Coombsov test

Direktni Coombsov test je antiglobulinski test (aglutinacija v gelu, ki omogoča dokazovanje popolnih dvovalentnih protiteles), ki na površini rdečih krvničk zaznava protitelesa razreda IgG in C3 komponento komplementa. Običajno imajo protitelesa, odkrita z neposrednim Coombsovim testom, široko specifičnost, ki ni povezana z dobro uveljavljenim antigenom. Pozitiven neposredni Coombsov test jasno kaže, da ima bolnik hemolitična anemija, čeprav za to boleznijo ne trpijo vsi bolniki s pozitivnim neposrednim antiglobulinskim testom. Pri približno 10% bolnikov protiteles ali komponent komplementa na membrani rdečih krvničk ni mogoče določiti z direktnim Coombsovim testom (test je negativen), kljub temu pa imajo avtoimunsko hemolitično anemijo. Za razjasnitev specifičnosti protiteles v takih primerih se uporabljajo testi z njihovo elucijo. Direktni Coombsov test, pozitiven le na komplement, se običajno nanaša na protitelesa proti prehladu tipa IgM. V tem primeru protitelesa IgM ni prisoten na rdečih krvnih celicah, ko bazalna temperatura telesa. Ker pa protitelesa IgM aktivno fiksirajo komplement in komplement ostane na rdečih krvnih celicah, bo pri tej obliki avtoimunske hemolitične anemije (hladna agutininska bolezen) Coombsov test pozitiven samo za komplement.

Direktni Coombsov test je pozitiven pri avtoimunski hemolitični anemiji, ki jo povzročajo topla protitelesa, avtoimunski anemiji, povzročeni z zdravili (pri jemanju metildope ima do 20% bolnikov pozitivno reakcijo), adsorpcijski tip hemolitične anemije, imunski kompleksni tip hemolitične anemija (test je pozitiven samo na C3), z avtoimunsko hemolitično anemijo, ki jo povzročajo hladna protitelesa - bolezen hladnih aglutininov (test je pozitiven samo na C3). Pri paroksizmalni hladni hemoglobinuriji je neposredni Coombsov test negativen.
V akutnem obdobju bolezni zaradi uničenja rdečih krvničk, na katerih se veliko število protiteles, s hemolitično krizo, pa tudi z nezadostno količino protiteles med kroničnim potekom bolezni, lahko opazimo negativen neposredni Coombsov test.

:

• Pomemben pogoj za zagotavljanje kakovosti laboratorijske raziskave odvzem krvi na prazen želodec, v jutranji čas(do 12:00).
• 12 ur pred testom se morate izogibati pitju alkohola, kajenju, prehranjevanju in omejitvi telesne dejavnosti.
• Zjutraj na dan krvnega testa lahko pijete vodo.
• Izogibajte se jemanju zdravil; Če ni mogoče prenehati jemati zdravila, morate o tem obvestiti laboratorij.
• Priporočljivo je, da material vzamete pred izvajanjem medicinskih diagnostičnih postopkov.
• Pri ocenjevanju ravni hormonov pri ženskah je pomembno upoštevati dan menstrualni ciklus Kdaj je najboljši čas za določanje določenih hormonov? Te informacije lahko dobite pri svojem zdravniku.

Kazalo	Značilno
Analizator in testni sistem	Gel kartice; DiaMed AG (Švica)
Referenčne vrednosti	Negativen rezultat / Pozitiven rezultat
Moteči dejavniki. Zdravila
Pozitiven test je možen pri jemanju naslednjih zdravil: acetaminofen, salicilna kislina, aminopirin, antihistaminiki, karbromal, cefalosporini, klorpromazin, klorpropamid, cisplatin, klonidin, dipiron, etosuksimid, fenfluramin, fuadin, hidralazin, hidroklorotiazid, ibuprofen, insulin, izoniazid, levodopa, mefenaminska kislina, melfalan, metadon, metildopa, metilsergid, nomifenzin , penicilamin, penicinska linija , fenacetin, fenilbutazon, probenecid, prokainamid, kinidin, kinin, rifampicin, streptomicin, sulfonamidi, derivati ​​sulfonilsečnine, tetraciklin, triamteren, trimelitični anhidrid
Indikacije za uporabo
Diagnoza imunske hemolitične anemije, hemolitična bolezen novorojenčki, z zdravili povzročena imunska hemolitična anemija, hemolitične transfuzijske reakcije
Interpretacija rezultatov
Običajno je neposredni Coombsov test negativen. Pozitiven Coombsov test za: avtoimunska hemolitična anemija; hemolitična bolezen novorojenčkov; z zdravili povzročena imunska hemolitična anemija; hemolitične transfuzijske reakcije

Antiglobulinsko načelo. Protieritrocitna protitelesa nepopolnega tipa in molekule komplementa (C), ki se nahajajo na površini eritrocitov, se odkrijejo - direktni test - z njihovo aglutinacijo v stiku z živalskim serumom, ki vsebuje protitelesa proti humanemu antiglobulinu (antiglobulinski serum). Prosta nepopolna protitelesa v serumu odkrijemo – indirektni test – tako, da jih pritrdimo na mešanico normalnih rdečih krvničk skupine 0, katerih vsi antigeni pripadajo znanemu sistemu Rh, in se nato aglutinirajo pod vplivom antiglobulinskega seruma.

Materiali, reagenti za Coombsov antiglobulinski test: epruvete 10/100 ml; graduirane pipete 1, 2 ml; Pasteurjeve pipete; stojala; Nebrušena stekelca; 8,5‰ raztopina NaCl; rdeče krvne celice. Pacientove rdeče krvne celice, pa tudi tiste, ki spadajo v skupino 0, bomo pridobili iz sveže odvzete krvi s sredstvom proti strjevanju krvi (raztopina EDTA).

