Se perustuu siihen tosiasiaan, että erytrosyytit, joihin antigeenit ovat esiadsorboituneita, saavat kyvyn agglutinoitua homologisten seerumien (vasta-aineiden) läsnä ollessa.

Tässä tapauksessa erytrosyytit toimivat kantajina spesifisten determinanttien kanssa, joiden agglutinaatio tapahtuu antigeeni + vasta-ainereaktion seurauksena.

Punasoluja, joiden pintaan antigeenit ovat tiukasti kiinnittyneet, kutsutaan erytrosyyttiantigeenisiksi diagnostisiksi eli antigeenillä herkistetyiksi punasoluiksi.

Toinen RNHA-vasta-aineiden tyyppi adsorboituu erytrosyyttien pintaan ja niiden myöhempi agglutinaatio tapahtuu homologisen antigeenin läsnä ollessa. Tässä tapauksessa tällaisia punasoluja kutsutaan erytrosyyttivasta-aine diagnostisiksi eli vasta-aineilla herkistetyiksi punasoluiksi.

Näiden kahden perustavanlaatuisen metodologisen lähestymistavan pohjalta on kehitetty monia RNGA:n muunnelmia ja niitä käytetään. Joten pieniä vakiohiukkasia lateksia käytetään kantajina. Tässä tapauksessa reaktiota kutsutaan lateksiagglutinaatioreaktioksi (RLA) tai sitä käytetään Staphylococcus aureus- koagulaatioreaktio jne. Yleensä punasoludiagnostiikkaa valmistetaan biologisen teollisuuden yrityksissä, ja RNGA:n pääkokemus on jo asennettu diagnostisiin laboratorioihin.

Punasoludiagnostiikan valmistelu sisältää seuraavat vaiheet:

erytrosyyttien kiinnitys formaldehydillä tai glutaari- tai akryylialdehydeillä. Tällaisia prosessoituja punasoluja säilytetään pitkään. Useammin tähän tarkoitukseen käytetään lampaiden, ihmisten, kanojen jne. punasoluja;
kiinnittyneiden punasolujen käsittely tanniiniliuoksella. Tämän seurauksena erytrosyytit saavat ominaisuuden peruuttamattomasti adsorboida proteiineja (viruksia ja vasta-aineita) pinnalle;
tanized erytrosyyttien herkistäminen viruksilla tai vasta-aineilla.

On huomattava, että erytrosyyttidiagnostiikan valmistusmenetelmät virusinfektiot eri.

Tekniikka RNHA:n määrittämiseksi vasta-ainetiitterin havaitsemiseksi ja määrittämiseksi on seuraava:

peräkkäisiin 2-kertaisiin seerumilaimennoksiin lisätään yhtä suuret annokset antigeenillä herkistettyjä punasoluja;
seos jätetään 2-3 tunniksi huoneenlämpötilaan tai 16-18 tunniksi 4 °C:seen;
ottaa tulokset huomioon. Jos seerumi sisältää vasta-aineita virukselle, jolla erytrosyytit herkistettiin, havaitaan hemagglutinaatiota, joka arvioidaan risteytyksissä.

Seerumin vasta-ainetiitteri pidetään seerumin korkeimpana laimennoksena, joka silti antaa hemagglutinaation vähintään kahdella ristillä.

RNGA:n mukana on kaikki asiaankuuluvat hallintalaitteet. Yleensä he laittavat reaktion mikromenetelmällä.

RNHA mahdollistaa seuraavat diagnostiset tehtävät:

havaita vasta-aineet ja määrittää niiden tiitteri veren seerumissa käyttämällä tunnettua punasoluantigeenidiagnostiikkaa;
tunnistaa ja tunnistaa tuntematon virus käyttämällä tunnettua punasolujen diagnostiikkaa.

RNGA:n edut: korkea herkkyys, helppo asetustekniikka ja nopea reagointi. On kuitenkin tärkeää huomata, että stabiilien punasoludiagnostiikan valmistuksessa on suuria vaikeuksia (suuri riippuvuus käytettyjen komponenttien puhtaudesta, tarve valita erytrosyyttien kiinnitys-, tanisaation ja herkistystapa kullekin virustyypille).

RTGA periaate koostuu siitä, että samat tilavuudet veriseerumia ja virussuspensiota sekoitetaan koeputkessa ja altistuksen jälkeen määritetään, säilyykö virus seoksessa lisäämällä erytrosyyttisuspensiota. Punasolujen agglutinaatio osoittaa viruksen läsnäolon, ja hemagglutinaation puuttuminen osoittaa viruksen puuttumista seoksesta. Viruksen katoamista viruksen + seerumin seoksesta pidetään merkkinä seerumin ja virusvasta-aineiden vuorovaikutuksesta.

Mutta vasta-aineet ovat vuorovaikutuksessa antigeenien kanssa tiukasti määritellyissä kvantitatiivisissa suhteissa. Siksi, jotta tietyltä määrältä virusta menetetään hemagglutinaatiokyky, tarvitaan tietty vähimmäismäärä vasta-aineita, ja koska yksi RTHA:n komponenteista on aina tuntematon, on välttämätöntä laittaa reaktio sarjaan koeputkia, joissa on eri annoksia vasta-aineita ja samat virusannokset, tai päinvastoin. Tämä saavutetaan ottamalla joko eri laimennokset seerumista ja sama viruksen laimennos tai viruksen eri laimennokset ja sama laimennos seerumista.

RTGA:n avulla voit ratkaista seuraavat tehtävät: määrittää hemagglutinoivan viruksen vasta-aineiden tiitteri seerumissa; tunnistaa tuntematon hemagglutinoiva virus tunnetuista seerumeista; määrittää näiden kahden viruksen antigeenisen suhteen asteen.

RTGA:n edut: tekniikan yksinkertaisuus, nopeus, steriili työ ei vaadita, spesifisyys, alhaiset kustannukset. Haitta: RTGA on mahdollista vain hemagglutinoivien virusten kanssa.

Vasta-ainetitrauksen periaate RTGA:ssa koostuu seuraavista:

- valmistaa sarja peräkkäisiä (yleensä 2-kertaisia) laimennoksia testiseerumista yhtä suuriin tilavuuksiin (yleensä 0,25 tai 0,2 ml);

– jokaiseen laimennokseen lisätään samat tilavuudet homologista virusta tiitterinä 4 HAU;

- seokset kestävät tietty aika tietyssä lämpötilassa (Newcastlen taudin virukselle 40-60 minuuttia huoneenlämmössä);

– kaikkiin seoksiin lisätään yhtä suuret määrät 1-prosenttista pestyjen punasolujen suspensiota;

- altistuksen jälkeen kunkin seoksen hemagglutinaatio arvioidaan ristiin.

Reaktio sisältää seerumin, viruksen ja punasolukontrollit.

Tämä seerumin korkein laimennus, joka silti täysin estää hemagglutinaation, katsotaan tämän seerumin vasta-ainetiitterin indikaattoriksi.

Käyttö hemadsorptioreaktion virologiassa.

RGAd. Vogel ja Shchelokov (1957) löysivät ensimmäisenä hemadsorption - erytrosyyttien yhteyden viruksen vaikuttamien solujen pintaan - kudosviljelmässä, joka oli infektoitunut influenssaviruksella. Tämä ilmiö perustuu sairastuneen solun pinnalla sijaitsevien virusreseptorien affiniteettiin erytrosyyttireseptoreihin, mikä johtaa niiden keskinäiseen sidokseen, joka on samanlainen kuin hemagglutinaatioreaktio. Tämän reaktion etuna on, että se muuttuu positiiviseksi jo ennen selkeiden sytopaattisten muutosten ilmaantumista infektoituneissa soluissa.

RGAd-metodologia koostuu seuraavista. 3.–4. päivänä soluinfektion jälkeen otetaan kaksi putkea samalla soluviljelmällä, joista toinen on infektoitu viruspitoisella materiaalilla ja toinen on kontrolliputki. Viljelyneste valutetaan molemmista koeputkista ja molempiin putkiin lisätään 2–3 tippaa pestyjen punasolujen 0,5 % suspensiota. Molemmat putket jätetään 5-10 minuutiksi niin, että erytrosyytit ovat solujen pinnalla (asetetaan vaakasuoraan pöydälle), huuhdellaan sitten hieman suolaliuoksella ja tutkitaan mikroskoopilla (pieni suurennos). Kontrolliputkessa punasolut poistetaan kokonaan suolaliuoksella, ja osa jäljellä olevista kelluu nesteen mukana. Jos infektoituneen koeputken punasoluja ei poisteta suolaliuoksella eivätkä ne kellu vaan kiinnittyvät solujen pintaan, RHAd on katsottava positiiviseksi.

Viruksesta ja solutyypistä riippuen punasolujen järjestys voi olla kolminkertainen:

- erytrosyytit adsorboituvat vain solukerroksen reuna-alueille "kaulakorun" muodossa (afrikkalainen sikaruttovirus);

- erytrosyytit sijaitsevat solukerroksessa pesäkkeinä tai klustereina (influenssavirus);

- erytrosyytit sijaitsevat diffuusisesti solukerroksessa (parainfluenssavirus).

Jokainen virus pystyy adsorboimaan tiettyjen eläinlajien punasoluja.

Virussairauksien serologinen diagnoosi lisäämällä vasta-ainetiitteriä parillisissa veriseerumissa.

Hemagglutinaatioreaktio (RGA) ja hemagglutinaation estoreaktio (HITA), reaktioiden mekanismi, komponentit ja sovellus.

Hemagglutinaatioreaktion perusta on punasolujen agglutinaation ilmiö, joka tapahtuu erilaisia tekijöitä. Tee ero suoran ja epäsuoran hemagglutinaation välillä.

