Alueellisten imusolmukkeiden puhkaisu
Imusolmukkeiden yli oleva iho käsitellään 96-prosenttisella alkoholilla ja 3-5-prosenttisella jodiliuoksella. Sitten vasemman käden 1 ja 2 sormea kiinnittävät imusolmukkeen. Oikea käsi ota steriili ruisku, jossa on muutama tippa isotonista natriumkloridiliuosta, joka ruiskutetaan rinnakkain pituusakseli imusolmuke. Neula työnnetään eri suuntiin solmukapselin vastakkaiseen seinämään ja ruiskun sisältö ruiskutetaan hitaasti. Vasemman käden sormilla imusolmuketta hierotaan kevyesti. Kun neula vedetään hitaasti ulos, ruiskun mäntä siirtyy samanaikaisesti eteenpäin ja imee imusolmukkeen sisällön. Materiaali levitetään lasilevylle (pienellä määrällä materiaalia lisätään tippa isotonista natriumkloridiliuosta), peitetään peitelasilla. Natiivilääkkeen tutkimus suoritetaan pimeässä näkökentässä valo-optisella mikroskoopilla, jossa on tummakenttäkondensaattori (objektiivi 40, 7x, 10x tai 15x). Vaaleita treponemoja löytyy myös värjätyistä valmisteista. Romanovsky-Giemsan mukaan värjättyinä vaaleat treponeemit värjätään vaaleanpunaisiksi, Fontanin ja Morozovin mukaan ruskeiksi (mustaksi), Burri-menetelmän mukaan värjäytymättömät treponeemit havaitaan tummalla taustalla.Serologinen diagnoosi
Tärkeys kupan diagnosoinnissa, hoidon tehokkuuden arvioinnissa, parannuskriteerin määrittämisessä, piilevien, vastustuskykyisiä muotoja liittyneenä tavanomaisiin (klassisiin) ja spesifisiin serologisiin reaktioihin. Vakio- tai klassiset serologiset testit (SSR:t) sisältävät:- Wassermanin reaktio (RV),
- Kahnin ja Sachs-Vitebskyn sedimenttireaktiot (sytokoliset),
- reaktio lasiin (pikamenetelmä),
- treponema pallidum immobilisaatioreaktio (RIBT),
- immunofluoresenssireaktio (RIF).
Wassermanin reaktio (RV)
- kehitti A. Wasserman yhdessä A. Neisserin ja C. Bruckin kanssa vuonna 1906. Wasserman-reaktio perustuu komplementin kiinnittymisen ilmiöön (Borde-Gangu-reaktio) ja mahdollistaa anti-lipidivasta-aineiden (reagins) määrityksen. Mukaan moderneja ideoita, Wasserman-reaktiossa määritetään vasta-aineita makro-organismien lipideille, ei vaalealle treponemalle, ja reaktio paljastaa autoimmuuniprosessin, joka johtuu makro-organismikudosten denaturoitumisesta vaalean treponeeman aiheuttaman lipoproteiinikompleksin (konjugaatti) muodostumisen myötä. lipidit (hapteenit) ovat määrääviä tekijöitä.Yleensä RV sijoitetaan kahdella tai kolmella antigeenillä. Yleisimmin käytettyjä ovat erittäin herkkä kardiolipiiniantigeeni (kolesterolilla ja lesitiinillä rikastettu naudan sydänuute) ja treponemaalinen antigeeni (anatogeenisen viljellyn treponema pallidum -sonicoitu suspensio). Yhdessä potilaan veriseerumin reagiinien kanssa nämä antigeenit muodostavat immuunikompleksin, joka pystyy adsorboimaan ja sitomaan komplementtia. Muodostuneen kompleksin (reagiinit + antigeeni + komplementti) visuaaliseen määrittämiseen käytetään hemolyyttistä järjestelmää indikaattorina (seos pässin erytrosyyttejä hemolyyttisen seerumin kanssa). Jos komplementti sitoutuu reaktion ensimmäisessä vaiheessa (reagiinit + antigeeni + komplementti), hemolyysiä ei tapahdu - erytrosyytit saostuvat helposti havaittavaksi sakaksi (PB-positiivinen). Jos komplementti ei ole sitoutunut vaiheessa 1, koska testiseerumissa ei ole reagiinia, hemolyyttinen järjestelmä käyttää sitä ja hemolyysi tapahtuu (PB-negatiivinen). Hemolyysin vakavuusaste RV:n yhteydessä arvioidaan plussalla: hemolyysin täydellinen puuttuminen ++++ tai 4+ (RV jyrkästi positiivinen); vasta alkanut hemolyysi +++ tai 3+ (PB-positiivinen); merkittävä hemolyysi ++ tai 2+ (PB heikosti positiivinen); käsittämätön kuva hemolyysistä ± (RV epäilyttävä); täydellinen hemolyysi - (Wassermann-reaktio on negatiivinen).
RV:n kvalitatiivisen arvioinnin lisäksi käytettävissä on kvantitatiivinen formulaatio, jossa on erilaisia seerumilaimennoksia (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Reagiinien tiitteri määräytyy maksimilaimennuksella, joka antaa silti jyrkästi positiivisen (4+) tuloksen. RV:n kvantitatiivinen formulointi on tärkeää joidenkin syfiliittisten infektioiden kliinisten muotojen diagnosoinnissa sekä hoidon tehokkuuden seurannassa. Tällä hetkellä Wasserman-reaktio on lavastettu kahdella antigeenillä (kardiolipiini ja treponemaalinen Reiter-kanta). Yleensä RV muuttuu positiiviseksi 5-6 viikon kuluttua tartunnasta 25-60 %:lla potilaista, 7-8 viikossa - 75-96 %:lla, 9-19 viikolla - 100 %:lla, vaikka viime vuodet joskus ennemmin tai myöhemmin. Samaan aikaan reagiinien tiitteri nousee vähitellen ja saavuttaa maksimiarvon (1:160-1:320 ja enemmän) yleistyneiden ihottumien ilmaantuessa (sekundaarinen tuore kuppa). Kun RV on positiivinen, diagnosoidaan primaarinen seropositiivinen kuppa.
Toissijaisen tuoreen kanssa ja toissijainen toistuva kuppa, RV on positiivinen 100 %:lla potilaista, mutta negatiivinen tulos voidaan havaita immuunipuutteellisilla aliravituilla potilailla. Myöhemmin reagiinien tiitteri laskee vähitellen ja toissijaisessa toistuvassa kuppassa ei yleensä ylitä arvoa 1:80-1:120.
Kolmannen asteen kupan kanssa RV on positiivinen 65-70 %:lla potilaista ja yleensä havaitaan alhainen reagiinitiitteri (1:20-1:40). Syfiliksen myöhäiset muodot (syfilis sisäelimet, hermosto) positiivinen RV havaitaan 50-80 %:ssa tapauksista. Reagin-tiitteri vaihtelee välillä 1:5 - 1:320.
Latentti kuppa positiivinen RV havaitaan 100 %:lla potilaista. Reagiinitiitteri on 1:80 - 1:640 ja myöhäisellä piilevällä kuppalla 1:10 - 1:20. Reagiinien tiitterin nopea lasku (täydelliseen negatiivisuuteen asti) hoidon aikana osoittaa hoidon tehokkuutta.
Wassermannin reaktion haitat- herkkyyden puute alkuvaiheessa primaarinen kuppa on negatiivinen). Se on myös negatiivinen 1/3:lla potilaista, jos heitä on aiemmin hoidettu antibiooteilla, potilailla, joilla on tertiaarinen aktiivinen kuppa, johon liittyy iho- ja limakalvovaurioita, nivellaitteistoa, sisäelimiä, keskushermostoa, myöhään synnynnäistä kuppaa .
Spesifisyyden puute- Wassermanin reaktio voi olla positiivinen henkilöillä, jotka eivät ole aiemmin sairastuneet ja jotka eivät kärsi kuppasta. Erityisesti vääriä positiivisia (epäspesifisiä) RV-tuloksia havaitaan potilailla, jotka kärsivät systeemisestä lupus erythematosuksesta, spitaalista, malariasta, pahanlaatuisista kasvaimista, maksavaurioista, laajoista sydäninfarkteista ja muista sairauksista, ja joskus täysin terveillä ihmisillä.
Lyhytaikainen väärä positiivinen Wasserman-reaktio havaitaan joillakin naisilla ennen synnytystä tai sen jälkeen, ihmisillä, jotka käyttävät väärin huumeita, anestesian jälkeen, alkoholin nauttimista. Yleensä väärä positiivinen RV ilmentyy heikosti, usein matalalla reagiinitiitterillä (1:5-1:20), positiivisella (3+) tai heikosti positiivisella (2+). Massaserologisissa tutkimuksissa väärien positiivisten tulosten esiintymistiheys on 0,1-0,15 %. Herkkyyden puutteen voittamiseksi he käyttävät kylmäasetusta (Collard-reaktio) ja samalla se asetetaan muiden serologisten reaktioiden kanssa.