Rdeče krvne celice skupine 0 je treba izbrati tako, da izvirajo iz normalnih posameznikov in vsebujejo vse Rh antigeni. Shranjujemo jih lahko do 7 dni v avtologni plazmi pri +4°C. V odsotnosti rdečih krvnih celic skupine 0 se lahko uporabi znani antigenski mozaik, mešanica rdečih krvnih celic skupine 0, Rh-pozitivnih in Rh-negativnih rdečih krvnih celic.

Serum bolnik mora biti sveže izbran.

Antiglobulinski serum izdelal Inštitut. I. Cantacuzino, je na voljo v liofilizirani obliki v 1 ml ampulah. Po raztapljanju shranjujte serum pri -20°C.

Coombsova antiglobulinska tehnika:
A) Neposredni Coombsov test: Izperite pacientove rdeče krvne celice 3-krat 8,5‰ raztopina NaCl.
Na več stekelcev nanesemo veliko kapljico razredčin antiglobulinskega seruma, zraven pa majhno kapljico bolnikovega sedimenta eritrocitov; zmešajte kapljice z vogalom kozarca. Pripravljen material pustite na mizi 5 minut, nato ga preglejte na prisotnost aglutinatov. Če je rezultat pozitiven, določimo največji aglutinacijski titer.

b) Indirektni Coombsov test: eritrocite skupine 0, Rh-pozitivne in Rh-negativne, 3-krat splaknemo z 8,5‰ raztopino NaCl in izpostavimo bolnikovemu serumu v razmerju 2 kapljici eritrocitov na 8-10 kapljic seruma, nato inkubiramo 60 minut pri temperatura 37 ° C. Po tem ponovno trikrat speremo rdeče krvne celice in jih obdelamo z antiglobulinskim serumom po navodilih za direktni test Coombs.

Kdaj govorimo o o hladnih aktivnih protitelesih senzibilizirajo rdeče krvne celice skupine 0 za 60 minut. pri temperaturi +4°C.

Opomba 1) Ne izvajajte neposrednega Coombsovega testa na rdečih krvnih celicah, shranjenih en ali več dni pri + 4 °C ali sobni temperaturi, saj so lahko rezultati lažno pozitivni zaradi fiksacije nepopolnih hladno aktivnih protiteles, prisotnih v normalnem serumu. 2) V primerih hude hiperproteinemije 4-5-krat sperite rdeče krvne celice in preverite odsotnost serumskih beljakovin v zadnji tekočini za izpiranje s sulfosalicilno kislino.

Morebiten ostanek 2 μg IgG/ml v usedlini eritrocitov lahko nevtralizira antiglobulinski serum. Coombsov test se lahko izvede tudi z uporabo monospecifičnih serumov anti-IgG, -IgM, -IgA -C3 in -C4, da se razjasni vrsta celic, ki se nahajajo na površini rdečih krvnih celic, na primer pri bolnikih z avtoimunsko hemolitično slabokrvnost.

Coombsov test– test za odkrivanje protiteles, pritrjenih na površino ali raztopljenih v plazmi. Uporablja se za odkrivanje imunizacije in protiteles proti rdečim krvnim celicam. Drugo ime je antiglobulinski test. Lahko je neposreden ali posreden.

pri direktni antiglobulinski test zazna protitelesa, fiksirana na površini rdečih krvničk. Izvaja se ob sumu na druge avtoimunske bolezni, po jemanju zdravil (metildopa, penicilin, kinin) itd.

Rdeče krvne celice so bile senzibilizirane in vivo – protitelesa so nanje že trdno pritrjena, dodatek antiglobulinskega seruma (anti-IgG) pa povzroči, da se senzibilizirane celice zlepijo, kar je vidno s prostim očesom.

Indirektni Coombsov test odkriva protitelesa proti eritrocitom v krvni plazmi, izvaja se pred transfuzijo krvi in ​​med.

Protitelesa proti eritrocitom so vrsta avtoprotiteles, tj. protiteles proti lastnim tkivom. Avtoprotitelesa se pojavijo med patološko reaktivnostjo imunski sistem za nekatera zdravila, na primer visoke odmerke penicilina.

Rdeče krvničke na svoji površini vsebujejo različne kemijske strukture(glikolipidi, saharidi, glikoproteini in proteini), v medicini imenovani antigeni. Človek od svojih staršev podeduje določen zemljevid antigenov na vsaki rdeči krvni celici.

Antigene združimo v skupine in nato kri razdelimo v več skupin – po sistemu AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Najbolj znana in pomembna pri delu zdravnika sta AB0 in Rh faktor (Rh).

sistem AB0

Rh status osebe določa prisotnost teh antigenov. Posebej pomemben antigen eritrocitov je antigen D. Če je prisoten, potem govorijo o Rh pozitivna kri RhD, in če ga ni - oh Rh negativni Rhd.

Če se ustrezno protitelo veže na eritrocitne antigene, se eritrocit uniči – hemoliza.

Indikacije

Glavna indikacija za neposrednoantiglobulinski test- sum na hemolitično anemijo. Najpogosteje se izvaja pri primarni avtoimunski hemolitični anemiji, hemolizi pri revmatičnih, tumorskih, nalezljive bolezni, z zdravili povzročena hemoliza.

Če se anemija pojavi več dni ali mesecev po transfuziji krvi ali ob dolgotrajni zlatenici pri novorojenčku, opravimo tudi direktni Coombsov test.

posrednoopravi se antiglobulinski test pred transfuzijo krvi in ​​med nosečnostjo Rh negativne ženske.