Ensin erytrosyytit pestään isotonisella natriumkloridiliuoksella, sitten tarvittaessa (käytettäessä proteiiniluonteisia antigeenejä) ne käsitellään 1:20 000 tanniiniliuoksella ja herkistetään liukoisilla antigeeneillä. Puskuroidulla isotonisella natriumkloridiliuoksella pesun jälkeen erytrosyyttiantigeeni on valmis käytettäväksi.

Testiseerumit laimennetaan isotonisella natriumkloridiliuoksella koeputkissa tai erityisissä muovilevyissä, joissa on reikiä, minkä jälkeen kuhunkin seerumilaimennokseen lisätään erytrosyyttidiagnostiikkaa. Reaktiotulokset epäsuora hemagglutinaatio ne otetaan huomioon putken pohjalle muodostuneen punasolusedimentin luonteen mukaan. Reaktion tulos katsotaan positiiviseksi, jossa punasolut peittävät tasaisesti koko koeputken pohjan. Negatiivisella reaktiolla punasolut pienen levyn tai "painikkeen" muodossa sijaitsevat koeputken pohjan keskellä.

RP:n pääkomponentit:

A) liukoinen antigeeni

B) Spesifiset vasta-aineet (seerumi)

(RTGA) on menetelmä viruksen tunnistamiseksi tai antiviraalisten vasta-aineiden havaitsemiseksi potilaan vereseerumista, joka perustuu ilmiöön, jossa virusta sisältävä lääkeaine ei agglutinoidu punasoluissa, kun läsnä on veriseerumi, joka on immuuni sille.
perustuu virusten antigeenien estoon eli suppressioon immuuniseerumin vasta-aineilla, minkä seurauksena virukset menettävät kykynsä agglutinoida punasoluja.

RTHA:ta käytetään diagnosoimaan monia virussairauksia, joiden aiheuttajat (influenssa, tuhkarokko, vihurirokko, puutiaisaivotulehdus jne.) voivat agglutinoida eri eläinten punasoluja.
Mekanismi. Virustyypitys suoritetaan hemagglutinaation estotestissä (HITA) tyyppispesifisellä seerumisarjalla. Reaktion tulokset otetaan huomioon hemagglutinaation puuttuessa. Viruksen A alatyypit, joissa on antigeenit H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 jne.

voidaan erottaa RTGA:ssa joukolla homologisia tyyppispesifisiä seerumeita.

Ytimessä hemagglutinaatioreaktiot on erytrosyyttien agglutinaation ilmiö, joka tapahtuu eri tekijöiden vaikutuksen alaisena.

Tee ero suoran ja epäsuoran hemagglutinaation välillä.
Suorassa hemagglutinaatioreaktiossa erytrosyytit tarttuvat yhteen, kun tiettyjä antigeenejä, kuten viruksia, adsorboituvat niihin.
Serologisissa tutkimuksissa käytetään suoraa hemagglutinaation estoreaktiota, kun potilaasta eristetty virus neutraloidaan spesifisellä immuuniseerumilla ja yhdistetään sitten punasoluihin.

Hemagglutinaation puuttuminen osoittaa viruksen ja käytetyn immuuniseerumin vastaavuuden.

Epäsuora hemagglutinaatioreaktio (passiivinen hemagglutinaatio) havaitaan, kun erilaisilla antigeeneillä esikäsiteltyjä (herkistettyjä) punasoluja täydennetään immuuniseerumilla tai potilaan seerumilla, jossa on sopivat vasta-aineet.

Punasoluilla on erityinen sitoutuminen, niiden passiivinen hemagglutinaatio.

Epäsuoran eli passiivisen hemagglutinaation reaktio on herkkyydeltään ja spesifisyydeltään muita serologisia menetelmiä parempi, ja sitä käytetään bakteerien, riketsian ja alkueläinten aiheuttamien infektioiden diagnosoinnissa.

Epäsuoran hemagglutinaation reaktion asettamismenetelmä koostuu useista vaiheista.

Puskuroidulla isotonisella natriumkloridiliuoksella pesun jälkeen erytrosyyttiantigeeni on valmis käytettäväksi. Testiseerumit laimennetaan isotonisella natriumkloridiliuoksella koeputkissa tai erityisissä muovilevyissä, joissa on reikiä, minkä jälkeen kuhunkin seerumilaimennokseen lisätään erytrosyyttidiagnostiikkaa.

Epäsuoran hemagglutinaatioreaktion tulokset otetaan huomioon putken pohjalle muodostuneen punasolusedimentin luonteen mukaan. Reaktion tulos katsotaan positiiviseksi, jossa punasolut peittävät tasaisesti koko koeputken pohjan. Negatiivisen reaktion yhteydessä erytrosyytit pienen levyn tai "painikkeen" muodossa sijaitsevat koeputken pohjan keskellä.

Hemagglutinaation estoreaktio- serologinen reaktio, joka perustuu vasta-aineiden kykyyn estää punasolujen agglutinaatiota hemagglutinoituvien virustyyppien (adenovirukset, arbovirukset, jotkin enterovirukset, influenssa- ja parainfluenssavirukset, tuhkarokko, reovirukset) vaikutuksesta.

Spesifiset antiviraaliset vasta-aineet ovat vuorovaikutuksessa näiden virusten virionien hemagglutiniinien pintamolekyylien kanssa ja estävät niiden sitoutumisen erytrosyyttikalvon komplementaarisiin molekyyleihin.

SISÄÄN Viime aikoina reaktiota käytetään laajalti kliinisen virologian laboratorioissa tiettyjen virusten spesifisten vasta-aineiden tiittereiden määrittämiseen sekä virusisolaattien serologiseen tunnistamiseen ja tyypitykseen potilaiden kliinisestä materiaalista.

Käyttö on jonkin verran rajoitettua, koska ihmisten veressä on epäspesifisiä virusinhibiittoreita sekä luonnollisia vasta-aineita - agglutiniineja.

Neutralisaatioreaktio - hemagglutinaation estoreaktio (RTGA).

RTGA:ta käytetään:
-virusten serotyypitykseen;
- infektioiden serodiagnosointiin.
Asetukseen on kaksi tapaa:
- tiputusmenetelmä lasille ( orientoiva reaktio), jota käytetään virusten serokopiointiin;
- sijoitettuna koeputkiin.

Mekanismi.

Joissakin viruksissa (esim. influenssa) on hemagglutiniinia, joka aiheuttaa eri eläinten punasolujen agglutinaation virustyypistä riippuen.

Jos seerumissa on vasta-aineita - antihemagglutiniinit, havaitaan virusten aktiivisuuden estymistä.
RTGA.
Tarkoitus: influenssa A -viruksen serotyypitys

Komponentit:
1. Tutkittava materiaali on poikasen alkion allantoisneste,
2. Diagnostiset influenssatyyppispesifiset seerumit,
3. 5 % kanan punasolujen suspensio.
4.

Suolaliuos.

Reaktio asetetaan lasille pudotusmenetelmällä. 1 tippa diagnostista seerumia ja testimateriaalia laitetaan lasille, sekoitetaan, sitten lisätään 1 tippa erytrosyyttisuspensiota. Positiivisella reaktiolla havaitaan homogeeninen punoitus, ja negatiivisella reaktiolla ilmaantuu punaisia hiutaleita (hemagglutinaatio).

Edellinen31323334353637383940414243444546Seuraava

influenssavirusten ominaisuudet. Influenssan epidemiologia ja diagnoosi. RTGA:n käyttö influenssaviruksen serotyypitykseen. Valmisteet spesifiseen ennaltaehkäisyyn ja hoitoon.

Influenssa tai influenssa - akuutti infektio jolle on ominaista yläosan limakalvojen vauriot hengitysteitä, kuume, yleinen myrkytys, sydän- ja verisuoni- ja hermostojärjestelmän häiriöt.

Influenssalle on ominaista taipumus epidemian ja pandeemisen leviämiseen taudinaiheuttajan suuren tarttuvuuden ja vaihtelevuuden vuoksi.

patogeenien ominaisuudet. Patogeenit - influenssavirukset kuuluvat perheeseen. Orthomyxoviridae, suvut Influenzavirus A, B ja Influenzavirus C. Influenssavirukset ovat RNA-viruksia. Tyypin A influenssaviruksen eristivät vuonna 1933 W. Smith, K. Andrews, P. Laidlaw. Vuonna 1940 T.

Hemagglutinaatiomenetelmän soveltaminen virologiassa.

Francis ja R. Medzhill eristivät tyypin B influenssavirukset, vuonna 1949 R. Taylor - tyypin C. Venäjällä A. A. Smorodintsev eristi ensimmäiset influenssavirukset vuonna 1936 ja määritti ne tyyppiin A. Morphology. Influenssaviruksilla on pallomainen muoto (pallon muotoinen) - 80 - 120 nm, harvemmin ne ovat filamenttimuotoisia. Ne koostuvat: 1) ytimestä - kierteisen symmetrian nukleokapsidista (yksijuosteinen lineaarinen "-" -RNA-juoste + proteiinikapsidi); 2) pohjakalvo- ulompi lipoproteiinikuori - superkapsidi.

Kalvon pinnalla on 2 tyyppisiä glykoproteiineja (piikkien ja villien muodossa): 1) hemagglutiniini - edistää kiinnittymistä solureseptoreihin; 2) neuraminidaasi - edistää viruksen vapautumista solusta. Viljely. Viljelyyn käytetään kanan alkioita, primaarisia trypsinoituja soluviljelmiä ja joskus laboratorioeläimiä.

