في حالة مرض الزهري الأولي، يتم فحص إفرازات القريح أو العقد الليمفاوية المثقوبة بحثًا عن اللولبية الشاحبة. في حالة الزهري الثانوي، تؤخذ المادة من سطح الحطاطات المتآكلة على الجلد والأغشية المخاطية والشقوق وغيرها. وقبل أخذ المادة بهدف تطهير سطح الآفات (التقرحات، القرح، الشقوق) من الملوثات المختلفة ) يجب مسحها جيدًا باستخدام قطعة شاش قطنية معقمة مبللة بمحلول متساوي التوتر من كلوريد الصوديوم أو وصف المستحضرات بنفس المحلول. يتم تجفيف السطح المنظف بمسحة جافة ويتم استخدام حلقة أو ملعقة بلاتينية لتهيج المناطق المحيطية قليلاً، بينما يتم في نفس الوقت الضغط برفق على قاعدة العنصر بأصابعك في قفاز مطاطي حتى يظهر سائل الأنسجة (المصل)، ومنه يتم إعداد الإعداد للبحث. يعد الحصول على سائل الأنسجة أمرًا مهمًا لتشخيص مرض الزهري، نظرًا لوجود اللولبية الشاحبة في تجويف الشعيرات الدموية اللمفاوية، وفي شقوق الأنسجة حول الأوعية اللمفاوية والدموية.

ثقب العقد الليمفاوية الإقليمية

تتم معالجة الجلد فوق الغدد الليمفاوية بمحلول كحول 96٪ و3-5٪ كحول من اليود. ثم استخدم الإصبعين الأول والثاني من اليد اليسرى لإصلاح العقدة الليمفاوية. اليد اليمنىخذ حقنة معقمة تحتوي على بضع قطرات من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر، والذي يتم حقنه بالتوازي المحور الطوليعقدة لمفاوية. يتم دفع الإبرة في اتجاهات مختلفة إلى الجدار المقابل لكبسولة العقدة ويتم حقن محتويات المحقنة ببطء. باستخدام أصابع اليد اليسرى، يتم تدليك العقد الليمفاوية بخفة. عندما يتم سحب الإبرة ببطء، يتم سحب مكبس المحقنة في نفس الوقت، لشفط محتويات العقدة الليمفاوية. يتم تطبيق المادة على شريحة زجاجية (إذا كانت كمية المادة صغيرة، تتم إضافة قطرة من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر) وتغطيتها بغطاء. يتم إجراء دراسة الدواء الأصلي في مجال رؤية مظلم باستخدام مجهر ضوئي مع مكثف مجال مظلم (هدف 40، 7x، 10x أو 15x). يمكن أيضًا العثور على اللولبية الشاحبة في المستحضرات الملونة. عندما يتم تلوين اللولبية الشاحبة وفقًا لرومانوفسكي-جيمسا باللون الوردي، وفقًا لفونتان وموروزوف - بني (أسود)، وفقًا لطريقة بوري، يتم الكشف عن اللولبية اللولبية غير الملوثة على خلفية داكنة.

التشخيص المصلي

أهمية تشخيص مرض الزهري، وتقييم فعالية العلاج، وتحديد معيار العلاج، وتحديد الخفية، أشكال مقاومةالمخصصة للتفاعلات المصلية القياسية (الكلاسيكية) والمحددة. تشمل التفاعلات المصلية القياسية أو الكلاسيكية (SSR) ما يلي:

• رد فعل واسرمان (WR)،
• التفاعلات الرسوبية لكان وساكس-فيتيبسكي (الخلايا الخلوية)،
• التفاعل على الزجاج (الطريقة السريعة)،

إلى محددة:

• رد فعل الشلل اللولبية الشاحبة (تفاعل اللولبية الشاحبة) ،
• رد فعل المناعي (RIF).

رد فعل واسرمان (WR)

- تم تطويره بواسطة A. Wasserman مع A. Neisser وC. Bruck في عام 1906. يعتمد تفاعل واسرمان على ظاهرة التثبيت التكميلي (تفاعل بورديت-جينجو) ويسمح بتحديد الأجسام المضادة للدهون (ريجينز). وفق الأفكار الحديثة، في تفاعل واسرمان، يتم تحديد الأجسام المضادة لدهون الكائنات الحية الدقيقة، وليس اللولبية الشاحبة، ويكشف التفاعل عن عملية مناعة ذاتية ناجمة عن تمسخ أنسجة الكائنات الحية الدقيقة عن طريق اللولبية الشاحبة مع تكوين مركب البروتين الدهني (مترافق)، حيث تكون الدهون (النشابات) عاملاً محددًا.

عادة ما يتم تشخيص الفيروس RV بوجود اثنين أو ثلاثة مستضدات. الأكثر استخدامًا هو مستضد الكارديوليبين عالي الحساسية (مستخلص القلب البقري المخصب بالكوليسترول والليسيثين) والمستضد اللولبي (معلق صوتي لللولبيات الشاحبة المستزرعة). تشكل هذه المستضدات، جنبًا إلى جنب مع مصل المريض، مركبًا مناعيًا قادرًا على الامتصاص والربط. لتحديد المركب المتشكل بصريًا (المستضد + المستضد + المكمل) كمؤشر، يتم استخدام نظام الانحلالي (خليط من كريات الدم الحمراء في الأغنام مع مصل الدم الانحلالي). إذا كان المكمل مرتبطًا في المرحلة 1 من التفاعل (المصل + المستضد + المكمل)، لا يحدث انحلال الدم - تترسب خلايا الدم الحمراء إلى راسب يمكن ملاحظته بسهولة (PB موجب). إذا لم يكن المكمل في المرحلة 1 مرتبطًا بسبب غياب الريجينات في مصل الاختبار، فسيتم استخدامه من قبل الجهاز الانحلالي وسيحدث انحلال الدم (RT سلبي). يتم تقييم درجة شدة انحلال الدم عند تحديد مرحلة RV من خلال الإيجابيات: الغياب التام لانحلال الدم ++++ أو 4+ (RV إيجابي بشكل حاد)؛ بالكاد بدأ انحلال الدم +++ أو 3+ (RV إيجابي)؛ انحلال الدم الكبير ++ أو 2+ (RV إيجابي ضعيف) ؛ صورة غير واضحة لانحلال الدم ± (RV مشكوك فيه)؛ انحلال الدم الكامل - (رد فعل فاسرمان سلبي).

بالإضافة إلى التقييم النوعي للـ PB، هناك تقييم كمي مع تخفيفات المصل المختلفة (1:10، 1:20، 1:80، 1:160، 1:320). يتم تحديد عيار الريجين بواسطة الحد الأقصى للتخفيف الذي لا يزال يعطي نتيجة إيجابية حادة (4+). يعتبر التدريج الكمي للـ RV مهمًا في تشخيص بعض الأشكال السريرية لعدوى الزهري، وكذلك في مراقبة فعالية العلاج. حاليًا، يتم إجراء تفاعل واسرمان باستخدام مستضدين (سلالة رايتر الكارديوليبين والتريبونيمال). كقاعدة عامة، يصبح RV إيجابيًا بعد 5-6 أسابيع من الإصابة في 25-60٪ من المرضى، عند 7-8 أسابيع - عند 75-96٪، عند 9-19 أسبوعًا - عند 100٪، على الرغم من أنه في السنوات الاخيرةفي بعض الأحيان في وقت سابق أو في وقت لاحق. في الوقت نفسه، يزداد عيار الريجين تدريجيًا ويصل إلى قيمة قصوى (1:160-1:320 وما فوق) في حالة الطفح الجلدي المعمم (الزهري الطازج الثانوي). عندما يكون RV إيجابيًا، يتم تشخيص مرض الزهري الإيجابي المصلي الأولي.
مع الطازجة الثانويةوالزهري الثانوي المتكرر، يكون RV إيجابيًا في 100٪ من المرضى، ولكن في المرضى المنضبين ذوي المناعة الضعيفة، يمكن ملاحظة نتيجة سلبية. بعد ذلك، يتناقص عيار الريجين تدريجيًا وفي حالة مرض الزهري الثانوي المتكرر لا يتجاوز عادةً 1:80-1:120.
لمرض الزهري الثالثييكون RV إيجابيًا في 65-70% من المرضى وعادةً ما يتم ملاحظة انخفاض عيار الريجين (1:20-1:40). في الأشكال المتأخرة من مرض الزهري (الزهري اعضاء داخلية, الجهاز العصبي) لوحظ وجود RV إيجابي في 50-80٪ من الحالات. يتراوح عيار الريجين من 1:5 إلى 1:320.
لمرض الزهري الكامنلوحظ وجود RV إيجابي في 100٪ من المرضى. يتراوح عيار الريجين من 1:80 إلى 1:640، وفي مرض الزهري الكامن المتأخر من 1:10 إلى 1:20. يشير الانخفاض السريع في عيار الرياجين (حتى السلبية الكاملة) أثناء العلاج إلى فعالية العلاج.