Kahnin ja Sachs-Vitebskyn sedimenttireaktiot
Wasserman-reaktiota käytetään yhdessä kahden kanssa sedimenttireaktiot (Kahn ja Zaks-Vitebsky), jonka tuotannon aikana valmistetaan väkevämpiä antigeenejä. Express-menetelmä (mikroreaktio lasilla) - viittaa lipidireaktioihin ja perustuu saostumisreaktioon. Se asetetaan spesifisen kardiolipiiniantigeenin kanssa, josta 1 tippa sekoitetaan 2-3 tippaan tutkittua veriseerumia erityisen lasilevyn kuoppiin.Etu- vastauksen saamisen nopeus (30-40 minuutissa). Tulokset arvioidaan sakan määrän ja hiutaleiden koon mukaan. Vakavuus määritellään CSR - 4+, 3+, 2+ ja negatiiviseksi. On huomattava, että vääriä positiivisia tuloksia havaitaan useammin kuin RV:ssä. Express-menetelmää käytetään pääsääntöisesti kupan massatutkimuksissa, kliinisissä diagnostisissa laboratorioissa, somaattisissa osastoissa ja sairaaloissa suoritettavissa tutkimuksissa. Express-menetelmän tulosten perusteella kupan diagnoosi on kielletty, sen käyttö raskaana oleville naisille, luovuttajille ja myös hoidon jälkeiseen valvontaan on suljettu.
Treponema pallidum immobilisaatioreaktio (RIBT)
Treponema pallidum immobilisaatioreaktio (RIBT)- ehdottivat vuonna 1949 R.W.Nelson ja M.Mayer. Se on tarkin kupan diagnostinen testi. Asetuksen monimutkaisuus ja korkeat kustannukset rajoittavat kuitenkin sen käyttöä. Potilaiden veriseerumissa määritetään videospesifiset vasta-aineet (immobilisiinit), jotka johtavat vaalean treponeeman liikkumattomuuteen komplementin läsnä ollessa. Antigeeni on elävä patogeeninen treponema pallidum, joka on eristetty kuppatartunnan saaneista kaneista. Mikroskoopin avulla lasketaan immobilisoitujen (immobilisoitujen) vaaleat treponeemojen lukumäärä ja arvioidaan RIBT:n tulokset: vaaleiden treponeemojen immobilisaatio 51 - 100 % on positiivinen; 31 - 50% - heikosti positiivinen; 21 - 30% - epäilyttävä; 0 - 20 % - negatiivinen.RIBT:llä on väliä milloin erotusdiagnoosi erottamaan väärät positiiviset serologiset reaktiot kupan aiheuttamista reaktioista. Muuttuu positiiviseksi myöhemmin kuin RV, RIF ja siksi diagnostiikkaa varten erilaisia muotoja kuppaa ei käytetä, vaikka kupan sekundaarivaiheessa se on positiivinen 85-100 %:lla potilaista.
Syfiliksen kolmannella jaksolla, johon liittyy sisäelinten, tuki- ja liikuntaelimistön ja hermoston vaurioita, RIBT on positiivinen 98-100 %:ssa tapauksista ( RV on usein negatiivinen).
On muistettava, että RIBT voi osoittautua vääräksi positiiviseksi, jos testiseerumissa on treponemosidisia lääkkeitä (penisilliini, tetrasykliini, makroliitit jne.), jotka aiheuttavat vaalean treponeeman epäspesifisen immobilisoinnin. Tätä tarkoitusta varten veri RIBT:lle tutkitaan aikaisintaan 2 viikkoa antibioottien ja muiden lääkkeiden lopettamisen jälkeen.
RIBT, kuten RIF, on hitaasti negatiivinen hoidon aikana, joten sitä ei käytetä kontrollina hoidon aikana.
Immunofluoresenssireaktio (RIF)
Immunofluoresenssireaktio (RIF)- kehitti vuonna 1954 A. Coons, ja sitä käytti ensimmäisen kerran syfiliittisen infektion diagnosoimiseen Deacon, Falcone, Harris vuonna 1957. RIF perustuu epäsuoraan menetelmään fluoresoivien vasta-aineiden määrittämiseksi. Kohdistuksen antigeeni on kudospatogeeninen vaalea treponema, joka on kiinnitetty lasilevyille, joille levitetään testiseerumia. Jos testiseerumi sisältää IgM:ään ja IgG:hen liittyviä anti-treponemaalisia vasta-aineita, ne sitoutuvat voimakkaasti antigeeniin - treponemaan, joka havaitaan fluoresoivalla mikroskoopilla käyttämällä anti-lajien ("anti-ihmisen") fluoresoivaa seerumia.RIF tulokset otetaan huomioon valmisteen vaalean treponeman hehkun voimakkuudessa (kelta-vihreä hehku). Jos seerumissa ei ole anti-treponemaalisia vasta-aineita, vaaleita treponeemoja ei havaita. Vasta-aineiden läsnä ollessa havaitaan vaalean treponeman hehku, jonka aste ilmaistaan plussina: 0 ja 1+ - takaisku; 2+ - 4+ - positiivinen.
RIF viittaa ryhmätreponemaalisiin reaktioihin, ja se asetetaan testiseerumin laimennokseen 10- ja 200-kertaisesti (RIF-10 ja RIF-200). RIF-10:tä pidetään herkempänä, mutta epäspesifiset positiiviset tulokset putoavat usein kuin RIF-200:lla (spesifisyys on korkeampi). Yleensä, RIF muuttuu positiiviseksi aikaisemmin kuin RW- positiivinen primaarisessa seronegatiivisessa kupassa 80 %:lla potilaista, 100 %:lla kupan sekundaarivaiheessa, aina positiivinen piilevässä kupassa ja 95-100 % tapauksista myöhäisissä muodoissa ja synnynnäisessä kupassa.
RIF-spesifisyys lisääntyy, kun testiseerumia on esikäsitelty sorbentti-ultraääni-treponemaalisella antigeenillä, joka sitoo ryhmävasta-aineita (RIF - abs).
Indikaatioita RIBT:n ja RIF:n esittämiseen- piilevän kupan diagnoosi lipidireaktioiden kompleksin spesifisyyden vahvistamiseksi syfiliittisen infektion tapauksessa positiivisen RV:n perusteella. Positiivinen RIBT ja RIF ovat todisteita piilevasta kuppasta. Väärällä positiivisella asuntoautolla erilaisia sairauksia(systeeminen lupus erythematosus, pahanlaatuiset kasvaimet jne.) ja jos RIBT:n ja RIF:n toistetut tulokset ovat negatiivisia, tämä osoittaa RV:n epäspesifisen luonteen. Epäily sisäelinten, tuki- ja liikuntaelimistön, hermoston myöhäisistä syfiliittisistä vaurioista negatiivisen RV:n läsnä ollessa potilailla. Primaarisen seronegatiivisen kupan epäily, kun potilailla, joilla on toistuvia tutkimuksia erittymisestä eroosion pinnasta (haava) ja puhkaisu laajentuneista alueellisista imusolmukkeista, vaaleaa treponemaa ei havaita - tässä tapauksessa asetetaan vain RIF - 10.
Kun tutkitaan henkilöitä, joilla on negatiivinen RV joilla on ollut pitkäaikaisia seksuaalisia ja kotikontakteja kuppapotilaiden kanssa, kun otetaan huomioon todennäköinen mahdollisuus hoitaa heitä lähimenneisyydessä antisyfilisillä lääkkeillä, jotka aiheuttivat RV-negatiivisia. Entsyymi-immunosorbenttimääritys (ELISA, ELISA - entsyymikytkentäinen immunosorbenttimääritys) - menetelmän ovat kehittäneet E. Engvall et ai., S. Avrames (1971). Essenssi koostuu kiinteän faasin kantajan pinnalle adsorboidun syfiliittisen antigeenin yhdistämisestä tutkitun veriseerumin vasta-aineen kanssa ja spesifisen antigeeni-vasta-ainekompleksin havaitsemisesta käyttämällä entsyymileimattua anti-lajien immuuniveriseerumia. Tämän avulla voit arvioida ELISA-tuloksia visuaalisesti substraatin värin muutosasteen perusteella konjugaatin osana olevan entsyymin vaikutuksesta. Epäluotettavat ELISA-tulokset voivat johtua ainesosien riittämättömästä laimennuksesta, lämpötila- ja aikasääntöjen rikkomisesta, liuosten pH-arvojen epäjohdonmukaisuudesta, laboratoriolasien kontaminaatiosta ja väärästä kantoaineen pesutekniikasta.
