikronogulsnēšanas metodi.

ELISA un RPGA

Informatīvas īpaši precīzas izpētes metodes ietver ELISA un RPGA testus. Ar viņu palīdzību tiek veikta ātra diagnostika. Laboratorijas tehniķi veic milzīgu skaitu šādu testu. Pateicoties tiem, ir iespējams uzstādīt precīza diagnoze.

Sifilisa RPGA tests ir pozitīvs 30 dienas pēc patogēna iekļūšanas organismā. To lieto, lai diagnosticētu primāro infekciju, kad parādās čūlas un izsitumi.

Pateicoties tam, ir iespējams identificēt progresējošas, slepeni notiekošas, kā arī iedzimtas patoloģijas formas. Bet to veic kopā ar ne-treponēmu un treponēmu testiem. Visaptveroša diagnostika garantē rezultātu ticamību. Trīskāršā pārbaude precīzi pierāda seksuāli transmisīvās infekcijas esamību vai neesamību.

Pozitīvā reakcija saglabājas visu laiku liels segments laiks. Šī iemesla dēļ pētījums netiek izmantots, lai novērtētu ārstēšanas efektivitāti.

ELISA tests ir pozitīvs 21 dienu pēc inficēšanās. Pārbaude dažreiz dod kļūdainus rezultātus. Tie parādās sistēmisku patoloģiju un traucētu vielmaiņas procesu gadījumā. To efektivitāte ir apšaubāma bērnam, kas dzimis no inficētas mātes.

Ar seroloģisko pētījumu metodēm iegūtās kļūdas kļuva par iemeslu progresīvu diagnostikas metožu atklāšanai. Gāzu hromatogrāfija un masas spektrometrija nenodrošina nepatiesi rezultāti. Vienīgais šķērslis to masveida lietošanai ir to augstās izmaksas.

Diagnostikas algoritms

• Kad sifiliss ir primārajā fāzē (līdz 60 dienām no inficēšanās brīža), patogēns tiek meklēts uz tumša fona vai to noteikšanai tiek izmantotas fluorescējošas antivielas.
• Ja patoloģija ir primārā, sekundārā vai latentā formā, izmanto RMP un ELISA. RPGA asins analīze sifilisa noteikšanai palīdz apstiprināt rezultātus.
• Sekundāras infekcijas recidīva gadījumā tiek analizēta čūlu un izsitumu izdalīšanās. Patogēni tiek izņemti no paraugiem un pētīti, izmantojot mikroskopiju.
• Kad slimība nonāk terciārajā fāzē, 1/3 pacientu ir negatīvs RMP. Tajā pašā laikā ELISA un RPGA rezultāti ir pozitīvi. Tomēr tie ne vienmēr norāda uz terciāro periodu, bet apstiprina, ka persona iepriekš ir pārcietusi infekciju. Vāji pozitīvs tests liecina par pilnīgu izārstēšanu, nevis terciārās fāzes attīstību.
• Lai apstiprinātu iedzimtu sifilisu, mātei un mazulim tiek ņemtas asins analīzes. Salīdziniet RMP testu datus. Tiek ņemts vērā, ka mazuļa ELISA un RPGA ir pozitīvi. Diagnoze tiek apstiprināta, izmantojot imūnblotēšanas metodi.

Sifiliss, tāpat kā jebkura sistēmiska patoloģija, ietekmē visu ķermeni. Tāpēc testēšana uz to tiek veikta grūtniecības laikā, pirms aborta. Pacientiem tiek veikta RMP, ELISA, RPGA.

Kā veikt pārbaudi

Venerologs nosūta pacientus analīzēm. Privātās laboratorijas pēc klienta pieprasījuma veic anonīmus sifilisa izmeklējumus. Lai veiktu pārbaudi, ārsta nosūtījums nav nepieciešams.

Noteikumi pētījuma veikšanai:

• Asinis tiek ņemtas laboratorijā no rīta tukšā dūšā (ēd pēc procedūras). Pirms testa jums ir atļauts dzert tikai ūdeni.
• 2 dienas pirms izmeklējuma aizliegts ēst treknu pārtiku un lietot alkoholu.
• Asinis tiek ņemtas no pirksta vai vēnas.
• Cik ilgi pētījums ilgst? Parasti ne vairāk kā dienu. Sifilisa testu interpretāciju iegūst no laboratorijas tehniķiem vai ārstējošā ārsta.
• Cik ilgi tests ir derīgs? Pēc 3 mēnešiem testa rezultāti kļūst nederīgi. Tās atkal tiek izīrētas.

Ja analīzes atšifrējums liecina, ka tests ir pozitīvs, jums jāapmeklē venerologs, kurš izrakstīs papildu pārbaudi, lai precīzi apstiprinātu diagnozi un izvēlētos nepieciešamo ārstēšanas shēmu.

Mugurkaula satura pārbaude

Neirosifilisa diagnoze tiek veikta pēc cerebrospinālā šķidruma pārbaudes. Šī analīze tiek veikta:

• cilvēki ar latentu infekcijas formu;
• nervu sistēmas slimību simptomiem;
• asimptomātisks, progresējošs neirosifiliss;
• atveseļojušies pacienti ar pozitīvām seroloģiskām reakcijām.

Ārsts dod nosūtījumu cerebrospinālā šķidruma noteikšanai. Punkcija tiek veikta no mugurkaula kanāla 2 caurulēs. Punkcija tiek ieeļļota ar jodu un pārklāta ar sterilu salveti. Pēc procedūras pacients paliek gultā 2 dienas.

1 paraugā tiek noteikts olbaltumvielu daudzums, šūnas un meningīta pēdas. Otrajā paraugā tiek aprēķinātas antivielas pret sifilisa izraisītāju. Lai to izdarītu, viņi veic šādas pārbaudes: RV, RMP, RIF un RIBT.

Atkarībā no konstatēto pārkāpumu skaita ir 4 cerebrospinālā šķidruma veidi. Katrs norāda uz īpašu nervu sistēmas bojājumu. Ārsts diagnosticē:

Turklāt testa rezultātus izmanto, lai spriestu par pacienta atveseļošanos.

Pārbaužu interpretācija ir ārsta uzdevums. Tikai viņš spēj izdarīt pareizos secinājumus, nepieciešamības gadījumā nozīmēt papildu izmeklējumus, noteikt precīzu diagnozi. Bīstamas sistēmiskas patoloģijas gadījumā nevajadzētu veikt pašdiagnozi. Kļūda diagnozē rada nopietnas sekas.

Komplementa fiksācijas reakcija (CFR)

Komplementa fiksācijas reakcija (FFR) tiek veikta divās fāzēs: pirmajā fāzē antigēnu apvieno ar testa serumu, kurā pieņem antivielu klātbūtni, pievieno komplementu un 30 minūtes inkubē termostatā.

Otrā fāze: pievienojiet hemolītisko sistēmu (aitas sarkanās asins šūnas + hemolītiskais serums). Pēc 30 minūšu inkubācijas termostatā rezultāts tiek ņemts vērā.

Ar pozitīvu RSC seruma antivielas, apvienojoties ar antigēnu, veido imūnkompleksu, kas piesaista komplementu, un hemolīze nenotiks. Ja reakcija ir negatīva (pārbaudāmajā serumā nav antivielu), komplements paliks brīvs un notiks hemolīze.

RSC izmanto sifilisa, gonorejas, tīfa un citu slimību seroloģiskai diagnostikai.

Imūnās reakcijas, kurās izmanto marķētus antigēnus un antivielas, ir balstītas uz faktu, ka viena no reakcijā iesaistītajām sastāvdaļām (antigēni vai antivielas) ir apvienota ar kaut kādu marķējumu, ko var viegli noteikt. Kā etiķetes tiek izmantoti fluorohromi (RIF), fermenti (ELISA), radioizotopi (RIA) un elektronu blīvi savienojumi (IEM).

Ar enzīmu saistīto imūnsorbcijas testu (ELISA), tāpat kā citus imūntestus, izmanto: 1) nezināma antigēna noteikšanai, izmantojot zināmas antivielas, vai 2) antivielu noteikšanai asins serumā, izmantojot zināmu antigēnu. Reakcijas īpatnība ir tāda, ka zināma reakcijas sastāvdaļa tiek kombinēta ar fermentu (piemēram, peroksidāzi). Fermenta klātbūtni nosaka, izmantojot substrātu, kas, fermentam iedarbojoties, kļūst krāsains. Visplašāk izmantotā ir cietfāzes ELISA.

