ציטוגנטיקה מסורתיתבעת לימוד הקריוטיפ, הוא תמיד היה מוגבל לרמת הרזולוציה של הלהקה. אפילו כאשר השתמשנו בשיטות ברזולוציה גבוהה לצביעה דיפרנציאלית של כרומוזומים, זיהינו רק יותר פסים על כרומוזום, אבל לא היינו בטוחים שהגענו לרמה המולקולרית של הרזולוציה. ההישגים האחרוניםטכנולוגיית DNA וציטוגנטיקה אפשרו להשתמש בטכניקות FISH לניתוח שינויים ב-DNA הכרומוזומלי ברמה המולקולרית. ציטוגנטיקה מולקולרית סיפקה פריצת דרך מהפכנית בציטוגנטיקה, ואיפשרה:

נתח את מבנה ה-DNA של כרומוזומים בטווח של 10-100 קילו-בסיסים;
לאבחן תאים בין-פאזיים שאינם מתחלקים, אשר הייתה לו השפעה עצומה על האבחון הטרום לידתי ועל האבחון הגנטי טרום השרשה (PGD).

טכנולוגיית FISHמשתמש בבדיקת DNA הקושרת או מחשלת רצפי DNA ספציפיים בתוך כרומוזום. הבדיקה הדנטורטית מודגרת עם ה-DNA המקורי של התא, גם הוא דנטורטי למצב חד-גדילי. הבדיקה מחליפה ביוטין deoxyuridine triphosphate או digoxigenin uridine triphosphate ב-thymidine. לאחר רנטורציה של ה-DNA המקומי עם בדיקה, ניתן לזהות את קומפלקס ה-Probe-DNA על ידי הוספת אבידין קושר ביוטין מסומן פלואורכרום או אנטי דיגוקסיגנין המסומן עם פלואורכרום. ניתן להשיג שיפור אות נוסף על ידי הוספת אנטיאבידין ולימוד הקומפלקס שנוצר באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. על ידי תיוג בדיקות DNA שונות עם מספר פלואורכרומים שונים, ניתן לדמיין בו זמנית מספר כרומוזומים או מקטעים כרומוזומליים בתוך תא בודד כאותות רב-צבעוניים.

אפשרות להגדרה מקטעי גנים ספציפיים, נוכח או נעדר בכרומוזומים, אפשרו לאבחן תסמונות של רצף גנים ברמת ה-DNA, כמו גם טרנסלוקציות בגרעינים בין-פאזיים, לרוב בתאים בודדים.

חומר עבור דגיכול לשרת או כרומוזומים מטאפאזהגרעינים המתקבלים מתאי חלוקה, או גרעינים בין-פאזיים מתאי שאינם בשלב החלוקה. קטעים מטופלים מראש עם RNase ו-proteinase כדי להסיר RNA שעלול להכליא עם הבדיקה והכרומטין. לאחר מכן הם מחוממים בפורמאמיד כדי לסנן את ה-DNA ומקובעים באלכוהול קר כקרח. לאחר מכן הבדיקה מוכנה להכלאה על ידי חימום. לאחר מכן מערבבים את הבדיקה והכרומוזום ואטומים עם כיסוי כיסוי ב-37 מעלות צלזיוס להכלאה. על ידי שינוי טמפרטורת הדגירה או הרכב המלח של תמיסת ההכלאה, ניתן להגביר את הספציפיות הקישורית ולהפחית את תיוג הרקע.

יישום הכלאה פלואורסצנטי באתרו - טכנולוגיית FISH

יעילות טכנולוגיית FISHהודגם לראשונה על ידי לוקליזציה של גנים ל. עם כניסתו של תיוג פלואורסצנטי, הכלאה באתר הוכחה הכרחית לאבחון מומים כרומוזומליים שאינם ניתנים לזיהוי שיטות מסורתיותלהקה. FISH גם מילא תפקיד מפתח באחת התגליות יוצאות הדופן בעולם. גנטיקה מודרנית- הטבעה גנומית.

טכנולוגיית הפיתוח שלו דגהתקבל בשלוש צורות. בדיקות Centromere, או אלפא לווין, מאופיינות בספציפיות כרומוזומלית יחסית והן שימשו לרוב בגנטיקה של תאים בין-פאזיים. בדיקות אלו מייצרות אותות דיפוזיים במקצת בעלי חוזק נאות באזור הצנטרומר, אך אינם מצליבים עם כרומוזומים בעלי רצפי צנטרומרים דומים. נכון להיום פותחו בדיקות בעותק בודד המספקות אות בדיד מרצועת כרומוזומים ספציפית ונמנעות מהתופעה של הכלאה צולבת. בדיקות אלו יכולות לשמש גם כדי לקבוע את מספר ההעתקים ואזורים ספציפיים של כרומוזום החשוד כקשור לתסמונת מסוימת. בדיקות בעותק בודד וצנטרומרים המיועדים לכרומוזומים 13, 18, 21, X ו-Y משמשים לאבחון טרום לידתי.

אפשר גם "לכתים" כרומוזומים שלמים באמצעות דג. הודות לטכנולוגיית קריוטיפינג ספקטרלית, המשתמשת בתערובת של פלואורכרומים שונים, ניתן כיום ליצור תבנית פלואורסצנטית ייחודית לכל כרומוזום בודד עם 24 צבעים נפרדים. טכנולוגיה זו מאפשרת לזהות סידורים כרומוזומליים מורכבים שאינם נראים באמצעות טכניקות ציטוגנטיות מסורתיות.