Passiivinen hemagglutinaatioreaktio (RPHA)
Ehdotettu kupan diagnostiseksi testiksi T. Rathlev (1965.1967), T. Tomizawa (1966). Reaktion makromodifikaatiota kutsutaan nimellä TRHA, mikromodifikaatio on MHA-TR, automatisoitu versio on AMNA-TR, reaktio polyurea-makrokapseleilla erytrosyyttien sijaan on MSA-TR. RPHA:n herkkyys ja spesifisyys ovat samanlaisia kuin RIBT:n ja RIF:n, mutta RPHA on vähemmän herkkä kupan varhaisissa muodoissa kuin RIF-abs ja herkempi myöhäisissä muodoissa, synnynnäisen kupan kanssa. RPGA on laadullinen ja määrällinen versio.Verenottotekniikka serologisia reaktioita varten
RV-, RIF-, RIBT-tutkimuksessa veri otetaan kyynärlaskimosta tyhjään mahaan tai aikaisintaan 4 tuntia aterian jälkeen steriilillä ruiskulla tai yhdellä neulalla (painovoimalla). Näytteenottopaikalla iho esikäsitellään 70 % alkoholilla. Ruisku ja neula tulee huuhdella isotonisella natriumkloridiliuoksella. 5-7 ml testiverta kaadetaan puhtaaseen, kuivaan, kylmään koeputkeen. Koeputkeen liimataan tyhjä paperi, jossa on potilaan sukunimi, nimikirjaimet, sairaushistorian tai avohoitokortin numero, verinäytteenottopäivämäärä. Verenoton jälkeen putki asetetaan jääkaappiin lämpötilajärjestelmä+4°+8°C seuraavaan päivään. Seuraavana päivänä seerumi tyhjennetään tutkimusta varten. Jos verta ei käytetä seuraavana päivänä, seerumi on valutettava hyytymisestä ja säilytettävä jääkaapissa enintään 1 viikon ajan. RIBT-tutkimusta varten koeputken on oltava erityisesti valmistettu ja steriili. Mikäli tutkimukseen tarvittavia verenottoa koskevia sääntöjä rikotaan, ehtojen noudattamatta jättäminen voi johtaa tulosten vääristymiseen.Ei ole suositeltavaa ottaa verta tutkimukseen syömisen jälkeen, alkoholin, erilaisten lääkkeitä, erilaisten rokotteiden käyttöönoton jälkeen, aikana kuukautiskierto naisten keskuudessa.
Express-menetelmän tutkimuksessa verta otettiin sormenpäästä, kuten tehdään ESR:ää varten, mutta verta otetaan 1 kapillaari enemmän. Express-menetelmä voidaan suorittaa myös laskimopunktiolla saadulla veriseerumilla. Jos verikokeita tarvitaan etälaboratorioissa, voidaan veren sijasta lähettää kuivaseerumia (dry drop -menetelmä). Tätä varten seerumi erotetaan seuraavana päivänä veren ottamisen jälkeen hyytymisestä ja vedetään steriiliin ruiskuun 1 ml:n määränä. Sitten seerumi kaadetaan 2 erillisen ympyrän muodossa 6x8 cm:n paksuiselle kirjoituspaperinauhalle (vahapaperi tai sellofaani), jonka vapaaseen reunaan kirjoitetaan tutkittavan sukunimi, nimikirjaimet ja verinäytteenottopäivämäärä. paperi. Seerumipaperi suojataan suoralta auringonvalolta ja jätetään huoneenlämpöön seuraavaan päivään. Seerumi kuivuu pieniksi ympyröiksi kiiltävän kellertävän lasimaisen kalvon muodossa. Sen jälkeen paperinauhat, joissa on kuivattua seerumia, rullataan rullalle kuin lääkejauhetta ja lähetetään laboratorioon, jossa ilmoitetaan diagnoosi ja mihin tarkoitukseen sitä tutkitaan.
Serologinen vastustuskyky
Osalla (2 % tai enemmän) kuppapotilaista täysimittaisesta antisyfiliittisestä hoidosta huolimatta negatiiviset serologiset reaktiot hidastuvat (poistuvat) hoidon päättymisen jälkeen jopa 12 kuukauden ajan tai kauemmin. On olemassa niin kutsuttu serologinen resistenssi, jota on viime vuosina havaittu usein. Serologisen resistenssin muotoja on:- Totta(absoluuttinen, ehdoton) - on tarpeen suorittaa lisäsyfiliittistä hoitoa yhdistettynä epäspesifiseen hoitoon kehon immuunivoimien lisäämiseksi.
- Suhteellinen- täyden hoidon jälkeen vaaleat treponeemat muodostavat kystoja tai L-muotoja, jotka ovat kehossa heikosti virulenssissa ja sen seurauksena lisähoitoa ei muuta serologisten reaktioiden, erityisesti RIF:n ja RIBT:n, indikaattoreita.
Pseudo-resistanssi- Hoidon jälkeen positiivisista serologisista reaktioista huolimatta kehossa ei ole vaaleaa treponemaa. Elimistössä ei ole antigeeniä, mutta vasta-aineiden tuotanto jatkuu, ja ne kiinnittyvät serologisten reaktioiden aikana.
Serologinen vastustuskyky voi kehittyä seuraavista syistä:
- riittämätön hoito ottamatta huomioon taudin kestoa ja vaihetta;
- riittämätön annos ja erityisesti siksi, ettei potilaiden painoa ole otettu huomioon;
- huumeiden käyttöönoton välisen aikavälin rikkomukset;
- vaaleiden treponemien säilyttäminen kehossa täysimittaisesta huolimatta erityistä hoitoa, koska ne ovat vastustuskykyisiä penisilliinille ja muille kemoterapialääkkeille, kun sisäelimissä, hermostossa on piilotettuja vaurioita, imusolmukkeet, joihin ei ole pääsyä antibakteeriset lääkkeet(usein vaaleat treponeemit löytyvät arven kudoksista monta vuotta hoidon päättymisen jälkeen, imusolmukkeissa on joskus mahdollista havaita vaaleat treponeemit 3-5 vuotta antisyfiliittisen hoidon jälkeen);
- suojavoimien vähentäminen erilaisissa sairauksissa ja myrkytyksissä (endokrinopatia, alkoholismi, huumeriippuvuus jne.);
- yleinen uupumus (vitamiini-, proteiini-, rasvapitoinen syöminen).
- mukana epäspesifiset sairaudet sisäelimet, sydän- ja verisuonijärjestelmän häiriöt, reuma, endokriinisen ja hermoston toimintahäiriöt, vakavat krooniset dermatoosit, pahanlaatuiset kasvaimet;
- hermoston vauriot (vakavat vammat, aivotärähdys, henkinen trauma);
- raskaus krooniset myrkytykset alkoholi, nikotiini huumeet; tartuntataudit (malaria, tuberkuloosi, virushepatiitti, punatauti, lavantauti, lavantauti ja uusiutuva kuume).
Laboratoriodiagnostiikka käyttää useita syfilistestejä kerralla saadakseen tarkimman tuloksen. Tämä kestää kauemmin, mutta antaa tarkimman vastauksen.
Useimmiten RIF-analyysin tulos esitetään numeroina. Salauksen purkulla on seuraavat nimitykset:
- terävä positiivinen tulos merkitty 4 plussalla (++++);
- positiivinen tulos osoitetaan 3 plussalla (+++);
- heikosti positiivinen tulos 2 plussaa (++);
- epäilyttävä tulos 1 plus (+);
- negatiivinen tulos on merkitty 1 miinuksella (-).
Kupan RIF-tulos esitetään myös prosentteina, mikä riippuu siihen liittyvien bakteerien määrällisestä indikaattorista:
- negatiivisella tuloksella immobilisaatio jopa 20%;
- heikosti positiivisella tuloksella immobilisaatio vaihtelee 20 - 50 %;
- positiivisella tuloksella immobilisaatio on yli 50 %.
Jos tulos on positiivinen vastaus, se ilmoittaa taudin olemassaolon.
Jos tulos heikosti positiivinen, tämä tarkoittaa yhtä määrää jäljellä olevia vasta-aineita veressä.
Negatiivinen tulos osoittaa vaalean treponeman puuttumisen, mikä tarkoittaa, että potilas on terve.
Klinikallamme kokeneet lääkärit diagnosoivat kupan nopeasti ja suurella mittaustarkkuudella. Olemme siis sosiaalisesti suuntautuneita kaikille väestöryhmille RIF-analyysin kustannukset ovat edullisia. Hinta näkyy nettisivujemme taulukossa.