Kätevin malli on kananpoikien alkiot 10-12 - päivän vanha. Sen avulla voit saada suuria määriä virusta, mikä on välttämätöntä rokotteiden ja bakteerivalmisteiden tuotannossa.

Infektio suoritetaan allontoaalisessa ontelossa, suoni-allontoisessa kalvossa, lapsivesiontelossa, amnionissa. Viruksen esiintyminen kanan alkiossa havaitaan hemagglutinaatiotestissä. Antigeeninen rakenne. Viruksilla on sisäinen antigeeni - S ja pinta-antigeenit: HA-hemagglutiniini ja NA-neuraminidaasi. S-antigeeni - ryhmäspesifinen, yhteinen koko tyypille, tämän antigeenin mukaan influenssavirukset jaetaan tyyppeihin A, B ja C. Tämä on komplementtia sitova, stabiili (muuttumaton) antigeeni.

HA- ja NA-antigeenit ovat spesifisiä antigeenejä. HA-antigeeni aiheuttaa viruksia neutraloivien vasta-aineiden muodostumisen ja punasolujen agglutinaation.

NA-antigeeni aiheuttaa vasta-aineiden muodostumista, jotka osittain neutraloivat viruksia.

Tyypin B virus on vähemmän vaihteleva, kun taas tyyppi C on erittäin stabiili.

myrkyllisiä ominaisuuksia. Viruksen myrkyllinen vaikutus elimistöön ( päänsärky, lihaskipu, lämpötila, katarraaliset ilmiöt) johtuu viruksen proteiineista (itse viruspartikkeleista). Tämä vaikutus on tiukasti spesifinen ja sen neutraloi vain vastaavan tyypin tai alatyypin immuuniseerumi tai sairaiden seerumi. vastus. Influenssavirukset ovat herkkiä UV-säteille, desinfiointiaineille (formaliini, alkoholi, fenoli, kloramiini) ja rasvaliuottimille.

Nestemäisessä väliaineessa ne kuolevat 50 - 60 ° C: n lämpötilassa useita minuutteja. Huoneenlämmössä ilmassa virukset pysyvät tarttuvina useita tunteja. Niitä varastoidaan pitkään kuivatussa muodossa, ja jäädytetyssä tilassa (-70 ° C) ne eivät vain säily pitkään, eivätkä myöskään menetä virulenssiaan.

eläinten herkkyys. Luonnollisissa olosuhteissa A-tyypin virukset tartuttavat ihmisiä ja eläimiä (hevoset ja siat sairastuvat), kun taas tyypin B ja C virukset tartuttavat vain ihmisiä. Laboratorioeläimistä valkoiset hiiret, afrikkalaiset fretit, syyrialaiset hamsterit ja apinat ovat alttiita viruksille.

Eläinten taudille on ominaista keuhkovaurio, kuume ja se voi johtaa eläinten kuolemaan. Taudin epidemiologia. Tartunnan lähde on sairas henkilö, jolla on kliinisesti selvä tai oireeton muoto. Sairas ihminen levittää viruksen ympäristöön yskiessä, puhuessa, aivastaessa sylkeä, limaa, ysköstä jo itämisaikana.

Potilas tarttuu 24 tuntia ennen pääoireiden alkamista ja aiheuttaa epidemian vaaran 48 tunnin kuluessa oireiden häviämisestä.

Välitysmekanismi on aerogeeninen. Tarttumisreitti on ilmateitse. Ihmisten alttius influenssalle on erittäin korkea. Kaikki sairastuvat ikäryhmät, pääasiassa sisällä talviaika. Lapset ja vanhukset ovat alttiimpia. Taudin nimi kuvastaa epidemiologian piirteitä: influenssa ranskasta. tarttuja - tartu, influenssa - italiasta. Influenza di freddo - kylmän vaikutus.

Kaikista terävistä hengityselinten sairaudet influenssa on yleisin ja vakava sairaus. Influenssapandemiat ja -epidemiat kattavat jopa 30-50 % tai enemmän väestöstä maapallo aiheuttaa valtavia vahinkoja maiden terveydelle ja taloudelle. Ensimmäiset kuvaukset influenssaepidemioista ovat peräisin 1100-1300-luvuilta. Pandemioiden ja suurepidemioiden esiintymisen aiheuttaa A-tyypin influenssavirus, joka johtuu viruksen suuresta vaihtelevuudesta ja liittyy uuden alatyypin syntymiseen antigeenisiirtymän seurauksena.

Pandemioiden välillä epidemioita esiintyy 1,5-2 vuoden välein, mikä liittyy virusten antigeeniseen ajautumiseen. Vuonna 1918 Espanjan influenssapandemian (1,5 miljardia ihmistä sairastui, 20 miljoonaa ihmistä kuoli) aiheutti A1-influenssavirus. Pandemia rekisteröitiin ensisijaisesti Espanjassa ja kattoi lähes koko maapallon väestön; taudille oli ominaista poikkeuksellisen vaikean verenvuotokeuhkokuumeen kehittyminen, jonka kuolleisuus oli ennätyksellistä (jopa 1 % kaikista tapauksista).

Vuonna 1957 "aasialaisen" pandemian (2 miljardia ihmistä sairastui) aiheutti uusi alatyyppi - alatyyppi A2. Vuonna 1968 "Hongkongin" pandemian (1 miljardi ihmistä sairastui) aiheutti äskettäin syntynyt alatyyppi - alatyyppi A3. Yleensä, uusi versio virus syrjäyttää aiemmin kiertäneen lajikkeen ihmispopulaatiosta.

Mutta vuonna 1977, 20 vuoden tauon jälkeen, tyyppi A1 "palasi odottamatta", mikä johti suureen epidemiaan. Näin ollen influenssaviruksen repressoidut muunnelmat säilyvät ja voivat tietyin väliajoin taas aiheuttaa epidemian. Tyypin B virus aiheuttaa paikallisia epidemioita, kun taas tyyppi C ei aiheuta epidemioita. Taudin patogeneesi ja klinikka. Sisäänkäyntiportti on ylempi hengitystie. Virus tunkeutuu limakalvon epiteelisoluihin ja lisääntyy niissä.

Viruksen vaikutus epiteelisoluihin aiheuttaa niiden nekroosin ja epiteelin hilseilyn (hyljinnän), minkä seurauksena limakalvosta tulee viruksia ja bakteereja läpäisevä. Ne tunkeutuvat vereen ja leviävät koko kehoon.” Viremiaan liittyy useita kapillaarin endoteelin vaurioita ja niiden läpäisevyyden lisääntymistä.

SISÄÄN vakavia tapauksia keuhkoissa, sydänlihaksessa ja parenkymaalisissa elimissä on laajoja verenvuotoja. Vaurioituneiden solujen ja virusproteiinien hajoamistuotteet ovat myrkyllinen vaikutus eri elimiin ja elinjärjestelmiin. Viruksen myrkyt painavat voimakkaasti keskushermostoa, ja vaikka prosessi ei kestä kauan (3-5 päivää), sairas ihminen pysyy heikentyneenä pitkään ja heikentyneeseen kehoon liittyy jokin toissijainen infektio ja syntyy komplikaatioita: influenssakeuhkokuume, akuutti keuhkopöhö, munuaisten, sydämen, keuhkoputkien vauriot.

Influenssan yleinen komplikaatio bakteeriperäinen keuhkokuume(ryhmän B streptokokit). Espanjan influenssapandemian aikana ihmisiä kuoli pääasiassa sekundääriseen bakteeriperäiseen keuhkokuumeeseen.

Influenssan patogeneesissä ei vain myrkytys ole tärkeä, vaan myös allergisaatio sekä immunokompetenttien solujen toiminnallisten ominaisuuksien rikkominen immuunipuutoksen kehittyessä. Itämisaika- useita tunteja - 1-3 päivää. Ominaista akuutti alkaminen, lämpötilan nousu 37,5 - 38 ° C: een, yleinen myrkytys ilmaistaan huonovointisuuden, päänsäryn, kivun muodossa silmämunat, hengitysteiden tulehdusprosessit, joiden vaikeusaste (nuha, kurkunpäätulehdus, trakeiitti, nielutulehdus).

Kuumeinen tila influenssalla ilman komplikaatioita kestää 5-6 päivää. Immuniteetti. Sairauden jälkeen muodostuu tyyppispesifinen ja kantaspesifinen immuniteetti, jonka aikaansaavat spesifiset ja epäspesifiset solu- ja humoraaliset tekijät. Hyvin tärkeä on Ig A vasta-aineita.Ristiimmuniteetti ei kehity, sairastettuaan tyypin A1 influenssan voi saada tyypin A2 jne. Immuniteettityypin viruksen jälkeen - 1-2 vuotta, B-tyypin viruksen jälkeen - 3-5 vuotta.

Passiivinen luonnollinen immuniteetti - 8-11 kuukauden ikäisille lapsille. Viruksen suuren antigeenisen vaihtelevuuden vuoksi toipuminen ei johda jatkuvan immuniteetin kehittymiseen uudelleeninfektiota vastaan.

Laboratoriodiagnostiikka. Tutkittava materiaali: närästykset-jäljet nenän limakalvolta, nenänielun vuoto, keuhkojen palaset, aivot kuolemantapauksissa.