Avtoimunska hemolitična anemija

Avtoimunska hemolitična anemija (primarna)– klasična avtoimunska bolezen neznanih vzrokov. Interakcija znotraj imunskega sistema je motena, kar vodi v dojemanje lastnih rdečih krvničk kot tujkov. V bezgavkah se sintetizirajo protitelesa razreda IgG (reagirajo pri t 37 °C) in/ali IgM (pri t 40 °C), ki, ko se pritrdijo na površino eritrocita, sprožijo številne encime (t. sistem komplementa) in »preluknjajo« steno eritrocita, kar vodi do njegovega uničenja – hemolize.

Prvi simptomi so posledica uničenja rdečih krvnih celic in zmanjšanja hemoglobina. Med njimi:

• utrujenost, splošna šibkost, razdražljivost
• dispneja
• bolečine v trebuhu in prsih, slabost
• temna barva urina
• bolečine v hrbtu
• ikterično obarvanje kože in sluznic
• zmanjšanje števila rdečih krvničk in

Pozitiven rezultat neposredno Coombsovi testi 100% potrjuje diagnozo avtoimunske hemolitične anemije in dokazuje njen avtoimunski izvor. Hkrati negativni rezultat ne omogoča odstranitve diagnoze.

Sekundarna hemolitična anemija

Sekundarna avtoimunska hemolitična anemija in pozitiven Coombsov test se lahko pojavita pri naslednjih boleznih:

• Evansov sindrom
• okužba s pljučnico

Pozitiven antiglobulinski test pri teh boleznih je eden od simptomov in ne merilo za diagnozo.

Hemolitična bolezen novorojenčka

Vzrok hemolitična bolezen novorojenčkov - nezdružljivost krvne skupine matere in ploda, v večini primerov po sistemu Rh, v posameznih primerih - po sistemu AB0, kazuistično - po drugih antigenih.

Rh konflikt se razvije, če plod Rh-negativne ženske podeduje Rh-pozitivno kri od očeta.

Bolezen se pri novorojenčku razvije le, če je mati že razvila protitelesa proti ustreznim antigenom, kar se zgodi po prejšnjih nosečnostih, splavih in transfuziji nezdružljive krvi. večina pogost razlog sprožitev sinteze protiteles proti antigenom membrane eritrocitov - porod (feto-maternalna krvavitev). Prvi porod praviloma poteka brez zapletov, naslednji pa so obremenjeni s hemolitično boleznijo novorojenčka v prvih dneh po rojstvu.

Simptomi hemolitične bolezni novorojenčka:

• porumenelost kože
• , in sluznice
• povečana jetra in vranica
• težave z dihanjem
• otekanje celega telesa
• vzbujanje in postopna depresija centralnega živčnega sistema

Anemija po transfuziji krvi

Indirektni Coombsov test pred transfuzijo krvi za oceno združljivosti in neposredni Coombsov test - po njem, če obstaja sum na posttransfuzijsko hemolizo, tj. v prisotnosti simptomov, kot so zvišana telesna temperatura, solzenje (preberite spodaj). Namen analize je odkriti protitelesa proti transfuziranim rdečim krvnim celicam, ki so se vezala na rdeče krvne celice prejemnika in so vzrok za potransfuzijsko hemolizo ter prezgodnjo odstranitev rdečih krvničk darovalca iz krvnega obtoka. prejemnik (tisti, ki je prejel kri).

Simptomi:

• zvišanje telesne temperature
• kožni izpuščaj
• bolečine v hrbtu
• rdeča
• slabost
• omotica

Dekodiranje

Treba je spomniti, da so osnovna pravila za dešifriranje neposrednih in posrednih antiglobulinskih testov enaka. Razlika je le v lokaciji protiteles – v krvi ali na rdečih krvničkah.

• če direktni Coombsov test je negativen– to pomeni, da protitelo ne »sedi« na rdeče krvne celice in je treba vzrok simptomov iskati naprej in ga odpraviti posredni vzorec Coombs
• če pozitiven rezultat Coombsov test odkrit po transfuziji krvi, okužbah, zdravilih - pozitivnost traja do 3 mesece (življenjska doba rdečih krvničk 120 dni - 3 mesece)
• pozitiven rezultat antiglobulinskega testa z avtoimunska bolezen traja mesece in celo leta

Norma

• direktni Coombsov test - negativen
• indirektni Coombsov test - negativen

Kvalitativno pozitiven rezultat se meri v številu plusov od ena do štiri (+, ++, +++, ++++), kvantitativno pa v digitalni obliki - 1:16, 1:256 itd.

ja Vaš zdravnik bi moral zagotovo vedeti, da ste prejeli transfuzijo krvi, saj to zdaj vpliva na pravilno razlago rezultatov testov. Pri prejemu tuje (čeprav večkrat testirane) krvi vedno obstaja možnost, da vaše telo razvije protitelesa proti transfuzirani krvi. Ta protitelesa bodo zagotovila slab vpliv na zdravstveno stanje. Pri naslednjih transfuzijah krvi mora zdravnik vedeti, da ste transfuzijo že prejeli, kar pomeni, da je bil čas za sintezo protiteles. Za nosečnice je ta podatek še kako pomemben.

3. Ali bodo vsi otroci bolni, če pride do neskladja Rh faktorja med materjo in otrokom?

Odvisno od tega, ali je otrok Rh pozitiven ali negativen (RhD). Nosilci krvnih skupin I, II, III in IV so lahko Rh pozitivni ali negativni. V primeru, da je mati Rh negativna, otrok pa Rh pozitiven, bodo protitelesa nastala že ob prvi nosečnosti, vendar šele po prvem porodu (ali prekinitvi nosečnosti) pride do neposrednega stika med krvjo matere in matere. otrok. Hemolitični učinek protiteles bo uresničen šele med drugim in naslednjimi porodi, kar bo povzročilo hemolitično bolezen pri novorojenčku.

