Coombsin testi– määritys pintaan kiinnittyneiden tai plasmaan liuenneiden vasta-aineiden havaitsemiseksi. Sitä käytetään immunisoinnin ja punasolujen vasta-aineiden havaitsemiseen. Toinen otsikko antiglobuliinitesti. Se voi olla suora tai epäsuora.
klo suora antiglobuliinitesti havaitsee punasolujen pinnalle kiinnittyneet vasta-aineet. Se suoritetaan epäiltäessä muita autoimmuunisairauksia, lääkkeiden ottamisen jälkeen (metyylidopa, penisilliini, kiniini) jne.
Punasolut on herkistetty in vivo - vasta-aineet ovat jo tiukasti kiinnittyneet niihin, ja antiglobuliiniseerumin (anti-IgG) lisäys saa herkistyneet solut tarttumaan yhteen, mikä näkyy paljaalla silmällä.
Epäsuora Coombsin testi havaitsee erytrosyyttivasta-aineita veriplasmassa, se suoritetaan ennen verensiirtoa ja sen aikana.
Anti-erytrosyyttivasta-aineet ovat autovasta-aineiden tyyppi, ts. vasta-aineita omia kudoksiasi vastaan. Autovasta-aine syntyy, kun immuunijärjestelmä reagoi epänormaalisti tiettyihin lääkkeisiin, kuten suuriin penisilliiniannoksiin.
Niiden pinnalla olevat punaiset verisolut sisältävät erilaisia kemialliset rakenteet(glykolipidit, sakkaridit, glykoproteiinit ja proteiinit), lääketieteessä kutsutaan antigeeneiksi. Ihminen perii vanhemmiltaan tietyn antigeenikartan jokaisessa punasolussa.
Antigeenit yhdistetään ryhmiin ja sitten veri jaetaan useisiin ryhmiin - AB0-, Rh-, Kell-, Lewis-, Kidd-, Duffy-järjestelmän mukaan. Tunnetuimmat ja merkittävimmät lääkärin työssä ovat AB0 ja Rh-tekijä (Rh).
AB0 järjestelmä
Henkilön Rh-status määräytyy näiden antigeenien läsnäolon perusteella. Erityisen tärkeä erytrosyyttien antigeeni on antigeeni D. Jos se on läsnä, he puhuvat siitä Rh-positiivinen veren RhD, ja jos sitä ei ole - oh Rh negatiivinen Rhd.
Jos vastaava vasta-aine kiinnittyy erytrosyyttiantigeeneihin, punasolu tuhoutuu - hemolyysi.
Indikaatioita
Tärkein indikaatio suoraanantiglobuliinitesti- hemolyyttisen anemian epäily. Se suoritetaan useimmiten primaaristen autoimmuunisairauksien hoitoon. hemolyyttinen anemia, hemolyysi reumaattisissa, kasvain-, tartuntataudeissa, lääkkeiden aiheuttama hemolyysi.
Jos anemia ilmaantuu useita päiviä tai kuukausia verensiirron jälkeen tai vastasyntyneen pitkittyneen keltaisuuden vuoksi, suoritetaan myös suora Coombs-testi.
Epäsuoratehdään antiglobuliinitesti ennen verensiirtoa ja Rh-negatiivisen naisen raskauden aikana.
Autoimmuuni hemolyyttinen anemia
Autoimmuuni hemolyyttinen anemia (primaarinen)– klassinen autoimmuunisairaus, jonka syitä ei tunneta. Vuorovaikutus immuunijärjestelmän sisällä häiriintyy, mikä johtaa siihen, että omat punasolut koetaan vieraiksi. Imusolmukkeissa syntetisoituu IgG-luokan (reagoivat t 37 °C:ssa) ja/tai IgM:n (t 40 °C:ssa) vasta-aineita, jotka punasolun pintaan kiinnittyessään laukaisevat useita entsyymejä ( komplementtijärjestelmä) ja "rei'ittää" erytrosyytin seinämän, mikä johtaa sen tuhoutumiseen - hemolyysiin.
Ensimmäiset oireet johtuvat sekä punasolujen tuhoutumisesta että hemoglobiinin laskusta. Heidän joukossa:
- väsymys, yleinen heikkous, ärtyneisyys
- hengenahdistus
- vatsa- ja rintakipu, pahoinvointi
- tumma virtsan väri
- selkäkipu
- ihon ja limakalvojen ikterinen värimuutos
- punasolujen määrän lasku ja
Suoraan positiivinen tulos Coombsin testit 100% vahvistaa autoimmuuni hemolyyttisen anemian diagnoosin ja osoittaa sen autoimmuuniperäisen alkuperän. Samaan aikaan negatiivinen tulos ei mahdollista diagnoosin poistamista.
Toissijainen hemolyyttinen anemia
Toissijainen autoimmuuni hemolyyttinen anemia ja positiivinen testi Coombs voi ilmetä seuraavien sairauksien yhteydessä:
- Evansin oireyhtymä
- keuhkokuume-infektio
Näiden sairauksien positiivinen antiglobuliinitesti on yksi oireista, ei diagnoosikriteeri.
Vastasyntyneen hemolyyttinen sairaus
Syy hemolyyttinen sairaus vastasyntyneet -äidin ja sikiön veriryhmän yhteensopimattomuus, useimmissa tapauksissa Rh-järjestelmän mukaan, yksittäisissä tapauksissa - AB0-järjestelmän mukaan, kasuistisesti - muiden antigeenien mukaan.
Rh-konflikti kehittyy, jos Rh-negatiivisen naisen sikiö perii Rh-positiivista verta isältä.
Sairaus kehittyy vastasyntyneellä vain, jos äidillä on jo kehittynyt vasta-aineita vastaaville antigeeneille, mikä tapahtuu aiempien raskauksien, aborttien ja yhteensopimattomien verensiirtojen jälkeen. Suurin osa yleinen syy laukaisee vasta-aineiden synteesin erytrosyyttikalvon antigeeneille - synnytys (sikiön ja äidin verenvuoto). Ensimmäinen synnytys tapahtuu yleensä ilman komplikaatioita, mutta myöhemmät ovat täynnä vastasyntyneen hemolyyttistä sairautta ensimmäisinä syntymän jälkeisinä päivinä.
Vastasyntyneen hemolyyttisen taudin oireet:
- ihon keltaisuus
- , ja limakalvoille
- suurentunut maksa ja perna
- hengitysongelmia
- koko kehon turvotus
- keskushermoston kiihtyminen ja asteittainen lamaantuminen
Anemia verensiirron jälkeen
Epäsuora Coombsin testi suoritetaan ennen verensiirtoa yhteensopivuuden arvioimiseksi, ja suora Coombs-testi - sen jälkeen, jos epäillään verensiirron jälkeistä hemolyysiä, ts. oireiden, kuten kuumeen, kastelun, läsnä ollessa (lue alla). Analyysin tarkoituksena on tunnistaa verensiirron saaneiden punasolujen vasta-aineet, jotka ovat sitoutuneet vastaanottajan punasoluihin ja aiheuttavat verensiirron jälkeisen hemolyysin sekä luovuttajan punasolujen ennenaikaista poistumista verenkierrosta. vastaanottaja (se, joka sai veren).
Oireet:
- kehon lämpötilan nousu
- ihottuma
- selkäkipu
- punainen
- pahoinvointi
- huimaus
Dekoodaus
On syytä muistaa, että suorien ja epäsuorien antiglobuliinitestien tulkitsemisen perussäännöt ovat samat. Ainoa ero on vasta-aineiden sijainti veressä tai punasoluissa.
- Jos suora Coombsin testi on negatiivinen– tämä tarkoittaa, että vasta-aine ei "istu" punasolujen pinnalle ja oireiden syytä tulee selvittää tarkemmin ja tehdä epäsuora Coombs-testi
- jos Coombs-testin positiivinen tulos havaitaan verensiirron, infektioiden, lääkkeiden jälkeen - positiivisuus kestää jopa 3 kuukautta (punasolujen elinikä on 120 päivää - 3 kuukautta)
- positiivinen antiglobuliinitestitulos autoimmuunisairaudelle kestää kuukausia tai jopa vuosia
Normi
- suora Coombsin testi - negatiivinen
- epäsuora Coombsin testi - negatiivinen
Laadullisesti positiivinen tulos mitataan plussojen lukumääränä yhdestä neljään (+, ++, +++, ++++) ja kvantitatiivisesti digitaalisessa muodossa - 1:16, 1:256 jne.