שיטה דגבאבחון טרום לידתי. עבור נשים בגיל רבייה מתקדם, הריון יכול להיות סיבה לא לשמחה אלא לדאגה. גיל האישה קשור לסיכון לפתח הפרעות כרומוזומליות בעובר. בדיקת מי שפיר, המתבצעת בשבוע 16 להריון, ואחריה ניתוח קריוטיפ נמשכת 10-14 ימים. השימוש ב-FISH בבדיקה מקדימה יכול להאיץ את האבחון ולהפחית את זמן ההמתנה. רוב הגנטיקאים והמעבדות סבורים שאין להשתמש ב-FISH בבודד כדי לקבל החלטות לגבי המשך ניהול ההריון. יש להשלים את שיטת ה-FISH בניתוח קריוטיפי, ותוצאותיה חייבות לפחות להיות מתואמות עם התמונה הפתולוגית בדיקת אולטרסאונד(אולטרסאונד) או סקר ביוכימי באמצעות דם אימהי.

תסמונות גנים רצפיםידוע גם בשם תסמונות מיקרו-מחיקה או אנאוזומיה סגמנטלית. אלו הן מחיקות של שברי כרומוזומים סמוכים, בדרך כלל מערבים גנים רבים. תסמונות רצף גנים תוארו לראשונה בשנת 1986 באמצעות טכניקות ציטוגנטיות קלאסיות. כעת, הודות ל-FISH, ניתן לזהות מחיקות תת-מיקרוסקופיות ברמת ה-DNA, מה שאיפשר לזהות את האזור הנמחק הקטן ביותר הקשור להתפתחות תסמונת מסוימת, הנקרא האזור הקריטי. לאחר שזוהה האזור הקריטי לתסמונת, לעיתים קרובות ניתן לזהות גנים ספציפיים שהיעדרם מוכר כקשור לתסמונת. מדריך עדכני של תסמונות רצף גנים מדווח על 18 תסמונות מחיקה ומיקרו-מחיקה הקשורות ל-14 כרומוזומים. כמה מתסמונות רצף הגנים הנפוצות ביותר והן ביטויים קלינייםניתנים בטבלה. 5-2.

טלומרים- תצורות המכסות את קצות הזרועות הארוכות והקצרות של הכרומוזומים. הם מורכבים מרצפים חוזרים TTAGGG ומונעים היתוך של קצוות הכרומוזומים זה עם זה. בדיקות טלומריות ממלאות תפקיד חשוב בזיהוי טרנסלוקציות מורכבות שלא ניתן לזהות בשיטות ציטוגנטיות מסורתיות. בנוסף, אחת התגליות של פרויקט הגנום האנושי הייתה העובדה שאזורי הכרומוזומים הסמוכים לטלומרים עשירים בגנים. כעת הוכח שמחיקות תת-טלומריות תת-מיקרוסקופיות אחראיות להתרחשותן של מחלות רבות שנקבעו גנטית.

קביעת מצב הגידול HER-2 על ידי FISH- מחקר של נטייה להתפתחות גידול ובחירה של טיפול מתאים בזמן לסרטן השד (BC) או סרטן הקיבה (GC).

HER-2 (HER-2/neu)- קולטן לגורם גדילה באפידרמיס אנושי-2 הוא חלבון שיכול להשפיע על הצמיחה תאים סרטניים. הוא נוצר על ידי גן מיוחד שנקרא הגן HER-2/neu. HER-2 הוא קולטן לגורם גדילה מסוים הנקרא גורם גדילה אפידרמיס אנושי המופיע באופן טבעי בבני אדם. כאשר גורם גדילה אפידרמיס אנושי מתחבר לקולטני HER-2 בתאי סרטן השד, הוא יכול לעורר את התאים הללו לגדול ולהתחלק. ברקמה בריאה, HER-2 משדר אותות המווסתים את התפשטות התאים והישרדות, אך ביטוי יתר של HER-2 עלול לגרום להתמרה ממאירה של תאים.

ביטוי יתר של HER-2 בתתי סוגים מסוימים של סרטן השד מוביל לשגשוג מוגבר ואנגיוגנזה, חוסר ויסות של אפופטוזיס (הרס עצמי מתוכנת גנטית של תאים). הוכח שבסרטן השד, ביטוי יתר של קולטן זה ברקמת הגידול קשור למהלך אגרסיבי יותר של המחלה, פוטנציאל גרורתי מוגבר של הגידול ופחות. פרוגנוזה חיובית. גילוי הקשר בין ביטוי יתר של HER-2 לבין פרוגנוזה לא חיובית לסרטן השד הוביל לחיפוש אחר גישות טיפול שמטרתן לחסום ספציפית את האונקוגן HER-2/neu (טיפול ממוקד נגד HER2).

סרטן השד (BC) - גידול ממאיר רקמת בלוטותבלוטת חלב. סרטן השד נמצא במקום הראשון מבין כל המחלות הממאירות בנשים.

בהתאם לקיומם של סמנים ביולוגיים של הגידול - ביטוי של קולטנים הורמונליים (אסטרוגן ו/או פרוגסטרון), מבחינים בביטוי של HER-2 - סרטן שד חיובי לקולטן הורמונים, חיובי ל-HER-2 ושלילי משולש.