Vsako žensko z negativnim Rh faktorjem je treba skrbno pregledati med nosečnostjo in po porodu preventivno zdravljenje za preprečitev pojava protiteles in nadaljnjih zapletov.

4. Ali je med nosečnostjo treba poznati krvno skupino mojega moža, preden opravim Coombsov test?

Med nosečnostjo morate ne samo poznati, ampak tudi preveriti krvno skupino otrokovega biološkega očeta.

podatki

• prvič predlagan v Cambridgeu leta 1945
• prag občutljivosti - vsaj 300 fiksiranih molekul protiteles na eni rdeči krvni celici
• število protiteles, ki sprožijo hemolizo - individualno za vsako osebo (od 16-30 do 300)
• dinamika drugih laboratorijskih kazalcev hemolitične anemije (hemoglobin, bilirubin, retikulociti) se lahko normalizira, Coombsov test pa ostane na enaki ravni

Coombsov test je nazadnje spremenil: 16. marec 2018 avtor Marija Bodjan

Coombs, Morant, Reis leta 1945 so predlagali antiglobulinski test, namenjen odkrivanju nepopolnih protiteles proti eritrocitom, kasneje pa so ga poimenovali Coombsov test. Bistvo ta metoda je, da antiglobulinski serum, ki vsebuje protitelesa proti človeškim imunoglobulinom, pri reakciji z rdečimi krvničkami, senzibiliziranimi z nepopolnimi protitelesi, povzroči njihovo aglutinacijo.

Glede na to, ali so protitelesa fiksirana na površini rdečih krvnih celic ali so v prostem stanju v krvni plazmi, se uporablja neposredni ali posredni Coombsov test.

Neposreden Coombsov test se izvede v primerih, ko obstaja razlog za domnevo, da so rdeče krvne celice, ki se proučujejo, že in vivo so bili senzibilizirani z ustreznimi protitelesi, tj. prva faza reakcije - fiksacija protiteles na površini rdečih krvničk - se je zgodila v telesu in kasnejši dodatek antiglobulinskega seruma povzroči aglutinacijo senzibiliziranih celic.

Z indirektnim Coombsovim testom se odkrijejo nepopolna protitelesa v testnem serumu. V tem primeru reakcija poteka v dveh fazah. Prva faza je inkubacija testnih eritrocitov s testnim serumom, pri kateri se protitelesa v vzorcu testnega seruma fiksirajo na površini eritrocitov. Drugi korak je dodajanje antiglobulinskega seruma.

Do sedaj se Coombsov test pogosto uporablja v laboratorijski praksi za diagnozo imunopatoloških stanj, zlasti pri avtoimunski hemolitični anemiji, za katero je značilno uničenje rdečih krvnih celic zaradi vezave. celična membrana s protitelesi in (ali) komponentami sistema komplementa. Uporablja se za ugotavljanje prisotnosti Ig G na membrani eritrocitov (običajno Ig G1 in Ig G3), ki lahko aktivirajo komplement, včasih pa tudi komplement (C3d). Vendar pa je v akutnem obdobju bolezni zaradi uničenja rdečih krvnih celic, na katerih je bilo zabeleženo veliko število protiteles, med hemolitično krizo, pa tudi z nezadostnim številom protiteles med kroničnim potekom bolezni, lahko opazimo negativen neposredni Coombsov test.

Poudariti je treba, da posredni Coombsov test ostaja najboljša metoda individualna izbira transfuzijskih medijev, saj vam omogoča najbolj natančno določitev individualne združljivosti darovalca in prejemnika z eritrocitnimi antigeni.

Pri pregledu vseh prejemnikov organov in tkiv v predtransplantacijskem obdobju in prejemnikov hematopoetskih matičnih celic tudi po presaditvi je priporočljiv dodaten direktni antiglobulinski test na prisotnost avtoprotiteles.

Poleg imunohematologije in transfuziologije se antiglobulinski testi pogosto uporabljajo pri diagnostiki številnih patoloških stanj: hematoloških bolezni, vključno z limfoproliferativnimi boleznimi, sistemske bolezni vezivnega tkiva, Sjogrenova bolezen, kronični aktivni hepatitis itd.

Coombsovi testi se aktivno uporabljajo v medicinski genetiki in sodna medicina za določanje površinskih eritrocitnih antigenov.

Coombsov test je precej delovno intenzivna raziskovalna metoda, ki zahteva posebno skrb pri izvajanju. Pri uporabi je nekaj težav, povezanih zlasti z razlago šibko pozitivnih reakcij. Znano je, da lažne šibke pozitivne oz negativne reakcije pri izvajanju Coombsovih testov so lahko posledica nezadostno učinkovitega izpiranja rdečih krvničk, nevtralizacije antiglobulinskega reagenta s sledovi seruma, pa tudi stika z nemaščeno površino, na katero se lahko fiksira antiglobulin, s čimer izgubi svojo aktivnost. . Druga pomanjkljivost Coombsovega testa je nestabilnost antiglobulinskega reagenta, katerega priprava in shranjevanje ima določene značilnosti, zaradi česar je tudi težko kvantificirati hemaglutinacijsko reakcijo z antiglobulinskim serumom.