Joo. Lääkärin tulee ehdottomasti tietää, että olet saanut verensiirron, koska se vaikuttaa nyt testitulosten oikeaan tulkintaan. Kun saat jonkun toisen (tosin monta kertaa testattua) verta, on aina mahdollista, että kehosi kehittää vasta-aineita siirrettyä verta vastaan. Nämä vasta-aineet tarjoavat huono vaikutus terveydentilasta. Seuraavia verensiirtoja varten lääkärin on tiedettävä, että olet jo saanut verensiirron, mikä tarkoittaa, että vasta-ainesynteesille on aikaa. Raskaana oleville naisille tämä tieto on vielä tärkeämpää.
3. Jos äidin ja lapsen Rh-tekijä ei vastaa toisiaan, ovatko kaikki lapset sairaita?
Riippuu siitä, onko lapsi Rh-positiivinen vai negatiivinen (RhD). Veriryhmien I, II, III ja IV kantajat voivat olla joko Rh-positiivisia tai negatiivisia. Tilanteessa, jossa äiti on Rh-negatiivinen ja lapsi Rh-positiivinen, vasta-aineita muodostuu jo ensimmäisen raskauden yhteydessä, mutta vasta ensimmäisen synnytyksen (tai raskauden keskeytyksen) jälkeen on suora kosketus äidin ja äidin veren välillä. lapsi. Vasta-aineiden hemolyyttinen vaikutus toteutuu vasta toisen ja sitä seuraavien synnytysten aikana, mikä johtaa vastasyntyneen hemolyyttiseen sairauteen.
Jokainen nainen, jolla on negatiivinen Rh-tekijä, tulee tutkia huolellisesti raskauden aikana ja synnytyksen jälkeen ennaltaehkäisevä hoito estämään vasta-aineiden ilmaantumista ja lisäkomplikaatioita.
4. Onko raskauden aikana välttämätöntä tietää mieheni veriryhmä ennen Coombs-testin tekemistä?
Sinun ei tarvitse vain tietää, vaan myös tarkistaa lapsen biologisen isän veriryhmä raskauden aikana.
Data
- ehdotettiin ensimmäisen kerran Cambridgessä vuonna 1945
- herkkyyskynnys - vähintään 300 kiinteää vasta-ainemolekyyliä yhdessä punasolussa
- hemolyysin laukaisevien vasta-aineiden määrä - yksilöllisesti jokaiselle henkilölle (16-30 - 300)
- muiden hemolyyttisen anemian laboratorioindikaattoreiden (hemoglobiini, bilirubiini, retikulosyytit) dynamiikka saattaa normalisoitua ja Coombsin testi pysyy samalla tasolla
Coombsin testiä muokkasi viimeksi: 16. maaliskuuta 2018, tekijä Maria Bodyan
Coombs, Morant, Reis ehdotti vuonna 1945 epätäydellisten punasoluvasta-aineiden havaitsemiseen suunniteltua antiglobuliinitestiä, ja sitä kutsuttiin myöhemmin Coombs-testiksi. ydin tätä menetelmää on se, että ihmisen immunoglobuliinien vasta-aineita sisältävä antiglobuliiniseerumi, kun se reagoi epätäydellisillä vasta-aineilla herkistyneiden punasolujen kanssa, johtaa niiden agglutinaatioon.
Sen mukaan, ovatko vasta-aineet kiinnittyneet punasolujen pinnalle vai ovatko ne vapaassa tilassa veriplasmassa, käytetään suoraa vai epäsuoraa Coombsin testiä.
Suora Coombsin testi suoritetaan tapauksissa, joissa on syytä olettaa, että tutkittavat punasolut ovat jo olemassa in vivo on herkistetty sopivilla vasta-aineilla, ts. reaktion ensimmäinen vaihe - vasta-aineiden kiinnittyminen punasolujen pinnalle - tapahtui elimistössä ja myöhempi antiglobuliiniseerumin lisäys aiheuttaa herkistyneiden solujen agglutinaation.
Epäsuoralla Coombs-testillä havaitaan testiseerumissa olevat epätäydelliset vasta-aineet. Tässä tapauksessa reaktio tapahtuu kahdessa vaiheessa. Ensimmäinen vaihe on koeerytrosyyttien inkubointi testiseerumin kanssa, jonka aikana testiseeruminäytteen sisältämät vasta-aineet kiinnittyvät punasolujen pinnalle. Toinen vaihe on antiglobuliiniseerumin lisääminen.
Tähän asti Coombsin testiä on käytetty laajalti laboratoriokäytännössä immunopatologisten tilojen diagnosoinnissa, erityisesti autoimmuuni hemolyyttisessä anemiassa, jolle on tunnusomaista punasolujen tuhoutuminen solukalvon sitoutumisen vuoksi vasta-aineisiin ja (tai) komplementtijärjestelmä. Sitä käytetään Ig G:n havaitsemiseen punasolukalvolla (yleensä Ig G1 ja Ig G3), joka voi aktivoida komplementin ja joskus komplementin (C3d). Kuitenkin taudin akuutissa jaksossa punasolujen tuhoutumisesta johtuen suuri määrä vasta-aineita, joilla on hemolyyttinen kriisi, sekä riittämätön määrä vasta-aineita taudin kroonisen kulun aikana, negatiivinen suora Coombs-testi voidaan havaita.
On korostettava, että epäsuora Coombsin testi säilyy paras tapa verensiirtoväliaineen yksilöllinen valinta, koska sen avulla voit määrittää tarkasti luovuttajan ja vastaanottajan yksilöllisen yhteensopivuuden erytrosyyttiantigeenien perusteella.
Ylimääräistä suoraa antiglobuliinitestiä autovasta-aineiden toteamiseksi suositellaan tutkittaessa kaikkia elin- ja kudossaajia ennen siirtoa ja hematopoieettisten kantasolujen vastaanottajia myös siirron jälkeen.
Immunohematologian ja transfusiologian lisäksi antiglobuliinitestejä käytetään laajalti useiden patologisten tilojen diagnosoinnissa: hematologiset sairaudet, mukaan lukien lymfoproliferatiiviset sairaudet, systeemiset sairaudet sidekudos, Sjogrenin tauti, krooninen aktiivinen hepatiitti jne.
Coombsin testejä käytetään aktiivisesti lääketieteellisessä genetiikassa ja oikeuslääketieteessä pinta-erytrosyyttiantigeenien määrittämiseen.
Coombsin testi on melko työvoimavaltainen tutkimusmenetelmä, joka vaatii erityistä huolellisuutta sen toteuttamisessa. Sitä käytettäessä on joitain vaikeuksia, jotka liittyvät erityisesti heikosti positiivisten reaktioiden tulkintaan. Tiedetään, että väärät heikosti positiiviset tai negatiiviset reaktiot Coombs-testeissä voivat johtua punasolujen riittämättömästä tehokkaasta pesusta, antiglobuliinireagenssin neutraloinnista seerumijäämien vaikutuksesta sekä kosketuksesta ei-rasvaiseen pintaan, jolla antiglobuliini voidaan korjata, jolloin se menettää toimintansa. Toinen Coombsin testin haittapuoli on antiglobuliinireagenssin epästabiilisuus, jonka valmistuksessa ja varastoinnissa on tiettyjä ominaisuuksia, mikä vaikeuttaa myös hemagglutinaatioreaktion kvantifiointia antiglobuliiniseerumilla.
Lisäksi A. Holburnin, D. Voakin et ai. , osoitti, että väärien negatiivisten tulosten syy voi olla liiallinen ravistelu, kun punasolususpensiota suspendoidaan uudelleen. Virheelliset tulokset antiglobuliinitestejä suoritettaessa voivat johtua myös siitä, että antiglobuliinireagenssissa on sekoitus anti-komplementaarisia vasta-aineita, erityisesti C3d-, C3c-, C4c- ja C4d-komplementtikomponentteja, jotka adsorboituvat testaa punasoluja inkubaation aikana ja luo vaikutelma positiivisesta tuloksesta.
Nämä haitat voidaan helposti poistaa pesemällä tutkittavat näytteet perusteellisesti ja seuraamalla reaktio-olosuhteita.
Viime vuosikymmenen aikana alhaista ionivahvuutta isotonista suolaliuosta (LISS) on käytetty vähentämään epäsuoran Coombs-testin suorittamiseen tarvittavaa aikaa ja lisäämään sen herkkyyttä.