סוגי סרטן השד מסוג HER-2/neu-positive (HER-2+) מאופיינים בביטוי גבוה של חלבון HER-2/neu.
סוגי סרטן השד HER=2/neu-negative (HER-2-) מאופיינים בביטוי נמוך או היעדר חלבון HER-2/neu.
על פי ההערכות, אחת מכל חמש נשים עם סרטן השד סובלת מגידול HER-2 חיובי. רוב סוגי סרטן השד תלויים הורמונליים: לאסטרוגנים ופרוגסטרון יש השפעה מעוררת (שגשוג וניאופלסטי) עליהם. בסרטן שד חיובי ל-HER-2, יש עודף של קולטני HER-2 על פני תאי הגידול. התופעה הזונקרא "מצב HER-2 חיובי" ומאובחן ב-15-20% מהנשים הסובלות מסרטן השד.

HER-2- קולטן לגורם גידול אפידרמיס אנושי מסוג 2, הקיים ברקמות באופן רגיל, המשתתף בוויסות חלוקת התא והתמיינות. עודף שלו על פני השטח של תאי הגידול (ביטוי יתר) קובע את הצמיחה המהירה הבלתי מבוקרת של הגידול, סיכון גבוה לגרורות ואת היעילות הנמוכה של סוגים מסוימים של טיפול. סרטן שד חיובי HER-2 הוא צורה אגרסיבית במיוחד של מחלה זו, בגלל זה הגדרה מדויקתלמצב HER-2 יש חשיבות מרכזית לבחירת טקטיקות הטיפול.

סרטן קיבה (GC)- גידול ממאיר שמקורו באפיתל של רירית הקיבה.

GC מדורגת במקום הרביעי במבנה שכיחות הסרטן ובמקום ה-2 במבנה התמותה מסרטן בעולם. שכיחות סרטן הקיבה בגברים גבוהה פי 2 מאשר בנשים. רוסיה היא אחד האזורים עם שכיחות גבוהה של סרטן קיבה ותמותה ממחלה זו. אבחון סרטן הקיבה על שלבים מוקדמיםקשה בגלל המהלך האסימפטומטי הארוך של המחלה. GC מתגלה לעתים קרובות בשלבים מאוחרים, כאשר שיעור ההישרדות ל-5 שנים אינו עולה על 5-10%, והכימותרפיה נותרה שיטת הטיפול היחידה.

שיטת הטיפול העיקרית בסרטן הקיבה היא ניתוח. עם זאת, ברוב המטופלים, בזמן האבחון, נקבע תהליך גידול נרחב, אשר הופך ניתוח רדיקלי לבלתי אפשרי ודורש מערכתית. טיפול תרופתי. כימותרפיה מגדילה באופן מובהק את ההישרדות הכוללת של חולים עם סרטן גרורתי, ומשפרת את איכות חייהם.

האונקוגן HER-2 (erbB-2) זוהה בתחילה בגידולי שד. הגברה וביטוי יתר של גן זה הם אירוע ספציפי יחסית לקרצינומות בשד ולמעשה אינו מתרחש בגידולים במקומות אחרים. נראה כי סרטן הקיבה הוא אחד היוצאים מן הכלל הבודדים, כאשר הפעלת HER-2 נצפתה בכ-10-15% ניאופלזמות ממאירותשל איבר זה ומתאם למהלך האגרסיבי של המחלה.

ביטוי יתר של HER-2 הוא גורם לפרוגנוזה גרועה. על פי מחקרים שונים, הגברה של הגן HER-2 בחולים עם סרטן מתואמת עם שיעורי הישרדות כלליים נמוכים.

להערכת מצב HER-2 בסרטן ובסרטן השד, נעשה שימוש בשיטת FISH.

דג- מחקר מאפשר לקבוע שינויים איכותיים וכמותיים בכרומוזומים לאבחון מחלות דם ממאירות וגידולים מוצקים.

כיום, מחקרי FISH נמצאים בשימוש נרחב ברחבי העולם.

שיטת FISH (הכלאה פלואורסצנטי באתרו) היא מחקר של מספר הגנים HER-2/neu בתוך תאים סרטניים.

אינדיקציות:

• סרטן השד - לצורך פרוגנוזה ובחירת טיפול;
• סרטן הקיבה - לצורך פרוגנוזה ובחירת טיפול.

הכנה
נקבע על ידי הרופא המטפל.

נדרשים פרוטוקול היסטולוגי ופרוטוקול אימונוהיסטוכימי, זכוכית IHC.

פרשנות של תוצאות
תוצאות בדיקת FISH מתבטאות באופן הבא:

1. חיובי (תכולה מוגברת, יש הגברה של הגן HER-2):

• סרטן שד חיובי HER-2;

2. שלילי (ללא הגברה של גן HER-2):

• סרטן שד שלילי HER-2.

סרטן החלב - מחלה מסוכנת, שלפי הסטטיסטיקה נמצאת במקום הראשון מבין מחלות הסרטן בנשים. הסיכון ללקות במחלה זו עולה אצל כל הנשים מעל גיל 40 ועשוי לנבוע ממספר גורמים אחרים. הגורמים הסבירים ביותר לסרטן השד כוללים השמנת יתר, נטייה גנטית או תורשתית, התחלה מוקדמתהווסת והשלמה המאוחרת, טיפול הורמונלי או הקרנות.

בנוסף, הסיכון לתחלואה מוגבר בנשים בטלניות ובנשים שכבר חלו בסרטן. גם גברים יכולים לחלות בסרטן השד.