Kupan serologisessa diagnoosissa on erittäin tärkeää saada luotettava ja tarkka tulos.
Tietyt toimenpiteet toteutetaan tietojen laadun parantamiseksi:
- Testiseerumi laimennetaan 200 kertaa (1:200) väärien positiivisten reaktioiden välttämiseksi. Sitten he sanovat, että se on käynnissä kupan analyysi RIF 200.
- Toisessa versiossa, kun seerumia laimennetaan 1:5, käytetään lisäksi erityistä absorbenttia, joka kerää "ylimääräisiä" vasta-aineita itseensä, jotta ne eivät vääristä tuloksia.
Treponeemojen koot ovat myös tutkijoiden käsissä. Spirokeettien suuret mikrobikappaleet näkyvät selvästi fluoresoivassa mikroskopiassa. Jos ne ovat "kiinnittyneet" seerumin fosforileimattuihin proteiineihin. Standardoidun antigeenin ja seerumin käyttö mahdollistaa RIF:n herkkyyden ja spesifisyyden maksimoimisen kupan diagnosoinnissa.
Yksityiset analyysivaihtoehdot RIF: RIF-absorptio
Yksi vaihtoehtoisia tapoja nimeltään RIF-Abs. Se eroaa tavallisesta tekniikasta tutkitun seerumin alhaisella laimennuksella - 1:5 vs. 1:200, kuten tavallista.
Tiivistetty näyte sisältää paljon aktiivisia proteiinimolekyylejä.
Herkkyyden välttämiseksi ja lisäämiseksi seerumia käsitellään erityisellä imeytysaineella syfiliittisten spirokeettien fragmenteista. Sorbentti kerää liian aktiivisia vasta-aineita päälleen, minkä jälkeen näyte käsitellään teollisella, fosforileimatulla seerumilla. Tämän esivalmistelun ansiosta kaikki tarpeettomat molekyylit, jotka voisivat vaikuttaa testituloksiin, eliminoidaan.
He asettivat sen seuraavien viitteiden mukaan:
- Positiivinen kliinisen hyvinvoinnin taustalla ja infektioriskien puuttuminen historiassa.
- Positiivinen RV potilailla, joilla on kroonisia sairauksia.
- Negatiivinen RV, kun syfilistä epäilyttäviä oireita ilmaantuu.
Ensimmäiset positiiviset tulokset näkyvät jo 15-16 päivää tartunnan jälkeen. Jos positiivinen reaktio muuttuu negatiiviseksi, tämä on merkki kupan täydellisestä parantumisesta. Väärän positiivisen tuloksen todennäköisyys on alle 0,4 %.
Tämä tilanne voi syntyä tutkittaessa syöpäpotilaita, alkoholisteja, raskaana olevia naisia ja immuunihäiriöistä kärsiviä.
Tietty osuus osuu teknisiin virheisiin, koska tuotanto on melko monimutkaista. On tapauksia, joissa on tarpeen erottaa synnynnäinen patologia hankitusta. Voit tehdä tämän, jos etsit erilaisia tyyppejä vasta-aineita potilaan veressä.
Syfilis-luokan M (IgM) vasta-aineet ilmaantuvat pian tartunnan jälkeen ja ovat paljon nopeampia kuin IgG. Voit tunnistaa ne kupan RIF-absorption analyysi IgM. Jos tämän reaktion tulokset ovat positiivisia, voimme puhua äskettäisestä infektiosta. Joten uudelleentartuntatapaukset voidaan erottaa uusiutumisesta tai lapsen infektio synnytyksen jälkeen voidaan havaita.
Tämän RIF-analyysimenetelmän tulosten perusteella he myös päättelevät, että varhaisen kupan hoito on tehokasta.
Jos epäilet kuppaa, ota yhteyttä kokeneeseen venereologiin.
Kuppaan liittyy lukuisia oireita ja on suuri määrä kliiniset muodot. Sen tunnistaminen perustuu potilaan kattavaan kliiniseen ja laboratoriotutkimukseen. Yleinen analyysi kupan veri sisältää vain vähän tietoa, joten sitä ei käytetä taudin diagnosoimiseen.
Seuraavat materiaalit voidaan ottaa analysoitavaksi:
- veri sormesta ja suonesta;
- viina - aivo-selkäydinneste;
- irrotettava kova chancre (haava);
- alueellisten imusolmukkeiden alueet.
Materiaalin ja diagnostisen menetelmän valinta riippuu taudin vaiheesta. Puhumme siitä, mitä testejä kupan varalta annetaan seuraavassa osiossa.
Taudin laboratoriodiagnoosin menetelmien luokittelu
Alkuvaiheessa voit käyttää bakterioskooppista menetelmää, joka perustuu patogeenin - vaalean treponeman - määrittämiseen mikroskoopilla. Jatkossa serologiset testit, jotka perustuvat biologisessa materiaalissa olevien mikrobiantigeenien ja elimistön tuottamien vasta-aineiden määritykseen, ovat laajalti käytössä.
Bakteriologista tutkimusta ei tehdä, koska kupan aiheuttaja kasvaa erittäin huonosti ravintoalustoilla keinotekoisissa olosuhteissa.
Kaikki menetelmät treponeman havaitsemiseksi, eli kupan testityypit, on jaettu kahteen suureen ryhmään:
1. Suora, joka havaitsee suoraan itse mikrobin:
- tummakenttämikroskopia (treponeman havaitseminen tummalla taustalla);
- RIT-testi - kanien infektio testimateriaalilla;
- polymeraasi ketjureaktio(PCR), joka havaitsee osia mikro-organismin geneettisestä materiaalista.
2. Epäsuora (serologinen), joka perustuu mikrobien vasta-aineiden havaitsemiseen, joita keho tuottaa vasteena infektiolle.
Serologiset testit on jaettu kahteen ryhmään
Ei-reponemaalinen:
- komplementin kiinnitysreaktio kardiolipiiniantigeenin (RSKk) kanssa;
- mikrosaostusreaktio (RMP);
- nopea plasmareagiinitesti (RPR);
- testaa toluidiinipunaisella.
Treponemaalinen:
- komplementin kiinnitysreaktio treponemaalisen antigeenin (RSKt) kanssa;
- treponeemin immobilisaatioreaktio (RIT tai RIBT);
- immunofluoresenssireaktio (RIF);
- reaktio passiivinen hemagglutinaatio(RPGA);
- entsyymi-immunomääritys (ELISA);
- immunoblottaus.
Näiden analyysien menetelmät ovat varsin monimutkaisia, joten keskitymme lähinnä siihen, milloin ne tehdään ja kuinka tarkkoja tietoja ne antavat.
Sanotaan heti, että kupan diagnosoinnin perusta on serologiset menetelmät. Mikä on kupan testin nimi: jokaisessa tapauksessa tutkimus voi sisältää erilaisia tekniikoita. Alla kuvailemme niitä tarkemmin.
Suorat testit
Niiden havaitseminen mikroskoopilla todistaa vakuuttavasti treponeman esiintymisen. Kupan todennäköisyys on tässä tapauksessa 97%. Mikrobeja voidaan kuitenkin havaita vain kahdeksalla potilaalla 10:stä, joten negatiivinen testi ei sulje pois sairautta.
Diagnoosi tehdään sellaisina ja aikoina, jolloin esiintyy kovaa ihottumaa tai ihottumaa. Näiden tarttuvien elementtien purkauksessa he etsivät taudinaiheuttajia.
Tehokkaampi, mutta myös kalliimpi ja monimutkainen analyysi– treponeemojen havaitseminen niiden esikäsittelyn jälkeen fluoresoivilla vasta-aineilla. Nämä ovat aineita, jotka "tarttuvat" mikrobeihin ja muodostavat "hehkunsa" mikroskoopin kentässä.
Menetelmien herkkyys laskee sairauden pitkittyessä, haavaumien ja ihottumien hoidossa antiseptisillä aineilla sekä hoidon jälkeen.
Biologinen menetelmä RIT:n diagnosoimiseksi on erittäin spesifinen, mutta kallis, ja tulos saadaan vain kautta pitkään aikaan kun tartunnan saanut eläin sairastuu. Tällä hetkellä menetelmää ei käytännössä käytetä, vaikka se on käytännössä tarkin kaikista. Erinomainen verikoe kuppalle treponeman geneettisen materiaalin havaitsemiseksi - PCR. Sen ainoa rajoitus on diagnostiikan suhteellisen korkea hinta.