مساوئ رد فعل واسرمان- حساسية غير كافية (في المرحلة الأوليةالزهري الأولي سلبي). كما أنه سلبي في ثلث المرضى إذا تم علاجهم بالمضادات الحيوية في الماضي، وفي المرضى الذين يعانون من مرض الزهري النشط الثالثي مع آفات الجلد والأغشية المخاطية، والجهاز المفصلي العظمي، والأعضاء الداخلية، والجهاز العصبي المركزي، والتشوهات الخلقية المتأخرة. مرض الزهري.
عدم وجود خصوصية- يمكن أن يكون رد فعل واسرمان إيجابيا لدى الأشخاص الذين لم يصابوا من قبل بمرض الزهري وليس لديهم. على وجه الخصوص، لوحظت نتائج RV إيجابية كاذبة (غير محددة) في المرضى الذين يعانون من الذئبة الحمامية الجهازية، والجذام، والملاريا، والأورام الخبيثة، وتلف الكبد، واحتشاء عضلة القلب واسعة النطاق وغيرها من الأمراض، وأحيانا في الأشخاص الأصحاء تماما.
تم الكشف عن رد فعل فاسرمان إيجابي كاذب على المدى القصيرلدى بعض النساء قبل الولادة أو بعدها، أو عند متعاطي المخدرات، أو بعد التخدير، أو شرب الكحول. كقاعدة عامة، يتم التعبير عن RV الإيجابي الكاذب بشكل ضعيف، غالبًا بعيار منخفض (1:5-1:20)، موجب (3+) أو موجب ضعيف (2+). خلال المسوحات المصلية الجماعية، يكون تكرار النتائج الإيجابية الكاذبة 0.1-0.15%. للتغلب على الحساسية غير الكافية، يتم استخدام اختبار البرد (تفاعل كوليار) وفي نفس الوقت يتم إجراؤه مع تفاعلات مصلية أخرى.

التفاعلات الرسوبية لكان وساكس-فيتيبسكي

يتم استخدام تفاعل واسرمان بالاشتراك مع اثنين ردود الفعل الرسوبية (كان وساكس-فيتيبسكي)، عند تنظيمها، يتم تحضير مستضدات أكثر تركيزًا. الطريقة السريعة (التفاعل الدقيق على الزجاج) - تشير إلى تفاعلات الدهون وتعتمد على تفاعل الهطول. يتم وضعه مع مستضد كارديوليبين محدد، ويتم خلط قطرة واحدة منه مع 2-3 قطرات من مصل دم الاختبار في فتحات طبق زجاجي خاص.
ميزة- سرعة تلقي الرد (خلال 30-40 دقيقة). يتم تقييم النتائج حسب كمية الرواسب المودعة وحجم الرقائق. يتم تعريف التعبير على أنه المسؤولية الاجتماعية للشركات - 4+، 3+، 2+ والسلبية. تجدر الإشارة إلى أنه يتم ملاحظة النتائج الإيجابية الكاذبة في كثير من الأحيان أكثر من RV. كقاعدة عامة، يتم استخدام الطريقة السريعة للفحوصات الجماعية لمرض الزهري، للفحوصات في مختبرات التشخيص السريري والأقسام الجسدية والمستشفيات. بناءً على نتائج الطريقة السريعة، يُحظر تشخيص مرض الزهري، ويُستبعد استخدامه لدى النساء الحوامل والمتبرعين وكذلك للتحكم بعد العلاج.

رد فعل تجميد اللولبية الشاحبة (TPI)

رد فعل تجميد اللولبية الشاحبة (TPI)- تم اقتراحه في عام 1949 من قبل R. W. Nelson و M. Mayer. هذا هو الاختبار التشخيصي الأكثر تحديدًا لمرض الزهري. ومع ذلك، فإن التعقيد وارتفاع تكلفة الإنتاج يحد من استخدامه. في مصل الدم للمرضى، يتم تحديد الأجسام المضادة الخاصة بالفيديو (immobilisins)، والتي تؤدي إلى عدم حركة اللولبية الشاحبة في وجود المكمل. المستضد هو اللولبية الشاحبة المسببة للأمراض المعزولة من الأرانب المصابة بمرض الزهري. باستخدام المجهر، يتم حساب الحركة المفقودة (المثبتة) اللولبية الشاحبة ويتم تقييم نتائج RIBT: تجميد اللولبية الشاحبة من 51 إلى 100٪ إيجابي؛ من 31 إلى 50% - إيجابي ضعيف؛ من 21 إلى 30% - مشكوك فيه؛ من 0 إلى 20% - سلبي.
RIBT يهم متى تشخيص متباين لتمييز التفاعلات المصلية الإيجابية الكاذبة عن التفاعلات الناجمة عن مرض الزهري. في وقت متأخر يصبح إيجابيا من RV، RIF، وبالتالي للتشخيص أشكال مختلفةولا يستخدم لمرض الزهري، على الرغم من أنه في الفترة الثانوية من مرض الزهري يكون إيجابيا في 85-100٪ من المرضى.
في الفترة الثالثة من مرض الزهري مع تلف الأعضاء الداخلية والجهاز العضلي الهيكلي والجهاز العصبي، يكون RIBT إيجابيًا في 98-100٪ من الحالات ( RV غالبا ما يكون سلبيا).
يجب أن نتذكر أن RIBT قد يكون إيجابيًا كاذبًا إذا كان مصل الاختبار يحتوي على أدوية مبيد اللولبيات (البنسلين، التتراسيكلين، الماكروليت، إلخ)، والتي تسبب تجميدًا غير محدد لللولبية الشاحبة. لهذا الغرض، يتم اختبار الدم لـ RIBT في موعد لا يتجاوز أسبوعين بعد انتهاء تناول المضادات الحيوية والأدوية الأخرى.
يتم سلبية RIBT، مثل RIF، ببطء أثناء عملية العلاج، لذلك لا يتم استخدامه كعنصر تحكم أثناء عملية العلاج.

التفاعل المناعي (RIF)

التفاعل المناعي (RIF)- تم تطويره في عام 1954 بواسطة أ.كونز واستخدم لأول مرة لتشخيص عدوى الزهري بواسطة ديكون، فالكون، هاريس في عام 1957. يعتمد RIF على طريقة غير مباشرة لتحديد الأجسام المضادة الفلورية. المستضد الذي يتم إنتاجه هو اللولبية الشاحبة المسببة للأمراض الأنسجة المثبتة على شرائح زجاجية، والتي يتم تطبيق مصل الاختبار عليها. إذا كان مصل الاختبار يحتوي على أجسام مضادة مضادة لللولبيات مرتبطة بـ IgM وIgG، فإنها ترتبط بقوة بالمستضد - اللولبية، والتي يتم اكتشافها في مجهر الفلورسنت باستخدام مصل الفلورسنت المضاد للأنواع ("المضاد للإنسان").
نتائج ريفتؤخذ في الاعتبار شدة توهج اللولبية الشاحبة في المستحضر (توهج أصفر-أخضر). في حالة عدم وجود أجسام مضادة مضادة للتريبونيم في المصل، لا يتم الكشف عن اللولبية الشاحبة. في وجود الأجسام المضادة، يتم اكتشاف وهج اللولبية الشاحبة، ويتم التعبير عن درجتها بالإيجابيات: 0 و1+ - رد فعل سلبي; من 2+ إلى 4+ - إيجابي.
يشير RIF إلى التفاعلات اللولبية الجماعية ويتم إعطاؤه بتخفيف 10 و 200 مرة من مصل الاختبار (RIF-10 وRIF-200). يعتبر RIF-10 أكثر حساسية، ولكن غالبًا ما يتم الحصول على نتائج إيجابية غير محددة مقارنةً بـ RIF-200 (له خصوصية أعلى). عادة، يصبح RIF موجبًا في وقت أبكر من RV- إيجابي في مرض الزهري المصلي الأولي في 80٪ من المرضى، في 100٪ في الفترة الثانوية من مرض الزهري، إيجابي دائمًا في مرض الزهري الكامن وفي 95-100٪ من الحالات في الأشكال المتأخرة والزهري الخلقي.
خصوصية RIFيزداد بعد المعالجة المسبقة لمصل الاختبار باستخدام مستضد اللولبيات الماصة بالموجات فوق الصوتية، والذي يربط الأجسام المضادة للمجموعة (RIF - abs).
مؤشرات لـ RIBT وRIF- تشخيص مرض الزهري الكامن للتأكد من خصوصية التفاعلات الدهنية المعقدة في حالة الاشتباه في الإصابة بالزهري بناءً على RV إيجابي. تعتبر نتائج RIBT وRIF الإيجابية دليلاً على مرض الزهري الكامن. في حالة إيجابية كاذبة RT مع امراض عديدة(الذئبة الحمامية الجهازية، الأورام الخبيثةإلخ) وإذا كانت النتائج المتكررة لـ RIBT وRIF سلبية، فهذا يشير إلى الطبيعة غير المحددة لـ RV. الاشتباه في وجود آفات الزهري المتأخرة في الأعضاء الداخلية والجهاز العضلي الهيكلي والجهاز العصبي إذا كان لدى المرضى نتيجة سلبية للـ RV. الاشتباه في مرض الزهري المصلي الأولي عندما لا يتم اكتشاف اللولبية الشاحبة في المرضى الذين يعانون من دراسات متكررة للإفرازات من سطح التآكل (القرحة) أو ثقب من الغدد الليمفاوية الإقليمية المتضخمة - في هذه الحالة يتم إعطاء RIF - 10 فقط.
عند فحص الأشخاص الذين يعانون من RV سلبيالذين كان لديهم اتصالات جنسية ومنزلية طويلة الأمد مع مرضى الزهري، مع الأخذ في الاعتبار الاحتمال المحتمل لعلاجهم في الماضي القريب بأدوية مضادة للزهري تسببت في سلبية الفيروس الوريدي. مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA - مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم) - طريقة طورها E. Engvall et al., S. Avrames (1971). يتكون الجوهر من الجمع بين مستضد الزهري الممتص على سطح حامل الطور الصلب مع جسم مضاد من مصل الدم الذي تتم دراسته وتحديد مجمع جسم مضاد محدد باستخدام مصل الدم المناعي المضاد للأنواع المسمى بالإنزيم. يتيح لك ذلك تقييم نتائج ELISA بصريًا من خلال درجة التغير في لون الركيزة تحت تأثير الإنزيم الموجود في الاتحاد. يمكن أن تحدث نتائج ELISA غير الموثوقة نتيجة لعدم كفاية تخفيف المكونات، وانتهاك ظروف درجة الحرارة والوقت، وعدم اتساق الرقم الهيدروجيني للمحاليل، وتلوث الأواني الزجاجية المختبرية، والتقنية غير الصحيحة لغسل الوسائط.

