Diagnoza okužbe s HIV je nujna za učinkovito zdravljenje. Za diagnosticiranje aidsa, standardni postopek pregled pacienta. Sestavljen je iz 2 stopenj:

• pregledovanje;
• imunski bloting.

Za postavitev diagnoze je dodatno predpisan PCR, ekspresno testiranje.

ELISA

Začetna diagnoza aidsa temelji na uporabi laboratorijskih proteinov HIV, ki ujamejo specifična protitelesa. Po stiku z encimi testnega sistema se barva indikatorja spremeni. Nato se spremenjena barvna shema obdela s posebno opremo, ki določa rezultat testa.

Podobna laboratorijska diagnoza okužbe s HIV pokaže rezultat 21 dni po okužbi. S pomočjo ELISA je nemogoče ugotoviti prisotnost virusa. Ta metoda diagnostika pomaga odkriti proizvodnjo protiteles proti virusu. Podoben proces lahko opazimo 2-6 tednov po okužbi.

Strokovnjaki razlikujejo 4 generacije sistemov ELISA z različnimi občutljivostmi. Zdravniki pogosto uporabljajo teste 3. in 4. generacije. Ti sistemi temeljijo na rekombinantnih proteinih ali peptidih sintetičnega izvora, ki imajo pomembno natančnost in specifičnost. ELISA se uporablja za odkrivanje, spremljanje širjenja virusa, kar zagotavlja varnost pri preverjanju darovane krvi. Natančnost takih sistemov se giblje od 93-99%. Testi, objavljeni v Zahodna Evropa. Za izvedbo diagnostike laboratorijski pomočnik vzame vensko kri (5 ml). 8 ur pred študijo je priporočljivo zavrniti hrano. Študija se pogosteje izvaja zjutraj.

Dešifriranje podatkov

Rezultati testa bodo prejeti v 10 dneh. Če je rezultat negativen, bolnik ni okužen. V tem primeru zdravljenje ni predpisano. Zaznan je lažno negativen rezultat:

• do 3 tedne po okužbi;
• na zadnja stopnja AIDS z nizkim imunskim sistemom;
• z nepravilno pripravo krvi.

Če je rezultat pozitiven, je bolnik okužen. V tem primeru se izvede IB. False pozitiven rezultat kaže na prisotnost sočasnih bolezni in nepravilno opravljeno pripravo krvi. Če je testiranje indicirano za nosečnice, lahko zdravnik v zbranem materialu odkrije nespecifična protitelesa, katerih proizvodnja ni povezana z virusom. Zbrani material se pregleda v referenčnem ali arbitražnem laboratoriju. Če je rezultat ponovnega testa negativen, je prvi rezultat napačen. V tem primeru se IB ne izvaja.

Izvedba imunske analize

Zdravljenje aidsa je predpisano po prejemu pozitivnega rezultata imunski bloting. Ta diagnostična metoda se izvaja z nitroceluloznim trakom, na katerega so naneseni virusni proteini. Za IB se uporablja venska kri, ki se nato obdela. Serumske beljakovine so razdeljene v skupine glede na njihov naboj in molekularna teža. Za izvedbo tega postopka se uporablja posebna oprema.

Če so v testnem materialu protitelesa proti virusu, se na traku pojavijo ustrezne črte. Pozitiven IB pomeni, da je bolnik HIV pozitiven. Dvomljiv rezultat se odkrije v začetnih fazah okužbe, s tuberkulozo in onkologijo, pri nosečnicah. V takih primerih je priporočljivo ponoviti IB.

Nedoločen rezultat IB kaže na prisotnost enega ali več proteinov virusa v imunoblotu. Podobno sliko opazimo pri nedavni okužbi, ko je v krvi majhna količina protiteles proti okužbi. V tem primeru bo IB čez nekaj časa pozitiven. Negotov rezultat te študije je lahko posledica odsotnosti okužbe s HIV pri hepatitisu, kroničnih presnovnih boleznih, med nosečnostjo. V tem primeru bo IB postal negativen ali pa bodo specialisti ugotovili vzrok negotovega rezultata pri bolniku.

PCR študija

Obrambni sistem je prizadet v ozadju vnosa virusa v Človeško telo. Za inkubacijska doba značilno obdobje 3 mesece. Zato je po spolnem stiku s partnerjem, okuženim s HIV, priporočljivo opraviti PCR diagnostiko. Omogočil vam bo določitev RNA virusa. Obdobje, v katerem je priporočljivo opraviti takšno študijo, je 8-24 mesecev.