Serologiset menetelmät
Ei-treponemaaliset testit
RSKk ja RMP
Tunnetuin näistä testeistä on Wassermanin reaktio. Tämä on tapa nopea diagnoosi(nopea kupan analyysi), joka perustuu samanlaiseen vasta-aineiden reaktioon sairaan ihmisen verestä itse treponeemiin ja naudan sydämestä saatuun kardiolipiiniin. Tämän vasta-aineiden ja kardiolipiinin vuorovaikutuksen seurauksena muodostuu hiutaleita.
Venäjällä tämä analyysi ei käytännössä käytetty. Se korvattiin mikrosaostusreaktiolla. Menetelmän haittana on sen alhainen spesifisyys. Väärä positiivinen analyysi kuppaverta löytyy tuberkuloosista, verisairauksista, systeemisestä lupus erythematosuksesta, raskauden aikana, lapsen syntymän jälkeen, kuukautisvuodon aikana ja monissa muissa tapauksissa. Siksi positiivisella RW:llä enemmän tarkat menetelmät diagnostiikka.
Infektion jälkeen reaktio muuttuu positiiviseksi kahden kuukauden kuluttua. Toissijaisessa kuppassa se on positiivinen lähes kaikilla potilailla.
Mikrosaostusreaktiolla, joka korvasi Wassermannin reaktion, on samanlainen mekanismi. Se on halpa, helppo suorittaa, nopea arvioida, mutta voi myös antaa väärän positiivisen tuloksen. Näitä kahta testiä käytetään seulontatesteinä.
RMP muuttuu positiiviseksi kuukauden kuluttua kovan chancren ilmestymisestä. Sen toteuttamiseen käytetään sormen verta.
Voiko kuppatesti olla väärä? Varmasti kyllä, varsinkin käytettäessä ei-treponemaalisia testejä.
Akuuttien väärien positiivisten testien syyt RMP:tä käytettäessä:
- akuutit tartuntataudit;
- keuhkokuume;
- sydäninfarkti;
- aivohalvaus;
- loukkaantuminen ja myrkytys.
Kroonisia vääriä positiivisia tuloksia esiintyy usein seuraavien sairauksien yhteydessä:
- tuberkuloosi;
- luomistauti;
- leptospiroosi;
- sarkoidoosi;
- reumaattiset sairaudet;
- Tarttuva mononukleoosi;
- pahanlaatuiset kasvaimet;
- diabetes;
- maksakirroosi ja muut.
Jos on kiistanalaisia analyyseja, diagnoosin selventämiseksi käytetään treponemaalisia serologisia testejä.
RPR- ja toluidiinipunatesti
Nopea plasmareagiinitesti (rpr syfilis-testi) on toisen tyyppinen reaktio kardiolipiiniantigeenin kanssa. Sitä käytetään seuraavissa tapauksissa:
- väestön seulonta;
- epäily kuppasta;
- luovuttajan seulonta.
Mainitsemme myös testin toluidiinipunaisella. Kaikkia näitä menetelmiä käytetään hoidon tehokkuuden arvioimiseen. Ne ovat puolikvantitatiivisia, eli ne vähenevät toipuessaan ja lisääntyvät infektion uusiutuessa.
Ei-treponemaalisten testien negatiiviset tulokset osoittavat todennäköisimmin, että tutkittavalla ei ole kuppaa. Siksi paranemisen arvioimiseen käytetään muita kuin treponemaalisia testejä. Ensimmäinen tällainen analyysi tulee tehdä 3 kuukautta hoitojakson päättymisen jälkeen.
Treponemaaliset testit
Treponemaaliset testit perustuvat treponemaalisten antigeenien käyttöön, mikä lisää merkittävästi niiden diagnostista arvoa. Niitä sovelletaan seuraavissa tilanteissa:
- positiivinen seulontatesti (mikrosaostumisreaktio);
- väärän positiivisen seulontatuloksen tunnistaminen;
- epäily kuppasta;
- piilevien muotojen diagnostiikka;
- retrospektiivinen diagnoosi, kun potilaalla on ollut sairaus aikaisemmin.
RIT ja RIF
Korkein laatu (erittäin herkkä ja erittäin spesifinen) ovat RIT ja RIF. Näiden menetelmien haittoja ovat monimutkaisuus, kesto, nykyaikaisten laitteiden ja koulutetun henkilöstön tarve. Useimmilla parantuneilla potilailla treponemaalitestit pysyvät positiivisina useiden vuosien ajan, eikä niitä siksi voida käyttää paranemisen kriteerinä.
RIF muuttuu positiiviseksi kahden kuukauden kuluttua tartunnasta. Jos se on negatiivinen, potilas on terve, jos se on positiivinen, taudin todennäköisyys on suuri.
RIT:tä käytetään erityisen usein potilailla, joilla on positiivinen virtsarakon syöpä taudin sulkemiseksi pois tai vahvistamiseksi. Se on erittäin herkkä ja sen avulla voit kertoa erittäin tarkasti, onko potilaalla kuppa vai ei. Analyysi tulee kuitenkin positiiviseksi vasta kolmen kuukauden kuluttua tartunnasta.
Immunoblottaus
Immunoblottaus on vielä herkempi kuin RIF, mutta vähemmän herkkä kuin RPHA. Sitä käytetään harvoin, pääasiassa vastasyntyneiden kupan diagnosointiin.
Listatut menetelmät eivät sovellu seulomiseen eli taudin nopeaan havaitsemiseen, koska ne muuttuvat positiivisiksi myöhemmin kuin mikrosaostumisreaktio.
ELISA ja RPGA
Nykyaikaiset erittäin informatiiviset standardoidut menetelmät kupan diagnosointiin - ELISA ja RPHA. Ne ovat edullisia, nopeasti asennettuja ja testattuja suuria määriä. Näitä testejä voidaan käyttää diagnoosin vahvistamiseen.
RPHA:n analyysi tulee positiiviseksi primaarisella seropositiivisella kuppalla, toisin sanoen kovan chancren ilmaantuessa (kuukausi tartunnan jälkeen). Se on erityisen arvokasta myöhään ja synnynnäisiä muotoja sairaudet. RPHA:ta tulee kuitenkin täydentää vähintään yhdellä ei-treponemaalisella testillä ja yhdellä treponemaalisella testillä tarkan diagnoosin varmistamiseksi. Tällainen kolminkertainen testi on luotettavin kupan analyysi. RPGA:n haittapuoli on säilyvyys positiivinen reaktio pitkään, mikä ei salli testien käyttämistä paranemiskriteerinä.
ELISA-testi kupan varalta tulee positiiviseksi jo kolmen viikon kuluttua taudista. ELISA:n haittana on, että se voi olla väärä. Väärä positiivinen reaktio tapahtuu, kun systeemiset sairaudet aineenvaihduntahäiriöt sekä sairaiden äitien lapsilla.
Vikoja serologiset menetelmät johti kehittyneimpien menetelmien kehittämiseen, jotka eivät anna virheitä, mutta ovat toistaiseksi kalliita ja harvoin käytettyjä - kaasukromatografia ja massaspektrometria.
Algoritmi syfiliittisen infektion diagnosoimiseksi eri vaiheissa
Primaarisella seronegatiivisella kaudella (enintään 2 kuukautta tartunnan jälkeen) treponeman etsintä suoritetaan pimeässä kentässä tai käyttämällä fluoresoivia vasta-aineita.
Primaarisessa seropositiivisessa, sekundaarisessa ja piilevässä kuppassa käytetään RMP:tä ja ELISA:ta, ja RPHA:ta käytetään varmistustestinä.
Potilailla, joilla on toissijaisen kupan uusiutuminen, ihottuman osia tutkitaan yrittäen eristää niistä treponema mikroskooppista tutkimusta varten.
Kolmannella jaksolla RMP on negatiivinen kolmanneksella potilaista. ELISA ja RPHA ovat positiivisia, mutta ne eivät välttämättä tarkoita tertiaarista kuppaa, vaan aiempaa sairautta. Heikosti positiivinen analyysi viittaa todennäköisemmin paranemiseen kuin tertiaarinen kuppa.
"Synnynnäisen kupan" diagnoosia tehtäessä otetaan huomioon sairauden esiintyminen äidissä, ero äidin ja lapsen RMP-tasoissa, positiivinen ELISA ja RPHA vastasyntyneellä sekä immunoblottaus.
Raskaana olevat naiset on tutkittava kupan varalta, erityisesti ne, jotka ovat jo synnyttäneet kuolleella sikiöllä, ei-kehittyvä raskaus, varhaiset keskenmenot. He suorittavat RMP-, ELISA- ja RPGA-menetelmiä. Tarkista taudin esiintyminen ja ennen raskauden keskeyttämistä.