1) Antigēnu noteikšana. Pirmais posms ir specifisku antivielu adsorbcija uz cietās fāzes, ko izmanto kā polistirola vai polivinilhlorīda virsmas plastmasas paneļu iedobēs. Otrais posms ir testa materiāla pievienošana, kurā tiek pieņemts, ka ir antigēns. Antigēns saistās ar antivielām. Pēc tam akas tiek mazgātas. Trešais posms ir specifiska seruma pievienošana, kas satur antivielas pret noteiktu antigēnu, kas marķēts ar fermentu. Marķētās antivielas tiek pievienotas antigēniem, un pārpalikums tiek noņemts, mazgājot. Tādējādi, ja testa materiāls satur antigēnus, uz cietās fāzes virsmas veidojas antivielas-antigēna-antivielu komplekss, kas iezīmēts ar fermentu. Lai noteiktu fermentu, tiek pievienots substrāts. Peroksidāzei substrāts ir ortofenilēndiamīns, kas sajaukts ar H 2 O 2 buferšķīdumā. Fermenta iedarbībā veidojas produkti, kuriem ir brūna krāsa.

2) Antivielu noteikšana. Pirmais posms ir specifisku antigēnu adsorbcija uz aku sienām. Parasti komerciālās testa sistēmās antigēni jau ir adsorbēti uz iedobju virsmas. Otrais posms ir testa seruma pievienošana. Antivielu klātbūtnē veidojas antigēna-antivielu komplekss. Trešais posms - pēc mazgāšanas iedobēm tiek pievienotas antiglobulīna antivielas (antivielas pret cilvēka globulīniem), kas marķētas ar fermentu. Reakcijas rezultātus novērtē, kā aprakstīts iepriekš.

Acīmredzami pozitīvi un acīmredzami negatīvi paraugi, kas ir pieejami komerciālās sistēmās, tiek izmantoti kā kontroles.

ELISA izmanto, lai diagnosticētu daudzas infekcijas slimības, jo īpaši HIV infekciju un vīrusu hepatītu.

Imunoblotēšana ir ELISA veids (elektroforēzes un ELISA kombinācija). Biopolimērus, piemēram, cilvēka imūndeficīta vīrusa antigēnus, atdala, izmantojot gēla elektroforēzi. Pēc tam atdalītās molekulas tiek pārnestas uz nitrocelulozes virsmu tādā pašā secībā, kādā tās atradās želejā. Pārsūtīšanas procesu sauc par blotēšanu, un iegūtā izdruka ir blotēšana. Šo nospiedumu ietekmē testa serums. Pēc tam pievieno ar peroksidāzi marķētu pretcilvēka globulīna serumu, tad substrātu, kas fermenta ietekmē kļūst brūns. Vietās, kur antivielas ir apvienojušās ar antigēniem, veidojas brūnas svītras. Metode ļauj noteikt antivielas pret atsevišķiem vīrusu antigēniem.

Radioimūntests (RIA). Metode ļauj noteikt antigēna daudzumu testa paraugā. Vispirms imūnserumam pievieno materiālu, kas it kā satur antigēnu, pēc tam pievieno zināmu antigēnu, kas marķēts ar radioizotopu, piemēram, I 125. Rezultātā nosakāmais (neiezīmētais) un zināmais iezīmētais antigēns saistās ar ierobežotu daudzumu antivielu. Tā kā marķētais antigēns tiek pievienots noteiktā devā, ir iespējams noteikt, kura tā daļa ir saistīta ar antivielām un kura palika brīva konkurences ar nemarķēto antigēnu dēļ un tika noņemta. Ar antivielām saistītā marķētā antigēna daudzumu nosaka, izmantojot skaitītāju. Tas ir apgriezti proporcionāls atklātā antigēna daudzumam.

Imūnelektronu mikroskopija (IEM). Antigēns, piemēram, gripas vīruss, ir pievienots specifiskam antiserumam, kas marķēts ar elektronu blīvu vielu. Kā etiķetes tiek izmantoti metālu saturoši proteīni (feritīns, hemocianīns) vai koloidālais zelts. Mikroskopijas laikā elektronu mikroskopā tiek uzņemtas fotogrāfijas, kurās redzami gripas virioni ar tiem piestiprinātiem tumšiem punktiem - iezīmētu antivielu molekulām.

Iegūtā imunitāte, tās atšķirība no iedzimtas (specifiska, iedzimta). Iegūtās imunitātes veidi.

Uzdevums.Ģimenes trīs gadus vecais bērns Valērijs saslima ar difteriju. Citi ģimenes locekļi neslimo, un māte bērnībā slimoja ar difteriju, un tēvs tika vakcinēts ar difterijas toksoīdu. Vecākā māsa Piecus gadus vecā Nataša medicīnisku kontrindikāciju dēļ savulaik nebija vakcinēta ar difterijas toksoīdu, tāpēc viņai nācās veikt ārkārtas profilaksi ar pretdifterijas antitoksiskā seruma palīdzību. Jaunākais brālis, trīs mēnešus vecais Vitālijs, neslimo, lai gan ne ar ko nebija vakcinēts. Mājā ir kaķis un suns, viņi nav slimi. Katram ģimenes loceklim un dzīvniekiem nosauciet imunitātes veidu, kas viņiem neļāva saslimt.

Kas ir antigēns? Kādas vielas var būt antigēni? Pilnvērtīgi antigēni un haptēni, kā tie atšķiras viens no otra? Antigēna struktūra. Kā sauc to antigēna molekulas daļu, kas nosaka tās specifiku? Nosauciet zināmos antigēnus. Kas ir autoantigēni? Mikrobu šūnas antigēna struktūra. Flagellar un somatiskie antigēni; lokalizācija, burtu apzīmējums, ķīmiskā būtība, saistība ar temperatūru, pagatavošanas metode, praktiska izmantošana. Anatoksīns, tā īpašības, pielietojums, ražošana. Kādi audi veido ķermeņa imūnsistēmu? Norādiet cilvēka imūnsistēmas centrālos un perifēros orgānus. Aprakstiet humorālās un šūnu imūnās atbildes veidošanās procesu. Norādiet šūnas, kas uztver un sagremo antigēnu; šūnas, kas mijiedarbojas, veidojot humorālo imunitāti, šūnu imunitāti; šūnas, kas transformējas un kļūst par plazmas šūnām, kas ražo antivielas; šūnas, kas stimulē šo procesu; šūnas, kas nomāc imūnreakciju; šūnas, kas iznīcina audzēja šūnas un vīrusu inficētas šūnas. Kas ir antivielas? Kā iegūt imūnserumu? Kā iegūt serumu, kas neitralizētu stingumkrampju toksīnu? Pret kādiem antigēniem veidojas antitoksīni, aglutinīni un hemolizīni? Kādas antivielas veidojas, kad organismā tiek ievadīts difterijas toksoīds? difterijas baktērijas? Antivielu ķīmiskā būtība un struktūra. Kāda ir imūnglobulīna aktīvā vieta? Uzskaitiet imūnglobulīnu klases un to īpašības. Norādiet imūnglobulīnu klasi, kas var iekļūt placentā. Kurai klasei pieder sekrēcijas imūnglobulīni? Antivielu uzkrāšanās dinamika. Kā sekundārā imūnā atbilde atšķiras no primārās? Kā zināšanas par imūnreakcijas dinamiku tiek izmantotas praktiskajā medicīnā? Kas ir imūnreakcijas, kāds ir to mehānisms, reakcijas fāzes. Kādos 2 virzienos tiek izmantotas imūnreakcijas? Uzskaitiet imūnās reakcijas.

Uzdevums. Aizstāt trūkstošos vārdus ar “anatoksīns” vai “antitoksīns”: _________ ir antigēns, _____________ ir antiviela, __________ rada aktīvo imunitāti, ieejot organismā, __________ rada pasīvo imunitāti, ievadot organismā, __________ iegūst, imunizējot dzīvniekus, ___________ tiek iegūts no toksīna, pakļaujoties formalīnam un karstumam, _______________ neitralizē toksīnus, __________ izraisa antivielu veidošanos organismā.

Aglutinācijas reakcija: kas ir aglutinācija, kas ir antigēns, kas ir antiviela; iestatīšanas metodes, kādas vadīklas ir iestatītas un kāpēc; kā vajadzētu izskatīties vadības ierīcēm. Aglutinējošie serumi, ko tie satur, kā tos iegūst, kam lieto; Kāds ir aglutinējošā seruma titrs? Netiešā (pasīvā) hemaglutinācijas reakcija: kas šajā reakcijā kalpo par antigēnu, kā tas tiek iegūts, reakcijas mehānisms. Kas ir eritrocītu diagnostika? Kas ir antivielu eritrocītu diagnostika? Nokrišņu reakcijas: kas ir nokrišņi, kas kalpo kā antigēns; Kā iegūt izgulsnējošu serumu? Kāds ir izgulsnošais seruma titrs? Iestatīšanas metodes, praktiskais pielietojums.