تفاعل التراص الدموي السلبي (RPHA)

تم اقتراحه كاختبار تشخيصي لمرض الزهري بواسطة T.Rathlev (1965,1967)، T.Tomizawa (1966). يُطلق على التعديل الكبير للتفاعل اسم TRHA، والتعديل الجزئي هو MNA-TR، والنسخة الآلية هي AMNA-TR، والتفاعل مع كبسولات البوليوريا الكبيرة بدلاً من خلايا الدم الحمراء هو MSA-TR. تتشابه حساسية ونوعية RPGA مع RIBT وRIF، لكن RPGA لديه حساسية أقل في الأشكال المبكرة من مرض الزهري مقارنةً بـ RIF-abs وحساسية أكبر في الأشكال اللاحقة من مرض الزهري الخلقي. يتم تسليم RPGA في الإصدارات النوعية والكمية.

تقنية جمع الدم للاختبارات المصلية

لدراسة RV، RIF، RIBT، يتم أخذ الدم من الوريد الزندي على معدة فارغة أو في موعد لا يتجاوز 4 ساعات بعد تناول الوجبة باستخدام حقنة معقمة أو إبرة واحدة (عن طريق الجاذبية). في موقع التجميع، تتم معالجة الجلد مسبقًا بنسبة 70٪ كحول. يجب غسل المحقنة والإبرة بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر. يتم سكب 5-7 مل من دم الاختبار في أنبوب اختبار نظيف وجاف وبارد. يتم لصق قطعة من الورق الفارغة تحمل الاسم الأخير للمريض والأحرف الأولى والتاريخ الطبي أو رقم بطاقة العيادات الخارجية وتاريخ جمع الدم على أنبوب الاختبار. بعد سحب الدم، يتم وضع الأنبوب في الثلاجة ظروف درجة الحرارة+4°+8°C حتى اليوم التالي. في اليوم التالي، يتم تصفية المصل للاختبار. إذا لم يتم استخدام الدم في اليوم التالي، فيجب تصريف المصل من الجلطة وتخزينه في الثلاجة لمدة لا تزيد عن أسبوع واحد. لإجراء اختبار RIBT، يجب أن يكون أنبوب الاختبار مُجهزًا ومعقمًا بشكل خاص. في حالة مخالفة قواعد جمع الدم للبحث، فإن عدم الالتزام بالشروط قد يؤدي إلى تحريف النتائج.
لا ينصح بأخذ عينات الدم للاختبار بعد الأكل أو الشرب أو الشرب الأدوية، بعد إعطاء اللقاحات المختلفة، خلال الدورة الشهريةبين النساء.
بالنسبة للبحث باستخدام الطريقة السريعة، تم أخذ الدم من طرف الإصبع، كما هو الحال عند أخذه من أجل ESR، ولكن تم أخذ الدم من شعيرة شعرية واحدة أكثر. يمكن أيضًا إجراء الطريقة السريعة باستخدام مصل الدم الذي يتم الحصول عليه عن طريق بزل الوريد. إذا كانت هناك حاجة لفحص الدم في المختبرات البعيدة، فيمكن إرسال المصل الجاف بدلاً من الدم (طريقة القطرة الجافة). للقيام بذلك، في اليوم التالي بعد أخذ الدم، يتم فصل المصل عن الجلطة وسحبه إلى حقنة معقمة بمبلغ 1 مل. ثم يسكب المصل على شكل دائرتين منفصلتين على شريط من ورق الكتابة السميك (ورق الشمع أو السيلوفان) مقاس 6x8 سم، ويكتب على الحافة الحرة للموضوع الاسم الأخير والأحرف الأولى من اسم الشخص وتاريخ أخذ عينة الدم. ورق. يتم حماية الورقة التي تحتوي على المصل من أشعة الشمس المباشرة وتترك في درجة حرارة الغرفة حتى اليوم التالي. يجف المصل على شكل دوائر صغيرة من طبقة زجاجية لامعة مصفرّة. بعد ذلك، يتم لف شرائط من الورق مع المصل المجفف مثل المسحوق الدوائي وإرسالها إلى المختبر، مع الإشارة إلى التشخيص والغرض الذي يتم فحصه من أجله.

المقاومة المصلية

في بعض المرضى المصابين بمرض الزهري (2٪ أو أكثر)، على الرغم من العلاج الكامل بمضادات الزهري، هناك تباطؤ (غياب) في التفاعلات المصلية السلبية بعد انتهاء العلاج لمدة تصل إلى 12 شهرًا أو أكثر. يحدث ما يسمى بالمقاومة المصلية، والتي أصبحت ملحوظة بشكل متكرر في السنوات الأخيرة. هناك أشكال من المقاومة المصلية:

• حقيقي(مطلق، غير مشروط) - من الضروري إجراء علاج إضافي مضاد للزهري، بالاشتراك مع علاج غير محدد لزيادة قوى المناعة في الجسم.
• نسبي- بعد العلاج الكامل، تشكل اللولبية الشاحبة أكياسًا أو على شكل حرف L، والتي تكون في الجسم في حالة منخفضة الضراوة، ونتيجة لذلك، علاج إضافيلا يغير مؤشرات التفاعلات المصلية، وخاصة RIF وRIBT.

في الوقت نفسه، تحدث عمليات التمثيل الغذائي البسيطة في أشكال الكيس، وتكون قذائف أشكال الكيس عبارة عن بروتين غريب (مستضد). ولحماية نفسه، يقوم الجسم بإنتاج أجسام مضادة محددة، تكون إيجابية أو إيجابية بقوة عند إجراء التفاعلات المصلية وعدم ظهور أي مظاهر للمرض. مع أشكال L، يتم تقليل عمليات التمثيل الغذائي بشكل أكبر وتكون خصائص المستضدات غائبة أو يتم التعبير عنها قليلاً. لا يتم إنتاج أجسام مضادة محددة أو تكون بكميات صغيرة، وتكون التفاعلات المصلية إيجابية أو سلبية بشكل ضعيف. كلما طالت الفترة الزمنية من لحظة الإصابة، كلما زاد عدد اللولبية الشاحبة التي تتحول إلى أشكال البقاء على قيد الحياة (الخراجات، الجراثيم، أشكال L، الحبوب)، حيث لا يكون العلاج المضاد للزهري فعالا.

المقاومة الزائفة- بعد العلاج، على الرغم من التفاعلات المصلية الإيجابية، فإن اللولبية الشاحبة غائبة في الجسم. لا يوجد مستضد في الجسم، ولكن يستمر إنتاج الأجسام المضادة، والتي يتم اكتشافها خلال التفاعلات المصلية.
يمكن أن تتطور المقاومة المصلية بسبب:

• عدم كفاية العلاج دون الأخذ في الاعتبار مدة ومرحلة المرض؛
• جرعة غير كافية وخاصة بسبب عدم مراعاة وزن الجسم للمرضى.
• انتهاك الفاصل الزمني بين تناول الدواء.
• الحفاظ على اللولبية الشاحبة في الجسم رغم اكتمالها علاج محددوذلك بسبب مقاومتها للبنسلين وأدوية العلاج الكيميائي الأخرى مع وجود آفات متكيسة مخفية في الأعضاء الداخلية والجهاز العصبي، العقد الليمفاوية، والتي لا يمكن الوصول إليها الأدوية المضادة للبكتيريا(غالبًا ما توجد اللولبية الشاحبة في الأنسجة الندبية بعد سنوات عديدة من انتهاء العلاج؛ وتوجد اللولبية الشاحبة أحيانًا في العقد الليمفاوية بعد 3-5 سنوات من العلاج المضاد للزهري)؛
• الحد من قوى الحماية في مختلف الأمراض والتسمم (اعتلال الغدد الصماء، وإدمان الكحول، وإدمان المخدرات، وما إلى ذلك)؛
• الإرهاق العام (تناول طعام فقير بالفيتامينات والبروتينات والدهون).

بالإضافة إلى ذلك، غالبًا ما يتم اكتشاف إيجابية كاذبة للتفاعلات المصلية، والتي لا ترتبط بوجود مرض الزهري لدى المرضى وتنتج عن:

• مصاحب أمراض غير محددةالأعضاء الداخلية، واضطرابات القلب والأوعية الدموية، والروماتيزم، وخلل في الغدد الصماء والجهاز العصبي، والأمراض الجلدية المزمنة الشديدة، والأورام الخبيثة.
• الأضرار التي لحقت الجهاز العصبي (إصابات خطيرة، وارتجاج، والصدمات النفسية)؛
• حمل؛ التسمم المزمنالكحول وأدوية النيكوتين. الأمراض المعدية (الملاريا والسل والتهاب الكبد الفيروسي والدوسنتاريا والتيفوس والتيفوئيد والحمى الراجعة).