Poleg tega so študije, ki so jih izvedli A. Holburn, D. Voak et al. , so pokazali, da je lahko vzrok za lažno negativne rezultate čezmerno tresenje pri resuspendiranju suspenzije rdečih krvnih celic. Napačne rezultate pri izvajanju antiglobulinskih testov lahko povzroči tudi prisotnost v antiglobulinskem reagentu primesi protikomplementarnih protiteles, zlasti proti komponentam komplementa C3d-, C3c-, C4c- in C4d-, ki so adsorbirana na površini testirajte rdeče krvne celice med inkubacijo in ustvarite videz pozitivnega rezultata.

Te pomanjkljivosti je mogoče enostavno odpraviti s temeljitim pranjem proučevanih vzorcev in spremljanjem reakcijskih pogojev.

V zadnjem desetletju je bila uporabljena izotonična fiziološka raztopina z nizko ionsko močjo (LISS) za skrajšanje časa, potrebnega za izvedbo indirektnega Coombsovega testa, in povečanje njegove občutljivosti.

Nesporna prednost antiglobulinskih testov je po mnenju številnih avtorjev njihova visoka občutljivost, ki bistveno presega njihovo ločljivost. alternativne metode testi, ki se uporabljajo za odkrivanje neaglutinacijskih protiteles.

Primerjali smo ločljivost metod za preučevanje krvnih serumov na prisotnost nepopolnih protiteles s poliglucinom, želatino in antiglobulinskim serumom. Med študijo so spremljali titre nepopolnih protiteles proti D v 140 vzorcih krvnega seruma izoimunskih darovalcev z uporabo želatinskih, poliglucinskih in indirektnih antiglobulinskih testov. Oblikovanje teh metod je bilo izvedeno v skladu s splošno sprejetimi metodami.

Ugotovljeno je bilo, da so metode za ugotavljanje senzibilizacije eritrocitov s protitelesi anti-D po svoji ločljivosti razvrščene takole: najbolj občutljiv je indirektni Coombsov test, nato želatinski test in najmanj informativen poliglucinski test. Rezultati, dobljeni v tej seriji poskusov, popolnoma ustrezajo literaturnim podatkom, kar nam omogoča sklepati, da visoka stopnja občutljivost Coombsovih testov, ki omogoča z visoko stopnjo gotovosti ugotavljanje prisotnosti protiteles proti eritrocitom v telesu, ki ne povzročajo aglutinacije rdečih krvnih celic.

Vendar pa pri izvajanju Coombsovih testov v praksi obstajajo primeri, ko nepopolnih protiteles ne odkrijemo, čeprav klinična slika bolezni ali predhodna imunizacija kaže na njihovo morebitno prisotnost. V takšnih primerih se lahko domneva, da je količina protiteles nezadostna, da bi jih lahko oborila protitelesa antiglobulinskega seruma.

To ugotovitev smo potrdili z lastnim eksperimentom, v katerem smo z metodo analizne mikroelektroforeze celic ugotovili prisotnost protiteles anti-D na testnih eritrocitih, ki jih posredni Coombsov test ni zaznal. V tej seriji poskusov je bil antiglobulinski serum dodan eritrocitom, predhodno inkubiranim s serumi, pridobljenimi iz krvi imuniziranih darovalcev med obdobjem antitelesogeneze v teku, tj. v obdobju, ko v njih z znanimi metodami, vključno s Coombsovim testom, niso odkrili protiteles.

V izvedenih študijah so bili zagotovljeni statistični dokazi o prisotnosti nepopolnih protiteles na površini rdečih krvničk. pomembna sprememba velikost elektroforetske mobilnosti senzibiliziranih rdečih krvničk po dodatku antiglobulinskega seruma. Opozoriti je treba, da so protitelesa anti-D naknadno določili pri vseh imuniziranih darovalcih z indirektnim Coombsovim testom v krvnem serumu.

Gillerand et al. je tudi pokazalo, da je za antiglobulinske teste značilen določen prag občutljivosti: pozitiven rezultat je zabeležen le, če je na površini ene rdeče krvne celice zabeleženih najmanj 500 molekul Ig G.

Poleg tega literatura ponuja dokaze, da je morebiten negativen rezultat Coombsovega testa lahko povezan z nizko afiniteto protiteles, ki senzibilizirajo rdeče krvne celice, zaradi česar se med postopkom pranja zlahka eluirajo s površine rdečih krvnih celic. .

Ob upoštevanju zgoraj navedenega lahko sklepamo, da v nekaterih primerih negativen rezultat Coombsovega testa še ni dokaz odsotnosti protiteles, pritrjenih na površini rdečih krvničk.

Znano je, da so Coombsove reakcije zelo specifične in lahko zaznajo večino vrst nepopolnih protiteles. Kot pa kažejo nekateri eksperimentalni podatki, so lahko antiglobulinski testi pozitivni tudi v neimunoloških stanjih. E. Muirhead et al. drugi dan po dajanju fenilhidrazina so opazovali pse pozitiven test Coombs. Tako hiter pojav pozitivne reakcije nasprotuje njeni imunološki naravi in ​​je bolj povezan z nespecifično adsorpcijo beljakovin na površini eritrocitov.

M. Williams et al. ugotovili, da lahko klavulanska kislina povzroči tudi pozitivno reakcijo, ki je po mnenju avtorjev povezana z nespecifično adsorpcijo plazemskih proteinov na površini eritrocitov. Podoben učinek so opazili pri zdravljenju s cefalosporinskimi antibiotiki.

Avtorji zgornjih študij poudarjajo neimunološko naravo pozitivnih rezultatov Coombsovih testov in vztrajajo, da so te snovi sposobne povzročiti modifikacijo membran rdečih krvnih celic, zaradi česar lahko rdeče krvne celice adsorbirajo beljakovine (zlasti albumin), ki so običajno prisotni v krvni plazmi in nimajo lastnosti protiteles. Poleg tega je možno, da ksenobiotik, adsorbiran na površini celice, služi kot povezava med celično membrano in plazemskimi proteini.