Säännöt kupan analyysin saamiseksi
Jotta saat lähetteen laboratorioon, sinun tulee käydä aluelääkärilläsi. Jos haluat tehdä testin nopeammin, sen voi tehdä yksityisessä laboratoriossa ilman lähetettä (esim. Invitro-laboratoriot tekevät kupan analyysin nopeasti ja nimettömästi).
Kuinka päästä kuppatestiin? Veri annetaan aamulla, tyhjään vatsaan. Voit juoda vain puhdasta vettä.
Valmistautuminen: kaksi päivää ennen testiä rasvaiset ruoat ja erityisesti alkoholi on suljettava pois ruokavaliosta.
Miten analyysi tehdään? tavalliseen tapaan sormesta tai kyynärsuonesta.
Kuinka paljon kuppatesti tehdään? Testitulos on yleensä valmis seuraavana päivänä. Seloste voidaan ottaa lääkäriltä tai laboratoriosta.
Kuinka pätevä analyysi on? Jopa kolme kuukautta.
Aivo-selkäydinnesteen analyysi
Joissakin tapauksissa neurosyfiliksen diagnosoimiseksi tehdään CSF-analyysi.
Tämä tutkimus on määrätty kaikille potilaille, joilla on piilevä kuppa jos heillä on merkkejä hermoston patologiasta sekä piilevä ja myöhäinen neurosyfilis.
Lisäksi analyysi tehdään kaikille potilaille toipumisen jälkeen säilyttäen samalla heidän positiiviset serologiset reaktiot. Kirjoitimme jo artikkelissamme, että tämä ilmiö tapahtuu melko usein.
Vain lääkäri määrää ja suorittaa kupan CSF-analyysin.
Aivo-selkäydinnestettä saadaan kahden nikaman välistä pistosta lanne-. Se kerätään 4 ml:aan kahteen koeputkeen. Sitten pistokohta käsitellään jodilla ja peitetään steriilillä siteellä. Punktion jälkeen potilaan tulee makaa vatsallaan sängyn jalkapää nostettuna vähintään 3-4 tuntia, jonka jälkeen hän voi makaa kyljellään. Vuodelepo pistoksen jälkeen se näkyy kahden päivän sisällä.
Ensimmäisestä koeputkesta tuleva aivo-selkäydinneste tutkitaan käyttämällä yleisesti hyväksyttyjä reaktioita proteiinipitoisuuteen, soluihin ja aivokalvontulehduksen (aivokalvon tulehduksen) oireiden määrittämiseen.
Toisen koeputken aivo-selkäydinnesteestä tutkitaan treponeman vasta-aineiden pitoisuus käyttämällä Wasserman-reaktiota, RMP:tä, RIF:ää ja RIBT:tä, joista keskustelimme edellä.
Rikkomusten vakavuuden mukaan aivo-selkäydinnesteessä on neljän tyyppisiä muutoksia. Niitä analysoimalla lääkäri voi päätellä, että hermostoon kohdistuu erilaisia vaurioita (vaskulaarinen neurosyfilis, syphiliittinen aivokalvontulehdus, meningovaskulaarinen kuppa, dorsaalinen tabes, myöhäinen mesenkymaalinen neurosyfilis) sekä potilaan toipuminen positiivisilla serologisilla testeillä.
Fonttikoko
Neuvostoliiton terveysministeriön MÄÄRÄYS 02-09-85 1161 SYFILISEN SEROLOGISEN DIAGNOOSIN PARANTAMISESTA (Yhdessä OHJEET ... Relevantti vuonna 2018
RIF - ABS -asetustapa
Testattu veriseerumi
Veriseerumin saamiseksi otetaan verta kyynärlaskimosta puhtaaseen ja kuivaan koeputkeen 5 ml:n tilavuudessa ja käsitellään samalla tavalla kuin Wasserman-reaktion aikaansaamiseksi. Veriseerumi inaktivoidaan kerran 56°:n lämpötilassa 30 minuutin ajan. Koska RIF-abs on sijoitettu ei-steriiliksi, steriilien astioiden käyttö ja steriiliysehtojen noudattaminen veriseerumia säilytettäessä ei ole välttämätöntä. Sillä on merkitystä vain veriseerumien pidempään säilyvyyden kannalta ennen tutkimusta.
Antigeeninä käytetään Nichols-kannan patogeenisten vaalean treponeemojen suspensiota 7 päivän ikäisestä kanin orkiitista. Terveet urospuoliset kaniinit, joilla on negatiiviset Wasserman- ja RIT-tulokset, saavat kiveksensisäisen tartunnan ja orkiitin ilmaantuessa vaaleat treponeemit poistetaan kiveksistä samalla tavalla kuin RIT-antigeenin hankinnassa. Saatu vaalean treponeeman suspensio kaadetaan kivespaloista steriileihin koeputkiin, joissa on puuvillatulpat ja jätetään jääkaappiin 4 ° C: een vuorokaudeksi, minkä jälkeen se erotetaan sedimentistä ja säilytetään samoissa olosuhteissa koko ajan. käyttöaika.
Antigeenin saaminen ja säilyttäminen edellyttää steriiliysehtojen noudattamista, tk. samalla antigeenillä reaktio voidaan toteuttaa 2-4 kuukauden kuluessa. Antigeeniksi tulee valita suspensio, jossa ei havaita treponemaagglutinaatiota ja niitä on riittävästi. Antigeeni voidaan saada ampulleissa muista laboratorioista. Ennen jokaista reaktiota suspensio sekoitetaan hyvin ja sitä tutkitaan mikroskoopilla tummakenttälauhduttimella sen tiheyden määrittämiseksi. RIF-abs:n asettamiseen tarvitaan 40-60 treponemaa sisältävä suspensio pimeässä näkökentässä; jos paksumpi suspensio on läsnä, se on laimennettava.
RIF-abs:n sorbenttina voidaan käyttää RSK:n ultraäänitettyä treponemaalista antigeeniä, jonka Kaunasin yritys on valmistanut Neuvostoliiton terveysministeriön bakteerivalmisteiden tuotantoa varten. Se on suspensio viljeltyjen vaaleiden kantojen V, VII, VIII, IX ja Reiter-treponeemojen seoksesta, jotka on tuhottu ultraäänellä. Jokainen sorbenttisarja on titrattava ennen kuin niitä käytetään RIF-abs:issa diagnostisiin tarkoituksiin.
Sorbenttien titraus
Sorbentit titrataan kuppapotilaiden veriseerumiin, jolloin saadaan jyrkästi (4+) ja heikosti (2+) positiivinen tulos RIF:ssä laimennuksella 1:5, sekä syfilisistä vapaiden henkilöiden veriseerumiin. infektio, joka antaa negatiivisen tuloksen RIF-5:ssä ja epäspesifisen positiivisuuden (2+ tai enemmän).
Esimerkki sorbentin tiitterin määrittämisestä
Koko sorbentti laimennetaan fosfaattipuskurilla, pH = 7,2, 2, 3, 4 kertaa tai enemmän. Syfilispotilailta otetaan 3 veriseerumit, joista yksi antaa vahvasti positiivisen (4+) tuloksen RIF-5:ssä, 2 - heikosti positiivisen (2+) ja 5 veriseerumit ihmisiltä, joilla ei ole syfilisinfektiota, joista 3 antaa epäspesifisiä tuloksia ja RIF-5 (2+ ja enemmän). Kaikki veriseerumit laimennetaan 5 kertaa sorbentilla, joka on laimennettu 2, 3, 4 tai useammin fosfaattipuskurilla. Sitten veriseerumi tutkitaan reaktiossa. Tulokset huomioon ottaen valitaan sorbentin laimennus, jossa kuppapotilaiden sorboidut veriseerumit säilyttävät samanlaisen positiivisuusasteen kuin fosfaattipuskurilla laimennetulla veriseerumilla ja henkilöiden, jotka ovat vapaita syfiliittiset infektiot eivät hehku. Tämä sorbentin laimennus on sen tiitteri.
Sorbentin tiitteri oli tässä tapauksessa laimennus 1:3, jossa kuppapotilaiden kaikki veriseerumit säilyttivät kontrollissa saadun positiivisuuden asteen ja samalla ei-syfiliittisen veren epäspesifisen positiivisuuden. seerumit poistettiin luotettavasti.
Anti-lajien luminesoiva seerumi
Ihmisen seerumiproteiinilla immunisoitujen eläinten fluorokromileimattua veriseerumia tarvitaan ihmisen veriseerumien tutkimiseen RIF-abs:ssa. Pakastekuivattu luminesoiva seerumi liuotetaan steriileissä olosuhteissa tislattuun veteen ampullien etiketissä ilmoitettuun tilavuuteen, kaadetaan steriiliin putkeen, jossa on kumitulppa ja säilytetään 4°C:ssa 1-2 kuukauden ajan käytön aikana.