Komplementa fiksācijas reakcija (CFR): CFR princips; kas veidojas imūnserumam mijiedarbojoties ar konkrētu antigēnu; kas notiek ar papildinājumu, ja tas ir klāt šīs mijiedarbības laikā? Kāds ir komplementa liktenis, ja starp antigēnu un antivielām nav specifiskas afinitātes? Ja RSC gala rezultāts ir hemolīze, vai tas nozīmē pozitīvu vai negatīvu rezultātu? RSC izveides metodika. Kāpēc testa serums ir jāinaktivē? Hemolītiskais serums: ko tas satur, kā to iegūst, kāds ir titrs un kā to nosaka? Papildinājums: ķīmiskā daba, saistība ar paaugstināta temperatūra, kur tas atrodas? Kā komplementu var iznīcināt? Kas tiek praktiski izmantots kā papildinājums?

Uzdevums. Uz slepkavībā apsūdzētā vīrieša apģērba konstatēts asins traips. Pēc kādas reakcijas var noteikt, vai tās ir cilvēka asinis; kas šajā reakcijā būs antigēns un kas būs antivielas; Kādām diagnostikas zālēm jābūt pieejamai laboratorijā šai reakcijai, kā tās tiek pagatavotas?

Uzdevums. Kā izmantot nokrišņu reakciju, lai noteiktu, vai analīzei piegādātais gaļas paraugs ir liels liellopi vai zirga gaļa; kādas diagnostikas zāles ir vajadzīgas?

Nokrišņu reakcija iekšā agara želeja, iestatīšanas metodes, praktiskais pielietojums.

Ko parāda seroloģiskā asins analīze?

Ko parāda seroloģiskā asins analīze? Diagnostikas pasākumi ir vissvarīgākais posms jebkuras slimības ārstēšanā. Ārstēšanas panākumi ir atkarīgi ne tikai no izrakstītajām zālēm, bet arī lielā mērā no tā, cik pareizi tika noteikta diagnoze.

Turklāt diagnostika ļauj novērst komplikācijas un vienlaicīgas slimības. Izmantojot pacienta asins seroloģisko testu, tiek konstatēta antivielu un antigēnu klātbūtne. Pētījums palīdz atklāt daudzas slimības, noteikt to fāzi un uzraudzīt ārstēšanas gaitu.

Kas ir seroloģija?

Seroloģija ir imunoloģijas nozare, kas pēta antigēnu reakcijas pret antivielām. Šī medicīnas nozare nodarbojas ar asins plazmas un tās imunoloģisko īpašību izpēti.

Mūsdienās seroloģiskā asins analīze antivielu noteikšanai ir uzticams veids, kā noteikt cilvēka imūndeficīta vīrusu, hepatītu, brucelozi, STS un citas dzīvībai bīstamas slimības. Izdomāsim, kādos gadījumos tas ir paredzēts.

Lietošanas indikācijas

Seroloģiskā asins analīze ir nepieciešama, lai identificētu slimības izraisītāju, ja ir grūti noteikt diagnozi.

Lai veiktu šo reakciju, plazmā tiek ievadīti patogēnu antigēni, un pēc tam notiekošo procesu pēta laborants. Vai nu veikt pretreakcija: V inficētas asinis Lai noteiktu patogēna specifisko identitāti, tiek ievadītas antivielas.

Piemērošanas joma

Šis pētījums tiek izmantots dažādas nozares medicīna. Šī reakcija identificē specifiskas šūnas un antivielas, ko organisms ražo, lai cīnītos pret infekcijām un vīrusiem.

Turklāt, izmantojot seroloģisko metodi, tiek noteikta cilvēka asinsgrupa.

Līdzīgu seroloģisko asins analīzi izmanto ginekoloģijā, lai diagnosticētu seksuāli transmisīvās slimības. Šo metodi izmanto arī grūtnieču visaptverošai izmeklēšanai (toksoplazmozes, HIV, sifilisa u.c. noteikšanai). Šī testa nokārtošana ir obligāta, reģistrējoties ar pirmsdzemdību klīnika.

Bērniem seroloģisko reakciju izmanto, lai apstiprinātu tā saukto “bērnības” slimību (vējbakas, masalas, masaliņas u.c.) diagnozi, ja simptomiem nav izteiktas izpausmes un slimību nav iespējams identificēt, analizējot klīniskās indikācijas. .

Seksuāli transmisīvo slimību noteikšana

Venerologiem šī pārbaude ir patiesi neaizvietojama un ļauj ļoti precīzi noteikt diagnozi.

Ar neskaidru klīnisko ainu, seroloģiskā asins analīze sifilisa, giardiozes, ureaplazmozes, hlamīdiju, herpes un citu slimību noteikšanai var ātri noteikt antivielu klātbūtni.

Vīrusu un infekcijas slimības

Seroloģisko analīzi aktīvi izmanto gastroenterologi, hepatologi un infekcijas slimību speciālisti, lai diagnosticētu vīrusu hepatītu.

Seroloģiskās asins analīzes atšifrēšana ļauj noteikt slimības stadiju un atbildēt uz jautājumu, cik šobrīd nepieciešama hospitalizācija. Kā pareizi sagatavoties?

Gatavošanās pārbaudei

Seroloģiskās asins analīzes tiek veiktas gan valsts, gan komerciālajās klīnikās. Priekšroka jādod laboratorijai ar modernu aprīkojumu un kvalificētu personālu.

Bioloģiskie paraugi pārbaudei var būt siekalas un izkārnījumi, taču vairumā gadījumu tiek izmantotas pacienta venozās asinis. Asinis seroloģiskajam testam tiek ņemtas no kubitālās vēnas laboratorijā. Pirms testa veikšanas Jums jākonsultējas ar savu ārstu par sagatavošanos šai procedūrai.

Lai sagatavotos seroloģiskajam testam, jums jāievēro daži vienkārši noteikumi.

Asinis tiek nodotas mierīgā stāvoklī pirms ēšanas, tas ir, tukšā dūšā. Pirms tam nevajadzētu veikt citus testus, piemēram, rentgena starus, ultraskaņu utt.

Vairākas nedēļas pirms asins nodošanas ir jāizvairās no antibakteriālo un dažu citu zāļu lietošanas. Daži ieteikumi šajā gadījumā ir atkarīgi no slimības, par kuru tiek veikta pārbaude. Piemēram, hepatīta pārbaude ietver taukainas pārtikas un alkohola izņemšanu 48 stundas pirms procedūras.

Fluorescences reakcija

Starp seroloģisko reakciju veidiem ir fluorescences reakcija. Šajā tehnikā tiek izmantots reaģents, kas izgaismo antivielas asins serumā.

Tiešas seroloģiskās reakcijas iestatīšana ietver specifisku antivielu marķēšanu ar fluorescējošu vielu. Šī reakcija ir visātrākā un tiek veikta vienā posmā.

Vēl vienu šādas analīzes veikšanas iespēju sauc par netiešo vai RNIF. To veic divos posmos. Pirmajā posmā antivielas netiek marķētas ar fluorescējošiem marķējumiem, bet otrajā tiek izmantotas atbilstoši marķētas antivielas, lai identificētu antigēnus un antivielas. Mirdzums rodas tikai pēc saistīšanās ar specifisku antivielu.

Ko parāda seroloģiskā asins analīze? Visas procedūras rezultātu novērtē ar īpašu ierīci, kas analizē starojuma stiprumu un atklāj pētāmā objekta formu un izmēru. Infekcijas slimību izraisītāji tiek atklāti ar rezultātu, kura ticamība ir % atkarībā no patoloģijas veida un stadijas.

Saistīts imūnsorbcijas tests

Šajos seroloģiskajos testos tiek izmantoti unikāli, stabili reaģenti. Šķiet, ka iezīmētās vielas pielīp pie vēlamajām antivielām. Rezultātā mēs iegūstam kvalitatīvu vai kvantitatīvu rezultātu.

Ja netiek atrasti izteikti marķieri, rezultāts tiks uzskatīts par negatīvu. Ja kvalitatīvā pētījuma laikā tiek konstatēta antivielu klātbūtne bioloģiskajos paraugos, tad testa rezultāts tiek uzskatīts par pozitīvu. Nosakot šūnas kvantitatīvi, analīze dod precīzāku rezultātu.