Diagnostiset menetelmät: 1) sytorinoskopiamenetelmä - virukselle spesifisten solunsisäisten sulkeumien havaitseminen - pyoktaniinilla värjättynä mikroskoopilla influenssaviruksen kirkkaan punaiset sulkeumat ovat näkyvissä sädeepiteelin soluissa; 2) virologinen menetelmä- influenssaviruksen eristäminen ihmiskehosta infektoimalla kanan alkioita potilaan nenänielun pesuaineella; viruksen indikaatio (läsnäolo) suoritetaan RGA:lla (influenssavirukset agglutinoivat ihmisten ja eri eläinten punasoluja), viruksen tunnistaminen suoritetaan vaiheittain: tyyppi määritetään RSC:ssä, hemagglutiniinin alatyyppi määritetään RTGA:ssa ja neuraminidaasin alatyyppi määritetään entsyymitoiminnan estoreaktiossa; 3) serologinen menetelmä - spesifisten vasta-aineiden tiitterin (4-kertainen) nousun havaitseminen potilaan veren seerumissa käyttämällä RSK:ta, RTGA:ta, PH:ta soluviljelmässä, geelisaostusreaktiota, ELISA:a; 4) biologinen menetelmä- hiirten intranasaalinen infektio - materiaalin joutuminen keuhkoihin eetterianestesia; hiiret kuolevat 2 - 3 päivän kuluttua keuhkokuumeen seurauksena; 5) express-diagnostiikka - virusantigeenin havaitseminen RIF:n avulla.

Hoito ja ehkäisy.

Ennaltaehkäisyyn ja hoitoon taudin ensimmäisinä päivinä käytetään ihmisen leukosyyttiinterferonia (intranasaalisesti). SISÄÄN lääketieteellisiin tarkoituksiin käyttää viruslääkkeitä- rimantadiini (tyypin A influenssa), adapromiini, viratsoli ja immunomoduloivat lääkkeet - dibatsoli, prodigiosaani, levomisoli.

Vaikeassa influenssassa, erityisesti lapsilla, käytetään luovuttaja-influenssa-immunoglobuliinia sekä lääkkeitä - soluproteaasien estäjiä (gordox, contrical, aminokaproiinihappo).

Erityinen ehkäisy. Käytetään seuraavia antiviraalisia lääkkeitä ja immunomodulaattoreita sekä eläviä ja inaktivoituja rokotteita: 1) elävät monorokotteet suun kautta annettavaksi - tällä hetkellä kiertävien virusten (A1, A3 ja B) heikennetyt kannat; osoittavat suurinta immunogeenisyyttä; 2) formaldehydillä tai UV-säteillä inaktivoitujen virulenttien kantojen kokovirionirokotteet; 3) alayksikkö-influenssarokotteet vain pinta-antigeeneistä - HA- ja NA-antigeeneistä (joilla on minimaalinen reaktogeenisyys).

Rokotteiden saamiseksi viruksia viljellään kanan alkioissa ja kanan alkiosoluviljelmässä.

Rokotteiden käyttöönoton myötä muodostuu paikallinen ja humoraalinen immuniteetti. Rokotus suoritetaan aikoina, jolloin epidemiariski on suurin. Se sopii paremmin nuorille ja vanhuksille. Tapettujen rokotteiden käyttö edellyttää vuosittaista uusintarokotusta; niiden tehokkuus ei ylitä 60-70%.

Koska Koska patogeenin antigeenisiä variaatioita havaitaan usein, vastaavan viruksen antigeenien joukko immunisaatiota varten voidaan määrittää vasta taudinpurkauksen alkamisen jälkeen.

Lippu 15.

Hemagglutinaatioreaktio (RGA).

Laboratoriossa käytetään kahta erilaista hemagglutinaatioreaktiota.

Ensimmäinen RGA viittaa serologiseen. Tässä reaktiossa punasolut agglutinoituvat, kun ne ovat vuorovaikutuksessa vastaavien vasta-aineiden (hemagglutiniinien) kanssa.

Reaktiota käytetään laajalti veriryhmien määrittämiseen.

Toinen RHA ei ole serologinen. Siinä ei aiheudu punasolujen agglutinaatiota

vasta-aineita, vaan virusten muodostamia erityisiä aineita. Esimerkiksi influenssavirus agglutinoi kanan punasoluja ja marsut, poliomyeliittivirus - lampaiden punasolut. Tämän reaktion avulla on mahdollista arvioida tietyn viruksen läsnäolo testimateriaalissa.

Reaktio suoritetaan koeputkissa tai erityisillä kuoppaisilla levyillä.

Viruksen esiintymisen varalta testattava materiaali laimennetaan isotonisella liuoksella suhteessa 1:10 - 1:1280; 0,5 ml kutakin laimennosta sekoitetaan yhtä suuren tilavuuden kanssa 1-2 % erytrosyyttisuspensiota. Kontrollissa 0,5 ml punasoluja sekoitetaan 0,5 ml:aan isotonista liuosta. Koeputket asetetaan termostaattiin 30 minuutiksi ja levyt jätetään huoneenlämpötilaan 45 minuutiksi.

Tulosten kirjanpito. Kun reaktion tulos on positiivinen koeputken tai kuopan pohjassa, putoaa erytrosyyttien sakka ("sateenvarjo") ja peittää koko kuopan pohjan.

Hemagglutinaation estoreaktio

Jos tulos on negatiivinen, erytrosyytit muodostavat tiheän sakan, jonka reunat ovat sileät ("painike"). Saman saostuman tulisi olla hallinnassa.

Reaktion intensiteetti ilmaistaan "+"-merkeillä. Viruksen tiitteri on materiaalin maksimilaimennus, jossa agglutinaatio tapahtuu.

Hemagglutinaation estoreaktio

Tämä on serologinen reaktio, jossa spesifiset antiviraaliset vasta-aineet, jotka ovat vuorovaikutuksessa viruksen (antigeenin) kanssa, neutraloivat sen ja riistävät sen kyvyn agglutinoida punasoluja, ts.

e. estävät hemagglutinaatioreaktion. Tämän reaktion avulla voit määrittää virusten tyypin ja tyypin.

Reaktioasetus. 0,25 ml antiviraalinen seerumi sekoitettuna yhtä suureen määrään viruksen sisältävää materiaalia. Seosta ravistellaan ja asetetaan termostaattiin 30 minuutiksi, minkä jälkeen lisätään 0,5 ml 1-2 % erytrosyyttisuspensiota.

Tulosten kirjanpito. Kokeen oikealla asetuksella seerumin ja erytrosyyttien säätelyssä tulisi muodostua "painike" - punasoluja agglutinoivaa tekijää ei ole; antigeenikontrollissa muodostuu "sateenvarjo" - virus aiheutti punasolujen agglutinaation.

Jos seerumi on homologinen tutkittavan viruksen kanssa, muodostuu "nappi" - seerumi on neutraloinut viruksen.

Epäsuora hemagglutinaatioreaktio

Epäsuoran (passiivisen) hemagglutinaation (RIHA) reaktio perustuu siihen, että erytrosyytit, jos niiden pinnalle adsorboituu liukoinen antigeeni, saavat kyvyn agglutinoitua vuorovaikutuksessa adsorboituneen antigeenin vasta-aineiden kanssa.

Reaktioasetus.

Seerumia kuumennetaan 30 minuuttia 56 °C:ssa, laimennetaan peräkkäin suhteessa 1:10 - 1:1280 ja kaadetaan koeputkiin tai kuoppiin 0,25 ml:ssa, johon sitten lisätään 2 tippaa punasoluja, joihin on adsorboitunut antigeenejä.

Säätimet: erytrosyyttien suspensio, joihin on adsorboitunut antigeenejä ilmeisen immuuniseerumin kanssa, punasolujen suspensio, joihin on adsorboitunut antigeenejä normaalilla seerumilla; normaalien punasolujen suspensio testatun seerumin kanssa.

Ensimmäisessä kontrollissa agglutinaation pitäisi tapahtua, toisessa ja kolmannessa sen ei pitäisi tapahtua.

Kontrollikysymykset.

1. Mitä positiivinen RGA-tulos erytrosyyttien ja viruksen esiintymisen varalta tutkitun materiaalin välillä osoittaa?

2. Tapahtuuko erytrosyyttien agglutinaatioreaktio, jos niihin lisätään virus ja sitä vastaava seerumi?

Mikä on tämän ilmiön paljastavan reaktion nimi?

KÄYTÄNNÖN TYÖ №12.

Komplementin sitoutumisreaktio.

Komplementin sitoutumisreaktio (RCT) perustuu siihen, että spesifinen antigeeni-vasta-ainekompleksi adsorboi (sitoutuu) aina itseensä komplementin.

Tätä reaktiota käytetään laajalti antigeenien tunnistamisessa ja infektioiden, erityisesti spirokeettien (Wassermann-reaktio), riketsioiden ja virusten aiheuttamien sairauksien, serodiagnosissa.

PCS on monimutkainen serologinen reaktio.

Se sisältää komplementin ja kaksi antigeeni-vasta-ainejärjestelmää. Pohjimmiltaan nämä ovat kaksi serologista reaktiota.

Oikea perusjärjestelmä koostuu antigeenistä ja vasta-aineesta (toinen tunnetaan, toinen ei). Siihen lisätään tietty määrä komplementtia. Jos tämän järjestelmän antigeeni ja vasta-aine täsmäävät, ne yhdistävät ja yhdistävät komplimentin. Tuloksena oleva kompleksi on hienojakoinen eikä ole näkyvissä.

Tämän kompleksin muodostuminen tunnetaan toisen hemolyyttisen tai indikaattorijärjestelmän avulla.

Se sisältää lampaiden punasolut (antigeeni) ja niitä vastaavan hemolyyttisen seerumin (vasta-aineen), ts. valmis immuunikompleksi. Tässä järjestelmässä erytrosyyttien hajoaminen voi tapahtua vain komplementin läsnä ollessa. Jos komplementti on sidottu ensimmäiseen järjestelmään, toisessa järjestelmässä ei tapahdu hemolyysiä;

ei ilmaista täydennystä. Hemolyysin puuttuminen (putken sisältö on sameaa tai putken pohjassa on punasolusedimenttiä) kirjataan RSK:n positiiviseksi tulokseksi.