يمكن لهذه العوامل أن تؤثر على التفاعل المناعي للجسم خلال فترة التطور النشط لمظاهر الزهري وأثناء تراجعها.

التشخيص المختبرييستخدم عدة اختبارات لمرض الزهري مرة واحدة للحصول على النتيجة الأكثر دقة. يستغرق هذا وقتًا أطول، لكنه يعطي الإجابة الأكثر دقة.

في أغلب الأحيان، يتم عرض نتيجة تحليل RIF بالأرقام. يحتوي فك التشفير على الرموز التالية:

• حاد نتيجة ايجابيةيُشار إليه بـ 4 إيجابيات (++++)؛
• تتم الإشارة إلى النتيجة الإيجابية بـ 3 إيجابيات (+++)؛
• نتيجة إيجابية ضعيفة مع 2 إيجابيات (++)؛
• النتيجة المشكوك فيها 1 زائد (+)؛
• تتم الإشارة إلى النتيجة السلبية بـ 1 ناقص (-).

يتم أيضًا عرض نتيجة RIF لمرض الزهري كنسبة مئوية، والتي تعتمد على المؤشر الكمي للبكتيريا المرتبطة:

• إذا كانت النتيجة سلبية، تصل نسبة التثبيت إلى 20%؛
• مع نتيجة إيجابية ضعيفة، يتراوح الشلل من 20 إلى 50٪؛
• مع نتيجة إيجابية، الشلل فوق 50٪.

إذا كانت النتيجة إيجابيالجواب، فهذا يدل على وجود المرض.

إذا كانت النتيجة إيجابية ضعيفةفهذا يشير إلى وجود كمية واحدة من الأجسام المضادة المتبقية في الدم.

سلبيتشير النتيجة إلى عدم وجود اللولبية الشاحبة مما يعني أن المريض يتمتع بصحة جيدة.

سيقوم الأطباء ذوو الخبرة في عيادتنا بتشخيص مرض الزهري بسرعة وبدقة عالية. ولذلك، فإننا نتوجه اجتماعيًا نحو جميع شرائح السكان تكلفة تحليل RIF غير مكلفة. السعر معروض في الجدول على موقعنا.

في التشخيص المصلي لمرض الزهري، من المهم جدًا الحصول على نتيجة موثوقة ودقيقة.

لتحسين جودة البيانات، يتم اتخاذ إجراءات معينة:

• يتم تخفيف مصل الاختبار 200 مرة (1:200) لتجنب التفاعلات الإيجابية الكاذبة. ثم يقولون أنه يتم تنفيذه اختبار مرض الزهري RIF 200.
• في خيار آخر، عند تخفيف المصل 1:5، يتم استخدام مادة ماصة خاصة بالإضافة إلى ذلك، والتي تجمع الأجسام المضادة "الإضافية" بحيث لا تشوه النتائج.

إن حجم اللولبيات يلعب أيضًا دورًا في أيدي الباحثين. الأجسام الميكروبية الكبيرة من اللولبيات مرئية بوضوح تحت المجهر الفلوري. إذا كانت البروتينات المسمى بالفوسفور من المصل "تتشبث" بها. إن استخدام المستضد والمصل الموحدين يسمح لنا بتعظيم حساسية ونوعية RIF في تشخيص مرض الزهري.

خيارات تحليل RIF الخاصة: امتصاص RIF

واحد من طرق بديلةيسمى RIF-Abs. وهو يختلف عن الطريقة المعتادة من خلال التخفيف المنخفض لمصل الاختبار - 1:5 مقابل 1:200، كالعادة.

تحتوي العينة المركزة على الكثير من جزيئات البروتين النشطة.

لتجنب وزيادة الحساسية، يتم معالجة المصل بمادة ماصة خاصة مصنوعة من شظايا اللولبيات المصابة بالزهري. تجمع المادة الماصة الأجسام المضادة النشطة بشكل مفرط ثم تتم معالجة العينة بمصل صناعي يحمل علامة الفوسفور. بفضل هذا التحضير الأولي، يتم التخلص من جميع الجزيئات غير الضرورية التي يمكن أن تؤثر على نتائج الاختبار.

ويتم وضعه حسب المؤشرات التالية:

• إيجابية على خلفية الصحة السريرية وعدم وجود تاريخ من مخاطر العدوى.
• RV إيجابي في المرضى الذين يعانون من أمراض مزمنة.
• RV سلبي عند ظهور أعراض مشبوهة لمرض الزهري.

تظهر النتائج الإيجابية الأولى بالفعل في اليوم 15-16 من لحظة الإصابة. إذا تغير رد الفعل من إيجابي إلى سلبي، فهذا يشير إلى الشفاء التام من مرض الزهري. احتمال الحصول على نتيجة إيجابية كاذبة أقل من 0.4٪.

يمكن أن يحدث هذا الوضع عند فحص مرضى السرطان ومدمني الكحول والنساء الحوامل والأشخاص الذين يعانون من اضطرابات مناعية.

نسبة معينة ترجع إلى أخطاء فنية، لأن الإنتاج معقد للغاية. هناك أوقات يكون من الضروري فيها التمييز بين الأمراض الخلقية والأمراض المكتسبة. يمكنك القيام بذلك إذا قمت بالبحث أنواع مختلفةالأجسام المضادة في دم المريض.

تظهر الأجسام المضادة لمرض الزهري من الفئة M (IgM) بعد فترة وجيزة من الإصابة وتكون أسرع بكثير من IgG. يسمح لك بالتعرف عليهم تحليل لامتصاص مرض الزهري RIFالغلوبولين المناعي. إذا كانت نتائج رد الفعل هذا إيجابية، فيمكننا التحدث عن الإصابة الأخيرة. وبهذه الطريقة يمكن تمييز حالات الإصابة مرة أخرى عن الانتكاس أو اكتشاف إصابة الطفل بعد الولادة.

واستنادا إلى نتائج تقنية تحليل RIF، يتم أيضا التوصل إلى نتيجة حول فعالية علاج مرض الزهري المبكر.

إذا كنت تشك في مرض الزهري، اتصل بأخصائي أمراض تناسلية من ذوي الخبرة.

يصاحب مرض الزهري أعراض عديدة وله عدد كبير منالأشكال السريرية. يعتمد الاعتراف بها على الفحص السريري والمختبري الشامل للمريض. التحليل العاميحمل الدم الخاص بمرض الزهري القليل من المعلومات، لذلك لا يستخدم لتشخيص المرض.

يمكن أخذ المواد التالية للتحليل:

• دم من الإصبع والوريد.
• السائل النخاعي - السائل النخاعي.
• تفريغ القرحة الصلبة (القرحة) ؛
• مناطق الغدد الليمفاوية الإقليمية.

يعتمد اختيار المادة وطريقة التشخيص على مرحلة المرض. سنتحدث عن الاختبارات التي يتم إجراؤها لمرض الزهري في القسم التالي.

تصنيف طرق التشخيص المختبري للمرض

في المرحلة الأولية، يمكنك استخدام الطريقة البكتيرية، بناء على تحديد العامل الممرض - اللولبية الشاحبة - تحت المجهر. في المستقبل، سيتم استخدام الاختبارات المصلية على أساس تحديد المستضدات الميكروبية والأجسام المضادة التي ينتجها الجسم في المواد البيولوجية على نطاق واسع.

لا يتم إجراء الدراسات البكتريولوجية، لأن العامل المسبب لمرض الزهري ينمو بشكل سيء للغاية على الوسائط المغذية في ظل ظروف اصطناعية.

تنقسم جميع طرق اكتشاف اللولبية، أي أنواع اختبارات مرض الزهري، إلى مجموعتين كبيرتين:

1. المباشر، وهو الكشف المباشر عن الميكروب نفسه:

• الفحص المجهري للمجال المظلم (الكشف عن اللولبيات على خلفية داكنة)؛
• اختبار RIT – إصابة الأرانب بمادة الاختبار؛
• بوليميريز تفاعل تسلسلي(PCR) الذي يكشف أجزاء من المادة الوراثية للكائن الحي الدقيق.

2. غير مباشر (مصلية)، يعتمد على الكشف عن الأجسام المضادة للميكروب التي ينتجها الجسم استجابة للعدوى.

تنقسم الاختبارات المصلية إلى مجموعتين

غير اللولبية:

• تفاعل التثبيت المتمم مع مستضد الكارديوليبين (CCk)؛
• تفاعل الهطول الدقيق (MPR)؛
• اختبار مصل البلازما السريع (RPR)؛
• اختبار مع طولويدين الأحمر.

لولبي:

• تفاعل التثبيت المتمم مع المستضد اللولبي (RSCT)؛
• رد فعل تجميد اللولبية (RTI أو RIBT) ؛
• رد فعل المناعي (RIF) ؛
• رد فعل التراص الدموي السلبي(RPGA) ؛
• المقايسة المناعية الإنزيمية (ELISA) ؛
• النشاف المناعي.

إن طرق هذه التحليلات معقدة للغاية، لذلك سنركز بشكل أساسي على وقت إجرائها ومدى دقة المعلومات التي تقدمها.

لنفترض على الفور أن أساس تشخيص مرض الزهري هو الطرق المصلية. ماذا يسمى اختبار مرض الزهري: في كل حالة قد يشمل الفحص تقنيات مختلفة. أدناه سنتحدث عنهم بمزيد من التفصيل.