Za končna diagnoza indicirano je redno darovanje krvi za HIV (1-krat v 3 mesecih). Zaradi visoke občutljivosti to raziskavo omogoča odkrivanje virusa 10 dni po okužbi. Lažno pozitiven rezultat PCR je mogoče dobiti tudi, če je v bolnikovem telesu prisotna druga okužba. PCR študija velja za drag postopek, saj zahteva posebno opremo.

PCR je predpisan za odkrivanje virusa pri naslednjih osebah:

• novorojenček, rojen od matere, okužene s HIV;
• bolniki z dvomljivo IB.

Tudi ta tehnika je prikazana za nadzor koncentracije virusa v krvi in ​​študij krvi darovalca.

Hitre raziskovalne metode

TO sodobne metode Specialisti za diagnostiko aidsa napotijo ​​hitre teste. Dešifriranje bo trajalo 10-15 minut. Imunokromatografski testi, ki temeljijo na kapilarnem pretoku, zagotavljajo natančne rezultate. Takšni testni sistemi so predstavljeni v obliki posebnih trakov, na katere se nanese kri ali slina. V prisotnosti virusa se na testu po 10 minutah pojavita 2 trakova:

• nadzor;
• barva.

V tem primeru je rezultat testa pozitiven značaj. Negativen rezultat je označen s pojavom enega kontrolnega traku. Za potrditev dobljenega rezultata se izvede IB. Na podlagi splošnih podatkov zdravnik postavi diagnozo in predpiše zdravljenje.

Virus lahko odkrijete doma. Za to se uporabljajo posebni hitri kompleti. OraSure Technologies1 je sistem, razvit v ZDA. Če je rezultat testiranja pozitiven, se bolniku svetuje, da ga opravi popoln pregled v zdravstvenem domu.

Pregled otroka

Nujno pregledamo novorojenčke, ki so bili rojeni od okuženih mater. S pomočjo seroloških metod je nemogoče natančno odkriti virus pri otrocih, starih od 5 do 18 mesecev. Toda rezultat takšne ankete je pomemben pri izvajanju IB.

Okužbo pri otrocih lahko odkrijete s PCR. DNK virusa odkrije specialist pri otrocih prvega meseca življenja. Za določitev koncentracije RNA patogena strokovnjaki določijo provirus imunske pomanjkljivosti. Za raziskave zdravnik uporablja polno kri ali njeno posušeno mesto. Material damo v epruveto s konzervansom EDTA (razmerje 1:20). Vzorec je treba hraniti pri temperaturi, ki ne presega 8 °C (2 dni). Zamrzovanje materiala ni dovoljeno.

Za pridobitev suhega vzorca krvi se vsa tekočina nanese na poseben papir. Vzorec lahko shranjujete pod 8°C. Kartice se uporabljajo 8 mesecev. Novorojenega otroka je treba pregledati in vzeti material za raziskave v naslednjih obdobjih:

• 48 ur po rojstvu;
• v starosti 2 mesecev po rojstvu;
• 3-6 mesecev po porodu.

Če je zdravnik odkril gen provirusa HIV nekaj ur po rojstvu otroka, je bil otrok okužen intrauterino. Z virusom se lahko okužimo tudi med porodom ali med dojenje. Rezultati, ki kažejo na prisotnost DNK virusa v 2 vzorcih, kažejo na razvoj aidsa pri otroku. Dispanzersko opazovanje ni potrebno, če so rezultati PCR negativni 4 mesece po rojstvu otroka.

Če je rezultat testa negativen, vendar so prisotni simptomi aidsa, je priporočljivo, da se posvetujete z zdravnikom. Takšno kliniko lahko sprožijo druge bolezni. Testiranje velja za edino in 100% metodo za diagnosticiranje virusa. Tudi usposobljeni in izkušeni strokovnjaki ne morejo prepoznati virusa po simptomih, ki jih predstavlja.

Če so čez nekaj časa rezultati bolnika negativni, potem v telesu ni virusa HIV.

Ne upošteva simptomov. Ampak takšna klinična slika je lahko povezana s fobijo pred aidsom. V tem primeru je potrebna pomoč psihologa. Po potrebi se otroku ali odrasli predpiše ustrezno zdravljenje.

Odločilno vlogo pri diagnozi okužbe s HIV igra laboratorijska diagnostika, ki je sestavljena iz odkrivanja protiteles proti HIV v krvi z ELISA, čemur sledi potrditev pozitivnih rezultatov z IB. Ta metoda diagnosticiranja okužbe s HIV omogoča identifikacijo okuženih s HIV z učinkovitostjo 99%.