Jos ensimmäisessä järjestelmässä antigeeni ei vastaa vasta-ainetta, immuunikompleksia ei muodostu ja komplimentti pysyy vapaana. Vapaana pysynyt komplimentti osallistuu toiseen järjestelmään aiheuttaen hemolyysin, RSK:n tulos on negatiivinen (putkien sisältö on läpinäkyvää - "lakkaveri").

Komponentit, komplementin kiinnitysreaktiot:

Antigeeni - yleensä lysaatti, uute, hapteeni,

harvemmin mikro-organismien suspensio.

2. Vasta-aine – potilaan seerumi.

3. Komplementti - marsun seerumi.

Antigeeni - lampaan punasolut.

5. Vasta-aine - hemolysiini lampaiden punasoluille.

6. Isotoninen liuos.

Ottaen huomioon, että RSC osallistuu suuri määrä monimutkaiset komponentit,

ne on esititrattava ja otettava reaktioon tarkat määrät ja yhtä suuret tilavuudet: 0,5 tai 0,25 ml, harvemmin 0,2, 1,25 tai 1,0 ml (suuremmat tilavuudet antavat tarkemman tuloksen). Reaktiokomponenttien titraus suoritetaan samassa tilavuudessa kuin koe, korvaamalla puuttuvat aineosat isotonisella liuoksella.

Liittyviä tietoja:

Sivustohaku:

Se perustuu siihen tosiasiaan, että erytrosyytit, joihin antigeenit ovat esiadsorboituneita, saavat kyvyn agglutinoitua homologisten seerumien (vasta-aineiden) läsnä ollessa.

Tässä tapauksessa erytrosyytit toimivat kantajina spesifisten determinanttien kanssa, joiden agglutinaatio tapahtuu antigeeni + vasta-ainereaktion seurauksena.

Punasoluja, joiden pintaan antigeenit ovat tiukasti kiinnittyneet, kutsutaan erytrosyyttiantigeenisiksi diagnostisiksi eli antigeenillä herkistetyiksi punasoluiksi.

Toinen RNHA-vasta-aineiden tyyppi adsorboituu erytrosyyttien pintaan ja niiden myöhempi agglutinaatio tapahtuu homologisen antigeenin läsnä ollessa.

Tässä tapauksessa tällaisia punasoluja kutsutaan erytrosyyttivasta-aine diagnostisiksi eli vasta-aineilla herkistetyiksi punasoluiksi.

Näiden kahden perustavanlaatuisen metodologisen lähestymistavan pohjalta on kehitetty monia RNGA:n muunnelmia ja niitä käytetään. Joten pieniä vakiohiukkasia lateksia käytetään kantajina.

Hemagglutinaation estoreaktio (HITA)

Tässä tapauksessa reaktiota kutsutaan lateksiagglutinaatioreaktioksi (RLA) tai käytetään Staphylococcus aureusta - hyytymisreaktiota jne. Yleensä punasoludiagnostiikkaa valmistetaan biologisen teollisuuden yrityksissä, ja pääasiallinen RNGA-kokemus on jo asetettu diagnostisissa laboratorioissa.

Punasoludiagnostiikan valmistelu sisältää seuraavat vaiheet:

erytrosyyttien kiinnitys formaldehydillä tai glutaari- tai akryylialdehydeillä.
Tällaisia prosessoituja punasoluja säilytetään pitkään. Useammin tähän tarkoitukseen käytetään lampaiden, ihmisten, kanojen jne. punasoluja;
kiinnittyneiden punasolujen käsittely tanniiniliuoksella. Tämän seurauksena erytrosyytit saavat ominaisuuden peruuttamattomasti adsorboida proteiineja (viruksia ja vasta-aineita) pinnalle;
tanized erytrosyyttien herkistäminen viruksilla tai vasta-aineilla.

On huomattava, että menetelmät erytrosyyttidiagnostiikan valmistamiseksi virusinfektioille ovat erilaisia.

Tekniikka RNHA:n määrittämiseksi vasta-ainetiitterin havaitsemiseksi ja määrittämiseksi on seuraava:

peräkkäisiin 2-kertaisiin seerumilaimennoksiin lisätään yhtä suuret annokset antigeenillä herkistettyjä punasoluja;
seos jätetään 2-3 tunniksi huoneenlämpötilaan tai 16-18 tunniksi 4 °C:seen;
ottaa tulokset huomioon.
Jos seerumi sisältää vasta-aineita virukselle, jolla erytrosyytit herkistettiin, havaitaan hemagglutinaatiota, joka arvioidaan risteytyksissä.

Seerumin vasta-ainetiitteri pidetään seerumin korkeimpana laimennoksena, joka silti antaa hemagglutinaation vähintään kahdella ristillä.

RNGA:n mukana on kaikki asiaankuuluvat hallintalaitteet. Yleensä he laittavat reaktion mikromenetelmällä.

RNHA mahdollistaa seuraavat diagnostiset tehtävät:

havaita vasta-aineet ja määrittää niiden tiitteri veren seerumissa käyttämällä tunnettua punasoluantigeenidiagnostiikkaa;
tunnistaa ja tunnistaa tuntematon virus käyttämällä tunnettua punasolujen diagnostiikkaa.

RNGA:n edut: korkea herkkyys, helppo asetustekniikka ja nopea reagointi.

On kuitenkin tärkeää huomata, että stabiilien punasoludiagnostiikan valmistuksessa on suuria vaikeuksia (suuri riippuvuus käytettyjen komponenttien puhtaudesta, tarve valita erytrosyyttien kiinnitys-, tanisaation ja herkistystapa kullekin virustyypille).

Jos löydät virheen, valitse tekstiosa ja paina Ctrl+Enter.

Yhteydessä

Luokkatoverit

Se käyttää erytrosyyttejä tai neutraaleja synteettisiä materiaaleja (esimerkiksi lateksihiukkasia), joiden pinnalle adsorboituu antigeenejä (bakteeri-, virus-, kudos-) tai vasta-aineita.

Niiden agglutinaatio tapahtuu, kun sopivat seerumit tai antigeenit lisätään. Antigeeneillä herkistettyjä punasoluja kutsutaan antigeenisiksi punasoluiksi, ja niitä käytetään vasta-aineiden havaitsemiseen ja titraamiseen. Erytrosyytit herkistetty vasta-aineilla. kutsutaan immunoglobuliini-erytrosyyttidiagnostisiksi ja niitä käytetään antigeenien havaitsemiseen.

Passiivista hemagglutinaatioreaktiota käytetään diagnosoimaan bakteerien aiheuttamia sairauksia (lavantauti ja sivutauti, punatauti, luomistauti, rutto, kolera jne.), alkueläinten (malaria) ja virusten (flunssa, adenovirusinfektiot, virushepatiitti B, tuhkarokko, puutiaisaivotulehdus, Krimi verenvuotokuume jne.), sekä määrittää joitakin hormoneja, tunnistaa yliherkkyys sairasta lääkkeet ja hormonit, kuten penisilliini ja insuliini.

Passiivisen hemagglutinaation (RPHA) reaktio.

Passiivinen hemagglutinaatiotesti on herkkä serologisen diagnoosin menetelmä ja sitä käytetään sekä varhaiseen että retrospektiiviseen diagnoosiin sekä rokotettujen immunologisen tilan määrittämiseen. Tularemiapotilailla vasta-aineet havaitaan yleensä sairauden 1. tai 2. viikon lopussa, 1-1,5 kuukauden kuluttua TPHA-tiitterit saavuttavat maksimiarvot (1:100000-1:20000, harvemmin korkeammat), minkä jälkeen ne laskevat ja pysyvät tasolla 1:100-1:200 pitkään.

Rokotetuilla vasta-aineita havaitaan myös jatkuvasti, mutta alemmissa tiittereissä, jotka eivät ylitä 1:2000-1:5000 1-1,5 kuukautta rokotuksen jälkeen, ne pysyvät useita vuosia alhaisella tasolla 1:20-1:80.

Tularemia erythrocyte diagnosticum (antigeeninen) toimii antigeeninä RPHA:n asettamiseen.

Lääke on formalinoituja pässin punasoluja, jotka on herkistetty tularemiaantigeenillä, saatavana nestemäisessä ja kuivassa muodossa. Nestemäinen valmiste - 10-prosenttinen erytrosyyttien suspensio 10-prosenttisessa formaliiniliuoksessa. Kuiva lyofilisoitu valmiste - vakuumikuivattu 10 % erytrosyyttien suspensio ilman säilöntäainetta. Ennen käyttöä se laimennetaan etiketin ohjeiden mukaan. Reaktion aikaansaamiseksi polystyreenilevyissä käytetään molempia valmisteita 2,5 %:n pitoisuutena ja kun reaktiota käynnistetään mikrotilavuuksina, 0,5 %:n pitoisuutena.

RPGA-asetustekniikka.

Testiseerumit laimennetaan suolaliuosta 1:5 (1:10) ja kuumennettiin 56 asteessa 30 minuuttia.

Hemagglutinaatioreaktio (RHA) ja

Tämän jälkeen seerumit käsitellään pässin erytrosyyttien heterogeenisten vasta-aineiden poistamiseksi 50-prosenttisella formalisoitujen punasolujen suspensiolla. Tätä varten erytrosyyttejä lisätään nopeudella 2 tippaa (0,05 ml) 1 ml:aan seerumia ja sekoitetaan perusteellisesti ravistamalla.