Antiglobuliinitestien kiistaton etu useiden kirjoittajien mukaan on niiden korkea herkkyys, joka ylittää merkittävästi niiden resoluution. vaihtoehtoisia menetelmiä testit, joita käytetään ei-agglutinoituvien vasta-aineiden havaitsemiseen.
Vertailimme veriseerumien tutkimismenetelmien erottelukykyä epätäydellisten vasta-aineiden esiintymisen suhteen käyttämällä polyglusiinia, gelatiinia ja antiglobuliiniseerumia. Tutkimuksen aikana epätäydellisten anti-D-vasta-aineiden tiittereitä tarkkailtiin 140 isoimmuuniluovuttajilta peräisin olevasta veriseeruminäytteestä käyttämällä gelatiini-, polyglusiini- ja epäsuoria antiglobuliinitestejä. Näiden menetelmien formulointi suoritettiin yleisesti hyväksyttyjen menetelmien mukaisesti.
Todettiin, että menetelmät erytrosyyttien herkistymisen havaitsemiseksi anti-D-vasta-aineilla on erottelukykynsä suhteen järjestetty seuraavasti: herkin on epäsuora Coombs-testi, sitten gelatiinitesti ja vähiten informatiivinen on polyglusiinitesti. Tässä koesarjassa saadut tulokset vastaavat täysin kirjallisuuden tietoja, minkä perusteella voimme päätellä sen korkeatasoinen Coombsin testien herkkyys, jonka avulla on mahdollista tunnistaa suurella varmuudella sellaisten punasolujen vastaisten vasta-aineiden esiintyminen kehossa, jotka eivät aiheuta punasolujen agglutinaatiota.
Käytännössä Coombs-testejä suoritettaessa on kuitenkin tapauksia, joissa epätäydellisiä vasta-aineita ei havaita, vaikka sairauden kliininen kuva tai aikaisempi immunisaatio viittaa niiden mahdolliseen esiintymiseen. Tällaisissa tapauksissa voidaan olettaa, että vasta-aineiden määrä ei ole riittävä, jotta ne saostuvat antiglobuliiniseerumin vasta-aineilla.
Tämän johtopäätöksen vahvisti oma kokeemme, jossa solujen analyyttisen mikroelektroforeesin menetelmällä todettiin anti-D-vasta-aineiden läsnäolo testipunasoluissa, joita ei havaittu epäsuorassa Coombs-testissä. Tässä koesarjassa antiglobuliiniseerumia lisättiin erytrosyytteihin, joita oli esi-inkuboitu immunisoitujen luovuttajien verestä saatujen seerumien kanssa vasta-ainegeneesin aikana, ts. aikana, jolloin niistä ei havaittu vasta-aineita tunnetuilla menetelmillä, mukaan lukien Coombsin testi.
Suoritetuissa tutkimuksissa saatiin tilastollista näyttöä epätäydellisten vasta-aineiden esiintymisestä punasolujen pinnalla. merkittävä muutos herkistyneiden punasolujen elektroforeettisen liikkuvuuden suuruus antiglobuliiniseerumin lisäämisen jälkeen. On huomattava, että anti-D-vasta-aineet määritettiin myöhemmin kaikista immunisoiduista luovuttajista epäsuorassa Coombs-testissä veriseerumissa.
Gillerand et ai. osoitti myös, että antiglobuliinitesteille on ominaista tietty herkkyyskynnys: positiivinen tulos havaitaan vain, kun yhden punasolun pinnalle on rekisteröity vähintään 500 Ig G -molekyyliä.
Lisäksi kirjallisuudessa on todisteita siitä, että Coombsin testin mahdollinen negatiivinen tulos voi liittyä punasoluja herkistäviä vasta-aineiden alhaiseen affiniteettiin, minkä seurauksena ne eluoituvat helposti punasolujen pinnalta pesuprosessin aikana. .
Edellä esitetyn perusteella voimme päätellä, että joissakin tapauksissa Coombsin testin negatiivinen tulos ei vielä ole todiste punasolujen pinnalle kiinnittyneiden vasta-aineiden puuttumisesta.
Tiedetään, että Coombsin reaktiot ovat erittäin spesifisiä ja voivat havaita useimmat epätäydelliset vasta-aineet. Kuten jotkut kokeelliset tiedot osoittavat, antiglobuliinitestit voivat kuitenkin olla positiivisia myös ei-immunologisissa olosuhteissa. E. Muirhead et ai. Toisena päivänä fenyylihydratsiinin antamisen jälkeen koirille havaittiin positiivinen Coombs-testi. Tällainen positiivisen reaktion nopea ilmaantuminen vastustaa sen immunologista luonnetta ja pikemminkin liittyy proteiinin epäspesifiseen adsorptioon erytrosyyttien pinnalle.
M. Williams et ai. havaitsi, että klavulaanihappo voi myös aiheuttaa positiivisen reaktion, joka tekijöiden mukaan liittyy plasman proteiinien epäspesifiseen adsorptioon erytrosyyttien pinnalla. Samanlainen vaikutus havaittiin kefalosporiiniantibioottihoidon aikana.
Yllä olevien tutkimusten kirjoittajat korostavat Coombs-testien positiivisten tulosten ei-immunologista luonnetta ja väittävät, että nämä aineet voivat muuttaa punasolujen kalvoja, minkä seurauksena punasolut voivat adsorboida proteiineja (erityisesti albumiini), joita on normaalisti veriplasmassa ja joilla ei ole vasta-aineominaisuuksia. Lisäksi on mahdollista, että solun pintaan adsorboitunut ksenobiootti toimii linkkinä solukalvon ja plasman proteiinien välillä.
Antiglobuliinitestien tulosten tulkitsemiseksi oikein on otettava huomioon myös perifeerisen veren nuorten ja kypsien punasolujen välinen määrällinen suhde. Havaittiin, että kehosta eristetyt retikulosyytit tehostetun erytroniregeneraation aikana voivat agglutinoitua antiglobuliiniseerumilla.
Positiivinen suora antiglobuliinitestitulos tapahtuu eri kanssa patologiset tilat, joihin liittyy immuunijärjestelmän häiriöt, tulehdusprosessit, jotka johtavat eri spesifisyyksien vasta-aineiden epäspesifiseen adsorptioon erytrosyyttien kalvoille. Tämä viittaa siihen, että Ig G -molekyylit eivät ole vuorovaikutuksessa erytrosyyttien spesifisten antigeenien kanssa, vaan ne ovat vain kiinnittyneitä tutkittavien solujen pinnalle.
On otettava huomioon, että suoritettaessa Coombs-testiä sairauksissa, joille on ominaista dysproteinemian kehittyminen tai paraproteiinien esiintyminen, positiivinen tulos johtuu erytrosyyttien pinnalla olevista proteiineista, joilla ei ole vasta-aineita, mikä osoittaa myös antiglobuliinitestien spesifisyyden puutteen niiden avulla havaitun proteiinin luonteen suhteen.
Siten, kuten monet tutkimukset ovat osoittaneet, suorien ja epäsuorien antiglobuliinitestien positiiviset tulokset eivät ole ehdoton todiste vasta-aineiden esiintymisestä, koska positiivisia reaktioita voidaan havaita myös erilaisissa patologisissa tiloissa, jotka eivät liity kehon isosensibilisaatioon tai autosensibilisaatioon. Siksi vain useiden immunoserologisten menetelmien tulosten vertailu kliininen kuva sairauksien avulla voimme täysin arvioida kehittyvää patologista prosessia.
Positiivinen epäsuora antiglobuliinitesti negatiivisen suoran testin kanssa osoittaa yleensä, että testiseerumissa on vapaita allovasta-aineita, jotka liittyvät aikaisempiin verensiirtoihin tai raskauksiin.
Coombs-testi on usein positiivinen kohtauksellisen yöllisen hemoglobinurian pahenemisen aikana; positiivinen Coombsin testi anti-C3:lla ja anti-C3dg:llä on kylmäagglutiniinitaudin merkki.