Reaktiopäivänä tarvittava määrä tätä seerumia laimennetaan tiitterin mukaan tislatulla vedellä. Etiketissä ilmoitettu käyttöseerumin laimennos ei sovellu syfilis-serodiagnostiikkaan tarkoitetun reaktion aikaansaamiseen, joten jokaisen sarjan tiitteri on määritettävä uudelleen.
Taulukko 13
Sorbenttititrauksen tulokset
| Testatut veriseerumit | RIF-5 tulokset | |||
| Veriseerumien laimennus 1:5 puskuri (K) | Veriseerumien laimennus 1:5 sorbentti laimennuksessa | |||
| 1: 2 | 1: 3 | 1: 4 | ||
| Veren seerumi potilaan, jolla on kuppa | ||||
| N 1 | 4+ | 3+ | 4+ | 4+ |
| N 2 | 2+ | 1+ | 2+ | 2+ |
| N 3 | 2+ | 2+ | 2+ | |
| Ei-syfiliittinen veriseerumi | ||||
| N 1 | 3+ | 1+ | 2+ | |
| N 2 | 2/3+ | 2+ | ||
| N 3 | 2+ | 2+ | ||
| N 4 | 2+ | 2+ | ||
| N 5 | ||||
Antilajien luminesoivan seerumin titraus
He ottavat 5 veriseerumit kuppapotilailta ja 5 veriseerumit terveiltä ihmisiltä, laimentavat ne 5 kertaa sorbentilla (ottaen huomioon sen tiitterin) ja reagoivat eri laimennoksilla luminoivan seerumin faasissa II vastaan ihmisen seerumiglobuliineja, joiden sarja on tiitteri määritetään. On otettava huomioon, että IEM:n tällä hetkellä tuottamien luminoivien seerumien tiitteri. N.F. Gamalei, vaihtelee, kun RIF-abs on asetettu arvoon 1:100 - 1:140. Kun reaktio otetaan huomioon, luminesoivan seerumin alustava tiitteri tulee ottaa huomioon, että laimennus, kun sitä käytetään positiivisten veriseerumien kanssa, antaa treponeemojen hyvän hehkun saatiin, ja antigeenin negatiivista hehkua ei vastaanotettu. Tiitteriä suurempi luminoivan seerumin laimennus johtaa reaktion herkkyyden laskuun ja pienempi spesifisyyden heikkenemiseen. Alustavan tiitterin määrittämisen jälkeen sitä tulisi tarkentaa lisää positiiviset ja negatiiviset veriseerumit. Lopulliseksi tiitteriksi voidaan katsoa se, joka testataan 100 veriseerumilla, ja niistä vähintään 20 tulee olla kuppapotilailta.
Itämisen estämiseksi kuivan luminoivan seerumin laimentamisen jälkeen tislatulla vedellä, on tarpeen lisätä siihen mortiolaattia nopeudella 1 tilavuus sen 1:1000 liuosta 9 tilavuusosaan luminoivaa seerumia. Kun otetaan uusia saman sarjan ampulleja, tiitteri tulee tarkistaa ja selvittää vain 10 tunnetun positiivisen ja negatiivisen veriseerumin varalta.
Esimerkki luminoivan anti-lajien seerumin alustavan tiitterin määrittämisestä
Valmista 60 lääkettä, numeroi ne 1 - 60. Ota 10 veriseerumia - 5 kuppapotilailta, 5 terveiltä ihmisiltä. Kaikki veriseerumit laimennetaan 5 kertaa laimennetulla mutta tiitterisorbentilla.
Numeroiduille 1-10, 11-20, 21-30, 31-40, 41-50, 51-60 lääkkeitä levitetään reaktion ensimmäisessä vaiheessa samoilla 10 veriseerumilla, laimennettuna 5 kertaa sorbentilla. Reaktion II vaiheessa luminoivaa seerumia laimennettuna 1:100 levitetään 1-10 valmisteeseen, 1:110 - 11-20, 1:120 - 21-30, 1:130 - 31-40, 1:130 - 41-50: 140, klo 51-60 - 1:150.
RIF-abs asetustekniikka
Valmisteet valmistetaan antigeenistä ohuille, hyvin rasvattomille lasilevyille kääntöpuoli jotka ympyrät, joiden halkaisija on 0,7 cm, on merkitty lasileikkurilla (10 ympyrää 1 lasilevyllä). Ympyrän sisällä lasille levitetään vaalean treponeeman antigeenisuspensio. Pasteur-pipetin sinetöity pää pyöreällä liikkeellä suspensio jaetaan ympyrän sisällä, kuivataan ilmassa ja kiinnitetään 10 minuuttia kemiallisesti puhtaassa asetonissa. Sitten lääkkeet on numeroitu. Inaktivoidut testiveriseerumit laimennetaan 5 kertaa sorbentilla, joka on laimennettu tiitteriin puskuriliuoksella. Telineeseen asetetaan joukko koeputkia, joiden lukumäärä ja lukumäärä vastaavat testattujen veriseerumien määrää ja lukumäärää. Tiitterillä laimennettu sorbentti kaadetaan koeputkiin pipetillä 0,2 ml:ssa, sitten lisätään 0,05 ml koko testiveriseerumia ja sekoitetaan hyvin. Veriseerumin laimennus voidaan suorittaa Florinsky-laitteella. Sorbentilla laimennettu veriseerumi levitetään antigeenille siten, että sivelykalvo peittyy tasaisesti, ja valmisteet asetetaan kosteaan kammioon, joka suljetaan kannella ja asetetaan termostaattiin 37° 30 minuutiksi (I reaktiovaihe). ). Ensimmäisen vaiheen jälkeen valmisteet pestään huolellisesti kahdella annoksella fosfaattipuskuria ja valmisteet asetetaan toiseen osaan 10 minuutiksi, kuivataan, minkä jälkeen ne asetetaan jälleen kosteaan kammioon, levitetään tiitterilaimennettua luminoivaa seerumia. ja jätettiin huoneenlämpötilaan 30 minuutiksi (faasi II reaktiot). Toisen vaiheen lopussa valmisteet pestään fosfaattipuskurilla, kuten edellä on kuvattu, kuivataan ja levitetään sivelypintojen pinnalle ei-luminoivaa immersioöljyä (dimetyyliftalaattia) tipoittain.
Valmisteiden tutkimus suoritetaan fluoresoivassa mikroskoopissa elohopeakvartsilampulla DRSh-250, jossa on upotusjärjestelmä, okulaari 4X tai 5X, suodattimet SZS-7 tai 14, FS-1. BS-8 ja ZhS-18 tai T-2N. Reaktion huomioiminen suoritetaan arvioimalla vaalean treponeman hehkua. RIF-abs:issa veriseerumit katsotaan positiivisiksi, jotka antavat hehkua kohdissa 4+, 3+ ja 2+. Kirkkaanvihreä-keltainen hehku on luokiteltu 4+, kirkas - 3+, heikko hehku 2+. Veriseerumit katsotaan negatiivisiksi, jos ne antavat hehkun 1+ (valmisteessa olevat treponeemit värjäytyvät voimakkaammin kuin tausta) tai eivät anna sitä.
Jokaisessa RIF-abs-formulaatiossa on käytettävä seuraavia kontrolleja:
Terävä positiivinen kontrolli. Kuppapotilaan veriseerumi, joka antaa hehkua 4+, kun se laimennettuna puskurilla 5 kertaa. 5 kertaa sorbentilla laimennettuna veriseerumi ei saa menettää positiivisuusastetta enempää kuin 1+.
Heikko positiivinen kontrolli. Kuppapotilaan koko- tai laimennettu veren seerumi, joka antaa heikon antigeenin luminesenssiasteen 2+, kun se laimennetaan puskurilla 5 kertaa. Sorbentilla laimennettuna sen positiivisuus tulee säilyttää.
epäspesifinen kontrolli. Ei-syfiliittinen veriseerumi, joka puskurilla laimennettuna antaa fluoresenssin vähintään 2+. Sorbentilla laimennettuna sen positiivisuus on eliminoitava.
Antigeenin, sorbentin ja luminesoivan seerumin kontrollit voidaan asettaa vain käytettäessä näiden ainesosien uusia sarjoja.
Menetelmä RIF-abs:n asettamiseen kapillaariverellä
RIF-abs:n asettaminen ei ole mahdollista vain veriseerumilla, vaan myös sormesta otetulla verellä. Tätä RIF-abs:n modifikaatiota voidaan käyttää tutkittaessa lapsia kupan varalta, kun aikuisilla on vaikea saada verta laskimosta ja kun massaseulotaan erilaisia kupan varalta.