סוגי ושיטות אבחון

השלב הראשון של אבחון סרטן השד הוא בדיקה שגרתית אצל ממולוגית. נשים מעל גיל 40 צריכות לעבור בדיקות כאלה לפחות פעם בשנתיים. הרופא מבצע בדיקה ויזואלית, מישוש וממוגרפיה של בלוטות החלב. סימנים חזותיים של התפתחות המחלה עשויים לכלול:

מידע כללי

צילום רנטגן של השד (ממוגרפיה) מאפשר לקבוע את נוכחותו, הגודל והמיקום של הגידול. כדי להגביר את הדיוק של התוצאות שהושגו, נעשה שימוש בטכנולוגיה של החדרת חומר ניגוד. אם כבר התגלה גידול, אזי משתמשים בשיטה של ​​פנאומוציסטוגרפיה - הוצאת נוזל הגידול והחדרת אוויר לחלל. אם לא צוינה נוכחות של גידול, נעשה שימוש בדקטוגרפיה - הכנסת חומר ניגוד לצינורות החלב.

שיטות אלה מאפשרות לך לדמיין את נוכחותן של תצורות ברקמת השד.

אם נוכחות גידול הופכת ברורה גם בממוגרפיה, המטופל מקבל הפניה למערכת של אמצעי אבחון:

באמצעות אולטרסאונד, הרופא יכול להבחין בין גידול לציסטה ולהבהיר את מיקום ההיווצרות. לאחר מכן, נלקחת ממנו דגימת רקמה לביופסיה. ביופסיה מאפשרת לברר את סוג הגידול: שפיר או ממאיר, וגם לקבוע אם הגידול תלוי הורמונלי. מידע זה מאפשר לרופא להחליט על אסטרטגיית טיפול, אך לא תמיד מאפשר לקבוע את השלב. לעתים קרובות, אפילו עם כל הדרוש פעילויות אבחוןניתן לקבוע זאת רק לאחר הניתוח.

מנגנון של מחקרים היסטולוגיים

ביופסיה של רקמות מתבצעת לפני ואחרי הניתוח. ההליך מתבצע לאחר בירור לוקליזציה של המבנה.

ביופסיה היא תהליך של הסרת פיסת רקמה, והמחקר שלה נקרא "בדיקה היסטולוגית" או פשוט "היסטולוגיה".

עובד רפואי משתמש במחט מיוחדת כדי להסיר כמות קטנה של רקמה מהגידול, או גידול שכבר הוסר מגופו של המטופל נשלח לבדיקה היסטולוגית. לאחר מכן שבר הרקמה נצבע ומעובד במיוחד כדי להגביר את הניגודיות ולהקל על המחקר. מומחה בוחן את החתך באמצעות מיקרוסקופ ונותן חוות דעת על איכות היווצרות הגידול. הרבה במחקר זה תלוי בתשומת לב ובכישוריו של טכנאי המעבדה שנותן את המסקנה.

מחקר דומה הוא אימונוהיסטוכימיה. באופן כללי, זה יכול להיקרא גם "היסטולוגיה", כי השיטה מבוססת על חקר רקמות, אך אימונוהיסטוכימיה היא שיטת ניתוח מתקדמת יותר. במחקר זה, הרקמה נצבעת גם עם ריאגנטים מיוחדים, אשר לא רק משפרים את הניגודיות החזותית, אלא גם משלבים ("תווית") עם נוגדנים בצורה מיוחדת, המאפשרת להבהיר מאפיינים נוספים של הגידול. במקרה זה, התגובה מתרחשת הרבה יותר מהר, מה שמאפשר לך להשיג במהירות תוצאות ניתוח.

אימונוהיסטוכימיה מאפשרת לא רק להבהיר את סוג הגידול, אלא גם לתכנן אסטרטגיית טיפול בחולה המבוססת על זיהוי הרגישות של רקמת הגידול ל סוגים שוניםהשפעות טיפוליות. בנוסף, מחקר זה הוא אוטומטי ככל האפשר, מה שמאפשר לנו למזער את הסבירות לטעות אבחון הנובעת מהגורם האנושי.

ישנם גם אמצעי אבחון מודרניים המאפשרים לזהות נוכחות של גידול בגוף: זוהי בדיקת דם ספקטרלית, ניתוח אימונולוגי (ביוכימי), בדיקת FISH של רקמת הגידול. בדיקת דם גנטית מאפשרת לכל אישה לוודא האם יש לה או אין לה את התנאים המוקדמים לסרטן השד. CT ו-MRI מאפשרים לקבוע במדויק את מיקומו של הגידול ולנטר את הדינמיקה של התפתחותו, להעריך את מבנה הגידול.

כיצד לזהות סרטן באמצעות בדיקת דם?

בדיקת דם ניתנת לרוב על ידי רופא לאחר בדיקת אולטרסאונד. ישנם מצבים כאשר המטופל יוזמה עצמיתתורמת דם עבור סמני חלונות או ניתוח גנטי כדי לזהות נטייה לסרטן השד. במקרים מסוימים ניתוח כללידם עשוי להיות סיבה לפנות למרפאה אונקולוגית (יחד עם מישוש של גוש או סימנים חזותיים של סרטן).

ניתוח ביוכימי

דם כחומר למחקר מאפשר לבצע את אמצעי האבחון הבאים:

יחד עם זאת, רק שני הניתוחים הראשונים יכולים להיקרא שיטות מיוחדות לקביעת סרטן, השנייה שבהן היא אמצעי מניעה יותר מאשר מבצעית. שתי בדיקות דם נוספות מתבצעות בעיקר לפני הניתוח לקביעת מצב הגוף והיקף התהליך. עם זאת, כפי שכבר הוזכר, אם מורגש גוש בחזה ובדיקת דם כללית מראה יותר משני מקדמי אבחון שליליים, זו סיבה להתייעץ עם מומחה. מקדמים שליליים הם אינדיקטורים מחוץ לנורמה בפרמטרים מסוימים של הרכב הדם.