Seerumi jätetään erytrosyyttien täydelliseen sedimentoitumiseen asti tai sentrifugoidaan tunnin kuluttua huoneenlämmössä, minkä jälkeen se on valmis tutkimukseen.

Laimennusnestettä kaadetaan 0,5 ml:n tilavuudessa useisiin polystyreenilevyn kuoppiin.

Seerumien alustavassa tutkimuksessa on suositeltavaa testata ne asettamalla reaktio levyn lyhyeen riviin (6 reikää). Jos vasta-aineita havaitaan lyhyessä seerumisarjassa, seerumit tutkitaan uudelleen pitkässä laimennussarjassa (12 kuoppaa).

Kun laimennusneste on läikkynyt, 0,5 ml testiseerumia 1:5 laimennoksessa lisätään kunkin rivin (lyhyen tai pitkän) ensimmäiseen kuoppaan. Sitten samoissa tilavuuksissa seerumi titrataan kaksinkertaisilla laimennoksilla. Siten seerumilaimennokset saadaan lyhyessä sarjassa 1:10 - 1:320 ja pitkässä sarjassa - 1:10 - 1:20480. Seerumien titrauksen jälkeen jokaiseen kuoppaan lisätään yksi tippa (0,05 ml) herkistetyn erytrosyyttien 2,5-prosenttista käyttösuspensiota.

Levyjen sisältöä ravistellaan perusteellisesti, kunnes saadaan homogeeninen suspensio. Levyt jätetään huoneenlämpöön pöydän kiinteälle pinnalle. Reaktion alustava rekisteröinti suoritetaan 2-3 tunnin kuluttua, lopullinen tiitterin määritys suoritetaan sen jälkeen, kun erytrosyyttien sedimentaatio on täydellinen kuopissa. Reaktiolle tarjotaan seuraavat kontrollit: 1) testiseerumi laimennoksella 1:10 0,5 ml:n tilavuudessa + 1 tippa herkittämättömien punasolujen 2,5-prosenttista suspensiota; 2) laimennusneste, jonka tilavuus on 0,5 ml + 1 tippa 2,5 % herkittämättömien punasolujen suspensiota; 3) laimennusneste 0,5 ml:n tilavuudessa + 1 tippa 2,5-prosenttista herkistettyjen punasolujen suspensiota.

Kaikkien kontrollien tulee antaa selvästi negatiivinen reaktio.

RPGA:n kirjanpito ja arviointi. Reaktio arvioidaan seuraavan kaavion mukaisesti:

1) jyrkästi positiivinen reaktio (++++) - erytrosyytit putoavat kuopan pohjalle yhtenäisenä kerroksena "sateenvarjon" muodossa, jossa on usein hilseilevät reunat;

2) positiivinen reaktio (+++) - erytrosyytit peittävät vähintään 2/3 reiän pohjasta;

3) heikosti positiivinen reaktio (++) - agglutinaatti on pieni ja sijaitsee aivan reiän keskellä;

4) epäilyttävä reaktio (+) - erytrosyyttisedimentin ympärillä aivan reiän keskellä on erillisiä agglutinaattirakeita;

5) negatiivinen (-) - reiän pohjassa punasolut asettuvat "painikkeen" tai pienen renkaan muodossa, jossa on sileät, terävästi rajatut reunat.

Seerumititteri otetaan huomioon viimeisen seerumilaimennoksen mukaan, joka antoi erittäin selkeän reaktion (vähintään kolme plussaa).

Laimennusta 1:100 tai enemmän pidetään diagnostisena tiitterinä, mutta kuten RA:n tapauksessa, sen nousua on seurattava.

TPHA tularemiassa on melko spesifinen ja havaitsee joitain ristireaktioita vain luomistaudin seerumien kanssa. Erotusdiagnoosi Tämä on mahdollista TPHA:n tiitterien korkeudella, jotka ovat paljon korkeammat homologisella antigeenillä.

Tekniikka RPHA:n asettamiseen mikrotilavuuksina.

RPHA voidaan suorittaa mikrotilavuuksina käyttämällä Takachi-tyyppistä mikrotiitteriä (tai pyöreäpohjaisia mikrotiitterilevyjä mikropipetteillä), mikä mahdollistaa materiaalin titrauksen 25 µl:n ja 50 µl:n tilavuuksina. Reaktioiden asettamistekniikka, kaikkien toimintojen järjestys on sama kuin tutkimuksessa polystyreenilevyillä. On kuitenkin pidettävä mielessä, että mikromenetelmän herkkyys on yleensä laimennusta kohti (ts.

2 kertaa) pienempi kuin makromenetelmä.

Reaktion asettamiseksi mikrotiitteriin pipettipipettiä käyttäen laimennusnestettä lisätään kuhunkin kuoppaan 50 µl:n tilavuudessa. Sitten 50 µl:n pään titraattoreiden avulla testiseerumi otetaan upottamalla pää siihen.

Varmista, että neste on täyttänyt titrauspään. Titraattori seerumin kanssa siirretään ensimmäiseen kuoppaan ja pidä sitä pystyasennossa useita pyörivät liikkeet meno-paluu matka. Sitten titraattori siirretään seuraavaan kuoppaan ja käsittely toistetaan. Titraus voidaan suorittaa samanaikaisesti useissa riveissä. Koko rivin titrauksen jälkeen titraaja pestään tislatulla vedellä (2 annoksen vaihdolla) pyörivin liikkein, vesi poistetaan päästä vanupuikolla ja poltetaan polttimen liekillä.

Titrauksen jälkeen kuoppiin lisätään 25 μl erytrosyyttidiagnostiikkaa.

RPHA:n diagnostisen aineen pitoisuuden mikrotilavuuksina tulisi olla 0,5 % (eli 2,5 % erytrosyyttisuspensiota laimennetaan lisäksi 5 kertaa). Punasolujen lisäämisen jälkeen levyjä tulee ravistaa kevyesti, kunnes saadaan homogeeninen suspensio. Tulokset voidaan kirjata jo 1-1,5 tunnin kuluttua, mikä on RPHA:n merkittävä etu mikrotiitterissä.

Lisäksi tämä menetelmä vaatii pienen määrän kaikkia reaktion aineosia ja testiseerumia.

Reaktio lasketaan seuraavasti:

1) "+" - täydellinen hemagglutinaatio, jossa erytrosyytit putoavat kuopan pohjalle yhtenäisessä kerroksessa "sateenvarjon" muodossa, joka vie vähintään 2/3 pohjasta;

2) "+ -" - osittainen hemagglutinaatio, jossa erytrosyytit putoavat pohjaan pienen koon löysän renkaan muodossa;

3) "-" - hemagglutinaation puuttuminen, kun erytrosyytit putoavat pohjaan pienen napin tai renkaan muodossa, jolla on sileä reuna.

Spesifisyys positiivinen tulos TPHA:ssa saatua reaktiota voidaan tarkistaa käyttämällä kolmikomponenttista reaktiota - passiivisen hemagglutinaation (RPHA) estoreaktiota.

RTPGA-asetustekniikka.

Tämä reaktio on asetettu vahvistamaan RPHA:n positiivisen tuloksen spesifisyyttä, kun se on epävarmaa tai sillä on erityistä epidemiologista merkitystä. Reaktiomekanismi koostuu hemagglutinaation spesifisestä estämisestä, kun testiseerumiin lisätään kuolleiden tularemiabakteerien suspensiota. Kolme komponenttia vuorovaikuttavat reaktiossa: testiseerumi, spesifinen tularemia-antigeeni ja antigeeninen punasoludiagnostiikka RTPGA sijoitetaan yleensä 7-8 kuopan riviin.

On suositeltavaa asentaa toinen RPGA rinnakkain RTPGA:n kanssa. 0,25 ml laimennusnestettä kaadetaan kahteen kuoppariviin, sitten testiseerumia 0,25 ml:n tilavuudessa lisätään molempien rivien ensimmäisiin kuoppiin ja titrataan. Lisää 0,25 ml laimennusnestettä toisen rivin kaikkiin kuoppiin ja 0,25 ml tularemiabakteerisuspensiota ensimmäisen rivin kuoppiin.

Käytetään Tularemia diagnosticumia (sisältää 25 miljardia tularemiabakteeria 1 ml:ssa), aiemmin laimennettuna 50 kertaa.

Tällainen suspensio sisältää 500 miljoonaa bakteeria 1 ml:ssa tai 125 miljoonaa 0,25 ml:n tilavuudessa. Antigeenin lisäämisen jälkeen levy jätetään 1 tunniksi huoneenlämpötilaan, minkä jälkeen lisätään yksi tippa (0,05 ml) erytrosyyttidiagnostiikkaa molempien rivien kaikkiin kuoppiin, levyä ravistetaan ja jätetään pöydän tasaiselle pinnalle.

Laskutus hoituu 2-3 tunnissa.

RTPGA:n kirjanpito ja arviointi. Jos testiseerumi sisältää spesifisiä tularemiavasta-aineita, lisätty antigeeni neutraloi ne ja hemagglutinaatiota ei tapahdu ensimmäisessä kuopparivissä tai korkean seerumitiitterin tapauksessa hemagglutinaatiota havaitaan harvemmissa (2-4) kuopissa kuin TPHA-rivillä. Tässä tapauksessa tulosten spesifisyys vahvistetaan.

Jos molemmilla riveillä havaitaan hemagglutinaatiota, ts. RTHA:n ja RPHA:n tulokset ovat samat, mikä osoittaa tularemiavasta-aineiden puuttumisen testiseerumissa. Tässä tapauksessa RPHA:n ensisijaista tulosta pidetään epäspesifisenä.

