Coombsov test

Priamy Coombsov test je antiglobulínový test (aglutinácia v géli, ktorý umožňuje detekciu kompletných divalentných protilátok), ktorý deteguje protilátky triedy IgG a C3 zložku komplementu na povrchu červených krviniek. Protilátky detegované priamym Coombsovým testom majú zvyčajne širokú špecificitu, ktorá nie je spojená s dobre etablovaným antigénom. Pozitívny priamy Coombsov test jasne naznačuje, že pacient má hemolytická anémia, aj keď nie všetci pacienti s pozitívnym priamym antiglobulínovým testom trpia týmto ochorením. Približne u 10 % pacientov sa protilátky alebo zložky komplementu na membráne červených krviniek nedajú určiť priamym Coombsovým testom (test je negatívny), no napriek tomu trpia autoimunitnou hemolytickou anémiou. Na objasnenie špecifickosti protilátok v takýchto prípadoch sa používajú testy s ich elúciou. Priamy Coombsov test, pozitívny len na komplement, sa zvyčajne vzťahuje na studené protilátky typu IgM. V tomto prípade IgM protilátky nie je prítomný na červených krvinkách, keď bazálnej teploty telá. Avšak vzhľadom na skutočnosť, že protilátky IgM aktívne fixujú komplement a komplement zostáva na červených krvinkách, pri tejto forme autoimunitnej hemolytickej anémie (ochorenie studených aggutinínov) bude Coombsov test pozitívny iba na komplement.

Priamy Coombsov test je pozitívny na autoimunitnú hemolytickú anémiu spôsobenú teplými protilátkami, autoimunitnú liekmi indukovanú anémiu (pri užívaní metyldopy má pozitívnu reakciu až 20 % pacientov), ​​liekovo-adsorpčný typ hemolytickej anémie, imunokomplexový typ hemolytickej anémia (test je pozitívny len na C3), pri autoimunitnej hemolytickej anémii spôsobenej protilátkami proti chladu - ochorenie chladových aglutinínov (test je pozitívny len na C3). Pri paroxyzmálnej studenej hemoglobinúrii je priamy Coombsov test negatívny.
V akútnom období ochorenia v dôsledku deštrukcie červených krviniek, na ktorých sa veľké množstvo protilátok, pri hemolytickej kríze, ako aj pri nedostatočnom množstve protilátok v chronickom priebehu ochorenia možno pozorovať negatívny priamy Coombsov test.

:

• Dôležitá podmienka pre zabezpečenie kvality laboratórny výskum krv odoberá materiál nalačno, v ranný čas(do 12:00).
• 12 hodín pred testom by ste sa mali vyhnúť pitiu alkoholu, fajčeniu, jedeniu a obmedzeniu fyzickej aktivity.
• Ráno v deň krvného testu môžete piť vodu.
• Vyhnite sa užívaniu liekov; Ak nie je možné prestať užívať lieky, musíte o tom informovať laboratórium.
• Odporúča sa odobrať materiál pred vykonaním akýchkoľvek lekárskych diagnostických postupov.
• Pri hodnotení hladiny hormónov u žien je dôležité zvážiť deň menštruačný cyklus Kedy je najlepší čas na stanovenie určitých hormónov? Tieto informácie môžete získať od svojho lekára.

Index	Charakteristický
Analyzátor a testovací systém	Gélové karty; DiaMed AG (Švajčiarsko)
Referenčné hodnoty	Negatívny výsledok / pozitívny výsledok
Rušivé faktory. Lieky
Pozitívny test je možný pri užívaní nasledujúcich liekov: acetaminofén, kyselina salicylová, aminopyrín, antihistaminiká, karbomal, cefalosporíny, chlórpromazín, chlórpropamid, cisplatina, klonidín, dipyrón, etosuximid, fenfluramín, fuadín, hydralazín, hydrochlorotiazid, ibuprofén, inzulín, izoniazid, levodopa, mefafenlanamová kyselina, metdopamel, nomifenmetyl, metdopamel nicillamin, penicin linny fenacetín, fenylbutazón, probenecid, prokaínamid, chinidín, chinín, rifampín, streptomycín, sulfónamidy, deriváty sulfonylmočoviny, tetracyklín, triamterén, anhydrid kyseliny trimellitovej
Indikácie na použitie
Diagnóza imunitnej hemolytickej anémie, hemolytická choroba novorodenci, liekmi indukovaná imunitná hemolytická anémia, hemolytické transfúzne reakcie
Interpretácia výsledkov
Za normálnych okolností je priamy Coombsov test negatívny. Pozitívny Coombsov test na: autoimunitná hemolytická anémia; hemolytická choroba novorodencov; liekmi indukovaná imunitná hemolytická anémia; hemolytické transfúzne reakcie

Antiglobulínový princíp. Antierytrocytové protilátky neúplného typu a molekuly komplementu (C) nachádzajúce sa na povrchu erytrocytov sa zisťujú - priamym testom - ich aglutináciou v kontakte so zvieracím sérom obsahujúcim protilátky proti ľudskému antiglobulínu (antiglobulínové sérum). Nekompletné protilátky voľné v sére sa zisťujú – nepriamym testom – ich naviazaním na zmes normálnych červených krviniek skupiny 0, ktorých všetky antigény patria do známeho Rh systému, a následne sa vplyvom antiglobulínového séra aglutinujú.

Materiály, činidlá pre Coombsov antiglobulínový test: skúmavky 10/100 ml; odmerné pipety 1,2 ml; Pasteurove pipety; statívy; nebrúsené sklíčka; 8,5‰ roztok NaCl; červené krvinky. Červené krvinky pacienta, ako aj tie, ktoré patria do skupiny 0, sa získajú z čerstvo odobratej krvi pomocou činidla proti zrážaniu krvi (roztok EDTA).