Indikacije za uporabo različnih laboratorijskih testov in značilnosti razlage rezultatov

Trenutno se za presejalno fazo diagnosticiranja okužbe s HIV uporabljajo kompleti reagentov tretje in četrte generacije, ki temeljijo na metodi ELISA. Posebnost testi četrte generacije so zmožnost hkratnega odkrivanja hipertenzije (p24) in celotnega AT, medtem ko testi tretje generacije omogočajo določitev samo AT. Če je mogoče, je treba dati prednost testom četrte generacije zaradi njihove višje vrednosti diagnostična občutljivost in možnost odkrivanja okužbe pri posameznikih med serološkim oknom.

Negativen rezultat pri odkrivanju AT do HIV metoda ELISA ne kaže vedno odsotnosti okužbe. resen problem predstavljajo tiste primere, kjer je bil test opravljen med serološkim oknom, tj. v prvih tednih po okužbi, ko protitelesa proti HIV še niso razvita v zadostni količini. Pri nekaterih posameznikih se lahko serološko okno podaljša za več mesecev, tako da, če obstajajo dokazi o izpostavljenosti osebam, okuženim s HIV, se ponovni testi običajno izvedejo po 2–3 mesecih. Lažno negativne rezultate odkrivanja protiteles proti HIV z uporabo ELISA lahko dobite v končni fazi bolezen, za katero je značilna huda imunski sistem z globoka kršitev proces nastajanja AT.

Pozitiven rezultat odkrivanja protiteles z ELISA kaže na verjetnost okužbe s HIV, včasih pa je lahko ta rezultat lažno pozitiven, na primer, če ima oseba tumorje, alergijske bolezni med nosečnostjo, med avtoimunske bolezni, pomembne spremembe kazalnikov biokemične raziskave kri, nekaj kronične bolezni. V takih primerih so potrebne dodatne raziskave v strokovnem laboratoriju.

Če je rezultat odkrivanja protiteles proti HIV z ELISA pozitiven, je potrebna njegova potrditev. Na prvi stopnji potrditve se analiza ponovi v istem testnem sistemu v dveh vrtinah – s tem so odpravljene tehnične napake. Če je rezultat potrjen, ponovimo določitev protiteles z ELISA v bolnikovem serumu z dvema referenčnima kompletoma reagentov. Če je rezultat vsaj ene od teh študij pozitiven, se izvede tretja stopnja potrditve: študija po metodi IB, ki omogoča odkrivanje protiteles proti posameznim proteinom antigena HIV.

Rezultate, dobljene z IB metodo, interpretiramo kot pozitivne, dvomljive in negativne. Rezultati se štejejo za negativne (negativne), če v testiranem serumu niso najdena protitelesa proti nobenemu od antigenov HIV ali je reakcija s proteinom p17 šibka. Najbolj tehten razlog za pozitivna reakcija je dokazovanje protiteles proti ovojnim proteinom HIV (glikoproteini gp41, gp120, gp160). Rezultat se šteje za pozitivnega, če se odkrijejo protitelesa proti katerim koli glikoproteinom HIV. Če pride do reakcije samo z enim od ovojnih proteinov, v kombinaciji z reakcijo z drugimi proteini ali brez njega, se rezultat šteje za dvomljiv, v tem primeru je priporočljivo opraviti teste za odkrivanje antigena p24 ali HIV DNA / RNA. Če se odkrije hipertenzija p24 ali DNA/RNA virusa HIV, se ponovni test z uporabo IB izvede 2 tedna po prvem nedoločenem rezultatu in nato vsaka 2 tedna, dokler ne dobite pozitivnega rezultata potrditvenega testa. Če 6 mesecev po prvem pregledu ponovno dobimo nedoločljive rezultate in bolnik nima dejavnikov tveganja za okužbo in klinični simptomi Okužba s HIV, rezultat se šteje za lažno pozitiven.

Pogosto se po 1-3-6 mesecih od trenutka pridobitve dvomljivega rezultata v krvnem serumu ena za drugo pojavijo protitelesa proti vsem antigenom HIV. V tem primeru je dvomljiv rezultat dokaz začetni fazi okužbe z virusom HIV. V nekaterih primerih so dvomljivi rezultati IB opaženi pri neokuženih posameznikih, ki imajo v telesu protitelesa, podobna pravim protitelesom proti HIV.