اختبارات مباشرة

إن اكتشافها تحت المجهر يثبت بشكل مقنع وجود اللولبيات. تصل احتمالية الإصابة بمرض الزهري إلى 97٪. ومع ذلك، يمكن اكتشاف الميكروبات في 8 من كل 10 مرضى فقط، وبالتالي فإن الاختبار السلبي لا يستبعد المرض.

يتم التشخيص خلال الفترات التي يوجد فيها قرح أو طفح جلدي. في تصريف هذه العناصر المعدية يبحثون عن العوامل المسببة للمرض.

أكثر كفاءة، ولكن في نفس الوقت أكثر تكلفة و تحليل معقد– الكشف عن اللولبيات بعد المعالجة المسبقة بالأجسام المضادة الفلورية. وهي مواد "تلتصق" بالميكروبات وتشكل "توهجًا" في مجال المجهر.

تتناقص حساسية الطرق مع طول مدة المرض، وعلاج القرحة والطفح الجلدي بالمطهرات، وكذلك بعد العلاج.

الطريقة البيولوجية لتشخيص RIT محددة للغاية، ولكنها مكلفة، ولا يتم الحصول على النتيجة إلا من خلال لفترة طويلةعندما يصاب الحيوان المصاب بالمرض. حاليًا، لا يتم استخدام هذه الطريقة عمليًا، على الرغم من أنها الأكثر دقة على الإطلاق. اختبار الدم الممتاز لمرض الزهري للكشف عن المادة الوراثية لللولبيات هو PCR. القيد الوحيد هو التكلفة العالية نسبيا للتشخيص.

الطرق المصلية

الاختبارات غير اللولبية

RSKk وRMP

وأشهر هذه الاختبارات هو رد فعل واسرمان. هذا هو الطريق التشخيص السريع(اختبار سريع لمرض الزهري)، يعتمد على تفاعل مماثل للأجسام المضادة من دم شخص مريض مع اللولبيات نفسها والكارديوليبين الذي تم الحصول عليه من قلب البقر. ونتيجة لهذا التفاعل بين الأجسام المضادة والكارديوليبين، يتم تشكيل رقائق.

في روسيا هذا التحليلعمليا لا تستخدم. تم استبداله بتفاعل الهطول الدقيق. عيب هذه الطريقة هو خصوصيتها المنخفضة. اختبار إيجابي كاذبيحدث الدم لمرض الزهري في مرض السل، وأمراض الدم، والذئبة الحمامية الجهازية، أثناء الحمل، بعد ولادة الطفل، أثناء نزيف الحيض وفي العديد من الحالات الأخرى. لذلك، مع RW الإيجابية، أكثر طرق دقيقةالتشخيص

بعد الإصابة، يصبح رد الفعل إيجابيا بعد شهرين. مع مرض الزهري الثانوي يكون إيجابيا في جميع المرضى تقريبا.

تفاعل الهطول الدقيق، الذي حل محل تفاعل واسرمان، لديه آلية مماثلة. إنها غير مكلفة، وسهلة التنفيذ، وسريعة التقييم، ولكنها يمكن أن تعطي أيضًا نتيجة إيجابية كاذبة. يتم استخدام هذين الاختبارين كاختبارات فحص.

تصبح RMP إيجابية بعد شهر من ظهور القرحة. لتنفيذها، يتم استخدام الدم من الإصبع.

هل يمكن أن يكون اختبار مرض الزهري خاطئًا؟ بالطبع نعم، خاصة عند استخدام الاختبارات غير اللولبية.

أسباب العينات الإيجابية الكاذبة الحادة عند استخدام RMP:

• الأمراض المعدية الحادة.
• التهاب رئوي؛
• احتشاء عضلة القلب؛
• سكتة دماغية؛
• الإصابات والتسمم.

غالبًا ما تحدث النتائج الإيجابية الكاذبة المزمنة في الأمراض التالية:

• مرض الدرن؛
• داء البروسيلات.
• داء البريميات.
• الساركويد.
• الأمراض الروماتيزمية
• عدد كريات الدم البيضاء المعدية.
• الأورام الخبيثة؛
• السكري؛
• تليف الكبد وغيرها.

إذا ظهرت اختبارات مثيرة للجدل، يتم استخدام الاختبارات المصلية اللولبية لتوضيح التشخيص.

اختبار RPR والتولويدين الأحمر

يعد اختبار راجين البلازما السريع (اختبار مرض الزهري RPR) نوعًا آخر من التفاعل مع مستضد الكارديوليبين. يتم استخدامه في الحالات التالية:

• فحص السكان؛
• اشتباه في مرض الزهري.
• فحص المتبرع.

ولنذكر أيضًا الاختبار باستخدام أحمر التولويدين. وتستخدم كل هذه الطرق لتقييم فعالية العلاج. وهي شبه كمية، أي أنها تقل مع الشفاء وتزيد مع انتكاسة الإصابة.

تشير النتائج السلبية للاختبارات غير اللولبية على الأرجح إلى أن الشخص ليس مصابًا بمرض الزهري. ولذلك، يتم استخدام الاختبارات غير اللولبية لتقييم العلاج. يجب إجراء التحليل الأول بعد 3 أشهر من انتهاء دورة العلاج.

اختبارات اللولبية

تعتمد اختبارات اللولبيات على استخدام المستضدات اللولبية، مما يزيد بشكل كبير من قيمتها التشخيصية. يتم استخدامها في الحالات التالية:

• اختبار الفحص الإيجابي (تفاعل الهطول الدقيق)؛
• التعرف على نتائج الفحص الإيجابية الكاذبة؛
• اشتباه في مرض الزهري.
• تشخيص الأشكال الكامنة.
• التشخيص بأثر رجعي عندما يكون المريض قد عانى من المرض في السابق.

RIT وRIF

أعلى مستويات الجودة (حساسة للغاية ومحددة للغاية) هي RIT وRIF. عيوب هذه الأساليب هي التعقيد، والوقت، والحاجة إلى المعدات الحديثة والموظفين المدربين. في معظم المرضى الذين تم شفاؤهم، تظل اختبارات اللولبيات إيجابية لسنوات عديدة، وبالتالي لا يمكن استخدامها كمعيار للشفاء.

يصبح RIF إيجابيًا بعد شهرين من الإصابة. إذا كانت سلبية، فإن المريض يتمتع بصحة جيدة، وإذا كانت إيجابية، فإن احتمال المرض مرتفع.

يتم استخدام RIT بشكل خاص في حالة النتائج الإيجابية لسرطان المثانة لاستبعاد المرض أو تأكيده. إنه حساس للغاية ويسمح لك بمعرفة بدقة كبيرة ما إذا كان المريض مصابًا بمرض الزهري أم لا. ومع ذلك، يصبح الاختبار إيجابيًا بعد ثلاثة أشهر فقط من الإصابة.

اللطخة المناعية

يعتبر النشاف المناعي أكثر حساسية من RIF، ولكنه أقل حساسية من RPHA. يتم استخدامه بشكل غير منتظم، وذلك بشكل رئيسي لتشخيص مرض الزهري عند الأطفال حديثي الولادة.

الطرق المذكورة ليست مناسبة للفحص، أي الكشف السريع عن المرض، لأنها تصبح إيجابية بعد تفاعل الهطول الدقيق.

إليسا وRPGA

الأساليب الموحدة الحديثة الغنية بالمعلومات لتشخيص مرض الزهري - ELISA وRPGA. فهي غير مكلفة، ويتم تركيبها واختبارها بسرعة بكميات كبيرة. ويمكن استخدام هذه الاختبارات لتأكيد التشخيص.

يصبح تحليل RPGA إيجابيًا مع مرض الزهري الإيجابي المصلي الأولي، أي مع ظهور القرحة (بعد شهر من الإصابة). إنها ذات قيمة خاصة في التشخيص المتأخر و الأشكال الخلقيةالأمراض. ومع ذلك، يجب استكمال اختبار RPGA باختبار واحد غير لولبي واحد على الأقل للتأكد من دقة التشخيص. هذا الاختبار الثلاثي هو الاختبار الأكثر موثوقية لمرض الزهري. مساوئ RPGA - الحفظ رد فعل إيجابيعلى مدى فترة طويلة من الزمن، وهو ما لا يسمح باستخدام الاختبار كمعيار للعلاج.

يصبح اختبار ELISA لمرض الزهري إيجابيًا بعد ثلاثة أسابيع من الإصابة بالمرض. عيب ELISA هو أنه يمكن أن يكون كاذبًا. يحدث رد فعل إيجابي كاذب عندما أمراض جهازية، الاضطرابات الأيضية، وكذلك عند الأطفال المولودين لأمهات مريضات.

عيوب الطرق المصليةأدى إلى تطوير الأساليب الأكثر تقدما التي لا تعطي أخطاء، ولكنها لا تزال باهظة الثمن ونادرا ما تستخدم - اللوني للغاز وقياس الطيف الكتلي.

خوارزمية لتشخيص عدوى الزهري في مراحل مختلفة

في الفترة المصلية الأولية (ما يصل إلى شهرين بعد الإصابة)، يتم إجراء البحث عن اللولبية في حقل مظلم أو باستخدام الأجسام المضادة الفلورية.

بالنسبة لمرض الزهري الإيجابي المصلي الأولي والثانوي والزهري الكامن، يتم استخدام RMP وELISA، ويتم استخدام RPGA كاختبار تأكيدي.