Červené krvinky skupiny 0 by sa mali vyberať tak, aby pochádzali od normálnych jedincov a obsahovali všetky Rh antigény. Môžu sa uchovávať až 7 dní v autológnej plazme pri + 4 °C. Pri absencii červených krviniek skupiny 0 sa môže použiť známa antigénna mozaika, zmes červených krviniek skupiny 0, Rh-pozitívnych a Rh-negatívnych červených krviniek.

Sérum pacient musí byť čerstvo vybraný.

Antiglobulínové sérum vyrobené inštitútom. Dr. I. Cantacuzino, je dostupný v lyofilizovanej forme v 1 ml ampulkách. Po rozpustení skladujte sérum pri -20°C.

Coombsova antiglobulínová testovacia technika:
A) Priamy Coombsov test: Opláchnite pacientovi červené krvinky 3-krát 8,5‰ roztok NaCl.
Naneste veľkú kvapku riedeného antiglobulínového séra na niekoľko podložných sklíčok a vedľa nej malú kvapku sedimentu erytrocytov pacienta; zmiešajte kvapky s rohom pohára. Pripravený materiál nechajte na stole 5 minút, potom skontrolujte prítomnosť aglutinátov. Ak je výsledok pozitívny, stanovte maximálny aglutinačný titer.

b) Nepriamy Coombsov test: erytrocyty skupiny 0, Rh-pozitívne a Rh-negatívne, 3x opláchnuť 8,5‰ roztokom NaCl a vystaviť pacientovmu séru rýchlosťou 2 kvapky erytrocytov na 8-10 kvapiek séra, potom inkubovať 60 minút pri teplota 37° S. Potom znovu trikrát umyte červené krvinky a ošetrite ich antiglobulínovým sérom podľa návodu na priamy test Coombs.

Kedy hovoríme o o studených aktívnych protilátkach senzibilizovať červené krvinky skupiny 0 počas 60 minút. pri teplote + 4°C.

Poznámka 1) Nevykonávajte priamy Coombsov test na červených krvinkách skladovaných jeden alebo niekoľko dní pri + 4 °C alebo izbovej teplote, pretože výsledky môžu byť falošne pozitívne v dôsledku fixácie neúplných chladovo aktívnych protilátok prítomných v normálnom sére. 2) V prípade ťažkej hyperproteinémie umyte červené krvinky 4-5 krát a skontrolujte neprítomnosť sérových bielkovín v poslednej premývacej kvapaline pomocou kyseliny sulfosalicylovej.

Možný zvyšok 2 μg IgG/ml v sedimente erytrocytov môže neutralizovať antiglobulínové sérum. Coombsov test možno vykonať aj s použitím monošpecifických anti-IgG, -IgM, -IgA -C3 a -C4 sér, aby sa objasnil typ buniek nachádzajúcich sa na povrchu červených krviniek, napríklad u pacientov trpiacich autoimunitnými hemolytickými anémia.

Coombsov test– test na detekciu protilátok naviazaných na povrch alebo rozpustených v plazme. Používa sa na detekciu imunizácie a protilátok proti červeným krvinkám. Druhým názvom je antiglobulínový test. Môže byť priamy alebo nepriamy.

O priamy antiglobulínový test detekuje protilátky fixované na povrchu červených krviniek. Vykonáva sa pri podozrení na iné autoimunitné ochorenia po užití liekov (metyldopa, penicilín, chinín) atď.

Červené krvinky boli senzibilizované in vivo – protilátky sú na nich už pevne naviazané a pridanie antiglobulínového séra (anti-IgG) spôsobuje zlepenie senzibilizovaných buniek, čo je viditeľné voľným okom.

Nepriamy Coombsov test zisťuje antierytrocytové protilátky v krvnej plazme, vykonáva sa pred transfúziou krvi a počas nej.

Antierytrocytové protilátky sú typom autoprotilátok, t.j. protilátky proti vlastným tkanivám. Autoprotilátka vzniká pri patologickej reaktivite imunitný systém pri niektorých liekoch napríklad vysoké dávky penicilínu.

Červené krvinky na svojom povrchu obsahujú rôzne chemické štruktúry(glykolipidy, sacharidy, glykoproteíny a proteíny), v medicíne nazývané antigény. Osoba zdedí od svojich rodičov špecifickú mapu antigénov na každej červenej krvinke.

Antigény sa spoja do skupín a následne sa krv rozdelí do niekoľkých skupín – podľa systému AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Najznámejšie a najvýznamnejšie v práci lekára sú AB0 a Rh faktor (Rh).

Systém AB0

Stav Rh osoby je určený prítomnosťou týchto antigénov. Zvlášť dôležitým antigénom erytrocytov je antigén D. Ak je prítomný, potom hovoria o Rh pozitívna krv RhD, a ak tam nie je - oh Rh negatívny Rhd.

Ak sa zodpovedajúca protilátka naviaže na antigény erytrocytov, erytrocyt sa zničí - hemolýza.

Indikácie

Hlavná indikácia pre priamyantiglobulínový test- podozrenie na hemolytickú anémiu. Najčastejšie sa vykonáva pri primárnej autoimunitnej hemolytickej anémii, hemolýze pri reumatických, nádorových, infekčné choroby hemolýza vyvolaná liekmi.

Ak sa anémia objaví niekoľko dní alebo mesiacov po transfúzii krvi alebo pri dlhotrvajúcej žltačke u novorodenca, vykoná sa aj priamy Coombsov test.

Nepriamevykoná sa antiglobulínový test pred transfúziou krvi a počas tehotenstva Rh-negatívnej ženy.