Analizējot analīzes rādītājus (piemēram, identificēto šūnu summu), speciālists nosaka, vai slimība ir sākuma stadijā, akūtā stadijā, vai patoloģijas hroniskā forma ir saasinājusies. Lai noteiktu diagnozi, ārsts ņem vērā ne tikai seroloģiskā pētījuma datus, bet arī slimības klīnisko ainu.

Šī testa iezīmes

Šīs analīzes veikšana ne vienmēr var nodrošināt 100% pārliecību, ka noteikta slimība ir atklāta. Gadās, ka rezultāti var būt neskaidri un ir nepieciešamas citas procedūras.

Piemēram, brucelozes testa laikā asins serums tiek kontrolēts, lai noteiktu sevis aizturi bez antigēna. Tas ievērojami palielina pārbaudes ticamību. Brucelozes tests var būt pozitīvs vai negatīvs, kā arī var radīt šaubas.

Ja saņemat apšaubāmus rezultātus, kuriem nav viennozīmīgas interpretācijas, ieteicams testu veikt vēlreiz. Turklāt brucelozi var noteikt ar asins kultūrām, pārbaudēm Kaulu smadzenes un cerebrospinālais šķidrums.

Seroloģiskās asins analīzes plusi

Diagnostikas metodes, izmantojot seroloģiskās reakcijas, tiek plaši izmantotas mūsdienu medicīnas praksē. Īpaši bieži tas tiek darīts, nosakot vīrusu un infekcijas patoloģijas.

Tie paši testi tiek izmantoti ģeogrāfiskās skrīninga un medicīniskās apskates laikā, lai novērstu infekcijas epidemioloģisko izplatīšanos.

Metodes priekšrocības ietver:

• Augsts pārliecības līmenis.
• Ātra reakcija un rezultāti. RSC rezultāti ir zināmi 24 stundu laikā. Īpašā situācijā, slimnīcas apstākļos, analīze būs gatava dažu stundu laikā.
• Slimības attīstības un terapijas efektivitātes uzraudzība.
• Zemas izmaksas un pieejamība pacientiem.

Metodes trūkumi

Tomēr seroloģiskajiem pētījumiem ir arī savi trūkumi.

Tie ietver faktu, ka analīzē ir jāņem vērā inkubācijas periods slimības, lai iegūtu ticamāku priekšstatu.

Piemēram, definīcija herpes simplex pirmais vai otrais veids ir iespējams tikai pēc 14 dienām no inficēšanās brīža. Imūndeficīta vīrusa klātbūtnes analīze tiek veikta 30 dienas, 90 dienas un sešus mēnešus pēc kontakta ar inficētu personu.

Protams, rezultātu ticamību var ietekmēt arī cilvēciskais faktors: asins paraugu ņemšanas sagatavošanas noteikumu neievērošana vai laboranta kļūda, veicot reakciju.

Saskaņā ar statistiku, kļūdainu rezultātu var iegūt 5% gadījumu. Pieredzējis ārsts, pārbaudot pacientu, izpētījis klīnisko ainu, vairumā gadījumu var aprēķināt pieļauto kļūdu.

Kādas asins analīzes tiek ņemtas par sifilisu: RW, RPGA, ELISA, VDRL, RPR, RIBT, testa rezultātu interpretācija

Sifiliss ir infekcijas slimība, ko izraisa Treponema pallidum spiroheta, ar noslieci uz progresējošu hronisku gaitu ar skaidru klīnisko simptomu periodizāciju.

Seksuālās transmisijas pārsvars pār kontaktu un transplacentāro transmisiju ierindo šo slimību starp seksuāli transmisīvajām slimībām (STS, STI). Papildus šīm infekcijas pārnešanas metodēm īpašu lomu spēlē mākslīgais ceļš (no latīņu “artificio” - mākslīgi izveidots).

Tas ir raksturīgs medicīnas iestādēm, galvenokārt tiek ieviests slimnīcas apstākļos. Infekcija notiek ar asins pārliešanu, dažādas ķirurģiskas operācijas, invazīvās diagnostikas metodes.

Neskatoties uz ziedoto asiņu karantīnu, donoru sifilisa noteikšanas problēma dažādi posmi slimība joprojām ir aktuāla.

Tāpēc sifilisa diagnostikas pasākumiem nepieciešama standartizācija, jaunu sensitīvu un informatīvu identifikācijas metožu ieviešana, kā arī kļūdu un testu rezultātu nepareizas interpretācijas samazināšana.

Laboratoriskās diagnostikas metožu klasifikācija

Sifilisa diagnozei ir dažas pazīmes, un tā atšķiras no citu diagnozes bakteriālas infekcijas. Treponema pallidum sarežģītā struktūra un antigēnās īpašības izraisa kļūdas seroloģisko reakciju rezultātu interpretācijā.

Ir 3 galvenās pacientu grupas, kurām tiek piedāvāta asins analīze sifilisa noteikšanai:

1. 1 Iedzīvotāju grupu skrīnings un medicīniskā pārbaude (ieskaitot grūtniecību, reģistrāciju pirmsdzemdību klīnikā, nodarbinātību un medicīniskās kartes reģistrāciju utt.).
2. 2 Skrīnings riska grupās (neaizsargāts dzimumakts ar personu, kas inficēta ar sifilisu, cilvēki pēc piespiedu seksuāla kontakta, HIV inficēti cilvēki utt.).
3. 3 Personas ar slimības simptomiem vai personas, kurām ir aizdomas par sifilītu.

Visi laboratorijas metodes nosacīti sadalīts tiešajā un netiešajā.

Tiešās metodes

1. 1 Treponema pallidum identificēšana tumšā laukā (tumšā lauka mikroskopija).
2. 2 Izmēģinājumu dzīvnieku inficēšanās (kultivēšana laboratorijas dzīvniekos).
3. 3 PCR (polimerāzes ķēdes reakcija).
4. 4 DNS zonde vai nukleīnskābju hibridizācija.

Netiešās metodes

Seroloģiskās reakcijas ir laboratorijas diagnostikas metodes, kuru pamatā ir antivielu (saīsināti AT) noteikšana pret Treponema pallidum antigēniem (saīsināti AG). Tie ir ļoti svarīgi diagnozes apstiprināšanai.

1. 1 Ne-treponēmas testi:
   • Vasermana reakcija (WRS);
   • Mikroprecipitācijas reakcija (MR, RMP) un tās analogi, kas norādīti zemāk;
   • Ātrā plazmas reagīna tests (RPR, RPR);
   • Sarkanā toluidīna seruma tests (TRUST);
   • Venerisko slimību izpētes laboratorijas netreponēmiskais tests - VDRL.
2. 2 Treponēmas testi:
   • Treponema pallidum imobilizācijas šķīdums – RIBT/RIT;
   • Imunofluorescences šķīdums - RIF, FTA (seruma atšķaidījumi RIF-10, RIF-200, RIF-abs);
   • Pasīvās hemaglutinācijas R-cija (RPGA, TRPGA, TPHA);
   • Ar enzīmu saistīts imūnsorbcijas tests (ELISA, EIA);
   • Imunoblotēšana.

1. attēls – sifilisa serodiagnozes algoritms

Histomorfoloģiskās metodes

Šīs metodes ir saistītas ar sifilīta izpausmju histomorfoloģijas pazīmju identificēšanu. Uzmanība tiek pievērsta šankra struktūras smalkumiem. Tomēr infekcijas diferenciāldiagnoze, izmantojot histoloģiju, ir ļoti sarežģīta. Histomorfoloģiju izmanto kopā ar citiem laboratorijas un klīniskiem testiem.

Treponema pallidum tumšā lauka mikroskopija

Šīs metodes pamatā ir tieša treponema pallidum noteikšana testa materiālā, izmantojot mikroskopu un īpašas ierīces (visbiežāk izdalījumi no erozijas un čūlas, retāk cerebrospinālais šķidrums un citi substrāti).

Izmantojot skarifikāciju, nokasot, izspiežot, no erozijām un čūlainajiem defektiem iegūst eksudātu, pēc tam sagatavoto preparātu izmeklē mikroskopā.

Parasti treponema pallidum tiek konstatēta preparātā, kas iegūts no šankra, no sekundāra svaiga, sekundāra recidivējoša sifilisa perēkļiem, kā arī limfmezglu un placentas punktos.

