Ранно откриване на HIV инфекция. Скрининг на населението за HIV инфекция. Диагностика на HIV инфекция Скрининг тест при диагностициране на HIV инфекция

Диагнозата на HIV инфекцията е необходима, за да се предпише ефективно лечение.За диагностициране на СПИН се извършва стандартна процедурапрегледи на пациенти. Състои се от 2 етапа:

преминаване на скрининга;
имуноблотинг.

За поставяне на диагнозата допълнително се предписват PCR и бързо тестване.

Провеждане на ELISA

Първоначалната диагноза на СПИН се основава на използването на лабораторни HIV протеини, които се улавят от специфични антитела. След контакта им с ензимите на тест системата цветът на индикатора се променя. След това променената цветова схема се обработва със специално оборудване, което определя резултата от теста.

Такава лабораторна диагностика на HIV инфекция показва резултати 21 дни след заразяването. ELISA не може да определи наличието на вируса. Този методдиагностиката помага да се открие производството на антитела срещу вируса. Подобен процес може да се наблюдава 2-6 седмици след заразяването.

Експертите разграничават 4 поколения ELISA системи с различна чувствителност. Лекарите по-често използват тестове от 3-то и 4-то поколение. Тези системи се основават на рекомбинантни протеини или пептиди синтетичен произход, които имат значителна точност и конкретност. ELISA се използва за откриване и проследяване на разпространението на вируса, което гарантира безопасност при изследване на дарената кръв. Точността на такива системи варира от 93-99%. Тестове, пуснати в Западна Европа. За извършване на диагностика лаборантът взема венозна кръв (5 ml). Препоръчително е да се въздържате от ядене 8 часа преди изследването. Проучването често се провежда сутрин.

Декриптиране на данни

Ще отнеме 10 дни, за да получите резултатите от теста. Ако резултатът е отрицателен, тогава пациентът не е заразен. В този случай лечението не се предписва. Открива се фалшиво отрицателен резултат:

до 3 седмици след инфекцията;
На последен етапСПИН с ниска имунна система;
поради неправилна подготовка на кръвта.

Ако резултатът е положителен, тогава пациентът е заразен. В този случай се осъществява информационна сигурност. Невярно положителен резултатпоказва наличието на съпътстващи заболявания и неправилна подготовка на кръвта. Ако тестът е показан за бременни жени, тогава в събрания материал лекарят може да идентифицира неспецифични антитела, чието производство не е свързано с вируса. Събраният материал се изследва в референтна или арбитражна лаборатория. Ако резултатът от повторния тест е отрицателен, тогава първият резултат е грешен. В този случай информационната сигурност не се осъществява.

Провеждане на имуноблотинг

Лечението на СПИН се предписва при положителен резултат имуноблотинг. Този диагностичен метод се извършва с нитроцелулозна лента, върху която се прилагат вирусни протеини. За IB се използва венозна кръв, която след това се обработва. Протеините, открити в суроватката, се разделят на групи въз основа на техния заряд и молекулно тегло. За извършване на този процес се използва специално оборудване.

Ако в тестовия материал има антитела срещу вируса, на лентата се появяват съответните линии. Положителният IB показва, че пациентът е заразен с HIV. Съмнителен резултат се открива в началните етапи на инфекция, с туберкулоза и онкология, както и при бременни жени. В такива случаи се препоръчва повторен IS.

Неопределен IB резултат показва наличието на един или повече протеини към вируса в имуноблота. Подобна картина се наблюдава при скорошна инфекция, когато в кръвта има малко количество антитела срещу инфекцията. В този случай информационната сигурност ще бъде положителна след известно време. Несигурният резултат от това изследване може да се дължи на липсата на HIV инфекция при хепатит, хронични метаболитни заболявания и по време на бременност. В този случай IB ще стане отрицателен или специалистите ще идентифицират причината за несигурния резултат при пациента.

PCR изследване

Защитната система е засегната поради въвеждането на вируса в човешкото тяло. За инкубационен периодтипичен период от 3 месеца. Ето защо, след сексуален контакт с партньор, заразен с HIV, се препоръчва да се подложи на PCR диагностика. Това ще ви позволи да определите РНК на вируса. Периодът, през който се препоръчва да се подложи на такова изследване, е 8-24 месеца.