Autoimunitná hemolytická anémia

Autoimunitná hemolytická anémia (primárna)– klasické autoimunitné ochorenie s neznámymi príčinami. Interakcia v rámci imunitného systému je narušená, čo vedie k vnímaniu vlastných červených krviniek ako cudzích. V lymfatických uzlinách sa syntetizujú protilátky triedy IgG (reagujú pri t 37 °C) a/alebo IgM (pri t 40 °C), ktoré po pripojení na povrch erytrocytu spúšťajú množstvo enzýmov (tzv. komplementový systém) a „perforujú“ stenu erytrocytu, čo vedie k jeho deštrukcii – hemolýze.

Prvé príznaky sú spôsobené deštrukciou červených krviniek a poklesom hemoglobínu. Medzi nimi:

• únava, celková slabosť, podráždenosť
• dyspnoe
• bolesť brucha a hrudníka, nevoľnosť
• tmavá farba moču
• bolesť chrbta
• ikterické sfarbenie kože a slizníc
• zníženie počtu červených krviniek a

Priamy pozitívny výsledok Coombsove testy 100% potvrdzuje diagnózu autoimunitnej hemolytickej anémie, dokazuje jej autoimunitný pôvod. Negatívny výsledok zároveň neumožňuje odstrániť diagnózu.

Sekundárna hemolytická anémia

Sekundárna autoimunitná hemolytická anémia a pozitívny Coombsov test sa môžu vyskytnúť pri nasledujúcich ochoreniach:

• Evansov syndróm
• zápal pľúc

Pozitívny antiglobulínový test na tieto ochorenia je jedným zo symptómov a nie kritériom diagnózy.

Hemolytická choroba novorodenca

Príčina hemolytická choroba novorodencov - inkompatibilita krvnej skupiny matky a plodu, vo väčšine prípadov podľa Rh systému, v jednotlivých prípadoch - podľa systému AB0, kazuisticky - podľa iných antigénov.

Rh konflikt sa rozvinie, ak plod Rh-negatívnej ženy zdedí Rh-pozitívnu krv od otca.

Ochorenie sa u novorodenca rozvinie iba vtedy, ak si matka už vytvorila protilátky proti zodpovedajúcim antigénom, čo sa stáva po predchádzajúcich tehotenstvách, potratoch a nezlučiteľných transfúziách krvi. Väčšina spoločný dôvod spustenie syntézy protilátok proti antigénom membrány erytrocytov - pôrod (feto-materské krvácanie). Prvý pôrod vo všeobecnosti prebieha bez komplikácií, no ďalšie sú v prvých dňoch po pôrode plné hemolytického ochorenia novorodenca.

Príznaky hemolytickej choroby novorodenca:

• žltosť kože
• a sliznice
• zväčšená pečeň a slezina
• problémy s dýchaním
• opuch celého tela
• excitácia a postupná depresia centrálneho nervového systému

Anémia po transfúzii krvi

Nepriamy Coombsov test vykonaná pred transfúziou krvi na posúdenie kompatibility, a priamy Coombsov test – po ňom pri podozrení na potransfúznu hemolýzu, t.j. v prítomnosti príznakov, ako je horúčka, slzenie (čítajte nižšie). Účelom analýzy je identifikovať protilátky proti transfúznym červeným krvinkám, ktoré sa naviazali na červené krvinky príjemcu a sú príčinou posttransfúznej hemolýzy, ako aj predčasného odstránenia darcovských červených krviniek z krvného obehu. príjemca (ten, kto dostal krv).

Symptómy:

• zvýšenie telesnej teploty
• kožná vyrážka
• bolesť chrbta
• červená
• nevoľnosť
• závraty

Dekódovanie

Je potrebné pripomenúť, že základné pravidlá na dešifrovanie priamych a nepriamych antiglobulínových testov sú rovnaké. Rozdiel je len v umiestnení protilátok – v krvi alebo na červenej krvinke.

• Ak priamy Coombsov test je negatívny– to znamená, že protilátka „nesedí“ na červených krvinkách a príčinu symptómov treba ďalej hľadať a riešiť nepriama vzorka Coombs
• Ak pozitívny výsledok Coombsov test zistený po transfúzii krvi, infekciách, liekoch - pozitivita trvá až 3 mesiace (životnosť červených krviniek 120 dní - 3 mesiace)
• pozitívny výsledok antiglobulínového testu s autoimunitné ochorenie trvá mesiace a dokonca roky

Norm

• priamy Coombsov test - negatívny
• nepriamy Coombsov test - negatívny

Kvalitatívne pozitívny výsledok sa meria v počte plusov od jedného do štyroch (+, ++, +++, ++++) a kvantitatívne v digitálnej forme - 1:16, 1:256 atď.

Áno. Váš lekár by mal určite vedieť, že ste dostali krvnú transfúziu, pretože to teraz ovplyvňuje správnu interpretáciu výsledkov testov. Pri príjme cudzej (hoci mnohokrát testovanej) krvi vždy existuje možnosť, že si vaše telo vytvorí protilátky proti transfúznej krvi. Práve tieto protilátky zabezpečia zlý vplyv o zdravotnom stave. Pri následných transfúziách krvi musí lekár vedieť, že ste už transfúziu dostali, čo znamená, že bol čas na syntézu protilátok. Pre tehotné ženy sú tieto informácie ešte relevantnejšie.

3. Ak dôjde k nesúladu Rh faktora medzi matkou a dieťaťom, budú choré všetky deti?

Závisí od toho, či je dieťa Rh pozitívne alebo negatívne (RhD). Nositelia krvných skupín I, II, III a IV môžu byť Rh pozitívni alebo negatívni. V situácii, keď je matka Rh negatívna a dieťa je Rh pozitívne, protilátky sa vytvoria už pri prvom otehotnení, ale až po prvom pôrode (resp. ukončení gravidity) dôjde k priamemu kontaktu krvi matky s. dieťa. Hemolytický efekt protilátok sa prejaví až pri druhom a ďalšom pôrode, čo povedie k hemolytickému ochoreniu novorodenca.