Tapauksissa, joissa on suuri riski saada vastasyntyneen hemolyyttinen sairaus, hyvin tärkeä Diagnoosin tekemiseksi (useimmiten raskauden aikana) ja tarvittaessa vasta-ainetiitterin ulkonäön ja muutoksen dynaamiseen seurantaan on suorien ja epäsuorien antiglobuliinitestien tulokset. Useimmiten vastasyntyneiden hemolyyttinen sairaus liittyy äidin ja sikiön yhteensopimattomuuteen antigeenin D, harvemmin ABO-järjestelmän antigeenien ja vielä harvemmin muiden antigeenien (C, c, K jne.) kanssa. Tämän prosessin aikana muodostuu vasta-aineita La, joka on pääsääntöisesti Ig G -luokan epätäydellisiä vasta-aineita, havaitaan selvästi epäsuorassa antiglobuliinitestissä. Tämän taudin kohdalla tunnistettujen vasta-aineiden oikein määritetyllä tiitterillä ja spesifisyydellä on suuri merkitys, koska raskaana olevan naisen veren punasolujen vastaisten vasta-aineiden tason välillä on tietty korrelaatio. mahdollinen ennuste hemolyyttisen taudin vakavuus.
Epäsuora Coombs-testi on myös tarpeen hoitokäytäntö turvallisen verensiirtohoidon varmistamiseksi. Sen toteuttaminen on pakollinen osa luovuttajien ja erilaisten vastaanottajaryhmien immunohematologisia tutkimuksia sekä kaikkien potilaiden rutiinitutkimuksia hoitolaitoksissa, jotka saattavat tarvita veren ja sen komponenttien siirtoa.
Epäsuoraa antiglobuliinitestiä käytetään seuraavissa tapauksissa:
Rh-kuuluvuuden (antigeeni D) tarkempaan määritykseen, jos Rh-tekijän määrittämisessä muilla menetelmillä on epäselviä tuloksia (polyglusiini, gelatiini jne.);
Tunnistaa heikot punasoluantigeenit (Kell-, Duffy-, Kidd-, Lewis- jne. järjestelmät) ja vasta-aineet näille antigeeneille;
Alloimmuunisten punasolujen vasta-aineiden havaitsemiseen ja tunnistamiseen, mukaan lukien vasta-aineet, jotka aiheuttavat hemolyyttisiä verensiirron jälkeisiä reaktioita;
Määrittää AB0-järjestelmän immuunivasta-aineiden läsnäolon verensiirron hemolyyttisten komplikaatioiden aikana;
Yhteensopivuustestiksi siirretyn veren ja sen komponenttien yksilölliseen valintaan.
Näin ollen Coombsin testi on tärkeä diagnostinen testi, jota käytetään lääketieteen eri aloilla (hematologia, synnytys, reumatologia, transfusiologia, kliininen ja laboratoriodiagnostiikka jne.). Coombsin testin suorittamisen erityispiirteiden tuntemus auttaa lisäämään saatujen tulosten luotettavuutta ja myötävaikuttaa laboratoriotietojen oikeaan tulkintaan.
Kirjallisuus
1. Vasta-aineet. Menetelmät / toim. D. Katie. - M.: Mir, 1991.
2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadzhiev A.B.. // Anemian verensiirtohoito: oppikirja. käsikirja lääkäreille. - M.: Prakt. Medicine, 2005. - s. 105-106.
3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfusiologia. - 2006. - Nro 2. — s. 39—62.
4. Donskov S.I.// Rhesusjärjestelmän veriryhmät: teoria ja käytäntö. - M.: VINITI RAS, 2005. - P. 180-186, 195.
5.Immunoserologia (säädösasiakirjat) / comp. A.G. Bashlay, S.I. Donskov. - M.: VINITI RAS, 1998.
6.Verijärjestelmän tutkimus kliinisessä käytännössä / toim. G.I. Kozinets, V.A. Makarova. - M.: Triada-X, 1997.
7. Levin V.I. Erytrodiereesin ja erytropoieesin mekanismiin akuutin aikana posthemorraginen anemia: tekijän abstrakti. dis. ... cand. hunaja. Sci. - Minsk, 1968.
8. Ragimov A.A., Bayramalibeyli I.E.. // Anemian diagnosoinnin, ehkäisyn ja hoidon perusteet. - M.: GOU VUNMC MH RF, 2002. - S. 204-209.
9. Chumakova E.D.. // Todellisia ongelmia hematologia ja transfusiologia: Valko-Venäjän tasavallan VI:n hematologien ja transfusiologian kongressin esitys, Minsk, 24.-25.5.2007 / toim. A.I. Svirnovsky, M.P. Potapneva. - Minsk: Republikaanien tieteellinen ja käytännöllinen hematologian ja transfusiologian keskus, 2007. - S. 50.
10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lansetti. - 1945. - Voi. 2. - s. 15.
11. Freedman J. // J. Clin. Pathol. - 1979. - Voi. 32. - P. 1014-1018.
12. Holburn A.M.. Laadunvalvonta. Methods in Hematology/toim. I. Cavill. - Edinburgh: Churchill Livingstone, 1982. - Voi. 4. - s. 34-50.
13. Khan S.// CMAJ. - 2006. - Voi. 175, N 8. - P. 919.
14. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Voi. 63 (liite 7). - s. 719-721.
15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Voi. 63 (liite 7). — s. 716—718.
16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// Uusi Eng. J. Med. -1976. - Voi. 277. - s. 123-125.
17. Muirhead E.E., GrovesM., Brian S. // J. Lab. Clin. Med. -1954. - Voi. 44. - P. 902-903.
18. Rosse W.F.//Hosp. Prac. - 1995. - N 105.
19. Voak D., Downie D., MooreB. et ai. //Biotests Bull. - 1986. - Voi. 1. - s. 41-52.
20. Voak D., Haigh T., Downie D. et ai. Solunpesukoneet antiglobuliinitesteihin. Toistotestaus – uusi menetelmä, joka osoittaa yhden laajasti käytetyn koneen – Sorvall CW1-AF2:n – tehottomuuden: raportti DHSS Technical Branchille, helmikuu 1991.
21. Williams M.E., Thomas D., Harman C.P.. et ai. //Antimikrobiset aineet ja kemoterapia. -1985. - s. 125-127.
22. Zarandona J.M., Yazer M.H.. // CMAJ. - 2006. - Voi. 174, N 3. - P. 305-307.
Lääketieteen uutisia. - 2008. - Nro 3. - s. 33-36.
Huomio! Artikkeli on osoitettu erikoislääkäreille. Tämän artikkelin tai sen osien uudelleentulostaminen Internetissä ilman hyperlinkkiä lähteeseen katsotaan tekijänoikeusrikkomukseksi.
- tutkimus, joka auttaa määrittämään epätäydellisten punasolujen vasta-aineiden pitoisuuden veressä. Tämän antiglobuliinitestin avulla voit havaita vasta-aineita raskaana oleville naisille.
Lisäksi se mahdollistaa alkuvaiheet diagnosoida hemolyyttinen anemia vastasyntyneillä, joilla on Rh-konflikti. Tämä auttaa estämään normaalille verenmuodostukselle välttämättömien punasolujen tuhoutumisen. Tämän testin loi vuonna 1945 Robert Coombs, mistä syystä se sai nimensä.
Coombs-testi on monipuolinen testi, joka mahdollistaa hematopoieettisten häiriöiden oikea-aikaisen diagnosoinnin sekä aikuisilla että lapsilla.
Tällaisia testejä on seuraavanlaisia:
- Suora Coombsin testi– voit määrittää punasolujen pinnalla olevat vasta-aineet. Tyypillisesti tällainen tutkimus määrätään epäillylle hemolyysille, autoimmuuni hemolyyttiselle anemialle tai muille autoimmuunisairauksille. Lisäksi se suoritetaan sen jälkeen huumeterapia kiniiniin, penisilliiniin tai metyylidopaan perustuvia lääkkeitä tai verensiirron jälkeen. Tarkempien tulosten saamiseksi sinun on lopetettava lääkkeiden käyttö kokonaan vähintään 1 viikko ennen tutkimusta.
- Epäsuora Coombsin testi– testi, jota voidaan käyttää erytrosyyttien vastaisten vasta-aineiden havaitsemiseen plasmasta. Se suoritetaan yleensä raskauden aikana ja ennen verensiirtoa. Punasolujen vastaisia vasta-aineita ilmaantuu ihmisen vereen reaktiivisen immuunijärjestelmän aikana tai reaktiona tiettyihin lääkkeisiin. Tarkempaa tutkimusta varten otetaan useita näytteitä kerralla 2 tunnin välein.
Käyttöaiheet
Coombsin testi suoritetaan vain, jos on vakavia viitteitä. Tämä on kallis ja aikaa vievä tutkimus, joka on erityinen testi.