בדיקת דם ביוכימית יכולה לזהות נוכחות של נוגדנים לתאי גידול. גופים כאלה נקראים סמני גידול. מספר וסוג סמני הגידול תלויים בפרטים הספציפיים (לוקליזציה) גידול סרטניושלב התפתחותו. סמני גידול כוללים:

במקרה של סרטן השד, הרופא המטפל יתעניין בעיקר בנוכחות סמן הגידול CA-15-3, שכן הימצאותו בדם מעידה בבירור על סרטן השד. פענוח התוצאה לוקח בממוצע יום אחד. ניתוח ביוכימי מתבצע מספר פעמים במהלך המחלה. דם עבור זה נלקח מוריד במחצית הראשונה של היום על בטן ריקה. שבועיים לפני הבדיקה, המטופל מפסיק ליטול הכל תרופות(לאישור עם הרופא המטפל). יומיים לפני תרומת דם, אסור לשתות אלכוהול, מזון שומני או מטוגן.

שעה לפני ההליך אסור לעשן ורצוי להפחית מתח רגשי. דם על ניתוח ביוכימיבדרך כלל הם לא נלקחים מיד לאחר הקרנות וטיפול פיזיותרפי.

קביעת גורמים גנטיים

לפני שמדברים על בדיקת דם גנטית, כדאי להדגיש את ההבדל בין המושגים "גנטית" ו"תורשתי". גורם גנטיהתרחשות הסרטן היא מושג רחב יותר שמרמז לא רק על נוכחותם של קרובי משפחה עם סרטן השד, אלא גם על מוטציה גנטית ספציפית המגבירה את הסיכון למחלה זו.

תורשה מרמזת על סיכון פוטנציאלי לסרטן השד על סמך ההיסטוריה המשפחתית. יחד עם זאת, לא רק נשים, אלא גם גברים יכולים לקבל את הגן המוטנטי, אך הנשא שלו לא בהכרח יחלה.

כל אישה יכולה לעבור בדיקות גנטיות. זה מומלץ במיוחד לאלו שקרוביהם הישירים חלו בסרטן השד. לפני תרומת דם לניתוח, על המטופל לדבר עם מומחה בתחום הגנטיקה, שיסביר את הניואנסים של פענוח התוצאות. אין צורך בהכנה מיוחדת מהמטופל לפני תרומת דם.

במקרה של קבלה תוצאה חיוביתמוטציות בגן BRCA, אך בהיעדר אחרות תסמינים מדאיגים, אין צורך להיכנס לפאניקה. נשים עם מוטציות בגנים אלו עשויות להיות מומלצות לעבור בדיקה עצמית ובדיקות גופניות כאמצעי מניעה. לאחר 40 שנה, הגיוני לחשוב על הסרת השחלות והשדיים; לנשים צעירות יותר שאינן מתכננות להביא ילדים בעתיד מומלץ לפעמים לקחת אמצעי מניעה. ההחלטה לגבי אמצעים אלו מונחת כולה על כתפיה של האישה עצמה ודורשת גישה מתחשבת והתייעצות עם רופאים.

שיטות האבחון העדכניות ביותר

ניתוח ספקטרלידם מגלה נוכחות של גידולים בגוף עם הסתברות של עד 93%. מדובר בשיטת אבחון זולה יחסית, המבוססת על הקרנת סרום הדם בספקטרום האינפרא אדום וניתוח ההרכב המולקולרי שלו.

המסקנה על בדיקת דם ספקטרלית ניתנת על פי עקרון "נוכחות-היעדר" ומטרתה לזהות את רוב סוגי הגידולים הממאירים. בדיקה זו יכולה גם לקבוע את שלב התפתחות סרטן השד. התוצאות מפוענחות במעבדה ואינן מצריכות חוות דעת נוספת של רופא.

על מנת לתרום דם לניתוח ספקטרלי, יש צורך להפסיק נטילת תרופות חודשיים לפני ההליך. לפחות 3 חודשים צריכים לעבור מרגע צילום רנטגן או הקרנה אחרת, כמו גם כימותרפיה. בנוסף, אסור לאישה להיות בהריון או במחזור בזמן איסוף הדם. דגימת דם מתרחשת על קיבה ריקה במחצית הראשונה של היום. בדיקת דם ספקטרלית אורכת בממוצע 12 ימי עבודה.

אחד מ השיטות העדכניות ביותראבחון סרטן הוא מה שמכונה "בדיקת דגים" (FISH, הכלאה פלואורסצנטית). יעילותו עדיין בדיון, השאלה העיקרית לגבי היתכנותו היא הליך המחקר היקר. מהות השיטה היא תיוג שברי תאים בהרכב פלואורסצנטי ובדיקה מיקרוסקופית נוספת של התאים. על סמך אילו חלקים של החומר הגנטי קשורים השברים המסומנים, ניתן להבין האם למטופל יש נטייה לסרטן ואילו שיטות טיפול יהיו רלוונטיות במקרה מסוים.

בדיקת FISH אינה מצריכה תאים בשלים לחלוטין, ולכן היא הרבה יותר מהירה לביצוע מבדיקות מעבדה אחרות. בנוסף, שיטת FISH מאפשרת לך לצפות בצורה ברורה יותר בנזק גנטי, שאי אפשר לעשות עם סוגים אחרים של ניתוח. בדיקת FISH משמשת לרוב לאיתור סרטן השד, אך היא פועלת גם לגילוי מספר סוגים אחרים של סרטן.