في المرضى الذين يعانون من انتكاسات مرض الزهري الثانوي، يتم فحص عناصر الطفح الجلدي، ومحاولة عزل اللولبيات منها للفحص المجهري.

في الفترة الثالثية، يكون سرطان المثانة سلبيًا لدى ثلث المرضى. إن نتائج اختبار ELISA وRPGA إيجابية، ولكنها قد لا تشير إلى مرض الزهري الثالثي، ولكن إلى مرض سابق. يشير الاختبار الإيجابي الضعيف إلى التعافي بدلاً من الزهري الثالثي.

عند تشخيص "الزهري الخلقي"، يؤخذ في الاعتبار وجود المرض لدى الأم، والاختلاف في معدلات الإصابة بسرطان الثدي لدى الأم والطفل، وإيجابية ELISA وRPGA عند الوليد، والتخثر المناعي.

يجب فحص النساء الحوامل للتأكد من عدم وجود مرض الزهري، وخاصة أولئك الذين لديهم بالفعل ولادة جنين ميت، أو حمل غير متطور، أو إجهاض مبكر. ينفذون RMP، ELISA، RPGA. ويتم فحصهم للتأكد من وجود المرض قبل إنهاء الحمل.

قواعد الحصول على اختبار لمرض الزهري

للحصول على إحالة إلى المختبر، يجب عليك زيارة طبيبك المحلي. إذا كنت ترغب في إجراء الاختبار بشكل أسرع، فيمكن القيام بذلك في مختبر خاص دون إحالة (على سبيل المثال، تقوم مختبرات Invitro بإجراء اختبار لمرض الزهري بسرعة ودون الكشف عن هويتك).

كيف يتم فحص مرض الزهري؟يتم التبرع بالدم في الصباح على معدة فارغة. يمكنك شرب الماء النظيف فقط.

تحضير:قبل يومين من الاختبار، تحتاج إلى استبعاد الأطعمة الدهنية وخاصة الكحول من نظامك الغذائي.

كيف يتم أخذ التحليل؟بالطريقة المعتادة من الإصبع أو الوريد الزندي.

كم من الوقت يستغرق اختبار مرض الزهري؟عادة ما تكون نتيجة الاختبار جاهزة في اليوم التالي. يمكن أخذ النسخة من الطبيب أو المختبر.

ما هي مدة صلاحية التحليل؟لمدة تصل إلى ثلاثة أشهر.

تحليل السائل النخاعي

في بعض الحالات، يتم إجراء اختبار السائل النخاعي لتشخيص الزهري العصبي.

يوصف هذا الفحص لجميع المرضى الذين يعانون من الزهري الكامنإذا كانت لديهم علامات أمراض الجهاز العصبي، وكذلك مع الزهري العصبي الكامن والمتأخر.

بالإضافة إلى ذلك، يتم إجراء التحليل على جميع المرضى بعد الشفاء إذا حافظوا على تفاعلات مصلية إيجابية. لقد كتبنا بالفعل في مقالتنا أن هذه الظاهرة تحدث كثيرًا.

يتم وصف تحليل السائل النخاعي لمرض الزهري بواسطة الطبيب فقط.

يتم الحصول على السائل النخاعي عن طريق ثقب بين فقرتين المنطقة القطنية. يتم جمعه في 4 مل في أنبوبين اختبار. ثم يتم معالجة موقع البزل باليود وتغطيته بضمادة معقمة. بعد الثقب، يجب على المريض الاستلقاء على بطنه مع رفع نهاية السرير لمدة 3-4 ساعات على الأقل، ثم يمكنه الاستلقاء على جانبه. راحة على السريربعد ثقب يشار إليه لمدة يومين.

يتم فحص السائل النخاعي من أنبوب الاختبار الأول باستخدام التفاعلات المقبولة عمومًا لمحتوى البروتين والخلايا وتحديد علامات التهاب السحايا (التهاب السحايا).

يتم فحص السائل النخاعي من الأنبوب الثاني لمعرفة محتوى الأجسام المضادة لللولبية اللولبية باستخدام تفاعل فاسرمان، RMP، RIF، وRIBT، والتي ناقشناها أعلاه.

وفقا لشدة الاضطرابات، يتم تمييز أربعة أنواع من التغيرات في السائل النخاعي. من خلال تحليلها، يمكن للطبيب أن يستنتج وجود أشكال مختلفة من الأضرار التي لحقت بالجهاز العصبي (الزهري العصبي الوعائي، التهاب السحايا الزهري، الزهري السحائي الوعائي، علامات الظهر، الزهري العصبي الوسيطي المتأخر)، وكذلك حول تعافي المريض المصاب بإيجابية المصل. الاختبارات.

حجم الخط

أمر وزارة الصحة في اتحاد الجمهوريات الاشتراكية السوفياتية بتاريخ 85/02/1161 بشأن تحسين التشخيص المصلي لمرض الزهري (مع تعليمات... ذات الصلة في عام 2018)

منهجية إعداد RIF - ABS

تم اختبار مصل الدم

يتم أخذ الدم للحصول على مصل الدم من الوريد المضاد للعدوى إلى أنبوب اختبار نظيف وجاف بحجم 5 مل ويتم معالجته بنفس طريقة تفاعل واسرمان. يتم تعطيل مصل الدم مرة واحدة عند درجة حرارة 56 درجة لمدة 30 دقيقة. نظرًا لأن RIF-abs يتم وضعه بشكل غير معقم، فإن استخدام حاويات معقمة والامتثال لشروط التعقيم عند تخزين مصل الدم ليس ضروريًا. من المهم فقط الحفاظ على أمصال الدم لفترة أطول قبل الاختبار.

يتم استخدام معلق من سلالة اللولبية الشاحبة المسببة للأمراض نيكولز من التهاب الخصية لمدة 7 أيام للأرنب كمستضد. يصاب ذكور الأرانب الأصحاء ذوي النتائج السلبية لاختبار واسرمان و RIT بالعدوى داخل الخصية، وعندما يحدث التهاب الخصية، تتم إزالة اللولبيات الشاحبة من الخصيتين بنفس الطريقة كما في حالة الحصول على مستضد لـ RIT. يُسكب المعلق الناتج عن اللولبية الشاحبة من قطع البيض في أنابيب اختبار معقمة بسدادات قطنية ويترك في الثلاجة عند درجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة يوم، وبعد ذلك يتم فصله عن الرواسب وتخزينه تحت نفس الظروف طوال الفترة. من الاستخدام.

يتطلب الحصول على المستضد وتخزينه الامتثال لظروف معقمة، لأن مع نفس المستضد، يمكن إجراء رد فعل في غضون 2-4 أشهر. بالنسبة للمستضد، يجب عليك اختيار تعليق لا يلاحظ فيه تراص اللولبيات ويوجد كمية كافية منها. يمكن الحصول على المستضد في أمبولات من مختبرات أخرى. قبل كل تفاعل، يتم خلط المعلق جيدًا وفحصه بالمجهر باستخدام مكثف المجال المظلم لتحديد كثافته. لأداء RIF-abs، من الضروري أن يكون لديك تعليق يحتوي على 40-60 لولبية في مجال رؤية مظلم؛ إذا كان هناك تعليق أكثر سمكًا، فيجب تخفيفه.

كمادة ماصة لـ RIF-abs، يمكن استخدام مستضد اللولبيات بالموجات فوق الصوتية لـ RBC، الذي تنتجه مؤسسة كاوناس لإنتاج المستحضرات البكتيرية التابعة لوزارة الصحة في اتحاد الجمهوريات الاشتراكية السوفياتية. وهو عبارة عن معلق من خليط من سلالات اللولبية الشاحبة المزروعة V وVII وVIII وIX وReiter التي تم تدميرها بواسطة الموجات فوق الصوتية. يجب معايرة كل سلسلة من المواد الماصة قبل استخدامها في RIF-abs لأغراض التشخيص.

معايرة المواد الماصة

تتم معايرة المواد الماصة على أمصال دم المرضى المصابين بمرض الزهري، مما يعطي نتيجة إيجابية حادة (4+) وضعيفة (2+) في RIF عند تخفيف بنسبة 1:5، وكذلك على أمصال الدم للأفراد الخاليين من المرض. عدوى الزهري، مما يعطي نتيجة سلبية في RIF-5 وإيجابية غير محددة (2+ أو أكثر).

مثال على تحديد عيار المادة الماصة

يتم تخفيف المادة الماصة بأكملها باستخدام محلول الفوسفات، حيث يكون الرقم الهيدروجيني = 7.2، 2، 3، 4 مرات أو أكثر. خذ 3 أمصال دم من مرضى الزهري، إحداها تعطي نتيجة إيجابية بقوة (4+) لـ RIF-5، 2 - إيجابية ضعيفة (2+)، و5 أمصال دم من أشخاص خاليين من عدوى الزهري، 3 منها إعطاء نتائج غير محددة وRIF-5 (2+ أو أكثر). يتم تخفيف مصل الدم بالكامل 5 مرات باستخدام مادة ماصة، ثم يتم تخفيفه بدوره 2، 3، 4 مرات أو أكثر باستخدام محلول الفوسفات. ثم يتم اختبار مصل الدم في التفاعل. بعد أخذ النتائج في الاعتبار، يتم اختيار تخفيف المادة الماصة، حيث تحتفظ أمصال الدم الممتصة للمرضى المصابين بمرض الزهري بدرجة إيجابية مماثلة لتلك التي يتم الحصول عليها مع أمصال الدم المخففة بمحلول فوسفات، وأمصال الدم للأشخاص الأحرار من عدوى الزهري لا تنتج توهجًا. هذا التخفيف للمادة الماصة هو عيارها.