Každá žena s negatívnym Rh faktorom by mala byť počas tehotenstva a po pôrode starostlivo vyšetrená preventívna liečba aby sa zabránilo vzniku protilátok a ďalším komplikáciám.

4. Je počas tehotenstva potrebné poznať krvnú skupinu môjho manžela pred vykonaním Coombsovho testu?

Počas tehotenstva musíte nielen vedieť, ale aj skontrolovať krvnú skupinu biologického otca dieťaťa.

Údaje

• prvýkrát navrhnutý v Cambridge v roku 1945
• prah citlivosti – aspoň 300 fixných molekúl protilátky na jednej červenej krvinke
• počet protilátok spúšťajúcich hemolýzu - individuálne pre každú osobu (od 16-30 do 300)
• dynamika iných laboratórnych indikátorov hemolytickej anémie (hemoglobín, bilirubín, retikulocyty) sa môže normalizovať a Coombsov test zostane na rovnakej úrovni

Coombsov test bol naposledy upravený: 16. marca 2018 Mária Bodyanová

Antiglobulínový test, určený na detekciu neúplných protilátok proti erytrocytom, navrhol Coombs, Morant, Reis v roku 1945 a neskôr bol nazvaný Coombsov test. Podstatou túto metódu je, že antiglobulínové sérum obsahujúce protilátky proti ľudským imunoglobulínom vedie pri reakcii s červenými krvinkami senzibilizovanými neúplnými protilátkami k ich aglutinácii.

V závislosti od toho, či sú protilátky fixované na povrchu červených krviniek alebo sú vo voľnom stave v krvnej plazme, sa používa priamy alebo nepriamy Coombsov test.

Priamy Coombsov test sa vykonáva v prípadoch, keď existuje dôvod predpokladať, že skúmané červené krvinky už sú in vivo boli senzibilizované vhodnými protilátkami, t.j. v organizme nastala prvá fáza reakcie - fixácia protilátok na povrchu červených krviniek a následné pridanie antiglobulínového séra spôsobuje aglutináciu senzibilizovaných buniek.

Pomocou nepriameho Coombsovho testu sa zistia neúplné protilátky prítomné v testovacom sére. V tomto prípade reakcia prebieha v dvoch fázach. Prvou fázou je inkubácia testovaných erytrocytov s testovaným sérom, počas ktorej sa protilátky obsiahnuté vo vzorke testovacieho séra fixujú na povrchu erytrocytov. Druhým krokom je pridanie antiglobulínového séra.

Doteraz sa Coombsov test široko používa v laboratórnej praxi na diagnostiku imunopatologických stavov, najmä pri autoimunitnej hemolytickej anémii, charakterizovanej deštrukciou červených krviniek v dôsledku väzby. bunková membrána s protilátkami a (alebo) zložkami komplementového systému. Používa sa na detekciu prítomnosti Ig G na membráne erytrocytov (zvyčajne Ig G1 a Ig G3), ktoré môžu aktivovať komplement, niekedy komplement (C3d). Avšak v akútnom období ochorenia v dôsledku deštrukcie červených krviniek, na ktorých bolo zaznamenané veľké množstvo protilátok, počas hemolytickej krízy, ako aj pri nedostatočnom počte protilátok v chronickom priebehu ochorenia, môže byť pozorovaný negatívny priamy Coombsov test.

Je potrebné zdôrazniť, že nepriamy Coombsov test zostáva najlepšia metóda individuálny výber transfúznych médií, pretože umožňuje najpresnejšie určiť individuálnu kompatibilitu darcu a príjemcu antigénmi erytrocytov.

Pri vyšetrovaní všetkých príjemcov orgánov a tkanív v predtransplantačnom období a príjemcov krvotvorných kmeňových buniek aj po transplantácii sa odporúča dodatočný priamy antiglobulínový test na prítomnosť autoprotilátok.

Okrem imunohematológie a transfuziológie sa antiglobulínové testy široko používajú v diagnostike mnohých patologických stavov: hematologické ochorenia vrátane lymfoproliferatívnych ochorení, systémové ochorenia spojivové tkanivo, Sjogrenova choroba, chronická aktívna hepatitída atď.

Coombsove testy sa aktívne používajú v lekárskej genetike a forenzná medicína na stanovenie povrchových antigénov erytrocytov.

Coombsov test je pomerne náročná metóda výskumu, ktorá si vyžaduje osobitnú starostlivosť pri jej implementácii. Pri jeho používaní sa vyskytujú určité ťažkosti spojené najmä s interpretáciou slabo pozitívnych reakcií. Je známe, že falošne slabé pozitíva resp negatívne reakcie pri vykonávaní Coombsových testov môžu byť dôsledkom nedostatočne účinného premývania červených krviniek, neutralizácie antiglobulínového činidla stopami séra, ako aj kontaktu s nemastným povrchom, na ktorý môže byť antiglobulín fixovaný, čím stráca svoju aktivitu . Ďalšou nevýhodou Coombsovho testu je nestabilita antiglobulínového činidla, ktorého príprava a skladovanie má určité znaky, čo tiež sťažuje kvantifikáciu hemaglutinačnej reakcie s antiglobulínovým sérom.