Tyypillisesti seuraavia tilanteita pidetään viitteinä sen toteuttamiselle:
- Verensiirron aikana. Testin avulla voit määrittää, juurtuuko vastaanottajan veri ihmiskehoon ja onko luovutus mahdollista. Tässä tapauksessa on tarpeen tutkia sekä luovuttajan että vastaanottajan aineisto. On tärkeää määrittää vasta-aineiden luonne, koska jos ne ovat yhteensopimattomia kehossa Rh-konfliktin taustalla, immuunijärjestelmää. Tämä johtaa kehitykseen vakavia sairauksia, ja sisään harvoissa tapauksissa jopa kuolema.
- Ennen kirurgiset toimenpiteet kun on olemassa verenhukan vaara. Tämä tehdään, jotta lääkäri voi välittömästi lisätä sopivaa verta kehon palauttamiseksi.
- Rh-herkistymisen havaitsemiseen. Reesus on erityinen antigeeni, jota esiintyy jokaisen naisen kehossa raskauden aikana. Jos äidillä on positiivinen Rh ja isällä negatiivinen tai päinvastoin, lapsella ei ole riippuvuutta - hän voi periä kenet tahansa. Jos lapsi saa äidiltä päinvastaisen reesuksen, herkistymisriski on suuri. Tälle ilmiölle on ominaista äidin ja lapsen veren sekoittuminen. Tämä voi tapahtua sekä raskauden että synnytyksen aikana.
Jos raskaana olevan naisen kehossa tapahtuu reesuskonflikti, äidin immuunijärjestelmä alkaa havaita hänen sikiönsä vieras kappale. Tämän vuoksi on suuri riski, että hän alkaa hyökätä häntä vastaan.
Tällaisten toimien seurauksena vauva voi kehittää vakavia patologioita. Useimmiten esiintyy erytroblastoosia - ilmiötä, jossa lapsen keho ei pysty tuottamaan riittävää määrää punasoluja.
Lisäksi Rh-konfliktin vuoksi sikiön kuolema voi tapahtua kohdussa tai heti syntymän jälkeen. Oikealla lähestymistavalla hoitoon tällaiset vakavat seuraukset voidaan helposti välttää.
Poikkeamat normista
klo positiivinen tulos Coombsin reaktion perusteella lääkäri päättelee, että veren seerumissa on vasta-aineita punasoluille. Tämä tarkoittaa, että luovuttajan veri ei välttämättä ole yhteensopiva potilaan veren kanssa.
Jos positiivinen tulos diagnosoidaan raskaana olevan naisen kehossa, jolla on Rh-negatiivinen veri, hänen kehonsa sisältää vasta-aineita sikiön verelle.
Tämä osoittaa Rh-konfliktin, joka vaatii erittäin huolellista lähestymistapaa raskauden hallintaan lääkäriltä sekä kaikkien naisen ohjeiden ja suositusten noudattamista.
Jos lapsen veressä on vasta-aineita, diagnosoidaan vastasyntyneen hemolyyttinen sairaus. Tässä tapauksessa suoritetaan uusintatutkimus sen määrittämiseksi, tapahtuuko vasta-ainepitoisuuden nousu odottavan äidin veressä vai ei.
Coombsin testin mahdolliset komplikaatiot
Coombsin testi on melko turvallinen testi, jonka avulla voidaan diagnosoida useita autoimmuunisairaudet. Se aiheuttaa harvoin komplikaatioita, yleensä negatiivisia seurauksia liittyvät verinäytteisiin.
He ovat:
- Verenvuoto tai verenvuoto ihon alla
- Huimaus ja pyörtyminen
- Tarttuva infektio
7 295
– antiglobuliinitesti, jonka tarkoituksena on tunnistaa Rh-negatiivisesta verestä epätäydellisiä punasolujen vasta-aineita Rh-tekijälle - spesifiselle proteiinille, joka sijaitsee Rh-positiivisen veren punasolujen pinnalla. Tätä testiä on kahta tyyppiä: suora - vasta-aineiden havaitseminen punasolujen pinnalla, epäsuora - vasta-aineiden havaitseminen veren seerumissa. Suoraa testausta tehdään verisairauksien diagnosoinnissa ja hoidon seurannassa: hemolyyttinen anemia, vastasyntyneiden hemolyyttinen sairaus ja muut. Epäsuora testi suoritetaan luovuttajan ja vastaanottajan veren yhteensopivuuden arvioimiseksi verensiirron aikana sekä Rh-konfliktin olemassaolon ja riskin määrittämiseksi raskauden suunnittelussa ja hallinnassa. Coombs-testin materiaalina on laskimoveri, tutkimus suoritetaan agglutinaatioreaktioon perustuvilla menetelmillä. Yleensä molemmat testit antavat negatiivisen tuloksen. Analyysi valmistuu yhden päivän kuluessa.
Coombsin testi - Kliininen tutkimus Rh-negatiivinen veri, jonka tarkoituksena on havaita Rh-tekijän vasta-aineita. Testiä käytetään Rh-konfliktin ja hemolyyttisten reaktioiden kehittymisen riskin tunnistamiseen. Jokaisessa ihmisessä punasolujen pinta sisältää tietyn joukon antigeenejä tai agglutinogeenejä - eri luonteisia yhdisteitä, joiden läsnäoloa tai puuttumista käytetään veriryhmän ja Rh-tekijän määrittämiseen. Antigeenejä on monenlaisia, mukaan lukien lääkärin käytäntö Veriryhmän määrittävät agglutinogeenit A ja B sekä agglutinogeeni D, Rh-tekijä, ovat käytännön tärkeitä. Positiivisella Rh-tekijällä D-antigeenit havaitaan erytrosyyttien ulkokalvolla, mutta negatiivisella tekijällä niitä ei havaita.
Coombsin testi, jota kutsutaan myös antiglobuliinitestiksi, on tarkoitettu epätäydellisten punasolujen vasta-aineiden havaitsemiseen verestä Rh-tekijäjärjestelmälle. Rh-tekijän vasta-aineet ovat spesifisiä immunoglobuliineja, joita muodostuu Rh-negatiivisessa veressä punasolujen, joissa on agglutinogeenia D, joutuessa siihen. Tämä voi tapahtua, kun sikiön ja raskaana olevan naisen veri sekoittuu verensiirroissa, jotka suoritetaan ilman ennakkovertailua. kirjoittamalla. Coombsin testistä on kaksi versiota - suora ja epäsuora. Tekemällä suora testi Coombs havaitsee punasolujen pintaan kiinnittyneet vasta-aineet. Tutkimusta käytetään hemolyyttisen reaktion syyn määrittämiseen. Epäsuora Coombs-testi on tarkoitettu punasolujen vastaisten vasta-aineiden havaitsemiseen veriplasmassa. On tarpeen määrittää veren yhteensopivuus luovuttajan ja vastaanottajan tai äidin ja sikiön välillä ja auttaa estämään Rh-konfliktin kehittymistä ja sitä seuraavaa punasolujen hemolyysiä.
Molempien Coombsin testin versioiden veri otetaan suonesta. Analyysi suoritetaan agglutinaatiolla käyttämällä antiglobuliiniseerumia. Tutkimuksen tuloksia käytetään hematologiassa hemolyyttisten reaktioiden syiden tunnistamiseen, kirurgiassa ja elvytyksessä verensiirtoja tehtäessä, synnytys- ja gynekologiassa Rh-negatiivisen veren raskauden seurannassa.
Indikaatioita
Suora Coombs-testi, joka havaitsee punasolujen pintaan kiinnittyneet vasta-aineet, on määrätty eri alkuperää oleviin hemolyyttisiin reaktioihin (punasolujen tuhoutuminen). Tutkimus on tarkoitettu primaariseen autoimmuuni hemolyyttiseen anemiaan, verensiirron jälkeiseen hemolyyttiseen anemiaan, vastasyntyneen hemolyyttiseen sairauteen, autoimmuuni-, kasvain- tai punasolujen hemolyysiin. tarttuvat taudit sekä vastaanotto lääkkeet esimerkiksi kinidiini, metyylidopa, prokaiiniamidi. Epäsuoraa Coombs-testiä, joka määrittää veriplasman vasta-aineet, käytetään estämään Rh-konfliktin kehittyminen. Se on tarkoitettu potilaille, jotka valmistautuvat verensiirtoon, sekä raskaana oleville naisille, joilla on negatiivinen Rh-tekijä, edellyttäen, että lapsen tulevalla isällä on positiivinen Rh-tekijä.