كان عيار المادة الماصة في هذه الحالة هو التخفيف بنسبة 1: 3، حيث احتفظت جميع أمصال الدم من مرضى الزهري بدرجة الإيجابية التي تم الحصول عليها في السيطرة، وفي الوقت نفسه، الإيجابية غير المحددة لأمصال الدم غير المصابة بالزهري تمت إزالته بشكل موثوق.

مصل الانارة المضاد للأنواع

لدراسة أمصال الدم البشري في RIF-abs، مطلوب مصل الدم المسمى بالفلوروكروم للحيوانات المحصنة ببروتين المصل البشري. يتم إذابة مصل الإنارة المجفف بالتجميد في ظروف معقمة في الماء المقطر بالحجم الموضح على ملصق الأمبولات، ثم يُسكب في أنبوب اختبار معقم بسدادة مطاطية ويُخزن عند درجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة 1-2 أشهر أثناء الاستخدام.

في يوم التفاعل، يتم تخفيف الكمية المطلوبة من هذا المصل بالعيار مع الماء المقطر. التخفيف العملي للمصل المشار إليه على الملصق غير مناسب لتكوين تفاعل لغرض التشخيص المصلي لمرض الزهري، لذلك يجب تحديد عيار كل سلسلة من جديد.

الجدول رقم 13

نتائج معايرة المواد الماصة

تم اختبار أمصال الدم	نتائج ريف-5
	تخفيف مصل الدم 1:5 مع العازلة (K)	تخفيف مصل الدم 1:5 مع مادة ماصة في التخفيف
		1: 2	1: 3	1: 4
مصل الدم لمريض مصاب بمرض الزهري
ن 1	4+	3+	4+	4+
ن 2	2+	1+	2+	2+
ن 3	2+		2+	2+
مصل الدم غير الزهري
ن 1	3+		1+	2+
ن 2	2/3+			2+
ن 3	2+			2+
ن 4	2+			2+
ن 5

معايرة مصل الإنارة المضاد للأنواع

خذ 5 أمصال دم من مرضى الزهري و5 أمصال دم من أشخاص أصحاء، وقم بتخفيفها 5 مرات بمادة ماصة (مع الأخذ في الاعتبار عيارها) وقم بإجراء تفاعل باستخدام تخفيفات مختلفة من مصل الإنارة في المرحلة الثانية ضد جلوبيولينات المصل البشري من السلسلة. الذي يتم تحديد عياره. وينبغي أن يؤخذ في الاعتبار أن عيار الأمصال المضيئة التي تنتجها حاليا شركة IEM المسماة باسمها. NF Gamaleya، يتقلب عند إعداد RIF-abs من 1: 100 إلى 1: 140. عند الأخذ في الاعتبار التفاعل، يجب مراعاة العيار الأولي لمصل الإنارة، حيث أن التخفيف، عند استخدامه مع أمصال الدم الإيجابية، يتوهج جيدًا من اللولبيات تم الحصول عليها، ومع التلألؤ السلبي للمستضد لم يتم تلقيها. يؤدي التخفيف الأكبر للمصل الانارة من العيار إلى انخفاض في حساسية التفاعل، والتخفيف الأقل يؤدي إلى انخفاض في الخصوصية. بعد تحديد العيار الأولي يجب توضيحه بواسطة أكثرأمصال الدم الإيجابية والسلبية. ويمكن اعتبار العيار النهائي هو الذي يتم اختباره على 100 مصل دم، ويجب أن يكون 20 منها على الأقل من مرضى الزهري.

لمنع الإنبات، بعد تخفيف مصل الإنارة الجاف بالماء المقطر، من الضروري إضافة مورثيولات إليه بمعدل حجم واحد من محلوله 1: 1000 إلى 9 مجلدات من مصل الإنارة. عند تناول أمبولات جديدة من نفس السلسلة، يجب فحص وتوضيح العيار فقط لـ 10 أمصال دموية إيجابية وسلبية بشكل واضح.

مثال على تحديد العيار الأولي لمصل مضاد للأنواع المضيئة

يتم تحضير 60 مستحضر مرقمة من 1 إلى 60. يتم أخذ 10 مصل دم - 5 من مرضى الزهري، 5 من الأصحاء. يتم تخفيف مصل الدم بالكامل 5 مرات بمادة ماصة معاير.

بالنسبة للأدوية المرقمة 1-10، 11-20، 21-30، 31-40، 41-50، 51-60، يتم تطبيق نفس أمصال الدم العشرة، المخففة 5 مرات بمادة ماصة، في المرحلة الأولى من التفاعل. في المرحلة الثانية من التفاعل، يتم تطبيق مصل الإنارة المخفف 1: 100 على 1-10 أدوية، 1:110 إلى 11-20، 1:120 إلى 21-30، 1:130 إلى 31-40، 1 إلى 41-50 : 140، عند 51-60 - 1: 150.

تقنية لإعداد RIF-abs

يتم تحضير المستحضرات من المستضد على شرائح زجاجية رفيعة منزوعة الدهن جيدًا الجانب الخلفيوالتي تم تمييزها بقطع زجاجي إلى دوائر يبلغ قطرها 0.7 سم (10 دوائر على شريحة زجاجية واحدة). داخل الدائرة، يتم تطبيق مستضد معلق من اللولبية الشاحبة على الزجاج. النهاية المختومة لماصة باستور في حركة دائريةيتم توزيع المعلق داخل الدائرة، ثم يجفف في الهواء ويثبت لمدة 10 دقائق في الأسيتون النقي كيميائيا. ثم يتم ترقيم الأدوية. يتم تخفيف أمصال دم الاختبار المعطلة 5 مرات بمادة ماصة مخففة بالعيار بمحلول منظم. يتم وضع عدد من أنابيب الاختبار في الرف، ويتوافق عددها وعددها مع عدد وعدد أمصال الدم التي يتم فحصها. ماص 0.2 مل من المادة الماصة المخففة في أنابيب الاختبار، ثم أضف 0.05 مل من مصل دم الاختبار الكامل واخلطه جيدًا. يمكن تخفيف مصل الدم باستخدام جهاز فلورينسكي. يتم تطبيق مصل الدم المخفف بمادة ماصة على المستضد بحيث يغطي اللطاخة بالتساوي، وتوضع المستحضرات في غرفة رطبة، مغلقة بغطاء وتوضع في منظم حرارة عند 37 درجة لمدة 30 دقيقة (المرحلة الأولى من ردة الفعل). بعد المرحلة الأولى، يتم غسل المستحضرات بعناية في جزأين من محلول الفوسفات، وتوضع المستحضرات في الجزء الثاني لمدة 10 دقائق، وتجفف، وبعد ذلك يتم وضعها مرة أخرى في غرفة رطبة، ويتم وضع مصل مضيء مخفف بالعيار. يطبق ويترك في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة (تفاعلات المرحلة الثانية). في نهاية المرحلة الثانية، يتم غسل المستحضرات بمحلول الفوسفات العازل كما هو موضح أعلاه، وتجفيفها ويتم وضع قطرة من زيت الغمر غير المضيء (ثنائي ميثيل فثالات) على سطح المسحات.

يتم فحص المستحضرات في مجهر فلورسنت باستخدام مصباح الكوارتز الزئبقي DRSh-250 مع نظام غمر، أو عدسة عينية 4X أو 5X، أو مرشحات SZS-7 أو 14، FS-1. BS-8 وZhS-18 أو T-2N. يتم أخذ التفاعل بعين الاعتبار من خلال تقييم توهج اللولبية الشاحبة. تعتبر أمصال الدم التي تعطي توهجًا 4+ و3+ و2+ إيجابية في RIF-abs. تم تصنيف التوهج الأخضر والأصفر اللامع بـ 4+، ومشرق - 3+، والتوهج الضعيف - 2+. أمصال الدم التي تعطي توهجًا بمقدار 1+ (يتم تلوين اللولبية في المستحضر بشكل أكثر كثافة من الخلفية) أو لا تعطيها تعتبر سلبية.

في كل إعداد RIF-abs، يجب استخدام عناصر التحكم التالية:

سيطرة إيجابية قوية. مصل الدم لمريض مصاب بمرض الزهري، يعطي لمعانًا 4+ عند تخفيفه 5 مرات بالمحلول العازل. عند تخفيفه 5 مرات بمادة ماصة، يجب ألا يفقد مصل الدم درجة إيجابية بأكثر من 1+.

سيطرة إيجابية ضعيفة. مصل الدم الكامل أو المخفف لمريض الزهري، يعطي درجة ضعيفة من تألق المستضد 2+ عند تخفيفه 5 مرات بالمحلول المنظم. عند تخفيفه بمادة ماصة، يجب أن تظل إيجابية.

تحكم غير محدد. مصل الدم غير المصاب بالزهري، والذي يعطي تألقًا لا يقل عن 2+ عند تخفيفه بمحلول عازل. عند تخفيفه بمادة ماصة، يجب التخلص من إيجابيته.

لا يمكن تثبيت ضوابط المستضد، والمواد الماصة، والمصل المضيء إلا عند استخدام سلسلة جديدة من هذه المكونات.