Okrem toho štúdie uskutočnené A. Holburnom, D. Voakom a kol. ukázali, že príčinou falošne negatívnych výsledkov môže byť nadmerné trasenie pri resuspendovaní suspenzie červených krviniek. Chybné výsledky pri vykonávaní antiglobulínových testov môžu byť spôsobené aj prítomnosťou prímesi antikomplementárnych protilátok v antiglobulínovom činidle, najmä proti zložkám komplementu C3d-, C3c-, C4c- a C4d-, ktoré sú adsorbované na povrchu otestujte červené krvinky počas inkubácie a vytvorte zdanie pozitívneho výsledku.

Tieto nevýhody možno ľahko odstrániť dôkladným premytím skúmaných vzoriek a sledovaním reakčných podmienok.

V poslednom desaťročí sa na skrátenie času potrebného na vykonanie nepriameho Coombsovho testu a zvýšenie jeho citlivosti používa izotonický fyziologický roztok s nízkou iónovou silou (LISS).

Nepopierateľnou výhodou antiglobulínových testov je podľa viacerých autorov vysoká citlivosť, ktorá výrazne prevyšuje ich rozlišovaciu schopnosť. alternatívne metódy testy, ktoré sa používajú na detekciu neaglutinujúcich protilátok.

Porovnali sme rozlíšenie metód na štúdium krvných sér na prítomnosť nekompletných protilátok pomocou polyglucínu, želatíny a antiglobulínového séra. Počas štúdie boli sledované titre neúplných anti-D protilátok v 140 vzorkách krvného séra od izoimunitných darcov pomocou želatíny, polyglucínu a nepriamych antiglobulínových testov. Formulácia týchto metód sa uskutočnila v súlade so všeobecne uznávanými metódami.

Zistilo sa, že z hľadiska ich rozlišovacej schopnosti sú metódy detekcie senzibilizácie erytrocytov anti-D protilátkami usporiadané nasledovne: najcitlivejší je nepriamy Coombsov test, ďalej želatínový test a najmenej vypovedajúci je polyglucínový test. Výsledky získané v tejto sérii experimentov plne zodpovedajú údajom z literatúry, čo nám umožňuje dospieť k záveru vysoký stupeň citlivosť Coombsových testov, ktorá umožňuje s vysokou mierou istoty identifikovať prítomnosť protilátok proti erytrocytom v tele, ktoré nespôsobujú aglutináciu červených krviniek.

Pri vykonávaní Coombsových testov v praxi však existujú prípady, keď sa neúplné protilátky nezistia, hoci klinický obraz ochorenia alebo predchádzajúca imunizácia naznačuje ich možnú prítomnosť. V takýchto prípadoch sa dá predpokladať, že množstvo protilátok je nedostatočné na to, aby sa vyzrážali protilátkami antiglobulínového séra.

Tento záver potvrdil aj náš vlastný experiment, v ktorom sa metódou analytickej mikroelektroforézy buniek zistila prítomnosť anti-D protilátok na testovaných erytrocytoch, ktoré neboli zistené v nepriamom Coombsovom teste. V tejto sérii experimentov bolo antiglobulínové sérum pridané k erytrocytom predinkubovaným so sérami získanými z krvi imunizovaných darcov počas obdobia prebiehajúcej tvorby protilátok, t.j. v období, keď sa u nich pomocou známych metód vrátane Coombsovho testu nezistili protilátky.

V uskutočnených štúdiách boli poskytnuté štatistické dôkazy o prítomnosti neúplných protilátok na povrchu červených krviniek. výrazná zmena veľkosť elektroforetickej pohyblivosti senzibilizovaných červených krviniek po pridaní antiglobulínového séra. Je potrebné poznamenať, že anti-D protilátky boli následne stanovené u všetkých imunizovaných darcov v nepriamom Coombsovom teste v krvnom sére.

Gillerand a kol. tiež ukázali, že antiglobulínové testy sa vyznačujú určitým prahom citlivosti: pozitívny výsledok sa zaznamená iba vtedy, keď sa na povrchu jednej červenej krvinky zaznamená najmenej 500 molekúl Ig G.

Okrem toho literatúra poskytuje dôkazy, že možný negatívny výsledok Coombsovho testu môže súvisieť s nízkou afinitou protilátok, ktoré senzibilizujú červené krvinky, v dôsledku čoho sa ľahko uvoľňujú z povrchu červených krviniek počas procesu premývania. .

Berúc do úvahy vyššie uvedené, môžeme konštatovať, že v niektorých prípadoch negatívny výsledok Coombsovho testu ešte nie je dôkazom absencie protilátok fixovaných na povrchu červených krviniek.

Je známe, že Coombsove reakcie sú vysoko špecifické a dokážu odhaliť väčšinu typov neúplných protilátok. Ako však ukazujú niektoré experimentálne údaje, antiglobulínové testy môžu byť pozitívne aj v neimunologických podmienkach. E. Muirhead a kol. na druhý deň po podaní fenylhydrazínu sa pozorovali psy pozitívny test Coombs. Takýto rýchly výskyt pozitívnej reakcie hovorí proti jej imunologickej povahe a je skôr spojený s nešpecifickou adsorpciou proteínu na povrchu erytrocytov.

M. Williams a kol. zistili, že kyselina klavulanová môže spôsobiť aj pozitívnu reakciu, ktorá je podľa autorov spojená s nešpecifickou adsorpciou plazmatických proteínov na povrchu erytrocytov. Podobný účinok sa pozoroval počas liečby cefalosporínovými antibiotikami.

Autori vyššie uvedených štúdií zdôrazňujú neimunologický charakter pozitívnych výsledkov Coombsových testov a trvajú na tom, že tieto látky sú schopné spôsobiť modifikáciu membrán červených krviniek, v dôsledku čoho môžu červené krvinky adsorbovať proteíny (najmä albumín), ktoré sú normálne prítomné v krvnej plazme a nemajú vlastnosti protilátok. Okrem toho je možné, že xenobiotikum adsorbované na bunkovom povrchu slúži ako spojenie medzi bunkovou membránou a plazmatickými proteínmi.