Rh-yhteensopivuuden määrittämiseksi Coombsin testiä ei määrätä potilaille, joilla on Rh-positiivinen veri. Näissä tapauksissa punasolujen pinnalla on jo antigeenejä, vasta-aineiden tuotantoa ei voi saada aikaan verensiirrolla tai sikiön veren pääsyllä raskaana olevan naisen verenkiertoon. Tutkimusta ei myöskään ole tarkoitettu raskaana oleville naisille, jos molemmilla vanhemmilla on negatiivinen Rh-tekijä - perinnöllinen resessiivinen ominaisuus. Tällaisten parien lapsella on aina Rh-negatiivinen veri; immunologinen konflikti äidin kanssa on mahdotonta. Hemolyyttisissä patologioissa antiglobuliinitestiä ei käytetä hoidon onnistumisen seuraamiseen, koska tulokset eivät heijasta punasolujen tuhoutumisprosessin aktiivisuutta.
Coombsin testin rajoituksena on tutkimusmenettelyn työläisyys - luotettavien tulosten saamiseksi on noudatettava lämpötila- ja aikaehtoja, reagenssien ja biomateriaalin valmistussääntöjä. Coombs-testin etuja ovat sen korkea herkkyys. Hemolyyttisessä anemiassa tämän testin tulokset pysyvät positiivisina, vaikka hemoglobiini-, bilirubiini- ja retikulosyyttitasot normalisoituisivat.
Valmistelu analysointiin ja materiaalin keräämiseen
Coombsin testin suorittamiseen käytetty materiaali on laskimoveri. Verinäytteenoton ajalle ja potilaan valmistelulle ei ole erityisiä vaatimuksia. Kuten kaikissa tutkimuksissa, on suositeltavaa pitää tauko ruokailun jälkeen vähintään 4 tuntia ja lopettaa tupakointi viimeisen 30 minuutin aikana. liikunta, välttää emotionaalinen stressi. Lääkkeiden käytön lopettamisesta kannattaa myös keskustella etukäteen lääkärin kanssa – jotkut lääkkeet voivat vääristää Coombs-testin tuloksia. Veri otetaan ruiskulla kyynärlaskimosta tai harvemmin käden takaosassa olevasta laskimosta. Muutaman tunnin kuluessa materiaali toimitetaan laboratorioon.
Kun suoritetaan suora Coombs-testi, antiglobuliiniseerumia lisätään potilaan veriseerumiin. Jonkin ajan kuluttua seoksesta tutkitaan agglutinaattien esiintyminen - niitä muodostuu, jos punasoluissa on vasta-aineita. Jos tulos on positiivinen, agglutinaatiotiitteri määritetään. Epäsuora Coombsin testi koostuu useammasta vaiheesta. Ensinnäkin seerumissa olevat vasta-aineet kiinnitetään injektoituihin punasoluihin inkubaation aikana. Sitten näytteeseen lisätään antiglobuliiniseerumia, jonkin ajan kuluttua määritetään agglutinaattien läsnäolo ja tiitteri. Analyysijakso on 1 päivä.
Normaalit tulokset
Normaalisti suoran Coombs-testin tulos on negatiivinen (-). Tämä tarkoittaa, että veressä ei ole punasoluihin liittyviä vasta-aineita, eivätkä ne voi aiheuttaa hemolyysiä. Normaali tulos Myös epäsuora Coombsin testi on negatiivinen (-), eli veriplasmassa ei ole Rh-tekijän vasta-aineita. Verensiirtoon valmisteltaessa vastaanottajalle tämä tarkoittaa yhteensopivuutta luovuttajan veren kanssa, raskautta seurattaessa tämä tarkoittaa äidin Rh-herkistymisen puuttumista, pientä immunologisen konfliktin kehittymisen riskiä. Fysiologiset tekijät, kuten ruokavalio tai fyysinen aktiivisuus, eivät voi vaikuttaa testitulokseen. Siksi, jos tulos on positiivinen, lääkärin kuuleminen on välttämätöntä.
Analyysin diagnostinen arvo
Positiivinen Coombs-testin tulos ilmaistaan kvalitatiivisesti (+) - (++++) tai kvantitatiivisesti tiittereillä 1:16 - 1:256. Molemmista näytteistä suoritetaan vasta-ainepitoisuuden määrittäminen punasoluissa ja veriseerumissa. Jos suora Coombs-testi on positiivinen, punasolujen ulkokalvolla havaitaan vasta-aineita, jotka johtavat näiden verisolujen tuhoutumiseen. Syynä voi olla verensiirto ilman ennakkotyyppiä - verensiirron jälkeinen hemolyyttinen reaktio, samoin kuin vastasyntyneen erytroblastoosi, lääkkeiden käytöstä johtuva hemolyyttinen reaktio, primaarinen tai sekundaarinen autoimmuuni hemolyyttinen anemia. Toissijaisen punasolujen tuhoutumisen voivat aiheuttaa systeeminen lupus erythematosus, Evansin oireyhtymä, Waldenströmin makroglobulinemia, kohtauksellinen kylmä hemoglobinuria, krooninen lymfaattinen leukemia, lymfooma, tarttuva mononukleoosi, kuppa, mykoplasmakeuhkokuume.
Epäsuoran Coombs-testin positiivinen tulos osoittaa, että plasmassa on Rh-tekijän vasta-aineita. Käytännössä tämä tarkoittaa, että Rh-herkistyminen on tapahtunut ja Rh-konfliktin kehittyminen on mahdollista luovuttajan veren infuusion jälkeen raskauden aikana. Raskauskomplikaatioiden estämiseksi naiset, joiden Coombs-testin tulos on positiivinen, merkitään erityiseen rekisteriin.
Poikkeavuuksien hoito
Coombsin testi viittaa isoserologisiin tutkimuksiin. Sen tulokset mahdollistavat hemolyyttisen reaktion tunnistamisen sekä luovuttajan ja vastaanottajan, äidin ja sikiön veren yhteensopivuuden määrittämisen Rh-konfliktin kehittymisen estämiseksi. Jos testitulos on positiivinen, sinun on kysyttävä neuvoa hoitavalta lääkäriltäsi - synnytyslääkäriltä-gynekologilta, hematologilta, kirurgilta.
Hyväksytty Roszdravnadzorin määräyksellä"Reagenssisarjan Rhesus-järjestelmän antigeenien ja vasta-aineiden määrittämiseen ihmisen veressä" käytöstä
(AGS for Coombs -testi)
TU 9398-102-51203590-2012
RU nro RZN 2013/1255, päivätty 10.11.2013
I. JOHDANTO
Coombs-testin vakioseerumi sisältää spesifisiä heteroimmuunivasta-aineita ihmisen veren proteiineja vastaan ja on tarkoitettu käytettäväksi kahdessa reaktiovaihtoehdossa - suorassa ja epäsuorassa Coombs-testissä.
Suora Coombsin testi käytetään erytrosyyttien herkistymisen määrittämiseen in vivo vastasyntyneiden hemolyyttisissä sairauksissa ja potilailla, joilla on kroonisen hemolyyttisen anemian autoimmuunimuoto, sekä joissakin muissa olosuhteissa. Suoritetaan suora Coombs-testi koostuu siitä, että Coombs-testiä varten seerumi lisätään tutkittaviin punasoluihin, jotka on aiemmin pesty niiden oman plasman proteiineista. Jos punasolut on herkistetty in vivo, reaktio johtaa niiden agglutinaatioon.
Epäsuora Coombsin testi käytetään testinä kehon herkistymistilan tunnistamiseksi, mikä mahdollistaa vapaassa tilassa olevien vasta-aineiden havaitsemisen testattavan henkilön veriseerumissa; verensiirron yhteensopivuustestiksi, kun tutkitaan vastaanottajan seerumin vaikutusta aiotun luovuttajan punasoluihin; ja testinä erilaisten ryhmäantigeenien määrittämiseksi erytrosyyteissä käyttämällä alustavaa altistusta standardiseerumille, jotka sisältävät tunnetun spesifisyyden omaavia vasta-aineita. Epäsuora Coombs-testi (kaikki vaihtoehdot) tuotettu kahdessa vaiheessa, joista ensimmäinen on testiseerumin (tai standardin) inkubointi standardi (tai testi) erytrosyyttien kanssa, eli punasolujen herkistäminen in vitro. Toinen vaihe on varsinainen reaktio seerumin kanssa Coombs-testiä varten, joka suoritetaan samalla tavalla kuin suora Coombs-testi.