Tekniikka RTPGA:n asettamiseen mikrotilavuuksina. RTHA, samoin kuin RPHA, voidaan suorittaa mikrotilavuuksina käyttämällä Takachi-tyyppistä mikrotiitteriä.

Tätä varten mikrolevyjen kuoppiin lisätään 0,25 μl laimennusnestettä kahdessa rivissä, joissa kussakin on 7-8 kuoppaa. Sitten titrauslaitteen avulla pisteytetään ja titrataan molemmilla riveillä 0,25 μl testiseerumia. Sen jälkeen jokaiseen ensimmäisen rivin kuoppaan lisätään 25 μl tularemiaantigeenia (jonka pitoisuus on 500 miljoonaa tularemiabakteeria 1 ml:ssa) ja 25 μl laimennusnestettä toisessa rivissä.

Levyt jätetään 1 tunniksi huoneenlämpöön, minkä jälkeen lisätään 25 μl antigeenista erythrocyte diagnosticumia (0,5 %:n pitoisuus) molempien rivien kaikkiin kuoppiin.

Tulosten laskenta ja arviointi suoritetaan samalla tavalla kuin reaktio makrotilavuuksina.

Julkaisupäivä: 2015-02-03; Lue: 3176 | Sivun tekijänoikeusloukkaus

studopedia.org - Studopedia.Org - 2014-2018. (0,003 s) ...

Vidalin reaktio. Taudin toisesta viikosta lähtien tartunnanaiheuttajaa vastaan vasta-aineita kertyy potilaiden vereen. Niiden tunnistamiseksi potilaan veriseerumia tutkitaan agglutinaatioreaktiossa. Tapettuja salmonellaviljelmiä - diagnostisia - käytetään antigeeninä.

Vidal-reaktion asettamiseen käytetään potilaan seerumia, sarjaa diagnostisia tarvikkeita ja isotonista natriumkloridiliuosta.

Veri (2-3 ml) sormen tai kyynärlaskimon pulpista kerätään steriiliin putkeen ja toimitetaan laboratorioon. Laboratoriossa koeputki asetetaan termostaattiin 20-30 minuutiksi hyytymän muodostamiseksi, jonka jälkeen hyytymä kiertää Pasteur-pipetillä sen erottamiseksi koeputken seinämästä ja asetetaan kylmään 30-40 minuutiksi. Erotettu seerumi imetään pois ja sitä käytetään agglutinaatioreaktion aikaansaamiseen salmonella-lavantaudin ja paratyfoidin diagnostisilla aineilla. Seerumin saamiseksi verta voidaan sentrifugoida.

Kun tarttuva prosessi- lavantauti tai paratyfoidi - elimistöön muodostuu O- ja H-vasta-aineita samannimistä taudinaiheuttajaantigeenejä vastaan.

O-vasta-aineet ilmestyvät ensin ja katoavat melko nopeasti. H-vasta-aineet säilyvät pitkään. Sama tapahtuu rokotuksen aikana, joten positiivinen Vidal-reaktio O- ja H-antigeeneillä osoittaa sairauden olemassaolon, ja reaktio vain H-antigeeneillä voi olla sekä sairastuneilla (anamnestinen reaktio) että rokotetuilla (rokotus). Tämän perusteella Vidal-reaktio sijoitetaan erikseen O- ja H-antigeenien kanssa (diagnostiikka).

Koska kliinisesti lavantauti ja sivutauti A ja B ovat samankaltaisia, potilaan seerumi testataan samanaikaisesti taudin luonteen tunnistamiseksi salmonellan lavantautien ja paratypfaattien A ja B diagnostisten tutkimusten kanssa.

Vidal-reaktiota käytetään laajalti, koska se on yksinkertainen eikä vaadi erityisolosuhteita.

Reaktio voidaan asettaa kahdella tavalla: pisara ja tilavuus (katso luku 12). Käytännössä volyymimenetelmää käytetään useammin. Lineaarista agglutinaatioreaktiota määritettäessä rivien lukumäärän tulee vastata antigeenien määrää (diagnosticum). Taudin aiheuttajaksi katsotaan mikro-organismi, jonka diagnostinen aine agglutinoi potilaan seerumin. Joskus havaitaan ryhmäagglutinaatiota, koska lavantaudin ja paratyfoidin aiheuttajilla on yhteisiä ryhmäantigeenejä. Tässä tapauksessa reaktion tulos sarjassa, jossa agglutinaatio havaitaan suuremmassa seerumilaimennoksessa, katsotaan positiiviseksi (taulukko 36).

Taulukko 36. Agglutinaatioreaktion mahdollinen tulos

Huomautus. Käytännössä Vidal-reaktiossa on neljä diagnostiikkaa: lavantauti "O" ja "H" ja paratyfaatti A ja B - diagnostisilla "OH".

Jos agglutinaatiota tapahtuu vain pienissä seerumilaimennoksissa - 1:100, 1:200, erottaakseen taudin reaktion rokotuksesta tai anamnestiosta, he turvautuvat agglutinaatioreaktion uudelleenvaiheeseen 5-7 päivän kuluttua. Potilaalla vasta-ainetiitteri nousee, mutta rokotetulla tai toipuneella potilaalla se ei muutu. Siten veren seerumin vasta-ainetiitterin nousu toimii indikaattorina taudista.

Vi-agglutiniinit ilmaantuvat potilaan vereen vasteena Vi-antigeenia sisältävien lavantautipatogeenien kulkeutumiseen kehoon. Ne määritetään toisesta sairausviikosta alkaen, mutta niiden tiitteri ei yleensä ylitä 1:10. Vi-vasta-aineiden havaitseminen liittyy lavantautipatogeenien esiintymiseen kehossa, joten näiden vasta-aineiden määrityksellä on suuri epidemiologinen merkitys, koska se mahdollistaa bakteerikantajien tunnistamisen.

Vi-hemagglutinaatioreaktio. Tämä on herkin reaktio vasta-aineiden havaitsemiseen.

Reaktion periaate on, että ihmisen (ryhmä I) tai lampaan punasolut voivat erikoiskäsittelyn jälkeen adsorboida Vi-antigeenin pinnalle ja saada kyvyn agglutinoitua vastaavien Vi-vasta-aineiden kanssa.

Punasoluja, joiden pintaan on adsorboitunut antigeenejä, kutsutaan punasoludiagnostisiksi.

Aseta Vi-hemagglutinaatioreaktio seuraavasti:

1) potilaan veriseerumi (1-2 ml); 2) erytrosyytti Salmonella Vi diagnosticum; H) Vi-seerumi; 4) O-seerumi; 5) isotoninen natriumkloridiliuos.

Reaktio asetetaan agglutinaatiokoeputkiin tai muovilevyille, joissa on kuoppia.

Potilaalta otetaan verta samalla tavalla kuin Vidal-reaktiossa. Hanki seerumi. Seerumista valmistetaan kaksinkertaiset sarjalaimennokset, alkaen suhteesta 1:10 - 1:160.

0,5 ml kutakin laimennosta lisätään kuoppaan ja 0,25 ml erytrosyyttidiagnostiikkaa. Reaktioseosta laitetaan 0,75 ml:n tilavuuteen.

Kontrollit ovat: 1) standardi agglutinoiva monoreseptoriseerumi + diagnostiikka - reaktion on oltava positiivinen seerumitiitteriin asti; 2) diagnosticum isotonisessa natriumkloridiliuoksessa (kontrolli) - reaktion tulee olla negatiivinen.

Kuoppien sisältö sekoitetaan perusteellisesti, asetetaan termostaattiin 2 tunniksi ja jätetään huoneenlämpöön seuraavaan päivään (18-24 tuntia).

Kirjanpito alkaa valvonnasta. Reaktio arvioidaan diagnostisen agglutinaation asteesta riippuen.

Tulokset huomioidaan neljän ristin järjestelmän mukaisesti:

Punasolut ovat täysin agglutinoituneet - sedimentti reiän pohjalla "sateenvarjon" muodossa;

+++ "sateenvarjo" on pienempi, kaikki punasolut eivät agglutinoituneet;

++ "sateenvarjo" on pieni, reiän pohjalla on agglutinoitumattomien erytrosyyttien sedimentti;

Reaktio on negatiivinen; erytrosyytit eivät agglutinoituneet ja asettuivat kuopan pohjalle napin muodossa.

Kontrollikysymykset

1. Missä taudin jaksossa Vidal-reaktio diagnosoidaan?

2. Mitä ainesosia tarvitaan Vidal-reaktion suorittamiseen?

3. Mitä diagnostiikkaa käytetään Vidalin reaktioon?

4. Mikä serologisista reaktioista on herkin lavantauti- ja sivutautiinfektioiden diagnosoinnissa?

5. Mitä diagnostiikkaa käytetään Vi-hemagglutinaatioreaktion formuloinnissa?

6. Mitä seerumia käytetään Vi-antigeenin esiintymisen määrittämiseen tutkitussa viljelmässä?

7. Mikä on Vi-faagityypin määritelmän merkitys?

Ota opettajalta O- ja H-diagnoosit salmonellan lavantantautista, paratyfoidista A ja paratyphoidista B sekä potilaan seerumista. Laita Vidalin reaktio.

Ravintoaineet

Ympäristöt EMS, Ploskirev, vismutti-sulfiittiagar tuotetaan lääketeollisuudessa kuivan jauheen muodossa. Ne valmistetaan etiketin ohjeiden mukaan: punnitaan tietty määrä jauhetta, kaadetaan sopiva määrä vettä, keitetään ja kaadetaan steriileihin petrimaljoihin.