Pre správny výklad Výsledky antiglobulínových testov by mali zohľadňovať aj kvantitatívny pomer medzi mladými a zrelými červenými krvinkami v periférnej krvi. Zistilo sa, že retikulocyty izolované z tela v období zvýšenej regenerácie erytrónu môžu byť aglutinované antiglobulínovým sérom.

Pozitívny výsledok priameho antiglobulínového testu sa vyskytuje s rôznymi patologických stavov, sprevádzané poruchami imunitného systému, zápalovými procesmi vedúcimi k nešpecifickej adsorpcii protilátok rôznych špecifík na membránach erytrocytov. To naznačuje, že molekuly Ig G neinteragujú so špecifickými antigénmi erytrocytov, ale sú fixované iba na povrchu študovaných buniek.

Malo by sa vziať do úvahy, že pri vykonávaní Coombsovho testu v prípadoch chorôb charakterizovaných vývojom dysproteinémie alebo výskytom paraproteínov je pozitívny výsledok spôsobený prítomnosťou proteínov na povrchu erytrocytov, ktoré nemajú vlastnosti protilátok, čo tiež poukazuje na nedostatočnú špecifickosť antiglobulínových testov, pokiaľ ide o povahu proteínu detegovaného s ich pomocou.

Ako ukázali početné štúdie, pozitívne výsledky priamych a nepriamych antiglobulínových testov nie sú absolútnym dôkazom prítomnosti protilátok, pretože pozitívne reakcie možno pozorovať aj pri rôznych patologických stavoch, ktoré nesúvisia s izosenzibilizáciou alebo autosenzibilizáciou tela. Preto len porovnanie výsledkov viacerých imunosérologických metód s klinický obraz choroby nám umožňuje plne posúdiť rozvíjajúci sa patologický proces.

Pozitívny nepriamy antiglobulínový test s negatívnym priamym testom zvyčajne indikuje prítomnosť voľných aloprotilátok v testovanom sére, spojených s predchádzajúcimi krvnými transfúziami alebo tehotenstvom.

Coombsov test je často pozitívny počas exacerbácie paroxyzmálnej nočnej hemoglobinúrie; pozitívny Coombsov test s anti-C3 a anti-C3dg je markerom choroby studených aglutinínov.

V prípadoch, keď je vysoké riziko vzniku hemolytickej choroby novorodenca, veľký význam Na stanovenie diagnózy (najčastejšie v tehotenstve) a v prípade potreby dynamické sledovanie výskytu a zmeny titra protilátok majte k dispozícii výsledky priamych a nepriamych antiglobulínových testov. Najčastejšie je hemolytická choroba novorodencov spojená s inkompatibilitou matky a plodu pre antigén D, menej často pre antigény systému ABO a ešte menej často pre iné antigény (C, c, K atď.). Počas tohto procesu sa tvoria protilátky La, ktoré sú spravidla neúplnými protilátkami triedy Ig G, sa jasne detegujú nepriamym antiglobulínovým testom. Pri tomto ochorení má veľký význam správne stanovený titer a špecifickosť identifikovaných protilátok, pretože existuje určitá korelácia medzi hladinou antierytrocytových protilátok v krvi tehotnej ženy a možná prognóza závažnosť hemolytickej choroby.

Nevyhnutný je aj nepriamy Coombsov test klinickej praxi aby sa zabezpečila bezpečná transfúzna terapia. Jeho implementácia je povinnou súčasťou imunohematologických štúdií darcov a rôznych kategórií príjemcov, ako aj rutinných vyšetrení všetkých pacientov v zdravotníckych zariadeniach, ktorí môžu vyžadovať transfúziu krvi a jej zložiek.

Nepriamy antiglobulínový test sa používa v nasledujúcich prípadoch:

Pre presnejšie určenie Rh príslušnosti (antigén D) v prípade nejasných výsledkov stanovenia Rh faktora inými metódami (polyglucín, želatína a pod.);

Na identifikáciu slabých antigénov erytrocytov (systémy Kell, Duffy, Kidd, Lewis atď.) a protilátok proti týmto antigénom;

Na detekciu a identifikáciu aloimunitných antierytrocytových protilátok, vrátane protilátok, ktoré spôsobujú hemolytické potransfúzne reakcie;

Stanoviť prítomnosť imunitných protilátok systému AB0 počas transfúznych hemolytických komplikácií;

Ako test kompatibility pre individuálny výber transfúzovanej krvi a jej zložiek.

Coombsov test je teda dôležitým diagnostickým testom používaným v rôznych oblastiach medicíny (hematológia, pôrodníctvo, reumatológia, transfuziológia, klinická a laboratórna diagnostika atď.). Znalosť zvláštností vykonávania Coombsovho testu pomôže zvýšiť spoľahlivosť získaných výsledkov a prispeje k správnej interpretácii laboratórnych údajov.

Literatúra

1. Protilátky. Methods / ed. D. Katie. - M.: Mir, 1991.

2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadzhiev A.B.. // Transfúzna terapia anémie: učebnica. manuál pre lekárov. - M.: Prakt. Medicína, 2005. - S. 105-106.

3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfuziológia. - 2006. - č.2. — S. 39—62.

4. Donskov S.I.// Krvné skupiny systému Rhesus: teória a prax. - M.: VINITI RAS, 2005. - S. 180-186, 195.

5.Imunoserológia (regulačné dokumenty) / komp. A.G. Bashlay, S.I. Donskov. - M.: VINITI RAS, 1998.

6.Štúdium krvného systému v klinickej praxi / ed. G.I. Kozinets, V.A. Makarova. - M.: Triada-X, 1997.