За окончателна диагнозаПоказано е редовно кръводаряване за ХИВ (веднъж на всеки 3 месеца). Поради високата чувствителност този прегледви позволява да откриете вируса 10 дни след заразяването. Фалшив положителен резултат с PCR може да се получи и ако има друга инфекция в тялото на пациента. PCR изследванеСчита се за скъпа процедура, тъй като изисква специално оборудване.

PCR се предписва за откриване на вируса при следните лица:

новородено, родено от ХИВ-инфектирана майка;
пациенти със съмнителна IB.

Тази техника е показана и за проследяване на концентрацията на вируса в кръвта и изследване на донорска кръв.

Бързи методи за изследване

ДА СЕ съвременни методиЕкспертите се позовават на бързите тестове за диагностициране на СПИН. Разшифроването им ще отнеме 10-15 минути. Имунохроматографските тестове, базирани на капилярен поток, дават точни резултати. Такива системи за тестване са представени под формата на специални ленти, върху които се прилага кръв или слюнка. Ако вирусът е наличен, след 10 минути на теста се появяват 2 ивици:

контрол;
оцветени.

В този случай резултатът от теста е положителен характер. Отрицателният резултат се показва от появата на една контролна линия. За потвърждаване на получения резултат се извършва информационна сигурност. Въз основа на общи данни лекарят поставя диагноза и предписва лечение.

Можете да откриете вируса у дома. За тази цел се използват специални експресни комплекти. OraSure Technologies1 е система, разработена в САЩ. Ако след изследването се установи положителен резултат, пациентът се препоръчва да се подложи пълен прегледв медицинския център.

Преглед на детето

Спешно се изследват новородените от заразени майки. Серологичните техники не могат точно да открият вируса при деца на възраст 5-18 месеца. Но резултатът от такова проучване е важен при провеждането на информационна сигурност.

Инфекцията при деца може да бъде открита чрез PCR. ДНК на вируса се открива от специалист при деца през първия месец от живота. За да се определи концентрацията на РНК на патогена, специалистите определят провируса на вируса на имунната недостатъчност. За изследването лекарят използва цяла кръв или изсушено петно от кръв. Материалът се поставя в епруветка с консервант EDTA (съотношение 1:20). Пробата трябва да се съхранява при температура не по-висока от 8°C (за 2 дни). Не се допуска замразяване на материала.

За да се получи проба от суха кръв, цялата течност се нанася върху специална хартия. Пробата може да се съхранява при температури под 8°C. Картите се ползват 8 месеца. Новородено дете трябва да бъде прегледано, вземайки материал за изследване, в следните периоди:

48 часа след раждането;
на възраст 2 месеца след раждането;
3-6 месеца след раждането.

Ако лекарят идентифицира гена на ХИВ провируса няколко часа след раждането на бебето, тогава бебето е било заразено вътреутробно. Можете да се заразите с вируса по време на раждане или кърмене. Резултати, които показват наличие на вирусна ДНК в 2 проби, показват развитие на СПИН при детето. Диспансерно наблюдениене се изисква, ако резултатите от PCR са отрицателни 4 месеца след раждането на бебето.

Ако резултатът от теста е отрицателен, но има симптоми на СПИН, тогава се препоръчва да се консултирате с лекар. Такава клиника може да бъде провокирана от други заболявания. Тестването се счита за единственият и 100% метод за диагностициране на вируса. Дори квалифицирани и опитни специалисти не могат да идентифицират вируса по неговите симптоми.

Ако след известно време резултатите на пациента са отрицателни, тогава в тялото няма ХИВ.

Това не отчита симптомите. Но подобни клинична картинаможе да бъде свързано със СПИН фобия. В този случай е необходима помощта на психолог. Ако е необходимо, на детето или възрастен се предписва подходящо лечение.

Лабораторната диагностика играе решаваща роля при диагностицирането на ХИВ инфекцията, която се състои в откриване на антитела срещу ХИВ в кръвта с помощта на метода ELISA, последвано от потвърждаване на положителни резултати с помощта на метода IB. Този метод за диагностициране на HIV инфекцията позволява идентифицирането на заразени с HIV лица с 99% ефективност.