החסרונות של בדיקת FISH כוללים, בנוסף לעלות הגבוהה שלה, את חוסר היכולת שלה לעבוד על אזורי כרומוזומים מסוימים בגלל הספציפיות של התגים. בנוסף, בדיקת FISH מתעלמת מסוגים מסוימים של מוטציות והתמוטטויות קוד גנטי, שיכולה להיות השמטה אבחנתית חשובה. יַחֲסִי לימודי דגיםעם בדיקת IHC הזולה יותר לא הראו תועלת משמעותית בקביעת הרגישות של תאים סרטניים להרצפטין. עם זאת, בדיקת FISH היא כיום המהירה ביותר מבין השיטות המדויקות ביותר לאבחון סרטן.

FISH הוא אחד ה"כלים" המדהימים ביותר ביולוגיה מולקולריתהמאה ה-XXI. באבחון טרום השרשה, טכניקת המחקר FISH משמשת לאיתור הפרעות כרומוזומליות או הפרעות בזיווג כרומוזומים בתאי העובר שהושגו לאחרונה על ידי הפריה חוץ גופית (IVF). אם לא מתגלים חריגות או סימנים לאנופלואידיה (הפרעת זיווג, היעדר זוגות כרומוזומים), אזי העובר ה"מלאכותי" נחשב בר-קיימא. ניתן להשתיל אותו ברחם של האם המצפה.

FISH גם מאפשר להתחקות אחר מאפיינים מיניים במערך הכרומוזומים של העובר. זה מאפשר לקבוע את מינו של הילד שטרם נולד עוד לפני תחילת ההריון בפועל (אם ניקח בחשבון שהדבר מתחיל בהשתלה של עובר חוץ-גופני לרחם).

מה זה FISH?

הקיצור מייצג: Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung, או הכלאה fluorescent in-situ. התמליל, ככל הנראה, אינו מספר דבר לקורא הנבער. אז בואו נסתכל על זה מושג מורכבבחלקים, משאירים את ה"in-situ" הלא מתורגם לסוף.

הַכלָאָה

בביולוגיה מולקולרית, למונח הזה יש משמעות מאוד מיוחדת שאין לה שום קשר להצלבת מינים בביולוגיה "רגילה".

הכלאה היא טכניקה גנטית מולקולרית המשמשת להערכת מצב ה-DNA וה-RNA של התאים הנלמדים. הוא מבוסס על חיבור של שרשראות בודדות של חומצות גרעין למולקולה אחת. בדרך זו נבדקת ההשלמה (התכתבות הדדית) של מולקולות או שבריהן זו לזו. עם השלמה מלאה, השרשראות משתלבות בקלות ובמהירות למולקולה משותפת. איחוד איטי מעיד על חוסר השלמה מספקת. אי-ההשלמה של השרשראות נובעת בדיוק ממומים כרומוזומליים (הפרות בסדר הכרומוזומים באזורים מסוימים), כרומוזומים לא מזווגים או היעדר כמה זוגות.

ה"כלי" למדידת השלמה הוא הטמפרטורה שבה גדילי ה-DNA מתכלאים למולקולה משותפת. כדי לעשות זאת, תחילה עליך לחמם את תכשיר חומצת הגרעין, ולאחר מכן, לאחר ערבובו עם תכשיר מחומם אחר, לקרר אותו. בחימום נעלמים קשרי מימן בין שרשראות DNA או RNA, ונוצרים שברים חד-גדיליים של מולקולות. תכשירים מעורבים של שני DNA או RNA (או DNA - RNA) מקוררים. לאחר קירור, קשרי מימן בין בסיסים משלימים משוחזרים במהירות, ונוצרת מולקולת DNA היברידית אחת (RNA או DNA - RNA). עם חוסר השלמה, התהליך נמשך זמן רב יותר, שברים לא משלימים נשארים לא מחוברים. כתוצאה מכך, ככל שטמפרטורת ההכלאה גבוהה יותר, כך המבנה הכרומוזומלי של התאים הרמוני ומתקין יותר. ככל שהטמפרטורה נמוכה יותר, כך יותר חריגות בכרומוזומים. בהתבסס על ניתוח של שאריות לא משלימות, ניתן לזהות חריגות ספציפיות או אזורים של אנופלואידיות.

סימון פלורסנטי

כדי לנתח את ההשלמה של מולקולת DNA (או RNA) הכלאה, נעשה שימוש בבדיקות גנטיות (או בדיקות DNA) מיוחדות, אשר, כמובן, גם מעט מן המשותף עם שמותיהם המשמשים, למשל, בניתוח.

בדיקות גנטיות מסונתזות ומסומנות במיוחד של DNA חד-גדילי (פחות נפוץ RNA) עם תכונות משלימות קבועות מראש. כשהכלאה, הם מתמזגים עם שברים גנטיים מסוימים, ובכך מאשרים את ההשלמה שלהם. מיקומם של הגשושיות במולקולה המוכלאה מעיד על המבנה התקין או הפגום של החומר הכרומוזומלי המקורי שממנו מורכב "מבנה מלאכותי" זה.

בדיקות גנטיות מסומנות, במיוחד, בחומרים זוהרים (פלורסנטים), מה שהופך אותם לנראים מתחת לעדשת מיקרוסקופ פלואורסצנטי מיוחד.