7. Levin V.I. K mechanizmu erytrodiézy a erytropoézy pri akút posthemoragická anémia: autorský abstrakt. dis. ...sladkosti. med. Sci. - Minsk, 1968.

8. Ragimov A.A., Bayramalibeyli I.E.. // Základy diagnostiky, prevencie a liečby anémie. - M.: GOU VUNMC MH RF, 2002. - S. 204-209.

9. Čumaková E.D.. // Skutočné problémy hematológia a transfuziológia: zborník z VI. kongresu hematológov a transfuziológov Bieloruskej republiky, Minsk, 24.-25.5.2007 / ed. A.I. Svirnovský, M.P. Potapneva. - Minsk: Republikánske vedecké a praktické centrum hematológie a transfuziológie, 2007. - S. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lancet. - 1945. - Sv. 2. - S. 15.

11. Freedman J. // J. Clin. Pathol. - 1979. - Sv. 32. - S. 1014-1018.

12. Holburn A.M.. Kontrola kvality. Methods in Hematology/ed. I. Cavill. - Edinburgh: Churchill Livingstone, 1982. - Zv. 4. - S. 34-50.

13. Khan S.// CMAJ. - 2006. - Zv. 175, N 8. - S. 919.

14. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Zv. 63 (dodatok 7). - S. 719-721.

15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Zv. 63 (dodatok 7). - S. 716-718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// New Engl. J. Med. —1976. - Vol. 277. - S. 123-125.

17. Muirhead E.E., HájeM., Brian S. // J. Lab. Clin. Med. —1954. - Vol. 44. - S. 902-903.

18. Rosse W.F.//Hosp. Prac. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., MooreB. a kol. //Biotests Bull. - 1986. - Sv. 1. - S. 41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. a kol. Stroje na umývanie buniek na antiglobulínové testy. Opakované testovanie – nová metóda demonštrujúca neefektívnosť jedného široko používaného stroja – Sorvall CW1-AF2: správa pre DHSS Technical Branch, február 1991.

21. Williams M.E., Thomas D., Harman C.P.. a kol. //Antimikrobiálne látky a chemoterapia. —1985. - S. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H.. // CMAJ. - 2006. - Zv. 174, N 3. - S. 305-307.

Lekárske novinky. - 2008. - č. 3. - s. 33-36.

Pozor! Článok je určený pre lekárov. Pretlač tohto článku alebo jeho častí na internete bez hypertextového odkazu na zdroj sa považuje za porušenie autorských práv.

Alebo rozpustené v plazme.

Synonymá: antiglobulínový test, Coombsov test, AGT, nepriamy/priamy antiglobulínový test, IAT, NAT, DAT, nepriamy/priamy Coombsov test

Coombsov test je

analýza, ktorá zisťuje imunizáciu a protilátky proti červeným krvinkám.

Typy Coombsovho testu

• priamy Coombsov test– zisťuje protilátky fixované na povrchu červených krviniek. Vykonáva sa pri podozrení na autoimunitnú hemolytickú anémiu, hemolýzu pri autoimunitných ochoreniach, po užití liekov (metyldopa, penicilín, chinín), po transfúzii krvi a hemolytickom ochorení novorodenca.

Červené krvinky boli senzibilizované in vivo – protilátky sú na nich už pevne naviazané a pridanie antiglobulínového séra (anti-IgG) spôsobuje zlepenie senzibilizovaných buniek, čo je viditeľné voľným okom.

• nepriamy Coombsov test– zisťuje antierytrocytové protilátky v krvnej plazme, vykonáva sa pred transfúziou krvi a počas tehotenstva.

Antierytrocytové protilátky sú typom autoprotilátok, t.j. protilátky proti vlastným tkanivám. Autoprotilátka sa vyskytuje, keď imunitný systém reaguje abnormálne na určité lieky, ako sú vysoké dávky penicilínu.

Červené krvinky na svojom povrchu obsahujú rôzne chemické štruktúry (glykolipidy, sacharidy, glykoproteíny a bielkoviny), v medicíne tzv. antigény. Osoba zdedí od svojich rodičov špecifickú mapu antigénov na každej červenej krvinke.

Antigény sa spájajú do skupín a popri tom sa krv delí do niekoľkých skupín – podľa Systém AB0, Rhesus, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Najznámejšie a najvýznamnejšie v práci lekára sú AB0 a Rh faktor (Rh).

Systém AB0

Rhesus príslušnosť osoba je určená prítomnosťou týchto antigénov. Zvlášť dôležitým antigénom erytrocytov je antigén D. Ak je prítomný, potom hovoria o Rh-pozitívnom krvnom RhD, a ak nie je prítomný, potom hovoria o Rh-negatívnom Rhd.

Ak sa zodpovedajúca protilátka naviaže na antigény erytrocytov, erytrocyt sa zničí - hemolyzuje.

Indikácie na použitie priamy antiglobulínový test

• primárna autoimunitná hemolytická anémia
• hemolytická anémia pri autoimunitných, nádorových, infekčných ochoreniach
• liekmi vyvolaná autoimunitná hemolytická anémia
• potransfúzna hemolytická anémia (dni - mesiace)
• hemolytická choroba novorodenca (inkompatibilita jednej z krvných skupín)

Indikácie na použitie nepriamy antiglobulínový test

• pred transfúziou krvi
• počas tehotenstva Rh-negatívnej ženy

Autoimunitná hemolytická anémia

Autoimunitná hemolytická anémia (primárna)– klasické autoimunitné ochorenie s neznámymi príčinami. Predpokladá sa, že dochádza k narušeniu procesu interakcie na úrovni imunitného systému, čo vedie k vnímaniu vlastných červených krviniek ako cudzích. Bunky produkujú protilátky triedy IgG (reagujú pri t 37 °C) a/alebo IgM (pri t 40 °C), pripájajú sa na povrch erytrocytu, spúšťajú množstvo enzýmov (systém komplementu) a „perforujú“ steny erytrocytu, čo vedie k jeho zničeniu - hemolýza.