Za pravilna razlaga Pri rezultatih antiglobulinskih testov je treba upoštevati tudi količinsko razmerje med mladimi in zrelimi eritrociti v periferni krvi. Ugotovljeno je bilo, da lahko retikulocite, izolirane iz telesa v obdobju povečane regeneracije eritrona, aglutinira antiglobulinski serum.

Pozitiven rezultat neposrednega antiglobulinskega testa pojavlja z različnimi patološka stanja, ki ga spremljajo motnje imunskega sistema, vnetni procesi, ki vodijo do nespecifične adsorpcije protiteles različnih specifičnosti na membranah eritrocitov. To nakazuje, da molekule Ig G ne interagirajo s specifičnimi antigeni eritrocitov, ampak so le pritrjene na površini proučevanih celic.

Upoštevati je treba, da je pri izvajanju Coombsovega testa v primerih bolezni, za katere je značilen razvoj disproteinemije ali pojav paraproteinov, pozitiven rezultat posledica prisotnosti beljakovin na površini eritrocitov, ki nimajo lastnosti protiteles, kar kaže tudi na pomanjkanje specifičnosti antiglobulinskih testov glede na naravo proteina, odkritega z njihovo pomočjo.

Tako, kot so pokazale številne študije, pozitivni rezultati neposrednih in posrednih antiglobulinskih testov niso absoluten dokaz prisotnosti protiteles, saj pozitivne reakcije lahko opazimo tudi pri različnih patoloških stanjih, ki niso povezana z izosenzibilizacijo ali avtosenzibilizacijo telesa. Zato le primerjava rezultatov več imunoseroloških metod z klinična slika bolezni nam omogoča, da v celoti ocenimo razvoj patološkega procesa.

Pozitivni indirektni antiglobulinski test z negativnim neposrednim testom običajno kaže na prisotnost prostih aloprotiteles v testnem serumu, povezanih s prejšnjimi transfuzijami krvi ali nosečnostjo.

Coombsov test je med poslabšanjem paroksizmalne nočne hemoglobinurije pogosto pozitiven; pozitiven Coombsov test z anti-C3 in anti-C3dg je marker bolezni hladnega aglutinina.

V primerih, ko obstaja veliko tveganje za razvoj hemolitične bolezni novorojenčka, velik pomen Za postavitev diagnoze (najpogosteje med nosečnostjo) in po potrebi dinamičnega spremljanja pojava in spremembe titra protiteles so na voljo rezultati neposrednih in posrednih antiglobulinskih testov. Najpogosteje je hemolitična bolezen novorojenčkov povezana z nezdružljivostjo matere in ploda za antigen D, manj pogosto za antigene sistema ABO in še redkeje za druge antigene (C, c, K itd.). Med tem procesom nastanejo protitelesa La, ki so praviloma nepopolna protitelesa razreda Ig G, so jasno odkrita v indirektnem antiglobulinskem testu. Pri tej bolezni sta zelo pomembna pravilno ugotovljen titer in specifičnost ugotovljenih protiteles, saj obstaja določena korelacija med nivojem protiteles proti eritrocitom v krvi nosečnice in možna prognoza resnost hemolitične bolezni.

Potreben je tudi posredni Coombsov test klinična praksa da bi zagotovili varno transfuzijsko zdravljenje. Njegovo izvajanje je obvezna sestavina imunohematoloških študij darovalcev in različnih kategorij prejemnikov, pa tudi rutinskih pregledov vseh bolnikov v zdravstvenih ustanovah, ki lahko potrebujejo transfuzijo krvi in ​​njenih komponent.

Indirektni antiglobulinski test se uporablja v naslednjih primerih:

Za natančnejšo določitev Rh pripadnosti (antigen D) v primeru nejasnih rezultatov določanja Rh faktorja z drugimi metodami (poliglukin, želatina itd.);

Za prepoznavanje šibkih eritrocitnih antigenov (sistemi Kell, Duffy, Kidd, Lewis itd.) in protiteles proti tem antigenom;

Za odkrivanje in identifikacijo aloimunskih antieritrocitnih protiteles, vključno s protitelesi, ki povzročajo hemolitične posttransfuzijske reakcije;

Ugotavljanje prisotnosti imunskih protiteles sistema AB0 med transfuzijskimi hemolitičnimi zapleti;

Kot test združljivosti za individualno izbiro transfuzirane krvi in ​​njenih sestavin.

Tako je Coombsov test pomemben diagnostični test, ki se uporablja na različnih področjih medicine (hematologija, porodništvo, revmatologija, transfuziologija, klinična in laboratorijska diagnostika itd.). Poznavanje posebnosti izvajanja Coombsovega testa bo pomagalo povečati zanesljivost dobljenih rezultatov in prispevalo k pravilni interpretaciji laboratorijskih podatkov.

Literatura

1. Protitelesa. Metode / ur. D. Katie. - M.: Mir, 1991.

2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadžijev A.B.. // Transfuzijsko zdravljenje anemije: učbenik. priročnik za zdravnike. - M.: Prakt. Medicina, 2005. - Str. 105-106.

3. Volkova O.Y., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfuziologija. - 2006. - št. 2. — Str. 39—62.

4. Donskov S.I.// Krvne skupine sistema Rhesus: teorija in praksa. - M.: VINITI RAS, 2005. - Str. 180-186, 195.

5.Imunoserologija (regulativni dokumenti) / comp. A.G. Bashlay, S.I. Donskov. - M.: VINITI RAS, 1998.

6.Študija krvnega sistema v klinični praksi / ed. G.I. Kozinets, V.A. Makarova. - M.: Triada-X, 1997.