Keskiviikkona Russell. 950 ml:aan tislattua vettä lisätään 40 g kuivaa ravintoalustaa ja 5 g ravintoagaria. Kuumenna kiehuvaksi ja liuota jauheet. Liuotetaan 1 g x 50 ml:aan tislattua vettä. tuntia glukoosia ja lisätään valmistettuun seokseen. Elatusaine kaadetaan steriileihin 5-7 ml:n koeputkiin, steriloidaan virtaavalla höyryllä (2 päivää 2 minuuttia) ja viistetään niin, että pylväs jää jäljelle. Russellin alusta, jossa on mannitolia ja sakkaroosia, valmistetaan samalla tavalla.

Olkenitskyn elatusaine kuivasta agarista. 2,5 g kuivaa ravinneagaria sulatetaan 100 ml:aan tislattua vettä. Kaikki reseptissä (etiketissä) ilmoitetut ainesosat lisätään 50 °C:seen jäähdytettyyn agariin. Koeputkiin kaadettu väliaine steriloidaan virtaavalla höyryllä (3 päivää 20 minuuttia) ja sitten viistetään. Valmiin väliaineen tulee olla vaaleanpunainen väri.

Hemagglutinaation estoreaktio

Hemagglutinaatioreaktio

Agglutinaatioreaktio

Agglutinaatioreaktio (RA) on mikrobien tai muiden solujen agglutinaatiota ja saostumista vasta-aineiden vaikutuksesta elektrolyytin (isotoninen natriumkloridiliuos) läsnä ollessa. Syntynyttä sakkaa kutsutaan agglutinoida.

Reaktioon tarvitset:

1. Vasta-aineet (agglutiniinit) - ovat potilaan seerumista tai immuuniseerumissa.

2. Antigeeni - elävien tai tapettujen mikro-organismien, erytrosyyttien tai muiden solujen suspensio.

3. Isotoninen liuos.

Serodiagnoosin agglutinaatiotestiä käytetään laajalti lavantauti, paratyfoidi (Vidal-reaktio), luomistauti (Wright-reaktio) jne. Vasta-aine tässä tapauksessa on potilaan seerumi ja antigeeni on tunnettu mikrobi.

Kun mikrobeja tai muita soluja tunnistetaan, niiden suspensio toimii antigeeninä ja tunnettu immuuniseerumi vasta-aineena. Tätä reaktiota käytetään laajalti diagnoosissa suoliston infektiot, hinkuyskä jne.

Laboratoriokäytännössä käytetään kahta hemagglutinaatioreaktiota (RHA), jotka eroavat toimintamekanismiltaan.

Ensimmäinen RGA viittaa serologiaan. Tässä reaktiossa punasolut agglutinoituvat, kun ne ovat vuorovaikutuksessa vastaavien vasta-aineiden (hemagglutiniinien) kanssa. Reaktiota käytetään laajalti veriryhmien määrittämiseen.

Toinen RGA ei ole serologinen. Siinä punasolujen liimaamista eivät aiheuta vasta-aineet, vaan virusten muodostamat erityiset aineet. Esimerkiksi influenssavirus agglutinoi kanojen ja marsujen punasoluja, poliovirus agglutinoi lampaiden punasoluja. Tämän reaktion avulla on mahdollista arvioida tietyn viruksen läsnäolo testimateriaalissa.

Tämä on serologinen reaktio, jossa spesifiset antiviraaliset vasta-aineet, jotka ovat vuorovaikutuksessa viruksen (antigeenin) kanssa, neutraloivat sen ja riistävät siltä kyvyn agglutinoida punasoluja, ts. estävät hemagglutinaatioreaktion. Hemagglutinaation estoreaktion (HITA) korkea spesifisyys mahdollistaa sen käytön HA:n aikana havaittujen virusten tyypin ja jopa tyypin määrittämiseen.

Riisi. Passiivisen hemagglutinaation (RPHA) reaktiokaavio. A - erytrosyyttidiagnostiikan saaminen; B - RNGA: 1-erytrosyytti: 2 - tutkittu antigeeni; 3 - erytrosyyttidiagnostiikka; 4 - vasta-aine tutkitulle antigeenille: 5 - agglutinaatti.

RNHA:n avulla voidaan määrittää tuntematon antigeeni, jos punasoluihin adsorboituu tunnettuja vasta-aineita.

Hemagglutinaatioreaktio (RHA)

RGA perustuu siihen tosiasiaan, että tietyntyyppisillä bakteereilla ja viruksilla on kyky adsorboitua punasolujen pinnalle. eri tyyppejä eläimet (ja linnut), jolloin ne tarttuvat yhteen ja muodostavat agglutinaatin (suora RGA).

Antigeenin (bakteerit, virukset) adsorptio erytrosyyttien pinnalle ei aina ilmene näkyvän sakan muodostumisena; lisäksi RGA on epäspesifinen, koska saman eläinlajin punasolut voivat adsorboida erilaisia antigeenejä.

Passiivisen (epäsuoran) hemagglutinaation (RPHA) reaktio on spesifinen. Sen asettamista varten valmistetaan alustavasti punasoludiagnostiikka (erytrosyytit, joihin antigeeni adsorboituu). Tätä tarkoitusta varten pässin (tai kukon) veri otetaan steriilisti, defibrinoidaan ja pestään useita kertoja fosfaattipuskuriliuoksessa (pH 7,2) käyttämällä 3-5-kertaista sentrifugointia. Supernatantti poistetaan, punasolujen pitoisuus säädetään 2,5 %:iin (1:40). 2,5-prosenttiseen erytrosyyttisuspensioon lisätään yhtä suurena tilavuutena (1 ml tai 0,5 ml) tutkittujen mikrobilajien bakteerisuspensiota pitoisuutena 5-10 miljardia solua 1 ml:aa kohti. Punasolut adsorboivat helposti polysakkaridiluonteisen antigeenin. Proteiiniluonteisen antigeenin adsorboimiseksi erytrosyytit esikäsitellään tanniinilla laimennuksella 1:20 000. Punasolut yhdessä lisätyn antigeenin kanssa jätetään herkistymään (adsorptioon) 2 tunniksi termostaatissa (37 °C), sitten sentrifugoidaan uudelleen nopeudella 3-4 000 rpm phos.

Saatu erytrosyyttidiagnostiikka asetetaan koeputkiin (tai pleksilevyn kuoppiin) ja siihen lisätään standardia immuuniseerumia.

Positiivisissa tapauksissa tapahtuu RGA - punasolujen menetys tyypillisen hiutaleisen tai rakeisen sedimentin muodossa, joka on jakautunut koeputken pohjan koko pinnalle (hemagglutinaatti). Tämä tarkoittaa, että tutkittava mikrobi (antigeeni) on spesifinen immunoseumin vasta-aineille. Negatiivisissa tapauksissa liimaamattomat punasolut asettuvat pohjalle pienen tasaisen ympyrän muodossa.

RPGA-tulosten luotettavuuden parantamiseksi, hidastaa reaktiota(jarruttaa) hemagglutinaation ilmiö(RZGA) tai sen muunnos - vasta-aineiden neutralointireaktio(RIA).

Riisi. 9.13. Passiivinen hemagglutinaatioreaktio (kaavio): Er - erytrosyytit: AG - antigeeni: AT - vasta-aine

RZGA:n ydin koostuu siitä, että agglutinaatioreaktio asetetaan tietyllä diagnostisella seerumilla ja testatulla antigeenillä (antigeeninä käytetään tutkittua mikrobityyppiä). Tätä seosta pidetään 1-2 tuntia 37 °C:ssa, sitten lisätään punasoluja. Jos testiantigeeni on homologinen diagnostisten seerumin vasta-aineiden kanssa, ne ovat vuorovaikutuksessa keskenään ja lisätyt punasolut eivät agglutinoidu - reaktion tulos on positiivinen. Jos testiantigeeni ei ole homologinen seerumin vasta-aineille tai sitä ei ole materiaalissa, niin lisätyt punasolut adsorboivat antigeenin ja RHA:ta syntyy - RHA:n tulos on negatiivinen, testattavan mikrobin (antigeenin) tyyppiä ei ole selvitetty.

PH A:n asetustapa on, että ne ottavat yhtä suuret tilavuudet ja sekoittavat diagnostisen immuuniseerumin kanssa erilaisia laimennuksia Tutkittavasta materiaalista (toivottu antigeeni), jätä kosketukseen 1-2 tunniksi, lisää sitten punasoluja, jotka on herkistetty tietyllä (tunnetulla) seerumin vasta-aineille spesifisellä antigeenillä (erythrocyte diagnosticum). Kun haluttu antigeeni reagoi seerumin vasta-aineiden kanssa, ne neutraloituvat ja lisätyt punasolut eivät agglutinoidu, RHA:ta ei esiinny - PHA-tulos on positiivinen. Jos testimateriaali ei sisällä käytetyn seerumin vasta-aineille spesifistä antigeeniä, vasta-aineet eivät neutraloitu. Siksi, kun erytrosyyttidiagnostiikkaa lisätään, ilmenee punasolujen agglutinaatiota (hemagglutinaatiota) ja RHA:n tulos on negatiivinen. Vasta-aineiden neutralointitesti on erittäin herkkä menetelmä antigeenin havaitsemiseksi paitsi elävien (tai tapettujen) bakteerien suspensiosta, myös eri elinten jauhemaisen kudoksen suspensiosta, sairaan organismin luonnollisista ja kuumennetuista eritteistä ja eritteistä.

Hemagglutinaatioreaktio lyhyesti. Epäsuoran hemagglutinaation (rnga) tai passiivisen hemagglutinaation (rpga) reaktio. Analyysiaika