Asetettaessa RIF-abs veren kanssa, käytetään samoja reaktioaineosia kuin asetettaessa RIF-abs veren seerumilla (antigeeni, sorbentti, luminesoiva seerumi). Luminesoivan seerumin tiitteri määritetään yllä olevan kaavion mukaisesti, mutta kun muodostetaan reaktio veren kanssa. Potilaan sormen puhkaisun jälkeen tutkittava veri otetaan mikropipetillä 0,1 ml:n merkkiin, puhalletaan nopeasti koeputkeen, joka sisältää 0,3 ml tislattua vettä, sekoitetaan huolellisesti pipetillä ja suodatetaan tislatulla vedellä kostutetun paperisuodattimen läpi. . Reaktion asettaminen laimennetulla verellä on mahdollista sekä ottopäivänä että 1-2 päivän kuluttua, edellyttäen, että sitä säilytetään 4 °:ssa.
Välittömästi ennen reaktion asettamista 0,1 ml koko sorbenttia lisätään kaikkiin reaktion asetukseen sisältyviin verinäytteisiin, sekoitetaan pipetillä ja ravistetaan ja asetetaan termostaattiin 37°:een 30 minuutiksi. Sitten sorbentilla käsitelty veri levitetään antigeeninäytteille ja asetetaan kosteaan kammioon 37°:een (reaktion vaihe 1). Altistusajan päätyttyä valmisteet pestään ensimmäisessä annoksessa fosfaattipuskuria niin, ettei objektilaseille jää veren jälkiä, ja ne asetetaan 10 minuutiksi puskurin toiseen osaan. Levyjen kuivaamisen jälkeen suoritetaan reaktion toinen vaihe. Samaan aikaan valmisteille levitetään ihmisen globuliinien vastaista luminoivaa seerumia, joka on laimennettu tälle RIF-muunnokselle määritetyn tiitterin mukaan. Kosteassa kammiossa olevat objektilasit asetetaan jälleen termostaattiin 37°:een.
30 minuutin kuluttua valmisteet pestään uudelleen 2 annoksella fosfaattipuskuria 10 minuutin ajan, kuivataan ja asennetaan fluoresenssimikroskopiaa varten. Lääkkeiden tutkimus ja reaktion tulosten kirjaaminen suoritetaan samalla tavalla kuin asetettaessa RIF-abs veriseerumilla.
RIF-200:n asetustapa
RIF-abs:n ja RIF-200:n asetustapa ovat lähellä. RIF-200:aa asetettaessa testiveriseerumien käsittely, antigeenin valmistus, anti-lajien luminesoivan seerumin valmistus ja sen titraus suoritetaan samalla tavalla kuin RIF-abs:ia asetettaessa. On vain otettava huomioon, että tällä hetkellä RIF-200:ssa tuotetun luminoivan seerumin tiitterit vaihtelevat välillä 1:20 - 1:50.
Asetustekniikka RIF-200
Testatut veriseerumit laimennetaan 200 kertaa fosfaattipuskurilla. Tätä varten telineeseen asetetaan 3 riviä koeputkia, joiden numero ja numerointi jokaisella rivillä vastaa testattujen veriseerumien lukumäärää ja numerointia työpäiväkirjassa. Ensimmäisessä rivissä kaadetaan kokotestiveriseerumit, toisessa rivissä 0,45 ml puskuria kaadetaan koeputkiin, kolmannessa rivissä 0,95 ml puskuria. Toisessa rivissä valmistetaan 10-kertainen laimennos veriseerumit, jolle otetaan 0,05 ml koeveriseerumia jokaisesta ensimmäisen rivin putkesta erillisellä 1 ml:n mittapipetillä ja siirretään toisen putkeen vastaavaan putkeen. riville ja sekoitetaan siellä olevan puskurin kanssa. Jokaisesta toisen rivin putkesta siirretään samaa pipettiä 0,05 ml 10-kertaisesti laimennettua testiveriseerumia vastaavaan kolmannen rivin koeputkeen ja saadaan 200-kertainen laimennus.
Asetettaessa reaktiota kosteaan kammioon asetettuihin valmisteisiin laimennettu testiveriseerumi 200 kertaa siten, että niiden koeputkiin merkityt numerot vastaavat lasilevyillä olevia numeroita. Veriseerumivalmisteille levittämisen jälkeen kostea kammio asetetaan 30 minuutiksi termostaattiin, jonka lämpötila on 37° (reaktion I vaihe). Sitten valmisteita pestään 10 minuuttia kahdessa annoksessa puskuria ja kuivataan. Sen jälkeen ne asetetaan jälleen kosteaan kammioon ja kaikkeen levitetään tiitterilaimennettua luminoivaa seerumia (reaktion vaihe II). Toista vaihetta suoritetaan 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa, minkä jälkeen valmisteita pestään 10 minuuttia, kuivataan ja asennetaan fluoresenssimikroskopiaa varten.
RIF-200:n tulosten kirjanpito tapahtuu samalla tavalla kuin RIF-abs.
Jos lääkärit ovat kiinnostuneita potilaan veren seerumin fluoresoivien vasta-aineiden tiitteristä, RIF-abs:a ja RIF-200:aa tulee käyttää testattujen veriseerumeiden sarjalaimennuksella ja fluoresoivien vasta-aineiden tiitteriä tulee pitää korkeimpana laimennoksena. veriseerumi, joka antaa silti positiivisen reaktiotuloksen. On tapana merkitä tiitteri lukuna, joka kuvaa testatun veriseerumin laimennusastetta, esimerkiksi 5, 10, 20, 40 jne. (RIF-abs) tai 200, 400, 800 jne. (RIF-200).
Asetettaessa molemmat reaktion modifikaatiot testattujen veriseerumien laimentamiseen ja valmisteiden pesuun vaiheiden I ja II jälkeen tulee käyttää seuraavan koostumuksen omaavaa fosfaattipuskuria: 1 l tislattua vettä, 6,8 g natriumkloridia, 1,48 g disubstituoitua natriumfosfaattia, 0,43 g monosubstituoitua kaliumfosfaattia (PH = 7,2). Valmistettua liuosta säilytetään huoneenlämmössä enintään viikon ajan.
Koska fluoresoivien vasta-aineiden läsnä ollessa on mahdollista saada negatiivisia tuloksia, verta ja veriseerumia ei tule tutkia RIF-abs- ja RIF-200-tutkimuksissa potilaiden penisilliinihoidon aikana.
RIF-c-asetustekniikka
Hermoston vaurioiden varhainen diagnosointi kupan yhteydessä on kiireellinen kysymys tämän taudin torjunnassa. Koska RIF-c on herkempi kuin kaikki muut kupan CSF-diagnoosissa käytetyt testit, tätä RIF:n muunnelmaa voidaan suositella keskushermoston syfiliittisten leesioiden diagnosointiin kaikissa kupan muodoissa.
RIF-c:n kohdistamiseen käytetään samaa antigeeniä, luminoivaa seerumia, kuin RIF-abs:n ja RIF-200:n kohdistamiseen veriseerumilla. Fluoresoivien vasta-aineiden määritys aivo-selkäydinnesteestä ja veriseerumista ja reaktion rekisteröinti ovat myös samanlaisia.
Aivo-selkäydinneste johdetaan reaktioon inaktivoitumattomana ja ehjänä. Ennen reaktion asettamista sitä voidaan säilyttää jääkaapin pakastinosastossa koeputkissa kumitulppien alla enintään 2 viikkoa. Sulatus suoritetaan huoneenlämmössä.
RIF-c-asetustekniikka
Reaktion vaiheessa I antigeenille levitetään 0,05 ml laimentamatonta aivo-selkäydinnestettä, valmisteet asetetaan kosteaan kammioon 30 minuutiksi huoneenlämpötilaan. Sitten niitä pestään fosfaattipuskurilla, pH = 7,2, 10 minuuttia, kuivataan. Vaiheessa II valmisteille levitetään tiitterilaimennettua luminoivaa seerumia, joka titrataan, kun saadaan aikaan reaktio aivo-selkäydinnesteen kanssa. Valmisteita pidetään huoneenlämmössä 30 minuuttia kosteassa kammiossa, pestään, kuivataan, asennetaan fluoresoivaa mikroskopiaa varten.
Virheiden lähteet
1. Reagenssien valmistusta, varastointia ja reaktion asettelua koskevien ehtojen noudattamatta jättäminen.
2. Luminesoivan seerumin heikko laatu ja sen tiitterin epätarkka määritys.
3. Testimateriaalin tai luminoivan seerumin levittäminen, kun reaktio asetetaan ei lääkkeen päälle, vaan lasilevyn toiselle puolelle.
4. Virheellinen valaistusasetus fluoresoivassa mikroskoopissa.
5. Antigeenin huono laatu.