Показания за използване на различни лабораторни тестове и характеристики на интерпретация на резултатите

Понастоящем комплекти реагенти от трето и четвърто поколение, базирани на метода ELISA, се използват за етапа на скрининг на диагностика на HIV инфекция. Отличителна чертаТестовете от четвърто поколение са в състояние едновременно да откриват хипертония (p24) и общи антитела, докато тестовете от трето поколение позволяват определянето само на антитела. Когато е възможно, трябва да се даде предпочитание на тестовете от четвърто поколение поради по-високите им стойности диагностична чувствителности способността за откриване на инфекция при индивиди по време на серологичния прозорец.

Отрицателен резултат при откриване на антитела към ХИВ метод ELISA не винаги показва липсата на инфекция. Сериозен проблемпредставляват онези случаи, когато тестът е извършен по време на серологичния прозорец, т.е. в първите седмици след инфекцията, когато все още не са разработени достатъчни количества антитела срещу HIV. За някои индивиди серологичният прозорец може да продължи няколко месеца, така че ако има доказателства за излагане на ХИВ, повторното изследване обикновено се извършва след 2-3 месеца. Фалшиво-отрицателни резултати от откриване на антитела срещу HIV чрез ELISA могат да бъдат получени в терминален стадийзаболяване, характеризиращо се с тежко увреждане имунна системас дълбоко нарушениеПроцес на образуване на AT.

Положителният резултат от откриването на AT с помощта на ELISA показва вероятността от заразяване с HIV инфекция, но понякога този резултат може да бъде фалшиво положителен, например, ако човек има тумори, алергични заболявания, по време на бременност, по време на автоимунни заболявания, значителни промени в показателите биохимични изследваниякръв, число хронични болести. В такива случаи са необходими допълнителни изследвания в експертна лаборатория.

В случай на получаване на положителен резултат от откриване на антитела срещу HIV чрез ELISA, е необходимо неговото потвърждение. На първия етап на потвърждение анализът се повтаря в същата тестова система в две ямки - това елиминира технически грешки. Ако резултатът се потвърди, определянето на AT чрез ELISA в серума на пациента се повтаря, като се използват два референтни комплекта реагенти. Ако се получи положителен резултат при поне едно от тези изследвания, се предприема третият етап на потвърждение: IB изследване, което дава възможност за откриване на антитела към отделни HIV антигенни протеини.

Резултатите, получени чрез метода за информационна сигурност, се интерпретират като положителни, съмнителни и отрицателни. Резултатите се считат за отрицателни, ако тестовият серум не съдържа антитела към нито един от антигените на HIV или има слаба реакция с протеина p17. Най-убедителната причина за положителна реакцияе откриването на антитела срещу протеини на обвивката на HIV (гликопротеини gp41, gp120, gp160). Резултатът се счита за положителен, ако се открият антитела срещу всеки два HIV гликопротеина. Ако има реакция само с един от протеините на обвивката, в комбинация с или без реакция с други протеини, резултатът се счита за съмнителен, в който случай се препоръчва да се проведат тестове за откриване на антиген p24 или HIV ДНК/РНК. Ако се открие p24 антиген или HIV ДНК/РНК, повторното изследване с помощта на IB се извършва 2 седмици след получаване на първия неопределен резултат и след това на всеки 2 седмици до получаване на положителен резултат при потвърдителния тест. Ако 6 месеца след първия преглед отново се получат неопределени резултати и пациентът няма идентифицирани рискови фактори за инфекция и клинични симптоми HIV инфекция, резултатът се счита за фалшиво положителен.

Често, след 1–3–6 месеца от момента на получаване на съмнителен резултат, антителата срещу всички HIV Ags се появяват в кръвния серум едно след друго. В този случай съмнителният резултат е доказателство начална фазаХИВ инфекции. В някои случаи се наблюдават съмнителни резултати от IB при неинфектирани лица, чиито тела съдържат антитела, подобни на истинските антитела срещу HIV.