Pamatojoties uz mazo daļiņu parādību, kas spīd tumšā laukā, kad to skar gaismas stars (Tindala fenomens), metode lieliski ļauj atšķirt sifilisa izraisītāju no citiem treponēmiem, pamatojoties uz morfoloģiskām atšķirībām un kustību veidu atšķirībām. baktērija.

Mikroskopijai izmanto īpašu tumšā lauka kondensatoru ar atbilstošu optisko izšķirtspēju. Zāles iegūst ar sasmalcinātu pilienu metodi (materiāla pilienu uzklāj uz tīra, beztauku stikla priekšmetstikliņa un pārklāj ar ļoti plānu segstikliņu).

Iegremdējamo eļļu pilina uz vāka. Pagriežot cauruli un pagriežot palielināmo lēcu, tiek noregulēts vēlamais apgaismojums.

Mikroskopa tumšajā laukā tiek konstatētas asins šūnas, epitēlija šūnas un sifilisa izraisītājs. Treponema pallidum izskatās kā spirāle, ļoti plāna, izstaro sudrabainu krāsu, ar gludām kustībām.

2. attēls. Tumšā lauka mikroskopija kā veids, kā vizualizēt Treponema pallidum pētāmajā materiālā. Ilustrācijas avots - CDC

Treponema pallidum ir jānošķir no citiem treponēmiem, ieskaitot Tr. refringens, ko var atrast orofarneksā un uz dzimumorgānu gļotādas. Šī baktērija veic haotiskas kustības, tai ir platas un asimetriskas, diezgan raupjas cirtas. Turklāt Treponema pallidum atšķiras no Tr. Microdentium, Tr. Buccalis un Tr. vincenti.

Baktēriju vizualizācija tumšā laukā dažkārt tiek papildināta ar fluorescences reakciju. Šim nolūkam dabiskajam materiālam pievieno antitreponēmas antivielas, kas marķētas ar fluorescējošu krāsvielu. Šajā gadījumā veidojas komplekss, ko sauc par antigēnu-antivielu (saīsināti AG-AT), kas ir izpētes objekts, izmantojot fluorescējošu mikroskopu.

Polimerāzes ķēdes reakcijas (PCR) metode

PCR, kas izstrādāta 1991. gadā, lai noteiktu Treponema pallidum dezoksiribonukleīnskābes (DNS) molekulu, ir ļoti jutīga un specifiska, ļaujot noteikt patogēna DNS fragmentus.

Šīs analīzes pamatā ir īsu DNS daļu kopēšana no gaišās spirohetas, kas atbilst noteiktajiem parametriem un atrodas paraugā. Tas viss tiek veikts mākslīgos apstākļos (in vitro). Reakcija tiek veikta ierīcē - termociklerā, kas nodrošina temperatūras ciklu periodizāciju. Notiek dzesēšana, kam seko mēģeņu karsēšana ar kļūdu 0,1˚C.

DNS matricu karsē 2 minūtes 92-98˚C temperatūrā ( Maksimālā temperatūra izmanto, ja polimerāze ir termostabila). Sildot, DNS pavedieni atdalās, jo starp tām sadalās ūdeņraža saites. Atkausēšanas posmā reakcijas temperatūra tiek pazemināta, lai saistītu grunti ar vienpavedienu veidni.

Atkausēšana aizņem apmēram 30 sekundes, un šajā laikā tiek sintezēti simtiem nukleotīdu. Jaunsintezētās molekulas tiek kopētas ar polimerāzes palīdzību, kā rezultātā tiek pavairoti specifiski dezoksiribonukleīnskābes fragmenti. Turpmāka fragmentu noteikšana tiek veikta, izmantojot agara gēla elektroforēzi.

Sifilisa PCR diagnostika joprojām ir eksperimentāla rakstura, taču tā ir pamatota, atklājot iedzimtu infekciju, sarežģītos diagnostikas gadījumos vai gadījumos, kad Treponema pallidum saturs testa materiālā ir minimāls.

DNS hibridizācija

DNS hibridizācija tiek veikta in vitro, un tās pamatā ir divu vienpavedienu DNS molekulu pilnīga vai daļēja savienošana vienā molekulā. Komplementāru fragmentu pilnīgas atbilstības gadījumā saplūšana notiek viegli. Ja komplementārā atbilstība ir daļēja, tad DNS virkņu savienošanās notiek lēni. Pamatojoties uz ķēdes saplūšanas laiku, var novērtēt komplementaritātes pakāpi.

Kad DNS karsē buferšķīdumā, ūdeņraža saites tiek pārtrauktas ar slāpekļa bāzes, kas ir komplementāras, izraisot DNS ķēžu atšķiršanos. Pēc tam zāles iegūst no divām denaturētām dezoksiribonukleīnskābēm. Atdzesējot, vienpavediena reģioni kļūst renaturēti. Izveidojas tā sauktais DNS hibrīds.

Metode ļauj novērtēt un analizēt atkausēšanas ātrumu, ņemot vērā DNS īpašības (līdzības un atšķirības) starp sugām vai sugas ietvaros.

DNS zondes izmantošana ietver marķēta DNS fragmenta hibridizāciju ar noteiktu DNS reģionu, lai identificētu komplementāras nukleotīdu sekvences. Zondes marķēšanai izmanto nepiesātinātu atomu (hromoforu) vai radioaktīvo izotopu grupu.

DNS zondi izmanto neviendabīgai un viendabīgai nukleīnskābju noteikšanai. Zondes uzdevums ir noteikt apgabalus, kur ir notikusi mērķa zondes saplūšana. Noteikšanai viendabīgā sistēmā ir tāda priekšrocība, ka tā ļauj uzraudzīt DNS molekulu hibridizāciju reāllaikā.

Metodes būtība ir DNS denaturācija un renaturācija (DNS ķēžu atkalapvienošanās). Nukleīnskābes un DNS zondes renaturācijas process beidzas ar “hibrīda” veidošanos.

Specifiskas nukleīnskābju sekvences hibridizējas ar DNS zondi un tādējādi tiek atklātas un ļauj novērtēt DNS daudzumu pētāmajā materiālā.

Laboratorijas dzīvnieku infekcija

Trušu augstā jutība pret Treponema pallidum (apmēram 99,9%) ļauj tos izmantot sifilīta infekcijas diagnostikā.

Trušu inficēšana tiek veikta pētniecības centros, un tā ir “zelta standarts” citu metožu jutīguma novērtēšanai.

Atgriezīsimies pie treponēmālajiem un netreponemālajiem testiem, jo ​​tie tiek izmantoti visbiežāk. Apsvērsim to priekšrocības un trūkumus, kā arī kļūdas rezultātu interpretācijā.

Ne-treponēmas testi

Tie ir testi, lai noteiktu IgG un IgM antivielas pret standartizētu kardiolipīna antigēnu. To būtisks trūkums ir salīdzinoši zemā specifika.

Zemās izmaksas un vienkārša izpilde ļauj klasificēt šos testus kā diagnostikas testus, kas nepieciešami provizoriskas diagnozes noteikšanai un skrīningam iedzīvotāju vidū.

Tieši netreponēmas pārbaudes tiek veiktas, piesakoties medicīniskajai lapai, piesakoties darbā vai reģistrējoties pirmsdzemdību klīnikā.

1. 1 Minimālā jutība primārā sifilisa stadijā – 70%;
2. 2 Minimālā jutība vēlīnā sifilisa stadijā – 30%;
3. 3 viltus negatīvu un viltus pozitīvu rezultātu iespējamība;
4. 4 RSK veikšanas darbietilpība.

1. 1 Salīdzinoši zemas testa ražošanas izmaksas;
2. 2 Saņemt ātru atbildi;
3. 3 Iespēja tos izmantot skrīningam.

Kļūdaini pozitīvu vai vāji pozitīvu paraugu iegūšana ir iespējama šādos gadījumos:

1. 1 Izpildes tehnoloģijas pārkāpums, bloķējot AG-AT kompleksu.
2. 2 Pacientam ir autoimūnas slimības (reimatoīdais artrīts, reimatisms, sklerodermija, sistēmiskā sarkanā vilkēde, sarkoidoze u.c.).
3. 3 Ļaundabīgi audzēji.
4. 4 Vīrusu un baktēriju infekcijas.
5. 5 Endokrīnās slimības ( autoimūns tiroidīts, diabēts).
6. 6 Grūtniecība.
7. 7 Alkohola lietošana.
8. 8 Ēdot treknu pārtiku.
9. 9 Senils vecums.

Kā redzat no saraksta, nepareizam rezultātam ir daudz iemeslu. Tāpēc no tā jābūt ļoti piesardzīgam. Apskatīsim vēl divus paraugus kopā ar RSC. Šī ir mikronogulsnēšanas reakcija un VDLR (tā modifikācija).