7. Levin V.I. O mehanizmu eritrodiereze in eritropoeze med akutnim posthemoragična anemija: avtorski povzetek. dis. ...kand. med. Sci. - Minsk, 1968.

8. Ragimov A.A., Bayramalibeyli I.E.. // Osnove diagnoze, preprečevanja in zdravljenja anemije. - M.: GOU VUNMC MH RF, 2002. - Str. 204-209.

9. Čumakova E.D.. // Dejanske težave hematologija in transfuziologija: zbornik VI kongresa hematologov in transfuziologov Republike Belorusije, Minsk, 24. in 25. maja 2007 / ur. A.I. Svirnovsky, M.P. Potapneva. - Minsk: Republiški znanstveni in praktični center za hematologijo in transfuziologijo, 2007. - Str. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lancet. - 1945. - Letn. 2. - Str. 15.

11. Freedman J. // J. Clin. Pathol. - 1979. - Letn. 32. - Str. 1014-1018.

12. Holburn A.M.. Kontrola kakovosti. Metode v hematologiji/ur. I. Cavill. - Edinburgh: Churchill Livingstone, 1982. - Zv. 4. - Str. 34-50.

13. Khan S.// CMAJ. - 2006. - letn. 175, N 8. - Str. 919.

14. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Letn. 63 (dodatek 7). - Str. 719-721.

15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Letn. 63 (dodatek 7). - Str. 716-718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// Nova angl. J. Med. —1976. - Vol. 277. - Str. 123-125.

17. Muirhead E.E., GrovesM., Brian S. // J. Lab. Clin. med. —1954. - Vol. 44. - Str. 902-903.

18. Rosse W.F.//Hosp. Prak. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., MooreB. et al. //Biotests Bull. - 1986. - Letn. 1. - Str. 41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. et al. Stroji za pranje celic za antiglobulinske teste. Ponovljeno testiranje - nova metoda, ki dokazuje neučinkovitost enega pogosto uporabljenega stroja - Sorvall CW1-AF2: poročilo tehničnemu oddelku DHSS, februar 1991.

21. Williams M.E., Thomas D., Harman C.P.. et al. //Protimikrobna sredstva in kemoterapija. —1985. - Str. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H.. // CMAJ. - 2006. - letn. 174, N 3. - Str. 305-307.

Medicinske novice. - 2008. - št. 3. - strani 33-36.

Pozor! Članek je namenjen zdravnikom specialistom. Ponatis tega članka ali njegovih fragmentov na internetu brez hiperpovezave do vira se šteje za kršitev avtorskih pravic.

Ali raztopljen v plazmi.

sinonimi: antiglobulinski test, Coombsov test, AGT, indirektni/direktni antiglobulinski test, IAT, NAT, DAT, posredni/direktni Coombsov test

Coombsov test je

analiza, ki zazna imunizacijo in protitelesa proti rdečim krvnim celicam.

Vrste Coombsovega testa

• direktni Coombsov test– zazna protitelesa, fiksirana na površini rdečih krvničk. Izvaja se ob sumu na avtoimunsko hemolitično anemijo, hemolizo pri avtoimunskih boleznih, po jemanju zdravil (metildopa, penicilin, kinin), po transfuziji krvi in ​​hemolitični bolezni novorojenčka.

Rdeče krvne celice so bile senzibilizirane in vivo – protitelesa so nanje že trdno pritrjena, dodatek antiglobulinskega seruma (anti-IgG) pa povzroči, da se senzibilizirane celice zlepijo, kar je vidno s prostim očesom.

• posredni Coombsov test– ugotavlja protitelesa proti eritrocitom v krvni plazmi, izvaja se pred transfuzijo krvi in ​​med nosečnostjo.

Protitelesa proti eritrocitom so vrsta avtoprotiteles, tj. protiteles proti lastnim tkivom. Avtoprotitelesa se pojavijo, ko se imunski sistem nenormalno odzove na določena zdravila, kot so visoki odmerki penicilina.

Rdeče krvničke na svoji površini vsebujejo različne kemijske strukture (glikolipide, saharide, glikoproteine ​​in beljakovine), ki jih v medicini imenujemo antigeni. Človek od svojih staršev podeduje določen zemljevid antigenov na vsaki rdeči krvni celici.

Antigeni so združeni v skupine in poleg tega je kri razdeljena na več skupin - glede na Sistem AB0, Rhesus, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Najbolj znana in pomembna pri delu zdravnika sta AB0 in Rh faktor (Rh).

sistem AB0

Rhesus pripadnost oseba je določena s prisotnostjo teh antigenov. Posebej pomemben antigen eritrocitov je antigen D. Če je prisoten, govorimo o Rh-pozitivnem krvnem RhD, če ga ni, pa o Rh-negativnem Rhd.

Če se ustrezno protitelo veže na eritrocitne antigene, se eritrocit uniči – hemolizira.

Indikacije za uporabo direktni antiglobulinski test

• primarna avtoimunska hemolitična anemija
• hemolitična anemija pri avtoimunskih, tumorskih, nalezljivih boleznih
• z zdravili povzročena avtoimunska hemolitična anemija
• posttransfuzijska hemolitična anemija (dnevi - meseci)
• hemolitična bolezen novorojenčka (nezdružljivost ene od krvnih skupin)

Indikacije za uporabo posredni antiglobulinski test

• pred transfuzijo krvi
• med nosečnostjo Rh negativne ženske

Avtoimunska hemolitična anemija

Avtoimunska hemolitična anemija (primarna)– klasična avtoimunska bolezen neznanih vzrokov. Predvideva se motnja v medsebojnem procesu na ravni imunskega sistema, ki vodi v dojemanje lastnih rdečih krvničk kot tujkov. Celice proizvajajo protitelesa razreda IgG (reagirajo pri t 37 °C) in/ali IgM (pri t 40 °C), ki se pritrdijo na površino eritrocita, sprožijo številne encime (sistem komplementa) in "perforirajo" steno eritrocita, kar vodi do njegovega uničenja - hemoliza.