Един от косвените признаци на HIV инфекция е селективно намаляване на CD4+ Т хелперните клетки поради факта, че HIV има тропизъм към CD4 клетъчния рецептор. Въпреки това, тези промени може да липсват на определени етапи от ХИВ инфекцията, да имат индивидуални вариации при различните пациенти и да се появят и при други заболявания. Така при възрастни пациенти в латентния стадий на заболяването броят на CD4+ лимфоцитите обикновено надвишава 0,5. 109/l, което отговаря на стойностите при здрави хора.

За ранна диагностикаизползва се тест за HIV инфекция. Методите за диагностициране на инфекция непрекъснато се подобряват, тъй като основните симптоми на заболяването не се появяват веднага, маскирайки се като други патологии. Освен това, когато лабораторни изследванияпроцентът на фалшиво положителни и фалшиво отрицателни резултати е висок.

Тестовите системи използват кръв за определяне на ХИВ, по-рядко използват урина и изстъргвания от устната лигавица.

Етапи на диагностициране на ХИВ инфекция при възрастни:

Предварителен – скрининг, при който се избират кандидати от рискови групи (предполагаемо заразени);

Референтни

Утвърждаване – експертен етап.

От етап на етап сложността, трудоемкостта и цената на изследователските методи се увеличават.

Термини, използвани при диагностицирането на ХИВ:

Антиген – HIV или негови части (капсула, ензими, липиди, протеини).

Антитела - клетки на имунната система, произведени от тялото срещу въвеждането на вирусна инфекция.

Сероконверсията е имунен отговор на защитната система срещу активното възпроизвеждане на вируса. Веднага след навлизането в тялото ХИВ клетките започват активно да се делят. В отговор концентрацията на антитела се увеличава в продължение на няколко седмици. Когато достигнат определено ниво (сероконверсия), тестовите системи са достъпни за диагностика. След като концентрацията на вируса спадне, нивото на антителата спада.

„Период на прозорец“ - периодът от момента на инфекцията до настъпването на сероконверсия отнема от 1,5 до 3 месеца. Заразен човекпрез този период е особено опасно като носител на инфекция, тъй като тестът за ХИВ показва фалшиво отрицателен резултат, въпреки че рискът от предаване на болестта е изключително висок.

По време на скрининга се извършва ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) за определяне на общите антитела срещу HIV-1 и HIV-2. Показва точни резултати не по-рано от 3-6 месеца след заразяването, въпреки че има изключения: може да открие антитела срещу ХИВ 3-5 седмици след опасен контакт.

Тестовите системи от четвърто поколение са най-точни. В допълнение към антителата към вируса, те също са в състояние да определят антигена към ХИВ (p-24-Capsid), което прави възможно откриването на вируса дори в „периода на прозореца“, преди появата на антитела.

Високата цена на такива системи за тестване принуждава много страни да използват системи от трето и дори второ поколение, които откриват само наличието на антитела.

Такива системи дават фалшиви положителни резултати, когато следните състояния:

Инфекция по време на бременност;

Ако резултатът от ензимния имуноанализ е положителен, те преминават към следващия етап на диагностика.

Референтен етап на диагностика на ХИВ

Използва се двойна диагностика с по-чувствителни тестови системи. Два положителни резултата са причина за преминаване към следващо ниво на диагностика.

Експертен етап – имуноблотинг

На този етап се определят антителата към отделните протеини на вируса на човешката имунна недостатъчност.

Етапи на експертния етап:

Разрушаване на вируса в отделни антигени с помощта на електрофореза.

Трансфер на антигени чрез метода на блотиране върху специални ленти с предварително покрити протеини, характерни за HIV.

Записване на реакцията, която възниква, ако в кръвта на пациента има антитела срещу антигени.

Има малък риск от грешка - фалшиво отрицателен резултат. Възможно е, ако изследването се проведе в терминалния стадий на заболяването или по време на „периода на прозореца“.

Използва се в комбинация с други тестове PCR метод(полимеразна верижна реакция). Той е различен свръхчувствителносткъм вируса, което може да доведе до голяма част от фалшиво положителни резултати.