Reaktion lopputulos sekä suorissa että epäsuorassa Coombs-testissä johtuu vuorovaikutuksesta tavallinen seerumi Coombsin testiä varten punasoluihin kiinnitetyillä vasta-aineilla (ihmisen veren proteiini). Tämä tulos ilmenee punasolujen agglutinaationa. Agglutinaation tarkkailuun tulee käyttää valkoista posliinia tai mitä tahansa valkoista lautasta, jossa on kostuttava pinta, jotta siihen levitetyt tippat sekoittuvat hyvin eivätkä leviä lautasen pinnalle. Sekoitettuja pisaroita tulee levittää kevyesti lautaselle, noin 2 kopeikka kolikon kokoiseksi.
II. REAKTIOIDEN VALMISTUS
Testiseerumi sen sisältämien vasta-aineiden esiintymisen ja spesifisyyden määrittämiseksi saadaan tutkittavan henkilön verestä ilman säilöntäainetta. Säilytetään + 4–8 0 C lämpötilassa enintään 2 päivää tai pakastettuna 1 kuukausi.
Yhteensopivuustestaukseen tarkoitettu seerumi saadaan samalla tavalla, mutta sitä käytetään enintään 2 päivän säilyvyysajalla.
Niiden sisältämien tiettyjen isoantigeenien määrittämiseen tarkoitetut punasolut valmistetaan jollakin säilöntäaineella henkilöltä, jonka verta tutkitaan. Voit myös käyttää punasolusedimenttiä verestä, joka on otettu ilman säilöntäainetta.
Yhteensopivuutta testattaessa käytetään luovuttajan verta, joka on otettu neulan läpi verensiirtoa varten valmistetusta injektiopullosta.
Kaikissa tapauksissa punasolut pestään 3-4 kertaa koeputkissa plasmasta lisäämällä 8-10 tilavuutta isotonista natriumkloridiliuosta yhteen tilavuuteen punasoluja, minkä jälkeen sekoitetaan ja sentrifugoidaan nopeudella 1500-2000 rpm 5- 10 minuuttia (kunnes punasolujen sedimentaatio on täydellinen). Jokaisen sentrifugoinnin jälkeen supernatantti imetään pois.
III. REAKTIOTEKNIIKAT
Testierytrosyytit valmistetaan 5-prosenttisena suspensiona, jota varten yksi tippa neljä kertaa pestyjä punasoluja sekoitetaan koeputkessa 19 tippaan isotonista natriumkloridiliuosta.
Yksi tippa (0,05 ml) 5-prosenttista punasolususpensiota siirretään valkoiselle levylle ja levitetään. Levyä keinutetaan ja sitä tarkkaillaan 3 minuuttia, jotta nähdään, onko punasolujen agglutinaatiota tapahtunut. Jos agglutinaatiota ei ole tapahtunut, lisää 1-2 tippaa standardiseerumia Coombs-testiä varten, sekoita tippa huolellisesti, ravista sitten levyä hieman, jätä se sitten rauhaan yhdeksi tai kahdeksi minuutiksi ja ravista uudelleen. Samanaikaisesti tulosta seurataan 10 minuuttia, mikä ilmaistaan agglutinaation läsnä ollessa tai puuttuessa.
Suoran Coombsin testin tulosten tulkinta.
Ei agglutinaatiota - negatiivinen testi
Agglutinaation esiintyminen
– positiivinen testi, joka osoittaa tutkittavien punasolujen herkistymistä eli niiden vasta-aineiden imeytymistä, joka tapahtui in vivo ihmiskehossa (vastasyntynyt, potilas). Jos testattujen punasolujen agglutinaatio tapahtui ennen lisäämistä seerumi Coombs-testiä varten; suoran testin tulosta ei oteta huomioon.
2. Epäsuora Coombsin testi
Tarkoitettu isovasta-aineiden havaitsemiseen tutkittavan henkilön veren seerumissa
Sitä käytetään tapauksissa, joissa on tarpeen selvittää, sisältääkö potilaan, raskaana olevan naisen, luovuttajan tms. veri epätäydellisen muodon isoimmuunivasta-aineita ja selvittää niiden spesifisyys. Reaktioon käytetään tutkittavan henkilön veriseerumia ja standardeja punasoluja, joiden spesifisyys tunnetaan. Näiden 8-10 tai useamman punasolunäytteen joukossa tekijöissä pitäisi olla eroja muista järjestelmistä, ja on erittäin tärkeää, että jokainen näistä tekijöistä sisältyy vähintään yhteen punasolunäytteeseen. Paneeli sisältää myös näytteitä Rh-negatiivisista punasoluista, joissa on erilaisia yhdistelmiä muiden järjestelmien antigeenejä, joten niiden joukossa on Duffy-positiivisia ja Duffy-negatiivisia, jotka puolestaan jakautuisivat Kell-positiivisiin ja Kell-negatiivisiin, Kidd-positiivinen ja Kidd-negatiivinen jne. Negatiivisena kontrollina reaktioon sisällytetään mahdollisuuksien mukaan sen henkilön punasolut, jonka seerumia testataan.
Reaktiotekniikka
Telineeseen asennetaan useita sentrifugi- tai muita putkia, joiden tilavuus on 3-10 ml, riippuen reaktioon sisältyvien punasolunäytteiden lukumäärästä. Putket merkitään ja niihin lisätään merkinnän mukaan 1 pieni pisara (0,01 ml) pestyjä standardeja punasoluja. Kuhunkin koeputkeen tiputetaan kolme tippaa testiseerumia, koeputkia ravistellaan voimakkaasti punasolujen sekoittamiseksi seerumiin ja asetetaan termostaattiin 37 0 C:een 45 minuutiksi. Inkuboinnin jälkeen putket poistetaan termostaatista ja punasolut pestään lisäämällä isotonista natriumkloridiliuosta putken yläosaan, sekoittamalla ja sen jälkeen sentrifugoimalla. Pesu toistetaan 3-4 kertaa, joka kerta imemällä supernatantti varovasti pois, sitten pestyihin punasoluihin lisätään 2 tippaa isotonista natriumkloridiliuosta, jotta saadaan noin 5 % suspensiosta (sentrifugiputkia käytettäessä voit rajoittaa itsesi kahdesti pesuun).1 tippa 5-prosenttista punasolujen suspensiota kustakin koeputkesta siirretään valkoiselle levylle, siihen lisätään 1-2 tippaa Coombs-testin standardiseerumia ja seerumi sekoitetaan perusteellisesti punasolujen kanssa. Levyä ravistetaan hieman, jätetään sitten rauhaan 1-2 minuutiksi ja ravistellaan uudelleen säännöllisin väliajoin samalla, kun reaktion tulosta tarkkaillaan 20 minuutin ajan.
Tulosten tulkinta
Ei merkkejä agglutinaatiosta (negatiivinen tulos) kaikissa näytteissä tarkoittaa, että testiseerumi ei sisällä epätäydellisiä vasta-aineita tutkimukseen sisältyvien standardipunasolujen sisältämille ryhmäantigeeneille.Jos joissakin tai useimmissa tippoissa, kontrollin lisäksi, havaittu agglutinaatio Tämä tarkoittaa, että testiseerumi sisältää epätäydellisiä vasta-aineita erytrosyyttiantigeenejä vastaan. Kysymys näiden vasta-aineiden spesifisyydestä ratkaistaan vertaamalla positiivisia ja negatiivisia reaktioita punasolujen antigeeninen rakenne sisältyy reaktioon. Kysymys näiden vasta-aineiden aktiivisuudesta ratkaistaan titraamalla.
Esimerkki 1. Agglutinaatiota tapahtui kaikilla Rh 0 (D) -tekijää sisältävillä punasolunäytteillä, riippumatta tämän järjestelmän ja muiden järjestelmien muiden tekijöiden läsnäolosta tai puuttumisesta, kun taas kaikilla Rh 0 (D) - negatiivisilla näytteillä agglutinaatiota ei havaittu (siis riippumatta muiden tekijöiden olemassaolosta tai puuttumisesta) - tämä tarkoittaa, että testiseerumi sisältää epätäydellisiä anti-Rhesus-vasta-aineita - Rh 0 (D).
Esimerkki 2. Agglutinaatiota tapahtui kaikissa Duffy-tekijää sisältävissä punasolunäytteissä, riippumatta Rhesus-järjestelmän ja muiden järjestelmien antigeenien läsnäolosta tai poissaolosta, kun taas agglutinaatiota ei havaittu kaikissa Duffy-negatiivisissa näytteissä, mikä tarkoittaa, että testiseerumi sisältää epätäydellisiä anti- -Duffy.