Simptomi hemolitične anemije

• utrujenost, splošna šibkost, razdražljivost
• dispneja
• bolečine v trebuhu, slabost
• temna barva urina
• bolečine v hrbtu
• ikterično obarvanje kože in sluznic
• povečana jetra, vranica
• zmanjšanje števila rdečih krvnih celic in hemoglobina v splošnem krvnem testu

Pozitiven rezultat naravnost Coombsovi testi 100% potrjuje diagnozo avtoimunske hemolitične anemije in dokazuje njen avtoimunski izvor. Hkrati negativni rezultat ne omogoča odstranitve diagnoze.

Sekundarna avtoimunska hemolitična anemija in pozitiven Coombsov test se lahko pojavita pri naslednjih boleznih:

• sistemski eritematozni lupus
• Evansov sindrom
• Waldenströmova makroglobulinemija
• paroksizmalna hladna hemoglobinurija
• kronična limfocitna levkemija
• limfomi
• Infekcijska mononukleoza
• Okužba z Mycoplasma pneumoniae
• sifilis

Pozitiven antiglobulinski test za te bolezni ne služi diagnostični kriterij, vendar je eden od simptomov bolezni.

Hemolitična bolezen novorojenčka

Vzrok hemolitična bolezen novorojenčkov - nezdružljivost krvnih skupin pri materi in plodu, v večini primerov po sistemu Rh, v posameznih primerih - po sistemu AB0, kazuistično - po drugih antigenih.

Rh konflikt se razvije, če plod Rh-negativne ženske podeduje Rh-pozitivno kri od očeta.

Bolezen se pri novorojenčku razvije le, če je mati že razvila protitelesa proti ustreznim antigenom, kar se zgodi po predhodnih nosečnostih, porodu, splavu in transfuziji nezdružljive krvi. Najpogostejši razlog za sprožitev sinteze protiteles proti antigenom membrane eritrocitov je porod (feto-maternalna krvavitev). Prvi porod praviloma poteka brez zapletov, naslednji pa so obremenjeni s hemolitično boleznijo novorojenčka v prvih dneh po rojstvu.

Simptomi hemolitične bolezni novorojenčka

• porumenelost kože
• slabokrvnost
• bledica kože in sluznice
• povečana jetra in vranica
• težave z dihanjem
• otekanje celega telesa
• vzbujanje in postopna depresija centralnega živčnega sistema

Anemija po transfuziji krvi

Indirektni Coombsov test opraviti pred transfuzijo krvi za oceno združljivosti in direktni Coombsov test- po njej, če obstaja sum na potransfuzijsko hemolizo, tj. če imate simptome, kot so zvišana telesna temperatura, mrzlica, solzenje (preberite spodaj). Namen analize je odkriti protitelesa proti transfuziranim rdečim krvnim celicam, ki so se vezala na rdeče krvne celice prejemnika in so vzrok za potransfuzijsko hemolizo ter prezgodnjo odstranitev rdečih krvničk darovalca iz krvnega obtoka. prejemnik (tisti, ki je prejel kri).

Simptomi hemolitične reakcije po transfuziji krvi

• zvišanje telesne temperature
• kožni izpuščaj
• bolečine v hrbtu
• rdeča barva urina
• slabost
• omotica

Dekodiranje Coombsovega testa

Treba je spomniti, da so osnovna pravila za dešifriranje neposrednih in posrednih antiglobulinskih testov enaka. Razlika je le v lokaciji protiteles – v krvi ali že na eritrocitu – na eritrocitu.

• če direktni Coombsov test je negativen– to pomeni, da protitelo ne »sedi« na rdeče krvne celice in je treba nadalje iskati vzrok simptomov ter opraviti indirektni Coombsov test
• če se odkrije pozitiven rezultat Coombsovega testa po transfuziji krvi, okužbah, zdravilih - pozitivnost lahko traja do 3 mesece (življenjska doba rdečih krvničk je 120 dni - 3 mesece)
• pozitiven rezultat antiglobulinskega testa za avtoimunsko bolezen lahko traja mesece ali celo leta

Coombsov test standardov

• direktni Coombsov test- negativno
• posredni Coombsov test- negativno

Kvalitativno pozitiven rezultat se meri v številu plusov od ena do štiri (+, ++, +++, ++++), kvantitativno pa v digitalni obliki - 1:16, 1:256 itd.

4 dejstva o Coombsovem testu

• prvič predlagan v Cambridgeu leta 1945
• prag občutljivosti - vsaj 300 fiksiranih molekul protiteles na eni rdeči krvni celici
• število protiteles, ki sprožijo hemolizo - individualno za vsako osebo (od 16-30 do 300)
• dinamika drugih laboratorijskih kazalcev hemolitične anemije (hemoglobin, bilirubin, retikulociti) se lahko normalizira, Coombsov test pa ostane na enaki ravni

Slabosti antiglobulinskega testa

• moči vezave antigena na protitelo ni mogoče določiti
• neznano število vezanih protiteles
• ne določa vrste protiteles
• pozitiven Coombsov test ne bo pomagal ugotoviti njenega vzroka
• 0,5% zdravi ljudje imeti pozitiven Coombsov test brez znakov hemolitične anemije
• ni primeren za spremljanje uspešnosti zdravljenja, saj ne bo pokazal aktivnosti hemolize eritrocitov