Komplementa fiksācijas reakcija (RSK, Wasserman, RW)

Šis ir tests, kas balstīts uz komplementa spēju saistīties ar AG-AT kompleksiem. Izveidotais komplekss tiek identificēts, izmantojot hemolītisko sistēmu. Kardiolipīna antigēns ievērojami palielina testa jutīgumu.

Kolmera reakcija ir arī jutīga, kas sastāv no tās veikšanas dažādos temperatūras apstākļos. Tādējādi Kolmera reakcijas pirmā fāze notiek 20˚C temperatūrā pusstundu, otrā fāze 4-8˚C temperatūrā 20 stundas. Šajā laikā notiek komplementa fiksācija.

Veicot RSC, ir iespējams iegūt dramatiski pozitīvus rezultātus. Iemesls, iespējams, ir augsts antivielu titrs neatšķaidītā serumā. Šajā gadījumā paraugus ievada ar devām, kas samazinās.

Lai diferencētu sifilisa stadijas un novērtētu pretsifilīta ārstēšanas efektivitāti, tiek noteikts AT daudzums serumā.

Parauga pozitivitāte tiek novērtēta, izmantojot krustiņus, un seruma atšķaidījums norādīts arī Vasermana, Kolmera un Kanna reakcijās.

Mikronogulsnēšanas reakcija

Tā kā iepriekš minēto testu veikšanas sarežģītība ir augsta, klīniskās izmeklēšanas pārklājuma plašumam dažādas grupas populācijas, ir izstrādāta paātrināta sifilisa serodiagnostikas metode, tā sauktā ekspresmetode - mikroprecipitācijas reakcija (saīsināti MR, RMP).

To veic ar kardiolipīna antigēnu un palīgvielām. Tās priekšrocība ir perifēro asiņu savākšana pētījumiem. Tas ievērojami paātrina gan pašu tehniku, gan laboratorijas tehniķu darbu.

2. attēls — mikronogulsnēšanas reakcija (shēma)

Lai veiktu MR, nepieciešama pacienta asins plazma vai inaktivēts serums (tie satur antivielas). Pēc tam plazmu ievieto marķētās iedobēs. Pēc tam testa materiālam pievieno pilienu kardiolipīna antigēna, samaisa un sakrata. Tā rezultātā inficētās personas serumā parādās dažādas intensitātes raksturīgas pārslas.

Šis ir kvalitatīvs paraugs. Kvantitatīvajam novērtējumam izmanto 10 seruma atšķaidījumus, kas ievietoti 10 iedobēs ar atbilstošu marķējumu. Ar kvalitatīvo MR atbildi norāda krustiņu (plusi) vai mīnusa veidā; ar kvantitatīvo MR norāda antivielu titru (1:2, 1:4 utt.).

Pārslu klātbūtne tiek uzskatīta par pozitīvu vai vāji pozitīvu reakciju. Flokulāta parādīšanās ir iespējama pat slimības neesamības gadījumā, tāpēc iegūtā rezultāta galīgo novērtējumu veic pēc kontroles pētījuma vai citām reakcijām (RIBT, RIF, ELISA, RPGA).

Pasaules Veselības organizācijas ieteiktā metode reakcijas noteikšanai ar lipoīdu antigēnu (AG) pamatoti tiek uzskatīta par labāko starp citiem standarta ne-treponēmas testiem. Izstrādāts ASV, Džordžijas štatā seksuāli transmisīvo slimību laboratorijā (Venereal Diseases Research Laboratories).

Iestādes saīsinājums kalpoja par parauga nosaukumu - VDRL. VDRL ir MR modifikācija. Serums no pacienta ar sifilisu tiek inaktivēts un novietots uz stikla priekšmetstikliņa. Izmantotais antigēns sastāv no kardiolipīna, holesterīna un lecitīna dažādos procentos. Atbilde tiek reģistrēta gandrīz nekavējoties.

Antivielu klātbūtnē serumā notiek izteikta flokulācija. Serums kļūst reaktīvs pēc 4 nedēļām pēc inficēšanās. Lai novērtētu antivielu daudzumu, serumu iepriekš atšķaida eksponenciāli.

1. 1 salīdzinoši augsta jutība;
2. 2 salīdzinoši augsta specifika;
3. 3 ieviešanas vienkāršība;
4. 4 zemas reaģentu izmaksas;
5. 5 saņemot ātru atbildi.

VDRL trūkums ir tā salīdzinoši augstais viltus pozitīvo rezultātu rādītājs.

To cēloņi ir tās pašas slimības, kas uzskaitītas iepriekš.

Treponēmas testus veic ar specifiskiem Treponema pallidum antigēniem. Tie ir nepieciešami un obligāti, lai noteiktu galīgo diagnozi. Tās ir imunofluorescences reakcija (RIF), netiešā hemaglutinācijas reakcija (IPHA), ar enzīmu saistīta imūnsorbcijas pārbaude (ELISA) utt.

Pēc pozitīvs rezultāts netreponēmālie testi (RPR, MP, VDRL) vienmēr jāveic treponēmas testi (parasti kombinācija - RPGA, ELISA, RIF).

Treponēmas testi ir sarežģītāki nekā ātrās pārbaudes un prasa vairāk naudas.

Šo reakciju (saīsināti kā RIF) izmanto, lai diagnosticētu sifilisu, tostarp latentās formas, un vēlreiz pārbaudītu pozitīvos un viltus pozitīvos paraugus.

RIF pamatā ir marķēto antivielu mirdzums, ja to apvieno ar antigēna-antivielu kompleksu zem kvarca lampas. Metode tika izmantota 60. gados, un tā izcēlās ar tās ieviešanas vieglumu un augsto specifiku (kas ir nedaudz zemāka par RIBT).

Tam ir vairākas modifikācijas: RIF-10, RIF-200 un RIF-abs.

RIF ir visjutīgākais, ja to atšķaida 10 reizes, un pārējie ir specifiskāki. RIF tiek veikts divos posmos. Pacienta asins serumu pievieno AG. Izveidojas AG-AT komplekss, kas tiek pētīts nākamajā fāzē. Pēc tam ar fluorohromu iezīmēto kompleksu identificē ar mikroskopiju. Ja spīdums netiek novērots, tas norāda uz specifisku antivielu trūkumu asins serumā.

RIF-200 ir visvērtīgākais no visiem atšķaidījumiem. Metode paredzēta dažādu sifilisa formu diagnosticēšanai, īpaši latentais sifiliss un pozitīvo paraugu atkārtota pārbaude.

Treponema pallidum (saīsināti RIBT, RIT) imobilizācijas reakcija ir viens no sarežģītajiem seroloģiskajiem testiem, kas prasa ievērojamas pūles un finansiālas izmaksas. RIBT lieto arvien retāk, taču tā nozīme latenta sifilisa diagnostikā saglabājas.

Tam ir liela nozīme viltus pozitīvu rezultātu atpazīšanā grūtniecēm, un tā pamatā ir baktēriju imobilizācija imobilizīnu – novēloto antivielu – klātbūtnē.

Rezultātu novērtē, pamatojoties uz imobilizēto treponēmu procentuālo daudzumu (%), izmantojot īpašu tabulu:

1. 1 No 0 līdz 20 - negatīvs tests.
2. 2 No 21 līdz 50 - vāji pozitīvs tests.
3. 3 No 50 papildu pozitīvas reakcijas.

Lietojot RIBT, ir iespējami arī kļūdaini pozitīvi rezultāti. Tādējādi nepareiza atbilde ir iespējama inficēšanās laikā ar tropiskām trepanematāzēm, kā arī ar tuberkulozi, aknu cirozi, sarkoidozi un gados vecākiem pacientiem.

Šo sifilisa asins analīzi sauc par pasīvo hemaglutinācijas testu (saīsināti kā RPHA, THRHA asins analīzes).

RPHA antigēnu sagatavo no aitas sarkanajām asins šūnām, kas pārklātas ar Treponema pallidum fragmentiem (iegūts no inficētiem trušiem (skatīt 4. attēlu)). Analīzē izmanto pacienta venozās asinis (plazmu vai inaktivētu serumu).

Pievienojot antigēnu sifilisa pacienta serumam, veidojas AG-AT komplekss, kas izraisa sarkano asins šūnu aglutināciju. aglutināciju subjektīvi nosaka laboratorijas tehniķis.