Диагностика при деца, чиито майки са HIV-инфектирани

Тестването на такива деца има свои собствени характеристики - антителата на майката срещу ХИВ може да присъстват в кръвта на детето, което е проникнало през плацентата по време на раждането. Те могат да продължат до 15-18 месеца от раждането на бебето. ако няма такива антитела, това не е сто процента доказателство, че детето не е заразено с вируса.

Диагнозата ХИВ инфекция може да се постави в лабораторията чрез откриване на специфични антитела срещу вируса. С много други вирусни заболяванияналичието на антитела показва минала инфекция. Въпреки това, тъй като ХИВ инфекцията се развива хронична инфекция, серопозитивните индивиди са не само активно заразени, но и инфекциозни.

Серологичен тест за определяне на наличието на HIV антитела става широко достъпен през 1985 г. Най-често използваният метод е ензимно-свързаният имуносорбентен анализ (ELISA), но се разработват и други видове тестове за антитела, като тестове, базирани на аглутинация на частици и "точка" ELISA. Тестовете се извършват бързо и лесно и не изискват сложно оборудване.

Въпреки че горните тестове в висока степенчувствителни, те също могат да дадат фалшиви резултати и положителният резултат трябва да бъде допълнително потвърден с помощта на допълнителен тест като имуноблотинг (Western blot) или индиректна имунофлуоресценция.

Възможно е също така директно откриване на HIV антигени (вирус или вирусен протеин) в спермата; индустрията произвежда необходими комплектиреактиви. Тези тестове първоначално са разработени като опит да се осигури лабораторен индикатор за наличието на инфекция по време на прозореца между инфекцията и производството на антитела, който обикновено продължава от 4 до 16 седмици. Анализите за откриване на антиген сега се използват по-широко за наблюдение на резултатите антивирусно лечениеболни от СПИН.

Програми за скрининг за HIV инфекция (т.е. скрининг за цялото население или отделни групинаселение, за да се определи инфекцията или наличието на заболяване) може да помогне:

предотвратяване на предаването на вируса чрез кръв и кръвни продукти, сперма, трансплантация на тъкани или органи;
получаване на епидемиологична информация за разпространението и честотата на ХИВ.

Всеки път, когато се обсъжда програма за скрининг, всички проблеми, идентифицирани в изявлението на СЗО (Приложение 4), трябва да бъдат ясно посочени и разгледани. Лошо проектираните и лошо изпълнени програми могат да навредят на общественото здраве и да разхищават ресурси. Посрещането на нуждите на общественото здраве и зачитането на правата на човека се гарантира най-добре чрез внимателно разглеждане на набор от технологични, логистични, социални, правни и етични въпроси, преди да се вземе решение за продължаване на програма за скрининг.

Задължителният скрининг за ХИВ има много ограничена роля в програмите за превенция и контрол на СПИН.

Рутинният скрининг на донорите помага за предотвратяване на предаването на ХИВ чрез кръв, сперма или други клетки, тъкани и органи. Част от този скрининг включва информирано съгласие от лицето и консултации, при които трябва да се гарантира поверителността.

Идентифицирането на серопозитивни лица чрез скрининг може да определи епидемиологичния тип на ХИВ, което е необходимо за оценка на райони и популации, нуждаещи се от специални образователни програми или други услуги за превенция. Тези проучвания трябва да се провеждат с помощта на методи, които не компрометират човешките права. Те трябва да се извършват по време на консултация, или със съгласието на информирано лице, при запазване на поверителността, или по анонимен, безплатен начин (без записване на друга лична информация).

Доброволното изследване за СПИН може да бъде част от здравните грижи за предполагаеми заболявания, свързани с ХИВ, и може да се прилага във връзка с информация, образование, консултиране и други услуги за подкрепа за насърчаване на устойчива промяна в поведението. При доброволното изследване за ХИВ получаването на съгласие от информирано лице и възможността за консултиране при запазване на поверителността са много важни. Услугите за доброволно изследване за ХИВ трябва да бъдат широко достъпни като част от програмите за превенция и контрол на СПИН и достъпът до такива услуги трябва да бъде улеснен.