Eden od posrednih znakov okužbe s HIV je selektivno zmanjšanje CD4+ celic T-pomočnic zaradi dejstva, da ima HIV tropizem za celični receptor CD4. Vendar pa lahko teh sprememb na določenih stopnjah okužbe s HIV ni, se razlikujejo od bolnika do bolnika in se pojavijo pri drugih boleznih. Torej pri odraslih bolnikih, ki so v latentni fazi bolezni, število CD4 + limfocitov običajno presega 0,5. 109/l, kar ustreza vrednostim pri zdravih ljudeh.

Za zgodnja diagnoza uporablja se testiranje na okužbo s HIV. Metode za diagnosticiranje okužbe se nenehno izboljšujejo, saj se glavni simptomi bolezni ne pojavijo takoj in se maskirajo kot druge patologije. Še več, pri laboratorijske raziskave odstotek lažno pozitivnih in lažno negativnih rezultatov je visok.

Testni sistemi za določanje HIV uporabljajo kri, manj pogosto uporabljajo urin in strganje iz ustne sluznice.

Faze diagnosticiranja okužbe s HIV pri odraslih:

Preliminarno - presejanje, ki izbere ogrožene kandidate (domnevno okužene);

Referenca

Potrditveno - strokovna faza.

Od stopnje do stopnje se kompleksnost, delovna intenzivnost in stroški raziskovalnih metod povečujejo.

Izrazi, ki se uporabljajo pri diagnozi HIV:

Antigen - HIV ali njegovi deli (kapsula, encimi, lipidi, proteini).

Protitelo je celica imunskega sistema, ki jo proizvaja telo proti vnosu virusne okužbe.

Serokonverzija je imunski odziv obrambnega sistema proti aktivnemu razmnoževanju virusa. Takoj po vstopu v telo se celice HIV začnejo aktivno deliti. Kot odgovor se koncentracija protiteles več tednov dviguje. Ko dosežejo določeno raven (serokonverzija), so testni sistemi na voljo za diagnozo. Ko koncentracija virusa pade, pade tudi raven protiteles.

"Okensko obdobje" - časovni interval od trenutka okužbe do pojava serokonverzije traja od 1,5 do 3 mesece. okužena oseba v tem obdobju je še posebej nevaren kot nosilec okužbe, saj test na HIV pokaže lažno negativen rezultat, čeprav je tveganje za prenos bolezni izjemno veliko.

Med presejanjem se izvaja encimski imunski test (ELISA) za določitev skupnih protiteles proti HIV-1 in HIV-2. Natančne rezultate pokaže ne prej kot 3-6 mesecev po okužbi, čeprav obstajajo izjeme: lahko zazna protitelesa proti HIV 3-5 tednov po nevarnem stiku.

Testni sistemi četrte generacije so najbolj natančni. Poleg protiteles proti virusu so sposobni določiti tudi antigen proti HIV (p-24-kapsid), kar omogoča odkrivanje virusa tudi v »dobi okna«, pred pojavom protiteles.

Visoki stroški takšnih testnih sistemov v mnogih državah silijo k uporabi sistemov tretje in celo druge generacije, ki določajo samo prisotnost protiteles.

Takšni sistemi dajejo lažno pozitivne rezultate, ko naslednja stanja:

Okužba med nosečnostjo;

S pozitivnim rezultatom encimskega imunskega testa nadaljujejo na naslednjo stopnjo diagnoze.

Referenčni korak pri diagnozi HIV

Pri občutljivejših testnih sistemih se uporablja dvojna diagnoza. Dva pozitivna rezultata sta razlog za prehod na naslednjo stopnjo diagnostike.

Strokovna faza - imunobloting

Na tej stopnji se določijo protitelesa proti posameznim proteinom virusa humane imunske pomanjkljivosti.

Faze strokovne stopnje:

Uničenje virusa v posamezne antigene z elektroforezo.

Prenos antigenov z metodo blotiranja na posebne trakove s predhodno nanesenimi proteini, specifičnimi za HIV.

Določitev reakcije, ki se pojavi, če bolnikova kri vsebuje protitelesa proti antigenom.

Obstaja majhna nevarnost napake – lažno negativen rezultat. Možno je, če se študija pojavi v terminalni fazi bolezni ali v "okenskem obdobju".

Uporablja se skupaj z drugimi testi PCR metoda(verižna reakcija s polimerazo). On je drugačen preobčutljivost na virus, kar lahko vodi do velikega deleža lažno pozitivnih rezultatov.