3. attēls — RPHA (pasīvās hemaglutinācijas reakcijas) shēma

Paraugs tiek novērtēts kā pozitīvs, ja parādās viendabīgi rozā krāsas aglutināti. Sarkanā nogulšņu iekrāsošanās norāda uz sarkano asins šūnu izgulsnēšanos. RPHA ir ļoti jutīga un ļoti specifiska.

Mikrohemaglutinācijas reakcija

Tā ir vienkāršota RPGA versija. Atšķiras no iepriekš aprakstītā testa ar to, ka reakcijas veikšanai nepieciešams mazāk antigēna, šķīdinātāja un seruma. 4 stundas pēc seruma inkubācijas paraugu var novērtēt. Izmanto sifilisa skrīningam un masveida izmeklējumiem.

Saistīts imūnsorbcijas tests

Ar enzīmu saistītā imūnsorbcijas pārbaude (saīsināti ELISA) balstās uz specifisku antigēna-antivielu reakciju. Bioloģiskais materiāls (pacienta asins serums, cerebrospinālais šķidrums) tiek ievadīts iedobēs, uz kuru cietās virsmas ir fiksēti treponema pallidum antigēni. Testējamo materiālu inkubē, pēc tam antivielas, kas nav saistījušās ar antigēniem, nomazgā (sk. 5. attēlu).

Iegūtā kompleksa identificēšana tiek veikta fermentācijas stadijā, izmantojot imūnserumu, kas marķēts ar fermentu. Plkst ķīmiskā reakcija ferments krāso iegūtos kompleksus. Krāsošanas intensitāte ir atkarīga no specifisko antivielu daudzuma pacienta asinīs, un to reģistrē ar spektrofotometru.

4. attēls. ELISA shēma (ar enzīmu saistītā imūnsorbcijas pārbaude)

ELISA jutība ir lielāka par 95%. Metode tiek izmantota automatizētā režīmā, lai pētītu izvēles iedzīvotāju grupas: donorus, grūtnieces un citus, lai precizētu pozitīvu un viltus pozitīvu netreponēmu testu diagnozi.

Imunoblotēšana

Imunoblotēšana ir ļoti jutīga metode, vienkārša ELISA modifikācija. Reakcijas pamatā ir elektroforēze ar Treponema pallidum antigēnu atdalīšanu.

Atdalītos imūndeterminantus pārnes uz nitrocelulozes papīru un attīsta ELISA. Pēc tam serumu inkubē un nesaistītās antivielas nomazgā. Iegūto materiālu apstrādā ar imūnglobulīniem (IgM vai IgG), kas marķēti ar fermentu.

Sifilisa laboratoriskās diagnostikas rezultātu klīniskais novērtējums

1. tabulā ir sniegti iespējamie testa rezultāti un to interpretācija. Kā redzams tabulā, atšifrēšanas laikā primāri svarīgs ir visaptverošs testu novērtējums.

1. tabula. Seroloģisko reakciju (asins analīzes sifilisa noteikšanai) rezultātu interpretācija. Lai skatītu, noklikšķiniet uz tabulas

Testa reaktivitāti novērtē arī, izmantojot “krustus”:

1. 1 Maksimālā atbilde (asi pozitīvs tests) ir apzīmēta ar 4 krustiņiem.
2. 2 Pozitīvu testu norāda ar 3 krustiņiem.
3. 3 Vāji pozitīvu reakciju norāda divi krustiņi.
4. 4 Viens krustiņš norāda uz apšaubāmu un negatīvu rezultātu.
5. 5 Noraidoša atbilde ir atzīmēta ar mīnusa zīmi.

Sifilisa laboratoriskās diagnostikas optimizācijas problēma nav zaudējusi savu aktualitāti līdz šai dienai. Mūsdienu diagnostikas metodēm, neskatoties uz zinātnieku vēlmi diagnostiku panākt pēc iespējas augstākajā jutīguma un specifiskuma līmenī, ir nepieciešama kontroles pārbaude un individuāla pieeja.

Sifilīta infekcijas iezīme ir serorezistences parādība, kas nekad nav saņēmusi zinātnisks skaidrojums. Diagnoze tiek veikta pēc pilnīgas pacienta izmeklēšanas, izmantojot epidemioloģiskās, klīniskās un laboratoriskās metodes.

Uz medicīnas ekonomiskās un tehniskās attīstības fona ir vērojams progress arī jaunu sifilisa diagnostikas kritēriju izstrādē. Tas viss ļaus ātri, veiksmīgi un precīzi ārstēt pacientus.

Infekcijas slimības izraisa atbilstošu antivielu veidošanos slima cilvēka asinīs. Tas darbojas šādi imūnā aizsardzībaķermeni.

Konkrēta vīrusa vai baktēriju antivielu klātbūtnes noteikšana ļauj uzzināt par slimības sākšanos pirms tās galveno simptomu parādīšanās. Mūsdienās seroloģiskie testi sniedz vispilnīgāko priekšstatu. Tāpēc šajā rakstā mēs runāsim par seroloģisko testēšanu.

Kas ir seroloģiskie testi

Cilvēku un dzīvnieku bioloģisko materiālu izpētes metodes, kas var noteikt tajos antivielas vai antigēnus, ko organisms ražo kā aizsargreakciju cīņā pret infekcijām, sauc par seroloģiskiem pētījumiem. Šādas metodes izmanto, lai noteiktu infekcijas izraisītāju, kā arī:

• asins grupas noteikšana,
• imunitātes izpēte, nosakot tās humorālās sastāvdaļas līmeni,
• audu antigēnu noteikšana.

Kam tas ir parakstīts?

Kāpēc to darīt?

Speciālisti šo metodi novērtē kā veidu, kā kvalitatīvi noteikt slimības diagnozi.

• Ja pacients ir slimības stadijā, tad ieteicams veikt atkārtotus pētījumus ar aptuveni vienas nedēļas intervālu, lai uzraudzītu izmantotās ārstēšanas efektivitāti.
• Seroloģiskos testus bieži izmanto, lai noteiktu, kurš patogēns izraisīja slimību pēc tam, kad pacients ir to pārcietis.

Procedūru veidi

Seroloģiskās izpētes metodes balstās uz dažādām reakcijām:

• Neitralizācijas reakcija balstās uz imūnseruma antivielu īpašību darboties kā neitralizējošam līdzeklim pret pašiem toksīniem vai mikroorganismiem, novēršot to kaitīgo iedarbību.
• Aglutinācijas reakcija, kas savukārt ir sadalīts šādos apakštipos:
  • tiešas reakcijas - tās izmanto, lai pārbaudītu asins serumu antivielu klātbūtnei. Nogalinātos mikrobus pievieno pētāmajam sastāvam, un, ja parādās nogulsnes pārslu veidā, tas nozīmē, ka reakcija uz šāda veida mikrobiem ir pozitīva;
  • netiešo hemaglutinācijas reakciju veic, ievadot asins serumā eritrocītus, uz kuriem adsorbējas antigēni; šie līdzekļi mijiedarbojas ar tāda paša veida antigēniem, kas atrodas asins serumā, kā rezultātā veidojas nogulsnes.
• Reakcija, kas ietver komplementu izmanto infekcijas slimību noteikšanai. Metode tiek īstenota, aktivizējot komplementu un novērojot reakcijas, kas notiek pētāmajā vidē.
• Nokrišņu reakcija tiek veikta, uzklājot antigēna šķīdumu uz šķidras barotnes - imūnseruma. Šai metodei izmantotais antigēns ir šķīstošs. Reakcija ir tāda, ka antigēna-antivielu komplekss tiek pakļauts nokrišņiem; radušās nogulsnes sauc par nogulsnēm.
• Reakcija, izmantojot marķētus antigēnus un antivielas ir balstīta uz to, ka mikrobi vai audu antigēni, apstrādāti noteiktā veidā, iegūst spēju izstarot gaismu ultravioleto staru ietekmē. Metode tiek izmantota ne tikai antigēnu diagnosticēšanai, bet arī noteikšanai ārstnieciskas vielas, fermenti, hormoni.

Kontrindikācijas par

Tā kā metode ietver pacienta bioloģiskā materiāla izpēti, tā nevar negatīvi ietekmēt cilvēku. Tāpēc lietošanai nav kontrindikāciju.

Pētījums ir pilnīgi drošs.

Tālāk mēs aprakstīsim, kā tiek veikta seroloģiskā pārbaude.

Indikācijas testēšanai

Metode tiek izmantota, lai noteiktu infekcijas izraisītāju, tostarp šādām slimībām:

• HIV infekcija,
• toksoplazmoze,
• infekcijas slimības, kas iegūtas seksuāla kontakta ceļā;
• difterija,
• Pieejamība ;
• bruceloze,
• stafilokoku infekcijas,
• hepatīts.