השימוש בצבעים שונים עבור מספר בדיקות מאפשר ניתוח בו זמנית של מבנים גנטיים שונים, למשל, לזהות אזורים של כרומוזומים עם שני גנים המונחים זה על זה וחריגות אחרות.

נכון לעכשיו, בניתוח יחיד, בדיקות גנטיות מסומנות בחמישה עד שישה צבעים שונים, לפעמים אפילו שבעה.

In-situ פירושו "בבית"

טכניקת ההכלאה המקורית הייתה מסורבלת. ה-DNA המופק עבר דנטורציה במאגרים תרמיים מיוחדים ועורבב בצנטריפוגה עם שברים דנטורטיים אחרים. הכלאה בוצעה גם במעבדה, "בכלי כימי".

הטכנולוגיה המודרנית מאפשרת לבצע ניתוחים במקום, כלומר "במקום", "בבית", במבנים הגנטיים המקוריים, ולא בתכשירים שנעשו במעבדה. מטרות המחקר היו גרעיני התא עצמם (שחולצו במהלך ביופסיה של גופים קוטביים, בלסטומרים ותאי שטח של הבלסטוציסט).

התבוננות בחומר הגנטי ישירות בגרעיני התא מאיצה את התהליך, והופכת אותו ל"נקי" יותר, ללא השפעות ונזקים חיצוניים, שאינם נכללים בייצור תרופות מעבדה.

עם זאת, ישנן בעיות המצביעות על גבולות בלתי עבירים השיטה הזאת. הכלאה בודדת לא יכולה "לכסות" את כל מערך הכרומוזומים בתאים. בדרך כלל נדרשות שתיים או שלוש הכלאות עוקבות, המאפשרות מחקר של 12-15 זוגות כרומוזומים (ויש 23 מהם בבני אדם). היכולת להכלאה נוספת של שרשראות DNA פוחתת בהדרגה לאחר כל הכלאה מחדש. זה לא מאפשר לבצע הכלאה "כמה פעמים הרצוי" לצורך ניתוח ממצה של אותו חומר גנטי.

שיטות פולשניות של אבחון טרום לידתי מאפשרות לא רק להסתכל אל העתיד ולחזות באופן אמין אם התינוק שטרם נולד יתמודד עם מחלות הקשורות למומים תוך רחמיים, אלא גם לברר את הטבע והגורמים לפתולוגיות מולדות.

עם זאת, כל מידע הוא בעל ערך רק אם הוא מגיע בזמן. אם אנחנו מדברים עללגבי מצב התפתחות העובר, מהירות השגת תוצאות הבדיקה הופכת חשובה ביותר.

לכן, שיטת FISH, המאפשרת לנו להעריך את נוכחותן של החריגות ההתפתחותיות השכיחות ביותר בעובר ככל האפשר. זמן קצר, מבוקש מאוד באבחון גנטי.

FISH הוא קיצור המפענח את מהות הטכנולוגיה לאיתור הפרעות כרומוזומליות - היברידית פלואורסצנטי באתרו - הכלאה פלואורסצנטית בסביבה "ביתית".

טכניקה זו, שהוצעה בסוף שנות ה-70 של המאה הקודמת על ידי ג'יי גול ומ.-ל. Pardew, מבוסס על האפשרות לשחזר את רצף שברי חומצות הגרעין (DNA או RNA) לאחר הדנטורציה שלהם.

המחברים פיתחו שיטה המאפשרת, באמצעות הכלאה באתרו של בדיקות DNA מסומנות (probes) שנוצרו באופן מלאכותי וחומר ציטוגנטי שנלקח לניתוח, לזהות כמותי ו סטיות איכותיותכרומוזומים מעניינים.

בסוף המאה הקודמת, לאחר שימוש מוצלח בצבעים פלואורסצנטיים לצביעה של בדיקות DNA, קיבלה שיטת FISH את שמה ומאז שופרה ושוונתה באופן אינטנסיבי.

טכניקות ניתוח מודרניות של FISH שואפות להבטיח שניתן לקבל את המידע המלא ביותר לניתוח החומר הגנטי הנבחר בהליך הכלאה אחד.

העובדה היא שפעם לאחר הכלאה, ניתן להעריך רק מספר מצומצם של כרומוזומים מאותו חומר ציטוגנטי. היכולת לעשות הכלאה מחדש של שרשראות DNA פוחתת מעת לעת.

לכן, כרגע באבחון גנטי, שיטת ההכלאה באתרו משמשת לרוב כדי לענות במהירות על שאלות לגבי האנופלואידיות הקיימות והשכיחות ביותר בכרומוזומים 21, 13, 18, כמו גם בכרומוזומי מין X, Y.

כל דגימות רקמה או תאים מתאימות לניתוח FISH.

באבחון טרום לידתי, אלה עשויים להיות דגימות דם, שפיכה או.

מהירות השגת התוצאות מובטחת על ידי העובדה שתאים המתקבלים מהחומר שנלקח לניתוח אינם צריכים להיות מטופלים במדיה תזונתית, תוך השגת חלוקתם למספר הנדרש, כמו ב דרך קלאסיתקריוטיפ.

החומר הנבחר עובר הכנה מיוחדת לקבלת תרחיף תאים טהור מרוכז. לאחר מכן, תהליך הדנטורציה של דגימת ה-DNA וה-DNA המקורי של הדגימה הנחקרת מתבצע למצב חד-גדילי ותהליך הכלאה, במהלכו מודגרים בדיקות ה-DNA הצבעוניות עם ה-DNA של הדגימה.