Príznaky hemolytickej anémie

• únava, celková slabosť, podráždenosť
• dyspnoe
• bolesť brucha, nevoľnosť
• tmavá farba moču
• bolesť chrbta
• ikterické sfarbenie kože a slizníc
• zväčšená pečeň, slezina
• zníženie počtu červených krviniek a hemoglobínu vo všeobecnom krvnom teste

Pozitívny výsledok rovno Coombsove testy 100% potvrdzuje diagnózu autoimunitnej hemolytickej anémie, dokazuje jej autoimunitný pôvod. Negatívny výsledok zároveň neumožňuje odstrániť diagnózu.

Sekundárna autoimunitná hemolytická anémia a pozitívny Coombsov test sa môžu vyskytnúť pri nasledujúcich ochoreniach:

• systémový lupus erythematosus
• Evansov syndróm
• Waldenströmova makroglobulinémia
• paroxyzmálna studená hemoglobinúria
• chronická lymfocytová leukémia
• lymfómy
• Infekčná mononukleóza
• Infekcia Mycoplasma pneumoniae
• syfilis

Pozitívny antiglobulínový test na tieto ochorenia neslúži diagnostické kritérium, ale je jedným z príznakov ochorenia.

Hemolytická choroba novorodenca

Príčina hemolytická choroba novorodencov - inkompatibilita krvných skupín u matky a plodu, vo väčšine prípadov podľa Rh systému, v jednotlivých prípadoch - podľa systému AB0, kazuisticky - podľa iných antigénov.

Rh konflikt sa rozvinie, ak plod Rh-negatívnej ženy zdedí Rh-pozitívnu krv od otca.

Ochorenie sa u novorodenca rozvinie iba vtedy, ak si matka už vytvorila protilátky proti zodpovedajúcim antigénom, čo sa stáva po predchádzajúcich tehotenstvách, pôrodoch, potratoch a nezlučiteľných krvných transfúziách. Najčastejším dôvodom na spustenie syntézy protilátok proti antigénom membrány erytrocytov je pôrod (feto-materské krvácanie). Prvý pôrod vo všeobecnosti prebieha bez komplikácií, no ďalšie sú v prvých dňoch po pôrode plné hemolytického ochorenia novorodenca.

Príznaky hemolytickej choroby novorodenca

• žltosť kože
• anémia
• bledosť kože a slizníc
• zväčšená pečeň a slezina
• problémy s dýchaním
• opuch celého tela
• excitácia a postupná depresia centrálneho nervového systému

Anémia po transfúzii krvi

Nepriamy Coombsov test vykonaná pred transfúziou krvi na posúdenie kompatibility a priamy Coombsov test- po nej pri podozrení na potransfúznu hemolýzu, t.j. ak máte príznaky ako horúčka, triaška, slzenie (prečítajte si nižšie). Účelom analýzy je identifikovať protilátky proti transfúznym červeným krvinkám, ktoré sa naviazali na červené krvinky príjemcu a sú príčinou posttransfúznej hemolýzy, ako aj predčasného odstránenia darcovských červených krviniek z krvného obehu. príjemca (ten, kto dostal krv).

Príznaky hemolytickej reakcie po transfúzii krvi

• zvýšenie telesnej teploty
• kožná vyrážka
• bolesť chrbta
• červená farba moču
• nevoľnosť
• závraty

Dekódovanie Coombsovho testu

Je potrebné pripomenúť, že základné pravidlá na dešifrovanie priamych a nepriamych antiglobulínových testov sú rovnaké. Jediným rozdielom je umiestnenie protilátok - v krvi alebo už na červenej krvinke - na červenej krvinke.

• Ak priamy Coombsov test je negatívny– to znamená, že protilátka „nesedí“ na červených krvinkách a je potrebné ďalej hľadať príčinu symptómov a vykonať nepriamy Coombsov test
• ak sa zistí pozitívny výsledok Coombsovho testu po transfúzii krvi, infekciách, liekoch - pozitivita môže trvať až 3 mesiace (životnosť červených krviniek je 120 dní - 3 mesiace)
• pozitívny výsledok antiglobulínového testu na autoimunitné ochorenie môže trvať mesiace alebo dokonca roky

Coombsove testovacie štandardy

• priamy Coombsov test- negatívny
• nepriamy Coombsov test- negatívny

Kvalitatívne pozitívny výsledok sa meria v počte plusov od jedného do štyroch (+, ++, +++, ++++) a kvantitatívne v digitálnej forme - 1:16, 1:256 atď.

4 fakty o Coombsovom teste

• prvýkrát navrhnutý v Cambridge v roku 1945
• prah citlivosti – aspoň 300 fixných molekúl protilátky na jednej červenej krvinke
• počet protilátok spúšťajúcich hemolýzu - individuálne pre každú osobu (od 16-30 do 300)
• dynamika iných laboratórnych indikátorov hemolytickej anémie (hemoglobín, bilirubín, retikulocyty) sa môže normalizovať a Coombsov test zostane na rovnakej úrovni

Nevýhody antiglobulínového testu

• silu väzby antigénu na protilátku nemožno určiť
• neznámy počet naviazaných protilátok
• neurčuje typ protilátky
• pozitívny Coombsov test nepomôže určiť jeho príčinu
• 0,5% zdravých ľudí mať pozitívny Coombsov test bez akýchkoľvek známok hemolytickej anémie
• nie je vhodný na sledovanie úspešnosti liečby, pretože nebude indikovať aktivitu hemolýzy erytrocytov