Lisäys. Jos laitoksella ei ole täydellistä paneelia standardi punasoluja, mutta on tarpeen testata seerumi vasta-aineiden esiintymisen varalta, on suositeltavaa suorittaa tutkimus 25-30 satunnaisella punasolunäytteellä terveiltä henkilöiltä. ryhmä 0 (I) tai testiseerumin kanssa samanniminen seerumi. Tämä tekee mahdolliseksi ratkaista ongelman vasta-aineiden läsnäolosta tai puuttumisesta useimpia Rh-Hr-, Duffy-, Kell-, Kidd-järjestelmän antigeenejä vastaan.
Jos saadaan positiivinen tulos, lisäpäätelmät havaittujen vasta-aineiden spesifisyydestä voidaan tehdä erityistutkimuksella, jossa on täysi paneeli standardeja punasoluja.
3. Tekniikka epäsuoran Coombs-testin suorittamiseksi siirretyn veren yhteensopivuuden testaamiseksi
Jotta estetään yhteensopimattomuus verensiirron aikana, seuraavat yhteensopivuustestit on suoritettava ennen verensiirtoa:
ABO-veriryhmien yhteensopivuustesti, joka suoritetaan koneessa huoneenlämmössä.
Rh-tekijän ja muiden isoantigeenien yhteensopivuustestit.
Yksi pieni (0,01 ml) pisara pestyjä luovuttajan erytrosyyttejä, jotka on otettu neulan kautta verensiirtoon tarkoitetusta veripullosta, siirretään sentrifugin tai muun putken pohjalle, jonka tilavuus on 3-4 ml ja 3 tippaa potilaan siihen lisätään seerumia. Koeputkea ravistellaan, jotta punasolut sekoittuvat seerumiin, minkä jälkeen se asetetaan termostaattiin 37 0 C:een 45 minuutiksi. Inkuboinnin jälkeen koeputken päälle lisätään isotonista natriumkloridiliuosta, koeputken sisältö sekoitetaan ja sentrifugoidaan 5-10 minuuttia. Tämä punasolujen pesu toistetaan 3 kertaa poistamalla joka kerta varovasti supernatantti. Kun käytät sentrifugiputkia, voit rajoittua pesuun kahdesti. Lisää 2 tippaa isotonista natriumkloridiliuosta pestyihin punasoluihin saadaksesi noin 5 % suspensiota.
1 tippa punasolujen 5-prosenttista suspensiota siirretään valkoiselle levylle, siihen lisätään 1-2 tippaa standardiseerumia Coombs-testiä varten ja seerumi sekoitetaan perusteellisesti punasolujen kanssa. Sitten levyä ravistetaan hieman, jätetään yksin 1-2 minuutiksi ja ravistellaan uudelleen säännöllisesti, samalla kun tarkkaillaan tulosta 20 minuutin ajan.
Huomautus: Rh-yhteensopimattomuuden tapauksessa agglutinaatio tapahtuu yleensä ensimmäisen minuutin aikana, mutta alhaisella Rh-vasta-aineiden (tai muiden vasta-aineiden) tiitterillä agglutinaatiota voi tapahtua myöhemmin, joskus 20. minuutilla.
Tuloksen tulkinta:
Agglutinaatit ovat näkyvissä kyhmyjen muodossa kirkastetulla tai täysin valkaistulla taustalla - tämä tarkoittaa, että luovuttajan verta yhteensopimaton vastaanottajan veren kanssa eikä sitä voida siirtää hänelle.
Poissaolo agglutinaation merkit tarkoittaa, että potilaan veri ei sisällä epätäydellisiä vasta-aineita luovuttajan punasoluja vastaan suhteessa Rh-tekijään ja muihin isoantigeeneihin, joille saattaa muodostua epätäydellisiä vasta-aineita.
Epäsuora Coombs-testi on herkkä vain epätäydellisille vasta-aineille.
4. Epäsuora Coombsin testitekniikka määrittämiseen antigeeninen rakenne punasolut
Tätä testiä käytetään määrittämään minkä tahansa punasoluryhmän antigeenin läsnäolo tai puuttuminen käyttämällä standardiseerumia, joka sisältää vastaavat vasta-aineet epätäydellisessä muodossa.
Useimmiten epäsuoraa Coombsin testiä käytetään määrittämään antigeenit Kell (K), Duffy (Fy), Kidd (Jk) ja myös Rh-järjestelmän heikon antigeenin (Du) määrittämiseen.
Ennen kuin jatkat antigeenien määritystä, tutkittavat punasolut tulee testata suoralla Coombs-testillä. Jos suoran testin tulos on positiivinen, antigeenien määritystä epäsuoralla Coombs-testillä ei voida suorittaa, vaan tähän tarkoitukseen on käytettävä muita reaktioita.
Reaktioon käytetään sentrifugia tai muita putkia, joiden tilavuus on 3-4 ml, määrä kolme: yksi erytrosyyttien testinäytteelle ja kaksi 1 pienelle (0,01 ml) pisaralle kolme kertaa pestyjä testipunasoluja lisätään ensimmäisen putken pohjalle, kontrollierytrosyytit lisätään toiseen putkeen, joka sisältää halutun antigeenin (esimerkiksi Duffy-positiivinen) ja kolmanteen putkeen - negatiivinen kontrolli (Duffy-negatiivinen). Lisää 2-3 tippaa standardiseerumia (tässä esimerkissä anti-Duffy) kaikkiin koeputkiin. Koeputkia ravistellaan sisällön sekoittamiseksi ja asetetaan termostaattiin 37 0 C:een 45 minuutiksi. Tällaisen inkuboinnin jälkeen koeputket poistetaan termostaatista, isotoninen natriumkloridiliuos lisätään päälle, sisältö sekoitetaan perusteellisesti ja sentrifugoidaan nopeudella 1500-2000 tuhatta rpm 5-10 minuuttia. Sentrifugoinnin jälkeen supernatantti imetään varovasti pois ja tämä punasolujen pesu toistetaan 4 kertaa. (Käytettäessä sentrifugiputkia voit rajoittua pesuun kahdesti).
Lisää 2 tippaa isotonista natriumkloridiliuosta pestyihin punasoluihin saadaksesi noin 5 % suspensiota. 1 tippa 5 % erytrosyyttisuspensiota kustakin koeputkesta siirretään valkoiselle levylle, 1-2 tippaa standardiseerumia Coombs-testiä varten lisätään jokaiseen erytrosyyttipisaraan ja sekoitetaan. Levyä ravistetaan hieman, jätetään sitten rauhaan 1-2 minuutiksi ja ravistellaan uudelleen säännöllisin väliajoin, samalla kun reaktion etenemistä tarkkaillaan 20 minuutin ajan.
Tulosten tulkinta
Agglutinaation esiintyminen punasolut (positiivinen tulos) tarkoittaa, että veri sisältää halutun antigeenin (tässä esimerkissä Duffy-positiivinen veri).
Ei agglutinaatiota (negatiivinen tulos) tarkoittaa, että testattu veri ei sisällä haluttua antigeeniä (Duffy negatiivinen).
Tulos otetaan todeksi kontrollinäytteiden tarkastuksen jälkeen, eli esimerkissä, jos tulos on positiivinen Duffy-positiivisella näytteellä ja negatiivinen Duffy-negatiivisella näytteellä.
5. Vapautuslomake
Reagenssi on saatavana nestemäisessä muodossa 5 tai 10 ml:n pulloissa (1 ml sisältää 10 annosta). Natriumatsidia käytetään säilöntäaineena lopullisessa pitoisuudessa 0,1 %.
6. Varastointi
Säilyvyys: kaksi vuotta jääkaapissa 2-8°C. Avattu pullo soveltuu käytettäväksi säilytettynä jääkaapissa hermeettisesti suljettuna koko viimeisen käyttöpäivän ajan.
Valituksen perusteet ovat: toimimattomuus, epäspesifisyys, pullon eheyden loukkaus, hiutaleet, vanhentunut reagenssin viimeinen käyttöpäivä. Ilmoita valituksen yhteydessä vastaanottopäivä, toimittaja (jos olet saanut tuotteen muulta kuin valmistajalta), eränumero ja syyt, miksi reagenssi todettiin sopimattomaksi. Liitä mukaan pöytäkirja reagenssin testauksen tuloksista ja 2-3 avaamatonta pulloa reagenssilla
Valitus tulee lähettää valmistajalle LLC "MEDICLON": 127276