Šo metodi izmanto arī šādu slimību noteikšanai:

• opisthorhioze,
• amebiāze,
• cisticerkoze,
• giardiasis,
• pneimonija.

Sagatavošanās procedūrai

Procedūrai nav nepieciešama īpaša sagatavošanās. Jāievēro viens nosacījums: asins paraugu ņemšana tiek veikta tukšā dūšā.

Asins (materiāla) paraugu ņemšanas (ņemšanas) algoritms seroloģiskai pārbaudei ir aprakstīts zemāk.

Analīzes veikšana

Asinis tiek ņemtas no elkoņa kaula vēnas. Lai pētījums izdotos, asinis tiek ņemtas nevis ar šļirci, bet gan ar gravitācijas palīdzību. Adatu bez šļirces ievada vēnā un mēģenē savāc līdz 5 ml asiņu.

Procedūras laikā pacients izjūt nelielu diskomfortu, kad adata tiek ievietota vēnā. Turpmākās darbības nav satraucošas.

Tālāk ir aprakstīta seroloģiskās asins analīzes rezultātu interpretācija.

Rezultātu atšifrēšana

Iegūtie rezultāti jāapsver kopā ar slimības klīnisko ainu, pārbaudot iespējamo diagnozi, izmantojot vairākus testus. Tas ir saistīts ar faktu, ka testi ir specifiski un dažreiz tiem nav absolūtas jutības pret infekcijas slimībām.

Visaptverošas seroloģiskās asins analīzes cena ir aprakstīta zemāk.

Vidējās procedūras izmaksas

Procedūras cena būs atkarīga no studiju veida. Tas sastāv no analīzes izmaksām un antivielu pret konkrētu patogēnu izmaksām. Procedūras vidējās izmaksas ir 700 rubļu robežās.

Seroloģiskās reakcijas ir aprakstītas tālāk esošajā videoklipā:

Seroloģiskā metode ir reakciju kopums, kura pamatā ir antigēna un antivielu mijiedarbība (Ag-Ab) un kuru mērķis ir identificēt antivielas pret infekcijas slimību patogēnu antigēniem vai pašiem mikrobu antigēniem asins serumā un citos ķermeņa šķidrumos. Seroloģisko metodi raksturo augsta jutība un specifiskums. Lielāko daļu šīs metodes reakciju ir viegli veikt un reģistrēt, tās ir pieejamas daudzām laboratorijām, parasti ir drošas, ekonomiskas un standartizējamas. UZ nepilnības Seroloģisko metodi var attiecināt uz: 1) rezultāta netiešo raksturu, kad par slimības etioloģiju spriež nevis pēc patogēna izolācijas, bet gan pēc organisma (imūnās) atbildes reakcijas pret patogēnu; 2) parenterālas iejaukšanās nepieciešamība pacienta organismā; 3) vairumā gadījumu novēlota diagnoze, kas izskaidrojama ar humorālās imūnās atbildes dabisko dinamiku; 4) iespēja sajaukt anamnētisko Abs (iepriekšējas slimības vai vakcinācijas rezultātā) ar Abs ar pašreizējo infekciju. Nosakot mikrobu antigēnus 3 un 4, trūkumu nav, taču ir jāņem vērā dažādu mikrobu antigēnu cirkulācijas īpatnības un šīs pazīmes jāsaista ar iespēju ņemt materiālu pētniecībai.

Seroloģiskās metodes posmi:

1) ņemšana materiāli pētniecībai. Vairumā gadījumu materiāls ir asins serums. To iegūst pēc asins recekļa veidošanās, asinis jāsavāc stingri aseptiskos apstākļos saskaņā ar standarta metodēm,

2) seroloģiskās reakcijas izvēle konkrētajam gadījumam ir atkarīga no pētījuma mērķa, iespējamās slimības, slimības fāzes, pētījuma materiāla, reakcijas jutīguma un konkrētās laboratorijas iespējām. Lai noteiktu Abs, kā arī Ags, tiek izmantotas aglutinācijas reakcijas ( RA), pasīvā hemaglutinācija ( RPGA)), imunofluorescence (REEF), hemaglutinācijas kavēšana ( RTGA), nokrišņi, flokulācija, komplementa saistīšanās reakcija (FFR) utt.

3) seroloģiskās reakcijas iestatīšana,

4) seroloģiskās reakcijas reģistrācija, lai noteiktu infekcijas seroloģisko marķieru klātbūtni.

Dažādas seroloģiskās reakcijas raksturo vairākas vispārīgās īpašības:

1) tā kā jebkuras seroloģiskās reakcijas ir mijiedarbības reakcijas starp Ab un Ag, tad visos gadījumos, lai noteiktu Ab klātbūtni pētāmajā substrātā, zināmu standarta korpuskulāro vai šķīstošo Ag kopu, t.s. diagnostikas. Savukārt, lai konstatētu Ag klātbūtni, kopa imūnās diagnostikas serumi,

2) Ag un Ab mijiedarbība notiek tikai elektrolīta klātbūtnē, kas parasti ir izotonisks nātrija hlorīda šķīdums vai bufermaisījumi; sistēmas pH jābūt apmēram 7,

3) Ag-At kompleksa veidošanai ir nepieciešams inkubācijas periods īpašos temperatūras apstākļos (no +4 ° C līdz 37 ° C). Konkrēta imūnkompleksa veidošanās notiek ātri; ar neapbruņotu aci redzama parādība (aglutinācija, līze utt.) - lēni, pēc vairākām stundām vai pat dienām,

4) abiem seroloģiskās reakcijas komponentiem (antigēnam un antivielām) jābūt līdzvērtīgā proporcijā. Jebkuras sastāvdaļas pārpalikums bloķē Ag-At kompleksa veidošanos un veicina kļūdaini negatīvus rezultātus.

Seroloģiskās reakcijas tiek reģistrētas vizuāli, dažreiz izmantojot palielināmo stiklu. Seroloģiskās reakcijas ņemšanas vērā būtība ir saistīta ar Ag un Ab saistīšanās fenomena noteikšanu, veidojot Ag-At kompleksu. Vizuāli Ag-At kompleksa veidošanos pavada divas galvenās parādības - aglutinācija un nokrišņi. Atšķirības starp tām nosaka antigēnu un tiem raksturīgo antivielu īpašības. Tajā pašā laikā starp mikrobu antigēniem ir arī tādi, kas inducē neizgulsnošo antigēnu sintēzi; Ag-Ab kompleksa veidošanos šajā gadījumā nepavada ne aglutinācijas parādība, ne nokrišņu parādība, un identificēšana. Ag-Ab kompleksa veidošanās fakts prasa reakcijas diagnostikas komponenta marķēšanu ar īpašām etiķetēm vai diagnostiskā antigēna pārnešanu uz citu agregācijas stāvokli.

Vērtējot reakciju, tiek izmantoti 3 galvenie kritēriji: 1) reakcijas esamība un intensitāte (plusos utt.); 2) diagnostiskais titrs, 3) Ab titra pieaugums slimības gaitā 4 vai vairāk reizes. Reakcijas klātbūtni nosaka vizuālas parādības vai imūnķīmiskā marķiera saistīšanās. Lai novērtētu seroloģiskās reakcijas intensitāti, tiek izmantots 4 “+” princips (7. tabula).

7. tabula.

Sistēma seroloģisko reakciju novērtēšanai ar 4 "+" aglutinācijas un izgulsnēšanās reakcijām

Lai kvantitatīvi attēlotu seroloģiskās reakcijas rezultātus, tiek izmantots antivielu vai antigēna titra jēdziens. Lai noteiktu Ab līmeni (vai Ag titru), ir jāveic seroloģiskā reakcija, sagatavojot vairākus asins seruma vai cita materiāla atšķaidījumus (titrāt). Sagatavojot asins seruma atšķaidījumus, izmanto elektrolīta šķīdumu (visbiežāk izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu). Atšķaidīšanas pakāpi (titrēšanu) nosaka pēc elektrolīta šķīduma tilpuma un asins seruma tilpuma attiecības. Piemēram, veicot secīgus atšķaidījumus 2 reizes, 1. mēģenē sajauc vienādus tilpumus elektrolīta šķīduma un asins seruma; ar soli 5 reizes 4 tilpuma daļām elektrolīta šķīduma pievieno 1 tilpumu seruma. ; ar soli 10 reizes - līdz 9 1 tilpumu asins seruma pievieno elektrolīta šķīduma tilpumam (8. tabula).