Diagnoza pri otrocih, katerih matere so okužene s HIV

Testiranje takih otrok ima svoje značilnosti – v otrokovi krvi so lahko prisotna materina protitelesa proti HIV, ki so med porodom prešla placento. Lahko trajajo do 15-18 mesecev od rojstva otroka. če teh protiteles ni, to ni stoodstotni dokaz, da otrok ni okužen z virusom.

Diagnozo okužbe s HIV lahko postavimo v laboratoriju z odkrivanjem specifičnih protiteles proti virusu. Z mnogimi drugimi virusne bolezni prisotnost protiteles kaže na okužbo v preteklosti. Ker pa se okužba s HIV razvije kronična okužba, seropozitivni posamezniki niso le aktivno okuženi, ampak tudi nalezljivi.

Serološki test za odkrivanje prisotnosti protiteles proti virusu HIV je postal široko dostopen leta 1985. Najpogosteje uporabljena metoda je encimski imunski test (ELISA), razvijajo pa se tudi druge vrste testov protiteles, kot sta aglutinacija delcev in "točkovni" test. ELISA. Teste je mogoče izvesti hitro in enostavno ter ne zahtevajo zahtevne opreme.

Čeprav zgornji testi v visoka stopnja občutljivi, lahko dajo napačne rezultate, pozitiven rezultat pa je treba dodatno potrditi z dodatnim testom, kot je Western blot (western blot) ali indirektna imunofluorescenca.

Možno je tudi neposredno določanje antigenov HIV (virus ali virusne beljakovine) v semenu; industrija proizvaja potrebne komplete reagenti. Ti testi so bili prvotno razviti kot poskus zagotavljanja laboratorijske indikacije prisotnosti okužbe med "oknom" med okužbo in proizvodnjo protiteles, ki običajno traja od 4 do 16 tednov. Testi za odkrivanje antigenov se zdaj pogosteje uporabljajo za spremljanje rezultatov protivirusno zdravljenje bolniki z aidsom.

Presejalni programi za okužbo s HIV (tj. presejanje celotne populacije oz posamezne skupine populaciji za ugotavljanje okužbe ali bolezni) lahko pomaga:

• preprečiti prenos virusa s krvjo in krvnimi pripravki, semenom, tkivi ali organi za presaditev;
• pridobiti epidemiološke podatke o razširjenosti in incidenci HIV.

Kadarkoli se razpravlja o presejalnem programu, je treba jasno navesti in obravnavati vsa vprašanja, navedena v izjavi WHO (Priloga 4). Slabo zasnovani in slabo izvedeni programi lahko škodijo javnemu zdravju in zapravljajo vire. Potrebe javnega zdravja in človekove pravice se najbolje zadovoljijo s skrbnim premislekom o vrsti tehnologije, logistike ter družbenih, pravnih in etičnih vprašanj, preden se sprejme odločitev o nadaljevanju programa presejanja.

Obvezno presejanje za HIV ima zelo omejeno vlogo v programih za preprečevanje in obvladovanje aidsa.

Rutinsko presejanje darovalcev pomaga preprečiti prenos virusa HIV s krvjo, semenom ali drugimi celicami, tkivi in ​​organi. Del takega pregleda je informirana privolitev posameznika in posvetovanja, ki morajo ostati zaupna.

Identifikacija seropozitivnih oseb z anketo omogoča določitev epidemiološkega tipa HIV, kar je potrebno za oceno območij in populacij, ki potrebujejo posebne izobraževalne programe ali druge preventivne storitve. Te raziskave je treba izvajati z metodami, ki ne ogrožajo spoštovanja človekovih pravic. Izvajajo naj se med posvetovanjem bodisi s privolitvijo informiranega posameznika ob spoštovanju zaupnosti bodisi anonimno, brezplačno (brez beleženja drugih osebno določljivih podatkov).

Prostovoljno testiranje na aids je lahko del zdravstvene oskrbe za sum bolezni, povezanih z virusom HIV, in se lahko vključi v informacije, izobraževanje, svetovanje in druge podporne storitve za spodbujanje trajnostne spremembe vedenja. Pri prostovoljnem testiranju na HIV sta zelo pomembna pridobitev privolitve obveščenega posameznika in možnost svetovanja ob ohranjanju zaupnosti. Storitve prostovoljnega testiranja na HIV bi morale biti splošno dostopne kot del programov za preprečevanje in obvladovanje aidsa, dostop do takih storitev pa bi moral biti olajšan.