منهجية أداء RIF-ABS بالدم الشعري

يمكن إجراء عملية RIF-abs ليس فقط بمصل الدم، ولكن أيضًا بالدم المأخوذ من الإصبع. يمكن استخدام هذا التعديل لـ RIF-abs عند فحص الأطفال بحثًا عن مرض الزهري، عندما يكون من الصعب الحصول على الدم من الوريد عند البالغين، وأثناء الفحص الشامل لمجموعات سكانية مختلفة بحثًا عن مرض الزهري.

عند تحديد مرحلة RIF-abs مع الدم، يتم استخدام نفس مكونات التفاعل كما هو الحال عند تحديد مرحلة RIF-abs مع مصل الدم (مستضد، ماصة، مصل مضيء). يتم تحديد عيار مصل الانارة وفقا للمخطط أعلاه، ولكن عند تنظيم رد فعل مع الدم. بعد ثقب إصبع المريض، يتم سحب الدم للاختبار باستخدام ماصة دقيقة حتى علامة 0.1 مل، ويتم نفخها بسرعة في أنبوب اختبار يحتوي على 0.3 مل من الماء المقطر، ويتم خلطها جيدًا باستخدام ماصة وتصفيتها من خلال مرشح ورقي مبلل بالماء المقطر. يمكن إجراء التفاعل مع الدم المخفف إما في يوم التجميع أو بعد 1-2 أيام، بشرط تخزينه عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.

مباشرة قبل التفاعل، تتم إضافة 0.1 مل من المادة الماصة الكاملة إلى جميع عينات الدم المتضمنة في التفاعل، ويتم خلطها بماصة ورجها، وتوضع في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. ثم يتم تطبيق الدم المعالج بالمادة الماصة على مسحات المستضد ويوضع في غرفة رطبة عند درجة حرارة 37 درجة (المرحلة 1 من التفاعل). بعد انتهاء فترة التعرض، تغسل المستحضرات في الجزء الأول من محلول الفوسفات بحيث لا تبقى آثار دم على الشرائح وتوضع في الجزء الثاني من محلول الفوسفات لمدة 10 دقائق. بعد تجفيف المسحات، يتم تنفيذ المرحلة الثانية من التفاعل. في هذه الحالة، يتم تطبيق مصل الإنارة ضد الجلوبيولين البشري، المخفف وفقًا للعيار المحدد لهذا التعديل لـ RIF، على المستحضرات. يتم وضع الكؤوس الموجودة في الغرفة الرطبة مرة أخرى في منظم حرارة عند 37 درجة.

بعد 30 دقيقة، يتم غسل الشرائح مرة أخرى في جزأين من محلول الفوسفات لمدة 10 دقائق، ثم يتم تجفيفها وتركيبها لإجراء الفحص المجهري الفلوري. يتم إجراء دراسة الأدوية وتسجيل نتائج التفاعل بنفس الطريقة التي يتم بها إجراء RIF-abs مع مصل الدم.

منهجية إعداد RIF-200

طريقة إعداد RIF-abs وRIF-200 متشابهة. عند ضبط RIF-200، تتم معالجة أمصال اختبار الدم، وتحضير المستضد، وإعداد مصل الانارة المضاد للأنواع ومعايرته بنفس الطريقة التي يتم بها عند ضبط RIF-abs. يجب أن يؤخذ في الاعتبار فقط أن عيار مصل الإنارة المنتج حاليًا في RIF-200 يتراوح من 1:20 إلى 1:50.

تقنية لإعداد RIF-200

يتم تخفيف أمصال الدم الاختبارية 200 مرة بمحلول الفوسفات. للقيام بذلك، يتم وضع 3 صفوف من أنابيب الاختبار في الحامل، ويتوافق عددها وترقيمها في كل صف مع عدد وترقيم أمصال الدم المختبرة في المصنف. في الصف الأول، يتم سكب أمصال دم الاختبار الكاملة، في الصف الثاني، يتم سكب 0.45 مل من العازلة في أنابيب الاختبار، في الصف الثالث - 0.95 مل من العازلة. في الصف الثاني، يتم تحضير تخفيف مصل الدم بمقدار 10 أضعاف، حيث يتم أخذ 0.05 مل من مصل دم الاختبار من كل أنبوب اختبار في الصف الأول باستخدام ماصة متدرجة منفصلة سعة 1 مل، يتم نقلها إلى أنبوب الاختبار المقابل من الصف الثاني ومختلط مع المخزن المؤقت المتاح هناك. من كل أنبوب اختبار من الصف الثاني، وباستخدام نفس الماصة، انقل 0.05 مل من مصل دم الاختبار المخفف 10 مرات إلى أنبوب الاختبار المقابل من الصف الثالث واحصل على تخفيف 200 مرة.

عند إعداد التفاعل، يتم تطبيق أمصال الدم الاختبارية المخففة 200 مرة على الأدوية الموضوعة في غرفة رطبة بحيث تتوافق أرقامها المشار إليها في أنابيب الاختبار مع الأرقام الموجودة على الشرائح. بعد إضافة مصل الدم إلى المستحضرات، توضع الحجرة الرطبة لمدة 30 دقيقة في منظم حرارة بدرجة حرارة 37 درجة (المرحلة الأولى من التفاعل). ثم يتم غسل المستحضرات لمدة 10 دقائق في جزأين من المخزن المؤقت وتجفيفها. بعد ذلك، يتم وضعها مرة أخرى في غرفة رطبة ويتم تطبيق مصل مضيء مخفف بالعيار عليها جميعًا (المرحلة الثانية من التفاعل). يتم تنفيذ المرحلة الثانية لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، وبعد ذلك يتم غسل المستحضرات لمدة 10 دقائق، وتجفيفها وتركيبها لإجراء الفحص المجهري الفلوري.

يتم أخذ نتائج RIF-200 في الاعتبار بنفس طريقة RIF-abs.

في حالة اهتمام الأطباء بعيار الأجسام المضادة الفلورية في مصل دم المريض، يجب إعطاء RIF-abs وRIF-200 مع التخفيف التسلسلي لأمصال دم الاختبار ويجب اعتبار عيار الأجسام المضادة الفلورية هو التخفيف الأعلى لـ مصل الدم الذي لا يزال يعطي نتيجة رد فعل إيجابية. من المعتاد الإشارة إلى العيار برقم يميز درجة تخفيف مصل دم الاختبار، على سبيل المثال، 5، 10، 20، 40، إلخ. (RIF-abs) أو 200، 400، 800، إلخ. (ريف-200).

عند إعداد كلا التعديلين من التفاعل، يجب استخدام محلول فوسفات من التركيبة التالية لتخفيف أمصال دم الاختبار وغسل المستحضرات بعد المرحلتين الأولى والثانية: 1 لتر من الماء المقطر، 6.8 جم من كلوريد الصوديوم، 1.48 جم من فوسفات الصوديوم غير المستبدل، 0.43 جم من فوسفات البوتاسيوم أحادي الاستبدال (PH = 7.2). يتم تخزين المحلول المحضر في درجة حرارة الغرفة لمدة لا تزيد عن أسبوع.

نظرًا لاحتمال الحصول على نتائج سلبية في وجود الأجسام المضادة الفلورية، لا ينبغي اختبار الدم والمصل في RIF-abs وRIF-200 أثناء علاج المرضى الذين يعانون من البنسلين.

منهجية وضع RIF-ts

يعد التشخيص المبكر لأضرار الجهاز العصبي بسبب مرض الزهري مسألة ملحة في مكافحة هذا المرض. نظرًا لحقيقة أن RIF-c أكثر حساسية من جميع الاختبارات الأخرى المستخدمة لتشخيص السائل النخاعي لمرض الزهري، يمكن التوصية بهذا التعديل لـ RIF لتشخيص آفات الزهري في الجهاز العصبي المركزي في جميع أشكال مرض الزهري.

لاختبار RIF-c، يتم استخدام نفس المستضد، مصل الإنارة، كما هو الحال في اختبار RIF-abs وRIF-200 مع مصل الدم. إن تحديد الأجسام المضادة الفلورية في السائل النخاعي ومصل الدم وتسجيل التفاعل متشابهان أيضًا.

يتم إدخال السائل النخاعي في التفاعل بشكل غير نشط وسليم. قبل إجراء التفاعل، يمكن تخزينه في حجرة التجميد بالثلاجة في أنابيب اختبار تحت سدادات مطاطية لمدة تصل إلى أسبوعين. يتم الذوبان في درجة حرارة الغرفة.

تقنية لإعداد RIF-ts

في المرحلة الأولى من التفاعل مع المستضد، يتم تطبيق 0.05 مل من اختبار السائل النخاعي غير المخفف، وتوضع المستحضرات في غرفة رطبة لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ثم يتم غسلها بمحلول الفوسفات المنظم، درجة الحموضة = 7.2، لمدة 10 دقائق وتجفيفها. في المرحلة الثانية، يتم تطبيق مصل مخفف على الأدوية، والذي تتم معايرته عند حدوث تفاعل مع السائل النخاعي. يتم الاحتفاظ بالمستحضرات في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة في غرفة رطبة، ويتم غسلها وتجفيفها وتركيبها لإجراء الفحص المجهري الفلوري.

مصادر الأخطاء

1. عدم الالتزام بشروط التحضير وتخزين الكواشف وإعداد التفاعل.

2. انخفاض جودة المصل المضيء وعدم دقة تحديد عياره.

3. تطبيق مادة الاختبار أو المصل المضيء عند ضبط التفاعل ليس على الدواء، بل على الجانب الآخر من الشريحة الزجاجية.

4. إعداد الإضاءة غير صحيح في المجهر الفلوري.

5. انخفاض جودة المستضد.