כך ממחישים את הכרומוזומים הרצויים (הצבעוניים) בתא, מוערכים מספרם, מבנה המבנים הגנטיים וכו'. העינית של מיקרוסקופ פלואורסצנטי מיוחד מאפשרת לבחון את שרשראות ה-DNA הזוהרות.

נכון לעכשיו, שיטת FISH נמצאת בשימוש נרחב למטרות אבחון לזיהוי מחלות גנטיות, סטיות כרומוזומליות ברפואת הרבייה, אונקולוגיה, המטולוגיה, דוסימטריה ביולוגית וכו'.

כיצד משתמשים באבחון FISH של העובר?

בתחום רפואת הרבייה נעשה שימוש בכל השלבים בשיטת FISH, כאחת משיטות האבחון הציטוגנטי המולקולרי.

• זוג.

כדי לקבוע את הקריוטיפ של הורים עתידיים, זה מתבצע פעם אחת, מכיוון שהגנום האנושי נשאר ללא שינוי לאורך כל החיים.

קריוטיפ של זוג לפני הריון יעזור לזהות האם ההורים הם נשאים של פתולוגיות גנטיות שעוברות בתורשה, כולל נסתרות. ו מצב כלליהגנום של האם והאב לעתיד, מה שיכול להשפיע על הצלחת הריון ונשיאת הריון עד תום.

אבחון באמצעות שיטת FISH במקרה זה פועל לעתים קרובות כמו בחינה נוספתלקריוטיפינג קלאסי, בעת זיהוי פתולוגיות כרומוזומליות בחומר הבדיקה (דם ורידי של ההורים), אם יש חשד לפסיפס.

בדיקה נוספת בשיטת FISH תאשר או תפריך באופן מהימן את הימצאותה של חשד לאנומליה בתאי ההורה העתידי.

• מחקר של שפיכה.

מיועד לקשיי רבייה בזוג עקב "הגורם הגברי". ניתוח זרע בשיטת FISH יאפשר לך להעריך את רמת החריגה סט כרומוזומיםזרע, וגם לקבוע אם גבר הוא נשא של מחלות גנטיות הקשורות למין.

אם לאחר מכן בני הזוג יפנו להתעברות באמצעות IVF, ניתוח FISH של השפיכה יאפשר לבחור את הזרע האיכותי ביותר להפרות הביצית.

• עם IVF.

לאבחון גנטי טרום השרשה (PGD). על סמך תוצאות מחקרים על הקריוטיפ של ההורים, נקבעות סטיות כרומוזומליות וגנטיות אפשריות שיכולות להיות מועברות לעובר.

הודות ליכולות האבחון של FISH, ניתן לבצע מחקר על הבריאות הגנטית של העוברים המתקבלים תוך מספר שעות לפני ההעברה לחלל הרחם על מנת להבטיח הריון עם עובר בריא ידוע.

בנוסף, היכולות של PGD מאפשרות לקבוע את מין העוברים, ולכן, "לסדר" את מין הילד שטרם נולד, במידת הצורך.

• במהלך ההריון.

באבחון טרום לידתי: אנליזה של תאי עובר המתקבלים באמצעות דגימת דליות כוריוניות, בדיקת מי שפיר או קורדוקנטה בשיטת FISH מוצעת לרוב על ידי מרכזים רפואיים בנוסף לקלאסי מחקר גנטיתאים עובריים (קריוטיפינג).

שיטה זו הכרחית כאשר יש צורך לקבל תשובה מהירה לגבי הימצאות הפגמים הכרומוזומליים הנפוצים ביותר בעובר: טריזומיה בכרומוזומים 21, 18, 13, סטיות בכרומוזומים X ו-Y, לעיתים גם אנופלואידיות בכרומוזומים 14 (או 17), 15, 16.

יתרונות ניתוח FISH

ביצוע ניתוח גנטי בשיטת FISH, למרות שהיא נותרה כיום שיטת עזר לאבחון פתולוגיות כרומוזומליות, כדאיות היישום שלה נקבעת על ידי יתרונות שאין להכחישה:

• מהירות השגת התוצאות לגבי הכרומוזומים שנבדקו היא תוך מספר שעות - לא יותר מ-72.

זה עשוי להיות חשוב אם גורל ההריון תלוי באבחון של גנטיקאים;

• רגישות גבוהה ואמינות של שיטת FISH - ניתוח מוצלח אפשרי על כמות זניחה של ביולוגי - מספיק תא אחד, טעות התוצאות היא לא יותר מ-0.5%.

זה עשוי להיות חשוב כאשר מספר התאים בדגימה המקורית מוגבל, למשל, כאשר החלוקה שלהם גרועה.

• אפשרות לבצע אבחון בשיטת FISH בכל שלב של ההריון (החל מהשבוע ה-7) ובאמצעות כל דגימה ביולוגית: שברי כוריון, מי שפיר, דם עוברי וכו'.

היכן ניתן לבצע אבחנה בשיטת FISH?

במוסקבה, שיטת FISH לאבחון טרום לידתי של הפרעות כרומוזומליות של העובר משמשת במרכזים הרפואיים הבאים:

ככלל, מרפאות מציעות שירותי אבחון FISH כחלק מקריוטיפ מלא של העובר באמצעות התערבות פולשנית בתוספת תשלום. וככלל, ההורים לעתיד מסכימים לשלם תוספת, כי הודות לשיטת FISH, תוך מספר ימים בלבד אתה יכול לגלות את הדברים החשובים ביותר על התינוק שלך